含s－(－)－n－炔丙基－1－氨基茚滿的藥物組合物的製作方法

2023-11-11 21:19:02

專利名稱：含s－(－)－n－炔丙基－1－氨基茚滿的藥物組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿及其藥物上可接受的鹽在治療神經病或神經外傷以及改善患者記憶力方面的新治療應用。
用於本文的術語「神經外傷」指由於局部缺血性損傷如中風、低氧或缺氧而引起的中樞神經系統損傷和/或外周神經系統損傷，神經變性病，帕金森病，早老性痴呆，神經中毒性損傷，頭外傷性損傷，脊柱外傷性損傷或者其它任何形式的神經損傷。
人們熟知R(-)司立吉林(也稱為L-司立吉林)，N,α-二甲基-N-2-丙烯基苯乙胺)是B形式單胺氧化酶(下文稱為″MAO-B″)的抑制劑。
PCT國際申請No.WO92/17169描述了R(-)司立吉林在保持神經生長功能、防止神經生長功能的喪失或恢復神經生長功能中的活性。該公開包括一系列據認為具有類似活性的司立吉林類衍生物，不過未給出支持該論點的數據。該系列衍生物中包括了AGN-1135，即外消旋的N-炔丙基-1-氨基茚滿。
在後續的論文中，Tatton,W.G．等在神經科學雜誌(J.Neuroscience),13(9),pp.4042-4053(1993)中報導了司立吉林的神經保護活性限於R(-)對映體。在增大軸突切開的未成熟大鼠面部單神經元的存活率方面S(-)對映體的活性小2000倍。此外，已證實神經保護活性只與具有MAO-B抑制活性的炔丙基衍生物的R-對映體有關。Davis等在神經化學雜誌增刊(J.Neurochem.Supplement)1,64:S60,(1995)(記錄了由同一作者在美國神經化學協會於1995年3月5～9日在美國加利福尼亞的SantaMonica舉辦的第26屆會議上報導的數據)公開了在各種神經保護活性模型中，屬於MAO-B的選擇性抑制劑的某些脂肪族N-甲基炔丙胺的R-對映體在拯救損傷的神經元方面比其相應的S-對映體更有效。
在司立吉林方面的研究工作進展導致相信神經保護活性不涉及MAO-B的抑制作用，因為據觀測R(-)司立吉林的亞抑制量可防止神經細胞死亡(Tatton，運動病(Movement Disorders),8(1):S20-S30,(1993))。據認為R(-)司立吉林可能依賴於與亞型MAO-B的相互作用，該亞型MAO-B對R(-)司立吉林極為敏感。
Yu等在神經科學雜誌(J.Neurosci.),63,pp.1820-1827(1994)中估測了R(-)-和S(+)-司立吉林以及數種脂肪族炔丙胺衍生物在逆轉通過施用N-(2-氯乙基)-N-乙基-2-溴苄胺(DSP-4)誘導的齧齒動物中去甲腎上腺素耗竭方面的活性。測定的被描述成「神經保護活性」指示的終點是與未處理的對比物相比去甲腎上腺素的恢復百分數。在描述的結果中，R(-)司立吉林和數種更高程度N-脂族取代的炔丙胺表現為「神經保護活性」。S(+)司立吉林被描述成類似於已知的去甲腎上腺素攝取抑制劑地昔帕明的作用，它的「神經保護活性」遠遠低於R(-)司立吉林。總之，與R(-)司立吉林相比，S(+)司立吉林表現為更好的去甲腎上腺素攝取抑制劑，但在描述的「神經保護活性」測定中卻差得多。
歐洲專利436,492公開了N-炔丙基-1-氨基茚滿的R(+)對映體(下文稱為「R(+)PAI」)作為MAO-B的選擇性不可逆抑制劑。由於該專一活性，也已提議將R(+)PAI用於治療帕金森病、記憶病、痴呆(尤其是早老性痴呆)、抑鬱症以及活動過強兒童綜合症。美國專利5,387,612、5,453,446和5,457,133涉及R(+)PAI以及治療患帕金森病的患者的方法，該方法包括給患者施用R(+)PAI。在這些美國專利中，強調的是與其對映體相比R(+)PAI優良的MAO-B抑制活性，R(+)PAI的對映體即是N-炔丙基-1-氨基茚滿的S(-)對映體(下文稱為「S(-)PAI」)。在體外分析中發現，作為MAO-B的抑制劑，R(+)PAI的活性比S(-)PAI高將近7000倍。在這些分析中還發現，雖然R(+)PAI對MAO-B的選擇性比對MAO-A(A形式單胺氧化酶)高29倍，但S(-)PAI對任一底物都未表現優先選擇性。在短暫和長久的活體內施用中也觀測到該效應。
PCT國際申請公開No.WO95/11016進一步公開了R(+)PAI是有效的「神經保護劑」。該文中數據描述了它在防止NMDA誘導的大鼠小腦細胞中細胞死亡中的應用以及在壓碎大鼠視神經後施用時它在減緩神經元變性中的應用。該公開中未啟示有關R(+)PAI可能發揮其「神經保護」效應的機制。
