一種治療慢性腎炎的中藥組合物及其製備方法和質量控制方法

2023-12-07 07:56:31 2

專利名稱：一種治療慢性腎炎的中藥組合物及其製備方法和質量控制方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥組合物，特別涉及用於治療慢性腎炎的中藥組合物，同時涉及該組合物的製備方法和質量標準。
背景技術：
慢性腎小球腎炎(簡稱慢性腎炎，CGN)，是由多種原因、多種病理類型組成原發於腎小球的一組疾病。臨床特點為病程長，可以有一段時間的無症狀期，呈緩慢進行性病程。尿常規檢查有不同程度的蛋白尿，尿沉渣鏡檢常可見到紅細胞，大多數患者有程度不等的高血壓和腎功能損害，治療困難，預後較差，它起病潛隱，臨床表現可輕可重或時輕時重，但總的說來，是不停頓地逐漸發展至腎功能衰竭，而危及生命。
按照全國中醫腎病專業委員會制定的慢性腎炎辨證分型標準，在統計了200例慢性腎炎的證型中，脾腎氣虛證有96例，佔48％氣陰兩虛證有77例，佔38.5％； 肝腎陰虛證有23例，佔11.5％；脾腎陽虛證有4例，佔2％。脾腎氣虛證是慢性腎炎最常見的證型，開發治療慢性腎炎脾腎氣虛證的新藥，對於提高慢性腎炎治療效果有積極意義。
目前西藥在治療慢性腎炎上沒有很好的辦法，中醫中藥在治療慢性腎炎上有其獨特的效果，但在《國家基本用藥目錄》中治療慢性腎炎脾腎氣虛證的類似中成藥僅有腎炎四味片和腎炎消腫片。腎炎四味片，其效果一般。腎炎消腫片由於療效不理想，市場上近二年已沒有銷售。因此，臨床醫生需要、患者治療需要、市場供銷需要儘快開發出治療慢性腎炎脾腎氣虛證有效且無副作用的中成藥。

發明內容
本發明的一個目的在於公開一種新的治療慢性腎炎的中藥組合物；本發明的另一個目的在於公開一種新的治療慢性腎炎的中藥組合物的製備方法；本發明的第三個目的在於公開一種新的治療慢性腎炎的中藥組合物的質量控制方法。
本發明藥物組合物的原料藥組成及配比如下(按重量份)黃芪700-1000重量份茯苓300-500重量份淫羊藿100-300重量份 僵蠶200-500重量份全蠍30-50重量份 澤瀉100-300重量份石韋300-600重量份 青風藤700-1000重量份本發明藥物組合物的原料藥黃芪優選生黃芪；本發明藥物組合物製劑每0.35g，相當於原藥材3.48g。
本藥物組合物的製備方法1.青風藤粉碎成粗粉，在有蓋容器中將藥材和1-2倍量PH值為8.0～9.0的70-85％的乙醇浸漬6～8小時，取出、分層，將潤溼的藥材鬆緊適度地裝於滲漉筒中，藥材裝填好後，先打開浸液出口，再添加6-10倍量PH值為8.0～9.0的70-85％的乙醇，按每公斤藥材每分鐘1～3ml的速度進行滲漉，收集滲漉液，滲漉液的PH值為弱鹼性；滲漉液於75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至80℃下相對密度為1.20-1.35，即得青風藤濃縮液；2.黃芪、茯苓、淫羊藿，加7-9倍量水煎煮2-3次，每次1-3小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至適量，每毫升相當於原藥材2g，離心，得離心液，再濃縮至80℃下相對密度為1.20-1.35，得黃芪、茯苓、淫羊藿濃縮液；3.僵蠶、全蠍粉碎成粗粉，加10-14倍量75-85％的乙醇照《中華人民共和國藥典》2000年版一部附錄IO流浸膏劑與浸膏劑下的方法滲漉，收集滲漉液，75～80℃的條件下回收乙醇，濃縮至80℃下相對密度為1.20-1.35，即得僵蠶、全蠍濃縮液；4.石韋、澤瀉一起加5-7倍量水煎煮2次，每次1-2小時，合併煎煮液，濾過，濾液濃縮至適量，加90-96％的乙醇，使含醇量達65-80％，充分攪拌，e靜置10-14小時，取上清液，在75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至80℃相對密度為1.20-1.35，即得石韋、澤瀉濃縮液；5.將濃縮液青風藤濃縮液和僵蠶、全蠍濃縮液混和，得混合物A；6.將黃芪(生)、茯苓、淫羊藿濃縮液和石韋、澤瀉濃縮液混和，得混合物B；
7.將上述兩種A、B混合物混合得本發明藥物組合物，該藥物組合物，經過常規工序直接或加入藥學上可接受的賦型劑製成臨床可接受的劑型，如片劑、口服液體製劑、膠囊、顆粒劑。
本組合物製成藥劑的質量控制方法包括鑑別和/或含量測定。
鑑別方法包括下列方法中的一種和/或幾種(a).取本組合物製劑3.5g，加甲醇40-60ml，置水浴上加熱回流1.5-3小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水9-12ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇提取1-3次，每次20ml，合併正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，每次20-40ml，棄去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸乾，殘渣加甲醇1.5-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠6薄層板上，以12-14∶5-7∶1.5-3的氯仿-甲醇-水在9-11℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以8-12％硫酚乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(b).取本組合物製劑3.5g，，加60-80％乙醇40-60ml，加熱回流0.5-1.5小時，放冷，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水9-11ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取1-3次，每次15-25ml，合併正丁醇液，用氨試液洗滌1-3次，每次20-40ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對照品，加甲醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠H薄層板上，以9-11∶0.5-1.5∶0.5-1.5∶0.5-1.5醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，置紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；(c).取本組合物製劑5.3g，加乙醚20-35ml，加熱回流0.5-1.5小時，濾過，濾液揮幹，殘渣加環乙烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取茯苓對照藥材8g，加乙醚30-50ml，同法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液4μl，對照藥材溶液10μl，分別點於同一矽膠6薄層板上，以石油醚30-60℃下，80-90∶14-16∶0.5-1.5的石油醚-丙酮-醋酸乙酯為展開劑，預飽和10-20分鐘，展開，取出，晾乾，置紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；(d).取本組合物製劑1.8g，加乙醇14-18ml，超聲處理25-35分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取青藤鹼對照品，加乙醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以6-8∶1-3∶0.5-1.5的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以稀碘化鉍鉀試劑；供試品色譜中，在與對照晶色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定方法包括下列方法中的一種和/或幾種(a).黃芪甲苷，取本組合物製劑，研細，取細粉3g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量，冷浸過夜，置水浴上加熱回流提取至無色，提取液回收甲醇並濃縮至於，殘渣加水10-20ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3-5次，每次15-30ml，合併正丁醇提取液，用氨試液洗滌1-3次，每次40-60ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加水5～7ml微熱使溶解，放冷，通過吸附樹脂柱，以水40-60ml洗脫，棄去水液，再用30-60％乙醇洗脫，棄去30-60％乙醇洗脫液，繼用60-80％乙醇100-140ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解並轉移至2ml量瓶內，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，精密吸取供試品溶液4μl，對照晶溶液2μl與6μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以12-14∶5-7∶1-3的氯仿-甲醇-水在8-12℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以8-12％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法進行掃描，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算，即得本品每0.35g含黃芪以黃芪甲苷(C41H68O14)計不得少於0.18mg；
