用於檢測和診斷癌症的抗體i-3859的用途
2023-06-09 01:39:21
用於檢測和診斷癌症的抗體i-3859的用途
【專利摘要】本發明涉及新的、分離的抗CXCR4抗體在癌症診斷中的用途。特別地，公開了用於診斷和/或預後與CXCR4表達相關的致癌疾病的方法。
【專利說明】用於檢測和診斷癌症的抗體1-3859的用途
【技術領域】
[0001]本發明涉及在患者中預後和/或診斷和/或治療監測(therapy monitoring)增殖性疾病的領域。更具體的，本發明涉及能夠特異性結合CXCR4的抗體，以及所述抗體用於檢測和診斷與CXCR4表達相關的病理性過度增殖性致癌疾病(pathologicalhyperproliferative oncogenic disorders)的用途、和相應的方法。在某些實施方案中，所述疾病是與CXCR4相對於正常而言升高的表達相關的致癌疾病，或任何其它與CXCR4過表達相關聯的病理學。本發明最終包括至少含有這種抗體的產物和/或組合物或試劑盒，以用於某些癌症的預後和/或診斷和/或治療監測。
【背景技術】
[0002]趨化因子是小的分泌肽，特別是免疫反應期間其控制著白細胞沿被稱為趨化因子梯度的配體化學梯度的遷移(Zlotnick A.等人，2000)。基於其NH2-端半胱氨酸殘基的位置、及與G蛋白偶聯受體(其兩個主要亞家族被命名為CCR和CXCR)的結合，趨化因子被分為兩個主要的亞家族，CC和CXC。到目前為止人們已發現了超過50個人趨化因子和18個趨化因子受體。
[0003]許多癌症具有複雜的趨化因子網絡，其影響腫瘤的免疫細胞浸潤以及腫瘤細胞生長、存活、遷移和血管生成。免疫細胞、內皮細胞和腫瘤細胞自身表達趨化因子受體，並可以響應趨化因子梯度。人類癌症活檢樣本和小鼠癌症模型的研究表明癌細胞趨化因子受體的表達與轉移能力的增加相關。來自不同癌症類型的惡性細胞具有不同的趨化因子受體表達譜，但是趨化因子受體4 (CXCR4)是最常發現的。來自至少23種不同類型的上皮起源、間充質起源和造血起源的人類癌症的細胞表達CXCR4受體(Balkwill F.等人，2004)。
[0004]趨化因子受體4 (也稱為融合素、⑶184、LESTR或HUMSTR)作為包含352個或360個胺基酸的兩種同種型存在。同種型a具有Genbank登錄號NP_001008540所述的胺基酸序列，而同種型b具有Genbank登錄號NP_003458所述的胺基酸序列。殘基Asnll是糖基化的，殘基Tyr21是通過添加硫酸基團修飾的，Cysl09和186通過二硫橋在受體的細胞外部分進行結合(Juarez J.等人,2004)。
[0005]該受體由不同類型的正常組織、初始(nlii\e)、非記憶T細胞、調節性T細胞、B細胞、嗜中性粒細胞、內皮細胞、初級單核細胞、樹突細胞、自然殺傷細胞、CD34+造血幹細胞表達，且在心臟、結腸、肝、腎和腦中以低水平表達。CXCR4在白細胞轉運(trafficking)、B細胞淋巴細胞生成和髓細胞生成中起關鍵作用。
[0006]CXCR4受體在大量癌症中過表達，所述癌症包括但不限於淋巴瘤、白血病、多發性骨髓瘤、結腸癌(Ottaiano A.等人，2004)、乳癌(Kato M.等人，2003)、前列腺癌(SunY.X.等人，2003)、肺癌(小細胞癌和非小細胞癌(Phillips R.J.等人，2003))、卵巢癌(Scotton C.J.等人,2002)、胰腺癌(Koshiba T.等人,2000)、腎癌、腦癌(Barbero S 等人，2002),成膠質細胞瘤和淋巴瘤。
[0007]迄今描述的CXCR4受體的唯一配體是間質細胞衍生因子-1 (SDF-1)或CXCL12。SDF-1在淋巴結、骨髓、肝、肺中大量分泌，腎、腦和皮膚分泌程度更少。CXCR4也被拮抗趨化因子識別，該拮抗趨化因子是III型人皰疹病毒編碼的病毒巨噬細胞炎症蛋白II(vMIP-1I)。