MAO抑制劑作為神經元拯救劑在神經元存活危難的臨床境況中的應用，可能包括由它們單獨產生的或者在藥物與藥物間或藥物與食物間相互作用後產生的潛在的心血管副作用而引起的嚴重缺點。由部分或全部抑制外周MAO-A引起的這些副作用，導致心血管系統中去甲腎上腺素濃度過量(例如參見Physician′s Desk Reference第48版，1994,MedicalEconomics Data,Montvale,NJ，「司立吉林」條目下)。選擇性MAO-B抑制劑如R(-)司立吉林比專一性更低的藥劑(如帕吉林或氯吉蘭)更不易危及心血管系統，因此前者可能是更安全的藥劑。然而，在體外條件下測定的這些藥劑的MAO亞型選擇性在活體內測定時傾向於急劇降低。所以，不同作者報導的MAO-A/MAO-B關於R(-)司立吉林的體外IC50值的比例為400、247、360和16(得自W.Paul和I.Szelenyi彙編於「單胺氧化酶-B的抑制劑」(「Inhibitors of Monoamine Oxidase-B」),I.Szelenyi編輯，Birkhauser,Basel,p.353,1993)， 啟示安全因子約為100或更大。建議R(-)司立吉林用於人受治療者的日劑量為10mg，認為可能危及心血管功能時的劑量是30～40mg(上文的Physician′s Desk Reference)。這樣，與體外實驗體系中的約400相比，臨床實踐中的安全因子約為3～4。
因此，仍需要這種「神經保護劑」，即在有效的同時沒有與迄今已知MAO-B抑制劑型神經保護劑相關的副作用。
所以，本發明的目的在於提供治療CNS病或PNS病、尤其是那些與神經外傷相關的病的方法和藥物組合物，應用的藥劑具有神經保護活性但不表現與已知MAO-B抑制劑相關的外周副作用。
本發明一方面提供了治療患神經病或神經外傷的患者的方法，該方法包括給所述患者施用治療有效量的(S)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽。
本發明尤其提供了治療患有神經變性病、神經中毒性損傷、腦缺血或中風的患者的方法，該方法包括給患者施用一定量S(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽。
本發明還特別提供了治療患有發作低氧或缺氧後的神經損傷、頭外傷性損傷或脊柱外傷性損傷的患者的方法，該方法包括給患者施用一定量S(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽。
本發明進一步提供了預防患者神經死亡的方法，它包括給患者施用一定量S(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽。
本發明還提供了治療患記憶病的患者的方法，它包括給患者施用一定量可有效地改善患者記憶力的S(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽。
本發明的另一方面提供了用於治療患者的神經病或神經外傷或者改善患者的記憶力的藥物組合物，它包括治療有效量的S(-)-N-炔丙基-a-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽以及藥物上可接受的載體。
本發明的又一方面提供了用作藥物以治療患者的神經病或神經外傷或者改善患者記憶力的S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿。
本發明的又一方面提供了S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽作為活性成分在製備用於改善患者記憶力的藥劑中的應用。
S(-)-炔丙基-1-氨基茚滿可按美國專利5,457,133中所述方法製備，而組合物則可按與該專利中所述那些類似的方法製備。
在本發明的實施中，優選應用S(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿的藥物上可接受的鹽。合適的藥物上可接受的鹽包括但不限於甲磺酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、乙磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、乙酸鹽、磷酸鹽和硫酸鹽。優選的是S(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿的鹽酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽和硫酸鹽。最優選該藥物上可接受的鹽是甲磺酸鹽。
