針對腫瘤壞死因子α的改進的納米體^TM的製作方法

2023-06-22 13:31:46 3

專利名稱：：針對腫瘤壞死因子α的改進的納米體TM的製作方法針對腫瘤壞死因子OC的改進的納米體TM本發明涉及針對腫瘤壞死因子a(TNF-a)的改進的納米體TM(NanobodiesTM)，以及包括或者基本上由一種或多種所述納米體組成的多肽。/";^,意.'A^"o6o辦TM，A/a"o6ofifesTM^7A^"oc/o"eTM^J6(y"xiV.K.遊敲"本發明還涉及編碼所述納米體和多肽的核酸；涉及製備所述納米體和多肽的方法；涉及表達或者能夠表達所述納米體和多肽的宿主細胞；涉及包括所述納米體、多肽、核酸或宿主細胞的組合物；並且涉及所述納米體、所述多肽、所述核酸、所述宿主細胞或所述組合物的應用，特別是用於預防、治療或診斷目的，諸如下文提及的預防、治療或診斷目的。本發明的其它方面、實施方案、優點和應用將通過下文的進一步描述而變得清楚。申請人的WO04/041862涉及針對TNF-a的納米體，並且涉及它的製備和應用，特別是用於預防和/或治療與TNF-a相關和/或受TNF-a調控的疾病和紊亂，諸如炎症、類風溼性關節炎、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、炎性腸炎症候群、多發性硬化病、艾迪生病、自體免疫肝炎、自體免疫腮腺炎、I型糖尿病、附睪炎、腎小球腎炎、格雷夫斯病、急性熱病性多神經炎、橋本病、溶血性貧血、系統性紅斑狼瘡、男性不育、多發性硬化病、重症肌無力、天皰瘡、銀屑病、風溼熱、類風溼性關節炎、結節病、硬皮病、斯耶格倫症候群、脊椎關節病、甲狀腺炎、和脈管炎。按照WO04/041862的抗-TNF納米體可以被人源化，並且可以是單價或多價的，其中後者導致對TNF的增加的親和力。按照WO04/041862的抗-TNF納米體TM還可以是多特異性的，並且特別可以是多特異性構建體的形式，其包括針對TNF的兩個或多個納米體和針對血清蛋白諸如人血清白蛋白的另一個納米體，這在體內導致增加的半衰期。WO04/041862還涉及製備抗-TNF納米體的方法，涉及編碼抗-TNF納米體的核酸或構建體，以及涉及包括所述抗-TNF納米體的藥物組合物，所述藥物組合物可以適用於靜脈內、皮下、口服、舌下、局部、鼻內、陰道內或直腸給藥，或者適用於通過吸入給藥。按照WO04/041862的抗-TNF納米體還可以用於診斷目的，任選地以成分試劑盒(kit-of-parts)形式。EP0486526描述了針對TNF特定表位的TNF-a結合配體。在所述結合配體中，提及單結構域抗體("dAbs")。Reiter等.，《/Mo/.r^7主激學染志J.(1999),290,685-698描述了從隨機化噬菌體展示文庫獲得的針對TNF-a的單結構域抗體，其從小鼠雜交瘤起始於VH結構域支架而產生。WO00/29004描述了針對TNF-a的鼠單結構域抗體("微體(microbodies)，，)。WO04/003019尤其描述了這樣的配體，g卩，其包括針對TNF-oc的第一結合結構域，和針對血清蛋白諸如血清白蛋白的第二結合結構域。本發明的一般目的是提供針對TNF-a的納米體，特別是針對人TNF-oc的納米體。具體地，本發明的一個目的是提供針對TNF-oc的納米體，特別是針對人TNF-a的納米體，並且提供包括所述納米體的蛋白或多肽，其適用於治療和/或診斷應用，並且特別用於預防、治療和/或診斷與TNF-a相關的和/或受之調控的諸如那些上文提及的一種或多種疾病和紊亂，和/或其可以用於製備預防和/或治療與TNF-a相關的和/或受之調控的諸如上文提及的那些一種或多種疾病的藥物組合物。更具體地，本發明的目的是提供針對TNF-a的納米體，並且提供包括所述納米體的蛋白和多肽，其為WO04/041862所述的針對TNF-a的納米體和多肽的備選物，和/或與WO04/041862所述的針對TNF-a的納米體和多肽相比，其具有一種或多種改進的性能或特性。更具體地，本發明的一個目的是提供針對TNF-oc的納米體，並且提供包括所述納米體的蛋白和多肽，與WO04/041862所述的針對TNF-a的納米體和多肽相比，其是改進的，具有下列一種或多種改進的性能或特性-增加的對於TNF-(X的親和力，以單價形式，以多價形式(例如以二價形式)和/或多特異性形式(例如，WO04/041862中或下文所述的多特異性形式的一種)；-更好的適用性，適用於以多價形式(例如，以二價形式)設計；-更好的適用性，適用於以多特異性形式(例如，WO04/041862或下文所述的多特異性形式的一種)設計；-對於"人源化"取代(如本文定義那樣)的提高的適用性或敏感性；禾口/或-更低的免疫原性，以單價形式，以多價形式(例如以二價形式)禾口/或以多價形式的多特異性形式(例如，WO04/041862中或下文所述的多特異性形式的一種)；-增加的穩定性，以單價形式，以多價形式(例如以二價形式)禾fV或以多價形式的多特異性形式(例如，WO04/041862中或下文所述的多特異性形式的一種)；-增加的針對TNF-a的特異性，以單價形式，以多價形式(例如以二價形式)禾Q/或以多價形式的多特異性形式(例如，WO04/041862中或下文所述的多特異性形式的一種)；-減小的或在需要的情形中增加的與來自不同物種的TNF-a的交叉反應性；和/或-一種或多種適於醫藥應用(包括預防應用和/或治療應用)禾n/或診斷應用(包括但不限於成像目的的應用)的其它改進的特性，以單價形式，以多價形式(例如以二價形式)和/或以多特異性形式(例如，WO04/041862中或下文所述的多特異性形式的一種)。這些目的通過本文所述的納米體、蛋白和多肽而實現。這些納米體在本文中還叫作"本發剪遊i片,沐r7Va"o6oc/^o/Ae/"ve油'o"J";並且這些蛋白和多肽在本文中還籠統地叫作"本發剪遊多i(^o/^e;^'^so/Aez'wve""'oMj，，。由於本文所述的納米體和多肽主要意欲用於治療和/或診斷應用，所以它們是針對(如本文所定義的那樣)人TNF-a的。然而，不排除(但也不需要)本文所述的納米體和多肽表現出與來自一種或多種其它溫血動物物種的TNF-a交叉反應，例如與來自一種或多種其它靈長類物種的TNF-a交叉反應，禾口/或與來自通常用作疾病動物模型的一種或多種動物物種(例如小鼠、大鼠、兔、豬或狗)特別是與TNF-a相關的疾病和紊亂的動物模型的物種(諸如本文提及的物種和動物模型)的TNF-a交叉反應。在這方面，對於有經驗的技術人員應該清楚，由於這允許針對人TNF-a的納米體和多肽可以在這樣的疾病模型中進行檢驗，所以，從藥物開發的觀點來看，所述交叉反應性，當存在時，可能是有優點的。在其最廣泛的意義上，本發明也沒有特別局限於或者由本發明的納米體和多肽所針對的TNF-a的特異性抗原決定簇、表位、部分、結構域、亞基或構象(當適用時)而定義。然而，在一個優選的實施方案中，本文所述的納米體、蛋白或多肽針對和/或可以結合TNF-a的表位，其位於和/或形成部分TNF受體結合位點(例如，TNF-RI,THF-RII的結合位點，也叫作p55或p75)。正如本領域公知的那樣，TNF三聚體包括3個受體結合位點，其基本上是等價的，並且其由/在位於TNF三聚體內的2個TNF單體的接觸面上形成。例如，本文所述的納米體、蛋白或多肽優選地針對和/或可以結合TNF-a的表位，其包括下列TNF-a的胺基酸殘基位置88的Gln，位置90的Lys，禾口/或位置146的Glu。特別地，本文所述的納米體、蛋白或多肽針對和/或可以結合TNF-a三聚體的表位，其位於和/或形成部分TNF受體結合位點。例如，本文所述的納米體、蛋白或多肽可以針對和/或可以結合TNF-a三聚體的表位，其包括下列胺基酸殘基第一個TNF單體(本文叫作"單體A")上位置88的Gln，和位置90的Lys，以及第二個TNF單體(本文叫作"單體B")上位置146的Glu(其中單體A和單體B在TNF三聚體中一起形成TNF受體結合位點)。更具體地，本文所述的納米體、蛋白或多肽針對和/或可以結合TNF-oc三聚體的表位，其包括上文提及的胺基酸(單體A中位置88的Gin;單體A中位置90的Lys和單體B中位置146的Glu)，並且另外包括TNF-a單體A的下列胺基酸殘基的至少一個、優選地2個或多個、更優選地5個或多個、並且優選地全部或基本上全部位置24的Gly，位置25的Gln,位置72的Thr，位置73的His,位置74的Val,位置75的Leu，位置77的Thr,位置79的Thr，位置83的lie,位置89的Thr,位置91的Val，位置92的Asn，位置97的lie,位置131的Arg,位置135的Glu，位置136的lie,位置137的Asn,位置138的Arg,位置139的Pro，位置140的Asp和單體B中的下列殘基位置20的Pro,位置32的Arg，位置65的Lys,位置112的Lys,位置115的Tyr,位置145的Ala，位置147的Ser。備選地，本文所述的納米體、蛋白或多肽針對和/或可以結合TNF-a的表位，其包括上文提及的胺基酸(單體A中位置88的Gin;單體A中位置90的Lys和單體B中位置146的Glu)，並且另外包括TNF-a單體A的下列胺基酸殘基的至少一個、優選地2個或多個、更優選地5個或多個、並且優選地全部或基本上全部位置75的Leu，位置77的Thr,位置79的Thr,位置80的Ile，位置81的Ser,位置87的Tyr,位置89的Thr，位置91的Val,位置92的Asn,位置95的Ser,位置97的Ile,位置135的Glu,位置136的lie,位置137的Asn以及單體B的下列殘基位置33的Ala,位置145的Ala,位置147的Ser。所述表位可以通過與TNF分子複合結晶的納米體的結構分析，或者通過其它途徑諸如通過肽掃描分析進行的表位繪圖而進行描繪。通過比較，從結晶數據(未顯示)可以看出WO04/041862的納米體3E結合與本發明優選的表位不同的表位(即，包括位置141的Tyr,位置140的Asp,位置67的Gln，位置24的Gly和位置23的Glu的表位)。因此，另一方面，本發明涉及免疫球蛋白可變結構域(或其適當的部分)，其可以結合位於和/或形成部分TNF受體結合位點的TNF-a的表位，並且優選地結合這樣的表位，即，所述表位包括下列TNF-a胺基酸殘基中的至少1個、優選地2個或多個、並且優選地全部位置88的Gin;位置90的Lys和位置146的Glu。這樣的免疫球蛋白可變結構域優選地是重鏈可變結構域或輕鏈可變結構域，並且特別是重鏈可變結構域，其可以是任何哺乳動物的重鏈可變結構域，包括但不限於人重鏈可變結構域、小鼠重鏈可變結構域和駱駝科(Camdid)重鏈可變結構域(諸如駱駝科4-鏈免疫球蛋白的重鏈可變結構域或所謂的重鏈抗體的重鏈可變結構域(VHH結構域))。所述免疫球蛋白可變結構域優選地是結構域抗體或單結構域抗體或者適於用作(單)結構域抗體。最優選地，所述免疫球蛋白可變結構域是納米體(如本文定義的那樣)，並且適合用於本發明這一方面的納米體的一些優選的但非限制性的實例是PMP1C2(TNF1，SEQIDNO:52)和PMP5F10CTNF3,SEQIDNO:60),以及其人源化的和其它變體(如本文進一步所述的那樣)。關於納米體，前述免疫球蛋白可變結構域還可以是本文所述的人源化的(作為舉例，並沒有限制)。本發明還涉及包括或者基本上由這樣的免疫球蛋白可變結構域組成的蛋白和多肽，例如，其可以如本文定義的那樣。備選地，這樣的可變結構域可以形成部分ScFv構建體、雙特異性構建體、嵌合抗體或抗體結構以及其它免疫球蛋白構建體，例如，Hoogenboom(NatureBiotechnology(自然生物學技術)(1997)，15:125-126)綜述的那些。然而，優選地，針對上述表位的免疫球蛋白可變結構域是納米體，在這種情形中，包括這樣的納米體的蛋白和多肽可以在本文中進一步描述。因此，本發明的一些優選的方面涉及I)針對TNF-ot三聚體上相同的表位的納米體，納米體TNFl(SEQIDNO:52)。II)針對TNF-oc三聚體上相同的表位的納米體，納米體TKF3(SEQIDNO:60)。III)針對TNF-oc三聚體的表位的納米體，所述表位至少包括下列胺基酸殘基單體A中位置88的Gin;單體A中位置90的Lys和單體B中位置146的Glu。IV)針對TNF-oc三聚體的表位的納米體，所述表位包括下列胺基酸殘基單體A中位置88的Gin;單體A中位置90的Lys和單體B中位置146的Glu;並且其還包括至少包括TNF-a單體A下列胺基酸殘基中的至少1個、優選地2個或多個、更優選地5個或多個、並且優選地全部或基本上全部位置24的Gly,位置25的Gln，位置72的Thr，位置73的His,位置74的Val,位置75的Leu，位置77的Thr,位置79的Thr,位置83的lie,位置89的Thr,位置91的Val，位置92的Asn,位置97的Ile，位置131的Arg，位置135的Glu，位置136的lie,位置137的Asn，位置138的Arg，位置139的Pro，位置140的Asp和單體B中的下列殘基位置20的Pro,位置32的Arg，位置65的Lys,位置112的Lys,位置115的Tyr，位置145的Ala,位置147的Ser。V)針對TNF-oc三聚體的表位的納米體，所述表位包括下列胺基酸殘基單體A中位置88的Gin;單體A中位置90的Lys和單體B中位置146的Glu;並且其還包括TNF-a單體A下列氮基酸殘基中的至少1個、優選地2個或多個、更優選地5個或多個、並且優選地全部或基本上全部位置75的Leu，位置77的Thr,位置79的Thr,位置80的IIe，位置81的Ser，位置87的Tyr,位置89的Thr,位置91的Val,位置92的Asn,位置95的Ser,位置97的lie,位置135的Glu，位置136的Ile,位置137的Asn以及單體B的下列殘基:位置33的Ala,位置145的Ala,位置147的Ser-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其具有這樣的關於TNF的K。ff速率好於2.10—3(l/s)，優選地好於l.l(T3。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於WO04/041862中納米體VHH3E(SEQIDNO:4)在相同檢測中的EC50值；或者所述納米體的人源化變體。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於12nM;或者所述納米體的人源化變體。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於5nM;或者所述納米體的人源化變體。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於3nM;或者所述納米體的人源化變體。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其為人源化的納米體。並且本實施方案的一些優選的方面涉及-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其為GLEW-類納米體。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其為人源化的GLEW-類納米體。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其在位置103含有精氨酸殘基(R)。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其在位置103含有精氨酸殘基(R)，並且其是人源化的。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其為GLEW-類納米體，並且其在位置103含有精氨酸殘基(R)，並且其是人源化的。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其在位置108含有亮氨酸殘基(L)。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其與胺基酸序列SEQIDNO's52(TNF1),76(TNF13)，77(TNF14),95(TNF29)或96(TNF30)之一具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文定義)。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中a)CDR1包括-胺基酸序列DYWMY;或-與胺基酸序列DYWMY有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95。％、甚至更優選地至少99。^的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列DYWMY有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；和b)CDR2包括-胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；以及C)CDR3包括-胺基酸序列SPSGFN;或-與胺基酸序列SPSGFN有至少80%、優選地至少卯％、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SPSGFN有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列DYWMY。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中-CDR1包括胺基酸序列DYWMY;並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN;或-CDR1包括胺基酸序列DYWMY;並且CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列DYWMY;並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列DYWMY;CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中a)CDR1為-胺基酸序列DYWMY;或-與胺基酸序列DYWMY有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列DYWMY有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且其中b)CDR2為-胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；以及其中c)CDR3為-胺基酸序列SPSGFN;或-與胺基酸序列SPSGFN有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SPSGFN有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中CDR1是胺基酸序列DYWMY。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中CDR3是胺基酸序列SPSGFN。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中-CDR1是胺基酸序列DYWMY;並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN;或-CDR1是胺基酸序列DYWMY;並且CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中CDR1是胺基酸序列DYWMY;並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中CDR1是胺基酸序列DYWMY;CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中-任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代；和/或-與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。並且本實施方案的一些優選的方面涉及-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其為KERE-類納米體。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其為人源化的KERE-類納米體。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其與胺基酸序列SEQIDNO's50(TNF3),83(TNF20),85(TNF21),85(TNF22),96(TNF23)或98(TNF33)之一具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相伺性。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中a)CDRl為-胺基酸序列NYYMG;或-與胺基酸序列NYYMG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列NYYMG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且b)CDR2為-胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;或-與胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；以及c)CDR3為-胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY;或-與胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中CDR1是胺基酸序列NYYMGo-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中CDR2是胺基酸序列NISWRG預YYKDSVKG。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中CDR3是胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中-CDR1是胺基酸序列NYYMG;並且CDR3是胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY;或-CDR1是胺基酸序列NYYMG;並且CDR2是胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;或.-CDR2是胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;並且CDR3是胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中CDR1是胺基酸序列NYYMG;CDR2是胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY並且CDR3是胺基酸序列ILPLSDDPGWNTY。-按照上述I)-V)中任一項的納米體，其中-任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代；和/或-與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。並且仍有一些其它特別優選的方面為VI)蛋白或多肽，其包括或者基本上由按照上述i)-v)中任一項的納米體組成。VII)蛋白或多肽，其包括或者基本上由至少一種按照上述I)-V)中任一項的納米體組成。VIII)蛋白或多肽，其包括兩種按照上述I)-V)中任一項的納米體。IX)蛋白或多肽，其包括兩種按照上述I)-V)中任一項的納米體，並且其是這樣的蛋白或多肽，即，當與TNF三聚體結合時，所述蛋白或多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或由這樣的受體交聯調控的信號傳導。X)蛋白或多肽，其包括兩種按照上述I)-V)中任一項的納米體，並且其能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點。XI)蛋白或多肽，其包括兩種按照上述I)-V)中任一項的納米體，其通過適當的接頭連接。XII)蛋白或多肽，其包括兩種按照上述I)-V)中任一項的納米體，其通過適當的接頭連接，並且其被聚乙二醇化(pegylated)。XIII)蛋白或多肽，其包括兩種按照上述I)-V)中任一項的納米體，並且其還包括至少一種針對人血清白蛋白的納米體。XIV)蛋白或多肽，其包括兩種按照上述I)-V)中任一項的納米體，並且其還包括至少一種針對人血清白蛋白的納米體，並且其是這樣的蛋白或多肽，即，當與TNF三聚體結合時，所述蛋白或多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或這樣的受體交聯調控的信號傳導。XV)蛋白或多肽，其包括兩種按照上述I)-V)中任一項的納米體，並且其還包括至少一種針對人血清白蛋白的納米體，並且其能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點。XVI)蛋白或多肽，其包括兩種按照上述I)-V)中任一項的納米體，並且其還包括一種針對人血清白蛋白的納米體，其中按照上述I)-V)中任一項的兩個納米體的每一種都交聯到，任選地通過適宜的接頭，針對人血清白蛋白的一種納米體上。XVII)蛋白或多肽，其包括兩種按照上述I)-V)中任一項的納米體，並且其還包括一種針對人血清白蛋白的納米體，其中按照上述i)-v)中任一項的兩個納米體每一種都交聯到，任選地通過適宜的接頭，針對人血清白蛋白的一種納米體上，並且其為這樣的蛋白或多肽，即，當與TNF三聚體結合時，所述蛋白或多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或這樣的受體交聯調控的信號傳導。XVIII)蛋白或多肽，其包括兩種按照上述I)-V)中任一項的納米體，並且其還包括一種針對人血清白蛋白的納米體，其中按照上述I)-V)中任一項的兩個納米體每一種都交聯到，任選地通過適宜的接頭，針對人血清白蛋白的一種納米體上，並且其能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點。-按照上述vi)-xvni)中任一項的蛋白或多肽，其中至少一種針對人血清白蛋白的納米體是人源化的納米體。-按照上述vi)-xvm)中任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是納米體ALB1(SEQIDNO:63)的人源化變體。-按照上述vi)-xvm)中任一項的蛋白或多肽，其中至少一種針對人血清白蛋白的納米體選自由下列各項組成的組ALB3(SEQIDNO:87),ALB4(SEQIDNO:88),ALB5(SEQIDNO:89),ALB6(SEQIDNO:100),ALB7(SEQIDNO:101)，ALB8(SEQIDNO:102)ALB9(SEQIDNO:103)和ALB10(SEQIDNO:104)。-按照上述vi)-xvin)中任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是ALB8。-按照上述vi)-xvm)中任一項的蛋白或多肽，其包括或者基本上由兩種按照上述I)-V)中任一項的人源化納米體，以及納米體ALB1(SEQIDNO:63)的一種人源化變體組成。應該注意，當納米體按上文提法作為"乾棍丄述/>0^在一項6"acco油"cew"/z朋y。/",o"a6ow)"日寸，它是至少按照I)-V)中的一項，可以按照i)-v)中的兩項或多項，並且還可以包括視為"按照上述I)-V)中任一項"的其它方面中的任何一個或多個。類似地，當蛋白或多肽按上文提法作為"貧厲J:述"-0^在一,T/"acco^a"cea"_yo"eq/WtoZF//""時，它是至少按照VI)-XVIII)中的一項，可以按照vi)-xvm)中的兩項或多項，並且還可以包括視為"按照上述vi)-xvm)中任一項"的其它方面中的任何一個或多個。下列情形也在本發明的範圍內，在適用的情形中，本發明的納米體或多肽可以結合TNF-a的兩個或多個抗原決定簇、表位、部分、結構域、亞基或構象。在這樣的情形中，本發明的納米體和/或多肽結合的TNF-a抗原決定簇、表位、部分、結構域或亞基可以是基本相同的(例如，如果TNF-a包含重複的結構基序或者作為多聚體存在)，或者可以是不同的(並且在後一種情形中，本發明的納米體和多肽可以以可能相同或不同的親和力和/或特異性與TNF-a的這樣不同的抗原決定簇、表位、部分、結構域、亞基相結合)。並且，例如，當TNF-a以活化的構象和以無活性構象存在時，本發明的納米體和多肽可以結合這些構象的任一種，或者可以結合這兩種構象(即，以可能相同或不同的親和力和/或特異性結合)。並且，例如，本發明的納米體和多肽可以結合這樣的TNF-a構象，即在其中它與相關配體結合，可以結合這樣的TNF-a構象，即在其中它不與相關配體結合，或者可以結合這兩種構象(也是以可能相同或不同的親和力和/或特異性結合)。還期望本發明的納米體和多肽廣泛地結合所有天然存在的或合成的TNF-a類似物、變體、突變體、等位體、部分和片段，或者至少結合TNF-a的這些類似物、變體、突變體、等位體、部分和片段，所述類似物、變體、突變體、等位體、部分和片段包含與本發明的納米體和多肽在TNF-a中(例如，在野生型TNF-a中)結合的抗原決定簇或表位基本上相同的一個或多個抗原決定簇或表位。此外，在這樣的情形中，本發明的納米體和多肽可以結合這樣的類似物、變體、突變體、等位體、部分和片段，其以與本發明的納米體結合(野生型)TNF-a的親和力和特異性相同或不同(即，高於或低於)的親和力和/或特異性結合。本發明的納米體和多肽結合一些TNF-a類似物、變體、突變體、等位體、部分和片段，而不結合其它的，這也包括在本發明的範圍內。一般地，本發明的納米體和多肽至少結合這些形式(包括單體、多聚體及相關的形式)，所述形式從生物學和/或治療觀點來看是最相關的，這對於熟練的技術人員是清楚的。此外，由於TNF-OC以單體形式和多聚體形式存在，並且特別以三聚體形式存在，所以下述也在本發明範圍內本發明的納米體和多肽只結合單體形式的TNF-a，或者本發明的納米體和多肽另外還結合一種或多種這樣的多聚體形式，諸如TNF的三聚體形式；或者可以只結合這樣的多聚體(例如，三聚體)形式。因此，一般地，在本敘述中當提及針對TNF-a的納米體、蛋白或多肽時，應該理解這還包括針對以其三聚體形式存在的TNF-a的納米體(包括但不限於針對這樣的三聚體的受體結合位點(例如，用於TNF-RI,THF-RII的結合位點，也叫作p55或p75)的納米體)。在所有這些情形中，本發明的納米體和多肽可以結合這樣的多聚體或締合的蛋白複合物，其以與本發明的納米體和多肽與單體和非締合狀態的TNF-a結合的親和力和/或特異性可能相同或不同(即，高於或低於)的親和力和/或特異性而結合。此外，一般地，包含兩個或多個針對TNF-a的納米體的本發明的多肽可以以比相對應的一個或多個單體納米體更高的親和力結合。例如，並且沒有局限性，包含兩個或多個針對TNF-a多價(如本文所定義那樣)蛋白或多肽的不同表位的納米體的多價(如本文所定義那樣)蛋白或多肽可以以比相對應的單體更高的親和力結合TNF-cc，所述TNF-a多價蛋白或多肽包含兩個或多個針對不同TNF-a表位的納米體。更重要地，包含兩個或多個針對TNF-a的納米體的多價(如本文所定義那樣)蛋白或多肽可以(並且通常應該)以比TNF-a單體更高的親和力結合TNF-a多聚體，並且通常還應該以比相對應的單體納米體更高的親和力結合。在這樣的多價蛋白或多肽中，例如，所述兩個或多個納米體可以針對相同的表位、基本上等價的表位或不同的表位。在這樣的多價蛋白或多肽的一個實施方案中，所述兩個或多個納米體可以是相同的(並且因此針對相同的表位)。由於已知通過TNF的信號傳導的初級模式包括TNF受體與TOF分子三聚體的交聯，所述TNF分子三聚體包含3個受體結合位點(例如參見Peppel等，《/五xp.Medr實驗度學染U，174(1991),1483-1489;Engelmann等，/所o/.r^"激眾學^^若J，265(1990)，14497;Smith和Baglioni,7!歷o/.Ozem,f全激化學^^吝j,264(1989),14646)，所以後者特別重要。例如，如Peppd等所述那樣，與單價胞外結構域相比，TNF受體的工程單價胞外結構域一一其僅能夠阻滯TNF三聚體上的單個受體結合位點一一不能防止TNF受體與其餘兩個受體結合位點的交聯；而包括兩個這樣的胞外結構域的工程蛋白_一因此能夠阻滯兩個受體結合位點一一提供了顯著的功效。在本發明中，已經發現，在體外模型中，在細胞模型中以及在先體外後體內模型中，所述單價納米體能夠以TNF活性減小的這樣的方式結合TNF-oc(參見下文實驗部分)。儘管本發明不受限於任何具體的機制、解釋或者假說，但是假設，由於它們小的大小和針對TNF-a的高親和力，兩個或三個本發明的單價納米體能夠同時佔據TNF三聚體上的兩個或三個不同的受體結合位點，因此防止所述三聚體起始受體交聯並且由此而起始信號傳導(然而，並不排除其它作用機制例如，取決於其所針對的表位，本發明的納米體還可以抑制TNF締合成三聚體狀態)。還應該注意，除了結合單一TNF-三聚體上的兩個或多個受體結合位點之外或者作為備選，包括或者基本上由針對TNF-a表位的兩個或多個免疫球蛋白可變結構域(或其適當的片段)組成的本發明的蛋白或多肽可以結合(例如分子間地結合)在兩個分開的TNF-a分子(例如，兩個分開的三聚體)上的表位。然而，按照一個特別優選的實施方案，本發明涉及這樣的蛋白或多肽，即，其包括或基本上由兩種或多種免疫球蛋白可變結構域(或其適當的片段)組成，所述免疫球蛋白可變結構域(或其適當的片段)的每一種都針對TNF-cx上(並且特別是TNF-a三聚體上)的表位，所述表位位於和/或形成TNF三聚體受體結合位點的部分，以致當與TNF三聚體結合時，所述多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或由這樣的受體交聯調控的信號傳導。特別地，按照這一優選的實施方案，本發明涉及這樣的蛋白或多肽，即，其包括或基本上由兩種或多種免疫球蛋白可變結構域(或其適當的片段)組成，所述免疫球蛋白可變結構域(或其適當的片段)的每一種都針對TNF-a上(並且特別是TNF-a三聚體上)的表位，所述表位位於和/或形成TNF三聚體受體結合位點的部分，其中所述免疫球蛋白可變結構域以蛋白或多肽能夠同時結合單一TNF三聚體上的兩個或多個受體結合位點(換言之，能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點)的這樣的方式彼此交聯。在這一實施方案中，所述兩種或多種免疫球蛋白可變結構域優選地如上文定義，並且最優選地是納米體(以致所述蛋白或多肽是多價納米體構建體，如本文進一步所述)。此外，在這一實施方案中，所述兩種或多種免疫球蛋白可變結構域可以是相同的或不同的；並且可以針對TNF受體結合位點中的不同表位，但是優選地針對相同的表位。在這一實施方案的一個優選的方面，所述兩種或多種免疫球蛋白可變結構域針對TNF-oc三聚體的表位，其表位位於和/或形成TNF受體結合位點的部分。例如，所述兩種或多種免疫球蛋白可變結構域優選地針對和/或可以結合TNF-a三聚體的表位，所述表位包括下列胺基酸殘基第一個TNF單體(本文叫作"單體A")上位置88的Gln和位置90的Lys，以及第二個TNF單體(本文叫作"單體B")上位置146的Glu(其中在TNF三聚體中單體A和單體B—起形成TNF受體結合位點)。正如下文參考納米體更詳細的描述那樣，在這樣的蛋白或多肽中，所述至少兩個免疫球蛋白可變結構域優選以這樣的方式連接，即，在這樣的蛋白或多肽中存在的兩個免疫球蛋白可變結構域的N端和C端之間的距離優選地至少為50埃，並且更優選地在55-200埃區間，並且更優選地在埃區間，並且特別是65-150埃區間。在這一實施方案的一個特別優選的方面，這兩個或多個免疫球蛋白序列是納米體，並且優選地選自本文所述的納米體。用於本發明的這一實施方案的一些特別優選的納米體是PMP1C2(TNF1,SEQIDNO:52)和/或PMP5F10(TNF3,SEQIDNO:60)，以及其人源化的和其它變體(如本文所述)；其中PMP1C2因此，現在將參考納米體更詳細地描述本實施方案。然而，技術人員應該清楚，本文的教導可以類似地應用到免疫球蛋白可變結構域。在本發明的這一實施方案中，所述兩個或多個免疫球蛋白序列通常通過一個或多個適宜的接頭連接，所述接頭是這樣的，即，每一個免疫球蛋白序列可以結合在同一TNF三聚體上的不同受體結合位點。適宜的接頭尤其取決於TNF三聚體上免疫球蛋白序列結合的表位(之間的距離)，並且基於本文的內容，可選地在一些有限程度的常規實驗後，這對於技術人員是顯而易見的。例如，當所述兩個或多個免疫球蛋白序列是(單一)結構域抗體或納米體時，適宜的接頭可以選自本文所述的接頭，但是其具有這樣的接頭長度，g卩，所述兩個或多個(單一)結構域抗體或納米體可以分別結合到同一TNF三聚體上的不同的受體結合位點。此外，當結合到TNF-a的受體結合位點的兩個或多個免疫球蛋白序列是(單一)結構域抗體或納米體時，它們還可以通過第三(單一)結構域抗體或納米體彼此連接(其中所述兩個或多個免疫球蛋白序列可以直接與第三(單一)結構域抗體/納米體連接或者通過適宜的接頭連接)。例如，這樣的第三(單一)結構域抗體或納米體可以是提供增加的半衰期的(單一)結構域抗體或納米體，如本文進一步所述。例如，後者(單一)結構域抗體或納米體可以是能夠結合(人)血清蛋白諸如(人)血清白蛋白的(單一)結構域抗體或納米體，如本文進一步所述。備選地，與TNF-a的受體結合位點結合的所述兩個或多個免疫球蛋白序列可以串連連接(直接地或者通過適宜的接頭)，並且所述第三(單一)結構域抗體或納米體(其可以提供增加的半衰期，如上文所述)可以直接或者通過適宜的接頭與這兩個或多個前文提及的免疫球蛋白序列之一連接。這樣的構建體的一些非限制性實例是SEQIDNOS:93或94的構建體。特別地，本發明已經發現(參見本文的結晶學數據)，當存在於本發明的多價或多特異性蛋白或多肽中的納米體與上述特異性表位(其為TNF1及其人源化變體的表位，以及TNF3及其人源化變體的表位)相結合時，那麼優選地，在這樣的蛋白或多肽中存在的兩個(或多個)抗-TNF納米體應該以這樣的方式連接，即，在這樣的蛋白或多肽中存在的兩個抗-TNF納米體的N端和C端之間的距離應該優選地為至少50埃，並且更優選地在55-200埃區間，並且特別在65-150埃區間(上限較不嚴格，並且可以出於便利的緣故進行選擇，例如，考慮到蛋白的表達/生產)；或者更普遍地，所述距離應該是這樣的，即，其允許蛋白或多肽進行分子內結合TNF-三聚體(即，取代分子間結合)。兩個抗-TNF納米體的N端和C端的距離可以通過任何適宜的方法確定，諸如通過結晶學或分子建模(如本文所述)。這些技術通常還使得確定特異的多價或多特異性蛋白或多肽是否能夠提供分子內建模成為可能。備選地，本發明還提供使用大小排阻層析的簡單實驗(如Santora等，Anal.Biochem.(分析生物化學)，299:119-129所述)，其可以用來確定本發明給出的蛋白或多肽是否(最顯著地)提供與TW-三聚體的分子內結合或者(最顯著地)兩個或多個TNF-三聚體之間的分子間結合。因此，在本發明的一個具體的實施方案中，本發明的蛋白或多肽優選是這樣的，即，在這一實驗中，它最顯著地或者基本上專一地導致分子內結合。然而，如上文所強調，應該注意到通過獨立的TNF-(x分子(例如，三聚體)的分子間結合而運作的本發明的蛋白或多肽也在本發明的範圍內。因此，在另一優選的方面，本發明提供包括至少兩個針對TNF-ot(並且特別是TNF-a三聚體)的納米體的多價或多特異性蛋白或多肽，其中所述納米體優選地針對基本上與納米體PMP1C2相同的表位(如本文所述)，並且其中所述至少兩個納米體以這樣的方式連接，即，至少兩個抗-TNF納米體的N端和C端之間的距離是這樣的所述蛋白或多肽能夠進行與TNF-三聚體的分子內結合(如本文所述)。優選地，在這樣的蛋白或多肽中，兩個抗-TNF納米體的N端和C端之間的距離為至少50埃，並且更優選地在55-200埃區間，並且特別是65-150埃區間。在這樣的優選蛋白或多肽中，所述兩個或多個納米體可以以任何適當的方式連接，條件是可以獲得在至少兩個抗-TNF納米體的N端和C端之間的優選距離，和/或條件是所述蛋白或多肽能夠進行與TNF-單聚體的分子內結合(如本文所述)。例如，在其最簡單的形式中，所述至少兩個納米體通過適宜的接頭或間隔直接連接，所述接頭或間隔提供至少兩個抗-TNF納米體的N端和C端的優選距離，並且其可以允許所述蛋白或多肽進行與TNF-三聚體的分子內結合(如本文所述)。本文描述了適宜的接頭，並且可以一一例如並且沒有限制一一包括一種胺基酸序列，其中胺基酸序列優選地具有14個胺基酸的長度，更優選地至少17個胺基酸，諸如約20-40個胺基酸序列(對於每一胺基酸使用3.5埃的平均距離，其分別對應49埃、59.5埃和約70埃的接頭距離；基於上文提及的距離，以相同方式計算胺基酸的最大量)。優選地，這樣的胺基酸序列還應該是這樣的，即，其允許所述蛋白或多肽進行與TNF-三聚體的分子內結合(如本文所述)。因此，在另一優選的方面，本發明提供包括至少兩個針對TNF-oc(並且特別是TNF-a三聚體)的納米體的多價或多特異性蛋白或多肽，其中所述納米體優選地針對基本上與納米體PMP1C2相同的表位(如本文所提及)，並且其中所述至少兩個納米體使用適宜的接頭或間隔彼此連接，以致至少兩個抗-TNF納米體的N端和C端之間的距離是這樣的所述蛋白或多肽能夠進行與TNF-三聚體的分子內結合(如本文所述)。優選地，在這樣的蛋白或多肽中，兩個抗-TNF納米體的N端和C端之間的距離(由此所述接頭或間隔的優選長度)為至少50埃，並且更優選地在55-200埃區間，並且特別是65-150埃區間。更優選地，在這一優選的方面，所述接頭或間隔是這樣的胺基酸序列，即，其包括至少14個，優選地至少17個，更優選地至少20個胺基酸(具有出於便利緣故而選擇的非嚴格性上限，約50個，並且優選地約40個胺基酸)。在一個優選的但是非限制性實施方案中，所述接頭基本上由甘氨酸和絲氨酸殘基組成(如下文進一步所述)。例如，一個適宜的接頭是本文所述的GS30接頭，其包括30個胺基酸殘基。在另一個實施方案中，所述至少兩個針對TNF-a的納米體通過另一部分(任選地通過一個或兩個接頭)諸如另一蛋白或多肽而彼此連接。在這一實施方案中，可以理想地在至少兩個抗-TNF納米體的N端和C端之間具有優選的距離(即，如上文提及)，例如，以便蛋白或多肽仍然可以進行與TNF-三聚體的分子內結合(如本文所述)。在這一實施方案中，所述至少兩個納米體可以直接與另一部分連接，或者使用適宜的接頭或間隔而連接，條件還是仍然可以獲得優選的距離和/或理想的分子內結合。所述部分可以是沒有偏離所述蛋白或多肽與TNF的結合和/或所述蛋白或多肽更理想的生物或藥理學特徵(太多)的任何適宜的部分。同樣地，所述部分可以基本上沒有活性，或者可以是生物活性的，並且同樣可以或者不可以提高所述蛋白或多肽的理想的特性和/或可以賦予所述蛋白或多肽一種或多種額外的理想特性。例如，並且沒有限制地，所述部分可以提高蛋白或多肽的半衰期，和/或可以減小其免疫原性或者提高任何其它理想的特性。在一個優選的實施方案中，所述部分可以是另一種納米體(包括但不限於針對TNF-OC的第三納米體，儘管這不是必要的並且通常較不優選)，並且特別地是提高蛋白或多肽半衰期的另一種納米體，諸如針對血清蛋白例如針對人血清蛋白的納米體。本文描述了這樣的蛋白和多肽的實例。因此，在一個實施方案中，本發明涉及包括兩種或多種免疫球蛋白序列(或其適當的片段)的多價多特異性構建體，其每一種針對TNF-a(例如，TNF-a三聚體)上位於和/或形成受體結合位點的部分的表位，並且其通過提供提高的半衰期的至少一個免疫球蛋白序列(並且任選地通過一個或多個適宜的接頭)彼此連接，以致當與TNF三聚體結合時，所述多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體的交聯和/或信號傳導。這樣的多肽可以是這樣的，即，以便前文提及的兩個或多個免疫球蛋白序列可以分別與TNF三聚體上的不同受體結合位點結合。特別地，在這一實施方案中，所述多肽可以包括三價雙特異性納米體，其包括每一種分別針對TNF-a(並且特別是TNF-a三聚體)上位於和/或形成受體結合位點的部分的表位的兩個納米體，其中所述納米體通過提供提高的半衰期的第三納米體(例如，針對血清蛋白諸如人血清白蛋白的納米體)彼此連接，其中每一前文提及的兩個納米體可以直接與所述第三納米體連接或者通過一個或多個適宜的接頭連接，以致當與TNF三聚體結合時，所述多肽能夠抑制或者減少TNF受體交聯和/或由所述TNF三聚體調控的信號傳導。這樣的多肽可以是這樣的，以致前文提及的兩個納米體可以分別與TNF三聚體上的不同受體結合位點結合。此外，用於本發明的這一實施方案的一些特別優選的納米體是PMP1C2(TNF1，SEQIDNO:52)和/或PMP5F10(TNF3，SEQIDNO:60)，以及其人源化的和其它變體(如本文所述)；其中PMP1C2(TNF1,SEQIDN0:52)及其人源化變體是特別優選的；並且所述納米體針對本文所述的人血清白蛋白。本發明的這一實施方案的一些優選的但是非限制性的構建體是TNF24(SEQIDNO:90),TNF26(SEQIDNO:92)，TNF27(SEQIDNO:93),TNF28(SEQIDNO:94),TNF60(SEQIDNO:417)和TNF62(SEQIDNO:418)，其中TNF60是特別優選的。因此，本發明的這一實施方案的一些優選方面涉及XDO包括或者基本上由兩種或多種免疫球蛋白可變結構域(或其適當的片段)組成的蛋白或多肽，所述免疫球蛋白可變結構域(或其適當的片段)每一種針對TNF-a(並且特別是TNF-oc三聚體)上位於和/或形成TNF三聚體的受體結合位點的部分的表位，以致當與TNF三聚體結合時，所述多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或由所述受體交聯調控的信號傳導。XX)包括或者基本上由兩種或多種免疫球蛋白可變結構域(或其適當的片段)組成的蛋白或多肽，所述免疫球蛋白可變結構域(或其適當的片段)每一種針對TNF-a(並且特別是TNF-a三聚體)上位於和/或形成TNF三聚體的受體結合位點的部分的表位，以致所述多肽能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述免疫球蛋白可變結構域以這樣的方式彼此連接，g卩，所述蛋白或多肽能夠同時結合單一TNF三聚體上的兩個或多個受體結合位點。-按照上述XDQ-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述免疫球蛋白可變結構域能夠結合與納米體TNFl(SEQIDNO:52)相同的表位。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述免疫球蛋白可變結構域能夠結合TNF三聚體的TNF受體結合位點內的表位，所述表位包括下列胺基酸殘基單體A中位置88的Gln;單體A中位置90的Lys和單體B中位置146的Glu。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述免疫球蛋白可變結構域能夠結合TNF三聚體的TNF受體結合位點內的表位，所述表位至少包括下列胺基酸殘基單體A中位置88的Gln;單體A中位置90的Lys和單體B中位置146的Glu;並且其還包括TNF-a單體A的下列胺基酸殘基的至少1個、優選地2個或多個、更優選地5個或多個、並且優選地全部或基本上全部位置24的Gly,位置25的Gin,位置72的Thr,位置73的His,位置74的Val,位置75的Leu，位置77的Thr，位置79的Thr,位置83的lie,位置89的Thr,位置91的Val，位置92的Asn,位置97的lie,位置131的Arg,位置135的Glu,位置136的lie,位置137的Asn，位置138的Arg,位置139的Pro，位置140的Asp，以及單體B中的下列殘基位置20的Pro,位置32的Arg,位置65的Lys，位置112的Lys，位置115的Tyr,位置145的Ala,位置147的Ser。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述免疫球蛋白可變結構域能夠結合TNF三聚體的TNF受體結合位點內的表位，其至少包括下列胺基酸殘基單體A中位置88的Gin;單體A中位置90的Lys和單體B中位置146的Glu;並且其還包括TNF-a單體A的下列胺基酸殘基的至少1個、優選地2個或多個、更優選地5個或多個、並且優選地全部或基本上全部:位置75的Leu,位置77的Thr,位置79的Thr,位置80的lie,位置81的Ser,位置87的Tyr,位置89的Thr，位置91的Val,位置92的Asn,位置95的Ser，位置97的Ile，位置135的Glu,位置136的Ile,位置137的Asn，以及單體B中的下列殘基位置33的Ala,位置145的Ala,位置147的Ser。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述至少兩種免疫球蛋白可變結構域以這樣的方式連接，即，在這樣的蛋白或多肽中存在的第一免疫球蛋白可變結構域的N端和第二免疫球蛋白可變結構域的C端之間的距離為至少50埃。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中第一免疫球蛋白可變結構域的N端和第二免疫球蛋白可變結構域的C端之間的距離為55-200埃。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中第一免疫球蛋白可變結構域的N端和第二免疫球蛋白可變結構域的C端之間的距離為65-150埃。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域通過接頭或間隔彼此連接。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述接頭或間隔是胺基酸序列。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述接頭或間隔包括至少14個胺基酸殘基。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述接頭或間隔包括至少17-50個胺基酸殘基。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述接頭或間隔基本上由甘氨酸和絲氨酸殘基組成。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述接頭或間隔是GS30(SEQIDNO:69)。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域通過另一部分彼此連接。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述其它部分是蛋白或多肽部分。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述其它部分賦予所述蛋白或多肽至少一種理想的特性，或者提高所述蛋白或多肽的至少一種理想的特性。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述其它部分提高所述蛋白和/或多肽的半衰期和/或減小所述蛋白或多肽的免疫原性。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域的每一種通過接頭或間隔與所述其它部分連接。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述接頭或間隔是胺基酸序列。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述接頭或間隔基本上由甘氨酸和絲氨酸殘基組成。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述其它部分是納米體。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述其它部分是針對人血清白蛋白的納米體。-按照上述XIX)-xx)中任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是人源化的納米體。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是納米體ALB1(SEQIDNO:63)的人源化的變體。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體選自由下列各項組成的組ALB3(SEQIDNO:87),ALB4(SEQIDNO:88),ALB5(SEQIDNO:89)，ALB6(SEQIDNO:100),ALB7(SEQIDNO:101),ALB8(SEQIDNO:102)ALB9(SEQIDNO:103)和ALB10(SEQIDNO:104)。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是ALB8。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是納米體。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是具有優於2.10—s(l/s)、優選地優於1.10—3(l/s)的對於TNF的K。ff速率的納米體；或者這樣的納米體的人源化變體。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是這樣的納米體，即，所述納米體在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於WO04/041862的納米體VHH3E(SEQIDNO:4)在相同檢測中的EC50值；或者這樣的納米體的人源化變體。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是這樣的納米體，即，所述納米體在wo04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於12nM;或者這樣的納米體的人源化變體。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是這樣的納米體，目卩，所述納米體在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於5nM;或者這樣的納米體的人源化變體。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是這樣的納米體，即，所述納米體在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於3nM;或者這樣的納米體的人源化變體。-按照上述XDC)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是按照上述XIX)-XX)中任一項的納米體，其是人源化的；這一實施方案的一些特別優選的方面為-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是GLEW-類納米體。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是在位置103具有精氨酸殘基(R)的納米體。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是在位置103具有精氨酸殘基(R)的GLEW-類納米體。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是與胺基酸序列SEQIDNO's52(TNP1),76(TNF13),77(TNF14),95(TNF29)或96(TNF30)之一具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的納米體(如本文所定義)。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中a)CDR1包括-胺基酸序列DYWMY;或-與胺基酸序列DYWMY有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列DYWMY有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且b)CDR2包括-胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；以及c)CDR3包括.--胺基酸序列SPSGFN;或-與胺基酸序列SPSGFN有至少80X、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SPSGFN有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列。-按照上述XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列DYWMY。-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG。-按照XIX)-XX沖任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中--CDR1包括胺基酸序列DYWMY;並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN;或者-CDR1包括胺基酸序列DYWMY;並且CDR2包括胺基酸序列EINTNGUTKYPDSVKG;或者-CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列DYWMY;並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列DYWMY;CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG，並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中a)CDR1為-胺基酸序列DYWMY;或-與胺基酸序列DYWMY有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列DYWMY有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且其中b)CDR2為-胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列EINTNGUTKYPDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且其中c)CDR3為-胺基酸序列SPSGFN;或-與胺基酸序列SPSGFN有至少80X、優選地至少卯％、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SPSGFN有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列。按照上XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR1是基酸序列DYWMY。按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR2是基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG。按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR3是基酸序列SPSGFN。按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中-CDR1是胺基酸序列DYWMY;並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN;或-CDR1是胺基酸序列DYWMY;並且CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN。-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR1是胺基酸序列DYWMY;並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN。-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR1是胺基酸序列DYWMY;CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG，和CDR3是胺基酸序列SPSGFN。-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中-任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代；和/或-與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域選自由下列各項組成的組納米體TNF1(SEQIDNO:52)和納米體TNF1(SEQIDNO:52)的人源化變體。-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域選自由下列各項組成的組TNF13(SEQIDNO:76),TNF14(SEQIDNO:77)，TNF29(SEQIDNO:95)和TNF30(SEQIDNO:96)。-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是TNF30(SEQIDNO:96);並且這一實施方案的一些特別優選的方面為-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是KERE-類納米體。-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是與胺基酸序列SEQIDNO，s50(TNF3),83(TNF20),85(TNF21)，85(TNF22),96(TNF23)或98(TNF33)之一有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的納米體(如本文所定義)。-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中a)CDRl包括-胺基酸序列NYYMG;或-與胺基酸序列NYYMG有至少80X、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列NYYMG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且b)CDR2包括-胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;或-與胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；以及c)CDR3包括-胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY;或-與胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列。