一種藍萼甲素的提取方法
2023-10-17 03:43:39 2
專利名稱：一種藍萼甲素的提取方法
技術領域：
本發明屬於中藥提取領域，具體涉及一種以藍萼香茶菜藥材為原料製備高純度藍 萼甲素的方法。
背景技術：
藍萼甲素為藍萼香茶菜的活性成分，藍萼甲素具有顯著的藥理活性，藍萼甲素可 抑制卡西黴素刺激的兔血小板生成血小板活化因子，能抑制花生四烯酸誘導的兔血小板血 栓素A2生成，並同時升高前列腺素E2，能顯著抑制ADP，AA, PAF等誘導的兔血小板聚集， 顯著升高血小板內 cAMP 7ΚΨ (參見Zhang B, Long K. Effects of glaucocalyxin A on aggtegation and cAMP levels of rabbit platelets in vitro. Acta Pharmacologica Sinica 1993,14(4) :347.)藍萼甲素具有細胞毒作用，對艾氏腹水癌有一定抑制作用，體 內對S180實體瘤抑制率達30.4% (10mg/kg，7天)，藍萼甲素對DNA、RNA和蛋白質合成具 有可逆性抑制作用，並呈劑量相關性(參見張淑香等，藍尊甲素在體外對DNA，RNA和蛋 白質生物合成的影響藥學情報通訊1990，8(3) :238.)。藍萼甲素對A549 (人肺癌細胞)、 L0V0(人腸癌細胞)、6T-CEM(人T細胞白血病細胞)、HL_60(人白血病細胞)具有較強的 細胞毒活性，可用於製備抗癌藥物(參見陳海生等，藍萼香茶菜中二萜類化合物在製備抗 癌藥物中的應用CN101455652-3320283)。現有技術中，從藥材藍萼香茶菜中提取藍萼甲素的方法不僅步驟繁瑣，得率偏低， 普遍低於10%，而且由於採用對生物體具有毒性的溶劑，殘留的有毒溶劑不符合藥典要求， 具體包括以下步驟(1)採集藥材藍萼香茶菜地上部分並粉碎，在常壓下，用體積百分數85% 95% 乙醇水溶液回流提取2 3次，每次回流提取2小時，合併提取液，減壓回收溶劑，至每毫升 溶劑含原藥材3 IOg ；(2)用等體積的石油醚萃取三次，石油醚層棄去，水層再用等體積氯仿萃取三次， 合併氯仿層並濃縮，得到氯仿萃取液；(3)向步驟(2)所得氯仿萃取液中加入矽膠攪拌均勻，減壓乾燥，進行矽膠柱層 析；以氯仿甲醇200 1或氯仿甲醇100 1洗脫，以薄層層析對照，收集含有藍萼甲 素的洗脫液，將洗脫液回收溶劑；(4)以無水乙醇或甲醇反覆結晶，得藍萼甲素，測試純度，計算得率。採用上述技術方案所得藍萼甲素的純度一般在90%以上，但得率一般為7% 9%，而且過程中使用了有毒的溶劑，氯仿、甲醇，並且殘留的有毒溶劑會影響藍萼甲素作為 藥物的使用，不符合藥典要求。
發明內容
本發明目的是提供一種藍萼甲素的提取方法，在提高純度和得率的同時，避免使 用有毒的溶劑，使提取的藍萼甲素符合藥典要求。
為達到上述目的，本發明採用的技術方案是一種藍萼甲素的提取方法，提取、矽 膠柱層析洗脫色素和雜質、純化步驟，具體包括以下步驟(1)採集原藥材藍萼香茶菜地上部分並粉碎，在常壓下，用體積百分數75 80% 乙醇水溶液回流提取2 3次，每次回流提取2 3小時，合併提取液，減壓除去部分溶劑， 得濃縮提取液；(2)向步驟(1)所得濃縮提取液中加入矽膠並攪拌均勻，減壓乾燥，進行矽膠柱層 析以矽膠柱體積為1體積份，首先以2 3份體積份的洗脫液A洗脫脂溶性色素，再以4 6份體積份的洗脫液B洗脫雜質，最後以10 15份體積份的洗脫液C洗脫；收集洗脫液， 濃縮後放置，析出晶體；其中，所述洗脫液A為石油醚和乙酸乙酯的混合物，並且按體積比，石油醚乙酸 乙酯=8 1 ；所述洗脫液B為石油醚和乙酸乙酯的混合物，並且按體積比，石油醚乙酸 乙酯=4 1 ；所述洗脫液C為石油醚和乙酸乙酯的混合物，並且按體積比，石油醚乙酸 乙酯=2:1;(3)無水乙醇重結晶，得藍萼甲素晶體。