[0008]CXCR4/SDF-1軸在癌症中起關鍵作用，直接參與導致轉移的遷移、侵入。實際上，癌細胞表達CXCR4受體，它們遷移並進入系統循環。然後，癌細胞被滯留(arrested)在產生高水平SDF-1的器官中的血管床中，在那裡其增殖、誘導血管生成和形成轉移性腫瘤(MurphyPM.,2001 )0該軸也通過激活細胞外信號調節的激酶(ERK)途徑(Barbero S.等人，2003)和血管生成(Romagnani P.，2004)參與細胞增殖。實際上，CXCR4受體及其配體SDF-1通過刺激VEGF-A表達顯然地促進了血管生成，其轉而增加了 CXCR4/SDF-1的表達(BachelderR.E.等人，2002)。還已知與腫瘤相關的巨噬細胞(TAM)聚集在腫瘤的缺氧區域，經刺激後與腫瘤細胞合作，並促進血管生成。據觀察缺氧選擇性地上調包括TAM的各種細胞類型中CXCR4的表達(Mantovani A.等人，2004)。最近證實CXCR4/SDF-1軸調節CXCR4+造血幹細胞/祖細胞(HSC)的轉運/歸巢，可在新生血管形成中起作用。證據顯示除了 HSC之外，功能性CXCR4也在來自其它組織(組織定向幹細胞=TCSC)的幹細胞上表達，因此SDF-1可在器官/組織再生所需的化學引誘(chemottracting) CXCR4+TCSC中起關鍵作用，但是這些TCSC也可以是癌症發展的細胞起源(癌症幹細胞理論)。對於人類白血病，和最近對於幾種實體腫瘤，比如腦和乳房，證實了癌症的幹細胞起源。存在幾個可以衍生自正常CXCR4+組織/器官特異性幹細胞的CXCR4+的腫瘤實例，比如白血病、腦腫瘤、小細胞肺癌、乳癌、肝胚細胞瘤、卵巢癌和宮頸癌(Kucia M.等人，2005)。
[0009]使用針對CXCR4受體的單克隆抗體在體內證實了通過幹擾CXCR4受體可以靶向癌症轉移(Muller A.等人 ，2001)。簡而言之，已表明針對CXCR4受體(單抗173R&D系統)的單克隆抗體顯著地減少了 SCID小鼠中常位(orthotopic)乳癌模型(MDA-MB231)中淋巴結轉移的數量。另一個研究(Phillips R.J等人，2003)使用抗SDF-1的多克隆抗體也顯示SDF-1/CXCR4軸在常位肺癌模型(A549)的轉移中起決定性作用，但是在該研究中，其對於腫瘤生長和血管生成都沒有作用。幾個其它研究也描述了使用CXCR4的SiRNA雙鏈體(Liang Z.等人，2005)生物穩定的CXCR4肽拮抗劑(Tamamura H.等人，2003)對體內轉移的抑制，或使用CXCR4的小分子拮抗劑如AMD3100(Rubin J.B.等人，2003 ；De Falco V.等人，2007)或單抗(專利W02004/059285A2)對體內腫瘤生長的抑制。因此，CXCR4是經驗證的用於癌症的治療靶。
[0010]趨化因子受體2(CXCR2)是另一種趨化因子受體，也被描述為腫瘤學中感興趣的靶。實際上，CXCR2在幾種腫瘤細胞類型中傳遞自分泌細胞生長信號，也可以通過促進血管生成間接地影響腫瘤生長(Tanaka T.等人2005)。
[0011]CXCR2趨化因子受體包含360個胺基酸。其主要在內皮細胞中表達，尤其是在新生血管形成期間。幾種趨化因子結合CXCR2受體:CXCL5、-6、-7、IL-8、GR0-a、-0和Y，其屬於ERL+促血管生成趨化因子。所述CXCR2受體與CXCR4受體共享序列同源性:37%的序列同一性和48%的序列同源性。CXCR2/配體軸參與幾種腫瘤生長機制，比如轉移(Singh RK.等人，1994)、細胞增殖(Owen J.D.等人，1997)和ERL+趨化因子介導的血管生成(StrieterR.M.等人，2004)。最後，與腫瘤相關的巨噬細胞和嗜中性粒細胞是炎症誘導的腫瘤生長的關鍵元素，趨化因子比如CXCL5、IL-8和GRO-a啟動嗜中性粒細胞的募集。[0012]二聚化作為調節G蛋白偶聯受體功能的常見機制出現，所述G蛋白偶聯受體是趨化因子受體(Wang J.和Norcross M，2008)。已經表明響應趨化因子結合的同源二聚化和異源二聚化是啟動和改變許多趨化因子受體的信號傳導所需要的。不斷有證據支持所述受體二聚體或寡聚體可能是趨化因子受體的基本功能單元的概念。在沒有配體的情況下，發現了趨化因子受體二聚體，並且趨化因子誘導受體二聚體的構象變化。