-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列NYYMG。-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR2包括胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG。-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR3包括胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY。-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中-CDR1包括胺基酸序列NYYMG;並且CDR3包括胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY;或-CDR1包括胺基酸序列NYYMG;並且CDR2包括胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;或-CDR2包括胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;並且CDR3包括胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY。-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列NYYMG;CDR2包括胺基酸序歹ljSILPLSDDPGWNTY，禾HCDR3包括胺基酸序列ILPLSDDPGWNTY。-按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中a)CDR1為-胺基酸序列NYYMG;或-與胺基酸序列NYYMG有至少80X、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列NYYMG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且b)CDR2為-胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;或-與胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；以及c)CDR3為-胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY;或-與胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列。按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR1是胺基酸序列NYYMG。按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR2是胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG。按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR3是胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY。按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中-CDR1是胺基酸序列NYYMG;並且CDR3是胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY;或-CDR1是胺基酸序列NYYMG;並且CDR2是胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;或-CDR2是胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;並且CDR3是胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY。按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中CDR1是胺基酸序列NYYMG;CDR2是胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY,和CDR3是胺基酸序列ILPLSDDPGWNTY。按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域是如對於按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽所述的納米體，其中-任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代；和/或-與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域選自由下列各項組成的組納米體TNF3(SEQIDNO:60)和納米體TNF3(SEQIDNO:60)的人源化變體。按照XIX)-XX)中任一項的蛋白或多肽，其中所述第一和第二免疫球蛋白可變結構域選自由下列各項組成的組83TNF20(SEQIDNO:83)，TNF21(SEQIDNO:84),TNF22(SEQIDNO:85),TNF23(SEQIDNO:86)或TNF33(SEQIDNO:99)。應該注意，當蛋白或多肽按上文提法作為"遂匸照J:述^7"-;^^任一觀acco油wcewz'f/z，o/^￥7JUtoWoveJ"時，它是至少按照XIX)-XX)中的一項，可以按照XIX)-XX)中的兩項，並且還可以包括視為"按照上述XIX)-XX)中任一項"的其它方面中的任何一個或多個。然而，應該注意，本發明不局限於任何具體的作用機制或假說。特別地，已經發現本發明的單價納米體還可以在本文所述的檢測和模型中有活性，這證實儘管在本發明的一個具體實施方案中優選，但是TNF三聚體的分子內結合不需要以獲得本文所述的納米體、蛋白和多肽的理想的作用和效果。類似地，本文所述的蛋白和多肽通過任何適當的機制(即，通過分子內結合，分子間結合，或者甚至通過與單聚體TNF結合，由此抑制TNF三聚體的形成)實現它們的理想作用，這也包含在本發明範圍內。以下也在本發明的範圍內應用本發明的納米體和多肽的部分、片段、類似物、突變體、變體、等位體和/或衍生物，和/或應用包括或基本上由其組成的蛋白或多肽，條件是這些適於本文設想的應用。這樣的部分、片段、類似物、突變體、變體、等位體、衍生物、蛋白和/或多肽將在本文中進一步描述。另一方面，本發明涉及針對TNF-oc的納米體(如本文所定義)，其由4個構架區(分別為FR1-FR4)和3個互補性決定區(分別為CDR1-CDR3)組成，其中(i)CDR1是這樣的胺基酸序列，其選自由SEQIDNOS:15-21的CDR1序列組成的組或者選自由SEQIDNOS:164-197的CDR1序列組成的組；或者選自由與SEQIDNOS:15-21組成的組的至少一種CDR1序列或SEQIDNOS:164-197組成的組的至少一種CDR1序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；和/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入；和/或選自由與SEQIDNOS:15-21組成的組的至少一種CDR1序列或SEQIDNOS:164-197組成的組的至少一種CDR1序列有2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；和/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入；並且其中(ii)CDR2是這樣的胺基酸序列，其選自由SEQIDNOS:22-28的CDR2序列組成的組或者選自由SEQIDNOS:232-265的CDR2序列組成的組；或者選自由與SEQIDNOS:22-28組成的組的至少一種CDR2序列或SEQIDNOS:232-265組成的組的至少一種CDR2序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入；禾口/或選自由與SEQIDNOS:22-28組成的組的至少一種CDR2序列或SEQIDNOS:232-265組成的組的至少一種CDR2序列有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入；並且其中(iii)CDR3是這樣的胺基酸序列，其選自由SEQIDNOS:29-33的CDR3序列組成的組或者選自由SEQIDNOS:300-333的CDR3序列組成的組；或者選自由與SEQIDNOS:29-33組成的組的至少一種CDR3序列或SEQIDNOS:300-333組成的組的至少一種CDR3序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；和/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入；和/或選自由與SEQIDNOS:300-333組成的組的至少一種CDR3序列有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；和/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入；或者選自由與SEQIDNOS:34和35的CDR3序列組成的組或者選自與SEQIDNOS:34和35的至少一種CDR3序列有至少80%、優選地至少卯％、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；和/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入；和/或選自與SEQIDNOS:34和35的至少一種CDR3序列有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。上述以及下文進一步描述的針對TNF-ot的納米體在本文中還叫作本發明的納米體。在本發明的納米體中，特別優選包括一個或多個上文明確列出的CDR's的納米體；更特別優選包括兩個或多個上文明確列出的CDR's的納米體；並且最特別優選包括三個上文明確列出的CDR，s的納米體。在下表I中可以看出一些CDR序列的特別優選的但非限制性的結合，其列出在許多優選的(但是非限制性的)本發明納米體中存在的CDR'S和構架序列。熟練的技術人員應該清楚，存在於同一克隆中的CDR1、CDR2和CDR3序列的結合(即，在表I中在同一行提到的CDR1、CDR2和CDR3序列)通常是優選的(儘管本發明在其最廣泛意義上不限於此，並且還包括表I中提及的CDR序列的其它適當的結合)。此外，在包括表I提及的CDR's結合的本發明納米體中，每一CDR可以被選自由與所提及的CDR's有至少80X、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組的CDR所取代；其中(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；和/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入；和/或選自由與所提及的CDR(s)上述胺基酸序列之一有3個、2個或者只有1個(如在前述段落中所指示)"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中.-(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。然而，熟練的技術人員應該清楚，表I中提及的CDR序列(的結合)通常是優選的。表I:構架和CDR序列的優選組合tableseeoriginaldocumentpage53tableseeoriginaldocumentpage54表I(續表、tableseeoriginaldocumentpage55表I〖續表):tableseeoriginaldocumentpage56tableseeoriginaldocumentpage57表I的注釋-ID是指在附上的序列表中的SEQIDNO's-對於CDR1:SEQIDNO:164對應SEQIDNO:15，SEQIDNO:167對應SEQIDNO:16;SEQIDNO:172對應SEQIDNO:17，SEQIDNOS:165和166對應SEQIDNO:18，SEQIDNO:170對應SEQIDNO:19,SEQIDNO:171對應SEQIDNO:20,並且SEQIDNOS:168和169對應SEQIDNO:21.-對於CDR2:SEQIDNOS:232和233對應SEQIDNO:22,SEQIDNO.'235對應SEQIDNO:23，SEQIDNO:240對應SEQIDNO:24，SEQIDNO:234對應SEQIDNO:25,SEQIDNOS:236和237對應SEQIDNO:26,SEQIDNO:238對應SEQIDNO:27，並且SEQIDNO:239對應SEQIDNO:28。-對於CDR3:SEQIDNO:303對應SEQIDNO:29，SEQIDNO:308對應SEQIDNO:30，SEQIDNO:306對應SEQIDNO:31，SEQIDNO:307對應SEQIDNO:32,SEQIDNOS:304和305對應SEQIDNO:33,SEQIDNO:300對應SEQIDNO:34，並且SEQIDNOS:301和302對應SEQIDNO:35。因此，在本發明的納米體中，至少一種存在的CDR1、CDR2和CDR3序列適當地分別選自由表I中列出的CDR1、CDR2和CDR3序列組成的組；或者分別選自分別與表I中列出的CDR1、CDR2和CDR3序列的至少一種具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99。％的"序列相同性"(如本文所定義)的CDR1、CDR2和CDR3序列的組；禾tl/或分別選自由分別與表I中列出的CDRl、CDR2和CDR3序列的至少一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的CDR1、CDR2和CDR3序列組成的組，。在本申請上下文中，"適當地選擇"意指，適用地，分別地，CDR1序列選自適當的CDR1序列(即，如本文所定義)，CDR2序列選自適當的CDR2序列(即，如本文所定義)，以及CDR3序列選自適當的CDR3序列(即，如本文所定義)。特別地，在本發明的納米體中，至少存在的CDR3序列適當地選自由表I列出的CDR3序列組成的組，或者選自與表I列出的至少一種CDR3序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的CDR3序列組；和/或選自由與表I列出的至少一種CDR3序列有3個、2個或只有1個胺基酸差異的CDR3序列組成的組。優選地，在本發明的納米體中，至少兩種存在的CDR1、CDR2和CDR3序列適當地分別選自由表I中列出的CDR1、CDR2和CDR3序列組成的組；或者分別選自由分別與表I中列出的CDR1、CDR2和CDR3序列的至少一種具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的CDR1、CDR2和CDR3序列組成的組；和/或分別選自由分別與表I中列出的CDR1、CDR2和CDR3序列的至少一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"的CDR1、CDR2和CDR3序列組成的組，。特別地，在本發明的納米體中，至少存在的CDR3序列適當地選自由表I列出的CDR3序列組成的組，或者選自分別與表I列出的至少一種CDR3序列有至少80X、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99。/^的序列相同性的CDR3序列組；並且至少一種存在的CDRl和CDR2序列適當地分別選自由表I列出的CDRl和CDR2序列組成的組，或者分別選自分別與表I列出的至少一種CDRl和CDR2序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的CDR1和CDR2序列組；和/或分別選自由分別與表I列出的至少一種CDR1和CDR2序列有3個、2個或只有1個胺基酸差異的CDR1和CDR2序列組成的組。最優選地，在本發明的納米體中，所有三種存在的CDR1、CDR2和CDR3序列都適當地分別選自由表I列出的CDR1、CDR2和CDR3序列組成的組，或者分別選自由分別與表I列出的至少一種CDR1、CDR2禾口CDR3序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的CDR1、CDR2和CDR3序列組；禾卩/或分別選自由分別與表I列出的至少一種CDR1、CDR2和CDR3序列有3個、2個或只有1個胺基酸差異的CDR1、CDR2和CDR3序列組成的組。甚至更優選地，在本發明的納米體中，至少一種存在的CDR1、CDR2和CDR3序列適當地分別選自由表I列出的CDR1、CDR2和CDR3序列組成的組。優選地，在這一實施方案中，至少一種或者優選地其它兩種存在的CDR序列都適當地選自分別與表I列出的至少一種相應的CDR序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的CDR序列；和/或選自由分別與表I列出的至少一種相應的CDR序列有3個、2個或只有1個胺基酸差異的CDR序列組成的組。特別地，在本發明的納米體中，至少存在的CDR3序列適當地選自由表I列出的CDR3組成的組。優選地，在這一實施方案中，存在的CDR1和CDR2序列的至少一種並且優選地二者都適當地分別選自分別與表I列出的CDR1和CDR2序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的CDR1和CDR2序列的組；和/或分別選自由分別與表I列出的CDR1和CDR2序列的至少一種有3個、2個或只有1個胺基酸差異的CDR1和CDR2序列組成的組。甚至更優選地，在本發明的納米體中，至少兩種存在的CDR1、CDR2和CDR3序列適當地分別選自由表I列出的CDR1、CDR2和CDR3序列組成的組。優選地，在這一實施方案中，其餘存在的CDR序列適當地選自與表I列出的至少一種相應的CDR序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的CDR序列的組；和/或選自由與表I列出的至少一種相應序列有3個、2個或只有1個胺基酸差異的CDR序列組成的組。特別地，在本發明的納米體中，至少CDR3序列適當地選自有表I列出的CDR3序列組成的組，並且CDR1序列或CDR2序列適當地分別選自由表I列出的CDR1和CDR2序列組成的組。優選地，在這一實施方案中，其餘存在的CDR序列適當地選自與表I列出的至少一種相應的CDR序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的CDR序列的組；和/或選自由與表I列出的相應CDR序列有3個、2個或只有1個胺基酸差異的CDR序列組成的組。甚至更優選地，在本發明的納米體中，所有三種存在CDR1、CDR2和CDR3序列都適當地分別選自由表I列出的CDR1、CDR2和CDR3序列組成的組。此外，通常優選在表I中所列出的CDR's(即，在表I同一行所提及的那些)的組合。因此，通常優選，本發明納米體中的CDR是表I提及的CDR序列，或者適當地選自與表I列出的CDR序列有至少80%、優選地至少卯％、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的CDR序列的組；和/或選自由與表I列出的CDR序列有3個、2個或只有1個胺基酸差異的CDR序列組成的組，至少一種並且優選地其餘CDR's二者都適當地選自屬於表I中同一組合(g卩，在表I同一行提及)的CDR序列，或適當地選自與屬於同一組合的CDR序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的CDR序列的組，和/或選自由與屬於同一組合的CDR序列有3個、2個或只有1個胺基酸差異的CDR序列組成的組。上一段落中顯示的其它優選方案也適用於表I提及的CDR's組合。因此，通過非限制性實例的方式，例如，本發明的納米體可以包括與表I提及的CDR1序列之一有大於80%的序列相同性的CDR1序列，與表I提及的(但是屬於不同的組合)CDR2序列之一有3個、2個或1個胺基酸差異的CDR2序列，和CDR3序列。例如，一些優選的本發明的納米體可以包括(1)與表I提及的CDR1序列之一有大於80%的序列相同性的CDR1序列；與表I提及的(但是屬於不同的組合)CDR2序列之一有3個、2個或1個胺基酸差異的CDR2序列；和與表I提及的(但是屬於不同的組合)CDR3序列之一有大於80%的序列相同性的CDR3序列；或者(2)與表I提及的CDR1序列之一有大於80%的序列相同性的CDR1序列；CDR2序列以及表I列出的CDR3序列之一；或者(3)CDR1序列；與表I列出的CDR2序列之一有大於80%序列相同性的CDR2序列；和與表I提及的同所述CDR2序列屬於同一組合的CDR3序列有3個、2個或1個胺基酸差異的CDR3序列。例如，一些特別優選的本發明的納米體可以包括(1)與表I提及的CDR1序列之一有大於80%的序列相同性的CDR1序列；與表I提及的屬於同一組合的CDR2序列有3個、2個或1個胺基酸差異的CDR2序列；和與表I提及的屬於同一組合的CDR3序列有大於80%的序列相同性的CDR3序列；(2)CDR1序列；表I列出的CDR2序列和表I列出的CDR3序列(其中所述CDR2序列和CDR3序列可以屬於不同的組合)。例如，一些甚至更優選的本發明的納米體可以包括(1)與表I提及的CDR1序列之一有大於80%的序列相同性的CDR1序列；表I列出的屬於同一組合的CDR2序列；和表I提及的屬於不同組合的CDR3序列；或(2)表I提及的CDR1序列；與表I提及的屬於同一組合的CDR2序列有3個、2個或1個胺基酸差異的CDR2序列；和與表I列出的屬於相同不同組合的CDR3序列有大於80%的序列相同性。例如，特別優選的本發明的納米體包括表I提及的CDR1序列，與表I提及的屬於同一組合的CDR2序列有大於80%的序列相同性的CDR2序列；和表I提及的屬於同一組合的CDR3序列。在本發明的納米體中最優選的納米體中，存在的CDR1、CDR2和CDR3序列適當地分別選自表I列出的CDR1、CDR2和CDR3序列的組合之一。優選地，當CDR序列適當地選自與表I列出的CDR序列之一有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的62序列相同性(如本文所定義)的CDR序列組時；和/或當CDR序列適當地選自與表I列出的CDR序列之一有3個、2個或只有1個胺基酸差異的CDR序列組成的組時i)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；和/或ii)與表I列出的CDR序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。按照本發明非限制但是優選的實施方案，本發明納米體中的CDR序列如上文定義，並且還是這樣的，即，所述本發明的納米體與TNF-a結合，具有10_5-10"2摩爾/升(M)或更小、並且優選地為10:10"2摩爾/升(M)或更小、並且更優選地10義10'12摩爾/升(M)的解萬常數(Kd)，和/或具有至少107M-'、優選地至少108M"、更優選地至少1(^M"諸如至少1012M'1的締合常數(KA);並且特別地具有低於500nM、優選地低於200nM、更優選地低於10nM諸如低於500pM的Kw本發明的納米體針對TNF-a的Kd和KA值可以以本質上已知的方式進行測定，例如使用本文所述的V按照本發明另一個優選的但非限制性實施方案，(a)CDR1具有1-12個胺基酸殘基的長度，並且通常在2-9個胺基酸殘基之間，諸如5個、6個或7個胺基酸殘基；和/或(b)CDR2具有13-24個胺基酸殘基的長度，並且通常在15-21個胺基酸殘基之間，諸如16個和17個胺基酸殘基；和/或(c)CDR3具有2-35個胺基酸殘基的長度，並且通常在3-30個胺基酸殘基之間，諸如6-23個胺基酸殘基。一方面，本發明提供針對TNF-a的納米體，其比納米體3E，按照WO04/041862的最佳作用納米體，作用更好。更具體地，本發明的這一實施方案的一些優選方面為XXI)針對TNF-a的納米體，其由4個構架區(分別為FR1-FR4)禾口3個互補性決定區(分別為CDR1-CDR3)組成，其對於TNF具有優於2.10-3(1/s)的K。ff速率，優選地優於1.10-3(1/s);或這樣的納米體的人源化變體。XXII)針對TNF-a的納米體，其由4個構架區(分別為FR1-FR4)禾口363個互補性決定區(分別為CDR1-CDR3)組成，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於WO04/041862的納米體VHH3E(SEQIDNO:4)在相同檢測中的EC50值；或這樣的納米體的人源化變體。XXIII)針對TNF-a的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於12nM;或這樣的納米體的人源化變體。XXIV)針對TNF-a的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於5nM;或這樣的納米體的人源化變體。XXV)針對TNF-oc的納米體，其在WO04/041862實施例l第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於3nM;或這樣的納米體的人源化變體；一些特別優選的方面為-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其為GLEW-類納米體。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其在位置103含有精氨酸殘基(R)。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其為人源化的納米體。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其在位置108含有亮氨酸殘基(L)。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其與胺基酸序列SEQIDNO's52(TNF1),76(TNF13),77(TNF14),95(TNF29)或96(TNF30)之一具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中a)CDR1包括-胺基酸序列DYWMY;或-與胺基酸序列DYWMY有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的氮基酸序列；或-與胺基酸序列DYWMY有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；禾口b)CDR2包括-胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；以及c)CDR3包括-胺基酸序列SPSGFN;或-與胺基酸序列SPSGFN有至少80X、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SPSGFN有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列DYWMY。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中-CDR1包括胺基酸序列DYWMY;並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN;或-CDR1包括胺基酸序列DYWMY;並且CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR1包括氮基酸序列DYWMY;並且CDR3包括氮基酸序列SPSGFN。按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列DYWMY;CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG，並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中a)CDR1為-胺基酸序列DYWMY;或-與胺基酸序列DYWMY有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列DYWMY有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且其中b)CDR2為-胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的氮基酸序列；以及其中c)CDR3為-胺基酸序列SPSGFN;或-與胺基酸序列SPSGFN有至少80X、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99。％的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SPSGFN有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR1是胺基酸序列DYWMY。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG.-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR3是胺基酸序列SPSGFN。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中-CDR1是胺基酸序列DYWMY;並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN;或-CDR1是胺基酸序列DYWMY;並且CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR1是胺基酸序列DYWMY;並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR1是胺基酸序列DYWMY;CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG，並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中-任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代；和/或-與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。並且一些其它特別優選的方面為-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其為KERE-類納米體。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其與胺基酸序列SEQIDNO，s50(TNF3),83(TNF20),85(TNF21),85(TNF22),96(TNF23)或98(TNF33)之一具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中a)CDR1包括-胺基酸序列NYYMG;或-與胺基酸序列NYYMG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列NYYMG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且b)CDR2包括-胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;或-與胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99°%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；以及c)CDR3包括-胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY;或-與胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列NYYMG。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR2包括胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG.-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR3包括胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY.-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中-CDR1包括胺基酸序列NYYMG;並且CDR3包括胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY;或-CDR1包括胺基酸序列NYYMG;並且CDR2包括胺基酸序列NIS職GYNIYYKDSVKG;或-CDR2包括胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;並且CDR3包括胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY。按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDRl包括胺基酸序列NYYMG;CDR2包括胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY,並且CDR3包括胺基酸序列ILPLSDDPGWNTY。按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中a)CDRl為-胺基酸序列NYYMG;或-與胺基酸序列NYYMG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列NYYMG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且b)CDR2為-胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;或-與胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；以及c)CDR3為-胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY;或-與胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR1是胺基酸序列NYYMG。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR2是胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR3是胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中-CDR1是胺基酸序列NYYMG;並且CDR3是胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY;或-CDR1是胺基酸序列NYYMG;並且CDR2是胺基酸序列NISWRG預YYKDSVKG;或-CDR2是氮基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;並且CDR3是胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中CDR1是胺基酸序列NYYMG;CDR2是胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY,並且CDR3是胺基酸序列ILPLSDDPGWNTY。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其中-任何胺基酸取代優選地是保守氮基酸取代；和/或-與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。-按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其為人源化的納米體。並且仍有一些其它特別優選的方面為XXVI)蛋白或多肽，其包括或者基本上由按照XXI)-XXV)中任一項的納米體組成。XXVII)蛋白或多肽，其包括兩種按照XXI)-XXV)中任一項的納米體。xxvin)蛋白或多肽，其包括兩種按照xxi)-xxv)中任一項的納米體，並且其是這樣的蛋白或多肽，即，當與TNF三聚體結合時，所述蛋白或多肽能夠抑制或者減少由所述TNP三聚體調控的TNF受體交聯和/或由這樣的受體交聯調控的信號傳導。XXIX)蛋白或多肽，其包括兩種按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，並且其能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點。XXX)蛋白或多肽，其包括兩種按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其通過適當的接頭連接。XXXI)蛋白或多肽，其包括兩種按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，其通過適當的接頭連接，並且其被聚乙二醇化。XXXII)蛋白或多肽，其包括兩種按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，並且其還包括至少一種針對人血清白蛋白的納米體。xxxin)蛋白或多肽，其包括兩種按照xxi)-xxv)中任一項的納米體，並且其還包括至少一種針對人血清白蛋白的納米體，並且其是這樣的蛋白或多肽，即，當與TNF三聚體結合時，所述蛋白或多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或這樣的受體交聯調控的信號傳導。XXXIV)蛋白或多肽，其包括兩種按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，並且其還包括至少一種針對人血清白蛋白的納米體，並且其能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點。XXXV)蛋白或多肽，其包括兩種按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，並且其還包括一種針對人血清白蛋白的納米體，其中按照XXI)-XXV)中任一項的兩個納米體的每一種都交聯到，任選地通過適宜的接頭，針對人血清白蛋白的一種納米體上。XXXVI)蛋白或多肽，其包括兩種按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，並且其還包括一種針對人血清白蛋白的納米體，其中按照XXI)-XXV)中任一項的兩個納米體每一種都交聯到，任選地通過適宜的接頭，針對人血清白蛋白的一種納米體上，並且其為這樣的蛋白或多肽，艮p，當與TNF三聚體結合時，所述蛋白或多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或這樣的受體交聯調控的信號傳導。XXXVII)蛋白或多肽，其包括兩種按照XXI)-XXV)中任一項的納米體，並且其還包括一種針對人血清白蛋白的納米體，其中按照XXI)-XXV)中任一項的兩個納米體每一種都交聯到，任選地通過適宜的接頭，針對人血清白蛋白的一種納米體上，並且其能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點。-按照XXVI)-XXXVII)中任一項的蛋白或多肽，其中至少一種針對人血清白蛋白的納米體是人源化的納米體。-按照xxvi)-xxxvn)中任一項的蛋白或多肽，其中至少一種針對人血清白蛋白的納米體是納米體ALB1(SEQIDNO:63)的人源化變體。-按照xxvi)-xxxvn)中任一項的蛋白或多肽，其中至少一種針對人血清白蛋白的納米體選自由下列各項組成的組ALB3(SEQIDNO:87),ALB4(SEQIDNO:88),ALB5(SEQIDNO:89)，ALB6(SEQIDNO:100),ALB7(SEQIDNO:101)，ALB8(SEQIDNO:102)ALB9(SEQIDNO:103)和ALB10(SEQIDNO:104)。-按照XXVI)-XXXVII)中任一項的蛋白或多肽，其中至少一種針對人血清白蛋白的納米體是ALB8。-按照XXVI)-XXXVII)中任一項的蛋白或多肽，其包括或者基本上由兩種按照XXI)-XXV)中任一項的人源化納米體，以及納米體ALB1(SEQIDNO:63)的一種人源化變體組成。應該注意，當納米體按上文提法作為"孩s照J:述;or"-xY"^在一j歹acconi朋cew"/za"_yoweo/JQ7JtoAX^)a6ove"，日寸，它是至少按照XXI)-XXV)中的一項，可以按照XXI)-XXV)中的兩項或多項，並且還可以包括視為"按照上述XXI)-XXV)中任一項"的其它方面中的任何一個或多個。類似地，當蛋白或多肽按上文提法作為"^S裙J:述JOT"-^T印中在一觀6'wacco油wcew"/za"yq/X^T7JtoJOfXF//9a6oveJ"日寸，它是至少按照XXVI)-XXXVII)中的一項，可以按照XXVI)-XXVII)中的兩項或多項，並且還可以包括視為"按照上述XXVI)-XXXVII)中任一項"的其它方面中的任何一個或多個。已發現特別用作抗-TNF納米體的克隆是克隆PMP1C2(TNF1)。可以從表39中KYM-檢測的比較數據看出，TNF1具有優於WO04/41862所述的最佳單價納米體(納米體3E)多於4倍的EC5o值，艮卩，對於PMP1C2的2，466nM相比較於對於3E的12nM(從表39中可以看出，在這一檢測中，本發明的所有納米體TNFl-TNF9都給出比3E更好的EC5o值)。在這一點上，還應該注意，WO04/41862的3E的納米體屬於"KERE類"(如本文所述)，並且因此可以比納米體PMP1C2(其屬於"GLEW類")更小程度人源化。當納米體PMP1C2與WO04/41862的納米體IA(GLEW-類納米體，具有與PMP1C2的最高程度的序列相同性(在CDR's和構架上))相比時，在KYM檢測中對於PMPlC2獲得的EC5o值多於50倍更好，即，對於PMP1C2的2.466nM相比較於對於1A的100nM。因此，包括一種或多種、優選地任意兩種、更優選地全部3種在克隆PMP1C2中存在的CDR's(或者衍生於其或者與其相對應的CDR序列)的納米體在本發明中特別優選。並且，這些納米體優選地屬於"103P,R,S組"(如本文所定義)，並且更優選地在位置103具有R，並且優選地還在位置44-47具有GLEW或GLEW-樣序列。並且，當這些納米體屬於"103P，R,S組"時(並且特別當它們在位置103具有R時)，一種優選的但非限制性人源化取代是108Q到108L。這些優選的納米體中其它優選的但非限制性人源化取代是在本文所示的TNF1人源化變體諸如TNF13、TNF14、TNF29或TNF30中存在的那些中的一種或多種，這將從TNF1序列和這些人源化序列之間的比較而直接清楚可見。因此，在本發明特別優選的納米體中，至少一種存在的CDR1、CDR2和CDR3序列適當地分別選自由CDR1序列SEQIDNO:164、CDR2序列SEQIDNO:232和CDR3序列SEQIDNO:300(即，克隆TNF1中存在的CDR序列)組成的組，或者分別選自分別與CDR1序列SEQIDNO:164、CDR2序列SEQIDNO:232和CDR3序列SEQIDNO:300具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的"序列相同性"(如本文所定義)的CDR1、CDR2和CDR3序列的組；禾口/或分別選自由分別與CDR1序列SEQIDNO:164、CDR2序列SEQIDNO:232和CDR3序列SEQIDNO:300具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的CDR1、CDR2和CDR3序列組成的組。優選地，在本發明的這些優選的納米體中，至少兩種存在的CDRl、CDR2和CDR3序列適當地分別選自由CDR1序列SEQIDNO:164、CDR2序列SEQIDNO:232和CDR3序列SEQIDNO:300(即，克隆TNF1中存在的CDR序列)組成的組，或者分別選自分別與CDRl序列SEQIDNO:164、CDR2序列SEQIDNO:232和CDR3序列SEQIDNO:300具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99^的序列相同性的CDR1、CDR2和CDR3序列的組；和/或分別選自由分別與CDRl序列SEQIDNO:164、CDR2序列SEQIDNO:232和CDR3序列SEQIDNO:300具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"的CDRl、CDR2和CDR3序列組成的組。更優選地，在本發明的這些優選的納米體中，所有三種存在的CDRl、CDR2和CDR3序列適當地分別選自由CDRl序列SEQIDNO:164、CDR2序列SEQIDNO:232和CDR3序列SEQIDNO:300(即，克隆TNF1中存在的CDR序列)組成的組，或者分別選自分別與CDRl序列SEQIDNO:164、CDR2序列SEQIDNO:232和CDR3序列SEQIDNO:300具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99X的序列相同性的CDR1、CDR2和CDR3序列的組；和/或分別選自由分別與CDRl序列SEQIDNO:164、CDR2序列SEQIDNO:232和CDR3序列SEQIDNO:300具有3個、2個或只有1個胺基酸差異的CDR1、CDR2和CDR3序列組成的組。甚至更優選地，在本發明的這些優選的納米體中，至少一種存在的CDR1、CDR2和CDR3序列適當地分別選自由CDR1序列SEQIDNO:164、CDR2序列SEQIDNO:232和CDR3序列SEQIDNO:300(即，克隆TNF1中存在的CDR序列)組成的組。優選地，在這一實施方案中，至少一種或者優選地其它兩種存在的CDR序列都適當地分別選自與CDRl序列SEQIDNO:164、CDR2序列SEQIDNO:232和CDR3序列SEQIDNO:300具有至少80X、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的CDR序列；和/或分別適當地選自由與與CDRl序列SEQIDNO:164、CDR2序列SEQIDNO:232和CDR3序列SEQIDNO:300具有3個、2個或只有1個胺基酸差異的CDR序列組成的組。甚至更優選地，在本發明的這些優選的納米體中，至少兩種存在的CDR1、CDR2和CDR3序列適當地分別選自由CDR1序列SEQIDNO:164、CDR2序列SEQIDNO:232和CDR3序列SEQIDNO:300(即，克隆TNF1中存在的CDR序列)組成的組。優選地，在這一實施方案中，其餘存在的CDR序列適當地分別選自與CDRl序列SEQIDNO:164、CDR2序列SEQIDNO:232和CDR3序列SEQIDNO:300具有至少80%、優選地至少90°%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的CDR序列的組；和/或分別選自由與CDRl序列SEQIDNO:164、CDR2序列SEQIDNO:232和CDR3序列SEQIDNO:300具有3個、2個或只有1個胺基酸差異的的CDR序列組成的組。本發明特別優選的納米體分別包括CDRl序列SEQIDNO:164、CDR2序列SEQIDNO:232和CDR3序列SEQIDNO:300(即，克隆TNF1中存在的CDR序列)。具有上述CDR序列的納米體優選地具有如本文進一步定義的構架序列。在上述表I中可以看到一些特別優選但非限制性的構架序列的結合。熟練的技術人員應該清楚，存在於同一克隆中的FR1、FR2、FR3和FR4序列(即，表I中同一行提及的FR1、FR2、FR3和FR4序列)的結合通常是優選的(儘管在其最廣泛的意義上，本發明不限於此，並且還包括表I提及的構架序列的其它適宜的結合)。更具體地，本發明的這一實施方案的一些優選的方面為XXXVIII)針對TNF-oc的納米體，其由4個構架區(分別為FR1-FR4)和3個互補決定區(分別為CDR1-CDR3)組成，其中a)CDR1包括-胺基酸序列DYWMY;或-與胺基酸序列DYWMY有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列DYWMY有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；和b)CDR2包括-胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有至少80X、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；以及c)CDR3包括-胺基酸序列SPSGFN;或-與胺基酸序列SPSGFN有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SPSGFN有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列。-按照XXXVIII)的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列DYWMY。-按照XXXVIII)的納米體，其中CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG。-按照XXXVIII)的納米體，其中CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。-按照xxxvni)的納米體，其中-CDR1包括胺基酸序列DYWMY;並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN;或-CDR1包括胺基酸序列DYWMY;並且CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。-按照XXXVin)的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列DYWMY;並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。-按照XXXVIII)的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列DYWMY;CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG,並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。-按照xxxvin)的納米體，其中-任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代；和/或-與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。-按照XXXVIII)的納米體，其為GLEW-類納米體。-按照XXXVin)的納米體，其在位置103包含精氨酸殘基(R)。-按照XXXVin)的納米體，其與胺基酸序列SEQIDNO's52(TNF1),76(TNF13),77(TNF14),95(TNF29)或96(TNF30)之一具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)。-按照xxxvin)的納米體，其為人源化的納米體。-按照XXXVin)的納米體，其在位置108包含亮氨酸殘基(L)。-按照XXXVin)的納米體，其具有優於2.10-3(1/s)、優選地優於1.10-3(1/s)的對於TNF的K。ff速率；或者所述納米體的人源化變體；-按照XXXVIII)的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於WO04/041862的納米體VHH3E(SEQIDNO:4)在相同檢測中的EC50值；或者所述納米體的人源化變體。-按照XXXVIII)的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於5nM;或者所述納米體的人源化變體。-按照XXXVIII)的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於3nM;或者所述納米體的人源化變體。XXXIX)針對TNF-a的納米體，其由4個構架區(分別為FR1-FR4)和3個互補決定區(分別為CDR1-CDR3)組成，其中a)CDR1為-胺基酸序列DYWMY;或-與胺基酸序列DYWMY有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列DYWMY有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且其中b)CDR2為-氮基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且其中c)CDR3為-胺基酸序列SPSGFN;或-與胺基酸序列SPSGFN有至少80%、優選地至少卯％、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SPSGFN有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列。-按照XXXIX)的納米體，其中CDR1是胺基酸序列DYWMY。-按照XXXIX)的納米體，其中CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG。-按照XXXIX)的納米體，其中CDR3是胺基酸序列SPSGFN。-按照XXXIX)的納米體，其中-CDR1是胺基酸序列DYWMY;並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN;或-CDR1是胺基酸序列DYWMY;並且CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN。-按照XXXIX)的納米體，其中CDR1是胺基酸序列DYWMY;並且CDR3是氮基酸序列SPSGFN。-按照XXXIX)的納米體，其中CDR1是胺基酸序列DYWMY;CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG，並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN。-按照XXXIX)的納米體，其中-任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代；和/或-與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。-按照XXXIX)的納米體，其為GLEW-類納米體。-按照XXXIX)的納米體，其在位置103包含精氨酸殘基(R)。-按照XXXIX)的納米體，其與胺基酸序列SEQIDNO，s52(TNFl),76(TNF13)，77(TNF14),95(TNF29)或96(TNF30)之一具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)。-按照XXXIX)的納米體，其為人源化的納米體。-按照XXXIX)的納米體，其在位置108含有亮氨酸殘基(L)。-按照XXXIX)的納米體，其對於TNF具有優於2.10-3(1/s)的K。ff速率，優選地優於1.10-3(1/s);或這樣的納米體的人源化變體。-按照XXXIX)的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於WO04/041862的VHH3E(SEQIDN0:4)在相同檢測中的EC50值，或這樣的納米體的人源化變體。-按照XXXIX)的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於5nM;或這樣的納米體的人源化變體。-按照XXXIX)的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於3nM;或這樣的納米體的人源化變體。-按照XXXIX)的納米體，其選自由TNF13(SEQIDNO:76)，TNF14(seqidno:77),tnf29(seqidno:95)和tnf30(seqidno:96)組成的組。-按照xxxix)的納米體，其為tnf30(seqidno:96);一些其它優選的方面為xl)蛋白或多肽，其包括或者基本上由按照xxxvm)或xxxix)的納米體組成。xli)蛋白或多肽，其包括或者基本上由至少一種按照xxxvm)或xxxix)的納米體組成。-按照xl)或xli)任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照xxxviii)或xxxix)的納米體。-按照xl)或xli)任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照xxxviii)或xxxix)的納米體，並且其為這樣的蛋白或多肽，艮P，當與tnf三聚體結合時，所述蛋白或多肽能夠抑制或者減少由所述tnf三聚體調控的tnf受體交聯和/或由這樣的受體交聯調控的信號傳導。-按照xl)或xli)任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照xxxviii)或xxxix)的納米體，並且其能夠分子內結合tnf三聚體上的至少兩個tnf受體結合位點。-按照xl)或xli)任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照xxxvm)或xxxix)的納米體，其直接彼此連接或者通過接頭彼此連接。-按照xl)或xli)任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照xxxvni)或xxxix)的納米體，其通過一種胺基酸序列彼此連接。-按照xl)或xli)任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照xxxviii)或xxxix)的納米體，其通過一種胺基酸序列彼此連接(諸如，沒有限制的，包括甘氨酸和絲氨酸殘基的胺基酸序列)，所述胺基酸序列包括至少14個胺基酸，更優選地至少17個胺基酸，諸如約20-40個胺基酸(諸如接頭gs30)。-按照xl)或xli)任一項的蛋白或多肽，其包括或者基本上由多肽tnf7(seqidno:73)組成，其中納米體tnf1都被人源化。-按照xl)或xli)任一項的蛋白或多肽，其包括或者基本上由多肽tnf55(seqidno:419)或tnf56(seqidno:420)組成。80-按照XL)或XLI)任一項的蛋白或多肽，其被聚乙二醇化。-按照XL)或XLI)任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照XXXVIII)或XXXIX)的納米體，並且其是這樣的蛋白或多肽，即，當與TNF三聚體結合時，所述蛋白或多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或由這樣的受體交聯調控的信號傳導；和/或其為這樣的蛋白或多肽，即，所述蛋白或多肽能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點，並且所述蛋白或多肽還包括至少一種針對人血清白蛋白的納米體。-按照XL)或XLI)任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照XXXVIII)或XXXIX)的納米體，並且所述蛋白或多肽還包括至少一種針對人血清白蛋白的納米體，其中所述兩種按照xxxvm)或xxxix)的納米體通過至少一種針對人血清白蛋白的納米體彼此連接，並且其中所述兩種按照xxxvin)或xxxix)的納米體直接連接到所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體上，或者通過接頭連接到所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體上。-按照XL)或XLI)任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照XXXVIII)或XXXIX)的納米體，並且所述蛋白或多肽還包括至少一種針對人血清白蛋白的納米體，其中所述兩種按照XXXVIII)或XXXDQ的納米體通過所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體彼此連接，並且其中所述兩種按照xxxvni)或xxxix)的納米體直接連接到所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體上，或者通過接頭連接到所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體上，其中所述接頭是一種胺基酸序列(諸如，沒有限制的，包括甘氨酸和絲氨酸殘基的接頭)，並且特別是包括3-40個胺基酸殘基諸如5-15個胺基酸殘基的胺基酸序列(諸如接頭GS9)。-按照XL)或XLI)任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照XXXVIII)或XXXIX)的納米體，並且所述蛋白或多肽還包括至少一種針對人血清白蛋白的納米體，其中所述兩種按照xxxvin)或xxxix)的納米體通過所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體彼此連接，並且其中所述兩種按照xxxvm)或xxxix)的納米體直接連接到所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體上，或者通過接頭連接到所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體上，並且所述蛋白或多肽是這樣的，即，當與TNF三聚體結合時，所述蛋白或多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或由這樣的受體交聯調控的信號傳導；和/或所述蛋白或多肽是這樣的，gP，所述蛋白或多肽能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點。-按照XL)或XLI)任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是人源化的納米體。