皮下抗her2抗體配製劑的製作方法

2023-10-23 12:56:57 2

專利名稱：皮下抗her2抗體配製劑的製作方法
皮下抗HER2抗體配製劑本發明涉及供皮下注射用的藥學活性抗HER2抗體，或此類抗體分子的混合物的高度濃縮的穩定的藥物配製劑。在較高量的抗HER2抗體或其混合物外，此類配製劑包含緩衝劑、穩定劑或兩種或更多種穩定劑的混合物、非離子型表面活性劑和有效量的至少一種透明質酸酶酶。本發明還涉及用於製備所述配製劑的方法及此類配製劑的用途。抗體的藥學用途在過去數年裡已經增加。在許多情況中，經由靜脈內(IV)路徑注射此類抗體。不幸地，可以經由靜脈內路徑注射的抗體量受限於抗體的物理-化學特性，特別地受限於其在合適的液體配製劑中的溶解度和穩定性及受限於輸注液體的體積。備選的施用途徑是皮下或肌肉內注射。這些注射途徑要求要注射的最終溶液中的高蛋白質濃度[Shire, S. J. , Shahrokh, Ζ. "Challenges in the development of high protein concentration formulations", J. Pharm. Sci. 2004 ；93 (6) :1390-1402 ；Roskos, L. K. , Davis C. G.等，"The clinical pharmacology of therapeutic antibodies，，，Drug Development Research 2004 ；61 (3) =108-120] 為了增加體積，及由此增加治療劑量(其可以安全且舒適地皮下施用)，已經提出了使用糖胺聚糖酶酶以增加可以注射抗體配製劑的間質空間[W02006/091871]。目前出售的治療用途的藥學活性抗體的穩定的配製劑的例子如下HERCEPTIN (曲妥單抗(Trastuzumab))是一種針對HER2受體的單克隆抗體(抗 HER2抗體)，其目前在歐洲以150mg凍乾粉末(含有抗體、二水合α，α-海藻糖、L-組氨酸和鹽酸L-組氨酸和聚山梨酯20)形式銷售，所述凍乾粉末應當為了輸注用注射用水重建以產生約21mg/ml的注射劑量。在美國和許多其它國家，銷售含有440mg曲妥單抗的多劑管形瓶。AVASTIN (貝伐單抗(Bevacizumab))是一種針對血管內皮生長因子(VEGF)的單克隆抗體，其目前在歐洲以兩類管形瓶中的液體配製劑銷售分別為aHml中的IOOmg貝伐單抗和b) 16ml中的400mg貝伐單抗，提供含有下列賦形劑的注射用水中的25mg/ml終濃度二水合海藻糖、磷酸鈉和聚山梨酯20。雖然已經發現了上述抗體配製劑適合於靜脈內施用，但是期望提供供皮下注射用的治療活性抗體的高度濃縮的穩定的藥物配製劑。皮下注射的優點在於它容許醫學從業人員在對患者相當短的幹預中將其實施。此外，可以訓練患者自己實施皮下注射。此類自身施用在維持劑量給藥期間特別有用，因為不需要醫院護理(醫學資源利用降低)。通常，經由皮下路徑的注射限於約ani。對於需要多劑的患者，可以在身體表面的多個部位注射多個單位劑量配製劑。皮下施用的下列兩種抗體產品已經出售。HUMIRA (阿達木單抗(Adalimumab))是一種針對腫瘤壞死因子α (TNF α )的單克隆抗體，其目前在歐洲以皮下應用的0. 8ml注射體積中的40mg劑量形式銷售(濃度50mg 抗體/ml注射體積)。M)LAIR (奧馬珠單抗(Omalizumab))是一種針對免疫球蛋白E的單克隆抗體(抗 IgE抗體)，其目前以150mg凍乾粉末(含有抗體、蔗糖、組氨酸和一水合鹽酸組氨酸和聚山梨酯20)形式銷售，所述凍乾粉末應當用皮下注射用水重建以產生125mg/ml注射劑量。目前在市場上不可購得適合於皮下施用的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑。因此，期望提供皮下注射的治療活性抗體的此類高度濃縮的穩定的藥物配製劑。對下皮注射胃腸外藥物一般限於小於aiii的體積，這是由於注射後產生的反壓力所致皮下(SC)組織中對水力傳導的粘彈性阻力[Aukland K.和Reed R.， 「Interstitial-Lymphatic Mechanisms in the control of Extracellular Fluid Volume", Physiology Reviews",1993 ；73 :1_78]，及由於疼痛的感覺。高濃度蛋白質配製劑的製備是相當有挑戰性的，並且需要使每種配製劑適合於所使用的特定蛋白質，因為每種蛋白質具有不同的聚集行為。懷疑聚集體至少在一些情況中引起治療性蛋白質的免疫原性。針對蛋白質或抗體聚集體的免疫原性反應可以導致中和性抗體，其可以使治療性蛋白質或抗性無效。似乎蛋白質聚集體的免疫原性在與皮下注射的關聯中最成問題，其中重複施用增加免疫應答的風險。雖然抗體具有非常相似的總體結構，但是此類抗體在胺基酸組成(特別是在負責結合抗原的CDR區中)和糖基化樣式方面有所不同。此外，另外可以有翻譯後修飾， 諸如電荷和糖基化變體。在抗HER2抗體的特定情況中，已經對例如人源化單克隆抗體 humMAb4D5-8( =曲妥單抗)描述了此類翻譯後修飾。已經開發出用於除去例如酸性變體的特定的純化方法，並且Basey，C. D和Blank，G. S.於W099/57i;34已經第一次提供了包含減少量的酸性變體(主要為脫醯胺化的變體，其中已經將初始多肽的一個或多個天冬醯胺殘基轉化成天冬氨酸，即已經將中性醯胺側鏈轉化成具有總體酸性特徵的殘基)的組合物。Andya 等(W0 97/04801 和美國專利 No. 6，267，958，6，685，940，6，821，151 和 7，060, 268)已經描述了包含凍幹保護劑(lyoprotectant)、緩衝液和表面活性劑的穩定的凍幹抗體配製劑。WO 2006/044908提供了抗體配製劑，其包含組氨酸-乙酸鹽緩衝液，pH5. 5至6. 5， 優選地5. 8至6. 2中配製的單克隆抗體。因此，本發明要解決的問題是提供皮下注射的藥學活性抗HER2抗體或此類抗體分子的混合物的新穎的高度濃縮的穩定的藥物配製劑。在較高量的抗HER2抗體或其混合物外，此類配製劑包含緩衝劑、穩定劑或兩種或更多種穩定劑的混合物、非離子型表面活性劑和有效量的至少一種透明質酸酶酶。高度濃縮的抗體配製劑的製備是有挑戰性的，這是由於較高蛋白質濃度的粘性的潛在升高和蛋白質聚集的潛在升高，即一種本質上濃度依賴性的現象。高粘性負面地影響抗體配製劑的工藝能力(例如，抽吸和過濾步驟)和施用(例如注射器能力)。通過添加賦形劑，可以在一些情況中降低高粘性。對蛋白質聚集的控制和分析越來越多有挑戰。在製造工藝的各個步驟(其包括發酵、純化、配製)期間和貯存期間潛在地遇到聚集。不同因素，諸如溫度、蛋白質濃度、攪動應力、冷凍和融化、溶劑和表面活性劑效應、和化學修飾可以影響治療性蛋白質的聚集行為。在高度濃縮的抗體配製劑的開發期間，必須監測蛋白質的聚集趨勢，並通過添加各種賦形劑和表面活性劑來控制[Kiese S.等，J. Pharm. Sci.，2008 ;97 (10) ；4347-4366] 0製備依照本發明的藥學活性抗HER2抗體的合適的高度濃縮的穩定的藥物配製劑的挑戰由於以下實情而提高，即必須以如下的方式在一種液體配製劑中配製兩種不同蛋白質，使得配製劑在數周裡仍然穩定，並且藥學活性成分在適當的貯存期間仍然有活性。