(b).淫羊藿苷色譜條件與系統適應性實驗，用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以25-40∶60-80的乙腈-水為流動相，檢測波長260-280nm，理論板數按淫羊藿苷峰計算應不低於1500；對照品溶液的製備，精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇製成每1ml含40ug的溶液，即得對照品溶液；供試品溶液的製備，取本組合物3.5g，研細，取0.5g，精密稱定，加60-80％乙醇25ml，超聲處理0.5-2小時，濾過，濾渣用適量60-80％乙醇洗滌，收集濾液與洗滌液，置水浴上蒸於，殘渣加水8-12ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2-4次，每次15-25ml，合併正丁醇提取液，用氨試液洗滌1-3次，每次15-25ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至10ml量瓶內，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，收集續濾液，作為供試品溶液；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得本品每0.35g含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)計不得少於0.20mg。
本組合物在治療慢性腎炎氣虛證中，可顯著降低血肌酐、血尿素氮，升高血漿白蛋白，降低膽固醇和甘油三酯，有明顯的利尿作用，極大地改善病人的臨床症狀，具有標本兼治的特點，並且無毒、無任何副作用。
下面實驗例用於進一步說明本發明。下列材料與儀器適用於各實驗例。
1藥物本組合物製劑(健腎片乾粉)，由江蘇康緣藥業股份公司提供，批號010310。每克乾粉含生藥9.94克，成人日用量為42g/60Kg。臨用前用蒸餾水配製成0.14g/ml、0.28g/ml、0.56g/ml三種濃度的混懸液(均按生藥量計算)。腎炎四味片，荊州市製藥廠(原湖北沙市製藥廠)出品，ZZ-4326一鄂衛藥準字(1981)第001544號，批號991002，規格每片0.36克，成人日用量8.64g/60Kg。該藥主要成分為胡枝子、黃芪、黃芩、石韋。將該藥粉碎過120目篩，加蒸餾水配製成0.05g/ml濃度的腎炎四味片混懸液(均按生藥量計算)。
嘌吟黴素(Puromycin，造模藥物)Sigma化學公司，批號10278。
2主要試劑無水乙二胺，上海試劑一廠，批號000210；碳化二亞胺，美國Sigma公司，批號1531H；牛血清白蛋白，美國Amresc。公司，批號051 7H弗氏不完全佐劑，Gibco公司，批號1079128生理鹽水，南京小營製藥廠，批號000823；肌酐液體試劑(鹼性苦味酸法)，北京中生生物工程高技術公司，批號000406；尿素試劑盒(尿素酶法)，北京中生生物工程高技術公司，批號000401；白蛋白液體試劑盒(溴甲酚綠法)，北京中生生物工程高技術公司，批號990908；膽固醇試劑盒(CHOD-PAP法)，北京中生生物工程高技術公司，批號000502；甘油三酯試劑盒(GPO-PAP法)，北京中生生物工程高技術公司，批號000510；尿蛋白試劑盒(化學比色法)，英國RANDOX公司，批號3971H；羊抗鼠免疫螢光抗體(FITC)IgG，北京中山生物技術有限公司，批號45501；兔抗人免疫螢光抗體(FITC)C3補體，北京中山生物技術有限公司，批號038(101)。
3主要儀器REVCO-80℃超低溫冰箱，MILLIPORE純水淨化系統，TGL-16G臺式高速離心機，DKB-8A型電熱恆溫水槽(上海精密實驗設備有限公司)，HG75-3A型電熱恆溫兩用箱(南京實驗儀器廠)，LDZ5-2型離心機(北京醫用離心機廠)。筒形大白鼠固定器(江蘇省張家港市醫用生理器械廠)。SHANDON冷凍切片機，AO螢光顯微鏡，JEM-1200EX透射電鏡。
4動物雄性健康Wistar大鼠，清潔級，體重180±20克，購自中國科學院上海實驗動物中心，合格證中科院動管會003號。
5飼料飼料為南京江浦實驗動物飼料廠生產的標準大鼠全價顆粒飼料。
6實驗條件實驗過程中大鼠自由攝食、飲水，室內溫度控制在18～24℃，相對溼度保持在40-70％。工作照度為150～300Lux，盡夜明暗交替時間(h)10/14。
7統計方法採用最小顯著差法(LSD法)和方差分析法(F檢驗)進行統計分析。
實驗例1本發明藥物組合物製成的片劑(健腎片)對陽離子化牛血清白蛋白(C-BSA)所致大鼠膜性腎病的影響1.分組及用藥劑量正常對照組雄性Wistar大鼠10隻，灌服蒸餾水3ml，每日一次。灌胃1小時後尾靜脈注射生理鹽水1ml，隔日一次。
模型對照組雄性Wistar大鼠10隻，灌服蒸餾水3ml，每日一次。灌胃1小時後尾靜脈注射C-BSA4mg，將C-BSA用生理鹽水配製成4mg/ml濃度的溶液尾靜脈注射，隔日一次，腎炎四味片對照組雄性Wistar大鼠10隻，每日用藥劑量0.79g/Kg，相當於人體用藥量的5.5倍，以0.05g/ml的腎炎四味片混懸液灌胃，每日一次。灌胃1小時後尾靜脈注射C-BSA4mg，將C-BSA用生理鹽水配製成4mg/ml濃度的溶液尾靜脈注射，隔日一次。健腎片低劑量組雄性Wistar大鼠10隻，每日用藥劑量2.1g/Kg，相當於人體用藥量的3倍，製成0.14g/ml健腎片混懸液灌胃，每日一次。灌胃1小時後尾靜脈注射C-BSA4mg，將C-BSA用生理鹽水配製成4mg/ml濃度的溶液尾靜脈注射，隔日一次。
健腎片中劑量組雄性Wistar大鼠10隻，每日用藥劑量4.2g/Kg，相當於人體用藥量的6倍，以0.28g/ml的健腎片混懸液灌胃，每日一次。灌胃1小時後尾靜脈注射C-BSA4mg，將C-BSA用生理鹽水配製成4mg/ml濃度的溶液尾靜脈注射，隔日一次。
健腎片高劑量組雄性Wistar大鼠10隻，每日用藥劑量8.4g/Kg，相當於人體用藥量的12倍，以0.56g/ml健腎片混懸液灌胃，每日一次。灌胃後1小時尾靜脈注射C-BSA4mg，將C-BSA用生理鹽水配製成4mg/ml濃度的溶液尾靜脈注射，隔日一次。
大鼠用藥量均按文獻方法換算。健腎片治療組劑距比1∶2∶4。
1.2、給藥時間連續給藥4周。
1.3、檢測指標1.4.1用藥前及用藥2周、4周分別收集24小時尿標本，測定尿量，檢測24小時尿蛋白定量(UTP)、24小時尿肌酐(Ucr)。
1.4.2用藥2周、4周分別眼眶靜脈叢採血檢測血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)、膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)。
1.4.3用藥結束後每組隨機取5隻大鼠新鮮腎組織做免疫螢光檢查。
1.4.4每組按從小到大編號順序取2份，腎組織標本分別進行邢染色、PAS染色、PAM染色、Masson染色做光鏡檢查，並做超薄切片進行電鏡檢查。
2結果2.1一般狀況及尿量變化表1健腎片對C-BSA所致膜性腎病大鼠體重的影響(g，X±S)

與正常對照組比較*p＜0.05。
與模型對照組比較P＜0.05。