-按照XL)或XLI)任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是納米體ALB1(SEQIDNO:63)的人源化變體。-按照XL)或XLI)任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體選自由下列各項組成的組ALB3(SEQIDNO:87)，ALB4(SEQIDNO:88),ALB5(SEQIDNO:89),ALB6(SEQIDNO:100)，ALB7(SEQIDNO:101)，ALB8(SEQIDNO:102)ALB9(SEQIDNO:103)和ALB10(SEQIDNO:104)。-按照XL)或XLI)任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是ALB8。-按照XL)或XLI)任一項的蛋白或多肽，其包括或基本上由兩種按照XL)或XLI)任一項的人源化納米體和納米體ALB1(SEQIDNO:63)的一種人源化變體組成。-按照XL)或XLI)任一項的蛋白或多肽，其包括或基本上由多肽TNF24(SEQIDNO:90)組成，其中納米體TNF1以及納米體ALB1都已經被人源化。-按照XL)或XLI)任一項的蛋白或多肽，其包括或基本上由兩種納米體TNF30和一種納米體ALB8組成。-按照XL)或XLI)任一項的蛋白或多肽，其包括或基本上由多肽TNF60(SEQIDNO:417)組成。應該注意，當納米體按上文提法作為"乾棍^0^///"或"乾棍X^/X"時，它是至少按照XXXVIII)和/或XXXIX)中的一項，並且還可以包括視為上述"按照XXXVIII)"或"按照XXXIX)"的其它方面中的任何一個或多個。類似地，當蛋白或多肽按上文提法作為"孩匸帶丄述x"或；a"在一觀"時，它是至少按照XL)-XLI)的一項，可以按照vi)-xvm)中的兩項或多項，並且還可以包括視為上述"按照XL)或XLI)任一項"的其它方面中的任何一個或多個。對於基於上述納米體TNF1的納米體(包括但不限於人源化納米體)，所述構架序列通常可以是本文所述的，並且優選地如下述a)FR1包括或者為-胺基酸序列SEQIDNO:130;或-與胺基酸序列SEQIDNO:130有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SEQIDNO:130隻有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且b)FR2包括或者為-胺基酸序列SEQIDNO:198;或-與胺基酸序列SEQIDNO:198有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SEQIDNO:198有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；以及c)FR3包括或者為-胺基酸序列SEQIDNO:266;或-與胺基酸序列SEQIDNO:266有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SEQIDNO:266隻有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且d)FR4包括或者為-胺基酸序列SEQIDNO:334;或-與胺基酸序列SEQIDNO:334有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SEQIDNO:334隻有1個胺基酸差異的胺基酸序列；其中在所述構架序列中存在的胺基酸差異更優選地如本文所述。針對TNF-a的納米體形成本發明的另一方面，所述納米體具有上述構架區(即，類似於TNF1)，並且其中至少一個構架區(諸如任意兩個、任意三個或所有四個構架區)已經被人源化。這樣的納米體可以特別具有這樣的CDR，s，以致所述納米體對於TNF具有優於2.10-3(l/s)、特別優於1.10-3(1/s)的K。ff速率；和/或具有這樣的CDR's，以致所述納米體在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於WO04/041862的納米體VHH3E(SEQIDNO:4)在相同檢測中的EC50值；並且特別好於12nM，更特別地好於5nM，甚至更特別地好於3nM。此外，或者備選地，這樣的納米體優選地針對TNF(即，TNF三聚體)與TNFl相同的表位。特別地，本發明涉及一種針對TNF-a的納米體，其為針對TNF-a的納米體的人源化變體，所述針對TNF-a的納米體具有下述構架序列FR1:SEQIDNO:130;FR2:SEQIDNO:198;FR3:SEQIDNO:266;禾卩FR4:SEQIDNO:334。這樣的納米體可以特別具有這樣的CDR's，以致所述納米體對於TNF具有優於2.10-3(l/s)、優選優於1.10-3(1/s)的K。ff速率；和/或具有這樣的CDR's，以致所述納米體在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於WO04/041862的納米體VHH3E(SEQIDNO:4)在相同檢測中的EC50值；並且特別好於12nM，更特別地好於5nM，甚至更特別地好於3nM。此外，或者備選地，這樣的納米體優選地針對TNF(即，TNF三聚體)與TNF1相同的表位。已經發現特別用作抗-TNF納米體的另一種克隆是克隆PMP5F10(TNF3，SEQIDNO:60)。從表39中KYM-檢測的比較數據可以看出，TNF3具有比WO04/41862所述的最佳單價納米體多於15倍更好的ECso值。因此，包括一種或多種、優選地任意兩種或者更優選地所有三種克隆PMP5F10中存在的CDR's(或者衍生於其或與其相對應的CDR序列)的納米體是本發明特別優選的。並且，這些納米體優選地屬於KERE類。更具體地，本發明的這一實施方案的一些優選的方面為XLII)針對TNF-oc的納米體，其由4個構架區(分別為FR1-FR4)禾口3個互補決定區(分別為CDR1-CDR3)組成，其中a)CDR1包括-胺基酸序列NYYMG;或-與胺基酸序列NYYMG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列NYYMG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；和b)CDR2包括-胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;或-與胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；以及c)CDR3包括-胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY;或-與胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99。Z的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列。-按照XLII)的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列NYYMG。-按照XLII)的納米體，其中CDR2包括胺基酸序列NIS籃GYNIYYKDSVKG。-按照XLII)的納米體，其中CDR3包括胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY。-按照XLII)的納米體，其中-CDR1包括胺基酸序列NYYMG;並且CDR3包括胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY;或-CDR1包括胺基酸序列NYYMG;並且CDR2包括胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;或-CDR2包括胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;並且CDR3包括胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY。-按照XLII)的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列NYYMG;CDR2包括胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY,並且CDR3包括胺基酸序列ILPLSDDPGWNTY。-按照XLII)的納米體，其中-任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代；和/或-與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。-按照XLII)的納米體，其為KERE-類納米體。-按照XLII)的納米體，其與胺基酸序列SSEQIDNO，s50(TNF3),83(TNF20)，85(TNF21)，85(TNF22),96(TNF23)或99(TNF33)之一具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)。-按照XLII)的納米體，其為人源化的納米體。-按照XLII)的納米體，其對於TNF具有好於2.1(T3(1/s)、優選地好於1.10—3(1/s)的K。ff速率；或者這樣的納米體的人源化變體。-按照XLII)的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於WO04/041862的納米體VHH3E(SEQIDNO:4)在相同檢測中的EC50值；或者這樣的納米體的人源化變體。-按照XLII)的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於5nM;或者這樣的納米體的人源化變體。-按照XLII)的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於3nM;或者這樣的納米體的人源化變體。XLIII)針對TNF-oc的納米體，其由4個構架區(分別為FR1-FR4)禾口3個互補決定區(分別為CDR1-CDR3)組成，其中a)CDR1為-胺基酸序列NYYMG;或-與胺基酸序列NYYMG有至少80X、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列NYYMG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且b)CDR2為-胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;或-與胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；以及c)CDR3為-胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY;或-與胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；-按照XLIII)的納米體，其中CDR1是胺基酸序列NYYMG。-按照XLIII)的納米體，其中CDR2是胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG。-按照XLIII)的納米體，其中CDR3是胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY。-按照XLIII)的納米體，其中-CDR1是胺基酸序列NYYMG;並且CDR3是胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY;或-CDR1是胺基酸序列NYYMG;並且CDR2是胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;或-CDR2是胺基酸序列NISWRGYNIYYKDSVKG;並且CDR3是胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY。-按照XLIII)的納米體，其中CDR1是胺基酸序列NYYMG;CDR2是胺基酸序列SILPLSDDPGWNTY,並且CDR3是胺基酸序列ILPLSDDPGWNTY。-按照xLin)的納米體，其中-任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代；和/或-與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。-按照XLIII)的納米體，其為KERE-類納米體。-按照XLIII)的納米體，其與胺基酸序列SEQIDNO，s50(TNF3),83(TNF20)，85(TNF21),85(TNF22),96(TNF23)或99(TNF33)之一具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)。-按照XLIII)的納米體，其為人源化納米體。-按照XLIII)的納米體，其對於TNF具有好於2.10—3(1/3)、優選地好於882.10—3(1/s)的K。ff速率；或者這樣的納米體的人源化變體。-按照XLIII)的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於WO04/041862的納米體VHH3E(SEQIDNO:4)在相同檢測中的EC50值;或者這樣的納米體的人源化變體。-按照XLIII)的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於5nM;或者這樣的納米體的人源化變體。-按照XLIII)的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於3nM;或者這樣的納米體的人源化變體。-按照XLIII)的納米體，其選自由下列各項組成的組SEQIDNO's，83(TNF20),85(TNF21),85(TNF22),96(TNF23)或98(TNF33)TNF13(SEQIDNO:76)，TNF14(SEQIDNO:77),TNF29(SEQIDNO:95)禾口TNF30(SEQIDNO:96)。一些其它優選的方面為XLIV)蛋白或多肽，其包括或者基本上由按照XLII)或XLIII)的納米體組成。XLV)蛋白或多肽，其包括或者基本上由至少一種按照XLII)或XLIII)的納米體組成。XLVI)蛋白或多肽，其包括兩種按照XLII)或XLIII)的納米體。xLvn)蛋白或多肽，其包括兩種按照XLii)或XLin)的納米體，並且其為這樣的蛋白或多肽，即，當與TNF三聚體結合時，所述蛋白或多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或由這樣的受體交聯調控的信號傳導。XLVm)蛋白或多肽，其包括兩種按照XLII)或XLIII)的納米體，並且其能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點。-按照XLIV)或XLVIII)任一項的蛋白或多肽，其包括或基本上由多肽TNF6(SEQIDNO:72)或TNF9(SEQIDNO:75)組成，其中納米體TNF3都已經被人源化。-按照XLIV)或XLVIII)任一項的蛋白或多肽，其被聚乙二醇化。-蛋白或多肽，其包括兩種按照XLII)或XLin)的納米體，並且其為這樣的蛋白或多肽，即，當與TNF三聚體結合時，所述蛋白或多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或由這樣的受體交聯調控的信號傳導；和/或其為這樣的蛋白或多肽，g卩，所述蛋白或多肽能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點，並且所述蛋白或多肽還包括至少一種針對人血清白蛋白的納米體。-按照XLIV)或XLVIII)任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是人源化的納米體。-按照XLIV)或XLVin)任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是納米體ALB1(SEQIDNO:63)的人源化變體。-按照XLIV)或XLVin)任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體選自由下列各項組成的組ALB3(SEQIDNO:87)，ALB4(SEQIDNO:88),ALB5(SEQIDNO:89),ALB6(SEQIDNO:100),ALB7(SEQIDNO:101),ALB8(SEQIDNO:102)ALB9(SEQIDNO:103)和ALB10(SEQIDNO:104)。-按照XLIV)或XLVin)任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是ALB8。-按照XLIV)或XLVIII)任一項的蛋白或多肽，其包括或基本上由兩種按照XLIV)或XLVIII)任一項的人源化納米體和納米體ALB1(SEQIDNO:63)的一種人源化變體組成。-按照XLIV)或XLVIII)任一項的蛋白或多肽，其包括或基本上由多肽TNF26(SEQIDNO:92)組成，其中納米體TNF3以及納米體ALB1都己經被人源化。應該注意，當納米體按上文提法作為"孩:照義丄//"或時，它是至少按照XLII)和/或XLIII)中的一項，並且還可以包括視為上述"按照XLII)"或"按照XLIII)"的其它方面中的任何一個或多個。類似地，當蛋白或多肽按上文提法作為"乾照1述瓜用或瓜「///)在一,"時，它是至少按照XL)-XLI)的一項，可以按照XLIV)-XLVIII)中的兩項或多項，並且還可以包括視為上述"按照XLIV)或XLVIII)任一項"的其它方面中的任何一個或多個。對於上述基於納米體TNF3的納米體(包括但不限於人源化納米體)，構架序列通常可以如本文所述，並且優選地如下述a)FR1包括或者為-胺基酸序列SEQIDNO:138;或-與胺基酸序列SEQIDNO:138有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SEQIDNO:138隻有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且b)FR2包括或者為-胺基酸序列SEQIDNO:206;或-與胺基酸序列SEQIDNO:206有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SEQIDNO:206有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；以及c)FR3包括或者為-胺基酸序列SEQIDNO:274;或-與胺基酸序列SEQIDNO:274有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SEQIDNO:274隻有1個胺基酸差異的胺基酸序列；.並且d)FR4包括或者為-胺基酸序列SEQIDNO:342;或-與胺基酸序列SEQIDNO:342有至少80%、優選地至少90。％、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99。X的序列相同性的胺基酸序列；或-與氮基酸序列SEQIDNO:342隻有1個胺基酸差異的胺基酸序列；其中在所述構架序列中存在的胺基酸差異更優選地如本文所述。另一方面，本發明涉及具有下列胺基酸序列的納米體所述胺基酸序列選自由SEQIDNO，s:52-60組成的組，由SEQIDNO，s:76-86組成的組,由SEQIDNO，s:95-99組成的組，由SEQIDNO，s105-129組成的組，或由與SEQIDNO，s:52-60、SEQIDNO，s:76-86、SEQIDNO，s:95-99或SEQIDNO，s105-129的一種或多種胺基酸序列有大於80%、優選地大於90%、更優選地大於95%諸如99%或更多的"序列相同性"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中後者胺基酸序列最優選地具有下文在納米體構架序列的基本描述下進一步限定的構架序列。按照一個具體的但非限制性實施方案，所述後者胺基酸是"人源化的"，如在本文進一步所述。最優選地，本發明的納米體選自由SEQIDNO's:52-60組成的組，由SEQIDNO，s:76-86組成的組，由SEQIDNO，s:95-99組成的組，或選自由SEQIDNO，s105-129組成的組，其中SEQIDNO's:76-86和SEQIDNO's:95-99的"人源化"納米體特別優選。如上文提及，本發明特別優選的納米體是克隆PMP1C2(TNF1;SEQIDNO:52)。因此，在一個優選的方面中，本發明涉及具有這樣的胺基酸序列的納米體，即，所述胺基酸序列選自由SEQIDNO:52組成的組，或者選自由與SEQIDNO:52的胺基酸序列有大於80%、優選地大於90%、更優選地大於95%諸如99%或更多"序列相同性"(如本文定義)的胺基酸序列組成的組，其中後者胺基酸序列最優選地具有下文在納米體構架序列的基本描述下進一步限定的構架序列。特別優選的是克隆PMP1C2(TNF1;SEQIDNO:52)的人源化變體。這樣的人源化變體的一些優選的但非限制性的實例是克隆TNF13(SEQIDNO:76)，TNF14(SEQIDNO:77),TNF29(SEQIDNO:95)和TNF30(SEQIDNO:96)。因此，在一個優選的方面中，本發明涉及一種具有這樣的胺基酸序列的人源化納米體即，所述胺基酸序列選自由SEQIDNO's:76,77,95或96組成的組，或選自由與胺基酸序列SEQIDNO's:76，77，95或96之一具有大於80%、優選地大於90%、更優選地大於95%諸如99%或更多"序列相同性"(如本文定義)的胺基酸序列組成的組，其中後者胺基酸序列最優選地具有下文在納米體構架序列的基本描述下進一步限定的構架序列。按照一個優選的實施方案，本發明的納米體是納米體TNF1(SEQIDNO:52)的人源化變體。本發明這一實施方案的一些優選的方面為XLIX)納米體TNF1的人源化變體，其對於TNF具有好於2.10-3(1/s)的Koff速率，優選地好於1.10-3(l/s)。L)納米體TNF1的人源化變體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於WO04/041862的納米體VHH3E(SEQIDNO:4)在相同檢測中的EC50值。LI)納米體TNF1的人源化變體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於5nM。LII)納米體TNF1的人源化變體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於3nM。LIII)蛋白或多肽，其包括或者基本上由至少一種納米體組成，所述納米體為按照XLIX)-LII)中任一項的納米體TNF1的人源化變體。LIV)蛋白或多肽，其包括或者基本上由兩種納米體組成(任選地通過接頭連接)，所述納米體為按照XLIX)-LII)中任一項的納米體TNF1的人源化變體。LV)蛋白或多肽，其包括或者基本上由兩種納米體組成(任選地通過接頭連接)，所述納米體為按照XLIX)-LII)中任一項的納米體TNF1的人源化變體，並且其為這樣的蛋白或多肽，即，當與TNF三聚體結合時，所述蛋白或多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或由這樣的受體交聯調控的信號傳導。LVI)蛋白或多肽，其包括或者基本上由兩種納米體組成，所述納米體為按照XLIX)-LII)中任一項的納米體TNF1的人源化變體，並且所述蛋白或多肽能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點。LVII)包括或者基本上由多肽TNF7(SEQIDNO:73)組成的蛋白或多肽，其中納米體TNF1都已經被人源化。LVIII)包括或者基本上由多肽TNF7(SEQIDNO:73)組成的蛋白或多肽，其中納米體TNF1都已經被人源化，並且其被聚乙二醇化。LIX)蛋白或多肽，其包括或者基本上由兩種納米體組成，所述納米體為按照XLIX)-LII)中任一項的納米體TNF1的人源化變體，並且所述蛋白或多肽還包括至少一種針對人血清白蛋白的納米體。LX)蛋白或多肽，其包括或者基本上由兩種納米體組成，所述納米體為按照XLIX)-LII)中任一項的納米體TNF1的人源化變體，所述納米體每一都連接到(任選地通過接頭連接)針對人血清白蛋白的一個納米體上。-按照LIII)-LX)任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是人源化的納米體。-按照LIII)-LX)任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是納米體ALB1(SEQIDNO:63)的人源化變體。-按照LIII)-LX)任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體選自由下列各項組成的組ALB3(SEQIDNO:87),ALB4(SEQIDNO:88),ALB5(SEQIDNO:89)，ALB6(SEQIDNO:100)，ALB7(SEQIDNO:101)，ALB8(SEQIDNO:102)ALB9(SEQIDNO:103)和ALB10(SEQIDNO:104)。-按照LIII)-LX)任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是ALB8。-按照Lin)-LX)任一項的蛋白或多肽，其包括或基本上由多肽TNF24(SEQIDNO:90)組成，其中納米體TNF1以及納米體ALBTNF1都己經被人源化。-按照LIII)-LX)任一項的蛋白或多肽，其包括或者基本上由兩個納米體TNF30和一個納米體ALB8組成。按照一個優選的實施方案，本發明的納米體是納米體TNF3(SEQIDNO:60)的人源化變體。本發明的這一實施方案的一些優選的方面為LXI)納米體TNF3的人源化變體，其對於TNF具有好於2.10-3(1/s)的Koff速率，優選地好於1.10-3(l/s)。LXII)納米體TNF3的人源化變體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於WO04/041862的納米體VHH3E(SEQIDNO:4)在相同檢測中的EC50值。LXin)納米體TNF3的人源化變體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於5nM。LXIV)納米體TNF3的人源化變體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於3nM。LXV)蛋白或多肽，其包括或者基本上由至少一種納米體組成，所述納米體為按照LXI)-LXIV)中任一項的納米體TNF3的人源化變體。LXVI)蛋白或多肽，其包括或者基本上由兩種納米體組成(任選地通過接頭連接)，所述納米體為按照LXI)-LXIV)中任一項的納米體TNF3的人源化變體。LXVII)蛋白或多肽，其包括或者基本上由兩種納米體組成(任選地通過接頭連接)，所述納米體為按照LXI)-LXIV)中任一項的納米體TNF3的人源化變體，並且其為這樣的蛋白或多肽，即，當與TNF三聚體結合時，所述蛋白或多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或由這樣的受體交聯調控的信號傳導。Lxvm)蛋白或多肽，其包括或者基本上由兩種納米體組成，所述納米體為按照LXI)-LXIV)中任一項的納米體TNF3的人源化變體，並且所述蛋白或多肽能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點。LXIX)包括或者基本上由多肽TNF6(SEQIDNO:72)或TNF9(SEQIDNO:75)組成的蛋白或多肽，其中納米體TNF3都已經被人源化。LXX)包括或者基本上由多肽TNF6(SEQIDNO:72)或TNF9(SEQIDNO:75)組成的蛋白或多肽，其中納米體TNF3都已經被人源化，並且其被聚乙二醇化。LXXI)蛋白或多肽，其包括或者基本上由兩種納米體組成，所述納米體為按照LXI)-LXIV)中任一項的納米體TNF3的人源化變體，並且所述蛋白或多肽還包括至少一種針對人血清白蛋白的納米體。LXXII)蛋白或多肽，其包括或者基本上由兩種納米體組成，所述納米體為按照LXI)-LXIV)中任一項的納米體TNF3的人源化變體，所述納米體每一都連接到(任選地通過接頭連接)針對人血清白蛋白的一個納米體上。-按照LXV)-LXXII)任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是人源化的納米體。-按照LXV)-LXXII)任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是納米體ALB1(SEQIDNO:63)的人源化變體。-按照LXV)-LXXII)任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體選自由下列各項組成的組ALB3(SEQIDNO:87)，ALB4(SEQIDNO:88),ALB5(SEQIDNO:89)，ALB6(SEQIDNO:100)，ALB7(SEQIDNO:101)，ALB8(SEQIDNO:102)ALB9(SEQIDNO:103)和ALB10(SEQIDNO:104)。-按照LXV)-LXXII)任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是ALB8。-按照LXV)-LXXII)任一項的蛋白或多肽，其包括或者基本上由多肽TNF26(SEQIDNO:92)組成，其中納米體TNF3以及納米體ALB1都己被人源化。在另一方面中，本發明涉及一種包括或者基本上由至少一種本文所定義的針對TNF-a的納米體組成的多肽。這樣的多肽在本文中也叫作"本發明的多肽"，並且可以如下文進一步描述和/或如WO04/041862中對其中公開的納米體的一般描述，並且例如可以是多價多肽或多特異性多肽，其也在下文中進一步描述。優選地，本發明的多肽是二價或三價的(即，分別包括兩個或三個本發明的多肽，任選地分別通過下文定義的一個或兩個接頭連接)或多特異性的多肽，其包括一種或兩種、並且優選地兩種本發明的納米體和至少一種針對血清蛋白的納米體，並且特別是針對人血清蛋白諸如針對人血清白蛋白的納米體。在一個優選的但非限制性實施方案中，在本發明的多肽中存在的本發明的納米體選自由SEQIDNO，s:52-60和SEQIDNO，s105-129組成的組或者選自其人源化變體，並且特別地選自SEQIDNO's76-86和SEQIDNO，s:95-99的"人源化"納米體。在本發明的多肽中存在的針對人血清白蛋白的納米體優選地如下文定義，並且更優選地選自由SEQIDNO's:61-67,SEQIDNO，s:87-89和SEQIDNO，s:100-104組成的組，並且特別是選自SEQIDNO's76-86和SEQIDNO's100-104的針對人血清白蛋白的"人源化"納米體。關於在本發明的多肽中存在的納米體，熟練的技術人員應該清楚，本文提及為"優選的"(或者為"更優選的"、"甚至更優選的"等等)納米體還優選地(或者更優選地，或者甚至更優選地，等等)用於本文所述的多肽中。因此，包括或者基本上由一個或多個"優選的"本發明納米體組成的多肽通常是優選的，並且包括或基本上由一個或多個"更優選的"本發明納米體組成的本發明多肽通常是更優選的，等等。因此，在本發明中，特別優選這樣的多肽，即，所述多肽包括一個或多個納米體，所述納米體基本上由克隆PMP1C2(TNF1;SEQIDNO:52)的一個優選變體組成，其中所述優選的變體如本文所定義。甚至更優選的是包括一個或多個基本上由克隆PMP1C2(TNF1;SEQIDNO:52)的一個人源化變體組成的納米體的多肽，其中所述人源化變體如本文所定義(實例為，沒有局限性，TNF13,TNF14,TNF29和TNF30)。TNF30是用於本發明多肽的特別優選的人源化"結構單元"。這樣的蛋白和多肽的一些優選的但非限制性的實例是PMP1C2本身、人源化變體TNF13、TNF14、TNF29和TNF30;SEQIDNO:70(TNF4),SEQIDNO:73(TNF7),SEQIDNO:90(TNF24),SEQIDNO:93(TOF27)的構建體；以及SEQIDNO:417(TNF60),SEQIDNO:419(TNF55)和SEQIDNO:420(TNF56)的構建體，其中後三種構建體包含人源化變體TNF30作結構單元。如本文所提及，本文所述的納米體和構建體可以是被聚乙二醇化的，或者包含一個或多個(額外的)允許聚乙二醇化和/或輔助聚乙二醇化的胺基酸殘基。這種多肽的兩個優選的但非限制性的實例是TNF55和TNF56，其都包含一個額外的半胱氨酸殘基用於PEG-基團的容易附著。本發明多肽的一些優選的但非限制性的實例是SEQIDNO's:70-75的本發明的二價多肽，以及SEQIDNO，s:90-94和SEQIDNO，s417-420的本發明的多特異性多肽。從下文提出的數據並且特別是從比較實施例中給出的數據可以看出，本發明的納米體和/或多肽具有提高的特性。特別地，與商購的抗-TNF生物製劑EnbreFM(依那西普)、HumiraTM和Remicade(英夫利昔單抗)相比，本發明的蛋白和多肽可以對於人TNF-ot具有提高的親和性(在本文所示的KYM檢測中表示為ECs-值)。此外，與國際公開WO04/041862中所述的最佳作用的納米體相比，本文所述的納米體可以對TNF-a具有提高的親和性。因此可以預計，與WO04/041862中所述只包括針對TNF-a的納米體的多肽相比，包括至少一個本發明的納米體的本發明的多肽還將具有提高的特性。更特別地，本文所述的多肽，其包括兩個或多個(並且優選兩個)本文的納米體(並且任選地例如針對人血清白蛋白的納米體)，在WO04/041862的實施例1第3)中所述的使用KYM進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於Humira⑧禾BRemicade(英夫利昔單抗)在相同檢測中的EC50值，並且優選地還好於Enbrd(依那西普)在相同檢測中的EC50值。例如，這樣的蛋白或多肽優選地在WO04/041862的實施例1第3)中所述的使用KYM進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於0.2nM，特別優選地好於0.1nM，諸如好於0.7Nm，並且特別是好於0.4nM。本申請人還表明，針對小鼠TNF-a的納米體和包括針對小鼠TNF-a的納米體的多肽在下列疾病模型中表現出有益的生物學活性(數據未顯示)-結腸炎的葡聚糖硫酸鈉糖(dextransulfatesodium)("DSS")模型，其使用常規小鼠以及IL-10敲除小鼠，如Okayasu等(Goy/rae"/wo/C^厚瘋學J1990,98(3):694)所述；-關節炎("RA")的膠原誘導的關節炎("CIA")模型，如Courtenay等(A^wer^然J1980,283(5748):666)所述，其使用常規小鼠以及IL-10敲除小鼠；-IBD的IL-10敲除小鼠模型，例如Re皿ick等(C7/"/附附柳o//mmw"opW/w/"/^^，iS"學競ig)^湮學;)1995,76(3Pt2):S174)所述；-RA的Kollias模型，例如Keffer等(五MBOJT^^學染,志力991，10(13):4025)所述；-IBD的2，4,6-三硝基苯磺酸("TNBS")模型，如Elson等07/mmwo/r^1996,157(5):2174)所述；-RA的CIA模型，由K叩pieters等(準備中的手稿)所述；-衍生於滑液的成纖維細胞模型(下文所述)；和-鼠科氣囊(airpouch)模型。優選地，本文所述的納米體在至少一種所述模型中、並且優選在所有所述模型中優於WO04/041862中的納米體1A;並且更優選地，在至少一種所述模型中、並且優選在所有所述模型中優於WO04/041862的納米體3E。此外，本文所述的多肽優選地在至少一種所述模型中、並且優選在所有所述模型中等價於或者優於Humira⑧或Remicade(英夫利昔單抗)；更優選地，在至少一種所述模型中、並且優選在所有所述模型中等價於或者優於Enbrd(依那西普)。這些數據證實，針對TNF-a的納米體以及包含其的多肽，諸如WO04/041862中所述的納米體和多肽，以及特別是本文所述的納米體和多肽，應該具有對於TNF調控的疾病和紊亂諸如上文提及的疾病和紊亂的治療功效。在另一方面中，本發明涉及編碼本發明的納米體和/或本發明的多肽的核酸。這樣的核酸在下文中也叫作"本發明的核酸"，並且例如可以是遺傳構建體的形式，如下文所定義。在另一方面中，本發明涉及表達或者能夠表達本發明的納米體和/或本發明的多肽的宿主或宿主細胞；和/或包含編碼本發明的納米體和/或本發明的多肽的核酸的宿主或宿主細胞。這樣的宿主或宿主細胞還可以類似於WO04/041862中所述的宿主和宿主細胞，但是其表達或者能夠表達本發明的納米體和/或本發明的多肽和/或包含本文所述的核酸。本發明還涉及包含或者包括本發明的納米體、本發明的多肽；和/或本發明的核酸的產品或組合物。例如，這樣的產品或組合物可以是藥物組合物(如下文所述)或用於診斷用途的產品或組合物(也如下文所述)。這樣的產品或組合物還可以類似於WO04/041862中所述的產品和組合物，但是其包含或者包括本發明的納米體、本發明的多肽或本發明的核酸。本發明還涉及製備或者產生本文所述的納米體、多肽、核酸、宿主細胞、產品和組合物的方法，所述方法在下文中進一步描述。此外，一般地，本文所述的納米體、多肽、核酸、宿主細胞、產品和組合物還可以以同WO04/041862中所述的方式類似的方式進行製備和應用。本發明還涉及本文所述的上述納米體、多肽、核酸、宿主細胞、產品和組合物的應用和用途，所述應用和用途包括，但不限於，下文所述的應用和用途和/或WO04/041862中對於針對TNF-a的納米體和/或對於包含其的多肽的其它用途和應用。從下文的進一步描述中，本發明的其它方面、實施方案、優點和應用將清楚可見。發明詳述本發明的上述和其它方面以及實施方案將通過下文的進一步描述而清楚，其中a)除非指明或另外定義，使用的所有術語具有它們在本領域中的通用意義，其對於熟練的技術人員是清楚可見的。例如，參考可以參見標準手冊，諸如Sambrook等"MolecularCloning:ALaboratoryManual(分子克隆實驗室手冊)"(第二版)，1-3巻，ColdSpringHarborLaboratoryPress(冷泉港實驗室出版)(1989);F.Ausubel等，eds.,"Currentprotocolsinmolecularbiology(現代分子生物學方法)",GreenPublishingandWileyInterscience,NewYork(1987);Lewin，"GenesII(基因II)，，，JohnWiley&Sons,NewYork,N.Y.，(紐約)(1985);Old等，"PrinciplesofGeneManipulation:AnIntroductiontoGeneticEngineering(基因操作原理遺傳工程入門)"，第二版，UniversityofCaliforniaPress(加利福尼亞大學出版)，Berkeley,CA(1981);Roitt等，"Immunology(免疫學)"(第六版)，Mosby/Elsevier，Edinburgh(2001);Roitt等，Roitt，sEssentialImmunology(Roitt，s基礎免疫學),第十版.BlackwellPublishing,UK(2001);和Janeway等，"Immunobiology(免疫學)，，(第六版)，GarlandSciencePublishing/ChurchillLivingstone,NewYork(2005)，以及本文所引用的綜合
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；b)除非另外指明，術語"^i^^歪應^^,一_不管其在本文中用來指重鏈抗體或常規的4鏈抗體一一用作一般術語，包括完整大小的抗體、其單獨的鏈、以及其所有部分、結構域或片段(包括但不限於抗原-結合結構域或片段，分別諸如VHH結構域或VH/VL結構域)。另外，術語"^^/"用於本文時(例如在類似"免疫球蛋白序列"、"抗體序列"、"可變結構域序列"、"VHH序列"或"蛋白序列"的術語中)通常應該理解為包括相關的胺基酸序列以及編碼所述胺基酸序列的核酸序列或核苷酸序列，除非上下文需要更狹義的解釋；c)除非另外指明，所有沒有具體詳細描述的方法、步驟、技術和操作可以以本質上己知的方式進行並且已經進行，這對於熟練的技術人員是清楚的。例如，仍舊參考標準手冊，參考上文和其中所引用的參考文獻的綜合
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;d)胺基酸殘基按照標準的三字母或一字母的胺基酸密碼顯示，如表1提及；表l:一字母和三字母胺基酸密碼tableseeoriginaldocumentpage102註解(1)有時也視作極性不帶電荷的胺基酸。(2)有時也視作非極性不帶電荷的胺基酸(3)熟練的技術人員應該清楚，胺基酸殘基在這一表中在pH6.0-7.0帶電荷或不帶電荷的事實不以任何方式反映所述胺基酸殘基在低於6.0的pH和/或高於7.0的pH下具有的電荷；在這樣更高或更低的pH，表中提及的胺基酸殘基可以是帶電荷的和/或不帶電荷的，這對於熟練的技術人員是很清楚的。(4)本領域己知，His殘基的電荷極大地取決於即使很小的pH變換，但是在約6.5的pH，His殘基一般可以認為基本上不帶電荷。e)出於比較兩種或多種核苷酸序列的目的，第一核苷酸序列和第二核苷酸序列之間的百分數通過用第一核苷酸序列中與第二核苷酸序列中相應位置的核苷酸相同的核苷酸數目除以第一核苷酸序列中的核苷酸總數並且乘以100%而計算，其中第二核苷酸序列中核苷酸的每一刪除、插入、取代或添加__與第一核苷酸序列相比一一都視作在單一核苷酸(位置)的差異。備選地，兩種或多種核苷酸序列之間的序列相同性程度可以使用已知的用於序列比對的使用標準設置的計算機算法進行計算，諸如NCBIBlastv2.0。例如，在WO04/037999，EP0967284,EP1085089，WO00/55318,WO00〃8972,WO98/49185和GB2357768-A中描述了用於確定序列相同性程度的一些其它的技術、計算機算法和設置。通常，出於按照上文列出的計算方法來確定兩種核苷酸序列之間的"序列相同性"的百分數的目的，將具有最大核苷酸數目的核苷酸序列視作"第一"核苷酸序列，並且將另一種核苷酸序列視作"第二"核苷酸序f)出於比較兩種或多種胺基酸序列的目的，第一胺基酸序列和第二胺基酸序列之間的百分數通過用第一胺基酸序列中與第二胺基酸序列中相應位置的胺基酸相同的胺基酸數目除以第一胺基酸序列中的胺基酸總數並且乘以100%而計算，其中第二胺基酸序列中胺基酸的每一刪除、插入、取代和添加一一與第一胺基酸序列相比一一都視作在單一胺基酸殘基(位置)上的差異，即，視作下文所定義的"^^贈老已"汲左升o備選地，兩種胺基酸序列之間的序列相同性程度可以使用已知的計算機算法進行計算，諸如上文提及的用於確定核苷酸序列相同性程度的那些，其仍舊使用標準設置。通常，出於按照上文列出的計算方法來確定兩種胺基酸序列之間的"序列相同性"的百分數的目的，將具有最大胺基酸殘基數目的胺基酸序列視作"第一"核苷酸序列，並且將另一種胺基酸序列視作"第二"胺基酸序列。此外，在確定兩種胺基酸序列之間的序列相同性程度時，熟練的技術人員可以考慮所謂的"保守"胺基酸取代，其通常可以描述為這樣的胺基酸取代，即，其中胺基酸殘基被具有相似化學結構的另一種胺基酸殘基取代，並且其對所述多肽的功能、活性或其它生物學特性幾乎沒有或者基本上沒有影響。這種保守胺基酸取代是本領域內公知的，例如，從wo04/037999,GB-A-2357768，WO98/49185，WO00/46383和WO01/09300中可知；並且可以基於WO04/037999以及WO98/49185和其中所引用的其它參考文獻的相關技術而選擇這種取代的(優選)類型和/或結合。這種保守取代優選地是這樣的取代，即，其中下列組(a)-(e)內的一個胺基酸被同組內的另一胺基酸殘基取代(a)小的脂肪族、非極性或微極性的殘基Ala,Ser,Thr,Pro和Gly;(b)極性、帶負電荷的殘基及其(不帶電荷的)醯胺Asp,Asn，Glu和Gin;(c)極性、帶正電荷的殘基His,Arg和Lys;(d)大的脂肪族、非極性殘基Met，Leu,Ile，Val和Cys;以及(e)芳族殘基Phe,Tyr和Trp。特別優選的保守取代如下Ala取代成Gly或取代成Ser;Arg取代成Lys;Asn取代成Gin或取代成His;Asp取代成Glu;Cys取代成Ser;Gin取代哉Asn;Glu取代成Asp;Gly取代成Ala或取代成Pro;His取代成Asn或取代成Gin;lie取代成Leu或取代成Val;Leu取代成lie或取代成Val;Lys取代成Arg,取代成Gin或取代成Glu;Met取代成Leu，取代成Tyr或取代成lie;Phe取代成Met,取代成Leu或取代成Tyr;Ser取代成Thr;Thr取代成Ser;Tip取代成Tyr;Tyr取代成Tip;和/或Phe取代成Val，取代成lie或取代成Leu。用於本文所述的多肽的任何胺基酸取代還可以基於Schulz等,PrinciplesofProteinStructure(蛋白質結構原理)，Springer-Verlag，1978研究的不同物種的同源蛋白之間的胺基酸變異頻率的分析，基於Chou和Fasman,Biochemistry(生物化學)13:211,1974和Adv.Enzymol.(高級酶學)，47:45—149，1978研究的結構形成潛力的分析，和基於Eisenberg等，Proc.Nad.AcadSci.USA(美國國家科學院學報)81:140-144,1984;Kyte和Doolittle;JMolec.Biol(分子生物學雜誌)157:105-132,1981,以及Goldman等，Ann.Rev.Biophys.Chem(物理化學年刊綜述)15:321-353，1986研究的蛋白中疏水模式的分析，所有這些完全結合於此作為參考。在本文描述和上文引用的綜合
背景技術：
中給出關於納米體的一級、二級和三級結構的信息。此外，出於這一目的，例如，Desmyter等，NatureStructuralBiology(自然結構生物學)，巻3，9,803(1996);Spinelli等，NaturalStructuralBiology(自然結構生物學)(1996);3，752-757;和Decanniere等，Structure(結構),巻7,4,361(1999)給出美洲駝(llama)的VHH結構域的晶體結構。關於在常規VH結構域中形成VH/VL界面的一些胺基酸殘基和在這些位置的潛在的駱駝化(camdizing)取代的其它信息可以在本文引用的關於納米體的現有技術中找到；g)如果在它們的全長有100%的序列相同性(如本文所定義)，那麼認為胺基酸序列和核酸序列"完全相同"；h)當比較兩種氮基酸序列時，術語"^"^^^#，是指與第二序列相比，在第一序列位置上的單個胺基酸殘基的插入、刪除或取代；應該理解兩種胺基酸序列可以包含l個、2個或多個這種胺基酸差異；i)核酸序列或胺基酸序列視作'丫議)^^Jr分/t"遊^^J0"—一例如，與其天然生物來源和/或其從中獲得的反應介質或培養介質相比一一此時其已經與其通常在所述來源或介質中與之締合的至少一種其它成分(諸如另一種核酸，另一種蛋白/多肽，另一種生物成分或高分子或至少一種汙染物、雜質或微量組分)分離。特別地，當它已被純化至少2倍，特別是至少10倍，更特別地至少100倍，並且達到1000倍或更多時，認為核酸序列或胺基酸序列"基本上分離"。當使用適當技術確定時，諸如適當的層析技術，諸如聚丙烯醯胺凝膠電泳技術，"以基本上分離形式"的核酸序列或胺基酸序列優選地基本上是均相的；j)當用於本文時，術語"結構域"通常是指抗體鏈的球狀區域，並且特別是指重鏈抗體的球狀區域，或者指基本上由所述球狀區域組成的多肽。通常，例如，這樣的結構域包括作為片層或通過二硫鍵而穩定的肽環(例如3或4個肽環)；k)術語'抗原決定簇，是指抗原上由抗原-結合分子(諸如本發明的納米體或多肽)並且特別是所述分子的抗原-結合位點而識別的表位。術語"抗原決定簇"和"表位"在本文中還可以互換地使用；1)對於特定的抗原決定簇、表位、抗原或蛋白(或對於至少其的一部分、片段或表位)可以結合、具有親和性和/或具有特異性的胺基酸序列(諸如本發明的納米體、抗體、多肽，或通常為抗原結合蛋白或多肽或其片段)認為是"針對(against)"或者"針對(directedagainst)"所述抗原決定簇、表位、抗原或蛋白。m)術語"特異性"是指特定的抗原-結合分子或抗原-結合蛋白(諸如本發明的納米體或多肽)分子可以結合的不同類型的抗原或抗原決定簇的數目。一種抗原-結合蛋白的特異性可以依據親和力和/或抗體親抗原性(avidity)而確定。親和力，表示為抗原與抗原-結合蛋白的解離平衡常數(KD)，是抗原決定簇和所述抗原-結合蛋白上抗原-結合位點之間的結合強度的測量KD值越小，抗原決定簇和抗原-結合分子之間的結合強度越強(備選地，親和力還可以表示為親和常數(KA)，其為1/KD)。熟練的技術人員應該清楚(例如，基於本文的進一步公開)，親和力可以以本質上已知的方式確定，其取決於目的特異性抗原。抗體親抗原性是抗原-結合分子(諸如本發明的納米體或多肽)和相關抗原之間的結合強度的測量。抗體親抗原性與抗原決定簇及其在抗原-結合分子上的抗原結合位點以及在所述抗原-結合分子上存在的相關結合位點的數目相關。典型地，抗原-結合蛋白(諸如本發明的納米體和/或多肽)將以10—5-10—12摩爾/升(M)或更小、並且優選地10:10^摩爾/升(M)或更小並且更優選地10—8-10-12摩爾/升的解離常數(KD)而結合，和/或以至少107M"、優選地至少108M—'、更優選地至少109M—'諸如至少1012M"的締合常數(KA)而結合。任何大於104M的KD值通常認為指示非特異性結合。優選地，本發明的納米體或多肽將以小於500nM、優選地小於200nM、更優選地小於10nM諸如小於500pM的Kd與理想的抗原結合。抗原-結合蛋白與抗原或抗原決定簇的特異性結合可以以本質上已知的任何適當的方法確定，其包括，例如，斯卡查德分析和/或競爭結合檢測，諸如放射性免疫測定(RIA)、酶免疫測定(EIA)和三明治競爭測定，以及本領域本質上已知的其不同的變化。n)如下文進一步所述，可以認為一一然而並不限於此一一納米體的胺基酸序列和結構由4個構架區或"FR's"組成，其在本領域和下文中分別叫作「構架區1"或"FR1";叫作"構架區2"或"FR2";叫作j"或"7^T';以及叫作"/夕,^4"或"Fi4";所述構架區被3個互補決定區或"CDR'S"中斷，其在本領域分別叫作"互#決定^或"CDW;叫作"互#決定或"CDi^";以及叫作"互浙決定,3"o)也如下文所述，納米體中胺基酸殘基總數可以在110-120區間，優選112-115，並且最優選113。然而，應該注意納米體的部分、片段或類似物(如下文進一步所述)不特別局限於它們的長度和/或大小，只要這樣的部分、片段或類似物滿足下文列出的深層要求，並且還優選地適於本文所述的目的；p)納米體的胺基酸殘基按照Kabat等("5^we"ceo//rato'mo//wmw"o/og/ca/z."fem^(T^資學y^遊蒼A遊^";^^"，USPublicHealthServices(美國公眾健康服務中心)，NIHBethesda，MD,PublicationNo.91)給出的關於VH結構域的通用編號方式進行編號，參考上文，這種編號方式在Riechmann和Muyldermans的文章中用於來自駱駝科的VHH結構域(例如，參見所述參考文獻的圖2)。按照這種編號方式，納米體的FRl包括位置1-30的胺基酸殘基，納米體的CDR1包括位置31-36的胺基酸殘基，納米體的FR2包括位置36-49的胺基酸殘基，納米體的CDR2包括位置50-65的胺基酸殘基，納米體的FR3包括位置66-94的胺基酸殘基，納米體的CDR3包括位置95-102的胺基酸殘基，以及，納米體的FR4包括位置103-113的胺基酸殘基。在這一方面，應該注意一一如在本領域內關於VH結構域和關於VHH結構域公知的一一每一CDR，s中的胺基酸殘基的總數可以不同，並且可以不與由Kabat編號方式指示的胺基酸殘基的總數相對應(即，按照Kabat編號方式的一個或多個位置可能不佔據在實際序列中，或者實際序列可能包含比由Kabat編號方式允許的數目更多的胺基酸殘基)。這意味著，通常，按照Kabat的編號方式可能或可能不與實際序列中的胺基酸殘基的實際編號方式相對應。然而，通常可以說，按照Kabat的編號方式並且不考慮CDR，s中的胺基酸編號，按照Kabat編號方式的位置1對應FR1的起點，並且反之亦然，按照Kabat編號方式的位置36對應FR2的起點，並且反之亦然，按照Kabat編號方式的位置66對應FR3的起點，並且反之亦然，以及按照Kabat編號方式的位置103107對應FR4的起點，並且反之亦然。。用於編號VH結構域的胺基酸殘基的備選方法是由Chothia等(7V"&wf^然J342,877-883(1989))所述的方法，即所謂的"WM定義"和所謂的"^J"^"乂"，所述方法還可以以類似的方式用於來自駱駝科的VHH結構域以及用於納米體。然而，在本說明書，權利要求和附圖中，遵循由Riechmann和Muyldermans用於VHH結構域的按照Kabat的編號方式，除非另外指明；並且q)給出附圖、序列表和實驗部分/實施例只是進一步舉例說明本發明，並且不應該被以任何方式解釋為或者認為限制本發明和/或附上的權利要求的範圍，除非本文中另外明確指明。關於重鏈抗體及其可變結構域的概括描述，其中對下列參考文獻進行參考，其作為概括
背景技術：
提及VrijeUniversiteitBrussel的WO94/04678,WO95/04079和WO96/34103;Unilever的WO94/25591，WO99/37681,WO00/40968，WO00/43507,WO00/65057,WO01/40310,WO01/44301，EP1134231和WO02/48193;VlaamsInstituutvoorBiotechnologie(VIB)的WO97/49805，WO01/21817,WO03/035694,WO03/054016andWO03/055527;AlgonomicsN.V.和本申請人的WO03/050531;加拿大國家研究委員會的WO01/90190;抗體研究所的WO03/025020(=EP1433793);以及本申請人的WO04/041867,WO04/041862,WO04/041865,WO04/041863，WO04/062551和本申請人發表的其它專利申請；Hamers陽Casterman等，Nature(自然)1993June3;363(6428):446-8;Davies和Riechmann,FEBSLett.1994Feb21;339(3):285-90;Muyldermans等，ProteinEng.(蛋白質工程)1994Sep;7(9):1129-3;Davies和RiechmannBiotechnology(生物技術)(NY)1995May;13(5):475-9;Gharoudi等，9thForumofAppliedBiotechnology(第9屆應用生物技術大會)，Med,Fac.LandbouwUniv.Gent.1995;60/4a部分I:2097-2100;Davies禾口Riechmann,ProteinEng.(蛋白質工程)1996Jun;9(6):531-7;Desmyter等，NatStructBiol.(自然結構生物學)1996Sep;3(9):803-11;Sheriff等，NatStructBiol.(自然結構生物學)1996Sep;3(9):733-6;Spinelli等，NatStructBiol.(自然結構生物學)1996Sep;3(9):752-7;ArbabiGhahroudi等，FEBSLett.1997Sep15;414(3):521-6;Vu等，MolImmunol.(分子免疫學)1997Nov-Dec;34(16-17):1121-31;Atarhouch等，JournalofCamelPracticeandResearch(駱駝應用和研究雜誌)1997;4:177-182;Nguyen等，J.Mol.Biol.(分子生物學雜誌)1998Jan23;275(3):413-8;Lauwereys等，EMBOJ.(胚胎學雜誌)1998Jul1;17(13):3512-20;Frenken等，ResImmunol.(免疫學研究)1998Jul-Aug;149(6):589陽99;Transue等，Proteins(蛋白質)1998Sep1;32(4):515-22;Muyldermans和Lauwereys,J.Mol.Recognit.(分子識別雜誌)1999Mar-Apr;12(2):131-40;vanderLinden等，Biochim.Biophys.Acta1999Apr12;1431(1):37-46.;Decanniere等,StructureFold.Des.1999Apr15;7(4):361-70;Ngyuen等，Mol.Immunol.(分子免疫學)1999Jun;36(8):515-24;Woolven等,Imm畫genetics(免疫遺傳學)1999Oct;50(1-2):98-101;Riechmann禾卩Muyldermans,J.Immunol.Methods(免疫學方法雜誌)1999Dec10;231(1-2):25-38;Spinelli等，Biochemistry(生物化學)2000Feb15;39(6):1217-22;Frenken等，J.Biotechnol.(生物技術雜誌)2000Feb28;78(1):11-21;Nguyen等，EMBOJ.(胚胎學雜誌)2000Mar1;19(5):921-30;vanderLinden等，J.Immunol.Methods(免疫學方法雜誌)2000Jun23;240(1-2):185-95;Decanniere等，J.Mol.Biol.(分子生物學雜誌)2000Jun30;300(1):83-91;vanderLinden等，J.Biotechnol.(生物技術雜誌)2000Jul14;80(3):261-70;Harmsen等，Mol.Immunol.(分子免疫學)2000Aug;37(10):579-90;Perez等，Biochemistry(生物化學)2001Jan9;40(1):74-83;Conmth等,J.Biol.Chem.(生物化學雜誌)2001Mar9;276(10):7346-50;Muyldermans等，TrendsBiochemSci.(生物化學科學趨勢)2001Apr;26(4):230-5;MuyldermansS.,J.Biotechnol.(生物技術雜誌)2001Jun;74(4):277-302;Desmyter等，J.Biol,Chem.(生物化學雜誌)2001Jul13;276(28):26285-90;Spinelli等，J.Mol.Biol.(分子生物學雜誌)2001Aug3;311(1):123-9;Conrath等，AntimicrobAgentsChemother.(抗微生物試劑化學治療)2001Oct;45(10):2807-12;Decanniere等，J.Mol.Biol.(分子生物學雜誌)2001Oct26;313(3):473-8;Nguyen等，AdvImmunol.(高級免疫學)2001;79:261-96;Muruganandam等，FASEBJ.2002Feb;16(2):240-2;Ewert等，Biochemistry(生物化學)2002Mar19;41(11):3628-36;Dumoulin等，ProteinSci.(蛋白質科學)2002Mar;11(3):500-15;Cortez-Retamozo等，Int.J.Cancer(癌症國際雜誌).2002Mar20;98(3):456-62;Su等，Mol.Biol.Evol.(分子生物學進化)2002Mar;19(3):205-15;vanderVaartJM.，MethodsMolBiol.(分子生物學方法)2002;178:359-66;Vranken等，Biochemistry(生物化學)2002Jul9;41(27):8570-9;Nguyen等，Imm垂genetics(免疫遺傳學)2002Apr;54(1):39-47;Renisio等,Proteins(蛋白質)2002Jun1;47(4):546-55;Desmyter等，J.Biol.Chem.(生物化學雜誌)2002Jun28;277(26):23645-50;Ledeboer等,J.DairySci.(每日科學雜誌)2002Jun;85(6):1376-82;DeGenst等，J.Biol.Chem.(生物化學雜誌)2002Aug16;277(33):29897-907;Ferrat等，Biochem.J.(生物化學雜誌)2002Sep1;366(Pt2):415-22;Thomassen等，EnzymeandMicrobialTechnol.(酶和微生物技術)2002;30:273-8;Harmsen等，Appl.Microbiol.Biotechnol.(應用微生物生物技術)2002Dec;60(4):449-54;Jobling等，NatBiotechnol(天然生物技術).2003Jan;21(1):77-80;Conrath等，Dev.Comp.Immunol.(發展和比較免疫學)2003Feb;27(2):87-103;Pleschberger等，Bioconjug.Chem.(生物綴合物化學)2003Mar-Apr;14(2):440-8;Lah等，J.Biol.Chem.(生物化學雜誌)2003Apr18;278(16):14101-11;Nguyen等，Immunology.(免疫學)2003May;109(1):93-101;Joosten等，Microb.CellFact(微生物細胞學實況).2003Jan30;2(1):1;Li等，Proteins(蛋白質)2003Jul1;52(1):47-50;Loris等，BiolChem.(生物化學)2003Jul25;278(30):28252-7;vanKoningsbruggen等，J.Immunol.Methods.(免疫學方法雜誌)2003Aug;279(1-2):149-61;Dumoulin等，Nature.(自然)2003Aug14;424(6950):783-8;Bond等，J.Mol.Biol.(分子生物學雜誌)2003Sep19;332(3):643-55;Yau等，J.Immunol.Methods.(免疫學方法雜誌)2003Oct1;281(1-2):161-75;Dekker等，J.Virol.(病毒學雜誌)2003Nov;77(22):12132-9;Meddeb-Mouelhi等.,Toxicon.2003Dec;42(7):785-91;Verheesen等，Biochim.Biophys.Acta(生物化學生物物理學學報)2003Dec5;1624(1-3):21-8;Zhang等，JMolBiol.(分子生物學雜誌)2004Jan2;335(1):49-56;Stijlemans等,JBiolChem.(生物化學雜誌)2004Jan9;279(2):1256-61;Cortez-Retamozo等，CancerRes.(癌症研究)2004Apr15;64(8):2853-7;Spinelli等，FEBSLett.2004Apr23;564(1-2):35-40;Pleschberger等，Bioconjug.Chem.