要製備S(-)PAI的藥物上可接受的酸加合鹽，可通過常規方法在合適的溶劑存在下使該游離鹼與所需酸反應。同樣，可用已知方法將酸加合鹽轉變成該游離鹼形式。
如前所述，在本發明的一個方面中提供了藥物組合物，它包括治療有效量的S(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽以及藥物上可接受的載體。S(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽的「治療有效量」可按本領域技術人員熟知的方法測定。這些組合物可製備成經口、非腸道、經直腸或經皮施用的藥劑。
上述組合物中的活性劑即S(-)PAI的優選劑量在下列範圍內。就經口的或栓劑製劑來說，可每天服用0.1～100mg/劑量單位，優選地每天服用1～10mg/劑量單位。就注射製劑來說，可每天服用0.1～100mg/ml/劑量單位，優選地每天服用1～10mg/ml/劑量單位。
這些組合物可單獨用於治療前面列舉的疾病，或者作為常規治療的輔助物。
合適的口服製劑形式包括片劑、壓制的或包衣的丸劑、錠劑、囊劑、硬質或軟質明膠膠囊、舌下含片、糖漿以及懸浮劑。
在一個實施方案中，藥物上可接受的載體是固體，該藥物組合物是片劑。活性成分的治療有效量可以是約0.1mg～約100mg，優選約1mg～約10mg。
在另一實施方案中，藥物上可接受的載體是液體，該藥物組合物是可注射的溶液。活性成分的治療有效量可以是約0.1mg/ml～約100mg/ml，優選是約1mg/ml～約10mg/ml。在一個實施方案中，該劑量形式是浸劑。
在又一實施方案中，載體是凝膠，該藥物組合物是栓劑。
至於非腸道施用，本發明提供了包括該活性成分的水溶液或非水溶液或乳液的安瓿或管形瓶。至於經直腸施用，提供了具有親水性或疏水性賦形劑的栓劑。至於作為軟膏劑以及穿皮給藥法的局部施藥，提供了該領域已知的合適的給藥系統。
本發明將在下述非限制性實施例中得以更詳細地闡述。實施例化學實施例實施例1二-(S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿)D-酒石酸鹽a)外消旋的N-炔丙基-1-氨基茚滿在室溫下20分鐘內往外消旋的1-氨基茚滿(64g)、15％氫氧化鈉水溶液(141g)、水(107mL)和甲苯(192mL)的混合物中加入苯磺酸炔丙酯(94.3g)。將所得混合物加熱至45℃達4小時，此時確證pH12(如果需要的話添加45％氫氧化鈉)，進行相分離。往有機相中加入水(64mL)，用33％硫酸水溶液將pH調至2。分離水相，用水稀釋後與甲苯混合。用25％氫氧化鈉水溶液將pH調至6，再進行相分離。再次用甲苯萃取水相，保證pH=6。真空濃縮合併的有機層得51g黃色油狀粗外消旋的N-炔丙基-1-氨基茚滿。b)二-(S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿)D-酒石酸鹽在回流下，往粗外消旋的N-炔丙基-1-氨基茚滿(46.5g)於異丙醇(157mL)的溶液中加入D-酒石酸(15.3g)於水(28mL)中的溶液。回流1小時後緩慢地將該混合物冷卻至室溫，用吸濾法分離所得沉澱並用異丙醇洗滌。將粗二-(S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿)D-酒石酸鹽從含15％水的1L異丙醇中重結晶而得26.5克標題化合物m.p.175～177℃,[α]D-34.3°(1.5,H2O)；關於C28H32O6N2的分析計算值C,68.26；H,6.56；N,5.69；實測C,68.76；H,6.57；N,5.61。實施例2S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿甲磺酸鹽將得自實施例1的二-(S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿)D-酒石酸鹽(15g)以及甲磺酸(6g)於異丙醇(150mL)中的溶液加熱回流30分鐘。讓該反應混合物冷卻至室溫，通過吸濾法分離所得沉澱而得標題化合物(11.1g),m.p.157℃,[α]D-22°。關於C13H17NSO3的分析計算值C,58.43；H,6.37；N,5.24；S,11.98；實測C,58.70；H,6.39；N,5.20；S,11.82。實施例3S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿甲磺酸鹽往氫氧化鈉(4.8g)的水(80mL)溶液中加入得自實施例1的二-(S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿)D-酒石酸鹽以及甲苯(80mL)。