在第一方面，本發明提供了準備好使用的皮下注射的藥學活性抗HER2抗體或此類抗體分子的混合物的高度濃縮的穩定的藥物配製劑。更具體地，本發明的藥學活性抗HER2抗體配製劑的高度濃縮的穩定的藥物配製劑包含-約50 至;350mg/ml 抗 HER2 抗體；-約1至IOOmM緩衝劑，其提供pH5. 5 士 2. 0 ；-約1至500mM穩定劑或兩種或更多種穩定劑的混合物，其中任選地，甲硫氨酸作為第二穩定劑存在，例如濃度為5至25mM ；-約0.01至0. 非離子型表面活性劑；和-有效量的至少一種透明質酸酶酶。在又一方面，本發明提供了配製劑用於製備可用於治療受試者中適合於用抗HER2 抗體治療的疾病或病症，諸如例如癌症或非惡性疾病的藥物的用途，包括以有效治療所述疾病或病症的量對受試者施用本文中所描述的配製劑。可以與化療劑伴隨或序貫共施用抗 HER2抗體。在本發明的另一方面，提供了治療受試者中適合於用抗HER2抗體治療的疾病或病症(例如癌症或非惡性疾病)的方法，包括以有效治療所述疾病或病症的量對受試者施用本文中所描述的配製劑。癌症或非惡性疾病一般會牽涉HER2表達細胞，使得依照本發明的治療性藥物SC配製劑中的HER2抗體能夠結合受影響的細胞。本發明還提供了包含注射組分和適合於其皮下施用的指令兩者的試劑盒形式的藥物組合物，其由藥學活性抗HER2抗體或此類抗體的混合物的高度濃縮的穩定的藥物配製劑和適合量的至少一種透明質酸酶酶組成。本發明的又一方面涉及注射裝置，其包含依照本發明的高度濃縮的穩定的藥物配製劑。此類配製劑可以由藥學活性抗HER2抗體或此類抗體分子的混合物和如下文概述的合適的賦形劑組成，並且另外可以包含可溶性透明質酸酶糖蛋白作為組合配製劑或共施用的分開配製劑。本發明的藥學活性抗HER2抗體配製劑的高度濃縮的穩定的藥物配製劑可以以液體形式提供或者可以以凍幹形式提供。依照WO 97/04801中的教導，可以通過重建凍幹的配製劑以提供比凍幹步驟前混合物中的蛋白質濃度大約2-40倍的重建配製劑中的蛋白質濃度，來增加重建配製劑中的抗體濃度。抗HER2 抗體濃度是 100 至 150mg/ml，例如 120 士 18mg/ml、約 110mg/ml、約 120mg/ ml 或約 130mg/ml。提供pH 5. 5 士 2. O的緩衝劑的濃度是1至50mM，例如10至30mM或約20mM。各種緩衝劑是本領域技術人員已知的，如下文進一步概述的。緩衝劑可以是組氨酸緩衝液，例如 L-組氨酸/HCl。在一個具體的實施方案中，L-組氨酸/HCl緩衝液的pH是約5. 5或約6. O。例如，穩定劑(在本專利說明書中與術語「穩定化劑」同義使用)是權力機構準許作為藥物配製劑中的合適添加劑或賦形劑的碳水化合物或糖類或糖，例如二水合α， α -海藻糖或蔗糖。穩定劑的濃度是15至250mM，或150至250mM，或約210mM。配製劑可以含有第二穩定劑，其中此第二穩定劑可以是甲硫氨酸，例如濃度為5至25mM或濃度為5 至15mM(例如濃度為約5mM、約IOmM或約15mM的甲硫氨酸)。
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藥學可接受表面活性劑的合適的例子包括聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯(Tween)、 聚乙烯-聚丙二醇、聚氧乙烯-硬脂酸酯、聚氧乙烯烴基醚，例如聚氧乙烯單月桂基醚、烴基苯基聚氧乙烯醚CTriton-X)、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(Poloxamer，Pluronic)、和十二烷基硫酸鈉(SDS)。最合適的聚氧乙烯山梨聚糖-脂肪酸酯是聚山梨酯20(以商標Tween 20 出售)和聚山梨酯80 (以商標Tween 80 出售)。最合適的聚乙烯-聚丙烯共聚物是那些以名稱Pluronic F68或Poloxamer 188 出售的。最合適的聚氧乙烯烴基醚是那些以商標Bri j 出售的。最合適的烴基酚聚氧乙烯醚以商品名Triton-X出售。非離子型表面活性劑可以是聚山梨酯，例如選自聚山梨酯20、聚山梨酯80和聚乙烯-聚丙烯共聚物的組。非離子型表面活性劑的濃度是0.01至0. (w/v)、或0.01至0.08% (w/v)、或0. 025 至 0. 075% (w/v)、或更具體地約 0. 02,0. 04 ^ 0. 06% (w/v)。透明質酸酶酶的濃度取決於依照本發明的配製劑的製備中使用的實際透明質酸酶酶。基於下文進一步的公開內容，本領域技術人員可以容易地確定透明質酸酶酶的有效量。它應當以足夠量提供，使得共施用的抗HER2抗體的分散和吸收升高是有可能的。透明質酸酶酶的最小量是大於150個U/ml。更具體地，透明質酸酶酶的有效量是約1』 000至 16，000個U/ml，其中基於假定的比活100，000個U/mg，所述量對應於約0. Olmg至0. 16mg 蛋白質。或者，透明質酸酶酶的濃度是約1』 500至12』 000個U/ml，或更具體地，約2』 000 個U/ml或約12』000個U/ml。前文規定的量對應於最初對配製劑添加的透明質酸酶酶量。 如例示性配製劑中證明的，最終配製劑中測量的透明質酸酶酶濃度可以在某個範圍內變化。如此，例如剛好在添加12』000個U/ml酶後測量的實際測量透明質酸酶酶(HE)濃度顯示12355個U/ml至15178個U/ml間的變化(見表1配製劑A至F和表3配製劑H)。透明質酸酶酶以組合的最終配製劑存在或者供共施用使用，例如作為如下文進一步概述的共配製劑。依照本發明的配製劑的重要問題是在它準備好使用和/或注射時，它具有如所附權利要求書中所列的組成。透明質酸酶酶對抗HER2抗體的比率(w/w)的範圍為1 1』000 至 1 8，000，或範圍為 1 4，000 至 1 5，000 或約 1 6，000。透明質酸酶酶可以自動物、人樣品衍生或者基於如下文進一步描述的重組DNA技術製造。在一些實施方案中，依照本發明的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑具有下列組成之一3)100至15011^/1111抗冊1 2抗體，例如選自下組曲妥單抗、帕妥珠單抗和1^^1 ；1 至50mM組氨酸緩衝液，例如L-組氨酸/HCl (pH為約5. 5) ； 15至250mM穩定劑，其是例如二水合α，α-海藻糖和任選地濃度5至25mM的甲硫氨酸作為第二穩定劑；約0.01至0. 08% 非離子型表面活性劑；和大於150至16，000個U/ml，更具體地1，000至16，000個U/ml 透明質酸酶酶，諸如例如rHuPH20，例如濃度為約2，000個U/ml或約12，000個U/ml。b)120 士 18mg/ml抗HER2抗體，例如選自下組曲妥單抗、帕妥珠單抗和T-DMl ；10 至30mM，或約20mM組氨酸緩衝液，諸如例如L-組氨酸/HCl (pH為約5. 5) ；150至250mM或約210mM穩定劑，其是例如二水合α，α -海藻糖和任選地濃度5至25mM，或5至15mM，或約IOmM的甲硫氨酸作為第二穩定劑；約0. 01至0. 08%非離子型表面活性劑；和1，000至 16，000 個 U/ml，或 1，500 至 12，000 個 U/ml，約 2，000 個 U/ml 或約 12，000 個 U/ml 透明質酸酶酶，諸如例如rHuPH20。