(生物綴合物化學)2004May-Jun;15(3):664-71;Nicaise等，ProteinSci.(蛋白質科學)2004Jul;13(7):1882-91;Omidfar等，TumourBiol.(腫瘤生物學)2004Jul-Aug;25(4):179-87;Omidfar等，TumourBiol.(腫瘤生物學)2004Sep-Dec;25(5-6):296-305;Szynol等，AntimicrobAgentsChemother.(抗微生物試劑化學治療)2004Sep;48(9):3390-5;Saerens等，J.Biol.Chem.(生物化學雜誌)2004Dec10;279(50):51965-72;DeGenst等，J.Biol.Chem.(生物化學雜誌)2004Dec17;279(51):53593-601;Dolk等，Appl.Environ.Microbiol.(應用環境微生物學)2005Jan;71(1):442-50;Joosten等，ApplMicrobiolBiotechnol.(應用微生物生物技術)2005Jan;66(4):384-92;D畫ulin等，J.Mol.Biol.(分子生物學雜誌)2005Feb25;346(3):773-88;Yau等，JImmunolMethods.(免疫學方法雜誌)2005Feb;297(1-2):213-24;DeGenst等，J.Biol.Chem.(生物化學雜誌)2005Apr8;280(14):14114-21;Huang等,Eur.J.Hum.Genet.(歐洲人類遺傳學雜誌)2005Apr13;Dolk等，Proteins.(蛋白質)2005May15;59(3):555-64;Bond等，J.Mol.Biol.(分子生物學雜誌)2005May6;348(3):699-709;Zarebski等，J.Mol.Biol.(分子生物學雜誌)2005Apr21;[E-公布先於印刷出版]。按照上述參考文獻中所用的術語學，在天然存在的重鏈抗體中存在的可變結構域還叫作"F^結構域"，以將它們與在常規的4-鏈抗體中存在的重鏈可變結構域(其在下文中叫作"^結構域")區分，以及與在常規4-鏈抗體中存在的輕鏈可變結構域(其在下文中叫作")^結構域")區分。如在上文提到的現有技術中提及，VHH結構域具有許多獨特的結構特點和功能特性，這使得分離的VHH結構域(以及基於此的納米體，其與天然存在的VHH結構域一起具有這些結構特點和功能特性)以及包含其的蛋白高度有利地用作功能性抗原-結合結構域或蛋白。特別地，並且不限於此，VHH結構域(其生來就"設計"為與抗原功能性結合，而無需存在輕鏈可變結構域，並且無需與輕鏈可變結構域相互作用)和納米體可以作用為單一的、相對小的、功能性抗原-結合結構單位、結構域或蛋白。這將VHH結構域與常規4-鏈抗體的Vh和VL結構域區分開，其本身通常不適合作為單一抗原-結合蛋白或結構域用於實際應用，但是需要以某種形式或另一結構域結合以提供功能性抗原-結合單位(例如，在常規抗體片段諸如Fab片段中；在ScFv，s片段中，其由共價連接到VL結構域上的Vh結構域組成)。由於這些獨特的特性，VHH結構域和納米體用作單一抗原-結合蛋白或用作抗原-結合結構域(即，作為更大的蛋白或多肽的部分)提供許多優於常規Vh和Vt結構域、scFv's或常規抗體片段(諸如Fab-或F(ab，)2-片段)應用的顯著優點.--只有單結構域需要以高親和力和高選擇性結合抗原，以致不需要存在兩個分開的結構域，或者不需要保證這兩個結構域以正確的空間構象和構型(即，通過使用專門設計的接頭，如同scfv's)存在；-vhh結構域和納米體可以從單一基因表達，並且需要翻譯後摺疊或修飾；-VHH結構域和納米體可以容易地加工成多價和多特異性形式(如本文進一步所討論)；-VHH結構域和納米體高度可溶，並且沒有聚集傾向(如同Ward等，Nature(自然)，341巻，1989，第544頁所述的來源於小鼠的抗原畫結合結構域)；-VHH結構域和納米體對熱、pH、蛋白酶和其它變性劑或條件高度穩定(參見，例如，Ewert等，同前所述)；-Vm-i結構域和納米體製備容易並且相對廉價，即使以生產需要的規模製備。例如，VHH結構域、納米體和包含其的蛋白/多肽可以使用微生物發酵生產(例如，下文進一步所述)，並且不需要使用哺乳動物表達系統，如同例如常規抗體片段；_與常規4-鏈抗體及其抗原-結合片段相比，VHH結構域和納米體相對小(大約15kDa，或比常規IgG小10倍)，並且因此表現出比所述常規4-鏈抗體及其抗原-結合片段更高的組織(包括但不限於實體瘤和其它緻密組織)穿透性；-VHH結構域和納米體可以表現出所謂的洞隙-結合(cavity-binding)特性(與常規VH結構域相比，尤其由於它們延長的CDR3環)，並且因此還可以接近常規4-鏈抗體及其抗原-結合片段不能接近的靶點和表位。例如，已經表明VHH結構域和納米體可以抑制酶(參見，例如，WO97/49805;Transue等，(1998)，同前所述；Lauwereys等，(1998)，同前所述)o如上文提及，本發明通常涉及針對TNF-oc的納米體，以及包括或基本上由一個或多個這樣的納米體組成的多肽，其可以用於下文以及WO04/041862中所述的預防、治療和/或診斷目的。還如上文提及以及下文進一步所述，本發明還涉及編碼這樣的納米體和多肽的核酸，製備這樣的納米體和多肽的方法，表達或能夠表達這樣的納米體或多肽的宿主細胞，這樣的納米體、多肽、核酸或宿主細胞的應用，以及涉及包括這樣的納米體、多肽、核酸或宿主細胞的組合物。通常，應該注意，當用於本文時，術語納米體在其最廣泛意義上不限於具體的生物來源或具體的製備方法。例如，如下文更詳細地討論，本發明的納米體可以這樣獲得(1)通過分離天然存在的重鏈抗體的Vhh結枸域；(2)通過表達編碼天然存在的VHH結構域的核苷酸序列；(3)通過將天然存在的VHH結構域"人源化"(如下文所述)或者通過表達編碼這樣的人源化VHH結構域的核酸；(4)通過將來自於任何動物物種特別是哺乳動物物種諸如來自於人類的天然存在的vH結構域"駱駝源化(camelization)"(如下文所述)，或者通過表達編碼這樣的駱駝源化的VH結構域的核酸；(5)通過如Ward等(同前所述)所述將"結構域抗體"或"Dab""駱駝源化"，或者通過表達編碼這樣的駱駝源化VH結構域的核酸；(6)應用合成或半合成技術製備蛋白、多肽或其它胺基酸序列；(7)通過應用核酸合成技術製備編碼納米體的核酸，然後表達這樣獲得的核酸；和/或(8)通過前述的任何結合。基於本文的公開，熟練的技術人員應該清楚實行前述的適當的方法和技術，以及例如包括下文更詳細描述的方法和技術。。然而，按照一個具體的實施方案，本發明的納米體不具有與天然存在的VH結構域的胺基酸序列諸如來自於哺乳動物並且特別是來自於人類的天然存在的VH結構域的胺基酸序列完全相同(即，與之100%的序列相同性程度)的胺基酸序列。本發明納米體的一種特別優選的種類包括具有與天然存在的VHH結構域的胺基酸序列相對應的但是已被"人源化"的胺基酸序列的納米體，"人源化"即，用在來自於人類的常規4-鏈抗體的VH結構域中對應位置存在的一個或多個胺基酸殘基替換所述天然存在的VHH序列的胺基酸序列中的一個或多個胺基酸殘基(例如，上文所示)。這可以以本質上己知的方式進行，這對於熟練的技術人員是清楚的，例如，基於下文的進一步描述以及本文引用的關於人源化的現有技術。此外，應該注意，本發明這樣的人源化納米體可以以本質上已知的任何適當方法獲得(即，在上文(l)-(8)點下所示)，並且因此沒有嚴格地限於使用包括天然存在的Vhh結枸域的多肽作為起始原料而獲得的多肽。對於屬於103P,R,S-組和/或GLEW-組的納米體(如本文定義)的優選但非限制性的人源化取代是108Q-108L。本發明納米體的另一種特別優選的種類包括具有與天然存在的Vh結構域的胺基酸序列相對應但已被"駱駝源化"的胺基酸序列的納米體，"駱駝源化"即，用在重鏈抗體的VHH結構域中對應位置存在的一個或多個胺基酸殘基替換常規4-鏈抗體的天然存在的VH結構域的胺基酸序列中的一個或多個胺基酸殘基。這可以以本質上已知的方式進行，這對於熟練的技術人員是清楚的，例如，基於下文的進一步描述。還可以參考WO94/04678。這樣的駱駝源化可能優先發生在存在於VH-V^界面的胺基酸位置以及所謂的駱駝科(Camelidae)標誌殘基(也參見例如WO94/04678)，也如下文所提及。優選地，用作產生或設計所述駱駝源化納米體的起始原料或起點的VH結構域或序列優選地是來自哺乳動物的Vh序列，更優選地是人類的VH序列。然而，應該注意，這種駱駝源化的本發明納米體可以以本質上已知的任何適當方式獲得(即，在上文(l)-(8)點下所示)，並且因此沒有嚴格地限於使用包括天然存在的VH結構域的多肽作為起始原料而獲得的多肽。例如，又如下文進一步所述，"人源化"和"駱駝源化"可以這樣進行通過提供分別編碼所述天然存在的VHH結構域或VH結構域的核苷酸序列，並且然後以本質上已知的方式改變所述核苷酸序列中的一個或多個密碼子，以致新核苷酸序列分別編碼人源化的或駱駝源化的本發明的納米體，並且然後以本質上已知的方式表達這樣獲得的核苷酸序列，以提供理想的本發明的納米體。備選地，分別基於天然存在的VHH結構域或VH結構域的胺基酸序列，可以分別設計理想的人源化或駱駝源化的本發明的納米體的胺基酸序列，然後應用本質上已知的肽合成技術從頭開始合成。此外，分別基於天然存在的VHH結構域或VH結構域的胺基酸序列或核苷酸序列，可以分別設計編碼所述理想的人源化或駱駝源化的本發明的納米體的核苷酸序列，然後應用本質上巳知的核酸合成技術從頭開始合成，之後可以以本質上已知的方式表達這樣獲得的核苷酸序列，以提供理想的本發明的納米體。熟練的技術人員應該清楚從天然存在的VH結構域或優選的Vhh結枸域(的胺基酸序列)和/或從編碼其的核苷酸序列和/或核酸序列起始而獲得本發明的納米體和/或編碼其的核苷酸序列和/或核酸的其它適宜方法，並且例如，可以包括將來自天然存在的VH結構域的一個或多個胺基酸序列和/或核苷酸序列(諸如一個或多個FR's和/或CDR's)與來自天然存在的vHH結構域的一個或多個胺基酸序列和/或核苷酸序列(諸如一個或多個FR's或CDR's)以適當方式組合，以提供本發明的納米體(編碼其的核苷酸序列或核酸)。按照本發明方面的一個優選的但非限制性的方面，納米體在其最廣泛意義上通常可以定義為這樣的多肽，其包括a)由被3個互補決定區/序列中斷的4個構架區/序列組成的胺基酸序歹U，其中在按照Kabat編號方式的位置108的胺基酸殘基是Q;禾口/或b)由被3個互補決定區/序列中斷的4個構架區/序列組成的胺基酸序歹ij，其中按照Kabat編號方式在位置44的胺基酸殘基是E，並且其中按照Kabat編號方式在位置45的胺基酸殘基是R;和/或c)由被3個互補決定區/序列中斷的4個構架區/序列組成的胺基酸序歹lj，其中按照Kabat編號方式在位置103的胺基酸殘基選自由P、R和S組成的組，並且特別選自由R和S組成的組。因此，在第一優選的但非限制性的方面，本發明的納米體可以具有結構FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分別是指構架區1-4，並且其中CDR1-CDR3分別是指互補決定區l-3，並且其中i)按照Kabat編號方式在位置108的胺基酸殘基是Q;和/或其中ii)按照Kabat編號方式在位置44的胺基酸殘基是E，並且其中按照Kabat編號方式在位置45的胺基酸殘基是R;和/或其中iii)按照Kabat編號方式在位置103的胺基酸殘基選自由P、R和S組成的組，並且特別選自由R和S組成的組；並且其中iv)CDR1,CDR2和CDR3如上文定義，並且優選地如按照上述一種優選的定義而定義，並且更優選地如按照上述一種更優選的定義而定義。特別地，按照本發明針對TNF-ot的納米體可以具有結構FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分別是指構架區1-4，並且其中CDR1-CDR3分別是指互補決定區l-3，並且其中i)按照Kabat編號方式在位置108的胺基酸殘基是Q;和/或其中ii)按照Kabat編號方式在位置44的胺基酸殘基是E，並且其中按照Kabat編號方式在位置45的胺基酸殘基是R;和/或其中iii)按照Kabat編號方式在位置103的胺基酸殘基選自由P、R和S組成的組，並且特別選自由R和S組成的組；並且其中iv)CDR1,CDR2和CDR3如上文定義，並且優選地如按照上述一種優選的定義而定義，並且更優選地如按照上述一種更優選的定義而定義。特別地，按照本發明方面的一個優選的但非限制性的方面，納米體通常可以定義為包括由被3個互補決定區/序列中斷的4個構架區/序列而組成的胺基酸序列的多肽，其中a-l)按照Kabat編號方式在位置44的胺基酸殘基選自由G,E,D,G,Q,R,S，L組成的組；並且優選地選自由G，E或Q組成的組；和a-2)按照Kabat編號方式在位置45的胺基酸殘基選自由L,R或C組成的組；並且優選地選自由L或R組成的組；禾口a-3)按照Kabat編號方式在位置103的胺基酸殘基選自由W,R或S組成的組；並且優選地選自由W或R組成的組，以及最優選地為W;a-4)按照Kabat編號方式在位置108的胺基酸殘基是Q;或者其中b-l)按照Kabat編號方式在位置44的胺基酸殘基選自由E和Q組成的組；禾口b-2)按照Kabat編號方式在位置45的胺基酸殘基是R;和b-3)按照Kabat編號方式在位置103的氮基酸殘基選自由W，R和S組成的組；並且優選地為W;b-4)按照Kabat編號方式在位置108的胺基酸殘基選自由Q和L組成的組；並且優選地為Q;或者其中c-l)按照Kabat編號方式在位置44的胺基酸殘基選自由G，E,D，Q，R,S和L組成的組；並且優選地由G,E和Q組成的組；和c-2)按照Kabat編號方式在位置45的胺基酸殘基選自由L，R和C組成的組；並且優選地選自由L和R組成的組；和c-3)按照Kabat編號方式在位置103的胺基酸殘基選自由P,R和S組成的組；並且特別選自由R和S組成的組；和c-4)按照Kabat編號方式在位置108的胺基酸殘基選自由Q和L組成的組；優選地為Q。因此，在另一個優選的但非限制性方面，本發明的納米體可以具有結構FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分別是指構架區1-4，並且其中CDR1-CDR3分別是指互補決定區l-3，並且其中i)按照Kabat編號方式在位置44的胺基酸殘基選自由G,E,D,G,Q,R，S,L組成的組；並且優選地選自由G,E或Q組成的組；並且其中ii)按照Kabat編號方式在位置45的胺基酸殘基選自由L，R或C組成的組；並且優選地選自由L或R組成的組；並且其中iii)按照Kabat編號方式在位置103的胺基酸殘基選自由W,R或S組成的組；並且優選地為W或R,並且最優選地為W;並且其中iv)按照Kabat編號方式在位置108的胺基酸殘基是Q;並且其中v)CDR1,CDR2和CDR3如上文定義，並且優選地如按照上述一種優選的定義而定義，並且更優選地如按照上述一種更優選的定義而定義。在另一個優選的但非限制性方面中，本發明的納米體可以具有結構FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分別是指構架區1-4，並且其中CDR1-CDR3分別是指互補決定區l-3，並且其中i)按照Kabat編號方式在位置44的胺基酸殘基選自由E和Q組成的組;並且其中ii)按照Kabat編號方式在位置45的胺基酸殘基是R;並且其中iii)按照Kabat編號方式在位置103的胺基酸殘基選自由W，R和S組成的組；並且優選地為W;並且其中iv)按照Kabat編號方式在位置108的胺基酸殘基是Q;並且其中v)CDR1,CDR2和CDR3如上文定義，並且優選地如按照上述一種優選的定義而定義，並且更優選地如按照上述一種更優選的定義而定義。在另一個優選的但非限制性方面中，本發明的納米體可以具有結構FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分別是指構架區1-4，並且其中CDR1-CDR3分別是指互補決定區l-3，並且其中0按照Kabat編號方式在位置44的胺基酸殘基選自由G，E，D,Q，R，S和L組成的組；並且優選地選自由G,E和Q組成的組；並且其中ii)按照Kabat編號方式在位置45的胺基酸殘基選自由L,R和C組成的組；並且優選地選自由L和R組成的組；並且其中.-iii)按照Kabat編號方式在位置103的胺基酸殘基選自由P，R和S組成的組；並且特別選自由R和S組成的組；並且其中iv)按照Kabat編號方式在位置108的胺基酸殘基選自由Q和L組成的組；優選地為Q;並且其中v)CDR1，CDR2和CDR3如上文定義，並且優選地如按照上述一種優選的定義而定義，並且更優選地如按照上述一種更優選的定義而定義。本發明納米體的兩種特別優選的但非限制性的組是按照上述a);按照上述I)到a-4);按照上述b);按照上述b-l)到b-4);按照上述c);和/或按照上述c-l)到c-4)的那些，其中a)按照Kabat編號方式在位置44-47的胺基酸殘基形成序列GLEW(或如下文定義的GLEW-樣序列)，並且在位置108的胺基酸殘基是Q;或者其中b)按照Kabat編號方式在位置43-46的胺基酸殘基形成序列KERE或KQRE(或KERE-樣序列)，並且在位置108的胺基酸殘基是Q或L,並且優選地為Q。因此，在另一個優選的但非限制性方面，本發明的納米體可以具有結構FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分別是指構架區1-4，並且其中CDR1-CDR3分別是指互補決定區1-3，並且其中i)按照Kabat編號方式在位置44-47的胺基酸殘基形成序列GLBW(或如下文定義的GLEW-樣序列)，並且在位置108的胺基酸殘基是Q;並且其中ii)CDR1，CDR2和CDR3如上文定義，並且優選地如按照上述一種優選的定義而定義，並且更優選地如按照上述一種更優選的定義而定義。在另一個優選的但非限制性方面中，本發明的納米體可以具有結構FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分別是指構架區1-4，並且其中CDR1-CDR3分別是指互補決定區l-3，並且其中i)按照Kabat編號方式在位置43-46的胺基酸殘基形成序列KERE或KQRE(或KERE-樣序列)，並且在位置108的胺基酸殘基是Q或L,並且優選地為Q;並且其中ii)CDR1,CDR2和CDR3如上文定義，並且優選地如按照上述一種優選的定義而定義，並且更優選地如按照上述一種更優選的定義而定義。在其中按照Kabat編號方式在位置43-46的胺基酸殘基形成序列KERE或KQRE的本發明的納米體中，位置37的胺基酸殘基最優選地為F。在其中按照Kabat編號方式在位置44-47的胺基酸殘基形成序列GLEW的本發明的納米體中，位置37的胺基酸殘基選自由Y，H,I，V或F組成的組，並且最優選地為F。因此，無論如何不限於此，基於存在於上述提及的位置的胺基酸殘基，本發明的納米體通常可以基於下列3組進行分類a)"GLEW-組"按照Kabat編號方式在位置44-47具有胺基酸序列GLEW並且按照Kabat編號方式在位置108具有Q的納米體。如本文進一步所述，在這一組內的納米體通常在位置37具有V，並且可以在位置103具有W,P，R或S，並且優選地在位置103具有W。所述GLEW組還包括一些GLEW-樣的序列，諸如下表2中提及的那些；b)"KERE-組"按照Kabat編號方式在位置43-46具有胺基酸序列KERE或KQRE並且按照Kabat編號方式在位置108具有Q或L的納米體。如本文進一步所述，在這一組內的納米體通常在位置37具有F，在位置47具有L或F;並且可以在位置103具有W，P,R或S，並且優選地在位置103具有W;c)103,P,R,S-組，在位置103具有P，R或S的納米體。這些納米體可以在按照Kabat編號方式的位置44-47具有胺基酸序列GLEW或者在按照Kabat編號方式的位置43-46具有胺基酸序列KERE或KQRE，後者最優選地與位置37的F和位置47的L或F結合(如關於KERE-組所定義)；並且可以在按照Kabat編號方式的位置108具有Q或L，並且優選地具有Q。因此，在一個優選的但非限制性的方面，本發明的納米體可以是屬於GLEW-組(如本文所定義)的納米體，並且其中CDR1,CDR2和CDR3如上文定義，並且優選地如按照上述一種優選的定義而定義，並且更優選地如按照上述一種更優選的定義而定義。在另一個優選的但非限制性的方面，本發明的納米體可以是屬於KERE-組(如本文所定義)的納米體，並且其中CDR1,CDR2禾BCDR3如上文定義，並且優選地如按照上述一種優選的定義而定義，並且更優選地如按照上述一種更優選的定義而定義。因此，在另一個優選的但非限制性的方面，本發明的納米體可以是屬於103P，R，S-組(如本文所定義)的納米體，並且其中CDR1,CDR2和CDR3如上文定義，並且優選地如按照上述一種優選的定義而定義，並且更優選地如按照上述一種更優選的定義而定義。此外，更一般地，並且除了上文提及的108Q，43E/44R和103P，R,S殘基之外，本發明的納米體可以在常規VH結構域中形成(部分)Vh/Vl界面的一個或多個位置包含一個或多個胺基酸殘基，所述胺基酸殘基比在相對應的天然存在的Vh或VHH結構域同一位置天然存在的胺基酸殘基更加高度帶電荷，並且特別是一個或多個帶電荷的胺基酸殘基(如表1中提及)。這樣的取代包括，但不限於下表2中提及的GLEW-樣序列；以及國際申請WO00/29004中所述關於所謂的"微體(m/cro6o&m)"的取代，例如在位置108的Q和在位置44-47的KLEW。在本發明的納米體的一些實施方案中，在位置83的胺基酸殘基選自由L,M，S，V和W組成的組；並且優選地為L。此外，在本發明的納米體的一些實施方案中，位置83的胺基酸殘基選自由R,K，N，E,I和Q組成的組；並且最優選地為K或E(對於與天然存在的VHH結構域相對應的納米體)或R(對於"人源化"納米體，如下文所述)。在一些實施方案中位置84的胺基酸殘基選自由P，A,R,S,D和V組成的組，並且最優選地是P(對於與天然存在的VHH結構域相對應的納米體)或R(對於"人源化"納米體，如下文所述)。此外，在本發明的納米體的一些實施方案中，位置104的胺基酸殘基122選自由G和D組成的組；並且最優選地是G。總而言之，在所述納米體中如上文提及的在位置11，37,44,45,47,83,84,103，104和108的胺基酸殘基在本文中還叫作"》元吉^^"。所述標誌殘基以及在最接近的相關的人VH結構域、VH3的相對應的位置的胺基酸殘基總結在表2中。在天然存在的VHH結構域中存在的這些標誌殘基的一些特別優選的組合在表3中提及。為了比較，叫作DP-47的人VH3的相對應胺基酸殘基以斜體顯示。表2:納米體中的標誌殘基tableseeoriginaldocumentpage123(1):特別地，但是不排除，與在位置43-46的KERE或KQRE組合。(2):在位置44-47通常為GLEW。(3):在位置43-46通常為KERE或KQRE，例如，在位置43-47為KEREL,KEREF，KQREL,KQREF或KEREG。備選地，還可能是序列諸如TERE(例如TEREL)，KECE(例如KECEL或KECER),RERE(例如REREG)，QERE(例如QEREG)，KGRE(例如KGREG),KDRE(例如KDREV)。一些其它可能的但較不優選的序列包括例如DECKL和NVCEL。(4):具有在位置44-47的GLEW和在位置43-46的KERE或KQRE。(5):通常作為在天然存在的VHH結構域的位置83-84的KP或EP。(6):特別地，但是不排除，與在位置44-47的GLEW組合。(7):具有附加條件當位置44-47為GLEW時，位置108總是Q。(8):所述GLEW組還在位置44-47包含GLEW-樣序列，諸如例如GVEW,EPEW,GLER，DQEW,DLEW,GIEW，ELEW，GPEW,EWLP,GPER，GUER禾QELEW。表3:在天然存在的納米體中標誌殘基的一些優選的組合對於這些組合的人源化，參考參見本說明書。tableseeoriginaldocumentpage125在所述納米體中，除了所述標誌殘基外在任何其它位置的每一胺基酸殘基可以是在天然存在的VHH結構域的相應位置(按照Kabat編號方式)天然存在的任何胺基酸殘基。對於熟練的技術人員這樣的胺基酸殘基應該是清楚的。表4-7提及一些非限制性的殘基，其可以存在於天然存在的VHH結構域的FR1、FR2、FR3和FR4的任一位置(按照Kabat編號方式)。對於任一位置，在天然存在的VHH結構域的任一位置最經常存在的胺基酸殘基(並且其在納米體中對於所述位置是最優選的胺基酸殘基)以粗體顯示；並且對於每一位置的其它優選的胺基酸殘基已加下劃線(注意在天然存在的VHH結構域的位置26-30發現的胺基酸殘基的數目支持構成編號方式Chothia(同前所述)的基礎的假說，S卩，在這些位置的殘基已經形成部分CDR1。)在表4-7中，還提及可以在人VH3結構域的任一位置存在的一些非限制性的殘基。此外，對於每一位置，在天然存在的人VH3結構域的每一位置最經常存在的胺基酸殘基以粗體顯示；並且其它優選的胺基酸殘基加下劃線。表4:FR1中的胺基酸殘基的非限制性實例(關於腳註，參見表2的腳註)tableseeoriginaldocumentpage127表4:FR1中的胺基酸殘基的非限制性實例(續表)位置胺基酸殘基-乂W25SS,A,F,P，T,L,V26GG,D,E,R，S，V，A,I，M，P,T27FS，F,R，L，P，G，N,A，D,E，H,I，K，M,Q,T,V,Y28TN,T,E,D,S，I，R，A,G,R,F,Y，L,M,P,V29F，YF，L，D，S,I，G，V,A，E，P,T,Y30S,B,GN，S,E,G,A,D,M,T,H,I,P，R,V，W表5:FR2中的胺基酸殘基的非限制性實例(關於腳註，參見表2的腳註)位置胺基酸殘基乂W36WW37標誌殘基:F(1)，Y,H,I,A,L,P,S或V優選F")或Y38RR39QQ,H，P,R，A,D,G，L,E40AA,F，G,P,T，V,I,L,N，R,S,Y41P,S,TP,A,L,S，I,Q，丁42GG,E，D,R,T，V43KK，D,E，N，Q，R,T,V，A,L,M,S44標誌殘基G(2),E(3)D，0，R,S,L,A,F,K,M，N,P,V,W,Y;優選G(2)，E("或Q;最優選G②或E(3)tableseeoriginaldocumentpage129tableseeoriginaldocumentpage130表7:FR4中的胺基酸殘基的非限制性實例(關於腳註，參見表2的腳註)tableseeoriginaldocumentpage131因此，在另一個優選的但非限制性的方面中，本發明的納米體可以具有結構FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分別是指構架區1-4，並且其中CDR1-CDR3分別是指互補決定區l-3，並且其中i)標誌殘基如上文所定義；並且其中ii)CDR1，CDR2和CDR3如上文定義，並且優選地如按照上述一種優選的定義而定義，並且更優選地如按照上述一種更優選的定義而定義。在另一個優選的但非限制性方面中，本發明的納米體可以具有結構FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分別是指構架區1-4，並且其中CDR1-CDR3分別是指互補決定區l-3，並且其中並且其中i)FR1選自由下述胺基酸序列組成的組[1]QVQLQESGGG^VQAGGSLRLSCAASG[26][SEQIDNO:1]或者選自由與上述胺基酸序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組；其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表4所限定的胺基酸取代;和/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表4所限定的胺基酸取代；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且其中ii)FR2選自由下述胺基酸序列組成的組[36]WXROAPGKXXEXVA[49][SEQIDNO:2]或者選自由與上述胺基酸序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組；其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表5所限定的胺基酸取代；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表5所限定的胺基酸取代;禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且其中iii)FR3選自由下述胺基酸序列組成的組[66]RFTISRDNAKNTVYLQMNSL2QgEDTAVYYCAA[94][SEQIDNO:3]或者選自由與上述胺基酸序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組；其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表6所限定的胺基酸取代;禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表6所限定的胺基酸取代；和/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且其中iv)FR4選自由下述胺基酸序列組成的組師lXXQGTXVTVSS[113][SEQIDNO:4]或者選自由與上述胺基酸序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組；其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表6所限定的胺基酸取代；禾口/或134(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表6所限定的胺基酸取代；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且其中v)CDR1,CDR2和CDR3如上文定義，並且優選地如按照上述一種優選的定義而定義，並且更優選地如按照上述一種更優選的定義而定義；其中所述標誌殘基用"^"表示，並且如上文所定義，並且其中括號內的數字是指按照Kabat編號方式的胺基酸位置。在另一個優選的但非限制性的方面中，本發明的納米體具有結構FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分別是指構架區1-4，並且其中CDR1-CDR3分別是指互補決定區1-3,並且其中並且其中i)FR1選自由下述胺基酸序列組成的組[1]QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCAASG[26][SEQIDNO:5]或者選自由與上述胺基酸序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組；其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表4所限定的胺基酸取代;禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置上的標誌殘基如在上述序列中所示；和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表4所限定的胺基酸取代;和/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置上的標誌殘基如在上述序列中所示；並且其中ii)FR2選自由下述胺基酸序列組成的組[36〗Wi;RQAPGK^PiiVA[49][SEQEDNO:6〗[36]W|;RQAPGK^E￡VA[49〗[SEQIDNO:7][36]WFRQAPGKEREGA[49][SEQIDNO:8][36]WFRQAPGKQRELVA[49][SEQIDNO:9][36〗WFRQAPGKOREFVA[49][SEQIDNO:10][36]WYROAPGKGLEWA[49][SEQIDNO:11]或者選自由與上述胺基酸序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組；其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表5所限定的胺基酸取代;禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置37，44,45和47的標誌殘基如在上述每一種序列中所示；和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表5所限定的胺基酸取代；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置37，44,45和47的標誌殘基如在上述每一種序列中所示;並且其中iii)FR3選自由下述胺基酸序列組成的組[66]RFTISRDNAKNTVYLQMNSLig^EDTAVYYCAA[94〗[SEQIDNO:12〗或者選自由與上述胺基酸序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組；其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表6所限定的胺基酸取代；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置83和84的標誌殘基如在上述每一序列中所示；和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表6所限定的胺基酸取代;禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置83和84的標誌殘基如在上述每一序列中所示；並且其中iv)FR4選自由下述胺基酸序列組成的組師lWGQGTQVTVSS[113〗[SEQIDNO:13〗[103]WGQGTLVTVSS[113][SEQIDNO:14〗或者選自由與上述胺基酸序列有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組；其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表6所限定的胺基酸取代；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置103,104和108的標誌殘基如在上述每一序列中所示；和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表6所限定的胺基酸取代；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置103,104和108的標誌殘基如在上述每一序列中所示；並且其中v)CDR1,CDR2和CDR3如上文定義，並且優選地如按照上述一種優選的定義而定義，並且更優選地如按照上述一種更優選的定義而定義。在另一個優選的但非限制性的方面，本發明的納米體可以具有結構FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分別是指構架區1-4，並且其中CDR1-CDR3分別是指互補決定區l-3，並且其中並且其中i)FR1選自由下述胺基酸序列組成的組[1〗QVQLQESGGG^VQAGGSLRLSCAASG〖26][SEQIDNO:5]和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表4所限定的胺基酸取代；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置上的標誌殘基如在上述序列中所示；並且其中ii)FR2選自由下述胺基酸序列組成的組[36]W^RQAPGK^EJiVA〖49][SEQIDNO:6][36]WFRQAPGKE虹FVA[49][SEQIDNO:7][36]WFROAPGKEREGA[49][SEQIDNO:8〗[36]WFROAPGKORELVA[49][SEQIDNO:9][36]WFROAPGKOREFVA[49][SEQIDNO:10〗和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和域如表5所限定的胺基酸取代；和/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置37，44，45和47的標誌殘基如在上述每一序列中所示；並且其中iii)FR3選自由下述胺基酸序列組成的組[66]RPTISRDNAKNTVYLQ廳SLI^EDTAVYYCAA[94[SEQIDNO:12]和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表6所限定的胺基酸取代；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置83和84的標誌殘基如在上述每一序列中所示；並且其中iv)FR4選自由下述胺基酸序列組成的組[103WGQGTOVTVSS[113][SEQIDNO:13][103〗^2QGTtVTVSS[113][SEQIDNO:14]和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中G)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表7所限定的胺基酸取代;和/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置103，104和108的標誌殘基如在上述每一序列中所示；並且其中v)CDR1,CDR2和CDR3如上文定義，並且優選地如按照上述一種優選的定義而定義，並且更優選地如按照上述一種更優選的定義而定義。在另一個優選的但非限制性的方面中，本發明的納米體可以具有結構FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分別是指構架區1-4，並且其中CDR1-CDR3分別是指互補決定區l-3，並且其中並且其中i)FR1選自由下述胺基酸序列組成的組[1]QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCAASG[26][SEQEDNO:5]和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表4所限定的胺基酸取代；和/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置上的標誌殘基如在上述序列中所示；並且其中-ii)FR2選自由下述胺基酸序列組成的組[36]WYRQAPGKGLEWA[49][SEQIDNO:11]和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表5所限定的胺基酸取代；和/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置37,44,45和47的標誌殘基如在上述每一序列中所示；並且其中iii)FR3選自由下述胺基酸序列組成的組[66]RFTISRDNAKNTVYLQMNSL泣EDTAVYYCAA[94][SEQIDNO:12〗和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表6所限定的胺基酸取代；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置83和84的標誌殘基如在上述每一序列中所示；並且其中i力FR4選自由下述胺基酸序列組成的組[103]WGOGTOVTVSS[113][SEQID穀13J和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表7所限定的胺基酸取代；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置103，104和108的標誌殘基如在上述每一序列中所示；並且其中v)CDR1,CDR2和CDR3如上文定義，並且優選地如按照上述一種優選的定義而定義，並且更優選地如按照上述一種更優選的定義而定義。在本發明的納米體中存在的一些其它構架序列可以在上文提及的歐洲專利EP656946中找到(參見，例如，也就是授權的US等價專利5,759,808)。在另一個優選的但非限制性的方面中，本發明的納米體可以具有結構FR1-CDR1-FR2畫CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分別是指構架區1-4，並且其中CDR1-CDR3分別是指互補決定區1-3，並且其中並且其中i)FR1選自由存在於SEQIDNO，s52-60,SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO，s95-99的納米體中、並且特別是存在於SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO's95-99的人源化納米體中的FR1序列組成的組，或者選自由與所述FR1序列的一種具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組；其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表4所限定的胺基酸取代;和/或(2)與所述FR1序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置上的標誌殘基如在所述FR1序列中所示；和/或選自由與所述FR1序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表4所限定的胺基酸取代；和/或(2)與所述FR1序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置上的標誌殘基如在所述FR1序列中所示；並且其中ii)FR2選自由存在於SEQIDNO，s52-60,SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO's95-99的納米體中、並且特別是存在於SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO's95-99的人源化納米體中的FR2序列組成的組，或者選自由與所述FR2序列的一種具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組；其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表5所限定的胺基酸取代；禾口/或(2)與所述FR2序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置37，44，45和47上的標誌殘基如在所述FR2序列中所示；和/或選自由與所述FR2序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表5所限定的胺基酸取代;禾口/或(2)與所述FR2序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置37，44，45和47上的標誌殘基如在所述FR2序列中所示；並且其中iii)FR3選自由存在於SEQIDNO，s52-60，SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO，s95-99的納米體中、並且特別是存在於SEQIDNO's76-86或SEQIDNO's95-99的人源化納米體中的FR3序列組成的組，或者選自由與所述FR3序列的一種具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組；其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表6所限定的胺基酸取代；和/或(2)與所述FR3序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置83和84上的標誌殘基如在所述FR3序列中所示；禾口/或選自由與所述FR3序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表6所限定的胺基酸取代；禾口/或(2)與所述FR3序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置83和84上的標誌殘基如在所述FR3序列中所示；並且其中iv)FR4選自由存在於SEQIDNO，s52-60，SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO，s95-99的納米體中、並且特別是存在於SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO's95-99的人源化納米體中的FR4序列組成的組，或者選自由與所述FR4序列的一種具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組；其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表6所限定的胺基酸取代；禾口/或(2)與所述FR4序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置103，104和108上的標誌殘基如在所述FR3序列中所示；和/或選自由與所述FR4序列中的一種具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表6所限定的胺基酸取代；和/或(2)與所述FR4序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入；並且(3)在位置103，104和108上的標誌殘基如在所述FR4序列中所示；並且其中v)CDR1，CDR2和CDR3如上文定義，並且優選地如按照上述一種優選的定義而定義，並且更優選地如按照上述一種更優選的定義而定義。一些特別優選的本發明的納米體可以選自由胺基酸序列SEQIDNO,s52-60，SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO，s95-99，並且特別是在SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO，s95-99的人源化納米體中的胺基酸序列組成的組，或者選自由與胺基酸序列SEQIDNO's52-60，SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO，s95-99中的一種具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組；其中(1)所述標誌殘基可以如在上述表2中所示；(2)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表4-7所限定的胺基酸取代；和/或(3)與上述胺基酸序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入。一些甚至更特別優選的本發明的納米體可以選自由胺基酸序列SEQIDNO，s52-60,SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO，s95-99，並且特別是在SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO，s95-99的人源化納米體中的胺基酸序列組成的組，或者選自由與胺基酸序列SEQIDNO，s52-60，SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO，s95-99中的一種具有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組；其中(1)所述標誌殘基如在選自SEQIDNO，s52-60，SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO，s95-99的相關序列中所示；(2)在除標誌位置之外的任何位置的任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)和/或如表4-7所限定的胺基酸取代；和/或(3)與選自SEQIDNO，s52-60,SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO's95-99的相關序列相比，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並沒有胺基酸刪除或插入。一些最優選的本發明的納米體可以選自由胺基酸序列SEQIDNO，s52-60,SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO，s95-99組成的組，並且特別選自SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO，s95-99的人源化納米體。從上文應該清楚，當用於本文時，術語本發明的納米體在其最廣泛意義上還包括在SEQIDNO，s52-60，SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO's95-99中提及的納米體的天然的或合成的突變體、變體、等位體、類似物和直向同源物(下文籠統叫作"類欽激")。一般地，例如，所述類似物可以包括納米體的同源序列、功能性片段或同源序列的功能性片段(如下文進一步所定義)。通常，在所述類似物中，在每一構架區的每一胺基酸殘基(除標誌殘基之外)可以被任何胺基酸殘基取代，條件是所述構架區的序列相同性的總程度保持如上文所限定。然而，優選地，在所述類似物中-上述構架序列中的一個或多個胺基酸殘基被在天然存在的Vhh結枸域中的同一位置上天然存在的一個或多個胺基酸殘基取代。這樣的取代的一些實例在上述表4-7中提及；和/或-上述構架序列中的一個或多個胺基酸殘基被可以視為"保守"胺基酸取代的一個或多個胺基酸殘基取代，如上文所述；和/或-上述構架序列中的一個或多個胺基酸殘基被在天然存在的人類VH結構域中的同一位置上天然存在的一個或多個胺基酸殘基取代。這通常叫作在天然存在的Vhh/納米體以及特別在所述位置的"人源化"，並且將在下文中更詳細地討論；並且-對於所述Vh結枸域和VHH結構域在上述表4-7中都只提及1個胺基酸殘基的位置優選地不被取代。此外，儘管一般較不優選，但是在所述類似物中，一個或多個胺基酸殘基可以從所述構架區刪除，和/或插入到構架區(任選地除了上文提及的一個或多個胺基酸取代)，條件是所述構架區的序列相同性的總程度保持如上文所限定。標誌殘基不應該刪除。此外，最優選地，對於所述VH結構域和vhh結構域在上述表4-7中都只提及1個胺基酸殘基的位置優選地不被刪除。優選地，所述類似物應該是這樣的，以致它們仍然可以結合TNF-a，對TNF-a具有親和性和/或具有特異性，即，當應用適當的檢測確定時，所述檢測例如確定所述類似物與TNF的結合的檢測，並且特別是下述實施例中所用的檢測中的一種，具有是SEQIDNo's52-60,SEQIDNO，s76-86或SEQIDNO，s95-99的納米體中至少一種的親和性和/或特異性的至少10%、優選地至少50%、更優選地至少70%、甚至更優選地至少80%、諸如至少90%、至少95%、至少99%或更多的親和性和/或特異性。148通常，例如，所述類似物可以這樣獲得通過提供編碼天然存在的vhh結構域的核酸，將要被人源化的一個或多個胺基酸殘基的密碼子改變成相對應的人胺基酸殘基的密碼子，在適當的宿主或表達系統中表達這樣獲得的核酸/核苷酸序列；並且任選地分離和/或純化這樣獲得的類似物，以提供基本上分離形式(如上文所定義)的所述類似物。這通常可以應用本質上已知的方法和技術而進行，所述方法和技術應該是熟練的技術人員所清楚的，例如從手冊和本文所引用的參考文獻和/或從下文的進一步描述中可知。備選地，並且例如，編碼類似物的核酸可以以本質上已知的方法合成(例如使用用於合成預先確定胺基酸序列的核酸序列的自動裝置)，並且可以在適當的宿主或表達系統中表達，在其中可以任選地分離和/或純化這樣獲得的類似物，以提供基本上分離形式(如上文所定義)的所述類似物。另一種提供所述類似物的方法包括相關胺基酸序列的化學合成，其應用本質上已知的肽合成技術，諸如下文所提及的那些技術。熟練的技術人員一般還應該清楚，納米體(包括其類似物)還可以從人Vh序列(即，胺基酸序列或相對應的核苷酸序列)起始製備，所述人Vh序列豬如例如人Vh3序列，諸如DP-47、DP-51、DP-54或DP-29，通過改變所述人vh結構域的胺基酸序列中的一個或多個胺基酸殘基，以提供具有下列各項的胺基酸序列(a)在位置108具有Q;和/或(b)在位置44具有E和/或在位置45具有R，並且優選地在位置44具有E和在位置45具有R;和/或(c)在位置103具有P，R或S，如上文所定義。此外，這通常可以應用前段中提到的各種方法和技術進行，其應用人vh結構域的胺基酸序列和/或核苷酸序列作為起點。當用於本文時，術語納米體以其最廣泛的意義還包括如上文所定義的本發明的納米體(包括類似物)的部分或片段，其可能也如在下文中進一步所述。通常，所述納米體和/或類似物的部分或片段具有這樣的胺基酸序列，即，與相對應的全長納米體或類似物的胺基酸序列相比，其中已經刪除和/或去除N末端的一個或多個胺基酸殘基，C末端的一個或多個胺基酸殘基，一個或多個鄰接的內部胺基酸殘基，或者其任何組合。還可以將一個或多個這樣的部分或片段組合以提供本發明的納米體。優選地，包含全長納米體和/或類似物的一個或多個部分或片段的納米體的胺基酸序列應該與相對應的全長納米體的胺基酸序列有至少50%、優選地至少60%、更優選地至少70%、諸如至少80%、至少90%或至少95%的序列相同性程度。此外，包含全長納米體和/或類似物的一個或多個部分或片段的納米體的胺基酸序列應該優選地是這樣，以致其包括相對應的全長納米體的胺基酸序列的至少10個鄰接的胺基酸殘基，優選地至少20個鄰接的胺基酸殘基，更優選地至少30個鄰接的胺基酸殘基，諸如至少40個鄰接的胺基酸殘基。通常，本發明的納米體的這樣的部分或片段應該具有這樣的胺基酸序列，即，與相對應本發明的全長納米體的胺基酸序列相比，其中己經刪除和/或去除N末端的一個或多個胺基酸殘基，C末端的一個或多個氮基酸殘基、一個或多個鄰接的內部胺基酸殘基，或其任何組合。還可以將一個或多個這樣的部分或片段組合，以提供本發明的納米體。按照一個優選的實施方案，當用於本文時，片段包括至少一個存在於本發明的全長納米體中的CDR's，優選地至少兩個存在於本發明的全長納米體中的CDR's，更優選地至少存在於本發明的全長納米體中的CDR2和CDR3，諸如例如所有三個存在於本發明的全長納米體中的CDR，s。按照另一個特別優選但非限制性的實施方案，這樣的部分或片段包括至少本發明的相對應的全長納米體的FR3、CDR3禾nFR4，即，例如在國際申請WO03/050531(Lasters等)中所述。優選地，這樣的部分或片段應該是這樣的，以致它們仍然可以結合TNF-oc，對TNF-a具有親和性和/或具有特異性，即，例如確定所述類似物與TNF的結合的檢測，並且特別是下述實施例中所用的檢測中的一種，具有是本發明的相對應的全長的納米體的親和性和/或特異性的至少10%、優選地至少50%、更優選地至少70%、甚至更優選地至少80%、諸如至少90%、至少95%、至少99%或更多的親和性和/或特異性。從上文的描述，應該清楚，本文所用的納米體的胺基酸序列在至少一個構架區中的至少一個胺基酸位置不同於天然存在的VH結構域的胺基酸序列，諸如來自人類的抗體的天然存在的VH結構域的胺基酸序列。特別地，應該清楚，本文所用的納米體的胺基酸序列在至少一個標誌殘基不同於天然存在的VH結構域的胺基酸序列，諸如來自駱駝科和/或人類的抗體的天然存在的VH結構域的胺基酸序列。因此，按照一個具體的實施方案，本發明的納米體具有在一個構架區的至少一個胺基酸位置不同於天然存在的VH結構域的胺基酸序列的胺基酸序列。按照本發明一個更具體的但非限制性的實施方案，本發明的納米體具有在至少一個標誌殘基不同於天然存在的VH結構域的胺基酸序列的胺基酸序列。從上文的描述，還應該清楚，一些本發明的納米體的胺基酸序列，諸如本發明的人源化納米體，應該在至少一個構架區的至少一個胺基酸位置(即，在標誌殘基位置或在另一位置)不同於天然存在的VHH結構域的胺基酸序列。因此，按照一個具體的但非限制性的實施方案，本發明的納米體具有在一個構架區的至少一個胺基酸位置不同於天然存在的VhH結構域的胺基酸序列的胺基酸序列。按照本發明一個更具體的但非限制性的實施方案，本發明的納米體具有在至少一個標誌殘基不同於天然存在的VHH結構域的胺基酸序列的胺基酸序列。本發明在其最廣泛意義上還包括本發明的納米體的衍生物。這樣的衍生物通常可以通過本發明的納米體和/或形成本發明的納米體的一個或多個胺基酸殘基的修飾而獲得，並且特別是通過化學和/或生物(例如，酶促)修飾。熟練的技術人員應該清楚這樣的修飾的實例，以及納米體序列中可以以這樣的方式修飾的胺基酸殘基的實例(即，在蛋白骨架上但是優選地在側鏈上)，可以用來引入所述修飾的方法和技術以及所述修飾的潛在用途和優點。例如，這樣的修飾可以包括向本發明的納米體內或向本發明的納米體上引入(例如，通過共價連接或以其它適當的方式)一個或多個官能團、殘基或部分，並且特別是賦予本發明的納米體一種或多種理想的特性或官能性的一個或多個官能團、殘基或部分。熟練的技術人員應該清楚所述官能團的實例。例如，所述修飾可以包括引入(例如，通過共價結合或以任何其它適當的方式)一個或多個這樣的官能團，即，所述官能團增加本發明的納米體的半衰期、溶解性和/或吸收，減少本發明的納米體的免疫原性和/或毒性，消除或減弱本發明的納米體的任何不理想的副作用，和/或賦予本發明的納米體和/或多肽其它的有利特性和/或減少本發明的納米體和/或多肽的不理想特性；或者兩種或多種上述的任何組合。所述官能團的實例以及引入所述官能團的技術的實例應該為熟練的技術人員清楚，並且通常包括上文引用的綜合
背景技術：