表2健腎片對C-BSA所致膜性腎病大鼠尿量的影響(ml/24h，±S)組別劑量 給藥前 給藥後2周 4周(g/Kg體重)正常對照組 -7.40±3.99 8.63±3.217.31±3.90(10) (10) (10)模型對照組 -7.35±1.85 13.47±6.58**5.81±2.82(10) (10) (8)腎炎四味片組1.33 7.34±1.15 8.15±3.47ΔΔ10.52±8.00Δ(10) (10) (10)健腎片I組 2.1 7.30±1.20 17.30±16.50Δ17.29±12.84ΔΔ(10) (10) (10)健腎片II組 4.2 7.47±2.87 15.16±9.44 11.19±4.26ΔΔ(10) (10) (10)健腎片III組 8.4 7.36±2.62 10.80±6.62 12.28±6.86ΔΔ(10) (10) (10)與正常對照組比較*p＜0.05，**p＜0.01。
與模型對照組比較ΔP＜0.05，ΔP＜0.01。
內為動物數。
造模各組大鼠，造模後均出現精神不振，反應遲鈍，喜拱背扎堆，毛髮欠光澤，飲食減少，活動量少，體重增長緩慢，大便稀溏等。模型對照組大鼠有的出現腹脹大，會陰部水腫，有的處死時剖腹可見有大量腹水。治療組與模型對照組相比程度要輕，一般狀況要好於模型對照組。治療組體重增加高於模型對照組，健腎片III組體重明顯高於模型對照組，P＜0.05。造模後，模型對照組大鼠尿量先增加後減少，給藥4周後，健腎片I、II、III組尿量明顯大於模型對照組，P＜0.01。
實驗過程中，模型對照組大鼠死亡2隻。其中1隻因採血不慎致失血過多而死亡，另1隻死亡大鼠膚色蒼白，形體瘦弱，死亡後解剖見腹腔有大量腹水，腎臟及其它臟器未見明顯異常。
2.2 24小時尿蛋白定量的變化結果見表3。
表3健腎片對C-BSA所致膜性腎病大鼠24小時尿蛋白的影響(mg/24h，X±S)組別 劑量給藥前給藥後2周 4周(g/Kg體重)正常對照組- 3.57±2.075.73±2.038.20±3.65(10) (10) (10)模型對照組- 3.87±2.3658.74±39.6**266.4±103.3**(10) (10) (8)腎炎四味組1.333.65±1.4839.83±22.31ΔΔ70.6424.62ΔΔ(10) (10) (10)健腎片I組 2.1 3.82±1.9933.97±15.2ΔΔ47.51±24.23ΔΔ(10) (10) (10)健腎片II組4.2 3.36±1.0831.03±6.30ΔΔ42.01±12.74ΔΔ(10) (10) (10)健腎片III組8.43.79±1.3626.39±11.83ΔΔ29.60±11.06ΔΔ(10) (10) (10)與正常對照組比較 *P＜0.01。
與模型對照組比較ΔΔP＜0.01。
內為動物數。
造模後，大鼠尿蛋白明顯升高，模型組與正常組比較P＜0.01。健腎片I、II、III組組尿蛋白明顯低於模型對照組(P＜0.01)。給藥2周時即起效，4周非常明顯。
2.3血肌酐和尿素氮的變化表4健腎片對C-BSA所致膜性腎病大鼠血肌酐和尿素氮的影響(X±S)組別 劑量 Scr(μmmol/L) BUN(mmol/L)(g/Kg體重) 2周4周2周 4周正常對照組 -105±2.11 102±8.01 4.33±0.73 4.14±1.51(10) (10) (10)(10)模型對照組 -144±39.26**125±7.5**9.62±4.01*10.5±2.98**(10) (8)(10)(8)腎炎四味片組 1.33 115±11.1ΔΔ119±10.9 7.52±1.75ΔΔ6.51±1.38ΔΔ(10) (10) (10)(10)健腎片I組 2.1 130±28.5Δ123±14.4 7.80±1.25Δ6.66±0.85ΔΔ(10) (10) (10)(10)健腎片II組 4.2 122±8.65ΔΔ115±8.09ΔΔ7.01±1.56Δ6.40±1.17ΔΔ(10) (10) (10)(10)健腎片III組8.4 115±9.03ΔΔ115±9.03ΔΔ6.38±1.14Δ5.52±2.41ΔΔ(10) (10) (10)(10)與正常對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
與模型對照組比較ΔP＜0.05，ΔΔ＜0.01內為動物數。
表4表明，大鼠造模後血肌酐、尿素氮升高，健腎片組兩者數值低於模型組。給藥4周後，健腎片II、III組血肌酐明顯低於模型組(P＜0.01)，健腎片I、II、III組血尿素氮含量低於模型組(P＜0.01)。
2.4血漿白蛋白的變化表5健腎片對C-BSA所致膜性腎病大鼠血漿白蛋白的影響(g/L X±S)組別 劑量2周 4周(g/Kg體重)正常對照組- 36.4±0.52 38.3±0.82(10)(10)模型對照組- 29.6±1.35**29.0±1.51**(10)(8)腎炎四味片組 1.3335.3±6.4ΔΔ2.8±1.81ΔΔ(10)(10)健腎片I組 2.1 32.3±1.49Δ32.0±1.05Δ(10)(10)健腎片II組4.2 34.3±5.26ΔΔ32.1±0.74Δ(10)(10)健腎片III組 8.4 36.4±7.43ΔΔ33.4±1.65ΔΔ(10)(10)
與正常對照組比較**P＜0.01。
與模型對照組比較ΔP＜0.05。ΔP＜0.01。內為動物數。
從表5可以看出，大鼠造模後血漿白蛋白下降，模型組與正常組比較差異顯著(P＜0.01)。給藥2周、4周時，健腎片I、II、II工組血漿白蛋白均明顯高於模型組(P＜0.05、0.01)。
2.5膽固醇與甘油三酯的變化表6健腎片對C-BSA所致膜性腎病大鼠膽固醇、甘油三酯的影響(mmol/L，X±S)組別 劑量 CHO TG(g/Kg體重) 2周 4周 2周 4周正常對照組-1.89±0.10 1.45±0.10 1.15±0.14 2.06±0.21(10)(10)(10)(10)模型對照組-3.25±0.51**4.42±0.74**2.76±0.66**4.04±1.65**(10)(8) (10)(8)腎炎四味片組 1.33 1.57±0.57ΔΔ2.51±0.34ΔΔ1.26±0.51ΔΔ2.09±0.38ΔΔ(10)(10)(10)(10)健腎片I組 2.1 1.20±0.36ΔΔ2.15±0.18ΔΔ1.21±0.40ΔΔ65±0.47ΔΔ(10)(10)(10)(10)健腎片II組4.2 1.62±0.40ΔΔ2.16±0.26ΔΔ0.88±0.35ΔΔ50±0.50ΔΔ(10)(10)(10)(10)健腎片III組 8.4 1.31±0.41ΔΔ2.02±0.32ΔΔ1.12±0.67ΔΔ33±0.22ΔΔ(10)(10)(10)(10)與正常對照組比較*P＜0.05，*P＜0.01。
與模型對照組比較ΔΔP＜0.01。內為動物數。
從表6可知，造模後模型組大鼠膽固醇、甘油三酯均升高，與正常組比較P＜0.01。給藥4周後，健腎片I、II、III組CHO、TG均明顯低於模型組(P＜0.01)。
2.6尿肌酐、內生肌酐清除率的變化表7健腎片對C-BSA所致膜性腎病大鼠Ucr、Ccr的影響(X±S)組別劑量 Ucr(μmol/L) Ccr(ml/24h)(g/Kg體重) 給藥前 給藥後2周4周 給藥後2周 4周正常對照組 - 5634±1579 3976±1279 4215±1940 298±67241±64.4(10)(10) (10) (10) (10)模型對照組 - 5717±2336 3350±1755*3631±1251*245±29.3*149±49*(10)(10) (8) (10) (8)腎炎四味片組 1.335027±1898 3992±1440ΔΔ5158±2939ΔΔ268±141 307±94(10)(10) (10) (10) (10)健腎片I組 2.1 5091±1739 3513±1852 3801±2592 286±99.6 310±92.1(10)(10) (10) (10) (10)健腎片II組 4.2 5947±1653 4269±2572ΔΔ4187±1635Δ00357±95.2ΔΔ363±50.5ΔΔ(10)(10) (10) (10) (10)健腎片III組8.4 5023±1572 4888±2434ΔΔ4887±2709ΔΔ362±96.8ΔΔ388±40.4ΔΔ(10)(10) (10) (10) (10)與正常對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
與模型對照組比較ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。 內為動物數。
由表7可知，造模後大鼠Ucr、Ccr下降，與正常組比較P＜0.05。給藥4周後，健腎片II、III組Ucr、Ccr較模型對照組升高，P＜0.05、0.01。
2.7病理形態學改變2.7.1免疫螢光檢查在螢光顯微鏡下放大400倍觀察，記錄螢光強度，並用柯達400(27定)膠捲攝片，曝光指數設定為800，測定自動曝光時間(秒)。每個標本分別測定5個腎小球，求出平均值。結果見下表。
