大孢耳黴及其對蚜蟲的防治的製作方法
2024-02-26 04:50:15
專利名稱：大孢耳黴及其對蚜蟲的防治的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種大孢耳黴以及利用大孢耳黴對蚜蟲及蟎蟲的防治，特別是對菸草蚜蟲的防治。
煙蚜[Mygus Persicae(Sulger)]與其它蚜蟲一樣，具有生活周期短，繁殖能力強，世代重疊嚴重，寄生範圍廣等特點。煙蚜群集於煙株頂端嫩葉上為害，造成煙株生長緩慢，葉片捲曲，並傳播病毒病，使菸草產量降低，品質變劣，嚴重者，使整株菸草壞死。目前，由於單一使用化學農藥防治，導致害蟲抗藥性增強，同時使蚜蟲的天敵受到傷害，降低了菸草品質，汙染了環境，並危害人體健康。
本發明的目的在於提供一種利用生物因子，即大孢耳黴來防治煙蚜，同時發揮煙田中蚜蟲天敵的總體效能，達到減少農藥殘毒對菸草品質的不良影響。
圖1中Ⅰ為大孢耳黴「88-Ⅰ」的分生孢子，Ⅰ為88-Ⅰ的休眠孢子。
圖2中為88-Ⅰ的菌落特徵。
圖3中為88-Ⅰ在蚜屍上的休眠孢子。
圖4為88-Ⅰ的假根。
圖5為寄生擬褐飛蝨上的大孢耳黴的假根。
一、菌株的分離篩選及確定1、菌種的分離及保芷從煙田中選取被大孢耳黴侵染的新鮮暗黃色的蚜屍，帶回實驗室內，自然風乾後，用昆蟲針的一頭插住蚜蟲，另一頭滅菌後插入已製備好的平板培養基中，使蚜屍立於培養基的上面，而後置於25℃恆溫箱中，待大孢耳黴的孢子散射於培養基中，在無菌條件下挑取邊緣無雜菌的孢子轉接於另一平板培養基中培養，從而得到有效的大孢耳黴[(Conidiobolws majos Rem.et kell.)異名(Entomophthora major Gustafs菌株。該菌株被命名為88-Ⅰ菌株，採用斜面原種保存於4℃的冰箱中，每2周轉接一次。
2、88-Ⅰ菌株的生物學特性蚜蟲暗黃色、無囊狀體，假根單絲狀(如圖4)。初生分生孢子球形，乳突明顯(如
圖1)，大小為41-63×30-57Nm，平均50×46Nm。休眠孢子球形(如
圖1)，外壁光滑，直徑為52-70Nm，平均為62Nm，壁厚2.5-6.5Nm。
來源於馬鈴薯綜合培養基的分生孢子大小為20-72×16-63Nm，平均為46×38Nm，休眠孢子大小為19-79Nm，平均為46Nm。
3、88-Ⅰ菌株的菌學特徵及生理生化特徵菌落在馬鈴薯綜合培養基上生長迅速，菌落表面具有網狀皺褶線，似魚網狀，菌落初期為米黃色，後期為乳黃色。大孢耳黴對糖的利用不顯著，它對糖的利用順序表現為可溶性澱粉＞蔗糖＞葡萄糖。大孢耳黴在有N，C源的培養基上均能生長，但有蛋白腖、酵母膏、蛋黃存在時生良好，它對N源的利用順序為蛋白腖＞酵母膏＞魚粉＞黃豆粉。大孢耳黴生長及產孢的PH值範圍在4.5-9.5，其中以6.0-7.5較為適宜，以6.5最佳。其生長的溫度範圍為10-40℃，其中以20-30℃較為適宜，以30℃最佳。
4、88-Ⅰ菌株與寄生於擬褐飛蝨上的大孢耳黴的生物學特徵的區別A、88-Ⅰ菌株
(1)蚜屍及培養基上均產生休眠孢子(如
圖1、如圖3)(2)假根單絲狀，無吸盤(如圖4)B、寄生於擬褐飛蝨上的大孢耳黴(1)蚜屍及培養基上均無休眠孢子(2)假根有吸盤(如圖5)由上可見，88-Ⅰ菌株為大孢耳黴新菌株。該菌株現已保芷在中國微生物菌種保芷管理委員會普通微生物中心，保芷號為CGMCC NO.170二、殺蟲物的培養及提取本發明是利用大孢耳黴的分生孢子、休眠孢子及菌絲體所產生的毒素以及它們的侵染性，對各類蚜蟲及蟎類進行防治的。我們將大孢耳黴的分生孢子、休眠孢子及菌絲體統稱為殺蟲物。其具體培養提取工藝過程如下。