中提及的所有官能團和技術，以及本質上已知的用於修飾藥物蛋白並且特別用於修飾抗體或抗體片段(包括ScFv，s和單結構域抗體)的官能團和技術，關於其的參考文獻例如參考Remington'sPharmaceuticalSciences(Remington's藥物禾鬥學),第16版，MackPublishingCo.，Easton，PA(1980)。例如，所述官能團可以直接連接(例如共價地)到本發明的納米體上，或者任選地通過適當的接頭或間隔，這也為熟練的技術人員所清楚。關於增加半衰期和/或減少藥物蛋白的免疫原性最廣泛應用的一種技術包括適當的藥用聚合物諸如聚(乙二醇)(PEG)或其衍生物(諸如甲氧基聚(乙二醇)或mPEG)的附著。一般地，可以應用聚乙二醇化作用的任何適當的形式，諸如本領域中用於抗體和抗體片段(包括但不限於(單)結構域抗體和ScFv，s)的聚乙二醇化作用；參考例如可以參考Chapman,Nat.Biotechnol"54，531-545(2002);Veronese禾口Harris,Adv.DrugDeliv.Rev.54,453-456(2003),Harris和Chess,Nat.Rev.Drug,Discov,,2，(2003)以及在WO04/060965中。用於蛋白聚乙二醇化的各種試劑還可以商購，例如從美國NektarTherapeutics購得。優選地，應用定向聚乙二醇化，特別是通過半胱氨酸-殘基(參見例如Yang等，ProteinEngineering,16,10，761-770(2003))。例如，出於這一目的，PEG可以附著到本發明的納米體中天然存在的半胱氨酸殘基上，本發明的納米體可以這樣進行修飾，以適當地引入一個或多個用於PEG附著的半胱氨酸殘基，或者可以將包括一個或多個用於PEG附著的半胱氨酸殘基的胺基酸序列融合到本發明的納米體的N-和/或C-端，熟練的技術人員本質上已知所有應用的蛋白質加工技術。優選地，對於本發明的納米體和蛋白，使用具有大於5000的分子量的PEG，諸如大於10,000並且小於200,000，諸如小於IOO，OOO;例如在20,000-80,000範圍。關於聚乙二醇化，應該注意，通常本發明還包括已經在一個或多個胺基酸位置被聚乙二醇化的任何本發明的納米體和/或本發明的多肽，優選地以這樣的方式，即，所述聚乙二醇化(l)增加體內半衰期；(2)減少免疫原性；(3)提供關於聚乙二醇化本質上已知的一種或多種更有利的其它特性；(4)基本上不影響所述納米體和/或多肽對TNF-oc的親和性(例如，當通過適當的檢測測定時，諸如下述實施例中所述的那些檢測，沒有減小大於90%的所述親和力，優選地沒有減小大於50%的所述親和力，並且更優選地沒有減小大於10%的所述親和力)；和/或(5)沒有影響本發明的納米體和/或多肽的任何其它理想的特性。熟練的技術人員應該清楚適宜的PEG-基團以及特異性地或非特異性地附著其的方法。例如，用於所述聚乙二醇化的適宜的試劑盒和試劑可以從Nektar(CA,USA)獲得。另外，通常較不優選的修飾包括N-連接或O-連接的糖基化作用，通常作為共-翻譯和/或翻譯後修飾的部分，其取決於用於表達本發明的納米體或多肽的宿主細胞。另一種修飾可以包括引入一種或多種可檢測的標記或其它信號-產生基團或部分，其取決於所標記納米體的目的用途。適宜的標記以及附著、使用和檢測它們的技術是熟練的技術人員所清楚的，並且例如包括但不限於，螢光標記(諸如螢光素、異硫氰酸鹽、羅丹明、藻紅蛋白、藻藍蛋白、別藻藍蛋白、鄰苯二醛(o-phthaldehyde)、以及螢光胺和螢光素金屬諸如^Eu或其它來自鑭系的金屬)，磷光性標記、化學發光標記或生物發光標記(諸如魯米另卩、異魯米諾、theromaticacridiniumester、咪唑、acridinium鹽、草酸酯、二氧雜環丁烷或GFP及其類似物)，放射性-同位素(諸如3H，125I，32P，35S，14C,51Cr,36C1，57Co，58Co，59Fe和75Se)，金屬、金屬螯合物或金屬陽離子(例如金屬陽離子諸如99mTc，123I,luIn，1311,97Ru,67Cu,67Ga和68Ga，或其它特別適合用於體內、體外或原位診斷和成像的金屬或金屬陽離子，諸如(^Gd，"Mn，162Dy,"Cr和"Fe))，以及發色團和酶(諸如蘋果酸脫氫酶、葡萄球菌核酸酶、A-V-類固醇異構酶、酵母醇脫氫酶、(X-磷酸甘油脫氫酶、丙糖磷酸異構酶、生物素-抗生物素蛋白過氧化酶、辣根過氧化酶、鹼性磷酸酶、天冬醯胺酶、葡糖氧化酶、卩-半乳糖苷酶、核糖核酸酶、脲酶、過氧化氫酶、葡萄糖-VI-磷酸脫氫酶、葡糖澱粉酶和乙醯膽鹼酯酶)。其它適宜的標記為熟練的技術人員所清楚，並且例如包括可以應用NMR或ESR光譜檢測的部分。例如，這樣標記的本發明的納米體和多肽可以用於體外、體內或原位檢測(包括本質上己知的免疫檢測，諸如ELISA,RIA,EIA和其它"三明治檢測"等)，以及體內診斷和成像目的，這取決於特定的標記的選擇。熟練的技術人員應該清楚，另一種修飾可以包括引入螯合基團，例如以螯合上文提到的金屬或金屬陽離子之一。例如，適當的螯合基團包括但不限於二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)或乙二胺四乙酸(EDTA)。另一種修飾可以包括引入作為特異性結合對諸如生物素-(鏈黴)抗生物素蛋白結合對的一部分的官能團。這樣的官能團可以用來將本發明的納米體與另一種蛋白、多肽或化學化合物結合，所述另一種蛋白、多肽或化學化合物與所述結合對的另一半結合，S卩，通過形成所述結合對。例如，本發明的納米體可以綴合到生物素上，並且連接到與抗生物素蛋白或鏈黴抗生物素蛋白綴合的另一種蛋白、多肽、化合物或載體上。例如，這樣綴合的納米體可以用作報導子，例如在可檢測的信號產生劑與抗生物素蛋白或鏈黴抗生物素蛋白綴合的診斷系統中用作報導子。例如，這種結合對還可以用來將本發明的納米體與載體結合，包括適用於藥物目的的載體。一個非限制性的實例是Cao和Suresh，JournalofDrugTargetting(藥物耙向雜誌)，8，4，257(2000)所述的脂質體製劑。這種結合對還可以用來將治療活性劑與本發明的納米體結合。對於一些應用，特別是對於意欲殺死表達本發明的納米體所針對的耙點的細胞(例如，在治療癌症時)，或者意欲減少或減緩所述細胞的生長和/或增殖的應用中，本發明的納米體還可以與毒素或者毒性殘基或部分連接。例如，可以與本發明的納米體連接以提供細胞毒性化合物的毒性部分、化合物或殘基的實例對於熟練的技術人員是清楚的，並且例如，可以在上文引用的現有技術和/或本文的進一步描述中找到。一個實例是所謂的ADEPTtm技木WO03/055527。熟練的技術人員應該清楚其它可能的化學和酶促修飾。這種修飾還可以為研究目的引入(例如，為了研究功能-活性關係)。例如，參考參見Lundblad和Bradshaw，Biotechnol.Appl.Biochem.(生物技術應用生物化學〉26，143-151(1997)。如上文提及，本發明還涉及包括至少一種VHH結構域(即，如使用本發明的方法所鑑定)或至少一個基於其的納米體的蛋白或多肽。按照本發明的一個非限制性的實施方案，所述本發明的多肽基本上由納米體組成。"基本上由……組成"意指本發明的多肽的胺基酸序列與納米體的胺基酸序列(如上文提及)完全相同，或者與納米體的胺基酸序列相對應，其中有限數目的胺基酸殘基，諸如1-10個胺基酸殘基並且優選地l-6個胺基酸殘基，諸如1,2,3,4,5或6個胺基酸殘基，已經添加到所述納米體的胺基酸序列的氨基末端、羧基末端或者氨基末端和羧基末端兩"V山順o所述胺基酸殘基可以或者不可以變化、改變或者另外影響所述納米體的(生物學)特性，並且可以或者不可以為所述納米體添加其它的官能性。例如，所述胺基酸殘基a)可以包括N-端Met殘基，例如，因此在異源宿主細胞或宿主生物體內表達；b)可以形成信號序列或前導序列，當合成時其引導所述多肽納米體從宿主細胞中分泌。適宜的分泌性前導肽應該是熟練的技術人員所清楚的，並且可以是本文進一步所述的。通常，這樣的前導序列與所述納米體的N端連接，儘管本發明在其最廣泛意義上不限於此；c)可以形成這樣的序列或信號，g卩，所述序列或信號允許所述納米體導向和/或透過或進入特異性的器官、組織、細胞、或者細胞的部分或區室，和/或所述序列或信號允許所述納米體透過或穿過生物屏障諸如細胞膜、細胞層諸如上皮細胞層、腫瘤包括實體瘤、或血腦屏障。所述胺基酸序列的實例對於熟練的技術人員是清楚的。一些非限制性的實例是在WO03/026700和Temsamani等，ExpertOpin.Biol.Ther.(生物學治療的專家觀點)，1,773(2001);Temsamani和Vidal,DrugDiscov.Today(今日藥物發現)，9,1012(004)以及Rousselle，J.Pharmacol.Exp.Ther.(藥理學和實驗治療學雜誌)，296,124-131(2001)中所述的小肽載體("Pep-trans載體，，)，和由Zhao等，Apoptosis(程序性細胞死亡),8，631-637(2003)所述的膜易位體序列。例如，用於抗體片段細胞內靶向的C端和N端胺基酸序列由Cardinale等，Methods(方法),34，171(2004)所述。關於細胞內革巴向的其它適宜的技術包括所謂的"胞內抗體"的表達和/或應用，所述"胞內抗體"包括本發明的納米體，如下文所提及；d)可以形成"標記"，例如允許或促進所述納米體的純化的胺基酸序列或殘基，例如使用針對所述序列或殘基的親和技術進行純化。然後，所述序列或殘基可以被去除(例如，通過化學或酶促分裂)，以提供納米體序列(為了這一目的，所述標記可以任選地通過可分裂的接頭序列與所述納米體序列連接或包含可分裂的基序)。這種殘基的一些優選的但非限制性的實例是多組氨酸殘基、穀胱甘肽(glutatione)殘基以及myc-標記諸如AAAEQKLISEEDLNGAA[SEQIDN0:31];e)可以是已經被官能化和/或可以作為官能團附著的位點的一個或多個胺基酸殘基。適宜的胺基酸殘基和官能團應該是熟練的技術人員所清楚的，並且包括但不限於，本文為本發明的納米體的衍生物提及的胺基酸殘基和官能團。按照另一個實施方案，本發明的多肽包括本發明的納米體，所述多肽在其氨基末端、在其羧基末端、或者在其氨基末端和其羧基末端兩端融合至少一個其它胺基酸序列，即，以提供包括所述本發明的納米體和一個或多個其它胺基酸序列的融合蛋白。這種融合體在本文還叫作"納米體融合體"。所述一個或多個其它胺基酸序列可以是任何適宜的和/或理想的胺基酸序列。所述其它胺基酸序列可以或不可以變化、改變或另外影響所述納米體的(生物學)特性，並且可以或不可以為本發明的納米體或多肽加入其它的官能性。優選地，所述其它胺基酸序列是這樣的，以致它賦予本發明的納米體或多肽一種或多種理想的特性或官能性。這樣的胺基酸序列的實例是熟練的技術人員所清楚的，並且通常可以包括基於常規抗體及其片段(包括但不限於ScFv's和單結構域抗體)的用於肽融合的所有胺基酸序列。例如，參考參見Holliger和Hudson,NatureBiotechnology(自然生物技術),23,9,1126-1136(2005)的綜述。例如，與本發明的納米體本質上相比，這樣的胺基酸序列可以是這樣的胺基酸序列，g卩，其增加本發明的多肽的半衰期、溶解性、或吸收，減少本發明的多肽的免疫原性或毒性，消除或減弱本發明的多肽的不理想的副作用，和/或賦予本發明的多肽其它有利的特性和/或減少本發明的多肽的不理想特性。所述胺基酸序列的一些非限制性實例為血清蛋白，諸如人血清白蛋白(參見，例如WO00/27435)或半抗原分子(例如被循環抗體識別的半抗原，參見例如WO98/22141)。所述其它的胺基酸序列還可以提供第二結合位點，所述結合位點可以針對任何理想的蛋白、多肽、抗原、抗原決定簇或表位(包括但不限於本發明的納米體所針對的相同的蛋白、多肽、抗原、抗原決定簇或表位，或者不同的蛋白、多肽、抗原、抗原決定簇或表位)。例如，所述其它胺基酸序列可以提供針對血清蛋白(諸如例如，人血清白蛋白或另一種血清蛋白，諸如IgG)的第二結合位點，以在血清中提供增加的半衰期。例如，參考參見EP0368684,WO91/01743,WO01/45746和WO04/003019(其中提及各種血清蛋白)，本申請人的題目為"Nanobodiesagainstamyloid-betaandpolypeptidescomprisingthesameforthetreatmentofdegenerativeneuraldiseasessuchasAlzheimer'sdisease(用於治療退行性神經疾病諸如阿爾茨海默病的針對P-澱粉樣蛋白的納米體tm及包含其的多肽)"的國際申請(其中提到各種其它的蛋白)，以及Harmsen等,Vaccine(疫苗),23(41);4926-42。按照另一個實施方案，所述一個或多個其它胺基酸序列可以包括常規4-鏈抗體(並且特別是人抗體)的和/或重鏈抗體的一個或多個部分、片段或結構域。例如，儘管通常較不優選，本發明的納米體可以連接常規的(優選人的)VH或Vl結構域，或者連接VH或Vl_結構域的天然的或合成的類似物，同樣任選地通過接頭序列(包括但不限於其它(單一)結構域抗體，諸如Ward等所述的dAb's)而連接。所述至少一個納米體還可以連接一個或多個(優選人的)CHl5CH2和/或CH3結構域，任選地通過接頭序列連接。例如，連接適當的CH,結構域的納米體，例如一一同適當的輕鏈一起一一用來產生類似於常規Fab片段或F(ab，)2片段的抗體片段/結構，但是其中一個或者(F(ab')2片段的情形中)一個或兩個常規VH結構域己被本發明的納米體取代。此外，兩個納米體可以連接到CH3結構域上(任選地通過接頭)，以提供具有增加的體內半衰期的構建體。按照本發明的多肽的一個具體的實施方案，一個或多個本發明的納米體可以連接一個或多個抗體部分、片段或結構域，所述抗體部分、片段或結構域賦予本發明的多肽一種或多種效應器功能和/或可以賦予與一個或多個Fc受體結合的能力。例如，為了這一目的，並且不限於此，所述一個或多個其它胺基酸序列可以包括抗體的一個或多個CH2和/或CH3結構域，諸如來自重鏈抗體(如本文所述)，並且更優選地來自常規的人4-鏈抗體；和/和可以形成(部分)和Fc區，例如來自IgG，來自IgE或來自另一種人Ig。例如，WO94/04678描述包括駱駝VHH結構域或其人源化衍生物(g卩，納米體)的重鏈抗體，其中所述駱駝科CH2和/或CH3結構域已被人CH2和CH3結構域取代，以提供由2個重鏈組成的免疫球蛋白，每一重鏈包括納米體和人CH2和CH3結構域(但不是CH1結構域)，所述免疫球蛋白具有由所述CH2和CH3結構域提供的效應器功能，並且所述免疫球蛋白可以在沒有任何輕鏈存在時起作用。可以適當地連接到本發明的納米體上以提供效應器功能的其它胺基酸序列是熟練的技術人員所清楚的，並且可以基於理想的效應器功能進行選擇。例如，參考參見WO04/058820,WO99/42077和WO05/017148，以及Holliger和Hudson,同前所述.的綜述。與本發明相對應的納米體相比，本發明的納米體與Fc片段的偶聯也可以導致增加的半衰期。對於一些應用，使用賦予增加的半衰期而沒有任何生物學顯著的效應器功能的Fc片段和/或恆定結構域(S卩，CH2和/或CH3結構域)也可以是適宜的或者甚至是優選的。包括具有增加的體內半衰期的一個或多個納米體和一個或多個恆定結構域的其它適宜的構建體應該是熟練的技術人員所清楚的，並且例如，可以包括任選地通過接頭序列連接到CH3結構域上的2個納米體。通常，具有增加的半衰期的任何融合蛋白或衍生物優選地具有大於50kD的分子量，腎吸收的截斷值。所述其它胺基酸序列還可以形成信號序列或前導序列，當合成時其引導本發明的納米體或多肽從宿主細胞中分泌(例如，以提供本發明的多肽的前_(pre-)、原-(pro-)或前原-(prepro-)形式，這取決於用來表達本發明的多肽的宿主細胞)。所述其它胺基酸序列還可以形成這樣的序列或信號，即，所述序列或信號允許本發明的納米體或多肽導向和/或透過或進入特異性的器官、組織、細胞、或者細胞的部分或區室，和/或所述序列或信號允許本發明的納米體或多肽透過或穿過生物屏障諸如細胞膜、細胞層諸如上皮細胞層、腫瘤包括實體瘤、或血腦屏障。所述胺基酸序列的適當的實例應該是熟練的技術人員所清楚的，並且例如包括但不限於，上文提及的"Peptrans"載體，由Cardinal等所述的序列，以及本質上已知可以用來表達或生產本發明的納米體和多肽的胺基酸序列和抗體片段，即所謂的"胞內抗體"，例如在WO94/02610,WO95/22618,US-A畫7004940，WO03/014960,WO99/07414;WO05/01690;EP1512696;以及在Cattaneo,A.&Biocca，S.(1997)IntracellularAntibodies:DevelopmentandApplications(細胞內抗體發展禾口應用).LandesandSpringer-Verlag;禾卩在Kontermann，Methods(方法)34,(2004),163-170,以及本文所述的其它參考文獻中所述。對於一些應用，特別是對於意欲殺死表達本發明的納米體所針對的靶點的細胞(例如，在治療癌症時)，或者意欲減少或減緩所述細胞的生長和/或增殖的應用中，本發明的納米體還可以與(細胞)毒性蛋白或多肽連接。例如，可以與本發明的納米體連接以提供細胞毒性多肽的所述毒性蛋白和多肽的實例對於熟練的技術人員是清楚的，並且例如，可以在上文引用的現有技術和/或本文的進一步描述中找到。一個實例是所謂的ADEPTtm技木WO03/055527。按照一個非限制性的實施方案，在本發明的納米體或多肽的胺基酸序列中可以加入、插入和/或取代一個或多個胺基酸殘基，以提供用於PEG-基團附著的一個或多個特異性的胺基酸殘基。蛋白藥物的功效取決於其中和靶點的能力，並且取決於潛在藥物固有的藥物代謝動力學。由於腎臟通常濾出低於60,000道爾頓(Da)的分子，所以減少清除的努力集中在增加生物藥物的分子量上，其通過蛋白融合(Syed等，1997)，糖基化或使用聚乙二醇聚合物進行修飾，即，聚乙二醇化作用(Lee等，1999;Abuchowski等，1977;Nucci等，1991;Lecolley,等，ChemCommun(化學通訊)，2004;Tao等，JAmChemSoc(美國化學會雜誌)，2004;Mantovani等，2005)。這些方法成功地延長了生物藥物的體內暴露。備選地，半衰期可以使用另一種聚乙二醇化試劑POLYPEG進行延長，POLYPEG用於二價納米體TNF56或TNF55的綴合。POLYPEG是櫛狀聚合物，在甲基丙烯酸骨架上具有PEG齒。POLYPEGs可以在PEG鏈長度上不同，在甲基丙烯酸骨架上不同，以及在活性末端基團上不同，其決定將POLYPEG與所述納米體綴合的方法。與存在於所述納米體中的C-端半胱氨酸的位點-特異性綴合可以通過在POLYPEG中的活性馬來醯亞胺末端-基團而實現。本發明還包括在一個或多個胺基酸位置糖基化的任何本發明的納米體和/或本發明的多肽，糖基化通常取決於用來表達本發明的納米體或多肽的宿主(如下文進一步所述)。按照一個非限制性的實施方案，可以將一個或多個胺基酸殘基添加到、插入和/或取代在本發明的納米體或多肽的胺基酸序列中，以提供可以被所用的宿主生物體糖基化的一個或多個特異的胺基酸殘基和/或位點。通過一個優選的但非限制性的實例，例如，在本發明的納米體的CDR2內位置50上的N-殘基可以被Q、D或S殘基取代，以提供糖基化位點，例如，用於通過畢赤酵母(i^/z&)糖基化。按照另一個實施方案，本發明的多肽可以包括納米體的胺基酸序列，其在其氨基末端、在其羧基末端、或者在其氨基末端和其羧基末端兩端融合至少一個其它胺基酸序列。此外，所述其它胺基酸序列可以或不可以變化、改變或者另外影響所述納米體的(生物學)特性，並且可以或者不可以為所述納米體添加其它的官能性。例如，按照一個優選的但非限制性的實施方案，所述其它胺基酸序列可以包括至少一個其它納米體，以提供包括至少2個，諸如3個、4個或5個納米體的本發明的多肽，其中所述納米體可以任選地通過一個或多個接頭序列(如本文所定義)連接。包括兩個或多個納米體的本發明的多肽在本文還叫作"多價"多肽。例如，本發明的"二價"多肽包括2個納米體，任選地通過一個接頭序列連接，而本發明的"三價"多肽包括3個納米體，任選地通過兩個接頭序列連接；等等。在本發明的多價多肽中，所述兩個或多個納米體可以是相同的或不同的。例如，在本發明的多價多肽中的兩個或多個納米體-可以針對同一抗原，即，針對所述抗原的相同部分或表位或者針對所述抗原的兩個或多個不同部分或表位；和/或-可以針對不同的抗原；或其組合。因此，例如，本發明的二價多肽-可以包括2個相同的納米體；-可以包括針對抗原的第一部分或表位的第一納米體和針對所述抗原的同一部分或表位或者針對所述抗原的另一部分或表位的第二納米體；-或者可以包括針對第一抗原的第一納米體和針對與所述第一抗原不同的第二抗原的第二納米體；然而，例如，本發明的三價多肽-可以包括針對同一抗原的相同的或不同的部分或表位的3個相同的或不同的納米體；-可以包括針對第一抗原的相同的或不同的部分或表位的2個相同的或不同的納米體和針對與所述第一抗原不同的第二抗原的第三納米體；或-可以包括針對第一抗原的第一納米體，針對與所述第一抗原不同的第二抗原的第二納米體，和針對與所述第一和第二抗原不同的第三抗原的第三納米體。包含至少兩個納米體的本發明的多肽，其中至少一個納米體針對第一抗原，並且至少一個納米體針對不同於所述第一抗原的第二納米體，還叫作"多特異性"納米體。因此，"雙特異性"納米體是包括至少一個針對第一抗原的納米體和至少一個針對第二抗原的其它納米體的納米體，而"三特異性"納米體是這樣的納米體，即，其包括至少一個針對第一抗原的納米體，至少一個針對第二抗原的其它納米體，和至少一個針對第三抗原的其它納米體；等等。因此，在它們最簡單的形式中，本發明的雙特異性多肽是本發明的二價多肽(如本文所定義)，其包括針對第一抗原的第一納米體，和針對第二抗原的第二納米體，其中所述第一和第二納米體可以任選地通過一個接頭序列(如本文所定義)而連接；而最簡單的形式的本發明的三特異性多肽是本發明的三價多肽(如本文所定義)，其包括針對第一抗原的第一納米體，針對第二抗原的第二納米體，和針對第三抗原的第三納米體，其中所述第一、第二和第三納米體可以任選地通過一個或多個，並且特別是一個或多個特別是兩個接頭序列連接。然而，從上文所述應該清楚，本發明並不限於此，在這種意義上，本發明的多特異性多肽可以包括任何數目的針對兩個或多個不同抗原的納米體。關於包含一個或多個VHH結構域的多價和多特異性多肽及其製備，參考還參見Conrath等，Ao/.Ozem.f生激遊化學染,吉J,巻276,10.7346-7350，以及EP0822985。在本發明的多肽中，所述一個或多個納米體和所述一個或多個多肽可以直接彼此連接(例如在WO99/23221中所述)和/或可以通過一個或多個適宜的間隔或接頭或其任意組合而彼此連接。用於多價和多特異性多肽的適宜的間隔或接頭應該是熟練的技術人員所清楚的，並且通常可以是本領域用來連接胺基酸序列的任何接頭或間隔。優選地，所述接頭或間隔適合用於構建意欲藥用的蛋白或多肽。一些特別優選的間隔包括本領域中用於連接抗體片段或抗體結構域的間隔和接頭。這些包括上文所引用的綜合
背景技術：
中提及的接頭，以及例如在本領域中用於構建雙抗體或ScFv片段的接頭(在這一方面，然而，應該注意，儘管在雙抗體和在ScFv片段中，所用的接頭序列應該具有某種長度、某種程度的撓性以及允許相關的Vh和VL結構域靠近在一起形成完整的抗原-結合位點的其它特性，但是，由於每一納米體本身形成完整的抗原-結合位點，所以對於用於本發明的多肽的接頭的長度和撓性沒有特別的限制)。其它適宜的接頭通常包括有機化合物或聚合物，特別是適用於藥用蛋白的那些。例如，聚(乙二醇)部分已經用來連接抗體結構域，參見例如WO04/081026。下列情形也在本發明範圍內，所用接頭賦予本發明的多肽一種或多種其它有利特性或官能性，和/或提供用於形成衍生物和/或用於官能團附著的一個或多個位點(例如，如本文關於本發明的納米體的衍生物的描述)。例如，包含一個或多個帶電荷胺基酸殘基(參見上表A-3)的接頭可以提供提高的親水特性，而形成或包含小的表位或標記的接頭可以用於檢測、鑑定和/或純化目的。並且，基於本文的公開，熟練的技術人員應該能夠確定用於本發明的特異性多肽的最佳接頭，任選地在基於一些有限的常規實驗之後。最後，當兩個或多個接頭用於本發明的多肽時，這些接頭可以相同或不同。並且，基於本文的公開，熟練的技術人員應該能夠確定用於本發明的特異性多肽的最佳接頭，任選地在基於一些有限的常規實驗之後。用於多價和多特異性多肽的接頭應該是熟練的技術人員所清楚的，並且例如包括gly-ser接頭，例如(glyxsery)z類型，諸如例如(gly4ser)3或(gly3ser2)3，如在WO99/42077中所述；鉸鏈樣區域，諸如天然存在的重鏈抗體的鉸鏈區或類似的序列。關於其它適宜的接頭，參考還參見上文所引用的綜合
背景技術：
。一些特別優選的接頭在SEQIDNO，s68和69中給出。接頭還可以為所述多價或多特異性多肽提供一些官能性。例如，包含一個或多個帶電荷胺基酸殘基(參見上表l)的接頭可以提供增加的親水特性，而形成或包含小的表位或標記的接頭可以用於檢測、鑑定和/或純化目的。如本文所提及，在本發明的蛋白或多肽中，本文提及的抗-TNF納米體優選地以這樣的方式連接，S卩，當與TNF三聚體結合時，所述蛋白或多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或由這樣的受體交聯調控的信號傳導；和/或以這樣的方式連接，即，所述蛋白或多肽能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點。適當的接頭如本文所述。還如本文所提及，蛋白或多肽是否提供分子間結合或分子之外的結合可以通過大小排阻層析而評定(至少初步評定)。通過大小排阻層析，可以分析TNF-a和抗體的複合體，以確定在所述複合體中抗體和TNF-a分子的數目和比例。從這些數據可以推論出分子間或分子內結合是否發生，如同Santora和同事(Santora，L.C.，等，AnalBiochem(生物化學年刊).2001)關於建立單克隆抗體D2E7(Humira)與TNF-a在不同的抗體和耙點比例結合的化學計量學所做。從所述複合體的分子量推論出三個抗體分子與三個TNF三聚體複合，由此表明所述抗體以分子間模式結合。使用二價納米體進行相似的實驗，其中很短的接頭誘導大分子複合體的形成，所述大分子複合體通過分子間鍵合而獲得。然而，具有更長的接頭的相同的二價納米體構建體作為不連續的小複合體從凝膠過濾柱上洗脫下來，由此證明形成分子內鍵合。與生物檢測數據結合，其中所述包含納米體TNF1的更長的接頭具有最佳效果(在所述檢測中完全中和所用的TNF的量，艮卩，10pM)，可以推測出二價納米體的分子內結合有效地防止兩個細胞結合的受體的交聯以及締合的受體的活化。已知的單克隆抗體諸如Humim或Remicade不能形成這種分子內鍵合，在三聚體TNF分子上總是留下兩個受體結合位點，在某種程度上可以與細胞結合的受體相互作用，當在所述生物檢測中測定時其轉化成較少效力的中和。備選地，蛋白或多肽是否提供分子間結合或分子之外的結合，可以通過結晶學和/或分子模擬(或其它適宜的計算機晶片技術)而評估。基於單聚體野生型TNFl/TNF-a複合體的晶體結構，產生三聚體TNF30/TNF-a複合體的模型。從這一結構，模擬最終TNF30-接頭-ALB8-接頭-TNF30構建體。所述TNF30-接頭-ALB8-接頭-TNF30構建體從結合兩個TNF30分子的TNFa三聚體開始模擬。由於ALB8的結構未知，所以使用第三個TNF30分子代替，其沿N-和C-端之間的直線位於另兩個納米體之間。然後人工添加9個胺基酸的接頭。所述模型在圖62中顯示，清楚的是，所述9個胺基酸的接頭與ALB8一起提供充分的空間，足以跨越與TNPa結合的兩個TNF30結構域之間的大約66A。ALB8本身已經跨越40A，並且在充分延伸的構象中，每一接頭可以跨越另一27A。結果，ALB8具有非常好的運動撓性，並且預計其與白蛋白的結合不會對與TNFoc的結合妨礙太多。此外，可能地，所述接頭可以被縮短而不影響抗體親抗原性，尤其是在作為ALB8的C-端的接頭的情形中。由於第二個TNF30與不同的TNFa締合的可能性隨著接頭的長度而增加，所以，相對交聯的三聚體，這可以具有增加與相同的TNFa三聚體的結合的有利的作用。還如本文進一步所述，與相對應的單價納米體相比，針對理想的抗原並且針對至少一種血清蛋白諸如下文提及的血清蛋白，並且特別是針對人血清白蛋白的本發明的多特異性多肽，可以在血清中表現出增加的半衰期。如上文所提及，本文所述的方法特別適用於產生本發明的這種多價的多特異性的多肽。在本發明的多肽中，所述至少一個納米體還可以與常規VH結構域或者與VH結構域的天然的或合成的類似物連接，任選地通過接頭序列連接。在本發明的多肽中，所述至少一個納米體還可以與VL結構域或者與VL結構域的天然的或合成的類似物連接，任選地通過接頭序列，以提供這樣的本發明的多肽，即，所述本發明的多肽以與常規scFv片段類似的形式但是包含納米體而不是VH結構域。在本發明的多肽中，所述至少一個納米體還可以與一個或多個CH1、CH2禾卩/或CH3結構域連接，任選地通過接頭序列。例如，與適宜的CH1結構域連接的納米體，例如一一同適當的輕鏈一起一一用來產生類似於常規Fab片段或F(ab')2片段的抗體片段/結構，但是其中一個或者(F(ab')2片段的情形中)一個或兩個常規VH結構域已被納米體取代。這種片段還可以是異種特異性或雙特異性的，即，針對兩種或更多種抗原。與適宜的CH2和CH3結構域(例如來源於駱駝科的)連接的納米體，可以用來形成單特異性或雙特異性的重鏈抗體。最後，與適宜的CH1、CH2禾nCH3結構域(例如來源於人類的)連接的納米體，一—與適的輕鏈一起一一可以用來形成這樣的抗體，即，其與常規4-鏈抗體類似，但是其中一個或兩個常規VH結構域已被納米體取代。此外，除了所述一個或多個納米體之外，本發明的多肽還可以包含官能團、部分或殘基，例如治療活性物質，諸如下文提及的那些，和/或標記或標誌，諸如螢光標記、同位素等等，如下文進一步所述。本發明的納米體、本發明的多肽、以及編碼其的核酸，可以以本質上已知的方式製備，熟練的技術人員應該從本文的進一步描述中而清楚。關於製備所述納米體、多肽和核酸的一些優選的但非限制性的方法包括上文提及的和/或下文進一步所述的方法和技術。熟練的技術人員應該清楚，用於製備本發明的納米體和/或多肽的一種特別有用的方法通常包括步驟-在適宜的宿主細胞或宿主生物體(本文還叫作"^:發剪遊^^f")中或在另一種適宜的表達系統中，表達編碼所述本發明的納米體或多肽的核酸(本文還叫作"4:發剪遊^"麼")，任選地接著進行-分離和/或純化這樣獲得的本發明的納米體或多肽。特別地，這樣的方法可以包括步驟-在某種條件下培養和/或維持本發明的宿主，所述條件是這樣的，以致所述本發明的宿主表達和/或生產至少一種本發明的納米體和/或多肽；任選地接著進行-分離和/或純化這樣獲得的本發明的納米體或多肽。本發明的核酸可以是單鏈或雙鏈DNA或RNA的形式，並且優選地是雙鏈DNA形式。例如，本發明的核苷酸序列可以是基因組DNA、cDNA或合成的DNA(諸如具有特別適用於在要用的宿主細胞或宿主生物體中表達的密碼子應用的DNA)。按照本發明的一個實施方案，本發明的核酸是基本上分離的形式，如上文所定義。本發明的核酸還可以是這樣的形式，存在於和/或是載體的部分，諸如例如質粒、黏端質粒或YAC，其也可以是基本上分離的形式。本發明的核酸可以以本質上已知的方法製備或獲得，其基於關於本文給出的本發明的多肽的胺基酸序列的信息，和/或可以從適當的天然來源分離。為了提供類似物，例如，編碼天然存在的VHH結構域的核苷酸序列可以進行基因定點誘變，以提供編碼所述類似物的本發明的核酸。並且，熟練的技術人員應該清楚，為了製備本發明的核酸，一些核苷酸序列，諸如至少一種編碼納米體的核苷酸序列，以及例如編碼一種或多種接頭的核酸，還可以以適當的方法連接在一起。用於產生本發明的核酸的技術應該是熟練的技術人員所清楚的，並且例如可以包括但不限於，自動DNA合成；基因定點誘變；將兩個或多個天然存在的和/和合成的序列(或者其兩個或多個部分)結合，引入引起剪截表達產物表達的突變；引入一個或多個限制性位點(例如，以產生可以使用適宜的限制性酶容易地消化和/或連接的盒和/或區)，禾卩/或通過PCR反應的方法引入突變，所述PCR反應使用一個或多個"錯配"引物，使用例如天然存在的GPCR的序列作為模板。這些以及其它技術應該是熟練的技術人員所清楚的，並且參考也參見上文提及的標準手冊，諸如Sambrook等和Ausubel等，以及下文的實施例。本發明的核酸還可以是這樣的形式，存在於和/或是遺傳構建體的部分，這對於本領域的技術人員應該是清楚的。這樣的遺傳構建體通常包括至少一種本發明的核酸，其任選地與本質上已知的一個或多個遺傳構建體元件連接，諸如例如一個或多個適宜的調控元件(諸如適當的啟動子、增強子、終止子、等等)和下文提到的其它遺傳構建體元件。包括至少一種本發明的核酸的所述遺傳構建體在本文也叫作"術—發剪遊遺傳/夕建體"。本發明的遺傳構建體可以是DNA或RNA，並且優選地是雙鏈DNA。本發明的遺傳構建體還可以是適於轉化要用的宿主細胞或宿主生物體的形式，適於結合到要用的宿主細胞的基因組DNA中的形式，或者適於在要用的宿主生物體中獨立複製、維持和/或遺傳的形式。例如，本發明的遺傳構建體可以是載體形式，諸如例如質粒、黏端質粒、YAC、病毒載體或轉座子。特別地，所述載體可以是表達載體，即，可以提供體外和/或體內表達的載體(例如，在適宜的宿主細胞、宿主生物體和/或表達系統中)。在一個優選的但非限制性的實施方案中，本發明的遺傳構建體包括a)至少一種本發明的核酸；其可操作性地連接b)—個或多個調控元件，諸如啟動子和任選地適宜的終止子；C)並且任選地還有d)本質上已知的一個或多個遺傳構建體的其它元件；其中術語"調控元件"、"啟動子"、"終止子"和"可操作性地連接"具有它們在本領域中的通用意思(如下文進一步所述)；並且其中存在於遺傳構建體中的所述"其它元件"，例如，可以是3'-或5'-UTR序列、前導序列、選擇標記、表達標記/報導子基因、和/或可以促進或增加轉化或結合(效率)的元件。用於所述遺傳構建體的這些和其它適宜的元件對於熟練的技術人員應該是清楚的，並且例如可能取決於所用的構建體、要用的宿主細胞或宿主生物體的類型；本發明的目的核苷酸序列在其中表達的方式(例如，通過組成型的、瞬時的或可誘導的表達)；和/或要用的轉化技術。優選地，在本發明的遺傳構建體中，所述至少一種本發明的核酸和所述調控元件，以及任選地所述一個或多個其它元件，彼此"可操作性地連接"，這通常意指它們彼此是功能性關係。例如，如果所述啟動子能夠起始或者另外控制/調控編碼序列的轉錄和/或表達，那麼啟動子被視為與編碼序列"可操作性地連接"(其中所述編碼序列應該理解為"受控於"所述啟動子)。一般地，當兩個核苷酸序列可操作性地連接時，它們應該在相同的方向，並且通常還在同一閱讀框中。它們通常還應該基本上鄰接，儘管這也可以不是必需的。優選地，本發明的遺傳構建體的調控以及其它元件是這樣的，即，它們能夠在要用的宿主細胞或宿主生物體內提供它們需要的生物學功能。例如，在要用的宿主細胞或宿主生物體中，啟動子、增強子或終止子應該是"可操作的"，這意味著(例如)所述啟動子應該能夠起始或者另外控制/調控與其可操作性地連接(如本文所定義)的核苷酸序列一一例如，編碼序列一一的轉錄和/或表達。一些特別優選的啟動子包括但不限於，本質上已知用於在細菌細胞中表達的啟動子，諸如下文提及的那些和/或在實施例中所用的那些。選擇標記應該是這樣的，即，其允許一一即，在適當的選擇條件下一一已經(成功地)轉化本發明的核苷酸序列的宿主細胞和/或宿主生物體與沒有(成功地)轉化的宿主細胞和/或宿主生物體區分開來。所述標記的一些優選的但非限制性的實例是提供針對抗生素(諸如卡那黴素或氨苄青黴素)的抗性的基因，提供溫度抗性的基因，或者在培養基中不存在某些因子、化合物和/或(食物)成分時允許所述宿主細胞或宿主生物體維持的基因，所述培養基是未轉化的細胞或生物體生存所必需的。前導序列應該是這樣的，以致一一在要用的宿主細胞或宿主生物體中一一其允許理想的翻譯後修飾和/或以致其將轉錄的mRNA導向細胞的理想部分或細胞器。前導序列還可以允許從所述細胞分泌表達產物。同樣地，前導序列可以是在所述宿主細胞或宿主生物體中可操作的任何原-(pro-)、前-(pre-)或前原-(prepro-)序列。對於在細菌細胞中表達，前導序列可以不是必需的。表達標記或報導子基因應該是這樣的，即，一一在宿主細胞或宿主生物體中一一其允許檢測所述遺傳構建體(上存在的基因或核苷酸序列)的表達。表達標記任選地還可以允許表達產物的定位，例如，在細胞的特定部分或細胞器中和/或在多細胞生物體的特定細胞、組織、器官或部分中。所述報導子基因還可以表達為與本發明的胺基酸序列融合的蛋白。一些優選的但非限制性的實例包括螢光蛋白諸如GFP。適宜的啟動子、終止子和其它元件的一些優選的但非限制性的實例包括下述實施例中所用的那些。關於可以存在於/用於本發明的遺傳構建體的啟動子、選擇標記、前導序列、表達標記和其它元件的一些(其它)非限制性的實例一一諸如終止子、轉錄和/或翻譯增強子和/或結合因子一一參考參見上文提及的通用手冊，諸如Sambrook等和Ausubd等，以及WO95/07463,WO96/23810，WO95/07463,WO95/21191,WO97/11094,WO97/42320,WO98/06737，WO98/21355，US-A-6,207，410,US-A-5,693,492和EP1085089中給出的實例。其它實例對於熟練的技術人員應該是顯而易見的。參考也參見上文引用的綜合
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和下文引用的其它參考文獻。本發明的遺傳構建體通常可以通過將本發明的核苷酸序列與上文所述的一個或多個其它元件適當地連接而提供，例如應用上文提及的通用手冊諸如Sambrook等和Ausubel等中所述的技術。通常，本發明的遺傳構建體通過將本發明的核苷酸序列插入到本質上己知的適當的(表達)載體中而獲得。適當的表達載體的一些優選的但非限制性的實例是下述實施例中所用的那些，以及下文提及的那些。本發明的核酸和/或本發明的遺傳構建體可以用於轉化宿主細胞或宿主生物體。所述宿主或宿主細胞可以是任何適當的(真菌的、原核的或真核的)細胞或細胞系或者任何適當的真菌的、原核的或真核的生物體，例細菌菌株，其包括但不限於革蘭氏-陰性菌株，諸如大腸桿菌(Eyc/^n'c/z/flco/O菌株；變形菌屬(iVofew)菌株，例如奇異變形菌(/Vo/euswzV(a6//^)菌豐朱；假單胞菌屬(i^eM(iomowas)菌株,伊!j如螢光假單胞菌(i^eWowo"osy^orwce似)菌株；以及革蘭氏-陽性菌株諸如芽孢桿菌屬(^flc///^)菌株，例如枯草芽孢桿菌(Sa"7/wra&z7^)菌株或短芽孢桿菌(Sacz7/w6wvz:0菌株；鏈黴菌屬(及;to/^cay)菌株，例如淺青紫鏈黴菌(S/w/to附yces//v/d"ra)菌株；葡萄球菌屬(Stop/^/ococc"5)菌株，例如肉葡萄球菌(iSto—_y/ococcw>corwwws)菌株；以及乳球菌屬(丄actococcw)菌株，例如乳酸乳球菌(Zac/ococc船/ac&)菌株；-真菌細胞，其包括但不限於來自下列各項物種的細胞木黴屬(7>7'c/20^rmfl)，例如7Hc/20<iermawese/的物禾中；脈孢菌屬(jVewnw/om),例如粗糙脈孢菌(JVewms/oracraMa);糞殼屬(SoWan'a),例如大孢糞殼(Sorafan'a附acra^pora);麴黴菌(」j;e《z'〃w),例如黑麴黴(^jperg/〃^y"/ger)或醬油麴黴(^j;^g/〃w^/m);或其它絲狀真菌；-酵母細胞，其包括但不限於來自下列各項物種的細胞酵母屬(Sacc/zarom^yces),例如酉良酒旨母(iSacc/zaromj/cescerev/57'ae);裂殖酵母屬(Sc/n'zosacc/wramycesJ,例如粟酒裂殖酵母(Sc/7&aracc/2"row7cespow6e^;畢赤酵母屬(戶Zc/2/fl)，例如巴斯德畢赤酵母(J或Pz'c/n.aw^/z朋o"ca;漢遜酵母屬(T/廳纖/aJ，例如多形漢遜酵母(T/歸麵/a/o/，o—aJ;克魯維酵母屬(《/wyvmw;/c"人例如乳酸克魯維酵母(X/w;/veraw少cM/flcfe);y4rxw/a，例如爿rx:w/aacfem'm'vonms;Kjrrawz'a,例如K^row/a-兩棲類細胞或細胞系，諸如爪蟾卵母細胞(Xe"o;wooc^^);-來源於昆蟲的細胞或細胞系，諸如衍生於鱗翅目(lepidoptera)的細胞/細胞系，包括但不限於貪夜蛾(5^^oP&ra)SF9禾nSf21細胞，或者衍生於果蠅屬(Z)/ww/h7")的細胞/細胞系，諸如Schneider和Kc細胞；-植物或植物細胞，例如在菸草(tobacco)植物中；禾口/或-哺乳動物細胞或細胞系，例如來源於人、來源於哺乳動物的細胞或細胞系，包括但不限於CHO-細胞、BHK-細胞(例如BHK-21細胞)，以及人細胞或細胞系，諸如HeLa，COS(例如COS-7)和PER.C6細胞；以及本質上已知的用於表達和生產抗體及抗體片段(包括但不限於(單一)結構域抗體和ScFv片段)的所有其它宿主或宿主細胞，這對於熟練的技術人員應該是清楚的。參考還參見上文引用的綜合
背景技術：
，以及例如WO94/29457;WO96/34103;WO99/42077;Frenken等，(1998),同前所述;Riechm誦禾口Muyldermans,(1999)，同前所述；糧derLinden,(2000)，同前所述；Thomassen等，(2002)，同前所述；Joosten等，(2003)，同前所述;Joosten等，(2005),同前所述；以及本文所應用的其它參考文獻。本發明的納米體和多肽還可以被引入多細胞生物體的一個或多個細胞、組織或器官中並且在其中表達，例如用於預防和/或治療目的(例如，作為基因治療)。為了這一目的，可以將本發明的核苷酸序列以任何適當的方式引入到細胞或組織中，例如照此(例如使用脂質體)或者在它們插入到適當的基因治療載體(例如，衍生於反轉錄病毒諸如腺病毒，或者細小病毒諸如腺伴隨病毒)中之後。同樣對於熟練的技術人員應該是清楚的，這樣的基因治療可以在體內進行和/或在患者體內原位進行，其通過給患者或患者的特定細胞或特定組織或器官施用本發明的核酸或者編碼其的適當的基因治療載體而進行；或者適宜的細胞(通常取自要治療的患者的機體，諸如移植的淋巴細胞、骨髓吸出物或活組織切片)可以用本發明的核苷酸序列在體外進行治療，然後適當地(重新)引入回到所述患者的機體內。所有這些可以使用熟練的技術人員公知的基因治療載體、技術和遞送系統進行，例如，Culver,K.W.，"GeneTherapy(基因治療)"，1994，p.xii,MaryAnnLiebert，Inc.,Publishers,NewYork,N.Y).Giordano,NatureFMedicine2(1996),534-539;Schaper,Circ.Res(循環研究).79(1996)，911-919;Anderson,Science(科學)256(1992),808-813;Verma,Nature(自然)389(1994),239;Isner，Lancet348(1996)，370-374;Muhlhauser，Circ.Res(循環研究)77(1995),1077-1086;Onodera，Blood(血液學)91;(1998),30-36;Verma,GeneTher(基因治療).5(1998)，692-699;Nabel，Ann.N.Y.Acad.Sci.(紐約科學院年刊)811(1997)，289-292;Verzeletti,Hum.GeneTher.(人類基因治療)9(1998),2243-51;Wang，NatureMedicine2(自然醫學2)(1996)，714-716;WO94/29469;WO97/00957，US5,580,859;1US5,5895466;或Schaper,CurrentOpinioninBiotechnology7(現代生物技術觀點7)(1996)，635-640。例如，在本領域中已描述ScFv片段(Afanasieva等，GeneTher.(基因治療)，10,1850-1859(2003))和雙抗體(Blanco等，J.Immunol(免疫學雜誌)，171,1070-1077(2003))的原位表達。對於納米體在細胞中的表達，它們還可以作為所謂的或作為所謂的"胞內抗體"表達，例如在WO94/02610，WO95/22618和US-A-7004940;WO03/014960中所述；在Cattaneo，A.禾口Biocca,S.(1997)IntracellularAntibodies:.DevelopmentandApplications(細胞內抗體發展禾卩應用).LandesandSpringer-Verag;以及在Kontermann，Methods(方、法)34,(2004),163-170中所述。對於生產，例如，本發明的納米體和多肽還可以在轉基因哺乳動物的乳中產生，例如在兔、母牛、山羊或綿羊的乳中(對於將轉基因引入哺乳動物的通用技術參見例如US-A-6，741,957，US-A-6，304,489和US-A-6,849,992)，在植物中和植物的部分中產生，所述植物部分包括但不限於它們的葉、花、果、種子、根或turbers(例如在菸草、玉米、大豆或紫花苜蓿中)中，或者例如在蠶Bombixmori的蛹中。此外，本發明的納米體和多肽還可以在不含細胞的表達系統中表達和/或生產，並且這樣的系統的適當的實例應該是熟練的技術人員所清楚的。一些優選的但非限制性的實例包括在麥芽系統中的表達；在兔網織紅細胞裂解物中表達；或者在大腸桿菌(￡.Zubay系統中表達。如上文提及，應用納米體的一個優點在於，基於此的多肽可以通過在適宜的細菌系統中表達而製備，並且適宜的細菌表達系統、載體、宿主細胞、調控元件等對熟練的技術人員是清楚的，例如參考上文引用的參考文獻。然而，應該注意，本發明在其最廣泛意義上並不限於在細菌系統中表達。優選地，在本發明中，應用(體內或體外)表達系統，諸如細菌表達系統，其以適於藥用的形式提供本發明的多肽，並且所述表達系統也是熟練的技術人員所清楚的。也是熟練的技術人員所清楚的，適於藥用的本發明的多肽可以使用肽合成技術製備。對於工業規模的生產，用於納米體或包含納米體的蛋白治療物的(工業)生產的優選的異源宿主包括大腸桿菌、巴斯德畢赤酵母(乃'c/hV7pmtor^)、釀酒酵母cweWw'ae)的菌株，其適用於大規模表達/生產/發酵，並且特別適用於大規模藥物表達/生產/發酵。所述菌株的適當的實例是熟練的技術人員所清楚的。所述菌株以及生產/表達系統也可從公司諸如Biovitmm(Uppsala,Sweden)獲得。備選地，哺乳動物細胞系，特別是中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，可以用於大規模表達/生產/發酵，並且特別用於大規模藥物表達/生產/發酵。並且，所述表達/生產系統也可從上文提及的一些公司獲得。具體的表達系統的選擇部分取決於特定的翻譯後修飾的需要，更具體地是糖基化的需要。生產包含納米體的重組蛋白，對於所述蛋白糖基化是理想的或者必需的，將使得應用具有將所表達的蛋白糖基化的能力的哺乳動物表達宿主成為必要。在這一方面，熟練的技術人員應該清楚，獲得的糖基化模式(即，附著的殘基的種類、數量和位置)將取決於表達所用的細胞或細胞系。優選地，使用人細胞或細胞系(即，形成基本上具有人糖基化模式的蛋白)，或者使用另一種哺乳動物細胞系，其可以提供基本上和/或功能上與人糖基化作用相同的糖基化模式或者至少模擬人糖基化作用。一般地，原核宿主諸如大腸桿菌不具有將蛋白糖基化的能力，並且應用更低等真核細胞諸如酵母通常導致與人糖基化作用不同的糖基化模式。不過，應該理解，所有前述宿主細胞和表達系統可以用於本發明，這取決於要獲得的理想的納米體或蛋白。因此，按照本發明的一個非限制性實施方案，本發明的納米體或多肽被糖基化。按照本發明的另一個非限制性實施方案，本發明的納米體或多肽未被糖基化。按照本發明的一個優選的但非限制性的實施方案，本發明的納米體或多肽在細菌細胞中生產，特別是在適於大規模藥物生產的細菌細胞，諸如上文提及的菌株的細胞中生產。按照本發明另一個優選的但非限制性的實施方案，本發明的納米體或多肽在酵母細胞中生產，特別是在適於大規模藥物生產的酵母細胞，諸如上文提及的物種的細胞中生產。按照本發明另一個優選的但非限制性的實施方案，本發明的納米體或多肽在哺乳動物細胞中生產，特別是在人細胞或人細胞系的細胞中，並且更特別是在適於大規模藥物生產的人細胞或人細胞系的細胞中，諸如上文提及的細胞系中生產。當在宿主細胞中的表達用來生產本發明的納米體和蛋白時，本發明的納米體和蛋白可以在細胞內產生(例如，在細胞溶膠中，在外周胞質或在內含體中)，然後從宿主細胞分離，並且任選地進一步純化；或者可以在細胞外產生(例如，在培養所述宿主細胞的培養基中)，然後從培養基分離，並且任選地進一步純化。當使用真核宿主細胞時，由於這極大地促進進一步的分離以及獲得的納米體和蛋白的下遊處理，所以通常優選細胞外生產。除了少數種類的蛋白諸如毒素和溶血素之外，細菌細胞諸如上文提及的大腸桿菌的菌株一般不向細胞外分泌蛋白，並且在大腸桿菌內的分泌生產是指蛋白穿過內膜易位到外周胞質空間。外周胞質生產相對於細胞溶膠生產提供一些優點。例如，在通過特異的信號肽酶將分泌信號序列分裂之後，所分泌的產物的N-端胺基酸序列可以與天然基因產物相同。此外，在外周胞質中比在細胞質中似乎存在少得多的蛋白酶活性。另外，由於在外周胞質中更少的汙染蛋白，所以蛋白純化更簡單。另一個優點是，由於外周胞質提供比細胞質更加氧化性的環境，所以可以形成正確的二硫鍵。在大腸桿菌中過量表達的蛋白通常在不溶的聚集體，即所謂的內含體中發現。這些內含體可以位於細胞溶膠中或在外周胞質中；從這些內含體回收生物活性蛋白需要變性/重摺疊步驟。許多重組蛋白，包括治療性蛋白，是從內含體回收的。備選地，熟練的技術人員應該清楚，可以使用細菌的重組菌株，其已被遺傳修飾，以分泌理想的蛋白，並且特別是本發明的納米體或多肽。因此，按照本發明的一個非限制性實施方案，本發明的納米體或多肽是在細胞內產生並且從宿主細胞分離，並且特別是從細菌細胞或者從細菌細胞中的內含體中分離的納米體或多肽。按照本發明的另一個非限制性的實施方案，本發明的納米體或多肽是在細胞外產生並且從培養宿主細胞的培養基中分離的納米體或多肽。與這些宿主細胞一起使用的一些優選的但非限制性的啟動子包括，-用於在大腸桿菌中表達lac啟動子(及其衍生物，諸如lacUV5啟動子);阿拉伯糖啟動子；噬菌體入的左向-(PL)和右向(PR)啟動子；trp操縱子的啟動子；雜合lac/trp啟動子(tac和trc);T7-啟動子(更具體地是T7-噬菌體基因10的啟動子)以及其它T-噬菌體啟動子；Tnl0四環素抗性基因的啟動子；上述啟動子的工程變體，其包括一個或多個拷貝的外來調控操縱基因序列；-用於在釀酒酵母中表達組成型ADm(醇脫氫酶1),ENO(烯醇化酶)，CYC1(異-l細胞色素c),GAPDH(甘油醛-3-磷酸脫氫酶)；PGK1(磷酸甘油酸激酶)，PYK1(丙酮酸激酶)；調控型GAL1,10,7(半乳糖代謝酶)，ADH2(醇脫氫酶2),PH05(酸性磷酸酶),CUP1(銅金屬硫蛋白)；異源型CaMV(花椰菜花葉病毒35S啟動子)；-用於在畢赤酵母(Pichiapastoris)中表達:A0X1啟動子(醇氧化酶I);-用於在哺乳動物細胞中表達人巨細胞病毒(hCMV)即時早期增強子/啟動子；人巨細胞病毒(hCMV)即時早期啟動子變體，其包含兩個四環素操縱基因序列，以致所述啟動子可以受Tet抑制基因調控；單純皰疹病毒胸苷激酶(TK)啟動子；勞斯肉瘤病毒長末端重複(RSVLTR)增強子/啟動子；來自於人、黑猩猩、小鼠或大鼠的延伸因子la(hEF-la)啟動子；SV40早期啟動子；HIV-1長末端重複啟動子；|3-肌動蛋白啟動子；與這些宿主細胞一起使用的一些優選的但非限制性的載體包括-用於在哺乳動物細胞中表達的載體pMAMneo(Clontech),pcDNA3(Invitrogen)，pMClneo(Stratagene),pSG5(Stratagene),EBO-pSV2-neo(ATCC37593),pBPV-l(8-2)(ATCC37110),pdBPV-MMTneo(342-12)175(ATCC37224),pRSVgpt(ATCC37199)，pRSVneo(ATCC37198)，pSV2-dhfr(ATCC37146),pUCTag(ATCC37460)和1ZD35(ATCC37565),以及基於病毒的表達系統，諸如基於腺病毒的那些；-用於在細菌細胞中表達的載體pET載體(Novagen)禾卩pQE載體(Qiagen);-用於在酵母或其它真菌細胞中表達的載體pYES2(Irwitrogen)和畢赤表達載體(Invitrogen);-用於在昆蟲細胞中表達的載體pBlueBacII(Invitrogen)和其它杆狀病毒載體；-用於在植物或植物細胞中表達的載體例如基於花椰菜花葉病毒或菸草花葉病毒的載體，適宜的農桿菌(Agrobacterium)菌株，或基於Ti-質粒的載體。與這些宿主細胞一起使用的一些優選的但非限制性的分泌序列包括-用於細菌細胞諸如大腸桿菌Pe舊，Bla，OmpA,OmpC,OmpF，OmpT，StII,PhoA，PhoE，Ma正，Lpp,LamB等；TAT信號肽，溶血素C-端分泌信號；-用於酉孝母a-交酉己因子前原-序歹lJ(a-matingfactorprepro-sequence)，磷酸酶(phol)，轉化酶(Suc),等；-用於哺乳動物細胞在靶點蛋白是真核起源的情形中固有的信號(indigenoussignal);鼠IgK-鏈V-J2-C信號肽；等。用於轉化本發明的宿主或宿主細胞的適宜的技術對熟練的技術人員是清楚的，並且取決於要用的宿主細胞/宿主生物體和要用的遺傳構建體。參考也參見上文提及的手冊和專利申請。轉化後，可以進行檢測並且選擇己經成功轉化本發明的核苷酸序列/遺傳構建體的那些宿主細胞或宿主生物體的步驟。例如，這可以是基於存在於本發明的遺傳構建體中的選擇標記的選擇步驟，或者是包括檢測本發明的胺基酸序列的步驟，例如，使用特異的抗體進行。轉化的宿主細胞(其可以是穩定的細胞系的形式)或宿主生物體(其可以是穩定的突變系或株系的形式)形成本發明的另一方面。優選地，這些宿主細胞或宿主生物體是這樣的，以致它們表達或者(至少)能夠表達(例如，在適宜的條件下)本發明的胺基酸序列(並且在宿主生物體的情形中在它的至少一種細胞、部分、組織或器官中)。本發明還包括本發明的宿主細胞或宿主生物體的其它世代、後代和/或子代，例如，其可以通過細胞分裂或者通過有性或無性生殖獲得。為了生產/獲得本發明的胺基酸序列的表達，所述轉化的宿主細胞或轉化的宿主生物體通常可以在本發明(理想的)胺基酸序列得到表達/生產的條件下保藏、維持和/或培養。適宜的條件對熟練的技術人員是清楚的，並且通常取決於所用的宿主細胞/宿主生物體，以及取決於控制本發明的(相關)核苷酸序列表達的調控元件。此外，參考參見在上文關於本發明的遺傳構建體段落中提及的手冊和專利申請。一般地，適宜的條件可以包括使用適宜的培養基，存在適宜的食物來源和/或適宜的營養素，使用適當的溫度，並且任選地存在適當的誘導因子或化合物(例如，在本發明的核苷酸序列在可誘導啟動子的控制下的情形中)；所有這些可以由熟練的技術人員選擇。此外，在這樣的條件下，本發明的胺基酸序列可以以組成型方式、以瞬時方式、或者只在適當地誘導時表達。熟練的技術人員還應該清楚，本發明的胺基酸序列可以(首先)以不成熟的形式(如上文提及)產生，其然後可以進行翻譯後修飾，這取決於所用的宿主細胞/宿主生物體。並且，本發明的胺基酸序列可以被糖基化，這也取決於所用的宿主細胞/宿主生物體。然後，本發明的胺基酸序列可以從宿主細胞/宿主生物體和/或從培養所述宿主細胞或宿主生物體的培養基中分離，這使用本質上已知的蛋白分離和/或純化技術，諸如(製備)層析和/或電泳技術、差別沉澱技術、親和技術(例如，使用與本發明的胺基酸序列融合的特異性的、可分裂的胺基酸序列)和/或製備免疫學技術(即，使用針對要被分離的胺基酸序列的抗體)。通常，對於藥物應用，本發明的多肽可以配製成藥物製劑，其包括至少一種本發明的多肽和至少一種藥用載體、稀釋劑或賦形劑和/或佐劑，並且任選地一種或多種其它藥物活性多肽和/或化合物。通過非限制性實例的方式，這樣的製劑可以是適於下列各項的形式口服給藥，腸胃外給藥(諸如通過靜脈內、肌內或皮下注射或靜脈內輸注)，局部給藥，通過吸入、皮膚貼片、移植物、栓劑給藥，等等。所述適宜的給藥形式一一其可以是固體、半固體或液體，取決於給藥的方式一一以及製備其所用的方法和載體，對熟練的技術人員是清楚的，並且在下文中進一步描述。通常，本發明的納米體和多肽可以以本質上已知的任何適當的方法配製和施用，例如，關於其的參考文獻參見上文引用的綜合
背景技術：
(並且特別參見WO04/041862,WO04/041863,WO04/041865和WO04/041867)，以及參見標準手冊，諸如Remington'sPharmaceuticalSciences(Remington's藥物科學)，第18版，MackPublishingCompany,USA(1990)或Remington,theScienceandPracticeofPharmacy(Remington,製藥禾鬥學和實踐)，第21版，LippincottWilliamsandWilkins(2005)。例如，本發明的納米體和多肽可以本質上已知的用於常規抗體及抗體片段(包括ScFv's和雙抗體)和其它藥物活性蛋白的任何方法配製和施用。所述製劑以及製備其的方法對於熟練的技術人員是清楚的，並且例如，包括適於腸胃外給藥(例如靜脈內、腹膜內、皮下、肌內、腔內、動脈內或鞘內給藥)或適於局部(及透皮的或皮內)給藥的製劑。例如，用於腸胃外給藥的製劑可以是適於輸注或注射的無菌溶液、混懸液、分散液或乳劑。例如，用於所述製劑的適宜的載體或稀釋劑包括但不限於，無菌水以及水性緩衝液和溶液，諸如生理磷酸鹽緩衝液水、Ringer's溶液、葡萄糖溶液、和Hank's溶液;水油(wateroils);甘油；乙醇；二醇諸如丙二醇，或者以及礦物油，動物油和植物油例如花生油、豆油，及其適宜的混合物。通常優選水性溶液或混懸液。本發明的納米體和多肽還可以使用遞送的基因治療方法進行施用。參見，例如，美國專利No.5，399，346，其完全結合作為參考。使用遞送的基因治療方法，轉染編碼本發明的納米體或多肽的基因的初級細胞另外可以用組織特異性啟動子轉染靶點特異的器官、組織、移植物、腫瘤或細胞，並且另外可以使用用於亞細胞定位表達的信號和穩定序列進行轉染。因此，本發明的納米體和多肽可以全身施用，例如，口服地，與藥用賦形劑諸如惰性稀釋劑或可同化的食用載體結合。它們可以包封在硬或軟殼的白明膠膠囊中，可以壓縮成片劑，或者可以直接與患者日常飲食的食物結合。對於口服治療性施用，本發明的納米體和多肽可以與一種或多種賦形劑結合，並且以可吸收的片劑、口腔片劑、藥片、膠囊、酏劑、混懸劑、糖漿、糯米紙囊劑等形式使用。所述組合物和製劑應該包含至少0.1%的本發明的納米體或多肽。當然，所述組合物和製劑的百分數可以變化，並且可以便利地在所給單位劑型的約2-約60重量％之間。本發明的納米體或多肽在這樣的治療有效組合物中的量是這樣的，以致獲得有效的劑量水平。所述片劑、藥片、丸劑、膠囊等還可以包含下列各項粘合劑，諸如黃蓍膠、阿拉伯樹膠、玉米澱粉或白明膠；賦形劑，諸如磷酸二鈣；崩解劑，諸如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、褐藻酸等；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂；並且可以加入甜味劑，諸如蔗糖、果糖、乳糖或阿司帕坦，或者調味劑，諸如歐薄荷、冬青油、或櫻桃調味劑。當單位劑型是膠囊時，除上述類型的物質之外，它還可以包含液體載體，諸如植物油或聚乙二醇。各種其它物質可以作為塗層存在，或者另外修飾所述固體單位劑型的物理形式。例如，片劑、丸劑、或膠囊可以用白明膠、蠟、紫膠或糖等包被。糖槳或酏劑可以包含本發明的納米體和多肽，作為甜味劑的蔗糖或果糖，作為防腐劑的甲基和丙基對羥基苯甲酸酯類，染料和調味劑諸如櫻桃或橙味調味劑。當然，在製備任何單位劑型中所用的任何物質都應該是藥物可接受的，並且在所用的量上基本上無毒。另外，本發明的納米體和多肽可以結合在持續釋放的製劑和裝置中。用於口服給藥的製備物和製劑還可以被提供以腸衣，所述腸衣允許本發明的構建體抵抗胃環境，並且進入腸內。更一般地，用於口服給藥的製備物和製劑可以適當地配置成用於遞送到胃腸道的任何理想的部分。另外，適宜的栓劑可以用於遞送到胃腸道內。本發明的納米體和多肽還可以通過輸注或注射進行靜脈內或腹膜內施用，本發明的納米體和多肽或者它們的鹽的溶液可以在水中製備，任選地與無毒表面活性劑混合。分散劑還可以在甘油、液體聚乙二醇、三醋精及其混合物中以及在油中製備。在普通的保存和使用條件下，這些製劑包含防腐劑以防止微生物的生長。適於注射或輸注的藥物劑型可以包括無菌的水溶液或分散液或者包含活性成分的無菌粉劑，其適合即時製備無菌注射或輸注溶液或分散液，任選地包封在脂質體中。在所有情形中，在製備和保存條件下，最終劑型必須是無菌的、流動的和穩定的。液體載體或賦形劑可以是溶劑或液體分散介質，例如，其包括水、乙醇、多醇(例如，甘油、丙二醇、液體聚乙二醇等)、植物油、無毒甘油酯及其適當的混合物。可以保持適當的流動性，例如，通過形成脂質體，在分散劑的情形中通過保持需要的顆粒大小或者通過使用表面活性劑。防止微生物作用可以通過各種抗細菌和抗真菌試劑獲得，例如，對羥基苯甲酸酯類、氯代丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在許多情形中，優選地包括等滲劑，例如，糖、緩衝劑或氯化鈉。可注射組合物的延長吸收可以通過在所述組合物中使用延遲吸收劑例如單硬脂酸鎂和白明膠而獲得。無菌注射溶液通過將需要量的本發明的納米體和多肽結合在適當的溶劑中，當需要時，與上文列舉的其它成分一起結合，然後進行過濾除菌而製備。在用無菌粉劑製備無菌注射溶液的情形中，優選的製備方法是真空乾燥和冷凍乾燥技術，其產生活性成分加上在先前的無菌過濾溶液中存在的任何其它理想的成分的粉劑。對於局部給藥，本發明的納米體和多肽可以以純的形式應用，即，在它們是液體的情形中。然而，通常理想地將它們作為與皮膚病學可接受的載體結合的組合物或製劑施用到皮膚上，所述載體可以是固體或液體。有用的固體載體包括細碎分裂的固體，諸如滑石、粘土、微晶纖維素、矽石、礬土等。有用的液體載體包括水、羥烷類或二醇類或水-醇/二醇摻合劑，其中本發明的納米體和多肽可以以有效水平溶解或分散，任選地在無毒表面活性劑的幫助下。可以添加佐劑諸如香味劑和其它抗微生物劑，以將給定用途的特性最優化。得到的液體組合物可以用作吸收襯墊，用於浸漬的繃帶及其它敷料，或者使用泵型或氣溶膠噴霧器噴到感染區域。增稠劑諸如合成的聚合物、脂肪酸、脂肪酸鹽及酯、脂肪醇、改性纖維素或改性的礦物質還可以與液體載體一起使用，以形成易塗開的糊劑、凝膠、藥膏、皂劑等，用於直接塗覆到使用者的皮膚。可以用於將本發明的納米體和多肽遞送到皮膚的有用的皮膚病學組合物的實例是本領域已知的；例如，參見Jacquet等(U.S.Pat.No.4,608,392)，Geria(U.S.Pat.No.4,992,478),Smith等(U.S.Pat.No.4,559,157)和Wortzman(U.S.Pat.No.4,820,508)。本發明的納米體和多肽的有用劑量可以通過比較它們的體外活性和在動物模型中的體內活性而確定。將在小鼠和其它動物中的有效劑量外推至人的方法是本領域已知的；例如，參見U.S.Pat.No.4,938,949。通常，本發明的納米體和多肽在液體組合物諸如洗液中的濃度約0.1-25wt-%，優選地約0.5-10wt-%。在半固體或固體組合物諸如凝膠或粉劑中的濃度約0.1-5wt-%，優選地約0.5-2.5wt-o/o。需要用於治療的本發明的納米體和多肽的量不但隨著所選的特定的納米體或多肽而變化，而且隨著施用途徑、要治療的病況的性質以及患者的年齡和病況而變化，並且最終取決於隨從醫生或臨床醫生的判斷力。此外，本發明的納米體和多肽的劑量變化取決於耙點細胞、腫瘤、組織、移植物或器官。理想的劑量可以便利地以單一劑量或作為在適當的時間間隔施用的分割的劑量而存在，例如，作為每天2、3、4次或更多的亞劑量。所述亞劑量本身可以進一步分割，例如，分割成許多次不連續的寬鬆間隔的施用；諸如從吸入器多次吸入，或者通過使用多滴到眼睛中。施用方案可以包括長期的、日常的治療。"長期"意指至少2周，並且優選地幾個星期、月或年的持續時間。在這一劑量範圍的必要的修改可以由本領域的普通技術人員僅僅使用本文的教導所給的常規實驗而確定。參見Remington'sPharmaceuticalSciences(Remington's藥物禾鬥學)(Martin,E.W.，ed.4),MackPublishingCo.，Easton，PA。在任何併發症情形中，劑量還可以由個別醫生進行調整。在另一方面中，本發明涉及預防和/或治療本文提及的至少一種，-相關的疾病或紊亂的方法，所述方法包括，給需要所述方法的受試者施用藥物活性量的本發明的納米體、本發明的多肽、和/或包括其的藥物組合物。在本發明的內容中，術語"預防和/或治療"不但包括預防和/或治療疾病，而且通常包括預防所述疾病的發作，減緩或逆轉疾病進程，防止或減緩與所述疾病相關的一種或多種症狀的發作，減少和/或減輕與所述疾病相關的一種或多種症狀，減少所述疾病和/或與之相關的任何症狀的嚴重性和/或持續時間，和/或防止所述疾病的嚴重性和/或與之相關的任何症狀的進一步增加，防止、減少或逆轉由所述疾病以及通常對治療患者有益的任何藥理作用而引起的任何生理損害。待治療的受試者可以是任何溫血動物，但是特別是哺乳動物，並且更特別是人類。熟練的技術人員應該清楚，待治療的受試者特別是患有或者有危險患有本文提及的疾病和紊亂的人。本發明還涉及預防和/或治療至少一種可以通過給患者施用本發明的納米體或多肽而預防和/或治療的疾病或紊亂的方法，所述方法包括，給需要所述方法的受試者施用藥物活性量的本發明的納米體、本發明的多肽、和/或包括其的藥物組合物。更特別地，本發明涉及預防和/或治療選自由本文列出的疾病和紊亂組成的組的至少一種疾病或紊亂的方法，所述方法包括，給需要所述方法的受試者施用藥物活性量的本發明的納米體、本發明的多肽、和/或包括其的藥物組合物。在另一個實施方案中，本發明涉及免疫治療的方法，並且特別涉及被動免疫治療的方法，所述方法包括給患有或者有危險患有本文提及的疾病和紊亂的受試者施用藥物活性量的本發明的納米體、本發明的多肽、禾口/或包括其的藥物組合物。在上述方法中，本發明的納米體和/或本發明的多肽和/或包含其的組合物可以以任何適當的方式施用，這取決於要用的特定的藥物製劑或組合物。因此，例如，本發明的納米體和/或本發明的多肽和/或包含其的組合物可以口服、腹膜內(例如，靜脈內、皮下、肌內、或者通過避開胃腸道的任何其它施用途徑)、鼻內、透皮地、局部施用，通過栓劑、通過吸入方式施用，這也取決於要用的特定藥物製劑或組合物。臨床醫生能夠選擇適當的施用途徑和用於所述施用的適當的藥物製劑或組合物，這取決於要預防或治療的疾病或紊亂以及臨床醫生公知的其它因素。本發明的納米體和/或多肽和/或包含其的組合物按照治療方案進行施用，所述治療方案適於預防和/或治療要被預防或治療的疾病或紊亂。臨床醫生通常能夠確定適宜的治療方案，取決於下列因素，諸如要被預防或治療的疾病或紊亂，要被治療的疾病的嚴重性和/或其症狀的嚴重性，要用的本發明的特定的納米體或多肽，要用的特定的施用途徑和藥物製劑(farmaceuticalformulation)或組合物，患者的年齡、性別、體重、飲食、綜合病況，以及臨床醫生公知的類似因素。一般地，所述治療方案包括以一種或多種藥物有效量或劑量施用一種或多種本發明的納米體和/或多肽，或者包含其的一種或多種組合物。施用的具體量或劑量由臨床醫生確定，同樣基於上文引用的因素。通常，對於預防和/或治療本文提及的疾病和紊亂，並且取決於要治療的具體疾病或紊亂，要用的特定的本發明的納米體和多肽的功效，具體的施用途徑和使用的特定的藥物製劑或組合物，本發明的納米體和多肽一般以每天每kg體重1克-0.01微克的量施用，優選地每天每kg體重0.1克-0,l微克，諸如每天每kg體重約l,10，100或1000微克，作為單一的每日劑量連續施用(例如，通過輸注)或者在一天內作為多次分割的劑量施用。臨床醫生通常能夠確定適宜的日常劑量，這取決於本文提及的因素。還應該清楚，在具體的情形中，臨床醫生可以選擇偏離這些量，例如，基於上文引用的因素以及它的專業判斷。一般地，關於施用量的一些指導可從通過基本上相同的施用途徑通常施用的相當的針對相同靶點的常規抗體或抗體片段的量而獲得，但是要考慮親和性/抗體親抗原性、功效、生物分布、半衰期以及熟練的技術人員公知的類似因素的不同。通常，在上述方法中，將使用單一的本發明的納米體或多肽。然而，使用組合的兩種或多種本發明的納米體和/或多肽也在本發明範圍之內。本發明的納米體和多肽還可以與一種或多種其它藥物活性化合物或原理(principles)組合應用，艮口，作為組合治療方案，其可以或者不可以引起增強效應。並且，基於上文所引用的因素及其專業判斷，臨床醫生能夠選擇所述的其它化合物或原理，以及適宜的組合治療方案。特別地，本發明的納米體和多肽可以與其它藥物活性化合物或原理組合應用，所述其它藥物活性化合物或原理是或者能夠用於預防和/或治療本文所引用的疾病和紊亂，結果可以或不可以獲得增強效應。所述化合物和原理的實例，以及施用其的途徑、方法和藥物製劑或組合物是臨床醫生所清楚的。當兩種或多種物質或原理用作組合治療方案的一部分時，它們可以通過相同的施用途徑或者通過不同的施用途徑在基本上相同的時間或在不同時間(例如，基本上同時地、連續地、或者按照交互方案)施用。當所述物質或原理通過相同的施用途徑同時施用時，它們可以作為不同的藥物製劑或組合物或者組合藥物製劑或組合物的一部分進行施用，這是熟練的技術人員所清楚的。並且，當兩種或多種活性物質或原理作為組合治療方案的一部分使用時，每一物質或原理可以以相同的量施用，並且按照與當所述化合物或原理單獨使用時相同的方案施用，並且所述組合應用可以或不可以引起增強效應。然而，當所述兩種或多種活性物質或原理的組合應用引起增強效應時，還可以可能地減少要施用的一種、多種或全部物質或原理的量，同時仍舊獲得理想的治療作用。例如，這可以用於避免、限制或減少當以它們的常規用量使用時與一種或多種所述物質或原理的應用相關的任何不需要的副作用，同時仍舊獲得理想的藥物或治療效果。