上述技術方案中，步驟(1)中，減壓除去的部分溶劑可以回收再循環使用；除去部 分溶劑的量取決於濃縮提取液的濃度，濃縮提取液的濃度為濃縮提取液的體積原藥材 的質量=Iml 3 4g ；例如，原藥材的質量為1200g，則濃縮提取液的體積對應為300 400ml ο由於上述技術方案運用，本發明與現有技術相比具有下列優點藍萼香茶菜藥材(經高效液相法測得藥材中藍萼甲素含量在0. )經本方法得 到的藍萼甲素的純度在95 100%，純度高，適於製備各種劑型，得率在10%以上，得率高， 方法的重現性強，按照2010版藥典附錄中有機溶劑殘留測定方法測定，無有機溶劑殘留， 並且適用的有機溶劑無毒性，符合2010版藥典要求。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步描述實施例一取藍萼香茶菜地上部分10kg，經粉碎，在常壓回流提取裝置中，用75%乙醇回流 提取2次，每次回流提取2小時，合併提取液，減壓回收溶劑濃縮提取液，濃縮後的體積為 3300毫升，加入1650克矽膠攪拌均勻，減壓乾燥，進行矽膠柱層析；矽膠柱體積為17600毫 升，以52800毫升的石油醚乙酸乙酯8 1洗脫脂溶性色素，再以105600毫升的石油醚 乙酸乙酯4 1洗脫雜質，最後以264000毫升的石油醚乙酸乙酯2 1洗脫，收集洗脫 液，濃縮至20毫升，放置，析晶，最後以無水乙醇20毫升重結晶，得藍萼甲素1.5克，其純度 為96.0%，得率15%，並且按照2010版藥典附錄中有機溶劑殘留測定方法測定，無有機溶 劑殘留。實施例二取藍萼香茶菜地上部分10kg，經粉碎，在常壓回流提取裝置中，用80%乙醇回流 提取3次，每次回流提取3小時，合併提取液，減壓回收溶劑濃縮提取液，濃縮後的體積為 3250毫升，加入1600克矽膠攪拌均勻，減壓乾燥，進行矽膠柱層析；矽膠柱體積為18000毫升，以54000毫升的石油醚乙酸乙酯8 1洗脫脂溶性色素，再以108000毫升的石油醚 乙酸乙酯4 1洗脫雜質，最後以270000毫升的石油醚乙酸乙酯2 1洗脫，收集洗脫 液，濃縮至20毫升，放置，析晶，最後以無水乙醇20毫升重結晶，得藍萼甲素1.4克，其純度 為95.6%，得率14%，並且按照2010版藥典附錄中有機溶劑殘留測定方法測定，無有機溶 劑殘留。以下實施例為採用現有技術的對比實施例實施例三取藍萼香茶菜地上部分1kg，經粉碎，在常壓回流提取裝置中，用85%乙醇回流提 取2次，每次回流提取2小時，合併提取液，減壓回收溶劑濃縮提取液，濃縮後的體積為250 毫升，先用等體積的石油醚萃取三次，石油醚層棄去，水層再用等體積氯仿萃取三次，合併 氯仿層並濃縮至10毫升，加入20克矽膠攪拌均勻，減壓乾燥，進行矽膠柱層析；氯仿甲醇 200 1洗脫，以薄層層析對照，收集含有藍萼甲素的洗脫液，將洗脫液回收溶劑，以無水乙 醇反覆結晶，得藍萼甲素0. 07克，其純度為90 %，得率7 %。