攪拌30分鐘後，用吸濾法通過硅藻土過濾該混合物，分離有機層，用水洗滌。真空濃縮有機相，用異丙醇稀釋後再濃縮。將殘餘物溶於異丙醇(125mL)，用甲磺酸(11.5g)處理。將所得混合物加熱回流30分鐘，過濾(硅藻土)後使之冷卻至室溫。通過過濾收集所得沉澱，用異丙醇洗滌得物理和化學性質與實施例2的產物相同的標題化合物。實施例4S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿甲磺酸鹽重複實施例1a的方法，只是應用美國專利申請系列No.08/372,064(1995年1月12日遞交)(公開號WO96/xxxxx)的實施例76～80製備的S-(-)-1-氨基茚滿代替外消旋的1-氨基茚滿。將所得黃色油狀物(30克)溶於180mL異丙醇，添加17.7克甲磺酸，將所得混合物加熱至回流後讓其冷卻。過濾分離沉澱，從含有活性炭的異丙醇中重結晶得與實施例2的化合物具有相同物理和化學性質的標題化合物。實施例5S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿鹽酸化物將12.4g S-(-)-1-氨基茚滿和12.9g碳酸鉀加入95mL乙腈。將所得懸浮液加熱至60°，滴加5.6g炔丙基氯。在60℃下攪拌該混合物達16小時，然後真空蒸餾除去大部分揮發物。將殘餘物分配於10％氫氧化鈉水溶液和二氯甲烷之間。乾燥有機相，在真空下除去溶劑。用急驟層析法在矽膠上純化殘餘物，用40％乙酸乙酯/60％己烷洗脫。合併含標題化合物的游離鹼的各級分，用乙醚替換溶劑。用氣態HCl處理該醚溶液，通過吸濾分離所得沉澱，從異丙醇中重結晶得6.8g標題化合物。該產物的[α]D為-30.3°(2％乙醇)，m.p.183～5℃。生物學實施例實施例1S(-)PAI甲磺酸鹽缺乏活體內抑制MAO的活性通過腹膜內注射(ip)或經口管飼法(po)用PAI的對映體之一或外消旋形式的PAI處理重250±20g的大鼠(雄性Sprague-Dawley衍生的)，分別在1h或2h後將其斷頭。對於物質的每個劑量值應用三個級別的組，應用描述於美國專利5,387,612的實施例19中的通用技術測定腦和肝中的MAO活性。運用Follin-Lowry法測定各培養物中蛋白質的量，以每mg蛋白質每小時培養時間代謝的底物nmol數計算酶活性。用PAI的對映體或外消旋形式的PAI處理過的動物組織中MAO的活性以施用賦形劑(經口施用時是水，ip注射時是0.9％鹽水)的對比組動物中酶活性的百分數表示。結果應用的劑量值均未產生任何明顯的行為變化。從抑制曲線計算產生50％抑制MAO-A和MAO-B時的劑量(IC50)，並示於表1。這些數據反映了與R(+)PAI甲磺酸鹽對MAO-B抑制的選擇性相比，S(-)PAI甲磺酸鹽抑制MAO-A和MAO-B的極低活性。表1腹膜內注射(ip)或經口施用(po)後，S(-)PAI甲磺酸鹽或R(+)PAI甲磺酸鹽在大鼠腦和肝臟中抑制MAO-A和MAO-B的IC-50值(mg/kg)。
實施例2S(-)PAI在低壓低氧模型中的神經保護效果應用的模型類似於M.Nakanishi等在生命科學(Life Sci.)13:467～476(1973)中；以及Y.Oshiro等在醫學化學雜誌(J.Med.Chem.)34:2014～2023(1991)中描述的模型。在常壓下將各重20～25g的一組4隻ICR雄性小鼠置於2.5L玻璃盒(A)中。通過閥將A盒與初始壓力的12L盒(B)連接。通過開始時關閉的閥將A盒與12L盒(B)連接。抽空B盒中的空氣至壓力為100mmHg。迅速開啟兩盒之間的閥，此時A盒中的壓力在14秒內降至200mmHg。測得A盒中小鼠在接觸低壓最久這15分鐘的存活時間。以與注射鹽水的或注射賦形劑的組相比、藥物處理組的存活時間百分數計算藥物預處理對存活率的影響。在每次實驗前和實驗後檢測兩次對比組，對比組包括12～16隻小鼠，每組4隻。每個實驗組總是包括4隻小鼠以保障所有實驗中恆定的殘餘氧體積。對比組小鼠的生存時間範圍是108～180秒。共應用8隻小鼠、每組4隻以重複測定試驗藥物各劑量的效果。所有藥物都在低氧一小時前腹膜內施用。正參比藥物是40mg/kg劑量下的戊巴比妥鈉，或是10mg/kg劑量下的地西泮，在低氧0.5小時前給藥。結果示於表2。表2藥物處理對200mmHg下的小鼠相對存活時間的影響，以相應對比組的百分數表示
實施例3不存在和存在PAI對映體時中腦動脈閉塞(MCA-O)後雄性Wistar大鼠的運動活性和腦梗塞尺寸。