按照本發明所用的治療方案的效果可以以對於涉及的疾病或紊亂本質上已知的任何方式進行確定和/或遵循，這是臨床醫生所清楚的。在適當的並且基於病例/病例基礎的情形中，臨床醫生還應該能夠改變或改進特定的治療方案，以便獲得理想的治療效果，避免、限制或減少副作用，和/或實現一方面獲得理想的治療效果與另一方面避免、限制或減少不理想的副作用之間的適當的平衡。通常，應該遵循所述治療方案，直到獲得理想的治療效果和/或持續所述理想的治療效果需要保持的那麼久。並且，這可以由臨床醫生確定。因此，在另一方面，本發明涉及一種藥物組合物，其包含至少一種本發明的納米體，或至少一種本發明的多肽，以及至少一種適宜的載體(即，用於獸醫應用的載體)，和任選地一種或多種其它活性物質。本發明還涉及本發明的納米體和/或本發明的多肽在製備藥物組合物中的應用，特別是在製備用於預防和/或治療(包括但不限於減輕至少一種症狀)由TNF-a調控的和/或與TNF-a相關的(例如，與TNF-a的異常活性、TNF-a的異常水平、TNF-a的異常表達和/或針對TNF-a的異常的敏感性或反應、或與TNF-a相關的一種生物現象相關)疾病或紊亂，諸如上文提及的一種疾病或紊亂的藥物組合物中的應用。本發明還涉及用於預防和/或治療(包括但不限於減輕至少一種症狀)由TNF-a調控的和/或與TNF-a相關的(例如，與TNF-a的異常活性、TNF-a的異常水平、TNF-a的異常表達和/或針對TNF-oc的異常的敏感性或反應、或與TNF-a相關的一種生物現象相關)疾病或紊亂，諸如上文提及的一種疾病或紊亂的方法，所述方法包括給需要所示方法的受試者施用治療活性量的本發明的納米體、本發明的多肽、和/或上文所述的藥物組合物。本發明提供包括一種或多種針對腫瘤壞死因子a(TNF-a)的多肽。本發明還涉及它們在診斷和治療中的應用。這樣的抗體可以具有與人構架序列高度同源性的構架序列。僅包括針對腫瘤壞死因子a(TNF-a)的抗體或與其它藥物組合的組合物是理想的。據信，腫瘤壞死因子a(TNF-a)在多種紊亂中起重要作用，例如，在炎性紊亂諸如類風溼性關節炎、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎和多發性硬化病中。TNF-a和受體(CD120a,CD120b)都已經得到非常詳細地研究。生物活性形式的TNF-a是三聚體，並且由相鄰亞基形成的溝對於細胞因子-受體相互作用是重要的。已經研發了一些拮抗細胞因子作用的策略，並且目前正用於治療各種疾病狀況。對TNF-oc具有充分的特異性和選擇性的TNF-oc抑制因子可以是用於預防或治療其中TNF-ct參與作為病因劑的紊亂的有效的預防或治療藥物化合物。已經描述通過針對TNF-a的抗體的方式治療毒性休克(EP486526),腫瘤衰退，抑制細胞毒性(US6448380,US6451983，US6498237)，自體免疫疾病諸如RA和局限性迴腸炎(EP663836,US5672347，US5656272),移植物抗宿主反應(US5672347)，細菌性腦膜炎(EP585705)的方法。但是，目前還沒有可用的藥物對於自體免疫疾病的治療完全有效，並且大部分受到嚴重毒性的限制。另外，研發針對這樣的靶點序列具有充分的效果和選擇性的新化學個體(NCE)是極端困難和長久的過程。另一方面，由於它們對它們的靶點具有高度特異性和低內在毒性，所以基於抗體的治療作為藥物具有顯著的潛能。另外，當與新化學個體(NCE's)的研發相比，研發時間可以極大地減少。然而，常規抗體很難針對多聚體蛋白而產生，在所述多聚體蛋白中配體的受體-結合結構域包埋在溝中，如同TNF-a的情形。本發明中所述的衍生於駱駝科的重鏈抗體己知具有腔-結合傾向(WO97/49805;Lauwereys等，EMBOJ(胚胎學雜誌).17,5312,1998)。因此，這樣的重鏈抗體天生適於結合諸如TNF的配體的受體結合結構域。另外，已知所述抗體在長的時間段內穩定，因而增加它們的保存壽命(Perez等，Biochemistry(生物化學)，40,74,2001)。此外，與哺乳動物細胞培養發酵相比，這樣的重鏈抗體片段可以使用廉價的表達系統在發酵罐裡'en-masse，生產，所述廉價的表達系統諸如酵母或其它微生物(EP0698097)。使用來源於資源諸如小鼠、綿羊、山羊、兔等的抗體，及其人源化衍生物作為需要調節炎症的病況的治療由於一些原因是成問題的。傳統抗體在室溫下不穩定，並且必須冷凍製備和保存，這需要必要的冷凍實驗室設備、保存和轉運，這構成時間和費用。在發展中國家冷凍有時並不可行。此外，由於對於表達完整和活性抗體必需的哺乳動物細胞系統在時間和設備上需要高水平的支持，並且產量很低，所以所述抗體的製備或小規模生產費用高。此外，常規抗體的大的尺寸將限制組織滲透，例如，在發炎組織的位點。並且，傳統抗體具有依賴於pH值的結合活性，並且因此對於用於常規生理pH值範圍之外的環境不穩定，所述環境諸如例如在治療胃出血、胃手術中。此外，傳統抗體在低或高pH值不穩定，並且因此不適用於口服施用。然而，已經證明，駱駝科抗體抵抗苛刻條件，諸如極端pH值、變性試劑和高溫(Dumoulin等，ProteinScience(蛋白質科學)ll,500,2002)，因此使得它們適於通過口服施用遞送。此外，傳統抗體具有依賴於溫度的結合活性，並且因而不適合用於在生物活性-溫度範圍之外的溫度(例如37士20。C)操作的檢測或試劑盒。由於它們針對它們的靶點具有高度特異性並且低內在毒性，多肽治療劑以及特別是基於抗體的治療劑作為藥物具有顯著的潛力。然而，為了製備其用於人類治療，熟練的技術人員已知為治療有用靶點獲得的抗體需要額外的修飾，以避免當施用其時在人類個體中的不希望的免疫反應。所述修飾過程通常叫作"人源化"。熟練的技術人員已知，在除人之外的物種中獲得的抗體需要人源化，以使得所述抗體治療性地用於人類((1)CDR移植蛋白質設計實驗室(ProteinDesignLabs):US6180370，US5693761;;Celltech:460167，EP626390,US5859205;(2)鑲蓋術(Veneering):Xoma:US5869619，US5766886，US5821123)。存在對於生產避免基本上需要人源化的或者完全排除人源化的需要的抗體生產方法的需求。存在對於具有確定的構架區或胺基酸殘基並且可以施用給人類受試者而不需要基本上人源化或者完全不需要人源化的新抗體種類的需求。常規抗體的另一種重要的缺點在於它們是複合的、大分子，並且因此相對不穩定，並且它們對於蛋白酶的降解敏感。這意味著，由於它們在這些位點不抗低pH，在這些位點和在血液中的蛋白酶作用和/或由於它們大的尺寸，所以常規抗體藥物不能口服、舌下、局部、鼻、陰道、直腸或通過吸入施用。它們必須通過注射(靜脈內、皮下等)施用，以克服這些問題中的一些。通過注射施用需要專業訓練，以正確並且安全地使用皮下注射器或針頭。還需要無菌設備，治療性多肽的液體製劑，所述多肽無菌和穩定形式的小瓶包裝，以及受試者的進入針頭的適宜位點。此外，在接受注射之前以及在接受注射時，受試者通常經歷身體和心理壓力。因此，存在對於遞送避免需要注射的治療性多肽的方法的需要，所述方法不但節省成本/時間，而且其對於受試者還是更加便利和更加舒服的。由於它們具有針對它們的靶點的高度特異性和低內在毒性，基於納米體的治療劑具有作為藥物的顯著潛力。然而，進一步提高它們的內在和功能親和性可以導致對於患者的許多益處，諸如減少治療劑的劑量，加速治療，並且減少副作用。本發明的一個實施方案是抗-TNF-ot納米體，所述納米體優選地如上文進一步限定。本發明的一個實施方案是包括至少一個抗-TNF-a納米體的抗-TNF-oc多肽，所述多肽優選地如上文進一步限定。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽，其還包括至少一個針對血清白蛋白的納米體。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-oc多肽，其中所述血清蛋白是血清白蛋白、血清免疫球蛋白、甲狀腺素-結合蛋白、運鐵蛋白、或凝血因子I中的任何一種。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽，其還包括至少一種選自由抗-IFN-Y納米體、抗-TNF-a受體納米體和抗-IFN々受體納米體組成的組的納米體。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽，其中針對TNF-a的納米體數目是至少2個。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-oc多肽，其中至少一個納米體是人源化的駱駝科VHHs。本發明的另一個實施方案是一種組合物，其包括上文所述的抗-TNF-a多肽和至少一種選自由抗-IFN-y納米體、抗-TNF-a受體納米體和抗-IFN-y受體納米體組成的組的納米體，所述多肽和納米體同時、分開或順序地施用給受試者。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-cx多肽，或者上文所述的組合物，其中所述納米體是全長納米體的同源序列、功能片段或同源序列的功能片段。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽，或者上文所述的組合物，其中所述抗-TNF-(x多肽是全長抗-TNF-cc多肽的同源序列、功能片段或同源序列的功能片段。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽，或者上文所述的組合物，其中至少一個納米體是駱駝科VHH。本發明的另一個實施方案是編碼上文所述的抗-TNF-a多肽的核酸。本發明的另一個實施方案是鑑定調控上文所述的抗-TNF-a多肽與腫瘤壞死因子-a的結合的試劑的方法，所述方法包括步驟(a)在允許所述多肽和靶點之間的結合的條件下，在存在和不存在候選調節劑時，將上文所述的抗-TNF-a多肽與耙點一腫瘤壞死因子-oc接觸，和(b)測定步驟(a)的多肽和靶點之間的結合，其中相對於不存在所述候選調節劑時的結合，在存在所述候選調節劑時的結合中的減少，鑑定所述候選調節劑作為調控上文所述的抗-TNF-(x多肽和腫瘤壞死因子-a的結合的試劑。本發明的另一個實施方案是鑑定通過上文所述的抗-TOF-oc多肽與腫瘤壞死因子-a的結合而調控腫瘤壞死因子-a-調控的紊亂的試劑，其包括(a)在允許所述多肽和耙點之間的結合的條件下，在存在和不存在候選調節劑時，將上文所述的抗-TNF-ot多肽與靶點一腫瘤壞死因子-a接觸，和(b)測定步驟(a)的多肽和耙點之間的結合，其中相對於不存在所述候選調節劑時的結合，在存在所述候選調節劑時的結合中的減少，鑑定所述候選調節劑作為調控腫瘤壞死因子-a-調控的紊亂的試劑。本發明的另一個實施方案是鑑定通過上文所述的抗-TNF-a多肽與腫瘤壞死因子-a的結合而調控腫瘤壞死因子-oc與其受體的結合的試劑的方法，其包括.-(a)在允許所述多肽和耙點之間的結合的條件下，在存在和不存在候選調節劑時，將上文所述的抗-TNF-a多肽與靶點一腫瘤壞死因子-oc接觸，和(b)測定步驟(a)的多肽和靶點之間的結合，其中相對於不存在所述候選調節劑時的結合，在存在所述候選調節劑時的結合中的減少，鑑定所述候選調節劑作為調節腫瘤壞死因子-a與其受體的結合的試劑。本發明的另一個實施方案是用於篩選調控腫瘤壞死因子-a-調控的紊亂的試劑的試劑盒，所述試劑盒包括上文所述的抗-T^F-a多肽和腫瘤壞死因子-a。本發明的另一個實施方案是一種按照上述方法鑑定的調控上述抗-TNF-a多肽與腫瘤壞死因子-a的結合的未知試劑。本發明的另一個實施方案是一種按照上述方法鑑定的調控腫瘤壞死因子-a-調控的紊亂的未知試劑。本發明的另一個實施方案是一種上文所述的未知試劑，其中所述紊亂是炎症、類風溼性關節炎、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、炎性腸炎症候群和多發性硬化病中的一種或多種。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽，或上文所述的核酸，或上文所述的組合物，或上文所述用於治療和/或預防和/或減輕與炎性進程相關的紊亂的試劑。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-oc多肽，或上文所述的核酸，或上文所述的組合物，或上文所述的試劑在製備用於治療和/或預防和/或減輕與炎性進程相關的紊亂的藥物中的應用。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-oc多肽或上文所述的組合物，其用於治療和/或預防和/或減輕對能夠通過胃環境而沒有物質失活的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂。-本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽或上文所述的組合物用於製備治療、預防和/或減輕對能夠通過胃環境而沒有物質失活的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的藥物中的應用。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽或上文所述的組合物，其用於治療和/或預防和/或減輕對遞送至陰道和/或直腸道的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽或上文所述的組合物用於製備治療、預防和/或減輕對遞送至陰道和/或直腸道的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的藥物中的應用。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-oc多肽或上文所述的組合物，其用於治療和/或預防和/或減輕對遞送至鼻、上呼吸道和/或肺的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽或上文所述的組合物用於製備治療、預防和/或減輕對遞送至鼻、上呼吸道和/或肺的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的藥物中的應用。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽或上文所述的組合物，其用於治療和/或預防和/或減輕對遞送至腸黏膜的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂，其中所述紊亂增加腸黏膜的滲透性。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽或上文所述的組合物用於製備治療、預防和/或減輕對遞送至腸黏膜的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的藥物中的應用，其中所述紊亂增加腸黏膜的滲透性。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-oc多肽或上文所述的組合物，其用於治療和/或預防和/或減輕對能夠有效通過舌下組織的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽或上文所述的組合物用於製備治療、預防和/或減輕對能夠有效通過舌下組織的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的藥物中的應用。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽或上文所述的組合物，其用於治療和/或預防和/或減輕對能夠有效通過皮膚的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽或上文所述的組合物用於製備治療、預防和/或減輕對能夠有效通過皮膚的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的藥物中的應用。本發明的另一個實施方案是上文所述的方法，上文所述的試劑盒，上文所述的核酸或試劑，上文所述的核酸或試劑的應用，上文所述的組合物，上文所述的組合物的應用，上文所述的抗-TNF-oc多肽，上文所述的抗-TNF-a多肽的應用，其中所述紊亂是炎症、類風溼性關節炎、COPD、哮喘、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、炎性腸炎症候群、多發性硬化病、艾迪生病、自體免疫肝炎、自體免疫腮腺炎、I型糖尿病、附睪炎、腎小球腎炎、格雷夫斯病、急性熱病性多神經炎、橋本病、溶血性貧血、系統性紅斑狼瘡、男性不育、多發性硬化病、重症肌無力、天皰瘡、銀屑病、風溼熱、類風溼性關節炎、結節病、硬皮病、斯耶格倫症候群、脊椎關節病、甲狀腺炎和脈管炎中的任何一種。本發明的另一個實施方案是一種包括上述核酸或試劑、上述抗-TNF-a多肽或上述組合物，和適當的藥物賦形劑的組合物。本發明的另一個實施方案是一種診斷以腫瘤壞死因子-a的功能障礙為特徵的紊亂的方法，所述方法包括(a)將樣品與上述抗-TNF-a多肽接觸，(b)檢測所述多肽與所述樣品的結合，和(c)將在步驟(b)中檢測的結合與標準進行比較，其中相對於所述樣品在結合中的差異是以腫瘤壞死因子-a的功能障礙為特徵的紊亂的診斷。本發明的另一個實施方案是用於篩選上文引用的紊亂的試劑盒，其使用上文所述的方法。本發明的另一個實施方案是用於篩選上文引用的紊亂的試劑盒，其包括上文所述的分離的抗-TNF-a多肽。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽用於純化所述腫瘤壞死因子-a的應用。本發明的另一個實施方案是上文所述的抗-TNF-a多肽用於抑制腫瘤壞死因子-oc與一個或多個腫瘤壞死因子-a受體之間的相互作用的應用。本發明的另一個實施方案是用於生產上文所述的抗-TNF-a多肽的方法，所述方法包括步驟(a)獲得編碼針對腫瘤壞死因子-oc的駱駝科VHH的雙鏈DNA，(b)克隆並表達步驟(b)中選擇的DNA。本發明的另一個實施方案是生產上文所述的抗-TNF-oc多肽的方法，其包括(a)在允許所述多肽表達的條件下，培養包含能夠編碼上述抗-TNF-ot多肽的核酸的宿主細胞，和(b)從所述培養物回收所產生的多肽。本發明的另一個實施方案是上文所述的方法，其中所述宿主細胞是細菌或酵母。本發明的另一個實施方案是用於篩選炎症、類風溼性關節炎、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、炎性腸炎症候群或多發性硬化病中的任一種的試劑盒，其包括上述抗-TNF-a多肽。VHHs，按照本發明，並且按照熟練的技術人員已知的，是衍生於天然沒有輕鏈的免疫球蛋白的重鏈可變結構域，諸如來源於駱駝科的那些，如在WO94/04678中所述(並且下文叫作VHH結構域或納米體)。Vhh分子比IgG分子小約lOX。它們是單一多肽，並且非常穩定，抗極端pH值和溫度條件。並且，它們抗蛋白酶的作用，對於常規抗體沒有這種情形。此外，vhhs的體外表達產生高產量、正確摺疊的功能vhhs。另外，在駱駝中產生的抗體識別除了通過應用抗體文庫或通過除駱駝之外的哺乳動物免疫而產生的抗體所識別的那些以外的表位(WO9749805)。同樣地，抗-TNF-aVHH's可以比常規抗體更有效地與TNF-a相互作用，由此更有效地阻滯其與TNF-a受體的相互作用。TNF-a還是能夠激發免疫應答的TNF-a片段。TNF-a還是能夠結合針對全長TNF-a的納米體的TNF-a片段。針對TNF-a的納米體意指能夠以好於10—6M的親和力結合TNF-a的納米體。本發明的一個實施方案是一種抗-TNF多肽，其中所述納米體包括針對TNF-a的駱駝科VHH。一個或多個針對TNF-a的抗-TNF多肽的納米體可以是相同的序列。備選地，它們可以完全不具有相同的序列。在本發明範圍之內，抗-TNF多肽包括抗-TNF-oc-納米體，其完全不共有相同的序列，但是其針對相同的靶點，一個或多個它的抗原。本發明還涉及抗-TNF-a多肽，其中所述納米體是針對TNF-a的VHH，其中所述VHH屬於具有人樣序列的種類。所述種類特徵在於，VhhS在位置45攜帶來自由甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、天冬醯胺或穀氨醯胺組成的組的胺基酸，諸如例如L45，和在位置103的色氨酸，按照Kabat編號方式。在WO03035694中描述另一種人樣種類的駱鴕科納米體，並且其包含典型地在人源或來自其它物種的常規抗體中發現的疏水性FR2殘基，但是通過取代存在於來自雙鏈抗體的VH中的保守色氨酸殘基的位置103的帶電荷的精氨酸殘基而補償這一親水性損失。同樣地，屬於這兩個種類的肽表現出針對人VH構架區的高胺基酸序列同源性，並且所述肽可以直接施用給人，沒有來自於其的不利的免疫反應的預料，並且沒有進一步人源化的負擔。本發明還涉及能夠編碼所述多肽的核酸。本發明所用的任何VHHs可以是傳統種類或人樣駱駝科抗體種類。所述抗體可以針對完整的TNF-a或其片段，或其同源序列的片段。這些多肽包括全長駱駝科抗體，即FC和VHH結構域，具有人FC結構域或VHH，S本身或衍生片段的重鏈駱駝科抗體的嵌合譯本。抗-血清白蛋白Vhh，s可以比已知為載體蛋白的常規抗體更有效的方式與血清白蛋白相互作用。作為載體蛋白，血清白蛋白的一些表位可以通過結合的蛋白、肽以及小化學化合物而不可接近。由於Vhh，s已知結合到'不同尋常的'或非常規的表位諸如腔中(WO97/49805)，所以可增加所述Vm's與循環白蛋白的親和性。本發明還涉及這樣的發現，即，本文所述的還包括一個或多個針對受試者的一種或多種血清蛋白的納米體的抗-TNF多肽，與當沒有部分所述構建體時的抗-TNF-a納米體的半衰期相比較，令人吃驚地在所述受試者的循環中具有顯著延長的半衰期。此外，發現所述多肽表現出同樣有利的納米體特性，諸如在小鼠中保持完整的高穩定性、極端pH抗性、高溫穩定性和高靶點親和性。血清蛋白可以是在受試者血清中找到的任何適宜的蛋白。在本發明的一方面中，所述血清蛋白是血清白蛋白、血清免疫球蛋白、甲狀腺素-結合蛋白、運鐵蛋白、或凝血因子I。取決於目的應用，諸如對於有效的治療和/或靶點抗原的區分(compartimentalisation)所需要的半衰期，V朋-伴侶可以針對上述血清蛋白中的一種。按照本發明的一個具體的但非限制性的方面，針對人血清白蛋白的納米體由4個構架區(分別為FR1-FR4)禾n3個互補決定區(分別為CDR1-CDR3)組成，其中iv)CDR1是選自由下列各項組成的組的胺基酸序列和/或選自由與上述胺基酸序列中的一種具有2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入；並且其中v)CDR2是選自由下列各項組成的組的胺基酸序列[SEQIDNO:36][SEQIDNO:37][SEQIDNO:38][SEQIDNO:39][SEQIDNO:40][SEQIDNO:41][SEQIDNO:42][SEQIDNO:43]AISADSSTKNYADSVKG[SEQIDNO:44]AISADSSDKRYADSVKG[SEQIDNO:45]RISTGGGYSYYADSVKG[SEQIDNO:46]或者選自由與上述胺基酸序列之一有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組；其中(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；和/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入；和/或選自由與上述胺基酸序列之一具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；和/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入；並且其中vi)CDR3是選自由下述組成的組的胺基酸序列DREAQVDTLDFDY[SEQIDNO:47]或者選自由與上述胺基酸序列之一有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組；其中(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；和/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入；和/或選自由與上述胺基酸序列之一具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入；或者選自由下列各項組成的組和/或選自由與上述胺基酸序列之一具有3個、2個或只有1個"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；和/(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。在另一方面中，本發明涉及針對人血清白蛋白的納米體，其由4個構架區(分別為FR1-FR4)和3個互補決定區(分另ij為CDR1-CDR3)組成，其選自由分別具有下述CDR1，CDR2和CDR3組合之一的結構域抗體和/或單一結構域抗體組成的組CDR1:SFGMS;CDR2:SISGSGSDTLYADSVKG;CDR3:GGSLSR;CDR1:LNLMG;CDR2:TITVGDSTNYADSVKG;CDR3:RRTWHSEL;CDR1:INLLG;CDR2:TTTVGDSTSYADSVKG;CDR3:RRTWHSEL;CDR1:SFGMS;CDR2:SINGRGDDTRYADSVKG;CDR3:GRSVSRS;CDR1:SFGMS;CDR2:AISADSSDKRYADSVKG;CDR3:GRGSP;CDR1:SFGMS;CDR2:AISADSSDKRYADSVKG;CDR3:GRGSP;CDR1:NYWMY;CDR2:RISTGGGYSYYADSVKG;CDR3:DREAQVDinLDFDYc在包括上文提及的CDR's組合的本發明的納米體中，每一CDR可以被選自由與所提及的CDR，s有至少80X、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性(如本文所定義)的氨基GGSLSRRRTWHSEL[SEQIDNO:[SEQIDNO:[SEQIDNO:SEQIDNO:48]49]50]51]196酸序列組成的組的CDR所替代；其中(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；和/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入；和/或選自由與上述胺基酸序列之一所提及的CDR(s)具有3個、2個或只有1個(如前段所示)"胺基酸差異"(如本文所定義)的胺基酸序列組成的組，其中-(1)任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代(如本文所定義)；禾口/或(2)與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。然而，在包括上文提及的CDR，s組合的本發明的納米體中，特別優選包括一個或多個上文列出的CDR，s的納米體；更特別優選包括兩個或多個上文列出的CDR，s的納米體；並且最特別優選包括3個上文列出的CDR's的納米體。在這些針對人血清白蛋白的納米體中，構架區FR1-FR4優選地按照上文對於本發明的納米體的定義。特別優選的針對人血清白蛋白的納米體選自由SEQIDNO，s:61-67,SEQIDNO，s87-89和SEQIDNO，s100-104組成的組。在這些納米體中存在的CDR's和構架區的優選的組合還在表II中列出。表II:針對人血清白蛋白的納米體中構架序列和CDR's的優選組合。tableseeoriginaldocumentpage198本發明的另一方面是本文公開的抗-TNF-oc多肽，其還包括選自由下列各項組成的組的至少一種多肽抗-IFN-y多肽、抗-TNF-a受體多肽和抗-IFN-Y受體多肽。按照本發明的一個方面，納米體針對TNF-a受體。所述納米體可以是駱駝科VHH。按照本發明的一個方面，納米體針對IFN-Y受體。所述納米體可以是駱駝科V朋。本發明的另一方面是治療本文所引用的自體免疫疾病或病況的方法，其包括給患者施用有效量的抗-TNF-a多肽，所述抗-TNF-oc多肽還包括選自由下列各項組成的組的至少一種多肽抗-IFN-y多肽、抗-TNF-a受體多肽和抗-IFN-Y受體多肽，所述多肽按照下文所述彼此連接。作為炎症治療化合物，所述多-特異性構建體可以具有比單-特異性構建體提高的功效。本發明的一個方面是一種組合物，其包括本文公開的抗-TNF-oc多肽和選自由下列各項組成的組的至少一種多肽抗-IFN-y多肽、抗-TNF-oc受體多肽和抗-IFN-Y受體多肽，用於同時、分開或順序地施用給受試者。本發明的一個方面是治療自體免疫疾病的方法，所述方法包括同時、分開或順序地給個體施用有效量的抗-TNF-a多肽和選自由下列各項組成的組的至少一種多肽抗-IFN-Y多肽、抗-TNF-a受體多肽和抗-IFN-Y受體多肽。本發明的另一個方面是一種試劑盒，其包含抗-TNF-a多肽和選自由下列各項組成的組的至少一種多肽抗-IFN-y多肽、抗-TNF-a受體多肽和抗-IFN-Y受體多肽，用於同時、分開或順序地施用給受試者。所述試劑盒可以按照本發明進行使用是本發明的一個方面。所述試劑盒可以用來治療本文所引用的疾病是本發明的一個方面。同時施用意指將所述多肽同時施用給受試者。例如，作為多肽的混合物或包括所述多肽的組合物。實例包括但不限於，靜脈內施用的溶液，片劑，液體，局部乳膏等，其中每一製備物包括目的多肽。分開施用意指將所述多肽同時或基本上同時施用給受試者。多肽作為分開的、未混合的製劑存在於試劑盒中。例如，不同的多肽可以作為個體片劑存在於試劑盒中。所述片劑可以通過同時吞咽兩片片劑或者一片片劑直接跟著另一片而施用給受試者。順序施用意指將所述多肽順序地施用給受試者。多肽作為分開的、未混合的製劑存在於試劑盒中。在給藥之間存在時間間隔。例如，一種多肽可以在另一種成分後達336，312,288,264,240,216,192,168,144,120,96,72,48,24,20,16，12,8,4,2,1或0.5小時施用。在順序施用中，在另一種多肽施用之前和/或之後，一種多肽可以施用一次，或者任何次數，並且以不同劑量施用。順序施用可以與同時或順序施用結合。下文所述的抗-TNF-ot多肽的醫藥用途，還適用於包含本文公開的抗-TNF-a多肽和選自由抗-IFN-Y多肽、抗-TNF-a受體多肽和抗-IFN-丫受體多肽組成的組的至少一種多肽的組合物，用於按照上文所公開同時、分開或順序地施用給受試者。按照本發明的一個方面，抗-IFN-Y多肽，抗-TNF-a，一種針對IFN-y的納米體。所述納米體可以是駱駝科VHH。按照本發明的一個方面，抗-TNF-a，針對TNF-a受體的納米體。所述納米體可以是駱駝科VHH。按照本發明的一個方面，抗-IFN-y受體多肽，抗-TNF-a，一種針對IFN-y受體的納米體。所述納米體可以是駱駝科VHH。本發明的另一個實施方案是本文公開的抗-TNF-a多肽，其中針對TNF-a的納米體的數目為2個或多個。與它們的單價負體相比，所述多價抗-TNF-oc多肽具有對於靶點的特別高的功能親和性的優點，表現出比預計的高得多的抑制性特性。多價抗-TNF-a多肽具有比單價親本抗-TNF-oc多肽高出幾個數量級的功能親和性。本發明人發現這些多價多肽的功能親和性比在現有技術中關於二價和多價抗體所報導的那些高得多。令人吃驚地，直接或者通過短接頭序列彼此連接的本發明的抗-TNF-a多肽表現出理論上預計地針對多價常規4-鏈抗體的高功能親和性。本發明人發現所述極大增加的功能活性可以優選地使用由多結構域和多價蛋白組成的抗原進行檢測，在直接結合檢測中或在功能性檢測中，例如細胞毒性檢測。所述納米體可以使用本領域內已知的方法或任何其它方法而連接形成本文公開的包含多於一種納米體的任何多肽。例如，它們可以通過將胺基酸殘基與有機衍生劑反應而通過化學交聯進行融合，諸如Blattler等,Biochemistry(生物化學)24,1517-1524;EP294703所述。備選地，所述納米體可以在DNA水平上遺傳融合，即形成編碼完整的多肽構建體的多聚核苷酸構建體，所述完整的多肽構建體包括一個或多個抗-耙點納米體和一個或多個抗-血清蛋白納米體。用於生產二價或多價VHH多肽構建體的方法在PCT專利申請WO96/34103中公開。一種連接多個納米體的方法是通過遺傳途徑，直接地或通過肽接頭而連接納米體編碼序列。例如，第一納米體的C-端可以連接到下一個納米體的N-末端。這種連接模式可以延長，以連接其它的納米體，構建和產生三-、四-等功能性構建體。按照本發明的一個方面，所述納米體直接彼此連接，沒有使用接頭。與連接大的常規抗體相反，其中接頭序列需要在兩個亞基中保持結合活性，本發明的多肽可以直接連接，由此避免接頭序列的潛在問題，諸如當施用給人受試者時的抗原性，導致亞基解離的接頭序列的不穩定性。按照本發明的另一個方面，所述納米體通過肽接頭序列彼此連接。所述接頭序列可以是天然存在的序列或非天然存在的序列。預計所述接頭序列在施用抗-TNF-a多肽的受試者中是非-免疫原性的。所述接頭序列可以提供針對多價抗-TNF-oc多肽的充分的撓性，同時抗蛋白水解降解。接頭序列的一個非限制性實例是可以衍生於WO96/34103中所述的VHHs鉸鏈區的一種。按照本發明的另一個方面，包括多於2個納米體的多價納米體可以直接地或者通過接頭序列彼此連接。這樣的構建體很難用常規抗體產生，並且由於大亞基的空間位阻，與單價構建體相比，功能性將失去或者極大地減少，而不是如用本發明的VHH，s可見的相當大地增加。本文公開的多肽構建體可以由熟練的技術人員按照本領域已知的方法或任何其它方法製備。例如，VHHs可以使用本領域已知的方法獲得，諸如通過免疫駱駝並且獲得來自於其的雜交瘤，或者通過使用本領域內已知的分子生物學技術克隆納米體文庫，並且隨後通過使用噬菌體展示而進行選擇。按照本發明的一個方面，抗-TNF-a多肽可以是全長抗-TNF-oc多肽的同源序列。按照本發明的另一個方面，抗-TNF-a多肽可以是全長抗-TNF-a多肽的功能片段。按照本發明的另一個方面，抗-TNF-oc多肽可以是全長抗-TNF-oc多肽的同源序列。按照本發明的另一個方面，抗-TNF-a多肽可以是全長抗-TNF-a多肽的同源序列的功能片段。按照本發明的一個方面，抗-TNF-a多肽可以包含抗-TNF-a多肽的序列。按照本發明的一個方面，用於形成抗-TNF-a多肽的納米體可以是完整納米體(例如Vhh)或其同源序列。按照本發明的另一個方面，用於形成多肽構建體的納米體可以是完整納米體的功能性片段。按照本發明的另一個方面，用於形成多肽構建體的納米體可以是完整納米體的同源序列。按照本發明的另一個方面，用於形成多肽構建體的納米體可以是完整納米體的同源序列的功能片段。當用於本文時，本發明的同源序列可以包括加入、刪除或取代一個或多個胺基酸，其基本上不改變本發明的多肽的功能特徵。胺基酸刪除或取代的數目優選地達到1,2,3,4,5,6,7,8,9,10，11，12,13，14，15,16，17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31，32,33,34，35,36，37,38,39,40,41,42，43,44,45,46,47,48,49,50，51,52,53,54，55,56,57,58,59,60,61,62，63,64,65,66,67，68,69或70個胺基酸。按照本發明的同源序列可以是通過加入、刪除或取代胺基酸而修飾的多肽，與未修飾的多肽相比較，所述修飾基本上不改變功能性特徵。按照本發明的同源序列可以是通過加入、刪除或取代胺基酸而修飾的多肽，與未修飾的多肽相比較，所述修飾基本上不改變功能性特徵。按照本發明的同源序列可以是存在於其它駱駝科物種中的序列，諸如例如，駱駝、單峰駱駝、美洲駝、羊駝、慄色羊駝等。在同源序列指示序列相同性的情形中，它意指與親本序列存在高序列相同性(大於70%，75%，80%,85%,90%，95%或98%的序列相同性)的某種序列，並且優選地特徵在於親本序列的相似特性，即，親和性、使用已知方法計算的所述相同性。備選地，同源序列還可以是允許在親本序列的許多位置進行取代而獲得的任何胺基酸序列，其按照下述規則Ser被Ser，Thr,Gly,和Asn取代；Arg被Arg，His,Gin,Lys，和Glu中的一種取代；Leu被Leu，lie,Phe,Tyr，Met，和Val中的一種取代；Pro被Pro,Gly,Ala，和Thr中的一種取代；Thr被Thr，Pro,Ser，Ala,Gly,His,和Gin中的一種取代；Ala被Ala,Gly，Thr,和Pro中的一種取代；Val被Val,Met,Tyr，Phe，lie,和Leu中的一種取代；Gly被Gly,Ala,Thr,Pro,禾QSer中的一種取代；lie被Ile，Met,Tyr,Phe，Val，和Leu中的一種取代；Phe被Phe,Trp，Met,Tyr,Ile，Val，禾卩Leu中的一種取代；Tyr被Tyr，Trp,Met,Phe,Ile,Val，禾卩Leu中的一種取代；His被His,Glu，Lys，Gin,Thr，和Arg中的一種取代；Gin被Gin,Glu,Lys，Asn，His,Thr,和Arg中的一種取代；Asn被Asn,Glu,Asp，Gin,禾QSer中的一種取代；Lys被Lys,Glu,Gln，His,和Arg中的一種取代；Asp被Asp,Glu,和Asn中的一種取代；Glu被Glu,Asp,Lys，Asn,Gln，His,和Arg中的一種取代；Met被Met，Phe,lie,Val,Leu，和Tyr中的一種取代。按照本發明的同源核苷酸序列可以是指，在嚴格雜交條件下，多於50,100,200，300，400，500,600,800或1000個能夠與編碼親本序列的核苷酸序列的反向-互補序列雜交的核苷酸的核苷酸序列(諸如Sambrook等,MolecularCloning,LaboratoryManuel(分子克隆，實驗室手冊)，ColdSpring,HarborLaboratorypress(冷泉港實驗室出版)，NewYork(紐約)所述的那些)。當用於本文時，功能性片段是指大小足夠以致目的相互作用保持在1x10"M或更好的親和性的納米體的序列。備選地，功能性片段包含完整胺基酸序列的部分刪除，並且仍然保持對於同靶點結合和相互作用必需的結合位點和蛋白結構域。當用於本文時，功能性片段是指小於完整序列的100%(例如，99%，90%,80%，70%,60%,50%,40%,30%，20%,10%,5%,1%等)，但是包括5個或更多個胺基酸或者15個或更多個核苷酸。當本文提及時，靶點，諸如TNF-a、TNF-ct受體、血清蛋白(例如，血清白蛋白、血清免疫球蛋白、甲狀腺素-結合蛋白、運鐵蛋白、凝血因子I)和IFN-y、IFN-y受體可以是所述靶點的片段。因此，靶點還是所述靶點的片段，能夠激發免疫應答。耙點還是所述耙點的片段，能夠結合針對全長耙點的納米體。當用於本文時，片段是指小於序列的100%(例如，99%,90%,80%，70%,60%,50%,40%,30%，20%,10°/。等)，但是包括5,6,7,8,9,10,12,13,14,15,16,17,18，19,20，21,22,23，24，25個或更多個胺基酸。片段長度足夠，以致目的相互作用保持1x10"M或更好的親和性。當用於本文時，片段還指任選的插入、刪除和取代一個或多個基本上不改變所述靶點結合針對野生型靶點的納米體的能力的胺基酸。胺基酸插入、刪除或取代的數目優選地達到1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16，17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28，29,30,31,32,33,34，35，36,37，38,39,40,41,42,43,44,45，46，47,48，49,50,51,52,53，54,55,56,57,58,59,60,61,62,63,64,65,66,67，68,69或70個胺基酸。本發明的同源序列可以包括已被人源化的抗-TNF-oc多肽。當施用時，新種類VHHs抗體的人源化還將減少在人個體中不利的免疫反應的可能性。本發明的一個實施方案涉及基於人抗體製備修飾的多肽的方法，其通過確定抗體可變結構域(vhh)的胺基酸殘基，所述胺基酸殘基可以被修飾而不減少所述結構域對於抗原的天然親和力，並且同時減少其關於異源物種的免疫原性；涉及在鑑定的殘基具有修飾的VHHs的應用，所述VHHs用於施用給異源物種；並且涉及這樣修飾的vhh。更具體地，本發明涉及製備修飾的VHHs，其被修飾用於施用給人，涉及得到的Vhh本身，以及所述"人源化"VHHs在治療人類疾病中的應用。人源化意指突變，以致在施用時在人類患者中的免疫原性較小或不存在。按照本發明，將多肽人源化包括下述步驟用在人共有序列中發現的它們的人類負體取代一個或多個駱駝科胺基酸，而所述多肽沒有失去其典型性特徵，即，人源化沒有顯著地影響得到的多肽的抗原結合能力。這樣的方法是熟練的技術人員所知的。駱駝科納米體的人源化需要在單一多肽鏈中引入和誘變有限數量的胺基酸。這與scFv，Fab,(Fab)2和IgG的人源化相反，其需要在兩個鏈，輕鏈和重鏈中引入胺基酸變化，以及這兩條鏈的裝配的保存。如在WO04/041862中所述，抗-TNF納米體可以被人源化。例如，人源化可以涉及FR1中位置1和5的殘基誘變，其通過用於所有組成成分克隆的引物而引入，並且不天然存在於美洲駝序列中。那些殘基的誘變沒有導致結合和/或抑制活性的喪失。人源化還可以涉及FR3中位置74,76，83,84，93的殘基誘變。那些殘基的誘變沒有導致結合和/或抑制活性的顯著喪失。因此，FR1和FR3的突變的組合沒有影響結合和/或抑制活性。人源化還可以涉及FR4中位置108的殘基誘變。Q108L的誘變導致在大腸桿菌中更低的生產水平。在駱駝VHH中，位置108暴露於溶劑，而在人抗體中，這一位置包埋在VH-VL界面(Spinelli，1996;Nieba，1997)。在分離的VHs中位置108暴露於溶劑。引入非極性疏水Leu代替極性不帶電荷的Gln可以對分子的內在摺疊/穩定性有顯著的影響。此外，在位置44和45用人的疏水殘基取代親水殘基(E44G和R45L)，對結合和/或抑制沒有影響。然而，當引入F37V和F47W時，觀察到結合和/或抑制活性的喪失。模型數據證實重要殘基37保持CDR3環構象的完整性，並且因此有活性(所有編號方式按照Kabat)。按照本發明的一個實施方案，人源化涉及單獨或組合地取代任何下述殘基-FR1位置1，5，28和30,-在FR2中位置44和45的標誌胺基酸，-FR3殘基74,75,76,83，84,93和94,-和FR4中位置103,104,108和111;-編號方式按照Kabat編號方式。本發明的一個實施方案是抗-TNF-a多肽，或者能夠編碼所述多肽的核酸，用於治療、預防和/或減輕與炎症進程相關的疾病的症狀。TNF-a參與炎症進程，並且阻滯TNF-oc作用可以具有抗炎效果，這在某些疾病狀況諸如例如局限性迴腸炎中非常理想。本實例證明按照本發明的VHHS結合TNF-a，並且，阻滯其與TNF-a受體的結合。本發明的抗-TNF-a多肽可應用於自體免疫疾病，諸如艾迪生病(腎上腺)、耳的自體免疫疾病(耳)、眼睛的自體免疫疾病(眼睛)、自體免疫肝炎(肝)，自體免疫腮腺炎(腮腺)、局限性迴腸炎(腸)、I型糖尿病(胰腺)、附睪炎(附睪)、腎小球腎炎(腎)、格雷夫斯病(甲狀腺)、急性熱病性多神經炎(神經細胞)、橋本病(甲狀腺)、溶血性貧血(紅血細胞)、系統性紅斑狼瘡(多組織)、男性不育(精子)、多發性硬化病(祌經細胞)、重症肌無力(肌神經接點)、天皰瘡(原皮膚(primarilyskin))、銀屑病(皮膚)、風溼熱(心臟和關節)、類風溼性關節炎(關節內裡(jointlining))、結節病(多組織和器官)、硬皮病(皮膚和結締組織)、斯耶格倫症候群(外分泌腺和其它組織)、脊椎關節病(中軸骨骼和其它組織)、甲狀腺炎(甲狀腺)和脈管炎(血管)。括號中是所述疾病影響的組織。自體免疫疾病的這一列表意欲是示例性的而不是包含一切的。本發明的抗-TNF-a多肽適用的自體免疫病況包括，例如，AIDS,遺傳性變態反應，支氣管哮喘，溼疹，麻風，精神分裂症，遺傳性抑鬱症，組織和器官移植，慢性疲勞症候群，阿爾茨海默病，帕金森病，心肌梗塞,休克，孤獨症，癲癇症，阿圖斯現象，過敏反應，和酒精和藥物成癮。在以上鑑定的自體免疫病況中，影響的組織是一級靶點，在其它情形中，它是二級耙點。這些病況部分或大部分是自體免疫症候群。因此，在治療它們時，可能使用相同的方法，或者此處公開的相同方法的方面，有時與其它方法組合。本發明的另一個實施方案是應用按照本發明的抗-TNF-a多肽或編碼所述多肽的核酸用於製備治療與炎症進程相關的紊亂的藥物。紊亂的實例包括類風溼性關節炎、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、炎性腸炎症候群和多發性硬化病。按照本發明的多肽和核酸可以通過常規途徑施用給受試者，諸如靜脈內施用。然而，本發明抗-TNF-a多肽特異的特性在於它們穿過障礙，諸如組織膜和/或腫瘤，並且在其上局部起作用，並且它們足夠穩定，足以耐受極端環境，諸如在胃中。因此，本發明的另一方面涉及抗-TNF-a多肽的遞送。當本發明的納米體和/或多肽用於，或者意欲用於預防或治療胃腸道疾病和紊亂時，特別是通過口服或其它施用方式施用道胃腸道時，通常不必要使用在血清中具有增加的半衰期的本發明的多肽(即，其已被聚乙二醇化或其包含針對血清蛋白的納米體)。因此，對於這樣的指徵，可以應用只包含本發明的納米體的本發明的多肽。特別地，已發現，對於口服施用預防和治療與TNF-a相關和/或由TNF-a調控的胃腸道疾病或紊亂(諸如IBD和上文提及的其它胃腸道疾病和紊亂)，應用本發明的單價納米體或應用基本上由本發明的單價納米體組成的本發明的多肽可以是優選的。對於其它指徵，諸如治療類風溼性關節炎(RA)，使用本發明的二價納米體可以是優選的。當這樣的納米體必須通過血流到達其目的作用位點時，應用在血清中具有增加的半衰期的本發明的多肽可以是優選的。按照本發明的受試者可以是對通過治療性多肽治療敏感的任何哺乳動物。口服遞送本發明的抗-TNF-oc多肽導致在結腸中受所述紊亂影響的局部位點提供活性形式的所述分子。這些位點可以是高度發炎並且包含TNF-oc-生產的細胞。結合TNF-a的本發明的抗-TNF-a多肽可以局部中和TNF-a，避免遍及全身的分布，並且因此限制消極的副作用。遺傳修飾的微生物諸如乳微球菌(Micrococcuslactis)能夠分泌抗體或其功能性片段。這樣修飾的微生物可以用作抗體或其功能性片段在小腸中局部生產和遞送的賦形劑。通過使用產生抗-TNF-a多肽的菌株，可以治療炎性腸症候群。本發明的另一個方面涉及遞送抗-TNF多肽，其通過利用在非侵入性細菌諸如革蘭氏-陽性生物體比如乳球菌物種(Lactococcusspec.)上的表面表達或從其分泌，使用諸如WO00/23471中所述的載體而遞送。本發明的一個實施方案是本文公開的抗-TNF-a多肽用於治療、預防和/或減輕對本發明的納米體或多肽調控敏感的紊亂的症狀，本發明的納米體或多肽能夠通過胃環境而所述物質不失活。紊亂的實例是引起炎症的任一種，包括但不限於，類風溼性關節炎、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、炎性腸症候群和多發性硬化病。如本領域熟練的技術人員所知，一旦擁有所述多肽構建體，配製技術可以用來在正確位置(在胃中，在結腸中，等等)釋放最大量的多肽。這種遞送方法對於治療、預防和/或減輕其靶點位於內臟系統的紊亂的症狀很重要。本發明的一個方面是治療、預防和/或減輕對本發明的納米體或多肽調控敏感的紊亂的症狀的方法，本發明的納米體或多肽能夠通過胃環境而沒有失活，所述方法通過給受試者口服施用本文公開的抗-TNF-a多肽而進行。本發明的另一個實施方案是本文公幵的抗-TNF-a多肽用於製備治療、預防和/或減輕對能夠通過胃環境而沒有失活的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的藥物中的應用。本發明的一個方面是將本發明的納米體或多肽遞送至內臟系統而所述物質不失活的方法，其通過給受試者口服施用本文公開的抗-TNF-a多肽而進行。本發明的一個方面是將本發明的納米體或多肽遞送至受試者的血流而所述物質不失活的方法，其通過給受試者口服施用本文公開的抗-TNF-a多肽而進行。本發明的另一個實施方案是本文公開的抗-TNF-oc多肽用於治療、預防和/或減輕對遞送至陰道和/或直腸道的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的症狀或紊亂。紊亂的實例是引起炎症的任一種，其包括但不限於，類風溼性關節炎、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、炎性腸症候群和多發性硬化病。在一個非限制性實例中，按照本發明的製劑包括本文公開的抗-TNF-a多肽，以凝膠、乳膏、栓劑、薄膜形式，或者以海綿形式或作為隨時間緩慢釋放活性成分的陰道環(這樣的製劑在EP707473,EP684814，US5629001中所述)。本發明的一個方面是治療、預防和/或減輕對遞送至陰道和/或直腸道的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的方法，其通過對受試者陰道和/或直腸施用本文公開的抗-TNF-a多肽而進行。本發明的另一個實施方案是本文公開的抗-TNF-a多肽用於製備治療、預防和/或減輕對遞送至陰道和/或直腸道的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的藥物中的應用。本發明的一個方面是將本發明的納米體或多肽遞送至陰道和/或直腸道而所述物質沒有失活的方法，其通過將本文公開的抗-TNF-oc多肽施用至受試者的陰道和/或直腸道而進行。本發明的一個方面是將本發明的納米體或多肽遞送至受試者的血流而所述物質沒有失活的方法，其通過將本文公開的抗-TNF-a多肽施用至受試者的陰道和/或直腸道而進行。本發明的另一個實施方案是本文公開的抗-TNF-a多肽，其用於治療、預防和/或減輕對遞送至鼻、上呼吸道和/或肺的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂的症狀。紊亂的實例是引起炎症的任一種，其包括但不限於，類風溼性關節炎、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、炎性腸症候群和多發性硬化病。在一個非限制性實例中，一種按照本發明的製劑，包括鼻噴霧(例如氣溶膠)或吸入器形式的本文公開的抗-TNF-a多肽。由於所述多肽構建體小，它可以比治療性IgG分子更加有效得多地到達其靶點。本發明的一個方面是用於治療、預防和/或減輕對遞送至上呼吸道和肺的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的方法，所述方法通過給受試者施用本文公開的抗-TNF-a多肽，這通過嘴或鼻吸入而進行。本發明的另一個實施方案是本文公開的抗-TNF-oc多肽用於製備治療、預防和/或減輕對遞送至鼻、上呼吸道和/或肺而所述多肽沒有失活的的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的藥物中的應用。本發明的一個方面是用於將本發明的納米體或多肽遞送至鼻、上呼吸道和肺而不失活的方法，其通過將本文公開的抗-TNF-ot多肽施用至受試者的鼻、上呼吸道和/或肺而進行。本發明的一個方面是用於將本發明的納米體或多肽遞送至受試者的血流而不失活的方法，其通過將本文公開的抗-TNF-a多肽施用至受試者的鼻、上呼吸道和/或肺而進行。本發明的一個實施方案是本文公開的抗-TNF-oc多肽，其用於治療、預防和/或減輕對遞送至腸黏膜的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀，其中所述紊亂增加腸黏膜的滲透性。由於它們小的大小，本文公開的抗-TNF-(X多肽可以穿過腸黏膜，並且更有效地到達患有引起腸黏膜滲透性增加的紊亂例如局限性迴腸炎的患者中的血流。本發明的一個方面是用於治療、預防和/或減輕對遞送至腸黏膜的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的方法，其中所述紊亂增加腸黏膜的滲透性，所述方法通過對受試者口服施用本文公開的抗-TNF-a多肽而進行。這一過程甚至可以通過本發明的另一個方面一一活性轉運載體的應用一_而進一步增強。在本發明的這一方面，將Vm融合到增強通過腸壁進入血流的轉運的載體上。在一個非限制性實例中，這一"載體"是融合到治療性VHH上的第二VHH。這種融合構建體使用本領域已知的方法製備。"載體"VHH特異性結合腸壁上的受體，所述受體誘導通過壁的活性轉運。本發明的另一個實施方案是本文公開的抗-TNF-oc多肽用於製備治療、預防和/或減輕對遞送至腸黏膜的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的藥物中的應用，其中所述紊亂增加腸黏膜的滲透性。本發明的一方面是將本發明的納米體或多肽遞送至腸黏膜而沒有失活的方法，其通過給受試者口服施用本發明的抗-TNF-a多肽而進行。本發明的一個方面是將本發明的納米體或多肽遞送至受試者的血流而沒有失活的方法，其通過給受試者口服施用本發明的抗-TNF-a多肽而進行。這一過程甚至可以通過本發明的另一個方面一一活性轉運載體的應用一一而進一步增強。在本發明的這一方面，將本文公開的抗-TNF-a多肽融合到增強通過腸壁進入血流的轉運的載體上。在一個非限制性實例中，這一"載體"是融合到所述多肽上的VHH。這種融合構建體使用本領域己知的方法製備。"載體"VHH特異性結合腸壁上的受體，所述受體誘導通過壁的活性轉運。本發明的一個實施方案是本文公開的抗-TNF-a多肽，其用於治療、預防和/或減輕對能夠有效通過舌下組織的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀。紊亂的實例是引起炎症的任一種，其包括但不限於，類風溼性關節炎、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、炎性腸症候群和多發性硬化病。本文公開的所述多肽構建體的製劑，例如，將片劑、噴霧劑、滴劑置於舌下，並且通過黏膜吸收到舌下毛細管網。本發明的一個方面是用於治療、預防和/或減輕對能夠有效通過舌下組織的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的方法，其通過對受試者舌下施用本文公開的抗-TNF-oc多肽而進行。本發明的另一個實施方案是本文公開的抗-TNF-a多肽用於製備治療、預防和/或減輕對能夠通過舌下組織的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的藥物中的應用。本發明的一個方面是將本發明的納米體或多肽遞送至舌下組織而沒有失活的方法，其通過對受試者舌下遞送本文公開的抗-TNF-a多肽而進行。本發明的一個方面是將本發明的納米體或多肽遞送至受試者的血流而沒有失活的方法，其通過對受試者口服施用本文公開的抗-TNF-a多肽而進行。本發明的一個實施方案是本文公開的抗-TNF-a多肽用於治療、預防和/或減輕對能夠有效通過皮膚的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂的症狀。紊亂的實例是引起炎症的任一種，其包括但不限於，類風溼性關節炎、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、炎性腸症候群和多發性硬化病。將所述多肽構建體的製劑，例如，乳膏、薄膜、噴霧劑、滴劑、貼片，放置在皮膚上，並且透過皮膚。本發明的一個方面是用於治療、預防和/或減輕對能夠有效通過皮膚的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的方法，其通過對受試者局部施用本文公開的抗-TNF-a多肽而進行。本發明的另一個實施方案是本文公開的抗-TNF-a多肽用於製備治療、預防和/或減輕對能夠有效通過皮膚的本發明的納米體或多肽的調控而敏感的紊亂症狀的藥物中的應用。本發明的一個方面是將本發明的納米體或多肽遞送至皮膚而沒有失活的方法，其通過對受試者局部施用本文公開的抗-TNF-a多肽而進行。的方法，其通過對受試者局部施用本文公開的抗-TNF-a多肽而進行。在本發明的另一個實施方案中，抗-TNF-a多肽還包含載體納米體(例如VHH)，其作用為活性轉運載體用於將所述抗-TNF-a多肽從肺內腔轉運至血液中。還包括載體的抗-TNP-a多肽特異性地與黏膜表面(支氣管上皮細胞)上存在的受體結合，導致所述多肽從肺內腔到血液的活性轉運。所述載體納米體可以融合到所述多肽構建體上。這種融合構建體可以使用本領域已知的方法製備，並且在本文描述。所述"載體"納米體特異性地與黏膜表面上的受體結合，其誘導通過所述表面的活性轉運。本發明的另一個方面是確定在鼻施用時將哪一種納米體(例如VHHs)活性轉運至血流中的方法。類似地，首次用於實驗的或免疫vhh噬菌體文庫可以進行鼻施用，並且在施用後的不同時間點，可以分離血液或器官，以拯救己經被活性轉運到血流的噬菌體。用於從肺內腔到血流的活性轉運的受體的非限制性實例是Fc受體N(FcRn)。本發明的一個方面包括通過所述方法鑑定的Vhh分子。然後所述Vhh可以用作裁體Vhh，用於在鼻施用時，將治療性VHH遞送到血流中相對應的靶點。在本發明的一個方面，可以應用本文公開的抗-TNF-a多肽，以篩選調控所述多肽與TNF-a的結合的試劑。當在單獨測定結合或所述多肽的置換的檢測中鑑定時，必須將試劑進行功能性測試，以確定它們是否在體內調控抗原作用。在置換實驗的一個實例中，在存在或不存在增加濃度的候選調節劑時，將表達TNF-a或其片段的噬菌體或細胞在結合緩衝液中與已經標記的本發明的多肽一起培養。為了驗證和校準所述檢測，可以進行對照競爭反應，其使用增加濃度的並且未標記的所述多肽。在培養後，將細胞徹底清洗，並且在適於所給的標記時(例如，液閃計數、螢光等)，檢測結合的、標記的多肽。在存在候選調節劑時所結合的標記的多肽的量中至少10%的減少表示所述候選調節劑對結合的置換。如果在1)iM或更低的濃度下它們置換50%的標記的多肽(亞飽和多肽劑量)，那麼就認為候選調節劑在這一檢測或本文所述的其它檢測中特異性地結合。備選地，結合或結合的置換可以通過表面等離振子共振(SPR)進行監測。表面等離振子共振檢測可以用作定量方法，通過在固定的傳感器附近由來自水相的本發明的多肽與固定在所述傳感器膜中的TNF-OC的結合或失去結合而引起的質量變化而檢測兩種分子之間的結合。在注射或移除所述多肽或候選調節劑後，並且使用BiacoreBiosensor(BiacoreAB)測定後，這種質量變化測定為相對於時間的共振單位。例如，按照由Salamon等(Salamon等，1996,BiophysJ.(生物物理學雜誌)71:283-294;Salamon等，2001,Biophys.J.(生物物理學雜誌)80:1557-1567;Salamon等，1999，TrendsBiochem.Sci.(生物化學科學趨勢)24:213-219,其中每一文獻通過引用結合於此。)所述的方法，TNF-oc可以固定在薄膜脂質膜中的傳感器晶片上(例如，研究級CM5晶片；BiacoreAB)。Sarrio等證明SPR可以用來檢測與固定在晶片上脂質層中的GPCRA(l)腺苷受體結合的配體(Sarrio等.，2000,Mol.Cell.Biol.(分子細胞生物學)20:5164-5174，其通過引用結合於此)。對於SPR檢測中本發明的多肽與TNF-a的結合的條件可以由本領域的技術人員使用Sarrio等報導的條件作為起點而細微調整。SPR可以以至少兩種方法檢測結合的調節劑。第一，本發明的多肽可以預結合固定的TNF-oc，然後注射濃度範圍0.1nM-1的候選調節劑。結合的多肽的置換可以量化，允許檢測調節劑結合。備選地，膜-結合的TNF-a可以與候選調節劑一起預培養，並且用本發明的多肽激活。所述多肽和與所述調節劑預培養的TNF-oc之間的結合親和力的差異，與不存在所述調節劑時所述多肽和TNF-a之間的結合親和力相比較，將證明在存在調節劑時所述多肽的結合或置換。在每一檢測中，相對於在不存在候選調節劑時結合的所述多肽的量，在存在候選調節劑時結合的所述多肽的量中IO%或更多的減少，表明所述候選調節劑抑制TNF-a與所述多肽的相互作用。例如，檢測對本發明的多肽與TNF-a的結合的抑制的另一種方法使用螢光共振能量遷移(FRET)。FRET是一種量子機制現象，如果D的放射光譜與A的激發光譜交迭，在彼此最接近的(通常分開〈100A)螢光供體(D)和螢光受體(A)之間存在所述現象。要被檢測的分子，例如，本發明的多肽和TNF-a用供體和受體螢光團的互補對進行標記。當通過TNF-a:多肽相互作用而緊密地結合在一起時，當激發供體螢光團時發出的螢光具有與在所述多肽與TNF-oc未結合時應答所述激發波長而發出的螢光不同的波長，這通過測定在每一波長的發射強度而提供結合的相對未結合的分子的量化。標記TNF-a的供體螢光團是本領域公知的。其中特別感興趣的是A.VictoriaGFP的變體，已知為藍綠FP(CFP，供體(D))和黃色FP(YFP,受體(A))。作為一個實例，YFP變體可以與TNF-oc製備成融合蛋白。用於表達作為融合體的GFP變體(Clontech)的載體以及螢光團-標記的試劑(MolecularProbes)是本領域已知的。將候選調節劑加入到螢光-標記的多肽和YFP-TNF-a的混合物中將導致對能量遷移的抑制，例如，這由相對於沒有候選調節劑的樣品YFP螢光的減少而證實。在使用FRET檢測TNF-a:多肽相互作用的檢測中，相對於沒有候選調節劑的樣品，在包含候選調節劑的樣品中在受體波長的螢光發射強度的10%或更多的減少，表明所述候選調節劑抑制TNF-a:多肽相互作用。當用於此處時，樣品可以是包含TNF-a的任何生物樣品，諸如臨床的(例如，細胞級分、全血、血漿、血清、組織、細胞等)，來自於臨床的，農業的，法庭的，科研或其它可能的樣品。所述臨床樣品可以是人或動物來源的。所分析的樣品可以本質上是固體或液體的。明顯地，當使用固體物質時，這些要首先溶解在適當的溶液中。關於FRET的一種變化使用螢光猝滅來監測分子相互作用。相互作用對中的一個分子可以用螢光團標記，並且另一個分子用當與其靠近並置時猝滅所述螢光團的螢光的分子標記。當激發時螢光的變化是在標記螢光團的分子猝滅劑對的締合中的變化的指示。通常，標記的TNF-a的螢光中的增加是攜帶猝滅劑的抗-TNF-a多肽己被置換的指示。對於猝滅檢測，相對於沒有候選調節劑的樣品，在包含候選調節劑的樣品中螢光發射強度的10%或更多的增加，表明所述候選調節劑抑制TNF-a:抗-TNF-a多肽相互作用。除了表面等離振子共振和FRET方法之外，螢光極化檢測用於量化結合。對於螢光-標記的分子的螢光極化值取決於旋光相關時間(rotationalcorrelationtime)或斜率。複合物，諸如由TNF-a與螢光標記的抗-TNF-a多肽締合形成的那些，具有比未複合的、標記的多肽更高的極化值。如果候選抑制劑中斷或抑制TNF-a與所述多肽的相互作用，那麼，相對於沒有候選抑制劑的混合物，包含TNF-oc:抗-TNF-oc多肽相互作用的候選抑制劑導致螢光極化的減少。螢光極化非常適用於鑑定中斷TNF-a:抗-TNF-a多肽複合物形成的小分子。相對於缺少所述候選調節劑的樣品中的螢光極化，在包含候選調節劑的樣品中的螢光極化的10%或更多的減少，表明所述候選調節劑抑制TNF-a:抗-TNF-oc多肽相互作用。用於監測TNF-cx:抗-TNF-ot多肽相互作用的另一種備選方案使用生物傳感器檢測。ICS生物傳感器巳在本領域內描述(AustralianMembraneBiotechnologyResearchInstitute(澳大利亞膜生物技術研究所)；CornellB,Braach-MaksvytisV,KingL，OsmanP，RaguseB,WieczorekL，禾口PaceR."Abiosensorthatusesion-channelswitches(使用離子-通道轉換的生物傳感器)"Nature(自然)1997,387,580)。在這一技術中，TNF-ot和抗-TNF-a多肽的締合與關閉懸浮的雙分子層膜中的短桿菌肽-輔助的離子通道偶聯，並且因此達到生物傳感器導納(admittance)(類似於阻抗(impedence))的可檢測的變化。