c)約120mg/ml抗HER2抗體，例如選自下組曲妥單抗、帕妥珠單抗和T-DMl ； 10至 30mM,或約20mM組氨酸緩衝液，諸如例如L-組氨酸/HCl (pH為約5. 5) ；150至250mM，例如約210mM穩定劑，其是例如二水合α，α -海藻糖和任選地濃度5至25mM，或5至15mM，或約IOmM的甲硫氨酸作為第二穩定劑；約0. 01至0. 08%非離子型表面活性劑；和1，000至 16，000 個 U/ml，或 1，500 至 12，000 個 U/ml，或更具體地約 2，000 個 U/ml 或約 12，000 個U/ml透明質酸酶酶，諸如例如rHuPH20。d)約120mg/ml抗HER2抗體，例如選自下組曲妥單抗、帕妥珠單抗和T-DM1 ；約 20mM組氨酸緩衝液，諸如例如L-組氨酸/HCl (pH為約5. 5)；約210mM 二水合α，α -海藻糖和任選地約IOmM甲硫氨酸作為第二穩定劑；0. 04或0. 06%聚山梨酯20 ；和約12，000個 U/ml透明質酸酶酶，諸如rHuPH20 ；及特別地下文規定的配製劑A。e)約120mg/ml抗HER2抗體，例如選自下組曲妥單抗、帕妥珠單抗和T-DM1 ；約 20mM組氨酸緩衝液，諸如例如L-組氨酸/HCl (pH為約5. 5)；約210mM 二水合α，α -海藻糖和任選地IOmM甲硫氨酸作為第二穩定劑；0. 04或0. 06%聚山梨酯20 ；和約2，000個U/ ml透明質酸酶酶，諸如rHuPH20 ；及特別地下文規定的配製劑X。f)凍幹配製劑，其包含120mg/ml抗HER2抗體，例如選自下組曲妥單抗、帕妥珠單抗和T-DMl ；20mM組氨酸緩衝液，諸如例如L-組氨酸/HCl (pH為約5. 5) ；210mM 二水合α，α -海藻糖和任選地IOmM甲硫氨酸作為第二穩定劑；約0. 04至0. 06%非離子型表面活性劑；及特別地下文規定的配製劑Y。可以與1』 000至16』 000個U/ml，或1』 500至 12』 000個U/ml，或更具體地約2』 000個U/ml或約12』 000個U/ml透明質酸酶酶，諸如例如rHuPH20 —起重建這些配製劑。在另一個實施方案中，依照本發明的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑具有表1、3和4中規定的組成之一，其中配製劑C、D、E和F由於不太想要的特性而不太優選，如實施例和表1中所概述的。已經提出了通過使用少量可溶性透明質酸酶糖蛋白(sHASEGP)來促進治療性蛋白質和抗體的皮下注射；見W02006/091871。已經顯示了，此類可溶性透明質酸酶糖蛋白 (作為組合的配製劑或者通過共施用)的添加促進對下皮施用治療性藥物。通過快速解聚胞外空間中的乙醯透明質酸HA，sHASEGP降低間質的粘性，由此提高水力傳導，並且容許安全且舒適地將較大體積施用入皮下組織中。經由降低的間質粘性由sHASEGP誘導的升高的水力傳導容許更大的分散，這潛在地提高SC施用的治療性藥物的系統生物利用度。因此，包含可溶性透明質酸酶糖蛋白的本發明的高度濃縮的穩定的藥物配製劑特別適合於皮下注射。本領域技術人員清楚地理解，可以提供包含抗HER2抗體和可溶性透明質酸酶糖蛋白的此類配製劑來以一種單一組合配製劑形式或備選地以可以在臨皮下注射前混合的兩種分開的配製劑形式施用。或者，可以將抗HER2抗體和可溶性透明質酸酶糖蛋白以分開注射在身體的不同部位，優選地在彼此緊密相鄰的部位施用。也有可能以連續注射形式注射依照本發明的配製劑中存在的治療劑，例如首先是可溶性透明質酸酶糖蛋白， 接著注射抗HER2抗體配製劑。這些注射也可以以相反的次序實施，即通過首先注射抗HER2 抗體配製劑，接著注射可溶性透明質酸酶糖蛋白來進行。在以分開注射施用抗HER2抗體和可溶性透明質酸酶糖蛋白的情況中，必須給蛋白質中的一種或兩者提供如所附權利要求書中所規定濃度的緩衝劑、穩定劑和非離子型表面活性劑，但是排除透明質酸酶酶。然後，可以在例如L-組氨酸/HCl緩衝液(pH為約6. 5)、100至150mM NaCl和0. 01至0. 1 % (w/v) 聚山梨酯20或聚山梨酯80中提供透明質酸酶酶。具體地，在20mM L-組氨酸/HCl緩衝液 (pH 6. 5)、130mM NaCl.O. 05% (w/v)聚山梨酯80中提供透明質酸酶酶，如下文表1的配製劑G中明確例示的。如上文記錄的，可以認為可溶性透明質酸酶糖蛋白是抗HER2配製劑中的別的賦形劑。可溶性透明質酸酶糖蛋白可以在製造抗HER2配製劑時添加至抗HER2配製劑或者可以在注射前不久添加。或者，可以以分開注射提供可溶性透明質酸酶糖蛋白。在後一種情況中，可溶性透明質酸酶糖蛋白可以在分開的管形瓶中以在皮下注射發生前必須用合適的稀釋劑重建的凍幹形式提供，或者可以由製造商以液體配製劑提供。抗HER2配製劑和可溶性透明質酸酶糖蛋白可以以分開的實體獲得或者也可以以包含注射組分和適合於其皮下注射的指令兩者的試劑盒提供。還可以提供適合於重建和/或施用配製劑中的一種或兩者的指令。因此，本發明還以包含注射組分和適合於其皮下施用的指令兩者的試劑盒形式提供了藥物組合物，其由藥學活性抗HER2抗體或此類抗體的混合物的高度濃縮的穩定的藥物配製劑和合適量的至少一種透明質酸酶酶組成。本發明的又一方面涉及包含依照本發明的高度濃縮的穩定的藥物配製劑的注射裝置。此類配製劑可以由藥學活性抗HER2抗體或此類抗體分子的混合物和如下文所概述的合適的賦形劑組成，並且另外可以包含可溶性透明質酸酶糖蛋白作為組合配製劑或作為共施用的分開配製劑。多種抗HER2抗體是現有技術中已知的。優選地，此類抗體是單克隆抗體。它們可以是所謂的嵌合抗體、人源化抗體或完全人抗體。它們可以是全長抗HER2抗體；具有相同生物學活性的抗HER2抗體片段；包括此類抗體或片段的胺基酸序列變體和/或糖基化變體。人源化抗HER2抗體的例子以INN名稱曲妥單抗和帕妥珠單抗已知。另一種合適的抗HER2抗體是T-DM1，其是一種由huMAb4D5_8 (HERCEPIN )和美登木素生物鹼類 (maytansinoide)(即DMl = N2』-脫乙醯基-N2，-(3_巰基-I-氧丙基)-美登素；即一種高度有力的抗微管劑)組成的抗體-毒素綴合物，該綴合物(具有MCC接頭)目前開發用於轉移性乳腺癌。具有各種特性的其它HER2抗體已經記載於Tagliabue等，ht. J. Cancer, 47 :933-937(1991) ；McKenzie 等，Oncogene,4 :543-548(1989) ；Cancer Res. ,51 5361-5369 (1991) ；Bacus 等，Molecular Carcinogenesis, 3 :350-362 (1990) ；Stancovski 等，PNAS (USA)，88 :8691-8695(1991) ；Bacus 等，Cancer Research, 52 :2580-2589(1992)； Xu 等，Int. J. Cancer，53 :401-408(1993) ；W094/00136 ；Kasprzyk 等，Cancer Research, 52 2771-2776(1992) ；Hancock 等，Cancer Res. ,51 :4575-4580(1991) ；Shawver 等，Cancer Res. ,54 :1367-1373(1994) ；Arteaga 等，Cancer Res. ,54 :3758-3765(1994) ；Harwerth 等，J. Biol. Chem.