表8 4周時大鼠腎組織免疫螢光曝光時間的比較(秒，X±S)組別 劑量 IgG C3(g/Kg體重)模型對照組-0.76±0.061.43±0.83腎炎四味片組 1.33 1.85±0.404.76±1.69Δ健腎片I組 2.1 5.98±0.58Δ6.92±1.10Δ健腎片II組4.2 10.25±0.97Δ11.19±1.56Δ健腎片III組 8.4 15.84±1.97ΔΔ21.35±2.19ΔΔ與模型對照組比較 P＜0.05。
AAP＜0.01。
正常對照組在螢光顯微鏡下，腎小球毛細血管壁無IgG、C3沉積。
模型對照組IgG、C3沿腎小球毛細血管壁呈耀眼的瀰漫性的細顆粒狀沉積，螢光強度為+++～++++。放大400倍攝片時自動曝光時間最短。
腎炎四味片組IgG、C3沿腎小球毛細血管壁呈細顆粒狀沉積，螢光強度為++～+++。攝片時自動曝光時間較模型組延長。見圖3-4。
健腎片I組IgG、C3沿腎小球毛細備管壁呈細顆粒狀沉積，螢光強度++～+++，自動曝光時間較模型對照組延長，P＜0.05。見圖5-6。
健腎片II組IgG、C3沿腎小球毛細血管壁呈細顆粒狀沉積，螢光強度+～++，亮度較模型組明顯減弱，自動曝光時間較模型對照組延長，P＜0.05。健腎片III組IgG、C3沿腎小球毛細血管壁似乎可見有細顆粒狀沉積，螢光強度±～+，自動曝光時間明顯延長，與模型對照組比較P＜0.01。
2.7.2光鏡檢查參照章友康[2]等方法測量腎小球直徑和腎小球內細胞數。光鏡下放大400倍，腎小球直徑為每張切片中5個最大腎小球直、橫徑的平均值，腎小球細胞數為每張切片中5個最大腎小球細胞數的平均值。結果見下表。
表9 4周時大鼠腎小球直徑和腎小球細胞數的比較(X±S)組別 劑量 腎小球直徑 腎小球細胞數(g/Kg體重) (μm)(個/腎小球)正常對照組 - 89.10±3.12 43.50±5.81模型對照組 - 107.21±6.34*76.47±6.20*腎炎四味片組 1.33 103.54±5.79 59.20±7.24健腎片I組 2.1 105.46±7.01 62.32±8.15健腎片II組 4.2 97.50±6.03 56.78±5.38健腎片III組8.4 92.14±6.40Δ51.54±4.36Δ與正常對照組比較*P＜0.05。
與模型對照組比較ΔP＜0.05。
正常對照組HE染色腎小球結構正常分布均勻，腎小球毛細血管袢開放，基底膜無增厚，上皮細胞足突形態正常，繫膜細胞及基質無增殖，腎小球直徑為89.10±3.12llm，腎小球細胞數為43.50±5.81個/腎小球，腎小管、間質無異常。PAS、PAM、Masson染色無異常。
模型對照組在HE、PAS、PAM、MASSON染色下，腎小球體積增大，細胞數增加，腎小球直徑為107.21±6.34llm，腎小球細胞數為76.47±6.20個/腎小球，與正常組比較P＜0.05。基質增多，基底膜無明顯增厚現象。
腎炎四味片組、健腎片I、I.I、III組腎小球體積增大，細胞數略增多，健腎片III組腎小球直徑為92.14±6.40lim，腎小球細胞數為51.54±4.36個/腎小球，與模型對照組比較P＜0.05。基底膜無明顯增厚。
2.7.3電鏡檢查正常對照組腎小球細血管袢開放，內皮細胞分布均勻，基底膜厚度100～150，無增厚，無電子緻密物沉積，三層結構清晰，上皮細胞無腫脹，足突清晰無融合，繫膜區無擴大，未見繫膜細胞增生基質增多。見

圖17-18。
模型對照組腎小球毛細血管基底膜較正常組增厚，厚度為200～300，上皮細胞下見少量電子緻密物沉積，上皮細胞廣泛足突融合，有明顯的假絨毛樣改變。
腎炎四味片組腎小球毛細血管基底膜無明顯增厚，上皮細胞下無電子緻密物沉積，上皮細胞足突融合、有假絨毛樣改變。見圖23-24。
健腎片工組腎小球毛血血管基底膜無明顯增厚，上皮細胞足突融合，假絨毛樣改變仍存在，未見電子緻密物沉積。健腎片II組腎小球毛細血管基底膜無明顯增厚，未見電子緻密物沉積，上皮細胞足突融合，有假絨毛樣改變。
健腎片III組腎小球超微結構接近正常，腎小球毛細血管壁基底膜無增厚，無電子緻密物沉積，上皮細胞足突融合及假絨毛樣改變明顯減輕。
3試驗結論用C-BSA製作大鼠MN模型已被廣泛用於藥理藥效學研究。由於抗原的理化或免疫學特性，可預先種植或結合於腎小球，後來在腎臟原位形成IC，最後導致腎炎的產生。[2]本實驗用C-BSA複製大鼠膜性腎病模型，與文獻報導變化一致。採用健腎片乾粉高、中、低劑量組灌服MN大鼠連續4周，結果表明健腎片I、II、III組對大鼠刪的尿蛋白有明顯的降低作用，並能降低血肌酐、尿素氮，提高內生肌酐消除率，升高血漿白蛋白，降低膽固醇、甘油三酯，且具有明顯的利尿作用。腎臟組織學觀察提示，健腎片I、II、III劑量組能減輕刪大鼠腎小球毛細血管基底膜的增厚和C3、IgG的沉積的螢光反應，及上皮電子緻密物的沉積，健腎片組病理損害明顯輕於模型對照組。
實驗例2對嘌呤黴素所致大鼠微小病變型腎病的影響1、分組及用藥劑量同實驗例1。
1.3給藥時間從第一次注射嘌吟黴素起，連續給藥4周。
1.4檢測指標1.4.1用藥前及用藥2周、4周分別收集24小時尿標本，測定尿量，檢測24小時尿蛋白定量(UTP)、24小時尿肌酐(Ucr)。
1.4.2用藥2周、4周分別眼眶靜脈叢採血檢測血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)、膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)。
1.4.3每組按從小到大編號順序取2份，腎組織標本分別進行邢染色、PAS染色、PAM染色、Masson染色做光鏡檢查，並做超薄切片進行電鏡檢查。
病理組織學檢查由江蘇省中醫院病理科、南京軍區總院病理科電鏡室承擔。
2結果2.1一般狀況及尿量變化表10 健腎片對嘌呤黴素所致微小病變型腎病大鼠體重的影響(g，X±S)組別 劑量 給藥前體重 給藥後體重(g/Kg體重) 1周 2周 3周 4周正常對照組-199.0±14.87212.5±16.71228.0±17.98244.5±16.91262.5±18.45模型對照組-200 5±14.62204.5±15.54210.0±16.50216.0±18.23*226.5±20 69*腎炎四味片組 1.33 200.0±13.74206.0±13.50206.5±14.54229.0±18.07246.5±20.55健腎片I組 2.1 199.5±16.41204.0±18.38211.5±18.57221.5±20.56233 5±22.49*健腎片II組4.2 201.0±13.29208.5±15.64219.5±17.71233.0±19.61248.5±22.24健腎片m組 8.4 198.5±15.64205.5±16.95217.5±18.61234.0±22.09251.5±24.16Δ與正常對照組比較*p＜0.05。
與模型對照組比較P＜0.05。
表11 健腎片對嘌呤黴素所致微小病變型腎病大鼠尿量的影響(ml/24h，X±S)組別 劑量 給藥前給藥後2周4周(g/kg體重)正常對照組-12.57±3.47 13.13±5.74 12.44±2.74(10) (10) (10)模型對照組-3.29±5.068.63±3.21**7.31±3.90**(10) (10) (10)腎炎四味片組 1.33 13.02±4.95 8.58±4.69 9.65±3.53(10) (10) (10)健腎片I組 2.1 2.86±3.8714.50±8.96ΔΔ13.22±4.68ΔΔ(10) (10) (10)健腎片II組4.2 13.85±4.24 12.48±3.02Δ12.95±3.02ΔΔ(10) (10) (10)健腎片III組 8.4 12.73±3.62 10.25±4.98 9.38±3.46(10) (10) (10)與正常對照組比較*p＜0.05，**P＜0.01與模型對照組比較P＜0.05，P＜0.01，內為動物數。
造模大鼠腹腔注射嘌呤黴素後，出現飲食減少、大便稀溏，懶動，喜拱背扎堆，體重增長減慢等變化。各治療組與模型對照組相比，程度要輕，體重增長高於模型對照組，其中健腎片工II組體重明顯高於模型對照組，P＜0.05。造模後模型對照組大鼠尿量在2周、4周時均減少，與正常組比較P＜0.01。健腎片I、II組尿量在2周、4周時比模型對照組明顯增加，P＜0.01，P＜0.05。