已知CXCR4與例如8 阿片類受體(DOR) (Hereld D., 2008)或 CCR2 (Percherancier Y.等人，2005)形成同源二聚體，也形成異源二聚體。在後一個實例中，源自CXCR4的跨膜結構域的肽通過阻斷配體誘導的所述二聚體的構象轉換而抑制活化(Percherancier Y.等人,2005)。另一個研究表明CXCR4-TM4肽(CXCR4的跨膜區的合成肽)降低了 CXCR4同源二聚體的原體(protomer)之間的能量轉移，並且抑制了惡性細胞中SDF-1誘導的遷移和肌動蛋白聚合(Wang J.等人，2006)。最近，也描述了 CXCR7與CXCR4形成功能性異源二聚體，並且增強了 SDF-1誘導的信號傳導(Sierro F.等人，2007)。組成型異源二聚體的其它實例包括顯示CXCRl和CXCR2相互作用以及形成各自同源二聚體的研究。對於它們中任一個與另一 GPCR(a (IA)腎上腺素受體)都沒有記錄到相互作用，表明CXCRl和CXCR2相互作用的特異性(Wilson S.等人，2005)。
[0013]如前所述，CXCR4和CXCR2受體是令人感興趣的腫瘤靶點。幹擾那些受體將通過減少腫瘤細胞增殖、血管生成、腫瘤細胞遷移和侵入、腫瘤對嗜中性粒細胞和巨噬細胞的募集和通過抑制CXCR4癌症幹細胞，以非常有效的方式抑制腫瘤生長和轉移。
[0014]兩個單克隆抗體，指515H7和414H5，其結合CXCR4同源二聚體和CXCR4/CXCR2異源二聚體兩者，並在兩者中誘導構象變化，其具有強抗腫瘤活性，並已在之前得到描述(參見TO2010/037831)。此外，本 申請人:已證實這種CXCR4/CXCR2異源二聚體的存在。
【發明內容】
[0015]本發明旨在提供至少一種在癌症模型中缺少任何體內活性的試劑，其可用作致癌疾病的診斷或預後 工具，特別是特徵在於CXCR4表達的那些、或者由異常CXCR4表達所介導的那些。
[0016]已公布的專利申請W02010/125162公開了兩個抗CXCR4單克隆抗體，稱為515H7和301aE5，以及其在HIV治療領域的用途。
[0017]出人意料的，本發明人現在已經證實所述抗體301aE5 (在本說明書中也指301E5，或通過參考已保藏的雜交瘤，更優選地指1-3859:出於本申請的目的，這些術語是相似的)在癌症治療領域不具有任何體內活性，這與其它呈現強抗腫瘤活性的抗體515H7相反(如W02010/037831中所述)。特別地，1-3859並不阻止CXCR4配體與受體的結合。
[0018]此外，本 申請人:發現抗體1-3859能夠:
[0019]i )識別單體的CXCR4 ；
[0020]ii)識別作為CXCR4/CXCR4同源二聚體的CXCR4 ；
[0021]iii)識別作為 CXCR4/CXCR2 異源二聚體的 CXCR4 ；
[0022]iv)從細胞裂解物(Iysat)中免疫沉澱CXCR4 ；
[0023]V)通過突光激活細胞分選(Fluorescence Activated Cell Sorting, FACS)識別表達CXCR4的細胞表面上的CXCR4 ;和[0024]vi )通過免疫組織化學方法識別CXCR4。
[0025]因為抗體1-3859的這些之前從未公開的新特性，本發明人發現所述抗體可用於鑑定表達CXCR4的細胞以及，特別是，表達CXCR4的腫瘤細胞。
[0026]因此，本發明涉及所述抗體在檢測表達CXCR4的疾病存在和/或定位中的用途。本發明也可應用在表達CXCR4的疾病的診斷和/或預後，優選在體外。所述表達CXCR4的疾病優選是癌症。
[0027]本發明的抗體1-3859的另一有利特性是其識別的表位與治療性單克隆抗體515H7的表位接近。更具體來說，如實驗實施例所示，1-3859能夠與治療性抗體515H7競爭與其表位的結合。因此，例如所述1-3859抗體可用於篩選待用515H7單抗進行治療的患者。特別是，本發明的抗體1-3859可用於檢驗存在於患者細胞表面的CXCR4的構象，其與抗體515H7識別的構象相類似，表明所述患者適應(amenable)基於抗體515H7的治療。