，267 :15160-15167(1992)；美國專利 No. 5，783，186 ；及 Klapper 等， Oncogene，14 :2099-2109(1997)。最成功的治療性抗 HER2 抗體是由 Genentech Inc.和 F. Hoffmann-La Roche Ltd以商品名HERCEPIN 出售的曲妥單抗。關於HER2抗原及針對其的抗體的更多詳情記載於許多專利和非專利出版物(關於合適的概述，見美國專利 No.5，821，337 和 WO 2006/044908)。抗HER2抗體選自例如曲妥單抗、帕妥珠單抗和T-DMl的組，並且也可以由抗HER2抗體的混合物，諸如例如曲妥單抗和帕妥珠單抗或T-DMl和帕妥珠單抗組成。已經發現了帕妥珠單抗和曲妥單抗的組合在先前曲妥單抗療法期間已經經歷進展的轉移性HER2陽性乳腺癌患者中是有活性的且耐受良好[見例如Baselga，J.等，Journal of Clin. Oncol. 第觀卷(7) 2010 第1138頁-第1144頁]。依照本發明的配製劑在本文中以抗HER2抗體曲妥單抗例示。術語「曲妥單抗」、「帕妥珠單抗，，和「 T-DMl，，涵蓋在選自美國、歐洲和日本的國家或地區中滿足獲得作為相同或生物相似產品的銷售授權必需的要求的所有相應抗 HER2抗體。曲妥單抗具有EP-B-590058中限定的CDR區。帕妥珠單抗具有WO 01/00245中限定的CDR區。已經發現了 BT-474抗增殖測定法[Nahta，R.等，「The HER-2-targeting antibodies Trastuzumab and Pertuzumab synergistically inhibit the survival of breast cancer cells」，Cancer Res. 2004 ；64 :2343. 2346]中的曲妥單抗活性在 0. 7-1. 3x IO4 個 U/mg 間。T-DMl 記載於 WO 2005/117986。HERCEPIN (曲妥單抗)已經在EU得到批准，用於如下治療具有過表達HER2的腫瘤的轉移性乳腺癌(MBC)患者-作為單一療法以治療已經接受針對其轉移性疾病的至少兩種化學療法方案的患者。先前的化學療法必須已經至少包含蒽環類抗生素和紫杉烷(taxane)，除非患者不適合這些治療。激素受體陽性患者也必須是激素療法已經失敗，除非患者不適合這些治療。-與帕利他塞(paclitaxel)組合以治療尚未接受針對其轉移性疾病的化學療法且不適合蒽環類抗生素的那些患者。-與多西他賽(docetaxel)組合以治療尚未接受針對其轉移性疾病的化學療法的那些患者。-與芳香酶抑制劑組合以治療先前沒用曲妥單抗治療的具有激素受體陽性MBC的絕經後患者。曲妥單抗也已經在EU得到批准，用於治療具有過表達HER2的腫瘤的MBC患者，用於在手術、化學療法(新輔助或輔助)和放射療法(若可適用的話)後治療HER2陽性早期乳腺癌(EBC)患者。此外，曲妥單抗目前開發用於治療胃癌。目前對曲妥單抗批准兩種劑量給藥方案(表1)；對於轉移性乳腺癌(MBC)和早期乳腺癌(EBC)兩者均為一周一次(qlw)和每3周一次(q3w)。在qlw劑量給藥方案中，加載劑量是細g/kg，接著是ang/kg的後續劑量。在q3w劑量給藥方案中，加載劑量是8mg/kg， 接著是6mg/kg的後續劑量。如上文所記錄的，靜脈內施用的HERCEPIN (曲妥單抗)目前以管形瓶中的凍幹形式出售。在歐洲出售的配製劑中，每個管形瓶裝有在凍幹填充體積6. 25ml無菌水溶液後獲得的幹殘留物，所述無菌水溶液含有下列組分150mg曲妥單抗(有效的156. 3mg以確保可以在重建後自最終產物取出150mg的名義數量)、3. 50mg鹽酸L-組氨酸、2. 25mg L-組氨酸、141. 9mg α , α-二水合海藻糖、0. 63mg聚山梨酯20。溶解的凍乾物含有約2%ig/ml曲妥單抗、5mML-組氨酸/HCl pH 6. 0、60mM二水合α，α-海藻糖、0. 01%聚山梨酯20。然後， 將溶液添加至輸注溶液，然後在90分鐘裡對患者施用輸注(若耐受良好的話，可以在MBC 中在30分鐘裡給予後續的輸注)。許多可溶性透明質酸酶糖蛋白是現有技術中已知的。為了進一步限定此類可溶性透明質酸酶糖蛋白的功能、作用機制和特性，提供了以下背景信息。SC(ST)間質基質由糖胺聚糖的粘彈性凝膠內包埋的纖維狀蛋白質的網絡構成。乙醯透明質酸(HA)，即一種非硫酸化重複線性二糖是SC組織的主要糖胺聚糖。HA由成纖維細胞以一種高分子量兆道爾頓粘性聚合物分泌入間質中，隨後，其在局部、在淋巴中、及在肝中經由溶酶體透明質酸酶和外切糖苷酶的作用降解。身體中的約50%乙醯透明質酸是由SC組織生成的，其中它以約0.8mg/gm溼重組織找到[Aukland K.和Reed R.， 見上文]。估計平均70kg成人含有15克HA，其中30%每天周轉(合成和降解)[Laurent L. B. 「CataboIism of hyaluronan in rabbit skin takes place locally, in lymph nodes and liver，，，Exp. Physiol. 1991 ;76 :695-703]。作為皮下基質的凝膠樣組分的主要成分，HA顯著促成其粘性。糖胺聚糖(GAG)是胞外基質(ECM)的複雜線性多糖。GAG以N-取代的氨基己酸和糖醛酸(在乙醯透明質酸(HA)、硫酸軟骨素(CS)、軟骨素(C)、硫酸皮膚素(DS)、硫酸乙醯肝素(HS)、和肝素(H)的情況中)，或半乳糖(在硫酸角質素(KQ的情況中)的重複二糖結構為特徵。除了 HA外，所有都以與核心蛋白共價結合方式存在。GAG及其核心蛋白在結構上稱為蛋白聚糖(PG)。在哺乳動物中，主要在結締組織、皮膚、軟骨中，及在滑液中找到乙醯透明質酸 (HA)。乙醯透明質酸也是眼的玻璃體的主要組分。在結締組織中，與乙醯透明質酸有關的水合水產生組織間的水合基質。乙醯透明質酸在與細胞運動性有關的生物學現象，包括快速發育、再生、修復、胚胎發生、胚胎學發育、傷口癒合、血管發生、和腫瘤發生中發揮關鍵的作用(Toole, Cell Biol. Extracell. Matrix, Hay ( H ), Plenum Press, New York, 1991 ； 第 1384 頁-第 1386 頁；Bertrand 等，Int. J. Cancer 1992 ；52 :1_6 ；Knudson 等，FASEB J. 1993 ；7 :1233-1241]。另外，乙醯透明質酸水平與腫瘤攻擊性相關聯[Ozello等，Cancer Res. 1960 ；20 :600-604 ；Takeuchi 等，Cancer Res. 1976 ；36 :2133-2139 ；Kimata 等，Cancer Res. 1983；43 :1347-1354]。在許多細胞的胞外基質中，特別地在軟結締組織中找到HA。已經給HA分配各種生理學功能，諸如在水和血漿蛋白質穩態中[Laurent Τ. C.等，FASEB J. , 1992 ；6 2397-2404]。HA生成在增殖細胞中增加，並且可以在有絲分裂中發揮作用。它還已經牽涉行進和細胞遷移。HA似乎在細胞調節、發育、和分化中發揮重要的作用[Laurent等，見上文]。已經在臨床醫學中廣泛使用HA。其組織保護和流變學特性已經證明為可用於眼科手術(例如以在白內障手術期間保護角膜內皮)。血清HA是肝疾病和各種炎性狀況， 諸如類風溼性關節炎的診斷。由HA積累引起的間質性水腫可以引起各個器官的功能障礙 [Laurent等，見上文]。乙醯透明質酸蛋白質相互作用也牽涉胞外基質或「基質」的結構。透明質酸酶是遍及動物界找到的一組一般中性或酸性活性酶。透明質酸酶就底物特異性和作用機制而言有所變化(W0 2004/078140)。存在著三大類透明質酸酶1.哺乳動物型透明質酸酶(EC 3. 2. 1. 35)，其是以四糖和六糖作為主要終產物的內-β-N-乙醯基己糖胺酶。它們具有水解和轉糖苷酶活性兩者，並且可以降解乙醯透明質酸和硫酸軟骨素(⑶)，一般地C4-S和C6-S。