2.2 24小時尿蛋白定量的變化表12健腎片對嘌吟黴素所致微小病變型腎病大鼠UTP的影響(mg/24h X±S)組別 劑量 給藥前 給藥後2周 4周(g/Kg體重)正常對照組- 8.15±3.21 7.37±2.03 8.20±3.65(10) (10) (10)模型對照組- 7.90±2.06 1783±288**1805±413**(10) (10) (10)腎炎四味片組 1.33 7.69±2.64 781±204ΔΔ983±276ΔΔ(10) (10) (10)健腎片I組 2.1 8.12±2.12 803±147ΔΔ1121±387ΔΔ(10) (10) (10)健腎片II組4.2 7.85±2.24 794±245ΔΔ811±319ΔΔ(10) (10) (10)健腎片III組 8.4 7.86±2.33 431±67ΔΔ625±127ΔΔ(10) (10) (10)與正常對照組比較 *P＜0.01與模型對照組比較「P＜0.01，內為動物數從表12可以看出，造模後大鼠尿蛋白明顯增加，2周、4周時模型組尿蛋白與正常組比較均有非常顯著差異，P＜0.01。健腎片I、II、III組和腎炎四味片組2周、4周時尿蛋白均明顯低於模型對照組，P＜0.01。
2.3血肌酐和尿素氮的變化表13 健腎片對嘌呤黴素所致微小病變型腎病大鼠Scr和BUN的影響(X±S)組別 劑量 Scr(μmmol/L) BUN(mmol/L)(g/Kg體重) 2周 4周2周4周正常對照組-99±8.46102±8.87 3.51±0.92 3.83±1.42(10)(10) (10) (10)模型對照組-130±5.61**122±15.19**8.99±4.03**9.29±3.11**(10)(8)(10) (10)腎炎四味片組 1.33 105±4.67ΔΔ119±12.94 8.47±2.21 6.51±1.31ΔΔ(10)(10) (10) (10)健腎片I組 2.1 116±13.55ΔΔ121±15.52 7.62±±4.70 6.95±1.30Δ(10)(10) (10) (10)健腎片II組4.2 103±4.04ΔΔ118±17.20 6.51±3.15Δ6.40±1.12ΔΔ(10)(10) (10) (10)健腎片III組 8.4 101±4.25ΔΔ117±8.47Δ8.30±2.56 6.93±1.87Δ(10)(10) (10) (10)
與正常對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01與模型對照組比較P＜0.05，P＜0.01，內為動物數。
表13說明，造模後模型組大鼠血肌酐、尿素氮升高，與正常組比較有非常顯著差異，P＜0.01。各治療組大鼠血肌酐、尿素氮較模型組降低。其中2周時健腎片I、II、III組和腎炎四味片組血肌酐明顯低於模型對照組，P＜0.01，健腎片II組尿素氮低於模型組，P＜0.05；4周時健腎片I、II組血肌酐與模型組比較有顯著差異，P＜0.05；4周時健腎片III組血肌酐與模型組比較有顯著差異，P＜0.05，健腎片II組和腎炎四味片組尿素氮與模型組比較P＜0.01，健腎片I、III組尿素氮與模型組比較P＜0.05。
2.4血漿白蛋白的變化結果見表14。
表14健腎片對嘌呤黴素所致微小病變型腎病大鼠ALB的影響(g/L，±S)組別 劑量 2周 4周(g/Kg體重)正常對照組 -36.40±0.84 38.5±0.97ΔΔ(10) (10)模型對照組 -33.26±0.23**32.5±0.44**(10) (10)腎炎四味片組 1.33 35.25±0.36Δ34.25±0.73(10) (10)健腎片I組 2.1 34.40±0.73 33.05±0.12(10) (10)健腎片II組 4.2 36.53±0.24ΔΔ36.97±0.23ΔΔ(10) (10)健腎片III組8.4 36.01±0.52ΔΔ35.92±0.38Δ(10) (10)與正常對照組比較 **P＜0.01與模型對照組比較ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01表14顯示，造模後模型組大鼠ALB明顯下降，與正常組比較有非常顯著差異，P＜0.01。健腎片II、III組較模型組升高，比較有顯著差異和非常顯著差異，P值分別＜0.05，＜0.01。
2.5膽固醇與甘油三酯的變化表15健腎片對嘌呤黴素所致微小病變型腎病大鼠CHO、TG的影響(mmol/L，X±S)組別 劑量 CHOTG(g/Kg體重)2周 4周2周4周正常對照組 - 1.97±0.16 1.46±0.10 1.14±0.19 2.14±0.34(10)(10) (10) (10)模型對照組 - 2.91±1.00**3.06±2.06**1.67±0.70*2.79±0.69*(10)(10) (10) (10)腎炎四味片組 1.33 1.75±0.47Δ2.52±0.37 1.50±0.95 2.14±0.55Δ(10)(10) (10) (10)健腎片I組 2.1 2.00±0.99 2.67±0.67 1.56±0.98 2.25±1.22(10)(10) (10) (10)健腎片II組 4.2 1.80±1.01Δ2.62±0.82 1.28±0.52Δ1.90±0.82Δ(10)(10) (10) (10)健腎片III組8.4 1.65±0.65Δ2.29±0.61Δ1.28±0.78Δ1.46±0.50ΔΔ(10) (10)(10) (10)與正常對照組比較*P＜0.05，**p＜0.01與模型對照組比較ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01，內為動物數。
由表15可知，造模後模型組大鼠CHO、TG均升高，與正常組比較分別P＜0.01和P＜0.05。各治療組CHO、TG較模型組降低，2周時健腎片II、III組CHO、TG與模型組比較P＜0.05；4周時健腎片II組TG與模型組比較P＜0.05，健腎片III組CHO、TG與模型組比較P＜0.05，P＜0.01。
2.6病理形態學改變2.6.1光鏡檢查模型組HE染色示近曲小管嚴重破壞，小管內皮損傷，小管上皮細胞有泡沫樣變性，局部小管有壞死。PAS染色示腎小管刷狀緣破壞明顯。
腎炎四味片組，健腎片I、II、III劑量組HE染色示腎組織已基本達到正常水平，PAS染色刷狀緣修複比較明顯。
2.6.2電鏡檢查模型組腎小球基底膜外側上皮細胞足突腫大，細胞質內空泡變性，溶酶體增多，間質細胞增多，近曲小管微絨毛受損傷，遠曲小管刷狀緣有病變。
腎炎四味片組，健腎片I、II、III劑量組病理改變輕於模型組，上皮細胞足突基本正常，溶酶體仍多，但空泡變性減少，間質空隙增大，細胞減少，近曲小管內膜恢復正常，遠曲小管微絨毛正常。見圖33。健腎片I、II、III劑量組的病理改變又輕於腎炎四味片組。
2.6.3組織免疫檢查光鏡見模型組在破壞的腎小管內，有較多的補體C3；各治療組隨著腎小管組織的修復，補體C3大腎組織內在大減少，但修復的組織內仍見有補體C3。免疫電鏡示模型組損傷絨毛區、管腔內有絨毛碎片，內含大量C3補體，而各治療組損傷片斷仍有，內含C3補體量減少。
3試驗結論現已發現在眾多的動物腎病模型中，嘌吟黴素連續注射於大鼠可獲得類似於人類的微小病變腎病。嘌呤黴素所致腎病的機理，多數學者認為是嘌呤黴素對腎，特別是對腎小球直接損害所致。在本次實驗中用嘌呤黴素製作大鼠微小病變型腎病模型，與文獻報導變化一致。採用健腎片乾粉高、中、低劑量組灌服微小病變型腎病大鼠連續4周，結果表明健腎片I、II、III組對大鼠微小病變型腎病的尿蛋白有顯著的降低作用；並能降低血肌酐、尿素氮，升高血漿白蛋白，降低膽固醇、甘油三酯，且健腎片I、II組具有明顯的利尿作用，與模型對照組對比P＜0.01。腎臟組織學檢查提示健腎片I、II、III劑量組能減輕腎小球基底膜外側上皮細胞足突腫大，減少細胞質內的空泡變性，病理損害明顯輕於模型對照組。
本發明下列實施例均能實現上述實驗例的效果。
實施例1黃芪(生)875g茯苓437.5g淫羊藿233g僵蠶350g全蠍 43.7g 澤瀉233g 石韋437.5g青風藤875g青風藤過20目篩粉碎成粗粉，在有蓋容器中將藥材和1.5倍量PH值為8.0～9.0的75％的乙醇浸漬6～8小時，取出、分層，將潤溼的藥材鬆緊適度地裝於滲漉筒中，藥材裝填好後，先打開浸液出口，再添加8.5倍量PH值為8.0～9.0的75％的乙醇，按每公斤藥材每分鐘1～3ml的速度進行滲漉，收集滲漉液，滲漉液的PH值為弱鹼性；滲漉液於75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至80℃下相對密度為1.35，即得青風藤濃縮液；黃芪(生)、茯苓、淫羊藿，加8倍量水煎煮2次，每次1.5小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至適量，每毫升相當於原藥材2g，離心，得離心液，再濃縮至80℃下相對密度為1.35，得黃芪(生)、茯苓、淫羊藿濃縮液；僵蠶、全蠍粉碎成粗粉，加12倍量80％的乙醇照《中華人民共和國藥典》2000年版一部附錄I0流浸膏劑與浸膏劑下的方法滲漉，收集滲漉液，75～80℃的條件下回收乙醇，濃縮至80℃下相對密度為1.25，即得僵蠶、全蠍濃縮液；石韋、澤瀉一起加6倍量水煎煮2次，每次1小時，合併煎煮液，濾過，濾液濃縮至適量，每毫升相當於原藥材2g，加95％的乙醇，使含醇量達70％，充分攪拌，靜置12小時，取上清液，在75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至80℃相對密度為1.35，即得石韋、澤瀉濃縮液；將濃縮液青風藤濃縮液和僵蠶、全蠍濃縮液混和，溼法制粒，80℃風熱乾燥，得幹顆粒；將黃芪(生)、茯苓、淫羊藿濃縮液和石韋、澤瀉濃縮液混和，加入10％藥用糊精拌勻，80℃風熱乾燥，100目篩粉碎，加入5％的藥用澱粉和1％的微晶纖維素，混勻，制粒，整粒，得幹顆粒；將兩種顆粒和0.5％的藥用硬脂酸鎂混勻，壓製成1000片，包薄膜衣，即得；每片重0.35g，相當於原藥材3.48g。
