一種海參用抗嗜水氣單胞菌營養增強劑的製作方法

2023-10-29 11:35:02 1

一種海參用抗嗜水氣單胞菌營養增強劑的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種海參用抗嗜水氣單胞菌營養增強劑，其由抗嗜水氣單胞菌滅活產物與營養飼料按重量比為1：2~10混合製得，其滅活產物製備過程包括以下步驟：增菌、洗滌後收集菌體；再經β-丙內脂滅活處理後於37℃放置2小時使其水解；再噴霧乾燥到營養飼料中，乾燥24~36h，產物水份含量為2~5%，利用本發明實施例所述方法配製的海參用抗嗜水氣單胞菌營養增強劑，適用於海參的育苗池和養成池；處理過程簡單，耗時少；製備成本低於傳統方法，本發明粉劑保存時間長，無汙染。本發明對解決大批量海參養殖的嗜水氣單胞菌的防治具有重要的現實意義。
【專利說明】一種海參用抗嗜水氣單胞菌營養增強劑
【技術領域】
[0001]本發明主要涉及海產品疾病檢測【技術領域】，具體涉及海產品致病微生物防治營養粉，尤其是一種海參用抗嗜水氣單胞菌營養增強劑。
【背景技術】
[0002]我國海域遼闊，自然條件優越，海洋資源十分豐富。但目前開發利用的程度還很低。這也說明我國開發利用海洋資源的潛力巨大，遼寧海域是中國重要的海洋生物資源、漁業資源寶庫，其盛產海參、扇貝、貽貝、牡蠣和魚、蝦以及藻類等，帶動海洋經濟發展。加強多邊和雙邊的海洋開發國際合作，集中集約開發利用海域及海島資源，合理配置優勢海洋產業，科學高效開發海洋資源，積極開展科研與試驗、開發與利用，海水養殖標準化是合理開發海水養殖資源的重要手段，研究制定海產品養殖標準，合理開發海水灘涂養殖資源，提高養殖海產品疾病是當今養殖業的重點內容。
[0003]海產品養殖是一項高風險的養殖業，傳統的小戶的海產品養殖給養殖戶帶來了巨大的市場和技術風險。為了將養殖戶養殖風險降到最低，開展對各類養殖業，包括魚、蝦、蟹、海參、鮑魚、貝類、海藻等各類海產品的疾病防治工作任務舉足輕重。有報導稱，霍亂弧菌、漂浮弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、創傷弧菌、嗜水氣單胞菌等有害細菌，是引起海產品各種疾病的罪魁禍首。
[0004]世界海參養殖以刺參(溫帶種)和糙海參(熱帶種)為主要品種。除中國、日本、韓國主要養殖刺參外，其他國家均以糙海參為主要養殖對象。近年來，隨著自然資源的減少和消費需求的增加，海參的人工養殖在一些國家逐漸興起。其中，中國和日本是主要的養殖國家，印度、印度尼西亞、越南、菲律賓、韓國、埃及等也有小規模的增養殖。
[0005]刺參(Apostichopus japonicus)是我國有記載的20餘種食用海參中價值最高、惟一分布於黃渤海域的溫帶種。其蛋白質含量高，糖類豐富，脂類含量低，且不含膽固醇，具有很高的營養保健和藥用價值，被人們視為重要的海珍品，因而具有重要的市場價值。近年來，海參消費需求量的逐年增加導致了世界範圍內海參自然資源的過度開發和種群數量的急劇下降，因此，海參的人工養殖也隨之發展起來。隨之而來的是海參養殖中遇到的各類問題。
[0006]β-丙內酯(BPL)在國外已廣泛用於各種疫苗的滅活。β-丙內脂(C2H403)是一種雜環類化合物，沸點155°C，常溫下是無色粘稠狀液體，是廣譜殺菌劑，對病毒、細菌、真菌等都有很強的殺滅作用，比福馬林作用強25倍。作用機理:作用於病原體DNA或RNA，改變核酸結構達到滅活目的，而不直接作用於蛋白。1.特點:β_丙內酯(BPL)直接與核酸作用，而不作用於殼蛋白，不破壞病原體的免疫原性。2.大劑量β_丙內酯(BPL)雖是一種致癌物，但極易水解，在37°C水浴水解2h後消失，其水解為無毒性的脂肪代謝產物β -羥基丙酸。另外，由於其能在疫苗液體中完全水解，不必考慮在成品疫苗中的殘留。3.37°C僅需2小時丙內酯即可完全水解，滅活時間短，從而顯著地縮短了疫苗生產周期，提高了經濟效益。總之，β_丙內酯(BPL)作為疫苗滅活劑，可直接作用於核酸，滅活能力強，保持疫苗良好的免疫原性；其水解產物對機體無害，接種反應輕。目前，國內外已將其用於一些疫苗的滅活。