應用Tamura等描述的方法的變更形式(Tamura A,Graham D,McCulloch J,Teasdale GH(1981)腦血流和代謝雜誌(J.Cereb.BloodFlow and Metab.)1:53～60)。用3ml/kg劑量下的Equitesine溶液腹膜內施藥麻醉各重300～400g的雄性Wistar大鼠(Olac England-Jerusalem)。Equitesine包括13.5ml硫噴妥鈉溶液(60mg/ml)、3.5g水合氯醛、1.75g MgSO4、33mL丙二醇、8.3mL絕對乙醇，用蒸餾水配成83mL。
應用SMZ-2B 102型高倍放大操作顯微鏡(Nikon,Japan)進行外科手術。為了暴露左邊中腦動脈，切開顳肌。並切除下頜骨的喙狀突起梢尖，用細修骨鉗取出。用牙鑽在中央壁和顳下窩頂蓋之間的接合處進行顱骨切除術。
用27號針小心地挑開硬膜。通過微型二極凝固(microbipolarcoagulation)在低功率設定下永久閉合MCA，始於鼻皮層的皮層支與旁側紋狀動脈之間的嗅束中央2～3mm。凝固後，用微型剪刀剪斷MCA並分開以保障完全閉合。接著縫合顳肌，覆蓋顱骨切除部位。用連續的3-0絲縫線縫合皮膚。對於平行組大鼠進行假顱骨切除手術，但未燒灼MCA。在任一組的整個手術操作期間(20～25min)通過體溫調節器(Kyoristsu,Japan)將體溫維持在37～38°，該體溫調節器由與直腸熱敏電阻連接的自調節式加熱墊構成。在手術24小時和48小時之後記錄神經學得分以估測藥物處理的大鼠相對於它們的未處理對比組的損傷嚴重性。48小時時，用Equitesine麻醉動物，通過2,3,5-氯三苯四唑(TTC)染色法顯現損傷的嚴重性。測定局部缺血後引起損傷的腦組織體積。
按下列方案以0.3～0.4mL蒸餾水中的i.p．注射液形式施藥手術前30分鐘內3mg/kg；閉合後60分鐘為2mg/kg；手術後20～24小時內3mg/kg。
通過永久閉合引起局部缺血48小時後，運用TTC染色法如下所述進行梗塞體積的形態測定。恰在使用前配製1％TTC的鹽水溶液並用鋁箔包裹以防曝光。將MCA-O大鼠深度麻醉，用帶有延長管和20mL注射器的23號蝶式針經胸廓切開術插入心室。切開右心房讓鹽水流出。輸入50i.u．肝素鹽水溶液直至灌注液不含血。用裝有30ml TTC的注射器替換鹽水注射器，以5ml/分的速度將TTC注入左心室。兩種灌注液都在37.5℃下施用。摘除腦，浸入盛於密閉玻璃管形瓶中的20ml 1％TTC中。將這些管形瓶放入37℃下的水浴中達2小時。傾析TTC溶液，將腦摘除，擦乾後放入10％緩衝福馬林溶液達3天。從腦基質獲得六片各2mm厚，離額極3、5、7、9、11和13mm處的冠狀切片(HarvardApparatus,South Natick,MA)。用視頻成象分析儀從冠狀切片的兩面測定梗塞面積並以mm2表示。通過測出所有六片切片中局部缺血面積的總和而計算以mm3表示的梗塞區體積。梗塞體積示於下表4。神經學得分神經學得分包括對給定大鼠中的比運動活性行為規定的系列等級進行總和。等級從0(完全正常的大鼠)至13(完全無活動能力的大鼠)。認為大多數參數是0(正常的)，或是1(無活動能力的)；其它的則被分級。本研究中應用如下試驗。一般觀察試驗活動減退；鎮靜狀態；豎毛。運動反射提起大鼠尾巴使大鼠離地面約15cm。正常大鼠採取的姿勢是，它們向地面伸出兩隻前肢，往兩邊呈梯形伸開後肢。當MCAO嚴重時，引起對側肢一致彎曲。運動能力該項測試看當使大鼠通過腋窩懸在棒上時，用對側肢抓住直徑為1cm的棒達5～15秒的能力。運動協調正常大鼠能沿適度傾斜放置的5cm寬的梁上下行走。如果在梁任一方向不能行走，表明一定的運動失調，缺乏平衡能力以及肢衰弱。步態在窄梁上有意移位時恢復正常的後對側肢或前對側肢位置的能力。平衡抓住2cm寬的窄梁並保持平衡的能力。運動活力在自動活動籠中總體運動達15分鐘的一段時間。規定上述各參數的等級示於表3表3．對10種姿勢和運動參數的每種規定的神經學得分
結果如表4中所示，S(-)PAI處理的大鼠的神經學嚴重性得分(NSS)和梗塞體積都明顯低於鹽水處理的大鼠。表4．大鼠中腦動脈永久閉塞後大鼠的神經學嚴重度得分±SEM以及腦梗塞尺寸±SEM。
在類似操作條件下，用R(+)PAI處理導致神經學得分嚴重度改善約20％。因此，相應的N-炔丙基-1-氨基茚滿的R對映體和S對映體二者幾乎同等地賦予該特定神經元損傷模型中的神經保護作用。實施例4S(-)-PAI不影響利血平引起的大鼠上瞼下垂利血平引起的上瞼下垂及其反向試驗。利血平引起兒茶酚胺貯量、尤其去甲腎上腺素的減少。活動物中的該效應在其它情況下，在上瞼下垂方面被證實。能防止或抑制利血平引起的上臉下垂作用的藥物或者直接作為去腎上腺素能的激動劑起作用，或者間接地通過減少或防止代謝性消除內源性去甲腎上腺素而起作用。MAO抑制劑屬於後一種類型。