[0028]本發明的第一方面涉及以高親和性特異性結合CXCR4的分離的抗體、或其抗原結合片段或衍生物，所述抗體缺乏任何體內活性。所述分離的抗體、或其抗原結合片段或衍生物可用於診斷或預後由CXCR4表達所介導的病理性過度增殖性致癌疾病的方法。特別地，所述分離的抗體可用於體內成像。優選的，本發明的分離的抗體結合人CXCR4。
[0029]在優選的實施方案中，提供分離的抗體、或其抗原結合片段或衍生物以用於檢測表達CXCR4的腫瘤的存在，其中所述抗體包含至少一個互補決定區(⑶R)，其選自包含胺基酸序列SEQ ID NOl至6的⑶R ;或序列與序列I至6在最佳比對後具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的至少 一個⑶R。
[0030]更優選的，本發明包含根據本發明的獲自遺傳重組或化學合成的抗體、或其抗原結合片段或衍生物。
[0031]根據優選的實施方案，根據本發明的抗體、或其衍生化合物或抗原結合片段，特徵在於其由單克隆抗體組成。
[0032]本文所用的「單克隆抗體」意思是來源於幾乎同質的抗體群的抗體。更特別地，除了可以以最小比例發現的很少可能天然出現的突變之外，群中的單個抗體是相同的。換句話說，單克隆抗體是由來源於單個細胞克隆(例如雜交瘤、用編碼同質性抗體的DNA分子轉染的真核宿主細胞、用編碼同質性抗體的DNA分子轉染的原核宿主細胞等)生長的同質性抗體組成，其特徵通常是一個且僅一個種類和亞類的重鏈，和僅一種類型的輕鏈。單克隆抗體是高度特異性且針對單一抗原的。另外，與通常包括針對各種決定簇或表位的各種抗體的多克隆抗體製劑相比，每個單克隆抗體針對抗原的單一表位。
[0033]典型的IgG抗體包含通過二硫鍵結合的兩條相同重鏈和兩條相同輕鏈。每個重鏈和輕鏈都包含恆定區和可變區。每個可變區包含三個被稱為「互補決定區」(「⑶R」)或「超變區」的段，其主要負責與抗原的表位相結合。其通常按照從N端的順序編號被稱作CDR1、CDR2和CDR3。可變區中較為高度保守的部分被稱作「框架區」。
[0034]存在三個重鏈⑶R和三個輕鏈⑶R。本文所用術語⑶R或⑶Rs表示，根據情況，包含負責抗體與其識別的抗原或表位的親和性結合的大多數胺基酸殘基的這些區中的一個或幾個、或者甚至全部這些區。
[0035]根據本發明，抗體的⑶R將根據IMGT編號系統來定義。從根據IMGT的⑶R推導出根據Kabat的⑶R，對本領域技術人員是顯而易見的。根據Kabat的⑶R必須視作本發明範圍的一部分。
[0036]無論抗原受體、鏈類型或物種如何，都將MGT唯一的編號定義為比較可變結構域[Lefranc M.-P., Immunology Todayl8, 509(1997)/Lefranc M.-P., TheImmunologist, 7, 132-136 (1999)/Lefranc,M.-P.,Pommie, C., Ruiz, M., GiudicelIi, V., Foulquier, E., Truong, L., Thouvenin-Contet, V.和 Lefranc, Dev.Comp.1mmunol.，27，55-77 (2003)]。在MGT唯一編號中，保守性胺基酸總是具有相同位置，例如半胱氨酸23(第I個CYS)、色氨酸41(保守性TRP)、疏水性胺基酸89、半胱氨酸104 (第2個CYS)、苯丙氨酸或色氨酸118 (J-PHE或J-TRP)。所述MGT唯一編號提供了框架區(FR1-1MGT:位置 I 至 26，FR2-MGT:39 至 55，FR3-MGT:66 至 104 和 FR4-1MGT:118 至 128)和互補決定區CDRl-頂GT:27至38，CDR2-MGT:56至65和CDR3-MGT:105至117的標準化定界。由於空位(gap)代表未佔用的位置，⑶R-MGT長度(在括號之間顯示，並用點分開，例如[8.8.13])成為關鍵信息。在2D圖解中使用IMGT唯一編號，命名為IMGT Colliersde Perles [Ruiz, M.和 Lefranc, M.-P.，Immunogenetics, 53，857-883 (2002)/Kaas, Q.和Lefranc, M.-P.，Current Bioinformatics, 2，21-30 (2007)]，並在 IMGT/3D 結構 DB 中的 3D結構中使用[Kaas, Q.，Ruiz, M.和 Lefranc, M.-P.，T cell receptor and MHC structuraldata.Nuc1.Acids.Res., 32, D208-D210 (2004)]。