【發明內容】

[0007]由【背景技術】可見，提高刺參自身的免疫力，增強其抗病力是解決刺參病害問題的重要途徑。本研究為達到防治養殖業中海參患病的目的，避免在海參疾病防治中使用抗生素，本發明所述的海參用抗嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)營養增強劑,採用以下技術方案實現:
[0008]一種海參用抗嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)營養增強劑,其有以下組分按質量份數配比組成:
[0009]嗜水氣單胞菌滅活產物與營養飼料總重量比為1:2~10，其中:
[0010]所述的營養飼料為:黃粉蟲沙50~70份；馬尾藻粉:25~40份；海蒿子15~35 ;大豆蛋白10~15份；魚粉:5~10份；螺旋藻2~5份；貽貝粉2~5份；低聚殼聚糖:1~4份；複合多維I~4份；複合多礦I~4份。
[0011]所述的嗜水氣單胞菌滅活產物由以下方法製備:
[0012](I)增菌:從嗜水氣單胞菌標準菌株的單一菌落中，挑取一菌環，接種到普通LB培養基中，進行發酵，37°C培養12h製得發酵產物；將發酵產物再接入嗜水氣單胞菌培養基中進行發酵，32~37°C培養24~48h，至菌懸液菌含量的終濃度為IO7~101(lCfu/g。
[0013](2)洗滌:將步驟(1)獲得的發酵產物，以1:50的質量比與PBS緩衝液混合，充分攪拌I~5min後，以4000~8000rpm轉數離心2~5min,以收集菌體；
`[0014](3)滅活處理:在收集的菌體中，按1:50的質量比加入PBS緩衝液，再向混合液體中，按1:1000-4000重量比加入β-丙內脂，IOOrmp振搖條件下，於4°C放置24h，然後於37°C放置2小時使其水解；
[0015](4)乾燥:上述步驟(3)所得的滅活產物噴霧乾燥到營養飼料中，乾燥24~36h，滅活產物與營養飼料總重量比為1:2~10，產物水份含量為2飛％，製得海參用抗嗜水氣單胞菌營養增強劑；
[0016]對於以上所述的所有技術方案中,較優的條件如下:所述的嗜水氣單胞菌培養基，其配製方法如下:
[0017]胰蛋白腖IOg,酵母提取物5g,氯化鈉IOg,葡萄糖5g,無需調節pH, 121°C下滅菌20min ;冷卻備用。
[0018]對於以上所述的所有技術方案中，較優的條件如下:按1:4000重量比加入β-丙內脂。
[0019]本發明中，上述產品製備方法中，均未限定方法的其他等效條件，因其可根據現有技術確定，也未限定所用試劑的級別，因其對結果影響小，並可以通過配製或商業途徑購買獲得，技術人員可以依據實施例中所列條件做參考依據進行調整。這些關於製劑方式和方法的選擇，相信本領域技術人員可以從現有技術中得到充分的啟示，本發明不再贅述。
[0020]本發明的優點是:適用於海參的育苗池和養成池；處理過程簡單，耗時少；製備成本低於傳統方法，本發明粉劑保存時間長，無汙染。本發明對解決大批量海參養殖的嗜水氣單胞菌的防治具有重要的現實意義。【具體實施方式】
[0021]以下實施例用於說明本發明，但不用來限制本發明的範圍。
[0022]實施例1
[0023](I)增菌:從嗜水氣單胞菌標準菌株的單一菌落中，挑取一菌環，接種到普通LB培養基中，進行發酵，37°C培養12h製得發酵產物；將發酵產物再接入嗜水氣單胞菌培養基中進行發酵，37°C培養48h，至菌懸液菌含量的終濃度為1010Cfu/g。
[0024]所述的嗜水氣單胞菌培養基，其配製方法如下:胰蛋白腖10g，酵母提取物5g，氯化鈉IOg,葡萄糖5g,無需調節pH, 121°C下滅菌20min ;冷卻備用。