用鹽水、R(-)司立吉林或S(-)PAI對大鼠進行腹膜內預先給藥，再在2小時後腹膜內注射利血平5mg/kg。將上瞼下垂程度按0～4級記分，其中4表示眼睛完全睜開，而0表示眼睛完全閉上。示於表5的數據與S(-)PAI不引起內源性去甲腎上腺素濃度增大這一假設相符。表5．用或未用MAO抑制劑進行預先給藥、利血平引起的上瞼下垂(5mg/kg i.p.)平均得分。在施用利血平2小時後的得分
實施例5在麻醉的貓中靜脈內S(-)PAI不影響加壓響應用i.v.戊巴比妥(nembutal)25mg/kg麻醉貓。如果需要的話，另外注射戊巴比妥5mg/kg保持麻醉。在股動脈上插管並連接到Statham壓力傳感器上，用於在Grass multichannel Polygraph上記錄血壓。在股靜脈上插管供i.v．注射藥物。結果示於表6，它表明通過以遞增劑量形式靜脈內S(-)PAI給藥至高達1mg/kg的累積劑量以及在注射後長達45～60分鐘之久既未影響平均動脈血壓(MABP)也未影響心搏率(HR)。表6．靜脈內注射S(-)PAI 45～60分鐘後戊巴比妥麻醉的貓平均動脈血壓和心搏率的變化
實施例6S(-)pAI不影響貓對兒茶酚胺的加壓響應MAO抑制劑通常增強對兒茶酚胺的加壓響應，因為它們封阻兒茶酚胺經酶MAO、尤其亞型A的代謝消除。用S(-)PAI按實施例5中所述處理過的貓進一步接受如下各種加壓劑的處理苯福林、酪胺和去甲腎上腺素。在各情況中，用S(-)PAI在1mg/kg i.v．下預處理後未明顯增強加壓響應。結果給出於表7中。表7．用S(-)PAI進行預處理(1mg/kg的i.v.注射)之前和之後，麻醉的貓對靜脈內兒茶酚胺的加壓響應
實施例7短暫的經口施用後S(-)PAI對清醒大鼠沒有心血管影響在用三溴乙醇(averteen)輕度麻醉下將長期留置導管植入尾動脈。植入24小時後使動物復原並接受測試。將導管連接到Statham壓力傳感器上，用Grass multichannel Polygraph記錄血壓。在此期間，將大鼠保持在籠中以便將已知可影響血壓的操縱和過度的處理減至最低程度。
應用了兩種大鼠品種WKY大鼠和相配的SHR(自發高血壓大鼠)大鼠。WKY大鼠得自本地品種，每隻重約250g。在這些大鼠中，處於休息狀態時的平均動脈血壓(MAP)和心搏率(HR)最大波動值分別為8mmHg和49次/分。
SHR大鼠購自英國的Charles River飼養場。使這些動物適應新環境並從旅途疲勞中恢復後，在3個月大小時應用它們，以便與其WKY對照動物相配。SHR高血壓是從1個月大小至3個月大小逐漸形成的。在此階段，血壓已升到高於正常血壓值。
以10ml/kg的量施用S(-)PAI。然後在45～60分鐘期間監測血壓和心搏率。結果給出於表8中，表明短暫的經口施用S(-)PAI對任一品種大鼠的任一個參數都無影響。表8．經口施用45～60分鐘後S(-)PAI對清醒的大鼠心血管的影響。
實施例8在2mg/kg/天的劑量下長期經口施用後S(-)PAI對SHR大鼠收縮期血壓缺乏影響應用3個月大小的自發高血壓大鼠。對每隻大鼠施用日劑量為2mg/kg於自來水(10ml/kg)中的S(-)PAI。對比組接受等量自來水。處理持續14天。在此期間，應用尾-套法(tail-cuff procedure)在第0、4、7和11天監測收縮期血壓。在第14天，應用實施例7中所述的留置導管法測定收縮期血壓。結果給出於表9和10中。用S(-)PAI在2mg/kg/天的劑量下長久經口處理對個體中的和個體間的收縮期血壓圖和心搏率圖無影響。表9．對SHR大鼠用尾-套法在2周期間測定的S(-)PAI(2mg/kg p.o.)對收縮期血壓和心搏率的影響。
表10．通過植入的導管直接測定的2周長久經口用S(-)PAI處理對SHR大鼠的心血管效應
實施例9在2mg/kg/天的劑量下長久經口服藥後S(-)PAI對SHR大鼠的體重缺乏影響。
另外還監測如上實施例8中所用大鼠的增重/失重作為食物消耗率的另一標誌。MAO抑制劑通常使可抑制食慾的中樞兒茶酚胺升高。用S(-)PAI在2mg/kg/天的劑量下長久處理在14天的處理期間對體重沒影響。結果給出於表11中。表11．用S(-)PAI經口長久處理2周後對SHR大鼠體重的影響。
總結實施例4～9表明S(-)PAI對數種MAO介導的效應影響極小或無影響。實施例10封閉性頭損傷(CHI)後S(-)PAI對小鼠的效果用於封閉性頭損傷的操作如Shohami等關於大鼠所述的(神經外傷雜誌(J.Neurotrauma)(1993)10(2)109-119)那樣，按所述作更改。