2.細菌透明質酸酶(EC 4. 2. 99. 1)降解乙醯透明質酸及以各種程度降解CS和 DS。它們是內-β-N-乙醯基己糖胺酶，其通過主要生成二糖終產物的β消除反應運行。3.來自水蛭、其它寄生物、和甲殼動物的透明質酸酶(EC 3. 2. 1. 36)是經由水解 β 1-3連接生成四糖和六糖終產物的內-β-葡糖醛酸糖苷酶。哺乳動物透明質酸酶可以進一步分成兩組中性活性和酸性活性酶。人基因組中存在著6種透明質酸酶樣基因，即HYALl、HYAL2、HYAL3、HYAL4、HYALPl和PH20/SPAM1。 HYALPl是一種假基因，並且尚未顯示HYAL3擁有針對任何已知底物的酶活性。HYAL4是一種軟骨素酶，並且展現出很少的針對乙醯透明質酸的活性。HYALl是原型酸性活性酶，而ΡΗ20 是原型中性活性酶。一般地，酸性活性透明質酸酶，諸如HYALl和HYAL2在中性ρΗ(即ρΗ 7)缺乏催化活性。例如，HYALl在體外超過ρΗ 4. 5具有很少的催化活性[Frost I. G.和 Stern, R. , "A microtiter-based assay for hyaluronidase activity not requiring specialized reagents", Anal. Biochemistry, 1997 ；251 :263-269]。 HYAL2 是一種在體夕卜具有非常低的比活的酸性活性酶。透明質酸酶樣酶也可以以那些一般經由糖基磷脂醯肌醇錨鎖定質膜的酶，諸如人 HYAL2 和人 PH20 [Danilkovitch-Miagkova 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003 ； 100 (8) 4580-4585 ;Phelps 等，Science 1988 ；240 (4860) :1780-1782]，和那些一般可溶的酶，諸如人 HYALl [Frost, I. G.等，"Purification, cloning, and expression of human plasma hyaluronidase",Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997 ；236(1) :10-15]為特徵。然而，存在著物種間的變化例如牛PH20非常鬆散地附著於質膜，並且沒有經由磷脂酶敏感性錨來錨定[Lalancette等，Biol. R印rod.，2001 ；65 (2) :628-36]。牛透明質酸酶的此獨特特徵已經容許使用可溶性牛睪丸透明質酸酶酶作為臨床使用的提取物(Wydase ，Hyalase )。其它 PH20種類是脂質錨定的酶，其一般在不使用去汙劑或脂肪酶的情況中是不可溶的。例如，人 PH20經由GPI錨而錨定於質膜。嘗試生成人PH20，不會將脂質錨引入多肽中的DNA構建體生成無催化活性的酶，或不溶性的酶[Arming等，Eur. J. Biochem.，1997 ；247 (3) :810-4]。 以可溶性和膜結合形式兩者找到天然存在的彌猴精子透明質酸酶。雖然64kDa膜結合形式在ρΗ 7.0擁有酶活性，但是54kDa形式僅在ρΗ 4. 0有活性[Cherr等，Dev. Biol.，1996 ； 10 ；175(1) :142-53]。如此，PH20的可溶性形式經常缺乏中性條件下的酶活性。如上文所記錄的且依照W02006/091871中的教導，可以將少量可溶性透明質酸酶糖蛋白(sHASEGP)引入配製劑中以便於將治療性藥物施用入下皮中。通過快速解聚胞外空間中的HA，sHASEGP降低間質的粘性，由此提高水力傳導，並且容許安全且舒適地將較大體積施用入SC組織中。經由降低的間質粘性由sHASEGP誘導的升高的水力傳導容許更大的分散，這潛在地提高SC施用的治療性藥物的系統生物利用度。在下皮中注射時，sHASEGP對HA的解聚定位於SC組織中的注射部位。實驗證據顯示sHASEGP在小鼠中以半衰期13至20分鐘在間質空間中局部失活，在⑶-1小鼠中靜脈內單劑後在血液中沒有可檢出的系統吸收。在血管區室內，sHASEGP在多至0. 5mg/kg劑量的情況中在小鼠和獼猴中分別表明2. 3和5分鐘的半衰期。與HA底物在SC組織中的連續合成組合，sHASEGP快速清除導致其它共注射分子的瞬時的且局部有活性的滲透增強，該效應在施用後 24 至 48 小時內完全可逆[Bywaters G. L.等，"Reconstitution of the dermal barrier to dye spread after Hyaluronidase injection", Br.Med. J. ,1951 ；2 (4741)1178-1183]。在其對局部液體分散的影響外，sHASEGP還充當吸收增強劑。大於16千道爾頓 (kDa)的大分子大多排除在經由擴散通過毛細管的吸收之外，並且大多經由引流淋巴結吸收。因此，皮下施用的大分子，諸如例如治療性抗體(分子量約150kDa)必須穿過間質基質， 之後到達引流淋巴系統，隨後吸收入血管區室中。通過提高局部分散，sHASEGP增加許多大分子的吸收速率(Ka)。相對於在沒有sHASEGP的情況中的SC施用，這導致升高的峰血液水平(Cmax),而且潛在地導致升高的生物利用度[Bookbinder L.H.，等，「A recombinant human enzyme for enhanced interstitial transport of therapeutics，，，J. Control. Release
