評價核酸分子的氧化還原活性的方法和具有氧化還原活性的核酸分子的製作方法
2023-10-29 13:01:17 2
評價核酸分子的氧化還原活性的方法和具有氧化還原活性的核酸分子的製作方法
【專利摘要】本發明提供能夠容易地評價核酸分子的氧化還原活性的新技術。本發明的評價方法的特徵在於，包括：檢測步驟，使用以電化學方式檢測氧化還原反應的裝置，電化學地檢測由作為評價對象的核酸分子催化的對底物的氧化還原反應；和評價步驟，由所述氧化還原反應的檢測結果評價所述核酸分子的氧化還原活性。作為所述裝置，使用具有具備檢測部的基板、所述檢測部具有電極系統、所述基板上配置有所述作為評價對象的核酸分子的裝置。本發明中，優選在所述基板上配置成為所述評價對象的多種核酸分子，利用一個裝置對多種核酸分子進行評價。
【專利說明】評價核酸分子的氧化還原活性的方法和具有氧化還原活性的核酸分子
[0001]
【技術領域】
[0002]本發明涉及評價核酸分子的氧化還原活性的方法和具有氧化還原活性的核酸分子。
【背景技術】
[0003]在臨床醫療、食品、環境等各種領域中，需要進行靶物質的檢測。上述靶物質的檢測一般利用與上述靶物質的相互作用，其中，使用與上述靶物質特異性結合的抗體的方法得到廣泛應用。該方法中，例如，使靶物質與用過氧化物酶等氧化還原酶標記化的抗體結合。然後，使用顯色底物，利用上述標記化抗體中的上述酶進行顯色反應，並對其顯色進行檢測。通過上述顯色的檢測，間接地進行上述靶物質的分析、例如定性分析和定量分析。
[0004]但是，上述抗體是通過對動物進行免疫而獲得的，因此，針對毒性靶物質和低分子靶物質獲得特異性抗原是極其困難的。因此，近年來，與靶物質結合的核酸、即所謂的核酸適體(以下稱為適體)受到關注。上述適體能夠在試管內獲得，因此，對於例如毒性靶物質和低分子靶物質也能夠獲得適體。而且，嘗試了在將這樣的適體代替上述抗體用於靶物質的檢測時並用顯示出與過氧化物酶同樣的催化活性的脫氧核酶(DNAzyme)。一般來說，上述脫氧核酶為具有富含鳥嘌呤的結構基序、呈G-四鏈體結構、通過與氯高鐵血紅素結合形成複合體而發揮過氧化物酶的催化功能的DNA。
[0005]上述靶物質的檢測中，具體而言，利用將單鏈適體與單鏈脫氧核酶連接而成的單鏈核酸元件(非專利文獻I)。在不存在靶物質的情況下，上述單鏈核酸元件通過自退火形成莖結構，由於上述莖結構而使上述脫氧核酶成為不能呈G-四鏈體的結構。因此，在不存在靶物質的條件下，上述單鏈核酸元件中的上述脫氧核酶不能與氯高鐵血紅素結合，不能發揮催化功能。另一方面，在靶物質存在下，上述靶物質與上述適體結合，由此使上述單鏈核酸元件消除了上述莖結構。因此，在靶物質存在下，上述單鏈核酸元件中的上述脫氧核酶形成G-四鏈體，與氯高鐵血紅素結合，由此發揮上述催化功能。因此，通過使針對氧化還原活性的顯色底物共存，在存在上述靶物質時發生顯色反應，在不存在上述靶物質時不發生顯色反應。因此，通過顯色反應的檢測，能夠進行靶物質的分析。而且，不需要對靶物質進行標記，因此，能夠以包含低分子在內的廣泛靶物質作為對象直接進行檢測。
[0006]如此，上述單鏈核酸元件需要通過上述適體的立體結構來控制上述脫氧核酶的活性。因此，例如，期望根據所使用的適體的序列來組合活性容易控制的脫氧核酶。
[0007]但是，被報導的脫氧核酶的數量有限。因此，確定與規定的適體的組合時，不得不從有限的脫氧核酶中選擇，根據靶物質來構建精度更優的核酸元件受到限制。另外，為了能夠進行靈敏度更優的檢測，需要顯示高氧化還原活性的脫氧核酶。