[0037]更具體地，根據第一方面，本發明涉及能夠特異性結合CXCR4的抗體、或其抗原結合片段或衍生物，其包括i)重鏈，根據頂GT編號系統所定義的，其含有下列⑶R-H1、⑶R-H2和⑶R-H3中的至少一個，其中⑶R-Hl含有序列SEQ ID N0.1、⑶R-H2含有序列SEQ ID N0.2以及CDR-H3含有序列SEQ ID N0.3 ;和/或ii)輕鏈，根據IMGT編號系統所定義的，其含有下列 CDR-Ll、CDR-L2 和 CDR-L3 中至少一個，其中 CDR-Ll 含有序列 SEQ ID N0.4、CDR_L2含有序列SEQ ID N0.5以及CDR-L3含有序列SEQ ID N0.6。
[0038]在另一個實施方 案中，本發明也可被描述為抗體、或其抗原結合片段或衍生物，其包括:
[0039]-含有根據MGT所定義的下列三個⑶R的重鏈，分別為具有序列SEQID N0.1的CDR-H1、具有序列SEQ ID N0.2的CDR-H2和具有序列SEQ ID N0.3的CDR-H3，或者與序列SEQ ID N0.1、2或3分別經最佳比對後具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列；和
[0040]-含有根據MGT所定義的下列三個⑶R的輕鏈，分別為具有序列SEQID N0.4的CDR-L1、具有序列SEQ ID N0.5的CDR-L2和具有序列SEQ ID N0.6的CDR-L3，或者與序列SEQ ID N0.4、5或6分別經最佳比對後具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列。
[0041]在本發明的意義上，兩條核酸或胺基酸序列之間的「百分比同一性」指兩條進行比較的序列之間在最佳比對後獲得的相同核苷酸或胺基酸殘基的百分比，該百分比是純粹統計學上的，並且兩條序列之間的差異沿其長度隨機分布。兩條核酸或胺基酸序列之間的比較通常在已對其進行最佳比對後通過比較序列而進行，所述比較能夠分段進行或使用「比對窗口」進行。用於比較的序列的最佳比對，除手工比較之外，還可以通過Smith和Waterman 的局部同源性算法(1981) (Ad.App.Math.2:482)、通過 Neddleman 和 Wunsch 的局部同源性算法(1970) (J.Mol.Biol.48:443)、通過Pearson和Lipman的相似性搜索法(1988) (Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:2444)或通過使用這些算法的計算機軟體(威斯康星遺傳學軟體包，遺傳學計算機組，575Science Dr.，Madison, WI的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，或通過比較軟體BLAST NR或BLAST P)進行。
[0042]通過比較兩條最佳比對的序列確定兩條核酸或胺基酸序列之間的百分比同一性，其中與用於兩條序列之間最佳比對的參考序列相比，待比較的核酸或胺基酸序列可具有添加或缺失。通過如下方法計算百分比同一性:確定兩條序列之間相同胺基酸或核苷酸殘基的位置數目，將相同位置的數目除以在比對窗口中的位置總數，並將結果乘以100以獲得兩條序列之間的百分比同一性。