實施例四藍萼香茶菜地上部分1kg，經粉碎，在常壓回流提取裝置中，用95%乙醇回流提取 3次，每次回流提取2小時，合併提取液，減壓回收溶劑濃縮提取液，濃縮後的體積為100毫 升，先用等體積的石油醚萃取三次，石油醚層棄去，水層再用等體積氯仿萃取三次，合併氯 仿層並濃縮至10毫升，加入20克矽膠攪拌均勻，減壓乾燥，進行矽膠柱層析；氯仿甲醇 100 1洗脫，以薄層層析對照，收集含有藍萼甲素的洗脫液，將洗脫液回收溶劑，以甲醇反 復結晶，得藍萼甲素0. 09克，其純度為92 %，得率9 %。實施例五藍萼香茶菜地上部分1kg，經粉碎，在常壓回流提取裝置中，用95%乙醇回流提取 3次，每次回流提取2小時，合併提取液，減壓回收溶劑濃縮提取液，濃縮後的體積為100毫 升，先用等體積的石油醚萃取三次，石油醚層棄去，水層再用等體積氯仿萃取三次，合併氯 仿層並濃縮至15毫升，加入30克矽膠攪拌均勻，減壓乾燥，進行矽膠柱層析；以氯仿洗脫色 素，再以氯仿甲醇200 1洗脫，以薄層層析對照，收集含有藍萼甲素的洗脫液，將洗脫液 濃縮，加入十倍量的甲醇，放置，過濾，以甲醇重結晶，得藍萼甲素0. 07克，其純度為96%， 得率7%。
權利要求
一種藍萼甲素的提取方法，提取、矽膠柱層析洗脫色素和雜質、純化步驟，其特徵在於，具體包括以下步驟(1)採集原藥材藍萼香茶菜地上部分並粉碎，在常壓下，用體積百分數75～80％乙醇水溶液回流提取2～3次，每次回流提取2～3小時，合併提取液，減壓除去部分溶劑，得濃縮提取液；(2)向步驟(1)所得濃縮提取液中加入矽膠並攪拌均勻，減壓乾燥，進行矽膠柱層析以矽膠柱體積為1體積份，首先以2～3份體積份的洗脫液A洗脫脂溶性色素，再以4～6份體積份的洗脫液B洗脫雜質，最後以10～15份體積份的洗脫液C洗脫；收集洗脫液，濃縮後放置，析出晶體；其中，所述洗脫液A為石油醚和乙酸乙酯的混合物，並且按體積比，石油醚∶乙酸乙酯＝8∶1；所述洗脫液B為石油醚和乙酸乙酯的混合物，並且按體積比，石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1；所述洗脫液C為石油醚和乙酸乙酯的混合物，並且按體積比，石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1；(3)無水乙醇重結晶，得藍萼甲素晶體。
2.根據權利要求1所述藍萼甲素的提取方法，其特徵在於步驟(1)中，減壓除去的部 分溶劑的量取決於濃縮提取液的濃度，濃縮提取液的濃度為濃縮提取液的體積原藥材 的質量=Iml 3 4g。
全文摘要
本發明屬於中藥提取領域，具體涉及一種以藍萼香茶菜藥材為原料製備高純度藍萼甲素的方法，包括以下步驟(1)採集原藥材藍萼香茶菜地上部分並粉碎，在常壓下，用75～80％乙醇水溶液回流提取2～3次，每次回流提取2～3小時，合併提取液，減壓回收溶劑，得濃縮提取液(2)向步驟(1)所得濃縮提取液中加入矽膠並攪拌均勻，減壓乾燥，進行矽膠柱層析；(3)無水乙醇重結晶，得藍萼甲素晶體。經本方法得到的藍萼甲素的純度在95～100％，純度高，適於製備各種劑型，得率在10％以上，得率高，方法的重現性強，按照2010版藥典附錄中有機溶劑殘留測定方法測定，無有機溶劑殘留，並且適用的有機溶劑無毒性，符合2010版藥典要求。
文檔編號C07C45/79GK101914002SQ201010264658
公開日2010年12月15日 申請日期2010年8月27日 優先權日2010年8月27日
發明者吳雙慶, 孫群, 張健, 徐乃玉, 沈曉丹 申請人:蘇州大學;蘇州利元醫藥科技有限公司