2006；114 :230-241]。動物起源的透明質酸酶產品已經在臨床上使用超過60年，主要用於提高其它共施用的藥物的分散和吸收及用於皮下輸液(大體積的流體的SC注射/輸注) [Frost G. I.，「Recombinant human hyaluronidase (rHuPH20) :an enabling platform for subcutaneous drug and fluid administration", Expert Opinion on Drug Delivery, 2007 ；4 :427-440]。關於透明質酸酶作用機制的詳情已經詳細記載於下列出片反物Duran-ReynoIds F.，「A spreading factor in certain snake venoms and its relation to their mode of action，，，CR Soc Biol Paris，1938 ；69-81 ；Chain Ε.， 「A mucolytic enzyme in testes extracts」，Nature 1939 ；977-978 ；Weissmann B.， "The transglycosylative action of testicular hyaluronidase，，，J. Biol. Chem., 1955 ；216 :783-94 ；Tammi, R.，Saamanen, Α. Μ.，Maibach，H. I.，Tammi Μ.，「Degradation of newly synthesized high molecular mass hyaluronan in the epidermal and dermal compartments of human skin in organ culture」，J. Invest.Dermatol. 1991 ； 97 :126-130 ；Laurent，U. B. G.，Dahl, L. B.，Reed, R. K. ,"CataboIism of hyaluronan in rabbit skin takes place locally, in lymph nodes and liver", Exp.Physiol.1991 ； 76 :695-703 ；Laurent,Τ. C.禾口 Fraser，J· R· Ε· ,Degradation of Bioactive Substances Physiology and Pathophysiology，，，Henriksen，J. H. (Ed)CRC Press，Boca Raton，FL; 1991.第 249 頁-第 265 頁；Harris，Ε. N.等，「Endocytic function，glycosaminoglycan specificity, and antibody sensitivity of the recombinant human 190-kDa hyaluronan receptor for endocytosis(HARE) 」，J. Biol. Chem. 2004；279 :36201-36209 ； Frost,G. I. ,"Recombinant human hyaluronidase(rHuPH20) :an enabling platform for subcutaneous drug and fluid administration，，，Expert Opinion on Drug Delivery,
2007；4 :427-440。在EU國家得到批准的透明質酸酶產品包括Hylase 「Dessau」和 Hyalase 。在美國得到批准的動物起源的透明質酸酶產品包括Vitrase 、Hydase 、和已經廣泛建立了透明質酸酶產品的安全性和功效。所鑑定的最重大的安全性風險是超敏感性和/或變應原性，認為其與動物衍生的製備物的純度缺乏相關[Frost， G. I. ,"Recombinant human hyaluronidase(rHuPH20) :an enabling platform for subcutaneous drug and fluid administration", Expert Opinion on Drug Delivery, 2007 ；4 :427-440]。應當注意，在英國、德國與美國間就動物衍生的透明質酸酶的批准劑量而言有差異。在英國，作為皮下或肌肉內注射佐劑的常用劑量是對注射直接添加的1500個單位。在美國，出於此目的使用的常用劑量是150個單位。在皮下輸液中，使用透明質酸酶來幫助相對大體積的流體的皮下施用。在英國，一般以皮下使用的每500至IOOOml流體給予1500個單位的透明質酸酶。在美國，認為150個單位對於每升皮下輸液溶液是足夠的。 在德國，認為150至300個單位對於此目的是足夠的。在英國，通過添加1500個單位來加速局部麻醉劑的擴散。在德國和美國，認為150個單位對於此目的是足夠的。雖然有劑量差異(在英國的劑量比在美國高10倍)，但是已經報告了分別在美國和英國銷售的動物衍生的透明質酸酶產品的安全性概況沒有明顯差異。在2005 年 12 月 2 日，Halozyme Therapeutics Inc.收到來自 FDA 的關於重組人透明質酸酶的可注射配製劑rHuPH20(HYLENEX )的批准。FDA批准150個單位的劑量的 HYLENEX 用於下列適應症的SC施用-作為佐劑以提高其它注射藥物的吸收和分散-用於皮下輸液-作為SC尿路造影術中的輔助物以改善不透射線劑的吸收。作為所述管理審閱的一部分，建立的是，rHuPH20與先前批准的動物衍生的透明質酸酶製備物擁有增強其它注射藥物分散和吸收的相同特性，但是具有改善的安全性概況。 具體地，與動物衍生的透明質酸酶相比，重組人透明質酸酶(rHuPH20)的使用使被動物病原體和傳染性海綿狀腦病汙染的潛在風險最小化。可溶性透明質酸酶糖蛋白(sHASEGP)、其製備方法及其在藥物組合物中的用途已經記載於WO 2004/078140。已經在WO 2006/091871中提及與多種例示性抗體，諸如例如曲妥單抗組合使用可溶性透明質酸酶糖蛋白。如下文進一步概述的詳細實驗工作已經顯示了，令人驚訝地，本發明的配製劑具有有利的貯存穩定性，而且滿足健康權力機構批准的所有必需要求。本發明的配製劑中的透明質酸酶酶增強抗HER2抗體對系統循環的投遞，例如通過增加活性物質的吸收來實現(它充當滲透增強劑)。透明質酸酶酶還通過可逆水解乙醯透明質酸(即SC間質組織的一種胞外組分)來提高治療性抗HER2抗體經由皮下應用路徑對系統循環的投遞。下皮中的乙醯透明質酸水解暫時打開SC組織的間質空間中的通道，並且由此改善治療性抗HER2抗體對系統循環的投遞。另外，施用顯示了人的疼痛降低和SC 組織的體積衍生的腫脹較小。透明質酸酶在局部施用時在局部具有其全部效應。換言之，透明質酸酶在數分鐘中局部失活並代謝，而且尚未注意到具有系統或長期效應。在透明質酸酶進入血流時它在數分鐘內快速失活排除在不同透明質酸酶產品間實施可比較的生物分布研究的實際能力。 此特性還使任何潛在的系統安全性憂慮最小化，這是因為透明質酸酶產品不能在遠離的部位起作用。所有透明質酸酶酶的統一特徵是其解聚乙醯透明質酸的能力，不管化學結構、物種來源、組織來源、或源自相同物種和組織的藥物產品的批次的差異。它們的與眾不同之處在於，儘管具有不同結構，它們的活性是相同的(除了效力外)。依照本發明的配製劑的透明質酸酶酶賦形劑以對本文中所描述的穩定的藥物配製劑中的抗HER2抗體的分子完整性沒有不利影響為特徵。此外，透明質酸酶酶僅僅修飾抗 HER2抗體對系統循環的投遞，但是不擁有可以提供或促成系統吸收的抗HER2抗體的治療