實施例2黃芪(生)890g茯苓422.5g淫羊藿240g僵蠶334g全蠍 45.7g 澤瀉240g 石韋422.5g青風藤890g製備方法青風藤過20目篩粉碎成粗粉，在有蓋容器中將藥材和1.5倍量PH值為8.0～9.0的78％的乙醇浸漬7～8小時，取出、分層，將潤溼的藥材鬆緊適度地裝於滲漉筒中，藥材裝填好後，先打開浸液出口，再添加8.5倍量PH值為8.0～9.0的78％的乙醇，按每公斤藥材每分鐘1～3ml的速度進行滲漉，收集滲漉液，滲漉液的PH值為弱鹼性；滲漉液於75～75℃的條件下回收乙醇，再濃縮至75℃下相對密度為1.35，即得青風藤濃縮液；黃芪(生)、茯苓、淫羊藿，加8倍量水煎煮2次，每次1.5小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至適量，每毫升相當於原藥材2g，離心，得離心液，再濃縮至80℃下相對密度為1.35，得黃芪(生)、茯苓、淫羊藿濃縮液；
僵蠶、全蠍粉碎成粗粉，加12倍量78％的乙醇照《中華人民共和國藥典》2000年版一部附錄IO流浸膏劑與浸膏劑下的方法滲漉，收集滲漉液，75～80℃的條件下回收乙醇，濃縮至75℃下相對密度為1.25，即得僵蠶、全蠍濃縮液；石韋、澤瀉一起加6倍量水煎煮2次，每次1小時，合併煎煮液，濾過，濾液濃縮至適量，每毫升相當於原藥材2g，加95％的乙醇，使含醇量達70％，充分攪拌，靜置12小時，取上清液，在75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至75℃相對密度為1.35，即得石韋、澤瀉濃縮液；將濃縮液青風藤濃縮液和僵蠶、全蠍濃縮液混和，溼法制粒，75℃風熱乾燥，得幹顆粒；將黃芪(生)、茯苓、淫羊藿濃縮液和石韋、澤瀉濃縮液混和，加入10％藥用糊精拌勻，75℃風熱乾燥，100目篩粉碎，加入5％的藥用澱粉和1％的微晶纖維素，混勻，制粒，整粒，得幹顆粒；將兩種顆粒加常規賦型劑糊精適量，製成膠囊1000粒，即得組合物的膠囊，每粒裝0.35g，相當於原藥材3.48g。
實施例3本組合物片劑的質量控制方法鑑別(1)取本組合物製成的片劑10片，除去薄膜衣後，研細，加甲醇50ml，置水浴上加熱回流2小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇提取2次，每次20ml，合併正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，每次30ml，棄去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸乾，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠6薄層板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酚乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(2)取本組合物製成的片劑10片，除去薄膜衣後，研細，加70％乙醇50ml，加熱回流1小時，放冷，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合併正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對照品，加甲醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠H薄層板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；(3)取本組合物製成的片劑15片，除去薄膜衣後，研細，加乙醚25ml，加熱回流1小時，濾過，濾液揮幹，殘渣加環乙烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取茯苓對照藥材8g，加乙醚40ml，同法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液4μl，對照藥材溶液10μl，分別點於同一矽膠6薄層板上，以石油醚30-60℃下，84∶15∶1的石油醚-丙酮-醋酸乙酯為展開劑，預飽和15分鐘，展開，取出，晾乾，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；(4)取本組合物製成的片劑5片，除去薄膜衣，研細，加乙醇15ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取青藤鹼對照品，加乙醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以7∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以稀碘化鉍鉀試劑；供試品色譜中，在與對照晶色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定(1)黃芪甲苷取本組合物製成的片劑20片，除去薄膜衣後，研細，取細粉39，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量，冷浸過夜，置水浴上加熱回流提取至無色，提取液回收甲醇並濃縮至於，殘渣加水15ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合併正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次50ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加水5～7ml微熱使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱，其內徑1.5cm，長12cm，，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇100ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，繼用70％乙醇120ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解並轉移至2ml量瓶內，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，精密吸取供試品溶液4μl，對照晶溶液2μl與6μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB薄層掃描法)進行掃描，波長λs＝530nm，λR＝700nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算，即得本品每片含黃芪以黃芪甲苷(C41H68O14)計不得少於0.18mg；(2)淫羊藿苷色譜條件與系統適應性實驗，用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以30∶70的乙腈-水為流動相，檢測波長270nm，理論板數按淫羊藿苷峰計算應不低於1500；對照品溶液的製備，精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇製成每1ml含40ug的溶液，即得對照品溶液；供試品溶液的製備，取本組合物製成的片劑10片，除去薄膜衣後，研細，取0.5g，精密稱定，加70％乙醇25ml，超聲處理1小時，濾過，濾渣用適量70％乙醇洗滌，收集濾液與洗滌液，置水浴上蒸於，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合併正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至10ml量瓶內，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，收集續濾液，作為供試品溶液；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)計不得少於0.20mg.