這種方法在六個數量級的導納變化上是線性的，並且理想地適用於小分子組合文庫的大規模、高通量篩選。相對於缺少候選調節劑的樣品的導納，在包含候選調節劑的樣品中的導納的10%或更大的變化(增加或減少)，表明所述候選調節劑抑制TNF-oc與所述多肽的相互作用。重要地要注意，在檢測TNF-oc與抗-TNF-a多肽的相互作用的檢測中，可能地，所述相互作用的調節劑不必必要地直接與同所述多肽物理相互作用的蛋白的結構域相互作用。還可能地，調節劑將在遠離相互作用位點的位置相互作用，並且引起，例如，TNF-oc中的構象變化。儘管如此，以這種方式作用的調節劑(抑制劑或拮抗劑)還是調節TNF-a與其受體的結合的感興趣的試劑。所述的任何結合檢測可以用來確定某種試劑在某種樣品例如組織樣品中的存在，所述試劑結合TNF-a，或者影響，例如，本發明的多肽與TNF-oc的結合。為了做得這樣，在存在或不存在所述樣品時，將TNF-a與所述多肽反應，並且在適於要用的結合檢測時檢測多肽結合。在所述多肽的結合中的10%或更多的減少表明所述樣品包含調控所述多肽與TNF-a的結合的試劑。當然，上述普遍化的方法可以容易地適用於篩選改變任何本發明的抗-TNF-a多肽、其同源序列、其功能性片段或其同源序列的功能性片段與TNF-a或其片段之間的結合的候選調節劑。本發明的一個實施方案是通過本文公開的方法鑑定的未知試劑。本發明的一個實施方案是通過本文公開的方法鑑定的未知試劑用於治療、預防和/或減輕與炎症進程相關的紊亂的症狀。本發明的另一個實施方案是通過本文公開的方法鑑定的未知試劑的應用，其用於治療、預防和/或減輕與炎症進程相關的紊亂的症狀。紊亂的實例包括類風溼性關節炎、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、炎性腸炎症候群和多發性硬化病。按照本發明使用的細胞優選地選自由下列各項組成的組細菌細胞諸如例如大腸桿菌，酵母細胞諸如例如釀酒酵母、巴斯德畢赤酵母(Rpastoris)，昆蟲細胞或哺乳動物細胞。按照本發明使用的細胞可以是任何細胞，其中可以引入按照本發明編碼本發明包括抗-TNF-oc的多肽的核酸序列、其同源序列、其功能性片段或其同源序列的功能性片段，以致所述多肽在天然水平或高於天然水平表達，如本文所定義。優選地，在細胞中表達的本發明的多肽表現出正常的或接近正常的藥性，如本文所定義。按照本發明的一個優選的實施方案，細胞選自由下列各項組成的組C0S7-細胞，aCHO細胞，aLM(TK-)細胞，aNIH-3T3細胞，HEK-293細胞,K-562細胞或1321N1星細胞瘤細胞，以及其它可轉染的細胞系。大體上，"治療有效量"、"治療有效劑量"和"有效量"意指獲得理想的一項或多項結果(調節TNF-ot結合；治療或預防炎症)所需要的量。本領域的普通技術人員應該意識到，效果，並且因此，"有效量"可以關於本發明中所用的調節TNF-a結合的不同的化合物而不同。本領域的技術人員可以容易地評估所述化合物的效果。當用於此處時，術語"化合物"是指本發明的抗-TNF-a多肽，組合物，或能夠編碼所述多肽的核酸，或者按照本文所述的篩選方法鑑定的試劑，或者包括一個或多個衍生的胺基酸的所述多肽。"藥用"意指非生物性或另外不理想的物質，即，所述物質可以與化合物一起施用給個體，而不引起任何不理想的生物作用或不以有害方式與其中所包含的藥物組合物的任何其它成分相互作用。本文公開的抗-TNF-a多肽用於治療或預防受試者中的病況，並且包括施用藥物學有效量的化合物或組合物。本發明的抗-TNF多肽用於治療或預防受試者中與類風溼性關節炎、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、炎性腸炎症候群和多發性硬化病相關的病況，並且包括施用藥物學有效量的結合TNF-a的化合物或組合物。本文公開的抗-TNF-a多肽用於治療或預防受試者中的病況，並且包括施用與另一種化合物諸如例如阿司匹林組合的藥物學有效量的化合物。本文公開的抗-TNF-a多肽用於治療或預防受試者中與類風溼性關節炎、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、炎性腸炎症候群和多發性硬化病相關的病況，並且包括施用與另一種化合物諸如例如阿司匹林組合的藥物學有效量的化合物。本發明不限於施用包括單一的本發明的化合物的製劑。在本發明的範圍內，提供組合治療，其中將包括多於一種本發明的化合物的製劑施用給需要其的患者。由TNF-a調控的病況包括但不限於，類風溼性關節炎、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、炎性腸炎症候群和多發性硬化病。用於本發明的化合物可以配製成藥物組合物，並且以各種適合所選的施用途徑的形式施用給哺乳動物宿主，諸如人患者或家畜，所述施用途徑即，口服或腸胃外、通過鼻內通過吸入、靜脈內、肌內、局部或皮下途徑。本發明的化合物還可以應用遞送的基因治療方法施用。參見，例如，美國專利No.5,399,346，其通過引用完全結合。應用遞送的基因治療方法，轉染了用於本發明的化合物的基因的初級細胞另外可以轉染組織特異性啟動子，以靶向特異的器官、組織、移植物、腫瘤或細胞。因此，本化合物可以全身施用，例如，口服，與藥用賦形劑諸如惰性稀釋劑或可同化的食用載體組合。它們可以封裝在硬或軟殼白明膠膠囊中，可以壓縮成片劑，或者可以直接與患者的日常飲食的食物結合。對於口服治療性施用，活性化合物可以與一種或多種賦形劑結合，並且以可吸收的片劑、口腔片劑、藥片、膠囊、酏劑、混懸液、糖漿、糯米紙囊劑等形式使用。這種組合物和製劑應該包含至少0.1。/。的活性化合物。當然，所述組合物和製劑的百分數可以改變，並且可以便利地在所給單位劑型的約2—約60重量％。活性化合物在所述治療用組合物中的量如此，以致將獲得有效的劑量水平。所述片劑、藥片、丸劑、膠囊等還可以包含下述粘合劑，諸如黃蓍膠、阿拉伯樹膠、玉米澱粉或白明膠；賦形劑，諸如磷酸二鈣；崩解劑，諸如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、褐藻酸等；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂；並且可以加入甜味劑，諸如蔗糖、果糖、乳糖或阿司帕坦，或者調味劑，諸如歐薄荷、冬青油、或櫻桃調味劑。當單位劑型是膠囊時，除上述類型的物質之外，它還可以包含液體載體，諸如植物油或聚乙二醇。各種其它物質可以作為塗層存在，或者另外修飾所述固體單位劑型的物理形式。例如，片劑、丸劑、或膠囊可以用白明膠、蠟、紫膠或糖等包被。糖漿或酏劑可以包含所述活性化合物，作為甜味劑的蔗糖或果糖，作為防腐劑的甲基和丙基對羥基苯甲酸酯類，染料和調味劑諸如櫻桃或橙味調味劑。當然，在製備任何單位劑型中所用的任何物質都應該是藥物可接受的，並且在所用的量上基本上無毒。另外，活性化合物可以結合在持續釋放的製劑和裝置中。所述活性化合物還可以通過輸注或注射進行靜脈內或腹膜內施用。本活性化合物或者其鹽的溶液可以在水中製備，任選地與無毒表面活性劑混合。分散劑還可以在甘油、液體聚乙二醇、三醋精及其混合物中以及在油中製備。在普通的保存和使用條件下，這些製劑包含防腐劑以防止微生物的生長。適於注射或輸注的藥物劑型可以包括無菌的水溶液或分散液或者包含活性成分的無菌粉劑，其適合即時製備無菌可注射或可輸注溶液或分散液，任選地包封在脂質體中。在所有情形中，在製備和保存條件下，最終劑型必須是無菌的、流動的和穩定的。液體載體或賦形劑可以是溶劑或液體分散介質，例如，其包括水、乙醇、多醇(例如，甘油、丙二醇、液體聚乙二醇等)、植物油、無毒甘油酯及其適當的混合物。可以保持適當的流動性，例如，通過形成脂質體，在分散劑的情形中通過保持需要的顆粒大小或者通過使用表面活性劑。防止微生物作用可以通過各種抗細菌和抗真菌試劑獲得，例如，對羥基苯甲酸酯類、氯代丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在許多情形中，優選地包括等滲劑，例如，糖、緩衝劑或氯化鈉。可注射組合物的延長吸收可以通過在所述組合物中使用延遲吸收劑例如單硬脂酸鎂和白明膠而獲得。無菌可注射溶液通過將需要量的活性化合物結合在適當的溶劑中，當需要時，與上文列舉的各種其它成分一起結合，然後進行過濾除菌而製備。在用無菌粉劑製備無菌可注射溶液的情形中，優選的製備方法是真空乾燥和冷凍乾燥技術，其產生活性成分加上在先前的無菌過濾溶液中存在的任何其它理想的成分的粉劑。對於局部給藥，本化合物可以以純的形式應用，g卩，在它們是液體的情形中。然而，通常理想地將它們作為與皮膚病學可接受的載體結合的組合物或製劑施用到皮膚上，所述載體可以是固體或液體。有用的固體載體包括細碎分裂的固體，諸如滑石、粘土、微晶纖維素、矽石、礬土等。有用的液體載體包括水、羥烷類或二醇類或水-醇/二醇摻合劑，其中所述化合物可以以有效水平溶解或分散，任選地在無毒表面活性劑的幫助下。可以添加佐劑諸如香味劑和其它抗微生物劑，以將給定用途的特性最優化。得到的液體組合物可以用作吸收襯墊，用於浸漬的繃帶及其它敷料，或者使用泵型或氣溶膠噴霧器噴到感染區域。增稠劑諸如合成的聚合物、脂肪酸、脂肪酸鹽及酯、脂肪醇、改性纖維素或改性的礦物質還可以與液體載體一起使用，以形成易塗開的糊劑、凝膠、藥膏、皂劑等，用於直接塗覆到使用者的皮膚。可以用於將所述化合物遞送到皮膚的有用的皮膚病學組合物的實例是本領域已知的；例如，參見Jacquet等(U.S.Pat.No.4,608,392)，Geria(U.S.Pat.No.4,992,478),Smith等(U.S.Pat.No.4,559,157)和Wortzman(U.S.Pat.No.4,820,508)。所述化合物的有用劑量可以通過比較它們的體外活性和在動物模型中的體內活性而確定。將在小鼠和其它動物中的有效劑量外推至人的方法是本領域已知的；例如，參見U.S.Pat.No.4,938,949。通常，所述化合物在液體組合物諸如洗液中的濃度約0.1-25wt-%，優選地約0.5-10wt-%。在半固體或固體組合物諸如凝膠或粉劑中的濃度約0.1-5wt-%，優選地約0.5-2.5wt-%。需要用於治療的所述化合物或其活性鹽或衍生物的量不但隨著所選的特定的鹽而變化，而且隨著施用途徑、要治療的病況的性質以及患者的年齡和病況而變化，並且最終取決於隨從醫生或臨床醫生的判斷力。此外，所述化合物的劑量變化取決於靶點細胞、腫瘤、組織、移植物或器官。理想的劑量可以便利地以單一劑量或作為在適當的時間間隔施用的分割的劑量而存在，例如，作為每天2、3、4次或更多的亞劑量。所述亞劑量本身可以進一步分割，例如，分割成許多次不連續的寬鬆間隔的施用；諸如從吸入器多次吸入，或者通過使用多滴到眼睛中。施用方案可以包括長期的、日常的治療。"長期"意指至少2周，並且優選地幾個星期、數月或數年的持續時間。在這一劑量範圍的必要的修改可以由本領域的普通技術人員僅僅使用本文的教導所給的常規實驗而確定。參見Remington'sPharmaceuticalSciences(Remington's藥物禾鬥學)(Martin,E.W.,第4版)，MackPublishingCo.，Easton，PA。在任何併發症情形中，劑量還可以由個別醫生進行調整。本發明提供一種作為TNF-cxTNF-a-受體相互作用的調節劑的試劑。所述候選試劑可以是合成試劑、或試劑的混合物，或可以是天然產物(例如，植物提取物或培養物上層清液)。按照本發明的候選試劑包括可以合成的小分子、天然提取物、肽、蛋白、碳水化合物、脂質等。可以從合成的或天然試劑的大文庫篩選候選調節劑。目前應用許多方法來隨機和定向地合成糖、肽和基於核酸的試劑。合成試劑文庫可以從許多公司商購，包括MaybridgeChemicalCo.(Maybridge化學公司)(Trevillet,Cornwall,UK),Comgenex(Princeton,NJ)，BrandonAssociates(Merrimack:NH)，禾HMicrosource(NewMilford，CT)。一種稀有的化學文庫可從Aldrich(Milwaukee,WI)獲得。組合文庫可用並且可以製備。備選地，以細菌、真菌、植物和動物提取物形式的天然試劑的文庫可從例如PanLaboratories(Bothell，WA)或MycoSearch(NC)獲得，或者通過本領域公知的方法容易地生產。另外，天然和合成產生的文庫和試劑通過常規化學、物理和生化方法而容易地修飾。有用的試劑可以在許多化學種類中找到。有用的試劑可以是有機試劑或小的有機試劑。小的有機試劑具有大於50而小於約2,500道爾頓的分子量，優選地小於約750，更優選地小於約350道爾頓。示例性種類包括雜環、肽、糖、類固醇等。所述試劑可以被修飾，以提高功效、穩定性、藥物相容性等。試劑的結構識別可以用來鑑定、產生或篩選其它試劑。例如，在肽試劑得以鑑定的情形中，它們可以以各種方式進行修飾，以提高它們的穩定性，諸如使用非天然胺基酸，諸如D-胺基酸，特別是D-丙氨酸，通過官能化氨基或羧基端，例如，對於氨基、醯化或垸化，並且對於羧基，酯化或醯胺化(amidification)，等等。對於初級篩選，按照本發明的候選試劑的有用濃度是從約10mM到約100jiM或更大(即1mM,10mM,100mM,1M等)。初級篩選濃度將用作上限，與9個其它濃度一起，其中所述其它濃度通過以半-對數間隔減少所述初級篩選濃度而確定(例如，對於9個其它濃度)，用於二級篩選或用於產生濃度曲線。按照本發明的高通量的篩選試劑盒包括用於進行檢測調節TNF-&/TNF-a受體相互作用的試劑的所有必要的裝置和介質，其中所述調節通過在存在多肽時，多肽優選地在liiM-lmM的濃度範圍，與TNF-a相互作用而進行。所述試劑盒包括下述。本發明的重組細胞，其包括並且表達編碼TNF-a的核苷酸序列，按照所述試劑盒，所述重組細胞在固體支持物上生長，諸如微量滴定平板，更優選地在96孔微量滴定平板上生長，按照本領域技術人員公知的方法，特別是在WO00/02045中所述。備選地，TNF-a以純的形式提供，例如，由本領域熟練的技術人員固定在96孔微量滴定平板上。備選地，所述試劑盒中提供預先固定，例如，預先固定在96孔微量滴定平板上的TNF-a。TNF-a可以是完整的TNF-a或其片段。將按照本發明的調節劑，以從約1pM到lmM或更高的濃度，加入到限定的孔中，其中存在適當濃度的抗-TNF-a多肽，其同源序列、其功能片段或其同源序列的功能片段，所述多肽的所述濃度優選地在1pM-lmM範圍。試劑盒可以包含一種或多種本發明的抗-TNF-a多肽。結合檢測按照本文已經公開的方法進行，並且將結果與基線水平比較，所述基線水平例如，為TNF-a結合抗-TNF-a多肽、其同源序列、其功能性片段或其同源序列的功能性片段的水平，但是不存在加入的調節劑。(例如)當與不存在調節劑的活性水平相比較時，選擇在TNF-a-多肽結合中表現出至少2倍、優選地5倍、更優選地10倍和最優選地100倍或更大的增加或減少的孔用於進一步分析。本發明提供用於篩選TNF-a/TNF-a受體結合的調節劑的其它試劑盒，以及用於診斷以TNP-a功能紊亂為特徵的紊亂的試劑盒。本發明還提供用於篩選紊亂的調節劑的試劑盒，以及用於它們的診斷的試劑盒，所述紊亂特徵在於涉及TNF-ot的一個或多個進程。按照本發明應用的試劑盒可以包括分離的TNF-cc。備選地，或者另外，試劑盒可以包括轉化表達TNF-a的細胞。在另一個實施方案中，按照本發明的試劑盒可以包括編碼TNF-a的多聚核苷酸。在另一個實施方案中，按照本發明的試劑盒可以包括用於TNF-a擴增的特異引物。按照本發明應用的試劑盒可以包括分離的TNF-a多肽，其同源物，或其功能性片段。按照本發明的試劑盒可以包括轉化表達所述多肽的細胞。試劑盒可以包含多於一種的多肽。在另一個實施方案中，按照本發明的試劑盒可以包括編碼TNF-a的多聚核苷酸。在另一個實施方案中，按照本發明的試劑盒可以包括用於大分子諸如例如TNF-a擴增的特異引物。因此所有按照本發明的試劑盒應該包括規定的項目或項目組合，以及包裝物質。試劑盒還包括使用說明。此外，熟練的技術人員還應該清楚，可以可能地將上文提及的用於本發明的納米體的一個或多個CDR，s"移植"到其它"支架"上，所述支架包括但不限於人支架或非-免疫球蛋白支架。用於這種CDR移植的適宜的支架和技術是熟練的技術人員所清楚的，並且是本領域公知的，參見，例如US-A-7,180,370,WO01/27160，EP0605522，EP0460167，US-A-7,054,297,Nicaise等,ProteinScience(蛋白質科學)(2004),13:1882-1891;Ewert等，Methods(方法)，2004Oct;34(2):184-199;Kettleborough等，ProteinEng.(蛋白質工程)1991Oct;4(7):773-783;O'Brien和Jones,MethodsMol.Biol.(分子生物學方法)2003:207:81-100;和Skerra,J.Mol.Recognit.(分子識別雜誌)2000:13:167-187，和Saerens等，J.Mol.Biol.(分子生物學雜誌)2005Sep23;352(3):597-607，以及本文引用的其它參考文獻。例如，可以以相似的方式應用本質上已知的關於將小鼠或大鼠的CDR，s移植到人構架和支架上的技術，以提供包括一個或多個本發明的納米體的CDR's和一個或多個人構架區或序列的嵌合蛋白。因此，在另一個實施方案中，本發明包括一種嵌合多肽，其包含至少一種選自由本文提及的用於本發明的納米體的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列組成的組的CDR序列。優選地，這樣的嵌合多肽包括至少一種選自由本文提及的用於本發明的納米體的CDR3序列組成的組的CDR序列，並且任選地還包括至少一種選自由本文提及的用於本發明的納米體的CDR1序列和CDR2序列組成的組的CDR序列。例如，這樣的嵌合多肽可以包括一個選自由本文提及的用於本發明的納米體的CDR3序列組成的組的CDR序列，一個選自由本文提及的用於本發明的納米體的CDR1序列組成的組的CDR序列，和一個選自由本文提及的用於本發明的納米體的CDR1序列和CDR2序列組成的組的CDR序列。對於這些嵌合多肽，本文提及的對於本發明的納米體優選的CDR's的組合通常也是優選的。在所述嵌合多肽中，所述CDR's可以與其它胺基酸序列連接和/或通過胺基酸序列彼此連接，其中所述胺基酸優選地是構架序列或作用為構架序列的胺基酸序列，或者一起形成用於遞呈所述CDR's的支架。參考也參見在前段中提及的現有技術。按照一個優選的實施方案，所述胺基酸序列是人構架序列，例如，Vh3枸架序列。然而，還可以使用非人的、合成的、半-合成的或非-免疫球蛋白構架序列。優選地，所用的構架序列如此，以致(1)所述嵌合多肽能夠結合xxxx，即，以相對應的本發明的納米體的親和力的至少1%、優選地至少5%、更優選地至少10%，諸如至少25%，並且達到50%或90%或更大的親和力；(2)所述嵌合多肽適於藥用；和(3)在用於其藥用(即，指徵、施用模式、劑量和治療方案)的目的條件下(其可以基本上類似於本文所述的關於應用本發明的納米體的條件)，所述嵌合多肽優選地基本上無免疫原性。按照一個非限制性實施方案，所述嵌合多肽包括通過至少一個構架序列連接的至少兩個CDR序列(如上文所提及)，其中優選地所述兩個CDR序列中的至少一個是CDR3序列，另一CDR序列為CDR1或CDR2序列。按照一個優選的但非限制性的實施方案，所述嵌合多肽包括至少兩個構架序列連接的至少兩個CDR序列(如上文提及)，其中優選地所述三個CDR序列中的至少一個是CDR3序列，其餘兩個CDR序列是CDR1或CDR2序列，並且優選地是一個CDR1序列和一個CDR2序列。按照一個特別優選的但非限制性的實施方案，所述嵌合多肽具有結構FR1'-CDR1-FR2，-CDR2-FR3，-CDR3-FR4'，其中CDR1，CDR2和CDR3如本文關於本發明的納米體的CDR，s的定義，而FR1',FR2',FR3'和FR4'是構架序列。特別地，FR1，，FR2，，FR3，和FR4，可以分別是人抗體(堵如Vh3序列)構架1，構架2，構架3和構架4序列，和/或所述構架序列的部分或片段。還可以使用具有結構FR1，-CDRl-FR2,-CDR2隱FR3，畫CDR3-FR4的嵌合多肽的部分或片段。優選地，這樣的部分或片段如此，以致它們滿足在前述段落中列出的標準。本發明還涉及包括和/或基本上由所述嵌合多肽組成的蛋白和多肽，涉及編碼所述蛋白或多肽的核酸；涉及製備所述蛋白和多肽的方法；涉及表達或能夠表達所述蛋白或多肽的宿主細胞；涉及組合物，並且特別是包含所述蛋白或多肽、核酸或宿主細胞的藥物組合物；並且涉及所述蛋白或多肽、所述核酸、所述宿主細胞和/或所述組合物的應用，特別是用於預防、治療或診斷目的，諸如本文提及的預防、治療或診斷目的。例如，所述蛋白、多肽、核酸、方法、宿主細胞、組合物和應用可以與本文關於本發明的納米體所述的蛋白、多肽、核酸、方法、宿主細胞、組合物和應用相似。還應該注意，當本發明的納米體包含除上文提及的優選的CDR序列之外的一個或多個其它CDR序列時，這些CDR序列可以是任何適宜的(即，適用於本文所述的目的)CDR序列和/或這些CDR序列可以以本質上己知的任何方法獲得，例如，從納米體(優選)，來自常規抗體(並且特別來自人抗體)的vh結構域，重鏈抗體，常規4-鏈抗體(諸如常規人4-鏈抗體)或針對TNF的其它免疫球蛋白序列。針對xxxx的這種免疫球蛋白序列可以以任何本質上己知的方法產生，如熟練的技術人員所清楚的，即，通過用TNF免疫或通過用TNF篩選免疫球蛋白序列的適宜的文庫，或其任何的組合。任選地，這可以接著進行技術諸如隨機或位點定向誘變和/或其它本質上已知的用於親和力成熟的技術。產生這樣的免疫球蛋白序列的適宜的技術是熟練的技術人員所清楚的，並且例如包括Hoogenboom,NatureBiotechnology(自然生物技術)，23,9,1105-1116(2005)綜述的篩選技術。產生針對指定的靶點的免疫球蛋白的其它技術包括，例如，納米體技術(例如，在未預先公布的美國臨時專利申請60/648,922)，所謂的SLAM技術(例如歐洲專利申請0542810中所述)，應用表達人免疫球蛋白的轉基因小鼠或者公知的雜交瘤技術(參見，例如Larrick等，Biotechnology(生物技術)，巻7，1989,第934頁)。所有這些技術可以用來產生針對TNF的免疫球蛋白，並且這種免疫球蛋白的CDR's可以用於本發明的納米體，即，如上文列出的。例如，這樣的CDR序列可以被確定、合成和/或分離，並且插入到本發明的納米體的序列中(例如，以便取代相對應的天然CDR)，所有應用的技術本質上已知，諸如本文所述的那些，或者包含所述CDR's的本發明的納米體(或編碼其的核酸)可以從頭合成，也應用本文提及的技術。現在將通過下述非限制性實例和附圖的方法對本發明進一步描述，其中所述附圖顯示單價TNFa納米體圖l:人TNFa納米體的序列比對圖2:血清白蛋白特異性TNFa納米體的序列比對圖3:白蛋白特異性TNFa納米體與人血清白蛋白的結合圖4:白蛋白特異性TNFa納米體與恆河猴血清白蛋白的結合圖5:白蛋白特異性TNFa納米體與小鼠血清白蛋白的結合圖6:TNFa和血清白蛋白納米體的純度(十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳)圖7:TNFa和血清白蛋白納米體的蛋白質印跡分析圖8:TNFa納米體與人TNFa的結合(ELISA)圖9:TNFa納米體與恆河猴TNFa的結合(ELISA)圖10:對依那西普關於人TNFa的受體-抑制檢測圖11:對依那西普關於恆河猴TNFa的受體-抑制檢測圖12:TNFa納米體與人TNFa的結合(Biacore)圖13:TNFa納米體與恆河猴TNFa的結合(Biacore)圖14:TNFa納米體與蛋白質A的結合(Biacore)圖15:TNFa和血清白蛋白納米體的溫度處理(蛋白質印跡)圖16:穩定性TNFa納米體的溫度處理(ELISA)圖17:血清白蛋白納米體的溫度處理(Biacore)二價TNFa納米體圖18:二價TNFa納米體的純度(十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳)圖19:二價TNFa納米體的蛋白質印跡分析圖20:對依那西普關於二價TNFa納米體的受體-抑制檢測圖21:穩定性二價TNFa納米體的溫度處理(ELISA)人源化的單價TNFa納米體圖22:TNF1人源化納米體的多序列比對圖23:TNF2人源化納米體的多序列比對圖24:TNF3人源化納米體的多序列比對圖25:ALB1人源化納米體的多序列比對圖26:人源化TNFa和血清白蛋白納米體的純度(十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳)圖27:人源化TNFa和血清白蛋白納米體的蛋白質印跡分析圖28:人源化TNFa納米體與人TNFa的結合圖29:人源化血清白蛋白納米體與人血清白蛋白的結合圖30:穩定性人源化TNFa納米體的溫度處理(ELISA)三價TNFa納米體圖31:三價TNFa納米體的純度(十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳)圖32:三價TNFa納米體的蛋白質印跡分析圖33:穩定性三價TNFa納米體的溫度處理(ELISA)人源化單價TNFa納米體(第二輪)圖34:TNF1人源化納米體的多序列比對圖35:TNF2人源化納米體的多序列比對圖36:TNF3人源化納米體的多序列比對圖37:ALB1人源化納米體的多序列比對圖38:人源化TNFa納米體的純度(十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳)圖39:人源化TNFa納米體的蛋白質印跡分析圖40:人源化TNFa納米體與人TNFa的結合圖41:穩定性人源化TNFa納米體的溫度處理(ELISA)圖42:純化的TNF60在銀染色的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳凝膠上的分析(A)考馬斯染色的十二垸基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳凝膠(B)並且在使用抗-NB的蛋白質印跡分析中(C)檢測圖43:TNF60在SuperdexHR75上的分析型大小排阻層析圖44:TNF60與人TNF-a的結合圖45:與Enbrel(依那西普)，Humira(阿達木單抗)和Remicade(英夫利昔單抗)相比，使用納米體tmTNF60在使用人TNPa的細胞毒性檢測中獲得劑量應答曲線圖46:與Enbrel(依那西普)，Humira(阿達木單抗)和Remicade(英夫利昔單抗)相比，使用納米體tmTNF60在使用恆河猴TNFa的細胞毒性檢測中獲得劑量應答曲線圖47:TNF60在小鼠中的藥物代謝動力學圖表圖48:TNF60在小鼠中的免疫原性圖表圖49:純化的TNF56-PEG40，TNF56-PEG60，TNF56-biotine,TNF55-PEG40,TNF55-PEG60和TNF55-biotine在考馬斯染色的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳凝膠上的分析圖50:純化的TNF56-PEG40在使用銀染色的十二垸基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳凝膠上的分析(A)考馬斯染色(B)並且在使用抗-NB的蛋白質印跡分析中(C)檢測圖51:TNF56-PEG40在SuperdexHR75上的分析型大小排阻層析圖52:TNF56-PEG40在SuperdexHR200上的分析型大小排阻層析圖53:與Enbrel(依那西普)，Humira(阿達木單抗)和Remicade(英夫利昔單抗)相比，使用納米體tmTNF56-PEG40和単價野生型納米體tmTNF1在使用人TNFa的細胞毒性檢測中獲得劑量應答曲線圖54:與Enbrel(依那西普)，Humira(阿達木單抗)和Remicade(英夫利昔單抗)相比，使用納米體TMTNF56-PEG40在使用恆河猴TNFa的細胞毒性檢測中獲得劑量應答曲線圖55:在小鼠中靜脈內施用後聚乙二醇化的二價納米體tmTNF56-PEG40和TNF56-PEG60的藥物代謝動力學分析圖56:在小鼠中靜脈內施用後聚乙二醇化的二價納米體tm3E-3E-PEG40和雙特異性納米體tm3E-3E-AR1的藥物代謝動力學分析圖57:TNF56-PEG40和TNF56-PEG60在小鼠中的免疫原性圖表圖58:TNF60在小鼠預防慢性多發性關節炎的效果圖59:TNF60在小鼠中治療慢性多發性關節炎的效果圖60:TNF60納米體TM關於在小鼠中預防慢性多發性關節炎中的效果的格式化作用圖61:納米體TMPMP1C2,3E,1A和3G的序列比對圖62:TNF-60的分子模型後附的表格組成本說明書的完整部分，並且如下單價TNFa納米體表8:TNFa納米體的序列表表9:人TNFa納米體的Koff值表10:TNFa和血清白蛋白納米體與人種系序列的同源性表ll:TNFa和血清白蛋白納米體的表達水平表12:人和恆河猴TNFa的ELISA結合表13:TNFcx納米體的受體-抑制檢測表14:TNFa納米體的Biacore分析表15:TNFa納米體與TNFa的結合(Ko-值)表16:TNFa納米體中和人(a)和恆河猴(b)TNFa的能力表17:溫度處理後TNFa和血清白蛋白納米體的OD280nm表18:溫度處理後TNFa納米體的能力二價TNFa納米體表19:二價TNFa納米體和連接序列的序列表表20:二價TNFa納米體構建體表21:二價TNFa納米體的表達水平表22:二價TNFa納米體的受體-抑制檢測表23:TNFa納米體中和人(a)和恆河猴(b)TNFa的能力表24:二價TNFa納米體的OD280nm人源化的單價TNFa納米體表25:人源化單價TNFa和血清白蛋白納米體的序列表表26:人源化TNFa和血清白蛋白納米體的表達水平228表27:TNFa納米體中和人TNPa的能力表28:人源化TNFa和血清白蛋白納米體的OD280nm三價TNFa納米體表29:三價TNFa納米體的序列表表30:三價TNFa納米體構建體表31:三價TNFa納米體的表達水平表32:三價TNFa納米體中和人TNFa的能力表33:三價納米體與血清白蛋白的結合(KD-值)表34:三價TNFa納米體的OD280nm人源化單價TNFa納米體(第二輪)表35:第二輪人源化的單價TNFa納米體的序列表表36:人源化TNFa納米體的表達水平表37:TNFa納米體中和人TNFa的能力表38:人源化TNFa納米體的OD280nm表39:比較納米體的生物活性其它表格表40:用于格式化三價納米體TM的寡聚核苷酸的概括表41:用於克隆三價納米體TM的寡聚核苷酸的概括表42:與商購對照(依那西普，英夫利昔單抗,Humira)相比較，在使用三價納米體TMTNF60的細胞毒性檢測中獲得的EC50值表43:在Biacore中TNF60和TNF24關於人血清白蛋白的親和力確定。Nd，未確定。表44:用于格式化二價納米體TM的寡聚核苷酸的概括。表45:與商購對照(依那西普，英夫利昔單抗,Humira)相比較，在使用二價納米體TM的細胞毒性檢測中獲得的EC50值表46:來自於成纖維細胞研究的滑膜結果表47:鼠氣囊研究的結果實施例實施例l:TNFa和血清白蛋白特異性納米體的鑑定使用兩隻用人TNFa免疫的美洲駝CL/amag/ama)鑑定拮抗性納米體，所述美洲駝以一周的時間間隔注射6次的100嗎細胞因子進行免疫。篩選使用基於競爭的檢測進行，其中分析單個納米體抑制標記的TNFa與其受體結合的能力。白蛋白特異性納米體從用人血清白蛋白免疫的美洲駝鑑定。單個納米體的篩選通過使用人、恆河猴和小鼠白蛋白的ELISA進行，產生與各種物種的血清白蛋白交叉反應的一組納米體。實施例2:分離的納米體的序列分析基於序列分析(圖1)鑑定不同種類的納米體，所述分析使用BLOSUM62評分矩陣，並且相似度顯著值截斷點260%:種類I(PMPlC2,PMP1Gll，PMP1H6)，禾中類II(PMP1G5，PMP1H2，PMP3G2),禾中類lib(PMPlD2),禾中類III(PMP3D10,PMP5FIO)。表8歹U出這些TNFa糹內米體的序列(SEQIDNOs:52—60)。基於序列分析(圖2)，鑑定不同種類的血清白蛋白納米體，其使用BLOSUM62評分矩陣，並且相似度顯著值截斷點260%。表8列出這些血清白蛋白納米體的序列(SEQIDNOs:61—67)。實施例3:Biacore分析TNFa納米體與TNFa的結合特徵在於在Biacore3000設備中的表面等離振子共振。來自不同物種的TNF通過胺基偶聯共價結合CM5傳感器晶片表面，直到達到增加250個應答單位。保持反應性的基團失活。評估納米體在一種濃度(1/1,000稀釋)的結合。每一納米體注射4分鐘，流速45pl/分鐘，以允許與晶片一結合的抗原的結合。無納米體的結合緩衝液以相同的流速流過晶片4小時，以允許結合的納米體的自動解離。從關於不同納米體獲得的sensorgrams計算K。ff-值。在每一種類的納米體中，未純化的蛋白在Biacore中分析。K。ff數據在表9中列出。基於K。ff值，保留每一種類的代表性納米體用於進一步的分析。對於種類I，選擇PMP1C2(TNF1);選擇PMP1G5(TNF2)作為種類II的代表；選擇PMP5F10(TNF3)作為種類III的代表。血清白蛋白結合按照上述進行檢測，除了使用1/20稀釋之外。圖3，4和5舉例說明使用未純化的蛋白篩選相對於人、恆河猴和小鼠血清白蛋白的白蛋白特異性TNFa納米體。所述納米體按照K。fr值排列，參見下表in。tableseeoriginaldocumentpage231對於家族C和家族B的成員獲得最佳k。ff。對於這些家族的成員，還觀察到小鼠、人和恆河猴血清白蛋白之間的交叉-反應性。確定來自種類B和C的代表性納米體用於進一步分析選擇PMP6A6(ALB1)作為種類B的代表，並且選擇PMP6A8(ALB2)作為種類C的代表。實施例4:在pAX051中克隆單價納米體大腸桿菌表達載體的描述pAX051是pUC19的衍生物。它包含能夠使用IPTG進行可控的表達誘導的LacZ啟動子。所述載體具有氨苄青黴素或羧苄青黴素的抗性基因。多克隆位點攜帶一些限制性位點，其中S,I和&^1I通常用於克隆納米體tm。符合NB編碼序列的閱讀框，所述載體編碼C-端c-myc標記和(His)6標記。信號肽是gen3前導序列，其將表達的納米體tm轉運到細胞周質。將編碼所選擇的納米體TNF1(PMP1C2),TNF2(PMP1G5),TNF3(PMP5F10),ALB1(PMP6A6)和ALB2(PMP6A8)的DNA克隆到pAX051中，並且將構建體轉化到TG1電感受態細胞中。分析克隆的PCR插入，並且在4個陽性克隆中確定核苷酸序列。從包含正確序列的克隆製備甘油儲液，並且保存在-80。C。實施例5:單價納米體的表達通過將表達代表性納米體的克隆的單菌落在37°C接種在LB，氨苄青黴素/羧苄青黴素(10(^g/ml)和2%葡萄糖中過夜而開始預培養。這一預培養物用來接種。接種體是生產培養物(TB培養基+氨苄青黴素/羧苄青黴素+0.1%葡萄糖)的l^(v/v)。將所述生產培養物在37°C生長直到達到OD600nm5-10，並且通過加入IPTG(lmM終濃度)誘導納米體表達。允許蛋白表達在37°C持續4小時或在28°C過夜，在所述時刻通過離心收集細胞並且將溼細胞團保存在-20。C。通過將沉澱物重懸在Peri-緩衝液(50mMNaH2P04，300mMNaCl,調整pH值到8.0)，將所述混合物在4。C旋轉30分鐘，並且使用製備離心機(SorvallRC-3C屍/M，具有H-6000A轉子)離心所述混合物以沉澱細胞，而製備所述-20。C保存的溼細胞團的預製備細胞周質提取物。收集代表細胞外周間隙的粗提取物的上層清液，用於進一步純化。將His(6)-標記的納米體在固定的金屬親和層析(IMAC)上純化。按照廠商的說明處理TALON樹脂(Clontech)。將所述提取物與樹脂一起在旋轉器上在RT溫育30分鐘。將樹脂用PBS洗滌，並且轉移到柱上。將填裝的樹脂用15mM咪唑洗滌。使用150mM咪唑將納米體從柱上洗脫下來。通過點樣在Hybond膜上並且用麗春紅顯現而分析洗脫的級分。收集包含蛋白的級分，並且針對PBS進行透析。收集透析的蛋白，過濾除菌，確定濃度，並且將等分試樣保存在-20。C。單價TNFa納米體的特徵性描述實施例6:與人種系序列同源將納米體的胺基酸序列與人種系序列比較，如表10所述。在與人序列同源的順序中，納米體排列如下對於TNFa納米體，TNF1>TNF2>TNF3;對於血清白蛋白納米體ALB1>ALB2。實施例7:表達水平計算表達水平，並且在表11中描述。在產量順序中，納米體排列如下對於TNFa納米體，TNF1>TNF2>TNF3;對於血清白蛋白納米體AIJB1>ALB2。實施例8:十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳分析為了確定純度，將蛋白樣品在15%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳凝膠上分析。將10plLaemmli樣品緩衝液加入到10|il(lug)純化的蛋白中，將樣品在95。C加熱IO分鐘，冷卻，並且上樣到15%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳凝膠上。凝膠按照通用步驟處理，並且用考馬斯亮藍(CBB)染色。圖6描繪TNFa-特異性和血清白蛋白-特異性納米體的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳。實施例9:蛋白質印跡分析將100ng純化的蛋白上樣在凝膠上。在十二垸基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳後，使用MiniTrans-Blot⑧電泳轉移元件(Biorad)將蛋白轉移到硝基纖維素膜上。將所述膜在4°C在PBS,1°/。酪蛋白中封閉過夜。由於所有的構建體都融合c-myc標記，所以將小鼠單克隆抗-myc抗體用作檢測工具。另外，兔多克隆抗-納米體(R23)用作檢測工具。將印跡在室溫下在1/2000稀釋在PBS中的抗-myc抗體中或在PBS中的1/2000抗-納米體抗體，1%酪蛋白中攪拌溫育1小時。在應用二抗(兔-抗-小鼠IgG鹼性磷酸酶綴合物，Sigma,A1902,1/1000稀釋在PBS中，或者山羊抗-兔IgG鹼性磷酸酶綴合物，Sigma,A8025,1%酪蛋白)之前將所述膜在PBS中洗滌5次。在室溫輕微攪拌溫育1小時後，將所述膜在PBS中洗滌5次。使用BCIP/NBT溶液顯現印跡，並且當條帶清楚可見時，通過用milliQ水洗滌所述印跡而終止反應。圖7描繪蛋白實施例10:在ELISA中與人和恆河猴TNFa的結合進行ELISA，檢驗與人和恆河猴TNFa的結合。將96-孔Maxisorp平板用在PBS中的2嗎/mlNeutravidin在4°C包被過夜(ON)。將平板用1%的酪蛋白在室溫封閉2小時。將生物素醯化的TNFa(400ng/ml)加入到孔中，並且在室溫溫育l小時。使用1/3稀釋並且從2pg/ml起始稀釋納米體樣品。使用小鼠抗-myc(1/2000稀釋)和兔抗-小鼠鹼性磷酸酶(1/2000稀釋，Sigma，A1902)和pNPP(2mg/ml)作為底物檢測納米體。圖9和10描述ELISA中與人和恆河猴TNFa的結合。結果總結在表12中。TNF1和TNF3表現出與人和恆河猴TNFa都結合。TNF2結合人TNFa，但是只微弱地與恆河猴TNFa反應。實施例ll:受體-抑制檢測分析恆河猴和人TNFa抑制受體-配體相互作用的能力。將96-孔Maxisorp平板用在PBS中的2)ig/ml依那西普在4°C包被過夜。將平板用1%酪蛋白在室溫封閉2小時。納米體樣品與起始濃度為5pg/ml並且使用1/2稀釋的生物素醯化的TNFa(10ng/ml)在室溫預溫育30分鐘。將樣品添加到平板中，並且在室溫溫育l小時。使用Extravidin鹼性磷酸酶(1/2000稀釋)和pNPP(2mg/ml)作為底物檢測生物素醯化的TNFa。圖11和12描繪對於人和恆河猴TNFa的抑制性ELISA。結果總結在表13中。關於人和恆河猴TNF的TNF1和TNF3觀察到配體/受體結合的抑制，而TNF2隻抑制人TNFa。實施例12:Biacore分析TNFa結合所述分析按照實施例3所述進行。圖13和14通過Biacore分析舉例說明與人和恆河猴TNFa的結合。結果總結在表14中。Biacore中的結合實驗證實ELISA結果對於TNF1和TNF3交叉-反應結合，而TNF2隻顯著性地結合人TNTFa。血清白蛋白結合按照上述進行檢測，除了使用不同濃度系列之外。每一濃度注射4分鐘，流速45pl/分鐘，以允許與晶片-結合的抗原的結合。將無分析物的結合緩衝液以相同流速流過所述晶片，以允許結合的納米體的解離。15分鐘後，通過注射再生溶液(25mMNaOH)而去除殘留的結合分析物。當達到平衡時，通過穩態親和力從每一分析物的不同濃度獲得的sensorgmms計算Kd-僮。結果總結在表15中。對於ALB1和ALB2觀察到交叉-反應性。對於ALB2，觀察到與人和恆河猴TNFa的最高親和力。然而，對於ALB2(因子400)，在對於人/恆河猴相對於小鼠血清白蛋白的親和性中的差異更明顯，而對於ALB1，只觀察到因子12的不同。實施例13:生物-檢測TNFa敏感的小鼠成纖維細胞細胞系L929s用於檢測所選納米體的抗-TNFa活性c在培養基中存在足夠高濃度的TNFa時，即，細胞毒性劑量，L929s細胞經歷壞死。TNFa與其受體的相互作用的抑制通過在將混合物加入到細胞中之前將一系列抗體稀釋物與細胞毒性濃度的TNFa預溫育而確定。放射菌素D在培養基中的存在使得細胞對TNFa更敏感，導致對於游離TNFa的增加的生物檢測敏感性。將L929細胞生長至幾乎匯合，以每孔5000個細胞接種在96-孔微量滴定平板上，並且培養過夜。向細胞中加入放射菌素D，終濃度為1pg/ml。將要檢測的所述納米體的連續稀釋液與細胞毒性濃度的TNFa(最終檢測濃度為0.5ng/ml或15IU/ml)混合。在37°C溫育至少30分鐘後，將這一混合物添加到接種的孔中。將平板在37°C和5。％C02培養24小時。通過使用四唑鹽WST-1確定細胞的生存能力。劑量-應答曲線和ECm)信用GraphpadPrism計算。關於人和恆河猴TNFa結果總結在表16中。基於它們中和細胞毒性活性的能力，分子排列如下對於人TNFa，TNF3>TNF1>TNF2，並且對於恆河猴TNFa，TNF1=TNF3>TNF2。實施例14:蛋白質A結合圖14描繪按照實施例12所述在Biacore中分析的蛋白質A結合。對於TNF1，TNF2,ALB1獲得陽性結合。對於TNF3和ALB2觀察到沒有結合或微弱的結合。實施例15:溫度穩定性將樣品稀釋為200pg/ml，並且分成包含500pl的8個等分試樣。不同的小瓶分別在從室溫到90。C範圍的給定溫度溫育。處理後，將樣品在室溫冷卻2小時，將它們保存在4。C。通過在14,000rpm離心30min去除沉澱。將上清液(SN)仔細地去除並且進一步分析。OD280nm檢測280nm的0D，並且計算濃度。結果總結在表17中。對於TNF2和TNF3從80。C開始觀察到蛋白含量的減少，而對於ALB2，從70°C開始觀察到減少。蛋白質印跡將2嗎處理的蛋白在15%十二垸基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳上分離，並且轉移到硝基纖維素膜上，並且按照上述處理。使用多克隆抗-納米體(R23,1/2000稀釋)和抗-兔辣根過氧化物酶(DAKO,P0448,1/2000稀釋)進行檢測。圖15描繪蛋白質印跡分析。對於在70，80和90。C處理的ALB2觀察到蛋白濃度的明顯的下降。對於在70，80和90°C處理的TNF1;對於在90。C處理的TNF3;對於在90°C處理的ALB1，也觀察到聚集，意味著上清液仍然包含痕量的沉澱物，這導致更高的OD280nm讀取值。這解釋為什麼對於在這些更高的溫度處理的TNF1、TNF3和ALB1當在OD280nm檢測時蛋白濃度不減少。ELISA檢測與人TNFa結合的ELISA基本上按照實施例10所述進行。結果在圖16中描繪。對於TNF1，TNF2,TNF3，從80。C開始，人TNFa結合下降。生物-檢測生物-檢測按照實施例13所述進行。結果總結在表18中。對於TNF1從70。C開始；對於TNF2和TNF3從80。C開始，納米體的效果降低。Bhcore按照實施例12所述確定與人血清白蛋白的結合。使用固定的濃度(1/50稀釋)。結果在圖17中描繪。對於ALB1，溫度處理不影響與血清白蛋白的結合。對於ALB2，所述處理從T-70。C開始對有k。n影響。二價納米體實施例16:二價TNFa特異性納米體的格式化將TNF1，TNF2和TNF3格式化成二價納米體。9AAGlySer接頭(表19SEQIDNo:68)或30AAGlySer接頭(表19SEQIDNo:69)用作兩個結構單元之間的間隔。這產生由表20代表的構建體。表19列出這些二價TNFa納米體的序列(SEQIDNOs:70-75)。實施例17:二價TNFa特異性納米體的表達表達按照實施例5中所述進行。將His(6)-標記的納米體在固定的金屬親和層析(IMAC)上純化。按照廠商的說明處理Ni-NTA樹脂(Qiagen)。將所述提取物與樹脂一起在旋轉器上在室溫溫育30min。將樹脂用PBS洗滌，並且轉移到柱上。將填裝的樹脂用PBS(1/10稀釋)洗滌。柱用15mM咪唑預洗脫。使用25mM檸檬酸pH-4將納米體從柱上洗脫下來。通過點樣在Hybond膜上並且用麗春紅顯現而分析洗脫的級分。合併包含蛋白的級分，並且通過陽離子交換然後大小排阻而進一步純化。收集純化的蛋白，過濾除菌，確定濃度，並且將等分試樣保存在-20。C。二價TNFa特異性納米體的特徵性描述實施例18:表達水平表21中計算並且描述二價TNFa納米體的表達水平。接頭對納米體的表達水平沒有顯著影響。實施例19:十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳按照實施例8中所述進行。圖18顯示十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳的結果。實施例20:蛋白質印跡蛋白質印跡分析按照實施例9中所述進行。圖19描繪蛋白質印跡結果。實施例21:受體-抑制檢測所述檢測按照實施例11中所述進行。圖20和表22描繪結果。與單價形式相比，對於所有二價納米體觀察到配體/受體結合抑制的增強。實施例22:生物-檢測所述檢測按照實施例13中所述進行。結果總結在表23中。基於它們中和細胞毒性活性的潛力，TNF8，TNF7,TNF9和TNF5在依那西普範圍內具有潛力。實施例23:溫度穩定性樣品按照實施例15中所述進行分析。OD280nm檢測280nm處OD並且計算濃度。結果總結在表24中。對於TNF4和TNF7從70°C開始觀察到蛋白含量的減少，而對於TNF5,TNF6，TNF8和TNF9從80°C開始觀察到減少。蛋白質印跡按照實施例15中所述分析樣品中聚集物的存在。ELISA檢測與人TNFa結合的ELISA基本上按照上述進行。結果在圖21中描繪。對於TNF5，TNF6,TNF8禾口TNF9從80。C開始，對於TNF4和TNF7從70。C開始，人TNFa結合下降。人源化的單價納米體實施例24:鑑定TNFa和血清白蛋白特異性納米體中的非-人胺基酸位置圖22(，l)，圖23(TNF2)，圖24(TNF3)和圖25(ALB1)描述使用DP51,DP53，DP54和DP29序列的多序列比對(ClustalW1.7)。除了胺基酸突變，進行密碼子最優化，產生表25SEQIDNOs:76-89的序列(分別針對TNFa和人血清白蛋白的納米體)。實施例25:產生密碼子最優化的突變體合成跨越納米體的完整序列的寡聚核苷酸。實施例26:表達二價TNFa特異性納米體表達按照實施例5中所述進行。人源化納米體的特徵性描述實施例27:表達水平表26描述計算的表達水平。以3.5-11.7mg/ml範圍的產量實現表達。誘導時間不影響產量。實施例28:十二垸基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳按照實施例8中所述進行。圖26描繪十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳凝膠。實施例29:蛋白質印跡蛋白質印跡分析按照實施例9中所述進行。圖27描繪蛋白質印跡結果。實施例30:生物-檢測所述檢測按照實施例13中所述進行。人源化納米體的結果總結在表27中。包括野生型納米體作為參照。實施例31:Biacore所述分析按照實施例12中所述進行。圖28和31顯示Biacore結果。實施例32:溫度穩定性樣品按照實施例15中所述進行分析。OD280nm檢測280nm的OD，並且計算濃度。結果總結在表28中。對於人源化的TNF1納米體(TNF13-14)，在蛋白濃度中沒有觀察到顯著減小。對於人源化的TNF2(TNF15-19)和TNF3(TNF20-23)從80°C開始觀察到蛋白濃度的減小。對於人源化的ALB1(ALB4-5)從70。C開始，和對於ALB3從60°C開始觀察到蛋白濃度的減小。蛋白質印跡按照實施例15中所述分析樣品中聚集物的存在。ELISA檢測與人TNFa的結合的ELISA基本上按照實施例15中所述進行。結果在圖30中描繪。對於溫度處理的野生型TNF1和人源化的TNF13和14;對於溫度處理的野生型TNF2和人源化的TNF15-19;人TNFa結合相當；與溫度處理的野生型TNF3相比，對於TNF21和22，人TNFa結合下降，並且對於TNF23下降到更低程度，而對於TNF20沒有觀察到影響。三價TNFa納米體實施例33:三價TNFa特異性納米體的格式化將TNFl,TNF2，TNF3和ALB1格式化成三價納米體。9AAGlySer接頭(表19SEQIDNo:68)或30AAGlySer接頭(表19SEQIDNo:69)用作兩個結構單元之間的間隔。這產生表30中的構建體。表29列出這些三價TNFa納米體的序列(SEQIDNOs:91-94)。實施例34:三價TNFa特異性納米體的表達表達按照實施例5中所述進行。將His(6)-標記的納米體在固定的金屬親和層析(IMAC)上純化。按照廠商的說明處理Ni-NTA樹脂(Qiagen)。將所述提取物與樹脂一起在旋轉器上在室溫溫育30分鐘。將樹脂用PBS洗滌，並且轉移到柱上。將填裝的樹脂用PBS(1/10稀釋)洗滌。用15mM咪唑預洗脫。使用25mM檸檬酸pH二4將納米體從柱上洗脫下來。通過點樣在Hybond膜上並且用麗春紅顯現而分析洗脫的級分。合併包含蛋白的級分，並且通過陽離子交換然後大小排阻而進一步純化。收集純化的蛋白，過濾除菌，確定濃度，並且將等分試樣保存在-20。C三價TNFa/SA特異性納米體的特徵性描述實施例35:表達水平在表31中計算並且描述表達水平。實施例36:十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳分析十二垸基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳按照實施例8中所述進行。圖31顯示SDS-PAGE凝膠。實施例37:蛋白質印跡分析蛋白質印跡分析按照實施例9中所述進行。圖32描繪蛋白質印跡結果。.實施例38:生物-檢測所述檢測按照實施例13中所述進行。二價納米體的結果總結在表32中。基於它們中和細胞毒性活性的潛力，所述分子潛力相等，並且相當於它們作為二價分子的潛力。實施例39:結合人血清白蛋白結合按照上述進行檢測，除了使用不同濃度系列之外。每一濃度注射4分鐘，流速45pl/min，以允許與晶片-結合的抗原的結合。接下來將無分析物的結合緩衝液以相同流速流過所述晶片，以允許結合的納米體的解離。15分鐘後，通過注射再生溶液(25mMNaOH)而去除殘留的結合分析物。當達到平衡時，通過穩態親和力從每一分析物的不同濃度獲得的sensorgrams計算Kd-信。結果總結在表33中。與野生型ALB1相比，對于格式化的ALB1粘合劑觀察到親和力的減小。然而，所述親和力仍然在7.2-14nM範圍內。實施例40:溫度穩定性樣品按照實施例15中所述進行分析。OD280nm檢測280nm處OD並且計算濃度。結果總結在表34中。對於TNF24，TNF27和TNF28從60°C開始，而對於TNF25和TNF26從70。C開始觀察到蛋白含量的減少。蛋白質印跡按照實施例15中所述分析樣品中聚集物的存在。ELISA檢測與人TNFa結合的ELISA基本上按照上述進行。結果在圖33中描繪。對於TNF24和TNF27從60°C開始，對於TNF25，TNF26和TNF28從70。C開始，人TNFa結合下降。人源化的單價納米體(第二輪)實施例41:鑑定TNFa和血清白蛋白特異性納米體中的非-人胺基酸位置圖34(TNF1),圖35(TNF2)，圖36(TNF3)和圖37(ALB1)描述使用DP51,DP53,DP54和DP29序列的多序列比對(ClustalW1.7)。突變的分子按照上述表達和純化，產生表35SEQIDNOs:95-104的序列(分別針對TNFa和人血清白蛋白)。人源化納米體的特徵性描述實施例42:表達水平表36描述計算的表達水平。以0.5-2.7mg/ml範圍的產量實現表達。實施例43:十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳按照實施例8中所述進行。圖38描繪808-Page凝膠。實施例44:蛋白質印跡蛋白質印跡分析按照實施例9中所述進行。圖39描繪蛋白質印跡結果。實施例45:生物-檢測所述檢測按照實施例13中所述進行。人源化納米體的結果總結在表37中。包括野生型納米體和第一輪人源化納米體作為參照。實施例46:Biacore所述分析按照實施例12中所述進行。圖40顯示Biacore結果。實施例47:溫度穩定性樣品按照實施例15中所述進行分析。OD280nm檢測280nm的OD，並且計算濃度。結果總結在表28中。對於人源化的TNF1納米體(TNF29-30)，在蛋白濃度中沒有觀察到顯著減小。對於人源化TNF2(TNF31-32)和TNF3(TNF33)從80°C開始觀察到蛋白濃度的減小。蛋白質印跡按照實施例15中所述分析樣品中聚集物的存在。ELISA檢測與人TNFa的結合的ELISA基本上按照實施例15中所述進行。結果在圖41中描繪。對於野生型TNF1和人源化的TNF29和30;對於野生型TNF2和人源化的TNF31和TNF32;並且還對於野生型TNF3和人源化的TNF33,人TNFa結合相當。比較實施例在這一比較實施例中，將本發明的9個納米體與WO04/041862的分別叫作"VHH#1A"或"1A","VHH3E，，或"3E"和"VHH#3G"或"3G"(在WO04/041862中，SEQIDN0S:l，4禾t15)的3個納米體進行比較。所用檢測是使用WO04/41862中提到的KYM-細胞的基於細胞的檢測(例如，參見實施例1中第3))。結果在下表39中提到。可以看出，本發明的納米體在這一檢測中具有比3E的EC50值好18倍的EC50值，3E是按照WO04/41862表現最好的納米體。實施例48:產生三價雙特異性人源化的納米體TM將三價雙特異性納米體格式化，並且首先克隆在大腸桿菌表達載體pAX054中，然後通過PCR拯救(rescued)，並且克隆在pPICZaA表達載體中。244犬遊磨教載微縦pAX54是pUC19的衍生物。它包含能夠使用異丙基-(3-D-硫代半乳糖苷進行可控的表達誘導的LacZ啟動子。所述載體具有氨苄青黴素或羧苄青黴素的抗性基因。多克隆位點攜帶一些限制性位點，其中S力I和&^H通常用於克隆納米體tm。信號肽是gen3前導序列，其將表達的納米體tm轉運到細胞周質。醋鮮郝錄這載柳箱述pPICZaA包含允許在大腸桿菌中增殖的pUC-來源的複製起點。它包含P/c/H'a/oston;y」OY7(醇氧化酶l)基因的啟動子。這一942bp的啟動子區(i)允許目的基因的甲醇-誘導的、高水平的表達，並且(ii)在用5'」OW啟動子區內線性化的載體DNA轉化Pichia後，將質粒結合靶向」OY7基因座。注意，pPICZoc載體不包含酵母的複製起點，並且因此，如果在所述質粒和畢赤酵母基因組之間發生重組，可以只分離轉化體。在大腸桿菌和巴斯德畢赤酵母宿主細胞中，所述載體指定對抗生素Zeocin的抗性。所述載體結合釀酒酵母oc-交配因子的分泌信號，所述分泌信號允許大部分蛋白向培養基有效分泌。a-因子信號序列的起始ATG對應JOW基因的天然起始ATG。多克隆位點擁有一些限制性位點，其中j^oI/五caR7或屈oI/A^/典型地用於將納米體tm編碼序列與分泌信號融合。多克隆位點之後接^OZ/轉錄終止區。關於這一表達載體的更多詳情可以在Invitrogen網址(http:〃www.invitrogen.com/content/sfs/manuals/ppiczalpha—man.pdf)上找到。潛式眾三份謝苯沐使用在WPA-0012中顯示的寡聚物組合，建立3個獨立的PCR反應，以擴增N-端、中間和C-端納米體tm亞基。N-端納米體tm使用M13—rev/Rev—9GlySer—L108擴增；中間納米體tm使用For—GlySer/Short和Rev—15BspEI—L108擴增；0端納米體，使用For—BspEI/M13—擴增。準備PCR反應1nl質粒DNA(50-100ng)，1.5)il正向引物(10pM—300nM):1.5pl反向引物(IOjuM—300nM)，1pidNTPs(10mM—0.2mM),5)nl緩衝液(10x—lx),0.75|il酶(3.5U/V1—2.6，)和39.25piH20，總體積50pl。引物序列在表40中給出。PCR程序以在94。C2分鐘起始。94°C30秒，50°C30秒和72°C1分鐘的循環重複30次，並且接著在72°C10分鐘。通過在2%瓊脂糖凝膠上分離5piPCR反應液而檢驗擴增。使用QIAquickPCR純化試劑盒按照廠商的用法說明純化PCR產物。使用一個柱子，並且用50^EB緩衝液洗脫。N-端VHH片段通過將50|ilDNA和2pi5amM(10Ul)在廠商推薦的適當的緩衝液中在37°C溫育2小時而製備。隨後，加入2nl胡I(10U/Vl)，並且將混合物在55。C溫育2小時。中間VHH片段通過將50piDNA和2|il5am//I(10Ul)和2pi(10U&l)在廠商推薦的適當的緩衝液中在37。C溫育2小時而製備。C-端VHH片段通過將50|ilDNA和2^S^^I(10U/)il)在廠商推薦的適當的緩衝液中在37。C溫育2小時而製備。隨後，加入2jil&fMI(10U/pl)，並且將混合物在60。C溫育1小時。將先前的消化反應物在2%瓊脂凝膠上分離。將VHH條帶(350-450bp)從凝膠上切下，並且使用QIAquick凝膠提取試劑盒按照廠商的用法說明純化DNA。使用一個柱子(每個柱最大400mg瓊脂糖凝膠)，並且用50|ilEB緩衝液洗脫結合的DNA。通過測定OD260而確定DNA濃度(lOD單位=50pg/ml)。準備終體積10pl的連接混合物，其包含100ng載體pAX54，12ngN-端VHH，12ng中間VHH片段，12ngC-端VHH片段，1^連接緩衝液和1pl連接酶(3U)，並且在室溫溫育2小時。使用2^連接混合物轉化大腸桿菌TG1。按照WPA-0010所述使用PCR分析克隆。對陽性克隆進行序列分析。使用QiaprepspinMiniprep試劑盒(Qiagen)按照廠商的用法說明和上文所述進行質粒製備。在VIB測序設備，Antwerp,Belgium進行觀!J序。將克隆在pAX054大腸桿菌表達載體中的納米體TM編碼區使用適當的弓I物對通過PCR進行拯救。為了確保所述納米體TM表達具有天然N-端，將所述編碼區符合閱讀框地克隆在分泌信號的Kex2切割位點。正向引物將所述分泌信號的C-端部分，直到屈ol識別位點，與所述納米體TM編碼區融合。準備PCR反應1pl質粒DNA(50-100ng),1.5|al正向引物(l0pM—300nM),1.5pi反向引物(IOpM—300nM)，1pidNTPs(10mM—0.2mM),5^緩衝液(10x—lx)，0.75^酶(3.5U/pl—2.6U/pl)和39.25piH20，總體積50jul。引物序列在表41中給出。PCR程序以在94。C2分鐘起始。94。C30秒，50。C30秒和72。C2分鐘的循環重複20次，並且接著在72°C10分鐘。通過在2%瓊脂糖凝膠上分離5plPCR反應物而檢驗擴增。使用QIAquickPCR純化試劑盒按照廠商的用法說明純化PCR產物。使用一個柱子，並且用50^EB緩衝液洗脫結合的DNA。克麟遊將編碼NB的DNA片段以及pPICZaA表達載體用適當的限制酶(lol+A^I)消化。插入片段通過將50piPCR產物與2pHoI(10U/pl)和2pl7Vofl(10U/)il)在廠商推薦的適當的緩衝液中在37°C溫育3小時而獲得。載體類似地獲得，使限制酶的量適應質粒的量。純化載體和NB編碼片段，並且使用BioPhotometer(Eppendorf)定量DNA濃度。將所述片段和接納載體以等摩爾比例使用i單位T4連接酶(Promega)在室溫下連接30分鐘或者在16。C連接過夜。將所述DNA(20-30ng)轉化TGl細胞。使用3'A0X1R和5'A0X1F引物通過PCR分析菌落。關於陽性克隆進行序列分析。將TNF30，TNF33和ALB8格式化成三價雙特異性納米體TM。9AAGlySer接頭用作結構單元之間的間隔。存眾巴箭德華漆縻母為了分離質粒DNA，通過將所述克隆的單菌落接種在5011111^+氨苄青黴素或羧苄青黴素(10(^g/ml)+2%葡萄糖中並且在37°C培養過夜而起始預培養。使用PlasmidMidi試劑盒(Qiagen)按照廠商的用法說明製備質粒DNA。通過將30叫質粒DNA與6pl^Lfl(10U/pl)按照廠商用法說明在適當緩衝液中在45°C溫育3小時而將所述DNA線性化。將消化的DNA使用PCR純化試劑盒(Qiagen)按照廠商說明純化。所述DNA使用EtOH沉澱按照標準步驟進行濃縮。將10線性化的DNAX-33電轉化感受態細胞，並且允許細胞在包含Zeocin(100/250/500lag/ml)的選擇性YPD瓊脂平板上生長48小時。X-33是野生型巴斯德畢赤酵母菌株；所述菌株本身以及所衍生的重組菌株包含天然力a打基因，並且能夠代謝甲醇(Mut+)。通過在24—孔平板中將單菌落接種在1mlBGCM中，並且將它們在30°C120rpm生長48小時來篩選克隆的表達水平。離心細胞，並且向所述細胞中加入新鮮的BMCM，在30。C120rpm生長48小時。然後，加入MeOH至終濃度0.5。/。，並且細胞在30。C120rpm生長8小時，之後再次加入MeOH至終濃度0.5。/。。細胞在30。C120rpm生長過夜。離心細胞，並且收集上層清液，並且按照實施例10中所述在ELISA中分析。實施例49:三價雙特異性人源化納米體TM的表達和純化把微辯,賴產緩衝液、溶液和其它的組合物可以在Invitrogen網址(http:〃www.invitrogen.com/content/sfs/manuals/ppiczalpha—man.pdf)上找到。通過將來自平板的單菌落接種在5mlYPD中而開始預培養。培養物在180rpm和30。C生長過夜。第二天，將預培養物稀釋到50mlYPD中，並且在180rpm和30°C生長過夜。生產培養物通過將預培養物接種至最終OD600nm=0.04-0.08而開始。培養物在BGCM中在30°C180rpm生長24小時，並且在4，500rpm離心30分鐘。將細胞以初始體積的1/3重懸在BMCM培養基中，最終OD600nm二15-20。將細胞在規律性時間點用MeOH誘導，典型地3次/天，從不超過1^MeOH濃度。誘導50個小時後收集上層清液。在巴箭德華漆縻母申表達遊謝苯體效教眾培養物上清在.22)im過濾膜Micro過濾器(Hydrosart,Sartorius)上過濾。使用在lOkDa超濾膜(HydroSart,Sartorius)上的滲濾濃縮樣品，並且濃縮至0.5-lL。將納米體TM使用蛋白質A親和層析(MabSelectXtra，GEHealthcare)進行純化，其使用PBS作為運行緩衝液，而甘氨酸[100mMpH-2.5]洗脫。使用1.5MTrispH=8.8中和樣品。納米體TM在陰離子交換層析(Source30Q，GEHealthcare)中進一步處理。將樣品用10mM哌嗪pH=10.2稀釋IO—倍，並且用1MNaOH調整至pH=10.2，並且用MilliQ水調整至電導率〈2mS/cm。將納米體在大小排阻層析(Superdex75pg,HiloadXK26/60,GEHealthcare)中處理，並且通過陰離子交換層析(Source30Q,GEHealthcare)通過流過5ml柱而去除LPS，所述柱用1MNaOH淨化，並且在DulbeccoPBS中平衡。