動物應用重量為34-40g的雄性Sabra小鼠(Hebrew University品種)。將它們每籠10隻成組地關在籠中，處於12hr:12hr亮暗循環中。隨意供給食物和水。
在麻醉下引起外傷。縱向剪開覆蓋顱骨的頭皮，於是頭皮收縮暴露出顱骨。在撞擊裝置(impact apparatus)的下平面上手工固定小鼠的頭。從3cm的距離處通過電子裝置對左半球，中冠面中線外側1～2mm處傳給333g的重量。在CHI 15分鐘後皮下注射一次S-PAI(1mg/kg)。運動功能的估測在封閉性頭損傷(CHI)後的不同時間應用下表12中所示的神經學嚴重度得分(NSS*)估測受損傷小鼠的運動功能和反射作用，該神經學嚴重度得分是從對大鼠所述的方式變更來的。對於缺乏測試的反射或者不能完成表中概括的工作記1分。在CHI後1小時能達到的最高分是25分，在更遲的時間達到的最高分則是21分。在1hr和在其它任何時間的NSS差異反映了自發恢復情況，以△NSS表示。1hr時分數為15～19表示嚴重損傷，11～14表示適度損傷，小於10則表示輕度損傷。
*本實施例中估測的NSS，在估測的參數和記分系統兩方面都不同於實施例3中的NSS。表12．封閉性頭損傷後小鼠的神經學嚴重度得分
參考記憶的估測Morris水迷宮試驗(Morris Water Maze Test)水迷宮由環形鋁池構成，該池直徑為1m，深60cm，盛水深度為17.5cm。隱蔽的目標平臺是倒扣在池中固定位置處位於水面1cm以下的玻璃容器(直徑15cm×高16.5cm)。將水溫保持在24℃，該池始終放在室內同一位置以提供相同的迷宮外記號。在CHI前，每天對小鼠進行3次試驗，接連試驗5天以建立基準行為-測定從相同起始位置發現該平臺的潛伏時間。在CHI之後24hr開始每天再測試小鼠，每天試驗3次，總計2周。
結果運動功能的估測表13．在封閉性頭損傷之後小鼠的神經學嚴重度得分的變化
參考記憶的估測

圖1示出在CHI之後用S(-)PAI處理的小鼠與鹽水處理的對照小鼠相比潛伏時間的減小。這表明就在CHI之後小鼠忘記了目標的位置。與鹽水處理的小鼠相比，用S(-)PAI處理後的小鼠記憶力增強了。
權利要求
1．用於治療神經病或神經外傷或者改善患者記憶力的藥物組合物，它包括作為活性成分的治療有效量的S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽，以及藥物活性載體。
2．適合經口、經直腸、靜脈內、經皮或非腸道施用的權利要求1的藥物組合物。
3．呈單位劑量形式的、權利要求1或2的藥物組合物，它包括約1mg～約1000mg所述活性成分。
4．權利要求3的藥物組合物，它包括約10mg～約100mg所述活性成分。
5．權利要求1～4任一項的藥物組合物，它包括作為活性成分的S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿的鹽酸化物、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽或硫酸鹽。
6．用於治療神經病或神經外傷的、權利要求1～5任一項的藥物組合物，所述神經病或神經外傷包括由於局部缺血性損傷、中風、低氧或缺氧而引起的中樞神經系統損傷或外周神經系統損傷，神經變性病，帕金森病，早老性痴呆，神經中毒性損傷，頭外傷性損傷，脊柱外傷性損傷或者其它任何形式的神經損傷。
7．用於改善患者記憶力的權利要求1的藥物組合物。
8．用作治療神經病或神經外傷或者改善患者記憶力的藥劑的S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽。
9．用於權利要求8的應用的S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿，其中該藥劑適合經口、經直腸、靜脈內、經皮或非腸道施用。
10．用於權利要求8的應用的S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿，其中該藥劑施用的劑量為約1mg～約100mg。
11．權利要求10的應用，其中該劑量為約10mg～約100mg。
12．用於權利要求8的應用的S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿的鹽酸化物、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽或硫酸鹽。