權利要求
1.一種治療慢性腎炎的中藥物組合物，其特徵在於該藥物組合物是由下述原料藥製成的黃芪700-1000重量份茯苓300-500重量份淫羊藿100-300重量份 僵蠶200-500重量份全蠍30-50重量份 澤瀉100-300重量份石韋300-600重量份 青風藤700-1000重量份
2.如權利要求1所述的藥物組合物，其特徵在於該藥物組合物是由下述原料藥製成的生黃芪875重量份 茯苓437.5重量份淫羊藿233重量份 僵蠶350重量份全蠍43.7重量份澤瀉233重量份石韋437.5重量份 青風藤875重量份
3.如權利要求1所述的藥物組合物，其特徵在於該藥物組合物是由下述原料藥製成的生黃芪890重量份 茯苓422.5重量份淫羊藿240重量份 僵蠶334重量份全蠍45.7重量份澤瀉240重量份石韋422.5重量份 青風藤890重量份
4.如權利要求1、2或3所述的藥物組合物，其特徵在於該藥物組合物還可加入賦型劑製成臨床可接受的劑型。
5.如權利要求1、2或3所述的藥物組合物的製備方法，其特徵在於該方法包括以下步驟青風藤粉碎成粗粉，在有蓋容器中將藥材和1-2倍量PH值為8.0～9.0的70-85％的乙醇浸漬6～8小時，取出、分層，將潤溼的藥材鬆緊適度地裝於滲漉筒中，藥材裝填好後，先打開浸液出口，再添加8.5倍量PH值為8.0～9.0的70-85％的乙醇，按每公斤藥材每分鐘1～3ml的速度進行滲漉，收集滲漉液，滲漉液的PH值為弱鹼性；滲漉液於75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至80℃下相對密度為1.20-1.35，即得青風藤濃縮液；生黃芪、茯苓、淫羊藿，加7-9倍量水煎煮2-3次，每次1-3小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至適量，每毫升相當於原藥材2g，離心，得離心液，再濃縮至80℃下相對密度為1.20-1.35，得黃芪、茯苓、淫羊藿濃縮液；僵蠶、全蠍粉碎成粗粉，加10-14倍量75-85％的乙醇照流浸膏劑與浸膏劑下的方法滲漉，收集滲漉液，75～80℃的條件下回收乙醇，濃縮至80℃下相對密度為1.20-1.35，即得僵蠶、全蠍濃縮液；石韋、澤瀉一起加5-7倍量水煎煮2次，每次1-2小時，合併煎煮液，濾過，濾液濃縮至適量，加90-96％的乙醇，使含醇量達65-80％，充分攪拌，靜置10-14小時，取上清液，在75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至80℃相對密度為1.20-1.35，即得石韋、澤瀉濃縮液；將濃縮液青風藤濃縮液和僵蠶、全蠍濃縮液混和，得混合物A；將黃芪、茯苓、淫羊藿濃縮液和石韋、澤瀉濃縮液混和，得混合物B；將上述兩種A、B混合物混合得本發明藥物組合物，該藥物組合物，經過常規工序直接或加入藥學上可接受的賦型劑製成臨床可接受的劑型。
6.如權利要求5所述的藥物組合物的製備方法，其特徵在於該方法為青風藤過20目篩粉碎成粗粉，在有蓋容器中將藥材和1.5倍量PH值為8.0～9.0的75％的乙醇浸漬6～8小時，取出、分層，將潤溼的藥材鬆緊適度地裝於滲漉筒中，藥材裝填好後，先打開浸液出口，再添加8.5倍量PH值為8.0～9.0的75％的乙醇，按每公斤藥材每分鐘1～3ml的速度進行滲漉，收集滲漉液，滲漉液的PH值為弱鹼性；滲漉液於75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至80℃下相對密度為1.35，即得青風藤濃縮液；生黃芪、茯苓、淫羊藿，加8倍量水煎煮2次，每次1.5小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至適量，每毫升相當於原藥材2g，離心，得離心液，再濃縮至80℃下相對密度為1.35，得黃芪(生)、茯苓、淫羊藿濃縮液；僵蠶、全蠍粉碎成粗粉，加12倍量80％的乙醇流浸膏劑與浸膏劑下的方法滲漉，收集滲漉液，75～80℃的條件下回收乙醇，濃縮至80℃下相對密度為1.25，即得僵蠶、全蠍濃縮液；石韋、澤瀉一起加6倍量水煎煮2次，每次1小時，合併煎煮液，濾過，濾液濃縮至適量，每毫升相當於原藥材2g，加95％的乙醇，使含醇量達70％，充分攪拌，靜置12小時，取上清液，在75～80℃的條件下回收乙醇，再濃縮至80℃相對密度為1.35，即得石韋、澤瀉濃縮液；將濃縮液青風藤濃縮液和僵蠶、全蠍濃縮液混和，溼法制粒，80℃風熱乾燥，得幹顆粒；將黃芪(生)、茯苓、淫羊藿濃縮液和石韋、澤瀉濃縮液混和，加入10％藥用糊精拌勻，80℃風熱乾燥，100目篩粉碎，加入5％的藥用澱粉和1％的微晶纖維素，混勻，制粒，整粒，得幹顆粒；將兩種顆粒和0.5％的藥用硬脂酸鎂混勻，壓製成1000片，包薄膜衣，即得。
7.權利要求1、2或3所述的藥物組合物的質量控制方法，其特徵在於該方法中的鑑別方法包括如下鑑別中的一種或幾種a.取本組合物製劑3.5g，加甲醇40-60ml，置水浴上加熱回流1.5-3小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水9-12ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇提取1-3次，每次20ml，合併正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，每次20-40ml，棄去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸乾，殘渣加甲醇1.5-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠6薄層板上，以12-14∶5-7∶1.5-3的氯仿-甲醇-水在9-11℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以8-12％硫酚乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；b.取本組合物製劑3.5g，加60-80％乙醇40-60ml，加熱回流0.5-1.5小時，放冷，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水9-11ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取1-3次，每次15-25ml，合併正丁醇液，用氨試液洗滌1-3次，每次20-40ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對照品，加甲醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠H薄層板上，以9-11∶0.5-1.5∶0.5-1.5∶0.5-1.5醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，置紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；c.取本組合物製劑5.3g，加乙醚20-35ml，加熱回流0.5-1.5小時，濾過，濾液揮幹，殘渣加環乙烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取茯苓對照藥材8g，加乙醚30-50ml，同法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液4μl，對照藥材溶液10μl，分別點於同一矽膠6薄層板上，以石油醚30-60℃下，80-90∶14-16∶0.5-1.5的石油醚-丙酮-醋酸乙酯為展開劑，預飽和10-20分鐘，展開，取出，晾乾，置紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；d.取本組合物製劑1.8g，加乙醇14-18ml，超聲處理25-35分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取青藤鹼對照品，加乙醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以6-8∶1-3∶0.5-1.5的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以稀碘化鉍鉀試劑；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
8.如利要求7所述的藥物組合物的質量控制方法，其特徵在於該方法中的鑑別方法包括如下鑑別中的一種或幾種a.取本組合物製劑3.5g，研細，加甲醇50ml，置水浴上加熱回流2小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇提取2次，每次20ml，合併正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，每次30ml，棄去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸乾，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠6薄層板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酚乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；b.取本組合物製劑3.5g，除去薄膜衣後，研細，加70％乙醇50ml，加熱回流1小時，放冷，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合併正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對照品，加甲醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠H薄層板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；c.取本組合物製劑5.3g，研細，加乙醚25ml，加熱回流1小時，濾過，濾液揮幹，殘渣加環乙烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取茯苓對照藥材8g，加乙醚40ml，同法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液4μl，對照藥材溶液10μl，分別點於同一矽膠6薄層板上，以石油醚30-60℃下，84∶15∶1的石油醚-丙酮-醋酸乙酯為展開劑，預飽和15分鐘，展開，取出，晾乾，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；d.取本組合物製劑1.8g，研細，加乙醇15ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取青藤鹼對照品，加乙醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以7∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以稀碘化鉍鉀試劑；供試品色譜中，在與對照晶色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
9.如利要求1、2或3所述的藥物組合物的質量控制方法，其特徵在於該方法中的含量測定為包括如下測定方法中的一種或幾種a.黃芪甲苷，取本組合物製劑，研細，取細粉3g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量，冷浸過夜，置水浴上加熱回流提取至無色，提取液回收甲醇並濃縮至於，殘渣加水10-20ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3-5次，每次15-30ml，合併正丁醇提取液，用氨試液洗滌1-3次，每次40-60ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加水5～7ml微熱使溶解，放冷，通過吸附樹脂柱，以水40-60ml洗脫，棄去水液，再用30-60％乙醇洗脫，棄去30-60％乙醇洗脫液，繼用60-80％乙醇100-140ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解並轉移至2ml量瓶內，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，精密吸取供試品溶液4μl，對照晶溶液2μl與6μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以12-14∶5-7∶1-3的氯仿-甲醇-水在8-12℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以8-12％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法進行掃描，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算，即得本品每0.35g含黃芪以黃芪甲苷計不得少於0.18mg；b.淫羊藿苷∶色譜條件與系統適應性實驗，用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以25-40∶60-80的乙腈-水為流動相，檢測波長260-280nm，理論板數按淫羊藿苷峰計算應不低於1500；對照品溶液的製備，精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇製成每1ml含40ug的溶液，即得對照品溶液；供試品溶液的製備，取本組合物製劑，研細，取0.5g，精密稱定，加60-80％乙醇25ml，超聲處理0.5-2小時，濾過，濾渣用適量60-80％乙醇洗滌，收集濾液與洗滌液，置水浴上蒸於，殘渣加水8-12ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2-4次，每次15-25ml，合併正丁醇提取液，用氨試液洗滌1-3次，每次15-25ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至10ml量瓶內，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，收集續濾液，作為供試品溶液；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得本品每0.35g含淫羊藿以淫羊藿苷計不得少於0.20mg；