為了確定純度，蛋白樣品按照實施例8中所述在15%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳凝膠上進行分析。所述凝膠使用SilverQuestTM按照廠商(Irwitrogen)所述的通用步驟進行處理。備選地，凝膠使用如實施例8和9中所述的考馬斯亮藍或在蛋白質印跡中進行分析。結果在圖42中給出。實施例50:三價雙特異性人源化納米體TM的特徵性描述TNF60由363個胺基酸組成。所述蛋白具有38,441Da的分子量。pl為8.71。280nm的消光係數是1.736。處譜蛋白質量按照標準步驟在ESI-MS中確定。TNF60的理論質量是38,441Da。所述蛋白具有2個S-S橋，這將在ESI-MS中導致38,435Da的質量。對於來源於3種不同批次的TNF60，實驗確定的質量在38,433Da一38,435Da範圍，與理論質量最大差別0.005%。N—端測序通過Edman降解按照標準步驟進行。N—端測序表明，前7個胺基酸的蛋白序列如下EVQLVES。這與理論蛋白序列一致，其顯示正確的N—端處理。藩力力樣品(IOOug)在高分辨Superdex75柱上分析，以描述不同批次的納米體TM的性質。納米體TM的大小排阻層析典型地產生對稱峰，在Superdex75上的保留時間為11.5ml。典型地記錄在280，254和214nm的吸收。214nm檢測允許更高的檢測靈敏度。在PBS中的分析大小提供對稱峰。沒有觀察到汙染物。對於3種不同批次觀察到的保留時間為11,5-11,55ml。代表性的圖表在圖43中顯示。實施例51:ELISA中TNF60與人TNFa的結合TNF60的官能性，即，與人TNFa的結合，按照實施例10所述在ELISA中進行分析。結果總結在圖44中，並且清楚地顯示2批次TNF60與人TNFa的劑量-依賴性的和飽和的結合。實施例52:在基於細胞的檢測中的官能性在實施例13所述的基於細胞的檢測中分析中和TNFa的細胞毒性活性的效力。結果總結在表42中和圖45和46中。數據表明TNF60具有在Enbrel/依那西普範圍的效力，和比Humira/阿達木單抗和Remicade/英夫利昔單抗10倍更好的效力。實施例53:TNF60與血清白蛋白的結合與人和恆河猴血清白蛋白的結合如實施例12中所述在Biacore中進行分析。KD,kon和koff值在表43中描述。將TNF60與TNF24比較，TNF24是具有野生型結構元件的三價雙特異性親本納米體TM。TNF60對人和恆河猴血清白蛋白的親和力相似。與對於TNF24觀察到的親和力相比較，親和力低2倍，所述TNF24是TNF60的野生型類似物。對於這兩種分子，K。n相同，而koff對於TNF60高2倍。實施例54:三價雙特異性人源化的納米體在小鼠中的藥物代謝動力學和免疫原性分析動物DBA1或BALBc小鼠在紅外燈下溫暖，並且在尾部靜脈內注射200pl納米體TM(每隻小鼠100嗎)。通過在尾部切小口並將血液收集到微管中，而在不同的時間點獲得樣品。典型地，血液在t-15分鐘,2小時，4小時，6小時，1天，2天，3天，4天，7天，14天取樣。血清按照標準步驟製備。裙定V、鎵i辦腳f，濃度將微量滴定平板(NUNC,Maxisorb)用2pg/mlneutravidin在4°C包被過夜。平板用PBS/0.05。/。吐溫-20洗滌5次，並且在室溫用PBS/l。/。酪蛋白封閉2小時。將生物素醯化的人TNFa(1/2000在PBS/0.2。/o酪蛋白中；400ng/ml)塗覆到孔上，並且在室溫溫育1小時。應用標準參照納米體TM，從濃度5pg/ml起始，並且使用在包含1%小鼠血漿的PBS中的5倍稀釋。允許納米體TM在室溫結合2小時。將所述平板洗滌5次，並且在室溫應用2000倍稀釋的兔多克隆抗-納米體(R23)1小時。洗滌平板之後，在室溫用3000倍稀釋的山羊-多克隆-抗-兔HRP(DAKO)檢測結合1小時，並且用ABTS/Eb02染色。檢測OD405nm。這一第一次ELISA用來確定標準參照的線性範圍。在第二次ELISA中，所述標準參照使用在這一線性範圍的濃度，並且典型地使用2倍稀釋液。在這種第二次ELISA中，將血清檢測樣品稀釋100倍，並且還在1%小鼠血漿中製備5倍稀釋液，以確定其中所述血清樣品提供在標準曲線的線性範圍內的讀出數的稀釋液。在第三次ELISA中，將血清樣品以在所述第二次ELISA中確定的適當濃度進行稀釋，並且使用2倍稀釋液，以精確確定所述血清樣品中的納米體TM濃度。進行實驗，確定TNF60在小鼠(i^3)中的藥物代謝動力學曲線。在施用後15分鐘達到103,84士31pg/ml的Cmax值。半衰期(tl/2卩)確定為1.9天，與小鼠血清白蛋白的半衰期相似，表明TNF60適應血清白蛋白的半衰期。數據在圖47中描繪。線定//、^^遊i^-謝米沐拔體納米體TM以在pbs中5pg/ml在4。C包被過夜。平板用PBS/0.05。/o吐溫-20洗滌5次，並且在室溫用PBS/l。/。酪蛋白封閉2小時。血清樣品稀釋100倍，並且塗覆到孔上，在室溫溫育l小時。檢測使用1000倍稀釋的多克隆兔抗-小鼠-HRP(DAKO，P0260)和使用ABTS作為底物而進行。血清樣品稀釋50倍，並且分析小鼠抗一TNF60抗體的存在。對於TNF60證明缺乏免疫原性。數據在圖48中描繪。實施例55:產生二價長半衰期人源化的納米體TM醋鮮赫被爐沐微遂參見實施例48潛式眾二份謝米伊M使用在WPA-0011中顯示的步驟，建立兩個獨立的PCR反應，以擴增N-端和C-端納米體tm亞基。對於擴增所述N-端納米體，使用PiForLong和Rev一30GlySer一L108作為引物組合；對於擴增所述C-端納米體tm，使用For—GlySer和PiRevCyslhum或者備選地使用For—GlySer和PiRevCys2hum，引入格式化所需要的限制性位點和C-端修飾所需要的游離半胱氨酸殘基。準備PCR反應1)il質粒DNA(50-100ng),1.5nl正向引物(10—300nM),1.5jil反向引物(10pM—300nM),1|ildNTPs(10mM—0.2mM)，5pi緩衝液(10x—lx),0.75|al酶(3.5U小l—2.6Ul)和39.25plH20,總體積50pl。引物序列在表44中給出。PCR程序以在94。C2分鐘起始。94。C30秒，50。C30秒和72。Cl分鐘的循環重複30次，並且接著在72°C10分鐘。通過在2%瓊脂糖凝膠上分離5^PCR反應物而檢驗擴增。使用QIAquickPCR純化試劑盒按照廠商的用法說明純化PCR產物。使用一個柱子，並且用50plEB緩衝液洗脫。N-端VHH片段通過將50plDNA和2pl5am/n(10U/^il)以及2nHoI(10U/]il)在廠商推薦的適當的緩衝液中在37°C溫育1.5小時而製備。C-端VHH片段通過將50|ilDNA和2pl5amHI(10U/pl)以及2plEcoiI(10U/)il)在廠商推薦的適當的緩衝液中在37°C溫育1小時而製備。將先前的消化反應物在2%瓊脂糖凝膠上分離。將所述VHH條帶(350-450bp)從凝膠上切下，並且使用QIAquick凝膠提取試劑盒按照廠商的用法說明純化DNA。使用一個柱子(每個柱最大400mg瓊脂糖凝膠)，並且用50piEB緩衝液洗脫結合的DNA。通過測定OD26。而確定DNA濃度(1OD單位=50jng/ml)。準備終體積10jul的連接混合物，其包含100ng載體pPICZaA,其被XhoI/EcoRI線性化，30ngN-端VHH，30ngC-端VHH片段，1jnl連接緩衝液和1pl連接酶(3U)，並且在室溫溫育l小時。使用2pl連接混合物轉化大腸桿菌TGl。按照WPA-0010所述使用PCR分析克隆，但是使用AOXIFor/AOXIRev引物組合。對陽性克隆進行序列分析。使用QiaprepspinMiniprep試劑盒(Qiagen)按照廠商的用法說明和上文所述進行質粒製備。在VIB測序設備,Antwerp,Belgium進行觀!l序。^眾巴梟蘑莩漆麒母參見實施例48。將TNF30格式化成二價納米體TM。30AAGlySer接頭用作兩個結構單元之間的間隔。為了允許C-端位點-特異性修飾，引入游離的半胱氨酸，作為納米體TM的最後AA，或者具有由GlyGlyGlyCys組成的額外的間隔。實施例56:二價長半衰期人源化的納米體TM的表達和純化^已Jf激華^瀠母中主產參見實施例49。縱二份鄉沐培養基通過離心和0.22pm過濾而不含細胞。無菌培養基保存在4°C直到進一步處理。低分子量的汙染物通過在10kDa超濾(UF)膜(HydroSartSartoconSliceCassette,Sartorius)上超濾而減少，如下述將4升培養基濃縮至0.5-1升，然後用5升PBS稀釋，並且再次濃縮至0.5升。這一操作進行兩次。UF的滯留物通過尼龍47mm膜0，45jnm(Alltech#2024)過濾。在下一步驟中，通過蛋白質A親和純化(使用MabSelectXtraTM,GEHealthcare)而從濃縮的培養基捕獲二價納米體TM。柱[35X100mm]在PBS中平衡，並且在樣品應用後用PBS徹底清洗。使用甘氨酸[100mM，pH-2.5]洗脫TNF56。MabSelectXtraTM的洗脫級分用Tris[1,5M,pH8,8]中禾口，並且保存在4。C。將TNF56濃縮，並且通過AEX(A=10mM哌嗪，pH10,8和B=1MNaCl在50mMTris中，pH7,5)使用Source30Q(GEHealthcare)進行純化。為了這一目的，納米體TM級分用A緩衝液(10mM哌嗪，pH10,8)稀釋至5mS/cm電導率，並且將pH調整到10,8。在將樣品上樣到柱上之前，將柱[25X100mm]在A緩衝液中平衡。TNF56用5個柱體積(CV)梯度洗脫。將收集的級分的pH用1MTrispH=7.8調整到7.8。在已資德単-糜母屮表這遊二份謝衰妒M遊覆z;二麒眾還嚴c-群麟變將二硫蘇糖醇(Dithiotreitol)(DTT，AldrichCat15,046-0)加入到中和的級分中，以減少在納米體TM的羧基端半胱氨酸之間形成的潛在的二硫橋(通常約20%)。發現終濃度10mM的DTT和在4。C溫育過夜是最優化的。還原通過分析型大小排阻層析(SEC)進行評估。因此，將25ial還原的納米體TM加入到75plD-PBS中，並且注射到在Dulbecco，sPBS(D-PBS,GibcoTMREF14190-094)中平衡的Sup7510/300GL柱上。未還原的納米體TM和DTT通過在D-PBS平衡的Hiload26/60Superdex75製備級柱上的製備型SEC而去除。還原的納米體TM的濃度通過檢測280nm的吸收而測定。使用Uvikon943DoubleBeamUV/VIS分光光度計(方法參見SOPABL-0038)。吸收在波長掃描245-330nm測定。使用由QuartzSuprasi鵬元件製成的兩個精密(Precision)元件(Hellma型號104-QS;光徑lOmm)。首先，通過放置兩個裝滿900WD-PBS的元件而在280nm測定空白的吸收。樣品通過將100nl樣品加入到第一個元件中而稀釋(1/10)。樣品的吸收在280nm檢測。濃度用下式計算OD,s。樣品-OD^空白對於TNF55:s=l,85:xl0對於TNF56:s=l，83.躬二微為了將納米體tm聚乙二醇化，將5X摩爾過量的新鮮配製的lmMPEG40溶液添加到還原的納米體TM溶液中。(NEKTARTM轉化治療法的MPEG2-MAL-40K(2D3YOT01)Mw=40,000g/moI;NEKTARTM轉化治療法的MPEG2-MAL-60K(2D3YOV01)Mw=60,000g/mo1)。納米體tm-PEG混合物輕微攪拌在室溫(RT)溫育1小時，然後轉移到4。C。PEG化通過分析型SEC評估。因此，將25pl納米體tm加到75plD-PBS中，並且注射到在D-PBS中平衡的Sup75HR10/300柱上。聚乙二醇化的納米體tm在所述柱的排斥體積範圍內^75kDa)洗脫。PEG化和未PEG化的納米體tm通過陽離子交換層析(CEX,使用Source30S,GEHealthcare;A緩衝液-25mM檸檬酸pH=4和B=1MNaCl在PBS中)分離。樣品稀釋至〈5mS/cm的電導率，並且將pH調整到4,0。將柱[25X100mm]平衡，並且在樣品應用之後用A—緩衝液徹底清洗。聚乙二醇化的納米體tm用3CV梯度洗脫。收集的納米體tm在D-PBS平衡的Hiload26/60Superdex75製備級柱上通過SEC緩衝(buffer)交換到D-PBS中。最後，通過流經陰離子交換柱(Source30Q)而將所述納米體tm製成沒有LPS的。柱(10xl00mm)在NaOH[1M]中淨化過夜，並且之後在沒有內毒素的D-PBS中平衡。生激素贗眾為了將納米體tm生物素醯化，將來自10mM儲液的5X摩爾過量的生物素(EZ-Link⑧Maleimide-P02-生物素，Pierce#21901)加到所述還原的納米體tm中(見5.5.D。將生物素-納米體tm混合物輕微攪拌在室溫溫育i小時，然後在4。C保存。生物素醯化的納米體tm的純度通過分析型SEC控制。因此，將25pl生物素醯化的納米體tm加到75|ilD-PBS中，並且注射到在D-PBS中平衡的Sup75HR10/300柱上。從所獲得的色譜可以推出，納米體tm—生物素255不需要進一步純化沒有檢測到通過自由巰基(sulfidrils)氧化的納米體tm二聚化。通過流經脫鹽柱葡聚糖凝膠G25精細(fme)(90ml)柱將緩衝液變換成D-PBS。最後，通過流經陰離子交換柱(Source30Q,GEHealthcare)而將所述納米體tm—生物素製成沒有LPS的。柱(lxl0cm)在1MNaOH中淨化過夜，然後在D-PBS中平衡。為了確定純度，蛋白樣品按照實施例8和49所述在15%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳凝膠上分析。結果在圖49和50中描繪。實施例57:二價長半衰期人源化的納米體tm的特徵性描述主眾獰密絲潘遂TNF55由260個胺基酸組成。所述蛋白具有27,106Da的分子量。pl為8.67。280nm的消光係數是1.850。TNF56由264個胺基酸組成。所述蛋白具有27,365Da的分子量。pl為8.67。280nm的消光係數是1.830。廑譜TNF55的理論質量是27,106Da。TNF55-生物素蛋白具有2個S-S橋和一個生物素修飾，其在ESI-MS中導致27，627Da的質量。對於TNF55-生物素實驗確定的質量為27,627Da。TNF56的理論質量是27,365Da。TNF55-生物素蛋白具有2個S-S橋和一個生物素修飾，其在ESI-MS中導致27，886Da的質量。對於TNF55-生物素實驗確定的質量為27,886Da。TNF56-PEG40的N—端測序表明，前7個胺基酸的蛋白序列如下EVQLVES。這與理論蛋白序列一致，其顯示正確的N—端處理。TNF56-PEG40在PBS中的分析大小提供對稱峰。沒有觀察到汙染物。在SuperdexHR75上的保留時間為8.5ml，並且在SuperdexHR200上為10.32ml。代表性的圖表在圖51和52中顯示。實施例58:在基於細胞的檢測中的官能性在基於細胞的檢測中分析中和TNFcx的細胞毒性活性的效力。在摩爾基礎上在不同濃度的納米體TM以及商購的依那西普，Humira和英夫利昔單抗檢驗效力。觀察到的EC50越高，化合物中和TNF(x的活性越低。結果總結在表45中和圖53和54中。數據表明，當與單價納米體TMTNF1相比較時，對於二價納米體TM效力的增加。TNF55衍生物的效力與TNF56衍生物相似，其在依那西普範圍內，並且比Humira和英夫利昔單抗好10倍。實施例59:二價長半衰期人源化的納米體在小鼠中的藥物代謝動力學和免疫原性分析參見實施例54。進行實驗，以檢驗聚乙二醇化的納米體TM在小鼠中的半衰期。二價TNF56-PEG40的半衰期與TNF56-PEG60的半衰期比較。兩種納米體TM具有相當的半衰期，~2天。結果在圖55中描繪。另外，研究聚乙二醇化二價3E-3E的半衰期。在靜脈內施用100pg納米體TM後，比較3E-3E-PEG20的半衰期和3E-3E-PEG40的半衰期。3E-3E-PEG20具有17小時的半衰期，而3E-3E-PEG40具有21天的半衰期，與3E-3E-MSA21的半衰期相當。結果在圖56中描繪。血清樣品稀釋100倍，並且分析小鼠抗-TNF56-PEG40或抗-TNF56-PEG60抗體的存在。對於這兩種分子證明缺少免疫原性。數據在圖57中描繪。實施例60:抗-TNF-a納米體TNF60(TNF60)在預防慢性多發性關節炎中的功效攜帶並且表達3'-修飾的人腫瘤壞死因子(hTNF-a,cachectin)轉基因的轉基因小鼠品系用作研究TNF60(TNF60)在預防關節炎的發展中的功效的模型(EMBOJ.10,4025-4031)。已經顯示這些小鼠在4一7周齡以100%的發生率發展慢性多發性關節炎。從第三周齡，將轉基因小鼠的幼仔分成8隻動物的組。在幵始研究之前，對每一組計算平均體重。從那時起，在整個研究過程中，對於每一組動物體重每周記錄一次。為了檢測TNF60在預防慢性多發性關節炎中的功效，對於特定組的每一隻動物給予腹膜內注射，每周兩次，按照下述方案-組1(陰性對照)磷酸鹽緩衝液(PBS)(配製緩衝液)-組2(納米體治療):TNF60終劑量30mg/kg-組3(納米體治療):TNF60終劑量10mg/kg-組4(納米體治療):TNF60終劑量3mg/kg-組5(第一陽性對照)依那西普終劑量30mg/kg-組6(第一陽性對照)依那西普終劑量10mg/kg-組7(第二陽性對照)英夫利昔單抗終劑量30mg/kg-組8(第二陽性對照)英夫利昔單抗終劑量10mg/kg-組9(第二陽性對照)英夫利昔單抗終劑量3mg/kg對於每一組，記錄注射日期和注射體積。注射持續7周。在這一期間，通過觀察每隻動物的關節形態中的肉眼可見的變化而記錄臨床得分。在10周齡,將所有小鼠處死，並且收集血清和關節。血清保存在-70。C，而踝關節保存在福馬林中。對於所選的組，將踝關節包埋在石蠟中並且切片。隨後踝關節切片用於疾病進展的組織病理學評估。結果在圖58中描述。實施例61:抗-TNF-a納米體TNF60(TNF60)在治療性治療慢性多發性關節炎中的功效攜帶並且表達3'-修飾的人腫瘤壞死因子(hTNF-a,cachectin)轉基因的轉基因小鼠品系用作研究TNF60(TNF60)在治療性治療關節炎中的功效的模型(EMBOJ.10,4025-4031)。已經顯示這些小鼠在4一7周齡以100%的發生率發展慢性多發性關節炎。從第六周齡，將轉基因小鼠的幼仔分成8隻動物的組。在開始研究之前，對每一組計算平均體重。從那時起，在整個研究過程中，對於每一組動物體重每周記錄一次為了檢測TNF60在治療性治療慢性多發性關節炎中的功效，對於特定組的每一隻動物給予腹膜內注射，每周兩次，按照下述方案-組1(陰性對照)磷酸鹽緩衝液(PBS)(配製緩衝液)-組2(納米體治療):TNF60終劑量30mg/kg-組3(納米體治療):TNF60終劑量10mg/kg-組4(第一陽性對照)依那西普終劑量30mg/kg-組5(第二陽性對照)英夫利昔單抗終劑量30mg/kg對於每一組，記錄注射日期和注射體積。注射持續7周。在這一期間，通過觀察每隻動物的關節形態中的肉眼可見的變化而記錄臨床得分。在13周齡，將所有小鼠處死，並且收集血清和關節。血清保存在-70。C，而踝關節保存在福馬林中。對於所選的組，將踝關節包埋在石蠟中並且切片。隨後踝關節切片用於疾病進展的組織病理學評估。結果在圖59中描述。實施例62:格式化對抗-TNF-a納米體在預防慢性多發性關節炎中的功效的影響攜帶並且表達3'-修飾的人腫瘤壞死因子(hTNF-a，cachectin)轉基因的轉基因小鼠品系用作研究以不同方法格式化的抗-TNF-a納米體在預防慢性多發性關節炎中的功效的模型(EMBOJ.10,4025-4031)。己經顯示這些小鼠在4—7周齡以100%的發生率發展慢性多發性關節炎。從第三周齡，將轉基因小鼠的幼仔分成8隻動物的組。在開始研究之前，對每一組計算平均體重。從那時起，在整個研究過程中，對於每一組動物體重每周記錄一次。為了研究不同形式的抗-TNF-a納米體在預防慢性多發性關節炎中的功效，對於特定組的每一隻動物給予腹膜內注射，每周兩次，按照下述方案-組1(陰性對照)磷酸鹽緩衝液(PBS)(配製緩衝液)-組2(納米體形式1):TNF60終劑量10mg/kg-組3(納米體形式1):TNF60終劑量2.5mg/kg-組4(納米體形式1):TNF60終劑量1mg/kg-組5(納米體形式2):TNF56-PEG40終劑量10mg/kg-組6(納米體形式2):TNF56-PEG40終劑量1.8mg/kg-組7(納米體形式2):TNF56-PEG40終劑量0.7mg/kg-組8(納米體形式3):TNF56-biot終劑量1.8mg/kg-組9(納米體形式4):TNF30終劑量1mg/kg-組10(納米體形式5):TNF1終劑量1mg/kg-組11(第一陽性對照)依那西普終劑量10mg/kg-組12(第二陽性對照)英夫利昔單抗終劑量10mg/kg對於每一組，記錄注射日期和注射體積。注射持續7周。在這一期間，通過觀察每隻動物的關節形態中的肉眼可見的變化而記錄臨床得分。在10周齡，將所有小鼠處死，並且收集血清和關節。血清保存在-70。C，而踝關節保存在福馬林中。對於所選的組，將踝關節包埋在石蠟中並且切片。隨後踝關節切片用於疾病進展的組織病理學評估。結果在圖60中描述。實施例63:抗-TNF-a納米體TNF60(TNF60)和TNF56-PEG40在恆河猴中的藥物代謝動力學研究捕獲一詞養的恆河猴(Macacamw/a"a)用來確定TNF60和TNF56-PEG40的藥物代謝動力學曲線。16隻動物用於這一研究(8隻雄性和8隻雌性)，並且分成4組(每組2隻雄性和2隻雌性)。所有動物稱重大約5kg,並且至少在使用之前6周沒有疾病。SniffPrivegetarischV3994作為食物。每隻猴子提供60g/kgb.w.。去除殘渣。在規律的時間間隔(一年至少2次)基於EPA/USA通過LUFA-ITL分析食物的汙染物。提供自來水作為隨意食水(adlibitum.)。將每一治療組的動物籠養在猴群內的一批幾個相鄰的籠子裡。猴子單獨飼養在90cmx82cmx96cm大小的V2A鋼鐵籠內。室溫保持在23。C士3。C(最大範圍)，並且相對溼度在60%±200/0(最大範圍)。例如，在清潔程序中引起的最大範圍的偏離在SOPs中處理。房間光照和黑暗分別12個小時。兩組輸注TNF60，兩組輸注TNF56-PEG40。使用留置導管和TSE輸注泵(參見下文)將TNF60和TNF56-PEG40(溶解在PBS中)靜脈內輸注到右臂或左臂的頭靜脈，以2mg/kg的固定劑量給予。進行4次單獨的施用，由至少14天的淘汰期(wash-out)分開。在最後施用後，繼續期至少8周。所述4組中的2組用與甲氨喋呤(MTX)(溶解在PBS中)結合的TNF60或TNF56-PEG40治療。組2用TNF60和MTX治療；組4用TNF56-PEG40和MTX治療。MTX以0.2mg/kg每周靜脈內給藥。在給藥那天，MTX在施用之前大約30分鐘給藥。給藥在第一次納米體施用時開始，並且將持續到第四次給藥後的整個8周的淘汰期。存在14次單獨的MTX施用，由從第一次測試項目施用開始的至少一周的淘汰期分開。實施例64:來源於滑膜的成纖維細胞研究在這一研究中，評估抗-TNF生物製劑，ALX0071和依那西普減少來源於RA-滑膜的成纖維細胞的TNFa-誘導的IL-6生產的能力。分離滑膜成纖維細胞將來自同意的RA患者的滑膜關節組織在4°C保存在具有抗生素的基於DMEM-的培養基中，直到關節置換手術後96小時。滑膜細胞通過在37。C膠原酶消化2小時而從解剖的滑膜分離。然後，通過系列離心和重懸步驟洗滌得到的細胞混懸液，然後，將得到的細胞在37。C培養在補充10%FCS(v/v)的基於DMEM的培養基中。獲得的成纖維細胞以第二次或第三次傳代而用於後續實驗。將來自4個供體的細胞用於單獨的實驗。將成纖維細胞接種在96孔平底聚苯乙烯平板上，每孔1.5xl(^個細胞，在終體積250的補充10%FCS(v/v)的基於DMEM的培養基中，並且培養過夜。滑膜成纖維細胞的刺激然後將細胞在單獨以50ng/mL補充TNFa(3nM(R&DSystems210-TA/CF)或在增加劑量的ALX0071(0.575—1920ng/mL;0.015-50nM)或依那西普(WyethLabs;3.75—11250ng/mL;0.025-75nM)存在下的基於DMEM的培養基中培養72小時。每一孔的終體積是250pL，並且每一評估進行三次。72小時後，去除上層清液培養基，並且在用IL-6ELISA(R&DSystems)分析之前保存在40。C。確定對TNF口-誘導的IL-6生產的抑制作用，並且計算對於ALX0071和依那西普的ICso值。翁菜總潛ALX10071和依那西普都劑量-依賴性地減少來自於所有4個供體的RA滑膜來源的成纖維細胞的TNFa-誘導的IL-6生產。在這些檢測條件下，在所述兩種試劑之間存在相似的功效。實施例65:鼠氣囊研究在這一研究中，評估抗-TNP生物製劑，ALX0071和依那西普減少TNFoc-誘導的細胞向鼠氣囊侵入的能力。產主氣蘑氣囊通過皮下(s.c.)注射2.5mL無菌空氣到麻醉雄性C57B1/6/J小鼠(25-30g,Harlan)的背面而形成。3天後，通過注射2.5mL無菌空氣而使所述囊再膨脹起來。在最初產生氣囊後6天，將動物麻醉，並且所述囊注射lml含有O.l嗎重組人TNFoc(R&DSystems,210-TA-050/CF)的0.5%羧甲基纖維素(CMC)賦形劑。在另外3組動物中，在注射TNFot前19小時，皮下注射ALX0071(0.0625，0.125和0.25mg/kg)。第二個三組動物在注射TNFoc前立即注射(皮下)依那西普(WyethLabs，0.125，0.25和0.5mg/kg)。TNFa注射後24小時，將小鼠用增加濃度的C02殺死(culled)。囊用2ml冰冷的沒有內毒素的含有5IU/ml肝素的無菌PBS灌洗。記錄體積，並且分離0.5ml等分試樣，用於在SysmexXT-Vet細胞計數器上計數總白血細胞(WBC)群體。每ml吸出的灌洗液計算對於每一組總WBC計數的平均值和平均值的標準誤差(SEM)。統計學分析通過具有Kmskal-Wallis後檢驗(Kruskal-Wallispost-test)的ANOVA關於未轉換的數據進行。碧屍總潛ALX10071和依那西普都減弱TNFa-誘導的WBC向氣囊的侵入(表)。然而，這一減弱在0.125(PO,01)禾n0.25mg/kg(PO.05)ALX0071劑量組都達到統計學顯著性，而對於任何依那西普劑量組沒有觀察到統計學顯著性。表8tableseeoriginaldocumentpage264tableseeoriginaldocumentpage265122EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCWSGFTFSATSMTWVRQAPGKAEEWVSFINSDGSSTTYADSVKGRETISRDNAKNTLYUMDDLQSEDTAmyycgrrgygrdrsrg工qvtvssnc5123evqu/esggg:lvqaggslr:lscaasggafsmyd、/gwfrqapgegre工varisgsgdstyssnrakgretisrdnakntv化omnslkredtavtycraaryngtwssndywgqgtovtvssNC55TNF一NC6124EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCECVSSGCTJTSMSMTWTOQAPGKAEEFVSFINSDGSSTTYANSVNGRraiSRDNAKKTLYLQMMSLGPEpTAMYYCQRRGYAI;DRGQGTQVTVSSnc55tnf,c7125qvqia/esggglvqaggsuuisctasgqtsstadmgwfrqppgkgrefvar工sgidgttyydepvkgrft工srdkaqntvy:lqmds:lkpe:dtavyycrspryadqwsaydywgqgtqvtvssNC55TNE^NC8126EVQLVESGGGl;VI2PGGSLRIiSCWSGnTSTTSMTWVRQAPGKFEEWVSFINSDGSSTTYADSVKGRFTISRDNAKNTIXLOMNSI^PEDTAMYYCGRRGYGRDRSKGIQVTVSSNC55TNF一S2C2127EVQ乙VESGGGLVQPGGSLRLSCVASASGVKVNDMGWYRQAPGKERELVATITDDGRTOTEDFAKGRrTISRCNAKNfVYLQ柳SIXPEDTAVYYCNARTYWAHLPTYWGQGTOVTVSSNC55TWF一S1C6128EV③VESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRSFGSVAMGWFRQAPGKEREFVAAlGYDGNSIRYGDSVKGRFT工SRDNIKWTMniEMEMMADDTARYLCAAEPLARYEGLWTYWGQGTQVTVSSS3C2129EVOLVESGGGLVOAGASIiRLSCTTSTRTNDRFNMAWFHQAPGKDREFVSRlDVAGYNTAYGDFVKGRFTVSRDSAENTW"LQMNSliRPEDTGVYYCAAGGWGISQSDYDLWGQGTQVTVSStableseeoriginaldocumentpage267表13tableseeoriginaldocumentpage268表14tableseeoriginaldocumentpage268表15tableseeoriginaldocumentpage268表16tableseeoriginaldocumentpage269表17tableseeoriginaldocumentpage269表18納米體溫度。cEC50innM#相對功效TNF1對照0,91610,01392弁2302n「1.TNF1至溫0,87310,014370,90110,013500,90810,013600,89110,013701,21810,010802,65510,004905,79710,002TNF2對照2,50010,00592弁2302nr2.TNF2至溫2,16510,005372,21210,005502,24110,005601,78210,007702,48710,005802,81810,004906,1350,002TNF3對照0,27810,04392弁2302nr3.TNF3室溫0,28910,041370,29510,040500,29010,041600,28110,042700,29310,040800,57610,021900,86110,014270表19tableseeoriginaldocumentpage271表20tableseeoriginaldocumentpage272表21tableseeoriginaldocumentpage272表22tableseeoriginaldocumentpage272表23檢測:L929s+AcfDf5000c/wjtableseeoriginaldocumentpage273檢測:"29s+AcfZ3f5000c/t^TNF:恆河薪[email protected]/m/tableseeoriginaldocumentpage273表24tableseeoriginaldocumentpage273表25名稱SEQIDNO序列(tnf1HUM1)75EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYWMTOVRQAPGKGIiEWVSEINTMGLITKYPDSVKGRniSRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCARSPSGFNRGQGTQVTVSSTNF114(TNF1HUM2)77EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFrFSDYWMW/RQAPGKGLEWVSEINTNGLITKYPDSVKGRFTISRDNAKNimQMNSIiKPEDTATNF15(TNF2H隨)78EVQLVESGGGLVQPGGSIjRLSCAASGRTFSEPSGYTYT工GWFROAPgkgrefvariywssgltyyadsvkgrft工srdiakntvd:lqmmslkpedtavyycaardg工ptsrsvgsymywgqgtqvtvssTNF16(TNF2HUM2)79EVQLVESGGGLVOPGGSLRLSCAASGFTFSEPSGYTYTIGWFRQAPGKGREFVARIYWSSGLTYYADSVKGRFTISRDIAKNTVDLQMNSLKPEDTAVYYCAARDGIPTSRSVGSYNYWGQGTQVTVSStnf1"7(tnf2HUM3)80evolvesggglvqpggslr:lscaasgrtfsepsgytyt工gwfrqapgkgrefvariywssgltyyadsvkgrftisrdmakntvdumnslkpedtavyycaardgiptsrsvgsyotwgqgtqvtvss(TNF2HUM4)81EVQLVESGGGLVQPGGSI/iaSCAASG只TFSEPSGYTYT工GWFRQAPGKGREFVARIYWSSGLTYYADSVKGRFTISRDIAKNTVDLQMNSLRPEDTAVYYCAARDGIPTSRSVGSYNYWGOGTQVTVSStmf19(tnf2HUM5)82EVGLVESGGGLVQPGGSUaSCAASGRTFSEPSGYTYTIGWFRGAPGKGREFVARIYWSSGLTYYADSVKGRFTISRDIAKWTVDLQ柳SLKPEDTAVYTCAARDGIPTSRSVGSYMYWGQGTIiVTVSSTNF20(TMF3HCJM1)83EVGLVESGGGLVQPGGSLiaSCAASGRSLSNYYMGWFRQAPGKGRELLGNISWRGTOIYYKDSVTCRFTISRDDSKNTIYXQMNSLKPEDTAVYYCAASILPLSDDPGWMTYWGQGTOVTVSSTNF21(TNF3HUM2)84EVQLVESGGGLVOPGGSLRLSCAASGFTFSNyYMGWFRQAPGKGRELIiGN工SWRGYMIYYKDSVKGRFT工SRDDSKNTIYLOMNSIiKPEDTAVYTCAASIliE^SDDPGWNTWGQGTQVTVSSTNF22(TNF3HUM3)B5EVQIiVESGGGliVQPGGSLRLSCAASGRSLSKfYYMGWFRQAPGKGREIXGNISWRGYNIYYKDSVKGRFTISRDDSKNTIYLQMNSIiKTEDTAVYYCAAS工1^SDDPGTOTY訴GQGTQVTVSStnf23(tnf3hum4)86evowesggglvqpggslrlscaasgrs:lsnyymgwfrqapgkgrehgniswrgyniyykdsvkgrftisrddskwtiyxqmnslkpedtavyycaasilplsddpgwntywgqgtlvtvssalb3(alb1h諷)8"7EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGrrFRSFGMSWVRQAPGKEPEwvssisgsgsdtlyadsvkgrftisrdnakttlyxomnslkpedtavyyCTIGGSLSRSSQGTQVTVSSalb4(alb1,2)88EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKEPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLVXQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTOVTVSSb9EVQLVESGGGLVQPGGSUaSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRrriSRDMAKTTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTQVTVSStableseeoriginaldocumentpage275表27tableseeoriginaldocumentpage275表28tableseeoriginaldocumentpage276表29tableseeoriginaldocumentpage277tableseeoriginaldocumentpage278表33tableseeoriginaldocumentpage279表34tableseeoriginaldocumentpage279tableseeoriginaldocumentpage280表37淑/..L929s+A"Df5O00c/—rWF:乂TA/[email protected]/m/EC5oinnlW相對功效VHH平均值Std6V#平均值Std6V藩10.7070.265140,0150.007TNF130.9880.01430.0140.003TNF140.9810.00730:0140.003曹291.33610.013TNF300.98510.017TNF21.4120.622140.0070.002TNF155.8961.25340.002o細TNF162.4220.19240馬0細TNF177.5550.56240細0.001TNF183.1340.48140.004o細TNF197.3720.94140.0010.001TNF312.19510細TNF322.50610.007TNF30.2240.133140.0480.019TNF200.3800細30.0350.005TNF210.8890.01930.0150.003TNF220.3030.00530.0040.011TNF230.30.01130.040.011TNF330.310.057依那西普0細0扁451.0020.011Humira0.0790.043390術0.069英夫利昔單抗0.0830.037450.1030.058表38tableseeoriginaldocumentpage281表39tableseeoriginaldocumentpage282表41tableseeoriginaldocumentpage283表44tableseeoriginaldocumentpage284表45tableseeoriginaldocumentpage284表46tableseeoriginaldocumentpage284表47tableseeoriginaldocumentpage284應用不多於常規實驗，本領域的那些技術人員應該意識到，或者能夠確定本文所述的本發明的具體實施方案的許多等價實施方案。這樣的等價實施方案意欲被下述權利要求所包括。本文公開的所有參考文獻通過全文引用完全結合於此。權利要求1.針對TNF-α的納米體，其由4個構架區(分別為FR1-FR4)和3個互補性決定區(分別為CDR1-CDR3)組成，其中a)CDR1包括-胺基酸序列DYWMY；或-與胺基酸序列DYWMY有至少80％、優選地至少90％、更優選地至少95％、甚至更優選地至少99％的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列DYWMY只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；和b)CDR2包括-胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG；或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有至少80％、優選地至少90％、更優選地至少95％、甚至更優選地至少99％的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；以及c)CDR3包括-胺基酸序列SPSGFN；或-與胺基酸序列SPSGFN有至少80％、優選地至少90％、更優選地至少95％、甚至更優選地至少99％的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SPSGFN只有1個胺基酸差異的胺基酸序列。2.按照權利要求l的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列DYWMY。3.按照權利要求1的納米體，其中CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG。4.按照權利要求1的納米體，其中CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。5.按照權利要求1的納米體，其中-CDR1包括胺基酸序列DYWMY;並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN;或-CDR1包括胺基酸序列DYWMY;並且CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-CDR2包括胺基酸序列EINTNGUTKYPDSVKG;並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。6.按照權利要求l的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列DYWMY;並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。7.按照權利要求1的納米體，其中CDR1包括胺基酸序列DYWMY;CDR2包括胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG,並且CDR3包括胺基酸序列SPSGFN。8.按照權利要求1一7中任一項的納米體，其中-任何胺基酸取代是保守胺基酸取代；和/或-與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。9.按照權利要求1一8中任一項的納米體，其為人源化的納米體。10.按照權利要求l一9中任一項的納米體，其為GLEW-類納米體。11.按照權利要求l一9中任一項的納米體，其在位置103包含精氨酸殘基(R)。12.按照權利要求1一9中任一項的納米體，其為GLEW-類納米體。13.按照權利要求l一9中任一項的納米體，其為在位置103具有精氨酸殘基(R)的GLEW-類納米體。.14.按照權利要求1一13中任一項的納米體，其與胺基酸序列SEQIDNO's52(TNF1)，76(TNF13),77(TNF14),95(TNF29)或96(TNF30)之一具有至少80%、或至少90%、或至少95。X、或至少99%的序列相同性(如本文所定義)。15.按照權利要求1一14中任一項的納米體，其在位置108包含亮氨酸殘基(L)。16.按照權利要求1一8中任一項的納米體，其具有優於2.10-3(1/s)、優選地優於1.10-3(1/s)的對於TNF的K。ff速率；或者所述納米體的人源化變體。17.按照權利要求l一8中任一項的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於WO04/041862的納米體VHH3E(SEQIDNO:4)在相同檢測中的EC50值；或者所述納米體的人源化變體。18.按照權利要求l一8中任一項的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於5nM;或者所述納米體的人源化變體。19.按照權利要求l一8中任一項的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於3nM;或者所述納米體的人源化變體。20.針對TNF-oc的納米體，其由4個構架區(分別為FR1-FR4)和3個互補決定區(分別為CDR1-CDR3)組成，其中d)CDR1為-胺基酸序列DYWMY;或-與胺基酸序列DYWMY有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列DYWMY只有1個胺基酸差異的胺基酸序列並且其中e)CDR2為-胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有至少80%、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG有2個或只有1個胺基酸差異的胺基酸序列；並且其中f)CDR3為-胺基酸序列SPSGFN;或-與胺基酸序列SPSGFN有至少80X、優選地至少90%、更優選地至少95%、甚至更優選地至少99%的序列相同性的胺基酸序列；或-與胺基酸序列SPSGFN只有1個胺基酸差異的胺基酸序列。21.按照權利要求20的納米體，其中CDR1是胺基酸序列DYWMY。22.按照權利要求20的納米體，其中CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG023.按照權利要求20的納米體，其中CDR3是胺基酸序列SPSGFN。24.按照權利要求20的納米體，其中-CDR1是胺基酸序列DYWMY;並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN;或-CDR1是胺基酸序列DYWMY;並且CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;或-CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG;並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN。25.按照權利要求20的納米體，其中CDR1是胺基酸序列DYWMY;並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN。26.按照權利要求20的納米體，其中CDR1是胺基酸序列DYWMY;CDR2是胺基酸序列EINTNGLITKYPDSVKG，並且CDR3是胺基酸序列SPSGFN。27.按照權利要求20—26中任一項的納米體，其中-任何胺基酸取代優選地是保守胺基酸取代；和/或-與上述胺基酸序列相比較，所述胺基酸序列優選地只包含胺基酸取代，並且沒有胺基酸刪除或插入。28.按照權利要求20—27中任一項的納米體，其為人源化的納米體。29.按照權利要求20—27中任一項的納米體，其為GLEW-類納米體。30.按照權利要求20—27中任一項的納米體，其在位置103包含精氨酸殘基(R)。31.按照權利要求20—27中任一項的納米體，按照權利要求l一8中任一項的納米體，其為在位置103具有精氨酸殘基(R)的GLEW-類納米體。32.按照權利要求20—27中任一項的納米體，其與胺基酸序列SEQIDNO，s52(TNF1),76(TNF13),77(TNF14)，95(TNF29)或96(TNF30)之一具有至少80%、或至少90%、或至少95%、或至少99%的序列相同性(如本文所定義)。33.按照權利要求20—27中任一項的納米體，其在位置108含有亮氨酸殘基(L)。34.按照權利要求20—27中任一項的納米體，其具有優於2.10-3(1/s)，優選地優於1.10-3(1/s)的對於TNF的K。ff速率；或這樣的納米體的人源化變體。35.按照權利要求20—27中任一項的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於WO04/041862的納米體VHH3E(SEQIDN0:4)在相同檢測中的EC50值，或這樣的納米體的人源化變體。36.按照權利要求20—27中任一項的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於5nM;或這樣的納米體的人源化變體。37.按照權利要求20—27中任一項的納米體，其在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於3nM;或這樣的納米體的人源化變體。38.按照權利要求1一37中任一項的納米體，其選自由TNF13(SEQIDNO:76)，TNF14(SEQIDNO:77)，TNF29(SEQIDNO:95)和TNF30(SEQIDNO:96)組成的組。39.按照權利要求1—38中任一項的納米體，其為TNF30(SEQIDNO:96)。40.蛋白或多肽，其包括或者基本上由按照權利要求1_39中任一項的納米體組成。41.按照權利要求40的蛋白或多肽，其包括或者基本上由至少一種按照權利要求1一39中任一項的納米體組成。42.按照權利要求40—41中任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照權利要求1一39中任一項的納米體。43.按照權利要求40—42中任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照權利要求1—39中任一項的納米體，並且其是這樣的蛋白或多肽，g口，當與TNF三聚體結合時，所述蛋白或多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或由這樣的受體交聯調控的信號傳導。44.按照權利要求40—42中任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照權利要求1—39中任一項的納米體，並且其能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點。45.按照權利要求42—44中任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照權利要求1—39中任一項的納米體，其直接彼此連接或者通過接頭彼此連接。46.按照權利要求45的蛋白或多肽，其中所述接頭是一種胺基酸序列。47.按照權利要求46的蛋白或多肽，其中所述接頭是一種胺基酸序列，其包括至少14個胺基酸，更優選地至少17個胺基酸，諸如約20-40個胺基酸。48.按照權利要求47的蛋白或多肽，其中所述接頭包括甘氨酸和絲氨酸殘基。49.按照權利要求42—48中任一項的蛋白或多肽，其包括或基本上由多肽TNF7(SEQIDNO:73)組成，其中納米體TNF1已被人源化。50.按照權利要求42—49中任一項的蛋白或多肽，其包括或基本上由多肽TNF55(SEQIDNO:419)或TNF56(SEQIDNO:420)組成。51.按照權利要求40—49中任一項的蛋白或多肽，其被聚乙二醇化。52.按照權利要求40—49中任一項的蛋白或多肽，其還包括至少一種針對人血清白蛋白的納米體。53.按照權利要求52的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體具有在ALB8(SEQIDNO:102)中存在的CDR序列。54.按照權利要求42的蛋白或多肽，其包括兩種按照權利要求1-39中任一項的納米體，其還包括至少一種針對人血清白蛋白的納米體。55.按照權利要求54的蛋白或多肽，並且所述兩種按照權利要求1-39中任一項的納米體直接與所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體連接，或者通過接頭與所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體連接。56.按照權利要求55的蛋白或多肽，其中所述接頭是胺基酸序列。57.按照權利要求55的蛋白或多肽，其中所述接頭是胺基酸序列，其包括3-40個胺基酸殘基，諸如5-15個胺基酸殘基。58.按照權利要求56和57的任一項的蛋白或多肽，其中所述接頭由甘氨酸和絲氨酸殘基組成。59.按照權利要求54-58的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體具有在ALB8(SEQIDNO:102)中存在的CDR序列。60.按照權利要求54-59中任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是人源化的納米體。61.按照權利要求60的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是納米體ALB1(SEQIDNO:63)的人源化變體。62.按照權利要求60的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體選自由下列各項組成的組ALB3(SEQIDNO:87),ALB4(SEQIDNO:88)，ALB5(SEQIDNO:89)，ALB6(SEQIDNO:100)，ALB7(SEQIDNO:101)，ALB8(SEQIDNO:102),ALB9(SEQIDNO:103)和ALB10(SEQIDNO:104).。63.按照權利要求62的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是ALB8(SEQIDNO:102)。64.按照權利要求54-63中任一項的蛋白或多肽，其包括或者基本上由兩種為按照權利要求1-39中任一項的納米體的人源化變體的納米體，以及納米體ALB1(SEQIDNO:63)的一種人源化變體組成。65.按照權利要求54-64中任一項的蛋白或多肽，其包括或者基本上由多肽TNF24(SEQIDNO:90)組成，其中納米體TNF1以及納米體ALB1都已被人源化。66.按照權利要求54-65中任一項的蛋白或多肽，其包括或者基本上由兩個納米體TNF30和一個納米體ALB8組成。67.按照權利要求54-66中任一項的蛋白或多肽，其包括或者基本上由多肽TNF60(SEQIDNO:417)組成。68.針對TNF-a的納米體，其為針對TNF-a的納米體的人源化變體，所述針對TNF-a的納米體具有下述構架序列FR1:SEQIDNO:130;FR2:SEQIDNO:198;FR3:SEQIDNO:266;和FR4:SEQIDNO:334。69.按照權利要求68的納米體，其具有的CDR's使得所述納米體對於TNF具有好於2.10-3(l/s)、優選地好於1.10-3(1/s)的Koff速率。70.按照權利要求68或69的納米體，其具有的CDR's使得所述納米體在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於WO04/041862中納米體VHH3E(SEQIDNO:4)在相同檢測中的EC50值；並且特別好於12nM，更特別地好於5nM，甚至更特別地好於3nM。71.按照權利要求68-70中任一項的納米體，其針對TNF(即，TNF三聚體)上與TNF1相同的表位。72.納米體，其針對TNF-a三聚體上的表位與納米體TNFl(SEQIDNO:52)針對的表位相同。73.納米體，其針對TNF-a三聚體上的表位與納米體TNF3(SEQIDNO:60)針對的表位相同。74.按照權利要求73的納米體，其具有的CDR's使得所述納米體對於TNF具有好於2.10-3(1/s)、優選地好於1.10-3(1/s)的Koff速率。75.按照權利要求73或權利要求74的納米體，其具有的CDR's使得所述納米體在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於WO04/041862中納米體VHH3E(SEQIDNO:4)在相同檢測中的EC50值；並且特別好於12nM，更特別地好於5nM，甚至更特別地好於3nM。76.納米體，其為納米體TNF1(SEQIDNO:52)的人源化變體。77.按照權利要求76的納米體，其具有的CDR's使得所述納米體對於TNF具有好於2.10-3(1/s)、優選地好於1.10-3(1/s)的Koff速率。78.按照權利要求76或權利要求77的納米體，其具有的CDR's使得所述納米體在WO04/041862實施例1第3)中所述的使用KYM細胞進行的基於細胞的檢測中所具有的EC50值好於WO04/041862中納米體VHH3E(SEQIDNO:4)在相同檢測中的EC50值；並且特別好於12nM，更特別地好於5nM，甚至更特別地好於3nM。79.蛋白或多肽，其包括或者基本上由按照權利要求68-78中任一項的納米體組成。80.按照權利要求79的蛋白或多肽，其包括或者基本上由至少一種按照權利要求68-78中任一項的納米體組成。81.按照權利要求79-80中任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照權利要求68-78中任一項的納米體。82.按照權利要求79-81中任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照權利要求68-78中任一項的納米體，並且其是這樣的蛋白或多肽，即，當與TNF三聚體結合時，所述蛋白或多肽能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或由這樣的受體交聯調控的信號傳導。83.按照權利要求79-81中任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照權利要求68-78中任一項的納米體，並且其能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點。84.按照權利要求81-83中任一項的蛋白或多肽，其包括兩種按照權利要求68-78中任一項的納米體，其直接彼此連接或者通過接頭彼此連接。85.按照權利要求84的蛋白或多肽，其中所述接頭是胺基酸序列。86.按照權利要求85的蛋白或多肽，其中所述接頭是胺基酸序列，其包括至少14個胺基酸，更優選地至少17個胺基酸，諸如約20-40個胺基酸。87.按照權利要求86的蛋白或多肽，其中所述接頭包括甘氨酸和絲氨酸殘基。88.按照權利要求81-83中任一項的蛋白或多肽，其包括或者基本上由多肽TNF7(SEQIDNO:73)組成，其中納米體TNF1都已被人源化。89.按照權利要求80-88中任一項的蛋白或多肽，其被聚乙二醇化。90.按照權利要求80的蛋白或多肽，其包括兩種按照權利要求68-78中任一項的納米體，並且所述蛋白或多肽還包括至少一種針對人血清白蛋白的納米體。91.按照權利要求90的蛋白或多肽，並且其中所述兩種按照權利要求68-78中任一項的納米體直接與所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體連接，或者通過接頭與所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體連接。92.按照權利要求91的蛋白或多肽，其中所述接頭是胺基酸序列。93.按照權利要求92的蛋白或多肽，其中所述接頭是胺基酸序列，其包括3-40個胺基酸殘基，諸如5-15個胺基酸殘基。94.按照權利要求92或93的任一項的蛋白或多肽，其中所述接頭由甘氨酸和絲氨酸殘基組成。95.按照權利要求90-94中任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體具有在ALB8(SEQIDNO:102)存在的CDR序列。96.按照權利要求90-95中任一項的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是人源化的納米體。97.按照權利要求96的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是納米體ALB1(SEQIDNO:63)的人源化變體。98.按照權利要求97的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體選自由下列各項組成的組ALB3(SEQIDNO:87)，ALB4(SEQIDNO:88),ALB5(SEQIDNO:89)，ALB6(SEQIDNO:100),ALB7(SEQIDNO:101)，ALB8(SEQIDNO:102)，ALB9(SEQIDNO:103)和ALB10(SEQIDNO:104)。99.按照權利要求98的蛋白或多肽，其中所述至少一種針對人血清白蛋白的納米體是ALB8(SEQIDNO:102)。100.按照權利要求81-99中任一項的蛋白或多肽，其包括或者基本上由兩種為按照權利要求65-67任一項的納米體的人源化變體的納米體和一種納米體ALB1(SEQIDNO:63)的人源化變體組成。101.包括或基本上由兩種或多種免疫球蛋白可變結構域(或其適當的片段)組成的蛋白或多肽，所述免疫球蛋白可變結構域的每一種針對TNF-oc(特別是TNF-a三聚體)上位於和/或形成TNF三聚體受體結合位點的部分的表位，以致所述多肽，當與TNF三聚體結合時，能夠抑制或者減少由所述TNF三聚體調控的TNF受體交聯和/或由這樣的受體交聯調控的信號傳導。102.包括或基本上由兩種或多種免疫球蛋白可變結構域(或其適當的片段)組成的蛋白或多肽，所述免疫球蛋白可變結構域的每一種針對TNF-oc(特別是TNF-a三聚體)上位於和/或形成TNF三聚體受體結合位點的部分的表位，以致所述多肽能夠分子內結合TNF三聚體上的至少兩個TNF受體結合位點。103.按照權利要求101或102的蛋白或多肽，其中所述兩種或多種免疫球蛋白可變結構域針對的表位與納米體TNF1(SEQIDNO:52)相同。104.按照權利要求101或102的蛋白或多肽，其中所述兩種或多種免疫球蛋白可變結構域是納米體。105.核苷酸序列或核酸，其編碼按照前述權利要求的任一項的納米體、蛋白或多肽。106.宿主細胞，其包括按照權利要求105的核苷酸序列或核酸，或者其表達或能夠表達按照權利要求1-104中任一項的納米體、蛋白或多肽。107.用於製備按照權利要求1-102中任一項的納米體、蛋白或多肽的方法，所述方法包括在所述宿主細胞生產或表達按照權利要求1-104任一項的納米體、蛋白或多肽的條件下培養或維持按照權利要求106的宿主細胞；並且其任選地還包括分離按照權利要求1-104中任一項的納米體、蛋白或多肽。108.藥物組合物，其包括至少一種按照權利要求1-104中任一項的納米體、蛋白或多肽，和任選地至少一種藥用載體。109.按照權利要求108的藥物組合物，或者按照權利要求1-104中任一項的納米體、蛋白或多肽，用於治療選自由下列各項組成的組的至少一種疾病和紊亂炎症、類風溼性關節炎、COPD、哮喘、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、炎性腸炎症候群、多發性硬化病、艾迪生病、自體免疫肝炎、自體免疫腮腺炎、I型糖尿病、附睪炎、腎小球腎炎、格雷夫斯病、急性熱病性多神經炎、橋本病、溶血性貧血、系統性紅斑狼瘡、男性不育、多發性硬化病、重症肌無力、天皰瘡、銀屑病、風溼熱、類風溼性關節炎、結節病、硬皮病、斯耶格倫症候群、脊椎關節病、甲狀腺炎和脈管炎。110.按照權利要求1-104中任一項的納米體、蛋白或多肽的應用，用於製備治療選自由下列各項組成的組至少一種疾病和紊亂的藥物炎症、類風溼性關節炎、COPD、哮喘、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、炎性腸炎症候群、多發性硬化病、艾迪生病、自體免疫肝炎、自體免疫腮腺炎、I型糖尿病、附睪炎、腎小球腎炎、格雷夫斯病、急性熱病性多神經炎、橋本病、溶血性貧血、系統性紅斑狼瘡、男性不育、多發性硬化病、重症肌無力、天皰瘡、銀屑病、風溼熱、類風溼性關節炎、結節病、硬皮病、斯耶格倫症候群、脊椎關節病、甲狀腺炎和脈管炎。111.蛋白或多肽，其與多肽TNF60(SEQIDNO:417)有至少80X、或者至少90%、或者至少95%、或者至少99%的序列相同性(如本文所定義)。全文摘要本發明涉及針對腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的改進的納米體TM，以及包括或者基本上由一種或多種所述納米體組成的多肽。本發明還涉及編碼所述納米體和多肽的核酸；涉及製備所述納米體和多肽的方法；涉及表達或者能夠表達所述納米體和多肽的宿主細胞；涉及包括所述納米體、多肽、核酸或宿主細胞的組合物；並且涉及所述納米體、所述多肽、所述核酸、所述宿主細胞或所述組合物的應用，特別是用於預防、治療或診斷目的，諸如預防、治療或診斷目的。文檔編號C07K16/24GK101248087SQ200680026278公開日2008年8月20日申請日期2006年5月17日優先權日2005年5月18日發明者埃爾斯·拜爾內德申請人:埃博靈克斯股份有限公司