[0008]因此，嘗試了獲得新的脫氧核酶，但脫氧核酶的篩選中，只能針對候選核酸分子一個一個地確認其活性，其操作極其繁瑣。
[0009]現有技術文獻
[0010]非專利文獻
[0011]非專利文獻I =Teller 等，Anal.Chem.，2009 年，vol.81，p.9114-9119
【發明內容】
[0012]發明所要解決的問題
[0013]因此，本發明目的在於提供能夠容易地評價核酸分子的氧化還原活性的新技術。
[0014]用於解決問題的方法
[0015]本發明的評價方法為評價核酸分子的氧化還原活性的方法，其特徵在於，包括:檢測步驟，使用以電化學方式檢測氧化還原反應的裝置，電化學地檢測由作為評價對象的核酸分子催化的對底物的氧化還原反應、和評價步驟，由上述氧化還原反應的檢測結果評價上述核酸分子的氧化還原活性，並且，上述裝置具有具備檢測部的基板，上述檢測部具有電極系統，上述基板上配置有上述作為評價對象的核酸分子。
[0016]本發明的核酸分子為具有氧化還原活性的核酸分子，其特徵在於，含有選自由序列號I?132組成的組中的至少一個多核苷酸。
[0017]發明效果
[0018]根據本發明的評價方法，能夠針對作為評價對象的核酸分子容易地評價氧化還原活性的有無及其強度。另外，根據本發明的評價方法，例如，還能夠同時對多種核酸分子進行評價，因此能夠高效地篩選目的核酸分子。如上所述，具有氧化還原活性的核酸分子例如能夠代替過氧化物酶等酶來使用，因此，在臨床醫療、食品、環境等各種領域中有用。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0019]圖1是表示本發明的實施例1中在pH、電極上的間隔區長度和過氧化氫濃度不同的條件下由脫氧核酶產生的電信號的圖，(A)為pH7.4的結果，⑶為pH8.0的結果，(C)為ρΗ8.5的結果，(D)為ρΗ9.0的結果。
[0020]圖2是表示本發明的實施例1中的由脫氧核酶產生的電信號的圖，(A)是表示相同的微陣列的第一次電信號測定與第二次電信號測定的重複性的圖，(B)是表示相同的間隔區長度的脫氧核酶間的重複性的圖。
[0021]圖3是表示本發明的實施例1中的由各脫氧核酶產生的電信號值與其頻率的關係的圖。
[0022]圖4是表示本發明的實施例2中的由脫氧核酶產生的電信號的圖，(A)是表示相同的微陣列的第一次電信號測定與第二次電信號測定的重複性的圖，(B)是表示相同的微陣列的第二次電信號測定與第三次電信號測定的重複性的圖，(C)是表示相同的微陣列的第一次電信號測定與第三次電信號測定的重複性的圖。
[0023]圖5是表示本發明的實施例2中的由各脫氧核酶產生的電信號值與其頻率的關係的圖，⑷表示c-Myc的結果，⑶表示SA的結果，(C)表示EAD2的結果，⑶表示TA的結
果O
[0024]圖6是表示本發明的實施例3中的由各脫氧核酶產生的電信號值的圖。【具體實施方式】
[0025]1.評價方法
[0026]如上所述，本發明的評價方法的特徵在於，包括:檢測步驟，使用以電化學方式檢測氧化還原反應的裝置，電化學地檢測由作為評價對象的核酸分子催化的對底物的氧化還原反應、和
[0027]評價步驟，由上述氧化還原反應的檢測結果評價上述核酸分子的氧化還原活性，
[0028]上述裝置具有具備檢測部的基板，
[0029]上述檢測部具有電極系統，
[0030]上述基板上配置有上述作為評價對象的核酸分子。
[0031]上述作為評價對象的核酸分子例如可以為一種，優選為多種。後者的情況下，例如，通過在上述基板上配置多種核酸分子，能夠使用一個基板對上述多種核酸分子進行評價。