13．權利要求8的應用，其中該藥劑用於治療神經病或神經外傷，所述神經病或神經外傷包括由於局部缺血性損傷、中風、低氧或缺氧而引起的中樞神經系統損傷或外周神經系統損傷，神經變性病，帕金森病，早老性痴呆，神經中毒性損傷，頭外傷性損傷，脊柱外傷性損傷或者其它任何形式的神經損傷。
14．權利要求8的應用，其中該藥劑用於改善患者記憶力。
15．S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽在製備用於治療神經病或神經外傷的藥劑方面的應用。
16．權利要求15的應用，其中該藥劑適合經口、經直腸、靜脈內、經皮或非腸道施用。
17．權利要求15的應用，其中該藥劑包括約1mg～約1000mg劑量的S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其鹽。
18．權利要求17的應用，其中該劑量為約10mg～約100mg。
19．權利要求15的S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿的鹽酸化物、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽或硫酸鹽的應用。
20．權利要求15的應用，其中該神經病或神經外傷包括由於局部缺血性損傷、中風、低氧或缺氧而引起的中樞神經系統損傷或外周神經系統損傷，神經變性病，帕金森病，早老性痴呆，神經中毒性損傷，頭外傷性損傷，脊柱外傷性損傷或者其它任何形式的神經損傷。
21．S-(-)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽作為活性成分在製備改善患者記憶力的藥劑方面的應用。
22．治療患神經外傷的患者的方法，它包括給所述患者施用治療有效量的(S)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽。
23．治療患神經變性病的患者的方法，它包括給所述患者施用治療有效量的(S)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽。
24．治療患神經中毒性損傷的患者的方法，它包括給所述患者施用治療有效量的(S)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽。
25．治療患腦缺血的患者的方法，它包括給所述患者施用治療有效量的(S)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽。
26．治療患中風的患者的方法，它包括給所述患者施用治療有效量的(S)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽。
27．治療患發作低氧或缺氧後的神經損傷的患者的方法，它包括給所述患者施用治療有效量的(S)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽。
28．治療患頭外傷性損傷的患者的方法，它包括給所述患者施用治療有效量的(S)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽。
29．治療患脊柱外傷性損傷的患者的方法，它包括給所述患者施用治療有效量的(S)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽。
30．預防患者神經死亡的方法，它包括給所述患者施用治療有效量的(S)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽。
31．治療患記憶病的患者的方法，它包括給所述患者施用治療有效量的(S)-N-炔丙基-1-氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽。
全文摘要
用於治療神經病或神經外傷或者改善患者記憶力的藥物組合物，它包括作為活性成分的治療有效量的S－(－)－N－炔丙基－1－氨基茚滿或其藥物上可接受的鹽，以及藥物活性載體。該藥物組合物尤其適合於治療神經病或神經外傷，包括由於局部缺血性損傷、中風、低氧或缺氧而引起的中樞神經系統損傷或外周神經系統損傷，神經變性病，帕金森病，早老性痴呆，神經中毒性損傷，頭外傷性損傷，脊柱外傷性損傷或者其它任何形式的神經損傷。
文檔編號C07C211/42GK1227486SQ97197199
公開日1999年9月1日 申請日期1997年6月20日 優先權日1996年7月11日
發明者R·萊維, M·B·H·尤狄姆, J·P·M·芬伯格, S·科翰, J·斯特林格 申請人:泰瓦製藥工業有限公司, 泰克尼昂研究開發基金有限公司