天然產物穗花杉雙黃酮治療病毒性疾病的新用途的製作方法

2023-12-09 01:27:11

專利名稱：天然產物穗花杉雙黃酮治療病毒性疾病的新用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，涉及穗花杉雙黃酮(amentoflavone)在製藥領域的新 用途，具體涉及穗花杉雙黃酮在治療病毒性疾病方面的新用途。 B肝病毒等各種肝炎病毒、以及各種呼吸道病毒所引起的病毒感染性疾病是一組 常見病，其發病率在全球呈逐步上升趨勢，而且不斷出現新的致病病毒。如2003年初在我 國部分省市流行的非典型肺炎(SARS)就是由冠狀病毒的變異病毒所引起的一種嚴重的病 毒性傳染病。還有前年出現的H5N1病毒及目前出現的H1N1病毒感染的疾病，都屬於病毒 感染性疾病。 病毒感染性疾病的危害不僅僅在於所引起的各種感染，更主要是其大多繼發或合 並細菌感染，故致使臨床症狀較重，病程較長，表現多樣化， 一直是危害人類健康的主要疾 病之一。 目前臨床治療病毒性疾病以化學合成和半合成的藥物為主。但是，由於半個多世 紀以來化學合成和半合成抗菌、抗病毒藥物的廣泛使用，已誘發病菌產生了耐藥性菌株，且 日漸增多條件性致病菌。加之其毒副作用較大等缺點，致使該類藥物儘管作為一線治療藥、 但已存在諸多不足。因此，抗病毒中藥具有副作用小而具有廣闊的應用前景，此新藥的開發 成功將產生重大的社會效益。 穗花杉雙黃酮是一種由天然植物、中藥材或中藥飲片中提取出來的具有顯著 抗病毒作用的化學成分。該天然產物的英文名為amentoflavone ;分子式為C^H^CV ; 分子量為538. 47，化學結構名稱為4H-1-苯並吡喃-4-酮，8-[5- (5， 7- 二羥基-4-氧 代-4H-l-苯並吡喃)-2-羥苯基]-5，7-二羥基-2-(4-羥苯基)-，英文化學結構名
(4H_l_Benzopy:ran_4_one， 8_[5_(5， 7_dihydroxy_4_oxo_4H_l_benzopy:ran_2_yl)_2_hydr oxyphenyl] _5， 7_dihydroxy_2_ (4-hydroxyphenyl) _)，結構式如下 中國藥典2005年版中規定巻柏為巻柏科植物巻柏
Selaginellatamariscina(Beauv. ) Spring或塾狀巻柏Selaginella pulvinata(Hook, et
Grev.)Maxim.的乾燥全草。全年均可採收，除去鬚根及泥沙，曬乾。辛，平。歸肝、心經。具 有活血通經。用於經閉痛經，癥瘕痞塊，跌扑損傷。巻柏炭化瘀止血。用於吐血，崩漏，便血， 脫肛。巻柏中含有多種化學成分，如黃酮類，現已發現巻柏中含有芹菜素(即igenin)、穗花 杉雙黃酮(amentoflavone)、扁柏雙黃酮(hinokiflavone)、異柳杉素(isocryptomerin)及 阿曼託黃色(amentoflavone)等；苯丙素類、生物鹼類、酚類、有機酸類等化合物。藥理作用
背景技術：
顯示具有免疫及抗腫瘤作用、對血液系統的作用、抗病毒、抑菌與抗炎作用、鎮痛鎮靜等作 用。而穗花杉雙黃酮用於治療B肝病毒、流感病毒等病毒性疾病的作用卻未見相關報導。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種天然化合物穗花杉雙黃酮用於治療病毒 性疾病的新用途。在臨床上可以製備成用於治療病毒性疾病的藥物製劑。所述的天然化合 物穗花杉雙黃酮，是從含有該成分的植物、中藥材或中藥飲片中提取出來的，如中藥巻柏或 其中藥飲片，優選的中藥材為巻柏科植物巻柏Selaginella tamariscina (Beauv.) Spring 或墊狀巻柏Selaginella pulvinata(Hook. etGrev. )Maxim.的乾燥全草。用該化合物做為 藥效成分來製備用於治療病毒性疾病的藥物製劑，可單獨或與製藥工藝中可接受的賦形劑 結合，按照常規方法製成口服給藥、腔道給藥、肌肉或靜脈給藥的藥物劑型。所述穗花杉雙 黃酮的含量在90%以上。本發明發現了中藥巻柏治療病毒性疾病的藥效成分，為其臨床應 用提供了科學依據，使穗花杉雙黃酮可做為一個天然的抗病毒劑，具有無成癮性、用量小的 特點。 穗花杉雙黃酮採用體外培養法篩選實驗，結果表明穗花杉雙黃酮對B肝病毒
的HBsAg和HBeAg有抑制作用，穗花杉雙黃酮在12. 5ug/ml的濃度時對HBsAg、 HBeAg的