[0025](2)洗滌:將步驟(I)獲得的發酵產物，以1:50的質量比與PBS緩衝液混合，充分攪拌Imin後，以4000rpm轉數離心5min,以收集菌體；
[0026](3)滅活處理:在收集的菌體中，按1:50的質量比加入PBS緩衝液，再向混合液體中，按1:4000重量比加入β-丙內脂，IOOrmp振搖條件下，於4°C放置24h，然後於37°C放置2小時使其水解；
[0027](4)乾燥:上述步驟(3)所得的滅活產物噴霧乾燥到營養飼料中，乾燥25h，滅活產物與營養飼料總重量比為1:10，產物水份含量為2%，製得海參用抗嗜水氣單胞菌營養增強劑。
[0028]所述的營養飼料為:黃粉蟲沙50份；馬尾藻粉:40份；海蒿子35 ;大豆蛋白15份；魚粉:10份；螺旋藻5份；貽貝粉5份；低聚殼聚糖:4份；複合多維I份；複合多礦4份。
[0029]實施例2
[0030](I)增菌:從嗜水氣單胞菌標準菌株的單一菌落中，挑取一菌環，接種到普通LB培養基中，進行發酵，37°C培養12h製得發酵產物；將發酵產物再接入嗜水氣單胞菌培養基中進行發酵，37°C培養48h，至菌懸液菌含量的終濃度為101(lCfu/g。
[0031]所述的嗜水氣單胞菌培養基，其配製方法如下:胰蛋白腖10g，酵母提取物5g，氯化鈉IOg,葡萄糖5g,無需調節pH, 121°C下滅菌20min ;冷卻備用。
[0032](2)洗滌:將步驟(I)獲得的發酵產物，以1:50的質量比與PBS緩衝液混合，充分攪拌Imin後，以5000rpm轉數離心5min,以收集菌體；
[0033](3)滅活處理:在收集的菌體中，按1:50的質量比加入PBS緩衝液，再向混合液體中，按1:5000重量比加入β-丙內脂，IOOrmp振搖條件下，於4°C放置24h，然後於37°C放置2小時使其水解；
[0034](4)乾燥:上述步驟(3)所得的滅活產物噴霧乾燥到營養飼料中，乾燥30h，滅活產物與營養飼料總重量比為1:7，產物水份含量為4%，製得海參用抗嗜水氣單胞菌營養增強劑。
[0035]所述的營養飼料為:黃粉蟲沙60份；馬尾藻粉:30份；海蒿子30 ;大豆蛋白15份；魚粉:7份；螺旋藻4份；貽貝粉4份；低聚殼聚糖:2份；複合多維2份；複合多礦2份。
[0036]實驗例3
[0037](I)增菌:從嗜水氣單胞菌標準菌株的單一菌落中，挑取一菌環，接種到普通LB培養基中，進行發酵，37°C培養12h製得發酵產物；將發酵產物再接入嗜水氣單胞菌培養基中進行發酵，37°C培養35h，至菌懸液菌含量的終濃度為109cfu/g。[0038]所述的嗜水氣單胞菌培養基，其配製方法如下:胰蛋白腖10g，酵母提取物5g，氯化鈉IOg,葡萄糖5g,無需調節pH, 121°C下滅菌20min ;冷卻備用。
[0039](2)洗滌:將步驟(I)獲得的發酵產物，以1:50的質量比與PBS緩衝液混合，充分攪拌Imin後，以4000rpm轉數離心5min,以收集菌體；
[0040](3)滅活處理:在收集的菌體中，按1:50的質量比加入PBS緩衝液，再向混合液體中，按1:6000重量比加入β-丙內脂，IOOrmp振搖條件下，於4°C放置24h，然後於37°C放置2小時使其水解；
[0041](4)乾燥:上述步驟(3)所得的滅活產物噴霧乾燥到營養飼料中，乾燥26h，滅活產物與營養飼料總重量比為1:5，產物水份含量為2飛％，製得海參用抗嗜水氣單胞菌營養增強劑。
[0042]所述的營養飼料為:黃粉蟲沙50份；馬尾藻粉:30份；海蒿子15 ;大豆蛋白15份；魚粉:8份；螺旋藻5份；貽貝粉4份；低聚殼聚糖:2份；複合多維2份；複合多礦2份。
[0043]實驗例4
[0044](I)增菌:從嗜水氣單胞菌標準菌株的單一菌落中，挑取一菌環，接種到普通LB培養基中，進行發酵，37°C培養12h製得發酵產物；將發酵產物再接入嗜水氣單胞菌培養基中進行發酵，37°C培養48h，至菌懸液菌含量的終濃度為101(lCfu/g。