[0043]例如，從網站http://www.ncb1.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html 上可獲得的 BLAST程序「BLAST2 序列」(Tatusova 等人，「Blast2sequences_a new tool for comparingprotein and nucleotide sequences」，FEMS Microbiol, 1999, Lett.174:247_250)，可以與預設參數一起使用(特別是參數「開放空位罰分」:5，和「延伸空位罰分」:2 ;所選的矩陣是例如程序建議的「BL0SUM62」矩陣)；直接通過所述程序計算兩條待比較序列之間的百分比同一I"生。
[0044]對於表現出與參考胺基酸序列具有至少80%,優選85%、90%、95%和98%同一性的胺基酸序列而言，優選的實例包括包含參考序列，某些修飾，特別是至少一個胺基酸的缺失、添加或置換，截短或延伸的那些。在置換一個或多個連續或不連續胺基酸的情況下，優選其中被置換的胺基酸被「等同的」胺基酸所取代的置換。在此，表述「等同的胺基酸」指可能被結構性胺基酸之一所置換的，然而並未改變相應抗體的生物活性的任何胺基酸和下述限定的那些具體實例。
[0045]等同胺基酸可 根據其與被置換胺基酸的結構同源性或根據可能產生的各種抗體之間生物活性的比較性測試結果而確定。
[0046]作為非限制性實例，下表1概述可進行卻沒有引起相應經修飾的抗體的生物活性發生顯著改變的可能置換；在相同條件下，反向置換自然是可能的。
[0047]表1
[0048]
【權利要求】
1.一種用於檢測CXCR4表達腫瘤的存在和/或定位的抗體、或其抗原結合片段或衍生物，所述抗體包含:i)含有下列3個⑶R的重鏈，所述⑶R分別為具有序列SEQ ID N0.1的CDR-Hl、具有序列SEQ ID N0.2的CDR-H2和具有序列SEQ ID N0.3的CDR-H3 ;和ii)含有下列3個⑶R的輕鏈，所述⑶R分別為具有序列SEQ ID N0.4的⑶R-L1、具有序列SEQ IDN0.5 的 CDR-L2 和具有序列 SEQ ID N0.6 的 CDR-L3。
2.根據權利要求1所述的抗體、或其抗原結合片段或衍生物，其特徵在於其選自: a)抗體，其具有含有下列3個⑶R的重鏈，所述⑶R分別為具有序列SEQID N0.1的CDR-Hl、具有序列SEQ ID N0.2的CDR-H2和具有序列SEQ ID N0.3的CDR-H3 ;以及含有序列SEQ ID N0.8的輕鏈可變結構域； b)抗體，其具有含有序列SEQID N0.7的重鏈可變結構域；以及含有下列3個⑶R的輕鏈，所述CDR分別為具有序列SEQ ID N0.4的CDR-Ll、具有序列SEQ ID N0.5的CDR-L2和具有序列SEQ ID N0.6的CDR-L3 ;或 c)抗體，其具有含有序列SEQID N0.7的重鏈可變結構域；和含有序列SEQ ID N0.8的輕鏈可變結構域。
3.根據權利要求1或2任一項所述的抗體、或其抗原結合片段或衍生物，其用於體外或離體診斷或預後與CXCR4表達相關的致癌疾病。
4.根據權利要求1至3任一項所述的抗體、或其抗原結合片段或衍生物，其中所述抗體無體內抗腫瘤活性。
5.一種用於在受試者中體外或離體檢測CXCR4表達腫瘤存在和/或定位的方法，所述方法包括步驟: (a)用能夠特異性結合CXCR4的抗體、或其抗原結合片段或衍生物接觸來自受試者的生物樣本；以及 (b)檢測所述抗體、或其抗原結合片段或衍生物與所述生物樣本的結合， 其中所述抗體、或其抗原結合片段或衍生物包含:i)含有下列3個CDR的重鏈，所述CDR分別為具有序列SEQ ID N0.1的CDR-H1、具有序列SEQ ID N0.2的CDR-H2和具有序列SEQ ID N0.3的CDR-H3 ;和ii)含有下列3個CDR的輕鏈，所述CDR分別為具有序列SEQ IDN0.4 的 CDR-Ll、具有序列 SEQ ID N0.5 的 CDR-L2 和具有序列 SEQ ID N0.6 的 CDR-L3。