[0032]上述作為評價對象的核酸分子例如為含有核苷酸殘基的分子。上述核酸分子例如可以為僅由核苷酸殘基構成的分子，也可以為含有核苷酸殘基的分子。上述核苷酸例如為核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸和它們的衍生物。上述核酸分子例如可以僅含有核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸和它們的衍生物中的任意一種，也可以含有二種以上，也可以全部含有。具體而言，上述核酸分子例如可以為含有核糖核苷酸和/或其衍生物的RNA，也可以為含有脫氧核糖核苷酸和/或其衍生物的DNA，也可以為含有前者和後者的嵌合體(DNA/RNA)。上述核酸分子可以為單鏈，也可以為雙鏈，優選單鏈。在上述核酸分子為單鏈的情況下，上述核酸分子可以列舉例如:單鏈DNA、單鏈RNA、單鏈嵌合體(DNA/RNA)等，在上述核酸分子為雙鏈的情況下，上述核酸分子可以列舉例如:雙鏈DNA、雙鏈RNA、DNA-RNA的雙鏈、雙鏈的嵌合體(DNA/RNA)等。上述核酸分子的長度沒有特別限制，例如為11?80個鹼基長。
[0033]對於上述核苷酸而言，作為鹼基，可以含有例如天然鹼基(非人工鹼基)、非天然鹼基(人工鹼基)。上述天然鹼基可以列舉例如:A、C、G、T、U和它們的修飾鹼基。上述修飾可以列舉例如:甲基化、氟化、氨基化、硫化等。上述非天然鹼基可以列舉例如:2』 -氟嘧啶、2』-O-甲基嘧啶等，作為具體例，可以列舉:2』_氟尿嘧啶、2』-氨基尿嘧啶、2』-O-甲基尿嘧啶、2-硫尿嘧啶等。上述核苷酸例如可以為修飾後的核苷酸，上述修飾核苷酸可以列舉例如:2』 -甲基化-尿嘧啶核苷酸殘基、2』 -甲基化-胞嘧啶核苷酸殘基、2』 -氟化-尿嘧啶核苷酸殘基、2』 -氟化-胞嘧啶核苷酸殘基、2』 -氨基化-尿嘧啶核苷酸殘基、2』 -氨基化-胞嘧啶核苷酸殘基、2』 -硫化-尿嘧啶核苷酸殘基、2』 -硫化-胞嘧啶核苷酸殘基等。上述核酸分子可以包含例如PNA(肽核酸)、LNA(Locked Nucleic Acid,鎖核苷酸)等。
[0034]本發明中，上述氧化還原反應只要是例如在從底物生成產物的過程中、在兩種底物之間發生電子的授受的反應即可。上述氧化還原反應的種類沒有特別限制。催化上述氧化還原反應的活性可以列舉例如與酶同樣的活性，具體而言，可以列舉例如與過氧化物酶同樣的活性(以下稱為過氧化物酶樣活性)等。上述過氧化物酶活性可以列舉例如來源於辣根的過氧化物酶(HRP)活性。在上述作為評價對象的核酸分子為DNA且具有上述氧化還原活性的情況下，上述DNA可以稱為例如DNA酶或脫氧核酶，另外，在上述核酸分子為RNA且具有上述氧化還原活性的情況下，上述RNA可以稱為例如RNA酶或核酶(RNAzyme)。
[0035]本發明中，上述裝置的上述檢測部只要能夠檢測由上述作為評價對象的核酸分子所催化的氧化還原反應產生的電信號即可。如上所述，上述檢測部具有上述電極系統。上述電極系統例如可以包含工作電極和對電極，也可以包含工作電極、對電極和參比電極。上述電極的材料沒有特別限制，可以列舉例如:鉬、銀、金、碳等。上述工作電極和上述對電極可以列舉例如:鉬電極、銀電極、金電極、碳電極等，上述參比電極可以列舉例如:銀/氯化銀電極等。上述銀/氯化銀電極例如可以通過向銀電極上層疊氯化銀電極而形成。