10.如利要求9所述的藥物組合物的質量控制方法，其特徵在於該方法中的含量測定為包括如下測定方法中的一種或幾種a.黃芪甲苷取本組合物製成的片劑20片，除去薄膜衣後，研細，取細粉3g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量，冷浸過夜，置水浴上加熱回流提取至無色，提取液回收甲醇並濃縮至於，殘渣加水15ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合併正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次50ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加水5～7ml微熱使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱，其內徑1.5cm，長12cm，，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇100ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，繼用70％乙醇120ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解並轉移至2ml量瓶內，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，精密吸取供試品溶液4μl，對照晶溶液2μl與6μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法進行掃描，波長λs＝530nm，λR＝700nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算，即得本品每片含黃芪以黃芪甲苷計不得少於0.18mg；b.淫羊藿苷色譜條件與系統適應性實驗，用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以30∶70的乙腈-水為流動相，檢測波長270nm，理論板數按淫羊藿苷峰計算應不低於1500；對照品溶液的製備，精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇製成每1ml含40ug的溶液，即得對照品溶液；供試品溶液的製備，取本品10片，除去薄膜衣後，研細，取0.5g，精密稱定，加70％乙醇25ml，超聲處理1小時，濾過，濾渣用適量70％乙醇洗滌，收集濾液與洗滌液，置水浴上蒸於，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合併正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至10ml量瓶內，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，收集續濾液，作為供試品溶液；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷計不得少於0.20mg；
11.如權利要求1、2或3所述的藥物組合物的質量控制方法包括如下步驟鑑別取本組合物製劑3.5g，研細，加甲醇50ml，置水浴上加熱回流2小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇提取2次，每次20ml，合併正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，每次30ml，棄去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸乾，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠6薄層板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酚乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；取本組合物製劑3.5g，除去薄膜衣後，研細，加70％乙醇50ml，加熱回流1小時，放冷，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合併正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對照品，加甲醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠H薄層板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-丁酮一水為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；取本組合物製劑5.3g，研細，加乙醚25ml，加熱回流1小時，濾過，濾液揮幹，殘渣加環乙烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取茯苓對照藥材8g，加乙醚40ml，同法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液4μl，對照藥材溶液10μl，分別點於同一矽膠6薄層板上，以石油醚30-60℃下，84∶15∶1的石油醚-丙酮-醋酸乙酯為展開劑，預飽和15分鐘，展開，取出，晾乾，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；取本組合物製劑1.8g，研細，加乙醇15ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取青藤鹼對照品，加乙醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以7∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以稀碘化鉍鉀試劑；供試品色譜中，在與對照晶色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定取本組合物製劑，研細，取細粉3g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量，冷浸過夜，置水浴上加熱回流提取至無色，提取液回收甲醇並濃縮至於，殘渣加水10-20ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3-5次，每次15-30ml，合併正丁醇提取液，用氨試液洗滌1-3次，每次40-60ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加水5～7ml微熱使溶解，放冷，通過吸附樹脂柱，以水40-60ml洗脫，棄去水液，再用30-60％乙醇洗脫，棄去30-60％乙醇洗脫液，繼用60-80％乙醇100-140ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解並轉移至2ml量瓶內，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，精密吸取供試品溶液4μl，對照晶溶液2μl與6μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以12-14∶5-7∶1-3的氯仿-甲醇-水在8-12℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以8-12％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法進行掃描，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算，即得每0.35g含黃芪以黃芪甲苷計不得少於0.18mg；用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以25-40∶60-80的乙腈-水為流動相，檢測波長260-280nm，理論板數按淫羊藿苷峰計算應不低於1500；對照品溶液的製備，精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇製成每1ml含40μg的溶液，即得對照品溶液；供試品溶液的製備，取本組合物製劑，研細，取0.5g，精密稱定，加60-80％乙醇25ml，超聲處理0.5-2小時，濾過，濾渣用適量60-80％乙醇洗滌，收集濾液與洗滌液，置水浴上蒸於，殘渣加水8-12ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2-4次，每次15-25ml，合併正丁醇提取液，用氨試液洗滌1-3次，每次15-25ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至10ml量瓶內，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，收集續濾液，作為供試品溶液；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得每0.35g含淫羊藿以淫羊藿苷計不得少於0.20mg；
12.如權利要求11所述的藥物組合物的質量控制方法包括如下步驟鑑別取本組合物製成的片劑10片，除去薄膜衣後，研細，加甲醇50ml，置水浴上加熱回流2小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇提取2次，每次20ml，合併正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，每次30ml，棄去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸乾，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠6薄層板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酚乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；取本組合物製成的片劑10片，除去薄膜衣後，研細，加70％乙醇50ml，加熱回流1小時，放冷，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合併正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對照品，加甲醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠H薄層板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；取本組合物製成的片劑15片，除去薄膜衣後，研細，加乙醚25ml，加熱回流1小時，濾過，濾液揮幹，殘渣加環乙烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取茯苓對照藥材8g，加乙醚40ml，同法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液4μl，對照藥材溶液10μl，分別點於同一矽膠6薄層板上，以石油醚30-60℃下，84∶15∶1的石油醚-丙酮-醋酸乙酯為展開劑，預飽和15分鐘，展開，取出，晾乾，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；取本組合物製成的片劑5片，除去薄膜衣，研細，加乙醇15ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取青藤鹼對照品，加乙醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以7∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以稀碘化鉍鉀試劑；供試品色譜中，在與對照晶色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定黃芪甲苷取本組合物製成的片劑20片，除去薄膜衣後，研細，取細粉39，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量，冷浸過夜，置水浴上加熱回流提取至無色，提取液回收甲醇並濃縮至於，殘渣加水15ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合併正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次50ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加水5～7ml微熱使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱，其內徑1.5cm，長12cm，，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇100ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，繼用70％乙醇120ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解並轉移至2ml量瓶內，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，精密吸取供試品溶液4μl，對照晶溶液2μl與6μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法進行掃描，波長λs＝530nm，λR＝700nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算，即得本品每0.35g含黃芪以黃芪甲苷計不得少於0.18mg；淫羊藿苷色譜條件與系統適應性實驗，用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以30∶70的乙腈-水為流動相，檢測波長270nm，理論板數按淫羊藿苷峰計算應不低於1500；對照品溶液的製備，精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇製成每1ml含40μg的溶液，即得對照品溶液；供試品溶液的製備，取本組合物製成的片劑10片，除去薄膜衣後，研細，取0.5g，精密稱定，加70％乙醇25ml，超聲處理1小時，濾過，濾渣用適量70％乙醇洗滌，收集濾液與洗滌液，置水浴上蒸於，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合併正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨液，分取正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至10ml量瓶內，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，收集續濾液，作為供試品溶液；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得本品每0.35g含淫羊藿以淫羊藿苷計不得少於0.20mg；
13.如權利要求1、2或3所述的藥物組合物在製備治療慢性腎炎的藥物中的應用。
14.如權利要求13所述的應用，其特徵在於所述治療慢性腎炎是指顯著降低尿蛋白。
15.如權利要求13所述的應用，其特徵在於所述治療慢性腎炎是指降低血肌酐、尿素氮，升高血漿白蛋白，降低膽固醇、甘油三酯。
16.如權利要求13所述的應用，其特徵在於所述治療慢性腎炎是指具有明顯的利尿作用。
17.如權利要求13所述的應用，其特徵在於所述治療慢性腎炎是指減輕腎小球基底膜外側上皮細胞足突腫大，減少細胞質內的空泡變性。
全文摘要
本發明公開了一種治療慢性腎炎的中藥組合物及其製備方法和質量控制方法。該組合物由黃芪、茯苓、淫羊藿、僵蠶、全蠍、澤瀉、石韋、青風藤組成。該中藥組合物製備時對不同組分採用滲漉、煎煮醇縮製成幹顆粒的方法，達到使有效藥物成分的充分發揮，同時本發明還提供了對該組合物採用成分鑑別、含量測定的質量控制方法。本組合物在治療慢性腎炎上具有效果穩定、顯著，無明顯毒副作用的特點。
文檔編號A61P13/12GK1500517SQ0214893
公開日2004年6月2日 申請日期2002年11月12日 優先權日2002年11月12日
發明者王鋼, 肖偉, 戴翔翎, 凌婭, 柳於介, 張孝法, 張艾麗, 王 鋼 申請人:江蘇康緣藥業股份有限公司