抑制率分別為75. 7%、63. 6% ;穗花杉雙黃酮在25ug/ml的濃度時對HSV-I的抑制率分別
為55. 9% ;穗花杉雙黃酮在12. 5ug/ml的濃度時對流感病毒A型(H1N1)的抑制率分別為
61. 1% ;穗花杉雙黃酮在25ug/ml的濃度時對CVB3的抑制率分別為39. 8%。 因此，穗花杉雙黃酮為一種從天然植物中分離得到的抗病毒成分，成分含量在
90%以上，是一種具有開發前景的抗病毒中藥新藥製劑。 目前臨床治療病毒性疾病以化學合成和半合成的藥物為主。但是，由於半個多世 紀以來化學合成和半合成抗菌、抗病毒藥物的廣泛使用，已誘發病菌產生了耐藥性菌株，且 日漸增多條件性致病菌。加之其毒副作用較大等缺點，致使該類藥物儘管作為一線治療藥、 但已存在諸多不足。因此，抗病毒中藥具有副作用小而具有廣闊的應用前景，此新藥的開發 成功將產生重大的社會效益。
具體實施例方式
實施例1 :穗花杉雙黃酮(amentoflavone)對B肝病毒的抑制作用。
材料與方法 1.體外細胞模型B型肝炎病毒(HBV)轉染的H印G2細胞，即H印G2 2. 215細胞。
2. MTT法檢測樣品對細胞的毒性。 3.酶聯免疫法(EIA)檢測樣品對HBsAg和HBeAg的抑制作用。 試驗過程 1.藥物的細胞毒性檢測 H印G2 2. 2. 15細胞在96孔細胞培養板中培養48小時後，加入不同濃度含藥培養 液，繼續培養9天(每3天換液一次)，用MTT法檢測細胞存活率，確定藥物對H印G2 2. 2. 15 細胞的毒性濃度。 2.藥物對HBV病毒抗原抑制作用檢測
H印G2 2. 2. 15細胞在96孔細胞培養板中培養48小時後，加入無毒濃度下的系列 濃度的含藥培養液，繼續培養9天(每3天換液一次)，收集上清液，用HBsAg和HBeAg診斷 試劑盒(ELISA法)檢測HBsAg和HBeAg。
實驗結果 實驗結果表明穗花杉雙黃酮(amentoflavone)對HBsAg、 HBeAg抗原的分泌有抑
製作用，對2215細胞的無毒濃度為12. 5ug/ml，即(TC。 = 12. 5ug/ml)，穗花杉雙黃酮在
12. 5ug/ml的濃度時對HBsAg、HBeAg的抑制率分別為75. 7%、63. 6%。 實施例2 :穗花杉雙黃酮(amentoflavone)體外對皰疹病毒抑制活性檢測材料與
方法 1.體外宿主細胞Vero細胞。 2.病毒株單純皰疹病毒I型(HSV-I)。 3. CPE法檢測藥物對細胞的毒性。 4. CPE法(細胞病變)檢測藥物對皰疹病毒的抑制作用。 抗病毒試驗過程 1.藥物的細胞毒性檢測 Vero細胞在96孔細胞培養板中培養形成單層後，加入不同濃度的藥液，繼續培養 3天，用CPE法檢測藥物對Vero細胞的毒性。
2.藥物抗皰疹病毒作用檢測 Vero細胞在96孔細胞培養板中培養形成單層後，用10TCID50的HSV-I感染細胞， 再加入無毒濃度下的系列濃度的含藥培養液，繼續培養3天，經CPE法確定藥物對皰疹病毒 的抑制作用。
實驗結果 實驗結果表明穗花杉雙黃酮(amentoflavone)對Vero細胞的無毒濃度為25ug/ ml，即(TCO = 25ug/ml)，穗花杉雙黃酮在25ug/ml的濃度時對HSV-I的抑制率分別為 55. 9%。 實施例3 :穗花杉雙黃酮(amentoflavone)體外對流感病毒抑制活性檢測材料與 方法 1.體外宿主細胞MDCK細胞。 2.病毒株流感病毒A型(H1N1) (A3/京科/30/95)。
3. CPE法檢測藥物對細胞的毒性。 4. CPE法(細胞病變)檢測藥物對流感病毒的抑制作用。 試驗過程 1.藥物的細胞毒性檢測 MDCK細胞在96孔細胞培養板中培養形成單層後，加入不同濃度的藥液，繼續培養 3天，用CPE法檢測藥物對MDCK細胞的毒性。
2.藥物抗流感病毒作用檢測 MDCK細胞在96孔細胞培養板中培養形成單層後，用100TCID50的流感病毒感染細 胞，再加入無毒濃度下的系列濃度的含藥培養液，繼續培養3天，經CPE法確定藥物對流感 病毒的抑制作用。