[0036]上述檢測部例如可以通過在上述基板的表面上配置上述電極而形成。上述電極的配置方法沒有特別限制，可以採用例如公知的方法，具體例可以列舉蒸鍍法、濺射法、絲網印刷法、電鍍法等薄膜形成方法。上述電極例如可以直接配置在上述基板上，也可以間接地配置在上述基板上。間接的配置可以列舉例如隔著其他部件的配置。
[0037]上述基板沒有特別限制，例如優選表面為絕緣性的基板。上述基板例如可以為包含絕緣材料的基板或由上述絕緣材料構成的基板，也可以為表面具有包含絕緣材料的絕緣層或由上述絕緣材料構成的絕緣層的基板。上述絕緣材料沒有特別限制，可以列舉例如:玻璃、陶瓷、絕緣性塑料、紙等公知的材料。上述絕緣性塑料沒有特別限制，可以列舉例如:有機矽樹脂、聚醯亞胺樹脂、環氧樹脂、氟樹脂等。
[0038]如上所述，上述作為評價對象的核酸分子可以為一種，但優選為多種，具體而言，優選在上述基板上配置上述多種核酸分子。上述裝置例如優選在上述基板上配置有上述多種核酸分子的微陣列。上述多種核酸分子例如優選在上述基板上配置成矩陣狀。另外，為了能夠根據其種類分別檢測由上述核酸分子產生的氧化還原反應，上述裝置例如優選具有多個檢測部，並且在各檢測部分別配置有不同種類的上述核酸分子。具體而言，上述裝置例如可以如下形成，即通過將上述基板的表面劃分成矩陣、在各劃分區域形成如上所述的電極系統作為檢測部並在各檢測部配置上述核酸分子。另外，也可以通過使用市售的電化學檢測系微陣列，使上述作為評價對象的核酸分子與上述陣列上的探針結合來作為上述評價用裝置使用。上述市售的微陣列可以列舉例如商品名為CombiMatrix ElectraSensemicroarray 的微陣列(CombiMatrix 公司)等。
[0039]如上所述，上述作為評價對象的核酸分子只要配置在上述基板上即可，優選固定到上述基板上。上述核酸分子例如可以直接地配置在上述基板上，也可以間接地配置在上述基板上。具體而言，上述核酸分子例如優選配置在上述基板中的上述檢測部上，更優選配置在上述檢測部中的上述電極上，優選配置在上述電極中的上述工作電極上。上述核酸分子例如可以直接地配置在上述檢測部或上述電極上，也可以間接地配置在上述檢測部或上述電極上。以下，若無特別說明，則「上述核酸分子向上述基板的配置或固定化」也包含向上述基板中的上述檢測部或上述檢測部中的上述電極的配置或固定化的含義。
[0040]上述核酸分子的配置方法沒有特別限制，可以採用公知的核酸固定化方法。上述固定化方法可以列舉例如將預先準備的核酸分子固定到上述基板上、優選固定到上述檢測部上、更優選固定到上述電極上的方法。該方法例如為利用光刻法的方法，作為具體例，可以參考美國專利5424186號說明書等。另外，上述固定化方法可以列舉例如在上述基板上、優選在上述檢測部上、更優選在上述電極上合成核酸的方法。該方法可以列舉例如所謂的斑點法(spot method)，作為具體例，可以參考美國專利5807522號說明書、日本特表平10-503841號公報等。
[0041]上述核酸分子例如可以以5』末端側或3』末端側中的任意一個末端側固定在上述
基板上。
[0042]上述核酸分子例如優選通過連接區配置在上述基板上。上述連接區例如優選含有核苷酸殘基。上述連接區例如可以僅由核苷酸殘基構成，也可以含有核苷酸殘基。上述核苷酸如前所述。上述連接區的長度沒有特別限制，例如為I?60個鹼基長，優選為6?60個鹼基長，更優選為20?30個鹼基長。連接區例如也稱為間隔區。