6.一種用於在受試者中體外或離體檢測表達CXCR4的細胞的百分比的方法，所述方法包括步驟: (a)用能夠特異性結合CXCR4的抗體、或其抗原結合片段或衍生物接觸來自受試者的生物樣本；以及 (b)定量在所述生物樣本中表達CXCR4的細胞的百分比， 其特徵在於所述抗體、或其抗原結合片段或衍生物包含:i)含有下列3個CDR的重鏈，所述CDR分別為具有序列SEQ ID N0.1的CDR-Hl、具有序列SEQ ID N0.2的CDR-H2和具有序列SEQ ID N0.3的⑶R-H3 ;和ii)含有下列3個⑶R的輕鏈，所述⑶R分別為具有序列 SEQ ID N0.4 的 CDR-Ll、具有序列 SEQ ID N0.5 的 CDR-L2 和具有序列 SEQ ID N0.6 的CDR-L3。
7.一種用於在來自受試者的表達CXCR4的腫瘤中體外或離體確定CXCR4表達水平的方法，所述方法包括步驟:(a)用能夠特異性結合CXCR4的抗體、或其抗原結合片段或衍生物接觸來自受試者的生物樣本；以及 (b)定量所述抗體、或其抗原結合片段或衍生物與所述生物樣本中的CXCR4的結合水平， 其特徵在於所述抗體、或其抗原結合片段或衍生物包含:i)含有下列3個CDR的重鏈，所述CDR分別為具有序列SEQ ID N0.1的CDR-Hl、具有序列SEQ ID N0.2的CDR-H2和具有序列SEQ ID N0.3的⑶R-H3 ;和ii)含有下列3個⑶R的輕鏈，所述⑶R分別為具有序列 SEQ ID N0.4 的 CDR-Ll、具有序列 SEQ ID N0.5 的 CDR-L2 和具有序列 SEQ ID N0.6 的CDR-L3。
8.根據權利要求7所述的方法，其中優選通過螢光激活細胞分選(FACS)或免疫組織化學(IHC)測量所述抗體、或其抗原結合片段或衍生物與CXCR4的結合水平。
9.一種用於體外或離體診斷或預後表達CXCR4的腫瘤的方法，所述方法包括步驟: (a)根據權利要求7或8確定CXCR4的表達水平，以及 (b)將步驟(a)的表達水平與來自正常組織或非CXCR4表達組織的CXCR4參考表達水平進行比較。
10.一種用於體外或離體確定受試者腫瘤的評分的方法，所述方法包括步驟: (a)用能夠特異性結合CXCR4的抗體、或其抗原結合片段或衍生物接觸來自受試者的生物樣本； (b)定量所述抗體、或其抗原結合片段或衍生物與在所述生物樣本中的CXCR4的結合水平；以及 (c)通過將來自受試者的所述抗體、或其抗原結合片段或衍生物的結合的量化水平與合適的等級進行比較，為腫瘤評分， 其特徵在於，所述抗體、或其抗原結合片段或衍生物包括:i)含有下列3個CDR的重鏈，所述⑶R分別為具有序列SEQ ID N0.1的⑶R-Hl、具有序列SEQID N0.2的⑶R-H2和具有序列SEQ ID N0.3的⑶R-H3 ;和ii)含有下列3個⑶R的輕鏈，所述⑶R分別為具有序列 SEQ ID N0.4 的 CDR-Ll、具有序列 SEQ ID N0.5 的 CDR-L2 和具有序列 SEQ ID N0.6 的CDR-L3。
11.根據權利要求10所述的方法，其中所述合適的等級基於兩個參數，所述兩個參數是染色強度和陽性細胞的百分比。
12.根據權利要求10或11任一項所述的方法，其中所述合適的等級是0至8的等級，其中無反應性評分為0，以及67-100%反應比例的強反應性評分為8。
13.一種用於體外或離體確定來自受試者的腫瘤狀態的方法，所述方法包括步驟: (a)根據權利要求10、11或12之一為來自受試者的腫瘤評分；和 (b)確定腫瘤狀態是評分3至8的[CXCR4(+)];或 (c)確定腫瘤狀態是評分0至2的[CXCR4(-)]。
14.根據權利要求10或11任一項所述的方法，其中所述的合適的等級是0至3+的等級，其中無腫瘤細胞的膜反應性評分為0，以及在10%以上的腫瘤細胞中的強烈完全的反應性評分為3+。
15.一種用於體外或離體確定來自受試者的腫瘤狀態的方法，其中所述方法包括步驟: (a)根據權利要求10、11或14之一為來自受試者的腫瘤評分；和 (b)確定腫瘤狀態是2+或3+評分的[CXCR4(+)];或 (c)確定腫瘤狀態是O或1+評分的[CXCR4(-)]。
16.一種用於確定致癌疾病是否對使用抗CXCR4抗體、或其片段或衍生物的治療易感的方法，所述方法包括步驟: (a)根據權利要求13或15體外或離體確定受試者腫瘤的CXCR4狀態，和 (b)如果狀態是CXCR4(+)，則確定致癌疾病對使用抗-CXCR4抗體、或其片段或衍生物的治療易感。