14效果的任何特性。透明質酸酶酶不是系統生物利用的，並且在依照本發明的穩定的藥物配製劑的推薦貯存條件沒有不利地影響抗HER2抗體的分子完整性。因此，它被認為是依照本發明的抗HER2抗體配製劑中的賦形劑。因為它不施加治療效果，所以它代表除治療活性抗 HER2抗體外的藥學形式組分。依照本發明的許多合適的透明質酸酶酶自現有技術已知。優選的酶是人透明質酸酶酶，最優選地稱為rHuPH20的酶。rHuPH20是通過水解N-乙醯基葡糖胺的C1位置與葡糖醛酸的C4位置間的β _1，4連接來解聚乙醯透明質酸的中性和酸性活性β-1，4糖基水解酶家族成員。乙醯透明質酸是一種在結締組織，諸如皮下間質組織，和某些特化組織， 諸如臍帶和玻璃體液的胞內基質中找到的多糖。乙醯透明質酸的水解暫時地降低間質組織的粘性，並且促進注射流體或局部漏出液或滲出物的分散，如此便於其吸收。透明質酸酶的效果是局部的，並且在M至48小時內發生的組織乙醯透明質酸完全重建的情況中可逆 [Frost,G. I. ,"Recombinant human hyaluronidase (rHuPH20) :an enabling platform for subcutaneous drug and fluid administration", Expert Opinion on Drug Delivery, 2007 ；4 :427-440]。經由水解乙醯透明質酸的結締組織滲透性升高與透明質酸酶在其提高共施用分子的分散和吸收能力方面的功效相關聯。人基因組含有數種透明質酸酶基因。僅PH20基因產物擁有生理學胞外條件下的有效透明質酸酶活性，並且充當鋪展劑，而酸性活性透明質酸酶沒有此特性。rHuPH20是目前可用於治療用途的第一種且唯一的重組人透明質酸酶酶。天然存在的人PH20蛋白具有將其錨定於質膜的附著於羧基端胺基酸的脂質錨。由Halozyme開發的rHuPH20酶是一種截短的刪除變體，其缺乏負責脂質附著的羧基端的此類胺基酸。這生成與牛睪丸製備物中找到的蛋白質相似的可溶性中性PH活性酶。rHuPH20蛋白與35個胺基酸的信號肽一起合成，所述信號肽在分泌過程期間自N端除去。成熟的rHuPH20蛋白含有與一些牛透明質酸酶製備物中找到的N端胺基酸序列直向同源的真實N端胺基酸序列。PH20透明質酸酶(包括動物衍生的PH20和重組人rHuPH20)通過水解N-乙醯基葡糖胺的C1位置與葡糖醛酸的C4位置間的β _1，4連接來解聚乙醯透明質酸。四糖 ^L^^^l^Vcf^] [ffeissmann, B. ,"The transglycosylative action of testicular hyaluronidase」，J. Biol. Chem.，1955 ；216 :783-94]。此 N-乙醯基葡糖胺 / 葡糖醛酸結構未在重組生物學產物的N連接的聚糖中找到，並且因此，rHuPH20不會影響與其一起配製的抗體，諸如例如曲妥單抗的糖基化。rHuPH20酶自身擁有每個分子6個N連接的聚糖，其中核心結構與單克隆抗體中找到的核心結構相似。如預期的，這些N連接的結構不隨時間變化，確認rHuPH20對這些N-連接的聚糖結構的酶活性的缺乏。rHuPH20的短半衰期和乙醯透明質酸的持續合成導致酶對組織的短的且局部的作用。可以通過使用重組DNA技術來製備作為依照本發明的皮下配製劑中的賦形劑的透明質酸酶酶。因此，確保始終獲得相同蛋白質(相同的胺基酸序列)，並且避免例如由自組織提取期間共純化的汙染性蛋白質引起的變應性反應。如本文中例示的配製劑中使用的透明質酸酶酶是人酶，即rHuPH20。rHuPH20 (HYLENEX )的胺基酸序列是公知的，並且以CAS登記號75971-58-7可獲得。近似的分子量是61kDa。已經在天然來源的哺乳動物透明質酸酶與來自人和其它哺乳動物的PH_20cDNA克隆間實施多重結構和功能比較。PH-20基因是重組產物rHuPH20使用的基因；然而，重組藥物產物是一種由PH-20基因編碼的完整蛋白質的447個胺基酸的截短型式。就胺基酸序列而言的結構相似性在任何比較中很少超過60%。功能比較顯示rHuPH20的活性與先前批准的透明質酸酶產品的活性非常相似。此信息與過去50年期間的臨床發現一致，即不管透明質酸酶來源，透明質酸酶的臨床安全性和單位功效是等同的。rHuPH20在依照本發明的抗HER2抗體SC配製劑中的使用容許施用較高體積的藥物產物，並且潛在地增強皮下施用的曲妥單抗吸收入系統循環中。依照本發明的穩定的藥物配製劑的摩爾滲透壓濃度是330士50m0sm/kg。依照本發明的穩定的藥物配製劑基本上沒有可見的(人眼檢查)顆粒。亞-可見的顆粒(如通過光遮蔽測量的)應當滿足下列標準-每個管形瓶彡IOym顆粒的最大數目->6000-每個管形瓶彡25μ m顆粒的最大數目-> 600在又一方面，本發明提供了配製劑用於製備可用於治療受試者中適合於用抗HER2 抗體治療的疾病或病症，諸如例如癌症或非惡性疾病的藥物的用途，包括以有效治療所述疾病或病症的量對受試者施用本文中所描述的配製劑。可以與化療劑伴隨或序貫共施用抗 HER2抗體。在又一方面，本發明提供了治療受試者中適合於用抗HER2抗體治療的疾病或病症(例如癌症或非惡性疾病)的方法，包括以有效治療所述疾病或病症的量對受試者施用本文中所描述的配製劑。癌症或非惡性疾病一般會牽涉HER2表達細胞，使得依照本發明的治療性藥物SC配製劑中的HER2抗體能夠結合受影響的細胞。下文的定義部分中進一步列出了可以用依照本發明的配製劑治療的各種癌症或非惡性疾病。可以將依照本發明的藥學活性抗HER2抗體的穩定的藥物配製劑作為皮下注射施用，其中以3周時間間隔(q3w)重複施用幾次。在大多數情況中在1至10分鐘，優選地2 至6分鐘，最優選地3士 1分鐘的時間段內施用注射流體的整個體積。在佐劑EBC患者中及接受曲妥單抗單一療法的MBC患者(其中沒有給予其它靜脈內(IV)化療劑)中，此類皮下施用導致患者便利增加及在家自身施用的潛力。這導致改善的順從性，並且降低/消除與 IV施用有關的成本(即，IV施用的護理成本、躺椅租費、患者出行等)。依照本發明的皮下施用最可能會與輸注相關反應的頻率和/或強度降低有關。對配製劑添加透明質酸酶容許增加可以安全且舒適地皮下施用的注射體積。在正常的情況下，注射體積是1至15ml。已經觀察到依照本發明的配製劑的施用提高治療性抗體的分散、吸收和生物利用度。經由SC路徑施用的大分子(即大於16kDa)經由引流淋巴液優先吸收入血管區室中[Supersaxo，A.等，「Effect of Molecular Weight on the Lymphatic Absorption of Water-Soluble Compounds Following Subcutaneous Administration，，，1990 ；2 167-169 ；Swartz,M. A. ,"Advanced Drug Delivery Review, The physiology of the lymphatic system」，2001 ;50 :3-20]。如此，這些大分子引入系統循環的速率相對於靜脈內輸注是減緩的，因此潛在地導致輸注相關反應的頻率/強度降低。依照本發明的皮下曲妥單抗配製劑的生成要求製造工藝的最終純化步驟中的高抗體濃度(約120mg/ml)。因此，將額外的工藝步驟(超濾/滲濾)添加至曲妥單抗的常規製造工藝。依照WO 97/04801中的教導，依照本發明的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑也可以以穩定化的蛋白質配製劑提供，所述穩定化的蛋白質配製劑可以用合適的稀釋劑重建以生成高抗HER2抗體濃度重建的配製劑。主要使用依照本發明的HER2抗體SC配製劑來治療癌症。其中，術語「癌症」和「癌性」指或描述哺乳動物中通常以不受調節的細胞生長為特徵的生理學狀況。癌症的例子包括但不限於癌瘤、淋巴瘤、母細胞瘤(包括髓母細胞瘤和視網膜母細胞瘤)、肉瘤(包括脂肪肉瘤和滑膜細胞肉瘤)、神經內分泌腫瘤(包括類癌瘤、胃泌素瘤、和胰島細胞癌)、間皮瘤、 神經鞘瘤(sctwarmoma)(包括聽神經瘤)、腦膜瘤、腺癌、黑素瘤、和白血病或淋巴樣惡性腫瘤。