[0043]上述裝置中，上述作為評價對象的核酸分子例如可以為連接有適體的狀態。以下，將上述作為評價對象的核酸分子與上述適體連接而成的物質稱為核酸元件。上述適體沒有特別限制，例如為能夠與特定的靶物質結合的適體。上述適體例如優選為含有核苷酸殘基作為構成成分的核酸分子。上述核苷酸沒有特別限制，如前所述。上述能夠與靶物質結合的適體例如可以通過公知的 SELEX(Systematic Evolution of Ligands by ExponentialEnrichment，指數富集配體系統進化)法等來製造。上述適體例如可以為單鏈，也可以為雙鏈，優選為單鏈。
[0044]上述核酸分子與上述適體例如可以直接結合，也可以間接地結合。後者的情況下，上述兩者例如可以通過連接區而結合。上述核酸分子與上述適體例如可以一者的5』末端與另一者的3』末端連接，也可以兩者的5』末端之間或3』末端之間連接。
[0045]在上述核酸分子上連接有上述適體的情況下，例如優選上述核酸分子的一個末端與上述基板結合、另一個末端與上述適體結合。如上所述，上述基板與上述核酸分子之間、上述核酸分子與上述適體之間例如可以分別通過連接區而結合。對於上述核酸分子與上述適體而言，例如優選單鏈核酸分子與單鏈適體連接。上述兩者連接而成的上述核酸元件例如可以通過自退火形成莖結構和/或環結構。
[0046]關於本發明的評價方法，作為第一實施方式，例示使用配置有上述作為評價對象的核酸分子的裝置的方法，作為第二實施方式，例示使用配置有結合有上述適體的上述作為評價對象的核酸分子的裝置、即配置有上述核酸元件的裝置的方法。本發明不限於這些實施方式。
[0047](第一實施方式)
[0048]本發明的第一實施方式中，如上所述，使用在上述基板上配置有上述作為評價對象的核酸分子的裝置。
[0049]首先，在上述檢測步驟中，例如，在上述底物的存在下，電化學地檢測由上述核酸分子催化的氧化還原反應。在上述核酸分子具有上述氧化還原活性的情況下，通過上述核酸分子，例如，從上述底物生成產物，在該過程中發生電子的授受。該電子授受例如可以通過施加到電極上而以電信號的形式在上述裝置的上述檢測部中電化學地進行檢測。上述電信號的檢測例如可以通過測定電流等上述電信號的強度來進行。
[0050]上述底物例如可以在上述檢測步驟中從外部向上述裝置中的上述核酸分子供給。
[0051]上述底物沒有特別限制，可以列舉例如:過氧化氫、3，3』，5，5』 -四甲基聯苯胺(TMB)U, 2-苯二胺(OPD)、2，2』 -聯氮雙(3-乙基苯並噻唑啉_6_磺酸)二銨鹽(ABTS)、3，3』 - 二氨基聯苯胺(DAB)、3，3』 - 二氨基聯苯胺四鹽酸鹽(DAB4HC1)、3_氨基-9-乙基咔唑(AEC)、4-氯-1-萘酚(4C1N)、2，4，6-三溴-3-羥基苯甲酸、2，4-二氯苯酚、4-氨基安替比林、4-氨基安替比林鹽酸鹽、魯米諾等。
[0052]上述檢測步驟中，除了上述底物以外，例如可以共存有卟啉。公知的脫氧核酶中存在例如通過與卟啉形成複合物而顯示出更高的氧化還原活性的脫氧核酶。因此，本發明中,例如,也可以通過共存R卜啉來檢測作為與卟啉的複合物的氧化還原活性。
[0053]上述卟啉沒有特別限制，可以列舉例如未取代的卟啉、其衍生物。上述衍生物可以列舉例如取代的卟啉以及與金屬元素形成絡合物而得到的金屬卟啉等。上述取代的卟啉可以列舉例如N-甲基中卟啉等。上述金屬卟啉可以列舉例如作為三價鐵絡合物的氯高鐵血紅素等。上述卟啉例如優選上述金屬卟啉，更優選為氯高鐵血紅素。
[0054]上述檢測步驟中，進行上述氧化還原反應的條件沒有特別限制。pH例如為7.4?