[0045]所述的嗜水氣單胞菌培養基，其配製方法如下:胰蛋白腖10g，酵母提取物5g，氯化鈉IOg,葡萄糖5g,無需調節pH, 121°C下滅菌20min ;冷卻備用。
[0046](2)洗滌:將步驟(I)獲得的發酵產物，以1:50的質量比與PBS緩衝液混合，充分攪拌Imin後，以4000rpm轉數離心5min,以收集菌體；
[0047](3)滅活處理:在收集的菌體中，按1:50的質量比加入PBS緩衝液，再向混合液體中，按1:4000重量比加入β-丙內脂，IOOrmp振搖條件下，於4°C放置24h，然後於37°C放置2小時使其水解；
[0048](4)乾燥:上述步驟(3)所得的滅活產物噴霧乾燥到營養飼料中，乾燥26h，滅活產物與營養飼料總重量比為1:5，產物水份含量為5%，製得海參用抗嗜水氣單胞菌營養增強劑。
[0049]所述的營養飼料為:黃粉蟲沙70份；馬尾藻粉:25份；海蒿子35 ;大豆蛋白15份；魚粉:8份；螺旋藻5份；貽貝粉2份；低聚殼聚糖:4份；複合多維4份；複合多礦4份。
[0050]利用本發明實施例f 4所述方法配製的海參用抗嗜水氣單胞菌營養增強劑，適用於海參的育苗池和養成池；處理過程簡單，耗時少；製備成本低於傳統方法，本發明粉劑保存時間長，無汙染。本發明對解決大批量海參養殖的嗜水氣單胞菌的防治具有重要的現實意義。
[0051]以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對於本【技術領域】的普通技術人員來說，在不脫離本發明技術原理的前提下，還可以做出若干改進也應視為本發明的保護範圍。
【權利要求】
1.一種海參用抗嗜水氣單胞菌營養增強劑，其特徵在於:有以下組分按質量份數配比組成， 嗜水氣單胞菌滅活產物與營養飼料總重量比為1:2?10，其中: 所述的營養飼料為:黃粉蟲沙50?70份；馬尾藻粉:25?40份；海蒿子15?35 ;大豆蛋白10?15份；魚粉:5?10份；螺旋藻2?5份；貽貝粉2?5份；低聚殼聚糖:1?4份；複合多維I?4份；複合多礦I?4份。 所述的嗜水氣單胞菌滅活產物由以下方法製備: (1)增菌:從嗜水氣單胞菌標準菌株的單一菌落中，挑取一菌環，接種到嗜水氣單胞菌培養基中，3-5%的體積比接種，進行發酵，32?37°C培養24?48h，至菌懸液菌含量的終濃度為KTlO'fu/g ;製得發酵產物； (2)洗滌:將步驟(I)獲得的發酵產物，以1:50的質量比與PBS緩衝液混合，充分攪拌I?5min後，以4000?8000rpm轉數離心2?5min,以收集菌體； (3)滅活處理:在收集的菌體中，按1:50的質量比加入PBS緩衝液，再向混合液體中，按1:1000?4000重量比加入丙內脂，IOOrmp振搖條件下，於4°C放置24h，然後於37°C放置2小時使其水解； (4)乾燥:上述步驟(3)所得的滅活產物噴霧乾燥到營養飼料中，乾燥24?36h，滅活產物與營養飼料總重量比為1:2?10，產物水份含量為2飛％，製得海參用抗嗜水氣單胞菌營養增強劑。
2.根據權利要求1所述的海參用抗嗜水氣單胞菌營養增強劑，其特徵在於，所述的嗜水氣單胞菌培養基，其配製方法如下: 胰蛋白腖IOg,酵母提取物5g,氯化鈉IOg,葡萄糖5g,無需調節pH, 121 °C下滅菌20min ;冷卻備用。
3.根據權利要求1所述的海參用抗嗜水氣單胞菌營養增強劑，其特徵在於，按1:4000重量比加入β_丙內脂。
【文檔編號】A23K1/00GK103815154SQ201210465671
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2012年11月16日 優先權日:2012年11月16日
【發明者】謝克煥 申請人:大連德通生物技術開發有限公司