17.一種用於選擇癌症患者的方法，所述癌症患者經預測能夠或不能從施用治療量的CXCR4抑制劑中獲益，所述方法包括步驟: (a)根據權利要求7或8所述的方法確定CXCR4的表達水平； (b)將之前步驟a)的表達水平與參考表達水平相比較；以及 (c)如果獲自(a)的表達水平與參考表達水平之比大於I，則選擇經預測能夠從CXCR4抑制劑的治療性施用中獲益的患者；或者 (d)如果獲自(a)的表達水平與參考表達水平之比小於或等於1，則選擇經預測不能夠從CXCR4抑制劑的治療性·施用中獲益的患者。
18.一種用於體外或離體確定治療方案的效果的方法，所述治療方案旨在於在患有CXCR4相關致癌疾病的受試者中緩解所述疾病，所述方法包括步驟: (a)根據權利要求7或8，在第一生物樣本中確定CXCR4的第一表達水平，所述第一生物樣本對應於所述治療的第一時間點； (b)根據權利要求7或8，在第二生物樣本中確定CXCR4的第二表達水平，所述第二生物樣本對應於所述治療的第二較後的時間點； (c)計算獲自步驟(a)的所述第一表達水平與獲自步驟(b)的所述第二表達水平之比；以及 (d)當步驟(C)之比大於I時，確定所述治療方案的效果為高；或者 (e)當步驟(C)之比小於或等於，第二表達水平統計學上相似於或，確定所述治療方案的效果為低。
19.根據權利要求18所述的方法，其中所述治療方案旨在於在患有CXCR4相關致癌疾病的受試者中緩解所述疾病，所述治療方案包括向所述受試者施用CXCR4抑制劑。
20.一種用於檢測表達CXCR4的腫瘤的存在和/或定位的試劑盒，所述試劑盒包括下列中的至少一個: a)抗體、或其抗原結合片段或衍生物，其包含:i)含有下列3個⑶R的重鏈，所述⑶R分別為具有序列SEQ ID N0.1的CDR-Hl、具有序列SEQ ID N0.2的CDR-H2和具有序列SEQID N0.3的⑶R-H3 ;和ii)含有下列3個⑶R的輕鏈，所述⑶R分別為具有序列SEQ ID N0.4的 CDR-Ll、具有序列 SEQ ID N0.5 的 CDR-L2 和具有序列 SEQ ID N0.6 的 CDR-L3 ； b)抗體，其具有含有下列3個⑶R的重鏈，所述⑶R分別為具有序列SEQID N0.1的⑶R-H1、具有序列SEQ ID N0.2的⑶R-H2和具有序列SEQ ID N0.3的⑶R-H3 ;以及含有序列SEQ ID N0.8的輕鏈可變結構域；c)抗體，其具有含有序列SEQID N0.7的重鏈可變結構域；以及含有下列3個⑶R的輕鏈，所述CDR分別為具有序列SEQ ID N0.4的CDR-Ll、具有序列SEQ ID N0.5的CDR-L2和具有序列SEQ ID N0.6的CDR-L3 ； d)抗體，其具有含有序列SEQID N0.7的重鏈可變結構域；和含有序列SEQ ID N0.8的輕鏈可變結構域。
21.根據權利要求20所述的試劑盒，其中所述抗體是標記的。
22.根據權利要求20或21任一項所述的試劑盒，其進一步包括用於檢測所述抗體與CXCR4之間結合程度的試劑。
23.根據權利要求20或21任一項所述的試劑盒，其進一步包括用於定量所述抗體與CXCR4之間結合水平的試劑。
24.根據權利要求20或21任一項所述的試劑盒，其進一步包括: i)用於檢測所述抗體與CXCR4之間的結合程度的試劑；以及 ii)用於為CXCR4表達水平評分的陽性和陰性對照樣本。
25.根據權利要求24所述的試劑盒，其進一步包括對鼠抗體特異的多克隆抗體，所述多克隆抗體優選是標記的。
26.根據權利要求20 或21任一項所述的試劑盒，其進一步包括: i)用於檢測所述抗體與CXCR4之間的結合程度的試劑； ii)已經與對CXCR4抑制劑的易感性相關聯的對照水平；和/或 iii)已經與對CXCR4抑制劑的抗性相關聯的對照水平。
【文檔編號】C07K16/28GK103717620SQ201280037703
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2012年7月30日 優先權日:2011年7月29日
【發明者】C·珂蘭蓋-阿穆, A·茹阿諾 申請人:皮埃爾法布雷醫藥公司