9.0，優選為7.4?8.5，更優選為7.4。上述pH例如優選利用緩衝液進行控制，例如，可以使用顯示上述pH的Tris-HCl等緩衝液。上述底物例如優選混合在緩衝液中以底物溶液的形式添加到上述核酸分子中。上述底物溶液中的上述底物的濃度沒有特別限制，例如為10?200mmol/L,優選為 20 ?100mmol/L,更優選為 40 ?60mmol/L,特別優選為 SOmmoI /I,η
[0055]接著，基於上述檢測步驟中的檢測結果，在上述評價步驟中，評價上述核酸分子的氧化還原活性。上述評價步驟例如可以評價氧化還原活性的有無，也可以評價上述氧化還原活性的強度。後者的情況下，例如可以以任意的核酸分子的氧化還原活性為基準來評價相對活性的強度，上述任意的核酸分子例如優選顯示氧化還原活性的核酸分子。
[0056](第二實施方式)
[0057]本發明的第二實施方式中，如上所述，使用在上述基板上配置有結合有上述適體的上述作為評價對象的核酸分子的裝置。若無特別說明，則與上述第一實施方式同樣。
[0058]首先，在上述檢測步驟中，例如，在上述底物和上述靶物質的存在下，電化學地檢測由上述核酸分子催化的氧化還原反應。上述檢測步驟特別優選包括在存在上述底物且不存在上述靶物質的條件下檢測上述氧化還原反應的步驟和在上述底物和上述靶物質的存在下檢測上述氧化還原反應的步驟。對於不存在上述靶物質的條件下的檢測與存在上述靶物質的條件下的檢測，先進行哪種檢測都可以。例如，不需要使與上述適體結合的靶物質脫離，因此，優選先進行不存在上述靶物質的條件下的檢測。
[0059]進行不存在上述靶物質的條件下的檢測與存在上述靶物質的條件下的檢測的原因如下。靶物質的檢測中，在使用能夠與上述靶物質結合的適體和具有氧化還原活性的核酸分子的情況下，期望上述具有氧化還原活性的核酸分子例如僅在存在靶物質的條件下顯示活性，在不存在靶物質的條件下不顯示活性。這是因為如果在不存在靶物質的條件下顯示活性，則在靶物質檢測中會得到假陽性的結果。因此，在不存在上述靶物質的條件下有無氧化還原活性和在上述靶物質存在下有無氧化還原活性，對於在使用上述適體的靶物質檢測中確立電化學方法非常重要。
[0060]另外，在上述核酸分子在不存在上述靶物質的條件下不顯示活性、在上述靶物質存在下顯示活性的情況下，可以認為在上述核酸分子與上述適體之間成立例如以下所述的結構上的關係。適體通常通過識別靶物質並結合而使其立體結構發生變化。因此，不存在靶物質的條件下的適體的立體結構使與其結合的上述核酸分子呈活性關閉的結構，另一方面，如果通過與靶物質的結合而變化的上述適體的立體結構使上述核酸分子的活性的抑制被解除，則僅在靶物質存在的條件下，上述核酸分子的活性開啟。[0061]在上述檢測步驟中，上述底物和上述靶物質例如可以從外部向上述裝置中的上述核酸分子供給。上述底物與上述靶物質的添加順序沒有特別限制，例如，可以在添加一者後添加另一者，也可以同時添加兩者。另外，可以與上述第一實施方式同樣地共存有上述卟啉。
[0062]上述底物沒有特別限制，與前述同樣。上述靶物質與上述適體沒有特別限制，可以使用期望的靶物質和能夠與其結合的適體。
[0063]接著，在上述評價步驟中，基於上述檢測步驟中的檢測結果，評價上述核酸分子的氧化還原活性。上述評價步驟中，例如，可以評價氧化還原活性的有無，也可以評價上述氧化還原活性的強度。後者的情況下，例如，可以以任意的核酸分子的氧化還原活性為基準來評價相對活性的強度，上述任意的核酸分子例如優選顯示氧化還原活性的核酸分子。
[0064]上述評價步驟中，例如優選對於在不存在上述靶物質的條件下不顯示上述氧化還原活性的核酸分子，評價在上述靶物質存在下的上述氧化還原活性。上述評價步驟中，例如，可以評價氧化還原活性的有無，也可以評價上述氧化還原活性的強度。後者的情況下，例如，可以以顯示氧化還原活性的任意的核酸分子的氧化還原活性為基準來評價相對活性的強度。
[0065]2.篩選方法
[0066]如上所述，本發明的篩選方法為一種具有氧化還原活性的核酸分子的篩選方法，其特徵在於，根據上述本發明的評價方法，使用裝置對作為評價對象的核酸分子的氧化還原活性進行評價，篩選具有氧化還原活性的核酸分子。