實驗結果 實驗結果表明穗花杉雙黃酮(amentoflavone)對MDCK細胞的無毒濃度為12. 5ug/ ml，即(TC0 = 12. 5ug/ml)，穗花杉雙黃酮在12. 5ug/ml的濃度時對流感病毒A型(H1N1)的 抑制率分別為61. 1%。 實施例4 :穗花杉雙黃酮(amentoflavone)體外對柯薩奇病毒抑制活性檢測、材料 與方法 1.體外宿主細胞Vero細胞。 2.病毒株抗柯薩奇B3病毒(CVB3) Nancy毒株。 3. CPE法檢測藥物對細胞的毒性。 4. CPE法(細胞病變)檢測藥物對柯薩奇B3病毒的抑制作用。 試驗過程 1.藥物的細胞毒性檢測 Vero細胞在96孔細胞培養板中培養形成單層後，加入不同濃度的藥液，繼續培養 3天，用MTT法檢測藥物對Vero細胞的毒性。
2.藥物抗柯薩奇B3病毒作用檢測 Vero細胞在96孔細胞培養板中培養形成單層後，用100TCID50的柯薩奇B3病毒 感染細胞，再加入無毒濃度下的系列濃度的含藥培養液，繼續培養3天，經CPE法確定藥物 對柯薩奇B3病毒的抑制作用。
實驗結果 實驗結果表明穗花杉雙黃酮(amentoflavone)對Vero細胞的無毒濃度為25ug/ ml ，即(TC0 = 25ug/ml)，穗花杉雙黃酮在25ug/ml的濃度時對CVB3的抑制率分別為 39. 8%。 實施例5 : 取穗花杉雙黃酮(amentoflavone) 25g，加入澱粉細粉200g，用等量遞增法混勻，
加入滑石粉5g，硬脂酸鎂2g，混勻，用85%乙醇制粒，乾燥，整粒，壓製成1000片，每日3次，
每次2片。 實施例6 : 取穗花杉雙黃酮(amentoflavone) 25g，加入澱粉細粉150g，滑石粉10g，硬脂酸鎂 5g，混勻，制粒，乾燥，裝入膠囊，製成1000粒，每日3次，每次2片。
實施例7 : 取穗花杉雙黃酮(amentoflavone) 50g，加入微晶纖維素250g，交聯聚乙烯吡咯烷 酮50g，混勻，加入90乙醇制粒，乾燥，整粒，加入羧甲基澱粉鈉10g，硬脂酸鎂5g，混勻，壓制 成1000片，每日服用3次，每次1片。
實施例8 : 取穗花杉雙黃酮(amentoflavone) 50g，甘露醇150g，加注射用水2000ml，攪拌使 溶解，用1M Na0H溶液調pH至9. 60 10. 0，攪拌使溶解，濾過，濾液按1 %溶液體積量加入 活性炭，在70 8(TC下加熱30分鐘，粗濾過，管道及容器用400mL注射用水洗滌，加水到 2500ml ，藥液經0. 22 ii m無菌過濾器過濾，灌裝，凍幹，壓塞，軋蓋，製成1000瓶，即得。
權利要求
穗花杉雙黃酮在製備治療病毒性疾病藥物中的應用。
2. 根據權利要求1所述的應用，其特徵在於所述的病毒性疾病包括B肝病毒、皰疹病 毒、流感病毒、柯薩奇病毒。
3. 根據權利要求l所述的應用，其特徵在於所述穗花杉雙黃酮的純度為穗花杉雙黃 酮含量大於90%。
4. 根據權利要求1所述的應用，其特徵在於所述穗花杉雙黃酮可以和藥學上可以接 受的載體或賦形劑混合製備臨床上可接受的藥物製劑。
5. 根據權利要求4所述的應用，其特徵在於所述的藥物製劑為口服給藥製劑；陰道、 肛門、鼻腔給藥製劑；肌肉或靜脈給藥製劑。
6. 根據權利要求5所述的應用，其特徵在於所述的口服製劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、 緩釋製劑、滴丸。
7. 根據權利要求1-6中任何一項所述的應用，其特徵在於所述的穗花杉雙黃酮，是從 含有該成分的植物、中藥材及中藥飲片中提取出來的。
8. 根據權利要求7所述的應用，其特徵在於所述的中藥材為巻柏科植物巻柏 Selaginella tamariscina(Beauv. )Spring或塾狀巻柏Selaginella pulvinata(Hook. etGrev.)Maxim.的乾燥全草。
全文摘要
本發明公開了天然化合物穗花杉雙黃酮(amentoflavone)用於治療病毒性疾病的新用途。所述的天然化合物穗花杉雙黃酮，是從含有該成分的植物、中藥材或中藥飲片中提取出來的。用該化合物做為藥效成分來製備用於治療病毒性疾病的藥物製劑，可單獨或與製藥工藝中可接受的賦形劑結合，按照常規方法製成口服給藥的片劑、膠囊劑、顆粒劑、緩釋製劑、滴丸等製劑；陰道、肛門、鼻腔等腔道給藥的凝膠劑、栓劑等製劑；肌肉或靜脈給藥的注射劑等藥物劑型。所述穗花杉雙黃酮的含量在90％以上。本發明公開了中藥卷柏治療病毒性疾病的藥效成分，為其臨床應用提供了科學依據，使穗花杉雙黃酮可做為一個天然的抗病毒劑，具有無成癮性、用量小的特點。
文檔編號A61P31/12GK101744805SQ20091024859
公開日2010年6月23日 申請日期2009年12月21日 優先權日2009年12月21日
發明者張國剛, 田宏 申請人:瀋陽藥科大學