(1)斜面菌種用馬鈴薯綜合培養基或常規培養基(如薩氏培養基PDA培養基)來保存菌種，菌種置於4～5℃的冰箱中，保存期為2～6周，若採用低溫(-20℃)冷藏法保存，可保存10以上。
(2)平板培養用馬鈴薯綜合培養基製成平板培養基，接菌後，於20～35℃左右的溫度下培養2-4天，其中以28℃左右條件培養2-3天最佳。
(3)三角燒瓶振蕩培養用馬鈴薯綜合液體培養基(未加瓊脂)分裝於三角燒瓶中(50ml或30ml)，每瓶裝液體培養基的量為瓶容量的1/3，然後接入0.1%的來源於平板培養基的菌種，在20～30℃條件下培養2～5天，其中以28℃條件培養2-3天最佳，三角燒瓶接種後的振蕩次數為90～180次/分鐘。
(4)發酵培養用魚粉加豆粉(或地瓜粉)製成液體培養基，其配方為魚粉2%+豆粉2%(或地瓜粉8%)，其餘為無菌水，在該培養基中於25～30℃溫度下培養48～72小時。
(5)殺蟲物的回收及乾燥用板筐過濾法將上述發酵液中的濾液與濾渣分離，濾渣在溫度為20°～30℃相對溫度為80～90%的條件下自然乾燥，即可得殺蟲物純粉。每100ml培養物可得到5g純菌絲，菌絲體經上述條件下可得到2g孢子純粉，每克孢子含孢子量為40億。
(6)殺蟲物的應用及其使用效果以每20公斤水加入0.4+g純粉製得的噴霧劑其殺蟲效果經濟有效噴施殺蟲物懸濁液後，蚜蟲即停止取食，呈現煩燥不安，2-3小時後開始死亡，24小時內蚜蟲死亡率可達60%以上，72小時內，死亡率可達90%以上。
上述馬鈴薯綜合培養基的配方為馬鈴薯40g+蛋白腖2g+酵母膏2g+葡萄糖20g+水100ml(固體培養基加18-20g瓊脂)。
本發明具有以下幾方面的優點(1)生產技術簡單製取大孢耳黴殺蟲物所需的設備及培養過程簡單。
(2)殺蟲效果好且穩定，在72小時內，對蚜蟲及蟎蟲的殺滅率可達90%以上。
(3)殺蟲物貯存容易。
(4)對溫血動物安全無毒，對蚜蟲的天敵無殺傷的作用。
(5)減少農藥殘留殘毒對菸草及其它農作物產生的不良影響，可增加出口創匯。
(6)保護環境，保護生態平衡，保證人體健康。
權利要求
1.一種大孢耳黴(保存於CGMCC.NO.170保芷日期92.1.23)殺蟲物(即大孢耳黴的分生孢子、休眠孢子、菌絲體)的發酵提取方法(該方法所用的大孢耳黴是從煙田中罹病的蚜蟲體內分離篩選得到的)為一般的微生物發酵提取方法。
全文摘要
本發明涉及一種大孢耳黴以及利用大孢耳黴對蚜蟲及蟎蟲的防治，特別是對菸草蚜蟲的防治。本發明所述的大孢耳黴是一種從菸草中罹病的蚜蟲體內分離培養出的大孢耳黴新菌株，該菌株現已保存於CCMCC、保藏號170、保藏日期92.1.23。本發明的大孢耳黴殺蟲物(即其分生孢子、休眠孢子、菌絲體)的發酵提取方法為一般的微生物發酵提取法，其所需的設備及培養過程簡單，殺蟲率可達90％以上，且貯存容易。
文檔編號A01N63/02GK1068473SQ92103608
公開日1993年2月3日 申請日期1992年5月13日 優先權日1992年5月13日
發明者陳家驊, 張玉珍, 劉明暉 申請人:福建農學院, 中國菸草總公司福建省公司