[0067]本發明的篩選方法的特徵為根據上述本發明的評價方法評價上述作為評價對象的核酸分子的氧化還原活性，其他步驟和條件沒有任何限制。
[0068]本發明中，基於上述氧化還原活性的評價結果。例如可以選擇顯示氧化還原活性的核酸分子，進而可以選擇顯示相對強的氧化還原活性的核酸分子作為目的核酸分子。另夕卜，如上所述，例如也可以選擇在不存在上述靶物質的條件下不顯示活性、在上述靶物質存在下顯示活性的核酸分子作為目的核酸分子。
[0069]3.具有氧化還原活性的核酸分子
[0070]本發明的具有氧化還原活性的核酸分子的特徵在於，包含選自由下述(a)?(d)組成的組中的至少一個多核苷酸。
[0071](a)由序列號I?132中任意一個鹼基序列構成的多核苷酸；
[0072](b)由上述(a)中任意一個鹼基序列中缺失、取代、插入和/或添加I個或多個鹼基後的鹼基序列構成且具有氧化還原活性的多核苷酸；
[0073](c)由相對於上述(a)中任意一個鹼基序列具有80%以上的同一性的鹼基序列構成且具有氧化還原活性的多核苷酸；
[0074](d)由在嚴格條件下與由上述(a)中任意一個鹼基序列構成的多核苷酸雜交的多核苷酸的互補鹼基序列構成且具有氧化還原活性的多核苷酸。
[0075]本發明的核酸分子例如可以為由上述(a)?(d)中的任意一個多核苷酸構成的分子，也可以為含有上述多核苷酸的分子。後者的情況下，例如，如後所述，本發明的核酸分子可以含有2個以上的上述(a)?(d)中的多核苷酸。上述2個以上的多核苷酸可以為相同的序列，也可以為不同的序列。另外，後者的情況下，本發明的核酸分子可以進一步具有例如連接區和/或附加序列等。本發明的核酸分子也稱為脫氧核酶。
[0076]上述(a)的多核苷酸為由上述序列號I~132中的任意一個鹼基序列構成的多核苷酸。
[0077]表1
[0078]
【權利要求】
1.一種評價核酸分子的氧化還原活性的方法，其特徵在於，包括: 檢測步驟，使用以電化學方式檢測氧化還原反應的裝置，電化學地檢測由作為評價對象的核酸分子催化的對底物的氧化還原反應、和 評價步驟，由所述氧化還原反應的檢測結果評價所述核酸分子的氧化還原活性， 所述裝置具有具備檢測部的基板， 所述檢測部具有電極系統， 所述基板上配置有所述作為評價對象的核酸分子。
2.如權利要求1所述的評價方法，其中，所述作為評價對象的核酸分子為多種核酸分子。
3.如權利要求2所述的評價方法，其中，所述基板為配置有所述多種核酸分子的微陣列。
4.如權利要求1至3中任一項所述的評價方法，其中，所述檢測步驟為在所述底物的存在下檢測由所述核酸分子催化的氧化還原反應的步驟。
5.如權利要求1至4中任一項所述的評價方法，其中，所述作為評價對象的核酸分子上結合有能夠與靶物質結合的核酸適體。
6.如權利要求5所述的評價方法，其中，所述檢測步驟為在所述底物和所述靶物質的存在下檢測由所述核酸分子催化的氧化還原反應的步驟。
7.如權利要求5或6所述的評價方法，其中， 所述檢測步驟包括在存在所述底物且不存在所述靶物質的條件下檢測所述氧化還原反應的步驟和在所述底物和所述靶物質的存在下檢測所述氧化還原反應的步驟， 所述評價步驟中，對於在不存在所述靶物質的條件下不顯示所述氧化還原活性的核酸分子，評價在所述靶物質存在下的所述氧化還原活性。
8.一種具有氧化還原活性的核酸分子的篩選方法，其特徵在於，根據權利要求1至7中任一項所述的評價方法，使用裝置對作為評價對象的核酸分子的氧化還原活性進行評價，篩選具有氧化還原活性的核酸分子。
9.一種具有氧化還原活性的核酸分子，其特徵在於，包含選自由序列號I?132組成的組中的至少一個多核苷酸。
【文檔編號】G01N27/327GK103649741SQ201280031760
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2012年7月2日 優先權日:2011年7月4日
【發明者】金子直人, 堀井克紀, 秋富穰, 加藤信太郎, 和賀嚴 申請人:Nec 軟體有限公司