角鯊烯合成酶抑制劑cj-13982的製備方法

2024-02-21 22:49:15

專利名稱：角鯊烯合成酶抑制劑cj-13982的製備方法
角鯊烯合成酶抑制劑CJ-13982的製備方法技術領域
本發明屬於醫藥生物技術領域，具體涉及利用植物內生真菌稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8發酵製備具有抑制角鯊烯合成酶作用的化合物CJ-13982的方法。
背景技術：
隨著我國人口的老齡化，心血管病發病率和病死率逐年上升，冠心病是其中的主要殺手。我們常說的冠心病多由動脈器質性狹窄或阻塞引起，又稱冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，其冠狀動脈狹窄多系脂肪物質沿血管內壁堆積所致，這一過程稱之為動脈硬化。動脈硬化發展到一定程度，冠狀動脈狹窄逐漸加重，限制流入心肌的血流。心臟得不到足夠的氧氣供給，就會發生胸部不適，即心絞痛。冠心病是指冠狀動脈粥樣硬化導致心肌缺血、缺氧而引發的心臟病，常伴發心絞痛。目前該病嚴重威脅中老年人的健康，是造成中老年人死亡的主要原因，如何降低其發病率及減少死亡率已成為世界各國關注的研究課題。
引起動脈硬化的脂肪物質的主要成分是膽固醇，許多研究表明，膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的水平與冠心病的發病率密切相關。由於人體內大約有70%膽固醇源於體內合成，所以抑制其體內合成是一種有效降低膽固醇的方法。羥甲基戊二醯輔酶 A(HMG-CoA)還原酶抑制劑(如洛伐他汀)是目前最有效的降膽固醇藥。據報導，冠心病病人使用HMG-CoA還原酶抑制劑降低血漿高膽固醇後，死亡率可降低約1/3。但是，當體內甲羥戊酸合成途徑中的關鍵酶一一HMG-CoA還原酶被抑制後，不僅膽固醇的合成減少，由甲羥戊酸進一步合成的非留醇類異戊二烯(如多萜醇)等物質也相應減少，而這些物質是細胞正常生長、分化和發育所需要的。因此HMG-CoA還原酶抑制劑會對細胞的生長、增殖和分化產生影響，並由此引起多種不良反應。另外，有證據表明血中甘油三酯過多是引起冠狀動脈心臟病的又一原因，而HMG-CoA還原酶抑制劑幾乎沒有降低血漿甘油三酯的作用。所以， 需要有比HMG-CoA還原酶抑制劑更安全有效的降血脂藥。
角鯊烯合成酶(squalene synthase, SQS)是體內膽固醇合成、代謝途徑中的一種重要酶，它能催化兩分子法呢基二磷酸(FPP)經還原性二聚作用，產生中間體前角鯊烯二磷酸，在NADPH的還原作用下，前角鯊烯二磷酸生成角鯊烯，後者再經進一步合成生成膽固醇。抑制SQS的活性，就能減少角鯊烯的生成量，從而降低膽固醇的水平，而且因為SQS的催化反應在合成類異戊二烯的分支途徑之後，所以SQS抑制劑對類異戊二烯的合成沒有影響。而且，還有報導指出，SQS抑制劑不僅能降低血漿膽固醇水平，還降低血漿甘油三酯水平。所以，SQS成為了治療高脂血症和冠狀動脈心臟病的極具吸引力的作用靶點，其抑制劑的研究也已成為降血脂藥物研製的一個重要方向。
在文獻「CJ-13981 and CJ-13982, new squalene synthase inhibitors, J. Antibiot.，2001，54(12)，1025-1030」中，作者從一株未鑑定的真菌CL15036中分離得到了本發明專利中的活性化合物CJ-13982及一個結構類似物CJ-13981，通過質譜和核磁共振技術鑑定了其平面結構，並測試了兩個化合物對大鼠和人體肝臟微粒體中SQS的抑制活性，結果表明，CJ-13982對大鼠和人體肝臟微粒體中SQS的IC50分別為2. 2和1. 1 μ Μ。3在文獻"Total synthesis and determination of the absolute stereochemistry of the squalene synthase inhibitors CJ-13981and CJ-13982, Tetrahedron Lett.， 2009，50( ) ,3388-3390」中，作者通過全合成的方法確定了本發明專利中的活性化合物 CJ-13982及其結構類似物CJ-13981的絕對構型。
化合物CJ-13982的結構如式(I)所示
權利要求
1.一種化合物CJ-13982的製備方法，其特徵在於，所述的CJ-13982是從稻黑孢 (Nigrospora oryzae)A8的發酵培養物中分離製備得到的，所述的稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8，其保藏編號為 CCTCC NO :M 2011412。
2.根據權利要求1所述的化合物CJ-13982的製備方法，其特徵在於，具體步驟如下(a)製備稻黑孢(Nigrosporaoryzae)A8的固體發酵培養物；(b)將固體發酵培養物用乙酸乙酯冷浸提取，濃縮乙酸乙酯提取液，得到總浸膏，將總浸膏用甲醇溶解懸浮，懸浮液用環己烷萃取，萃取後的甲醇溶液經濃縮得到甲醇相浸膏；(c)甲醇相浸膏經矽膠柱層析，以氯仿-甲醇作為洗脫劑，從體積比100 O O 100 梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積比為10 1 5 1梯度下洗脫下來的餾分，將該餾分用凝膠柱層析，以體積比為1 1的氯仿-甲醇作為洗脫劑洗脫，收集在TLC上能用體積比為 5 1的氯仿-甲醇作為展開劑展開，且用碘顯色成黃色長條的餾分，將該餾分用反相矽膠柱層析，先以體積比為4 1的甲醇-水作為洗脫劑洗脫至柱子上黃色部分洗出以後，再換純甲醇洗脫，收集該餾分，濃縮得到白色固體，即為目標化合物CJ-13982。
3.根據權利要求2所述的化合物CJ-13982的製備方法，其特徵在於，所述的製備稻黑孢(Nigrospora oryzae) A8的固體發酵培養物是通過以下方法製備的將稻黑孢 (Nigrospora oryzae) A8接種到CPDA培養基中，在培養3天，獲得種子平板，然後將種子平板培養物切成20X20mm的小塊，接種於固體發酵培養基中，培養30天，獲得稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8的固體發酵培養物；所述的固體發酵培養基的配方為每升含有:1000g大米，6g蛋白腖，IOOOmL水。
全文摘要
本發明公開了一種角鯊烯合成酶抑制劑CJ-13982的製備方法。化合物CJ-13982是從稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8的發酵培養物中分離製備得到的，所述的稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8，其保藏編號為CCTCC NOM 2011412。本發明提供的從植物內生真菌稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8的發酵培養物中製備得到具有抑制角鯊烯合成酶作用的化合物CJ-13982的方法，該方法具有培養條件溫和、培養基配製簡單易行、分離純化步驟簡單、產量大、可以在人工控制條件下實現大規模生產等優點，能夠比較方便解決研究或應用化合物CJ-13982所需的原料問題，為製備化合物CJ-13982提供了一條新的途徑。
文檔編號C12R1/645GK102517350SQ20111040692
公開日2012年6月27日 申請日期2011年12月8日 優先權日2011年12月8日
發明者李冬利, 王磊, 章衛民 申請人:廣東省微生物研究所