此類癌症的更具體例子包括鱗狀細胞癌(例如上皮鱗狀細胞癌)、肺癌(包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌和肺鱗癌)、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌(包括胃腸癌)、胰腺癌、成膠質細胞瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝瘤、乳腺癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌瘤、唾液腺癌、腎癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、肛門癌、陰莖癌、睪丸癌、食管癌、膽管腫瘤、及頭和頸癌。如本專利說明書中所使用的，術語「約」意指規定所提供的特定數值可以以某種程度變化，諸如例如意指給定數值中包括範圍為士 10%，優選地士5%，最優選地士2%的變化。「過表達」HER受體的癌症是與相同組織類型的非癌性細胞相比在其細胞表面上具有顯著更高水平的HER受體，諸如HER2的癌症。此類過表達可以由基因擴增或由轉錄或翻譯升高引起。可以在診斷或預後測定法中通過評估細胞表面上存在的HER蛋白的水平升高 (例如經由免疫組織化學測定法；IHC進行)來測定HER受體過表達。或者/另外，可以例如經由螢光原位雜交(FISH;見W098/4M79)、Southern印跡、或聚合酶鏈式反應(PCR)技術，諸如實時定量PCR(RT-PCR)來測量細胞中的HER編碼核酸的水平。也可以通過測量生物學流體，諸如血清中的脫落抗原(例如，HER胞外域)來研究HER受體過表達[見例如1990 年6月12日公告的美國專利No. 4,933, 294 ； 1991年4月18日公布的W091/05264 ； 1995年 3 月 28 日公告的美國專利 5，401，638 ；及 Sias 等，J. Immunol. Methods 1990 ；132 :73-80]。 除了上述測定法外，各種體內測定法是熟練從業人員可用的。例如，可以將患者身體內的細胞暴露於任選地用可檢測標記物，例如放射性同位素標記的抗體，並且可以例如通過外部掃描放射性或者通過分析自先前暴露於抗體的患者採集的活組織檢查來評估抗體對患者中的細胞的結合。相反地，「不過表達HER2受體」的癌症是與相同組織類型的非癌性細胞相比不表達比正常水平高的HER2受體的癌症。「過表達」HER配體的癌症是與相同組織類型的非癌性細胞相比生成顯著更高水平的所述配體的癌症。此類過表達可以由基因擴增或由轉錄或翻譯升高引起。可以通過評估患者中，例如腫瘤活組織檢查中的配體(或其編碼核酸)的水平或者通過各種診斷測定法， 諸如IHC、FISH、Southern印跡、PCR或本領域中公知的體內測定法來診斷性測定HER配體的過表達。涵蓋的是，也可以使用依照本發明的HER2抗體SC配製劑來治療各種非惡性疾病或病症，其包括自身免疫性疾病(例如銀屑病)；子宮內膜異位症；硬皮病；再狹窄；息肉，諸如結腸息肉、鼻息肉或胃腸息肉；纖維腺瘤；呼吸系統疾病；膽囊炎；神經纖維瘤病； 多囊腎病；炎性疾病；皮膚病症，包括銀屑病和皮炎；血管疾病；牽涉血管上皮細胞的異常增殖的狀況；胃腸潰瘍；門內特裡埃(Menetrier)氏病、分泌型腺瘤或蛋白質損失症候群(protein loss syndrome)；腎病症；血管生成性病症(angiogenic disorder)；目艮病， 諸如年齡相關黃斑變性、推測的眼組織胞漿菌病症候群、來自增殖性糖尿病視網膜病變的視網膜新血管化、視網膜血管化、糖尿病視網膜病變、或年齡相關黃斑變性；骨相關病理學，諸如骨關節炎、佝僂病和骨質疏鬆；腦缺血事件後的損傷；纖維變性或水腫疾病，諸如肝硬變、肺纖維化、結節病(carcoidosis)、甲狀腺炎(throiditis)、系統性高粘滯症候群(hyperviscosity syndrome systemic)、Osier Weber-Rendu 疾病、慢性阻塞性月市疾病(occlusive pulmonary disease)、或燒傷、創傷、輻射、中風、缺氧或缺血後的水腫；皮膚的超敏感性反應；糖尿病視網膜病和糖尿病腎病；格-巴二氏症候群(Guillain-Barre syndrome)；移植物抗宿主病或移植排斥；佩吉特(Paget)氏病；骨或關節炎症；光老化 (例如由對人皮膚的UV輻射引起的)；良性前列腺肥大；某些微生物感染，包括選自下組的微生物病原體腺病毒、漢坦病毒、布氏疏螺旋體(Borrelia burgdorferi)、耶爾森氏菌 (Yersinia spp.)和百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)；由血小板聚集引起的血栓；生殖狀況，諸如子宮內膜異位症、卵巢過度刺激症候群、先兆子癇、功能障礙性子宮出血、或月經頻多；滑膜炎；粥樣斑；急性和慢性腎病(包括增殖性腎小球腎炎和糖尿病誘導的腎病)；溼疹；肥厚性瘢痕形成；內毒素性休克和真菌感染；家族性腺瘤病息肉病；神經變性性疾病(例如阿耳茨海默(Alzheimer)氏病、AIDS相關痴呆、帕金森(Parkinson) 氏病、肌萎縮側索硬化、視網膜色素變性、脊柱性肌萎縮(spinal muscular atrophy)和小腦變性)；骨髓增生異常症候群；再生障礙性貧血；缺血性損傷；肺、腎或肝的纖維化；T細胞介導的超敏感性疾病；嬰兒肥大性幽門狹窄；泌尿阻塞症候群(urinary obstructive syndrome)；銀屑病關節炎；和橋本(Hasimoto)氏甲狀腺炎。本文中的療法的例示性非惡性適應症包括銀屑病、子宮內膜異位症、硬皮病、血管疾病(例如再狹窄、動脈粥樣硬化、冠狀動脈疾病、或高血壓)、結腸息肉、纖維腺瘤或呼吸系統疾病(例如，哮喘、慢性支氣管炎、支氣管擴張或囊性纖維化病)。在適應症是癌症的情況中，可以用抗體配製劑和化療劑的組合治療患者。聯合施用包括共施用或同時施用(其使用分開的配製劑或單一藥物配製劑進行)和以任意次序的連續施用，其中優選地，存在著所有活性劑同時施加其生物學活性的時間段。如此，可以在施用依照本發明的抗體配製劑之前、或之後施用化療劑。在此實施方案中，化療劑的至少一次施用與依照本發明的抗體配製劑的至少一次施用間的時機優選地是約1個月或更小，且最優選地約2周或更小。或者，可以在單一配製劑或分開的配製劑中對患者同時施用化療劑和依照本發明的抗體配製劑。用所述抗體配製劑的治療會導致癌症或疾病的體徵或症狀的改善。例如，在所治療的疾病是癌症的情況中，此類療法可以導致存活(總體存活和/或無進展存活)的改善和/或可以導致客觀臨床響應(部分的或完全的)。此外，用化療劑和抗體配製劑的組合治療可以對患者產生協同或大於疊加的治療益處。通常，所施用配製劑中的抗體是裸抗體。然而，所施用的抗體可以與細胞毒劑綴合。然後，免疫綴合物和/或其結合的抗原被細胞內在化，導致免疫綴合物在殺死其結合的癌細胞方面的治療功效升高。在一個實施方案中，細胞毒劑靶向或幹擾癌細胞中的核酸。 此類細胞毒劑的例子包括美登木素生物鹼類、加利車黴素(calioheamicin)、核糖核酸酶和DNA內切核酸酶。臨床上最先進的免疫綴合物是曲妥單抗-美登木素生物鹼類免疫綴合物 (T-DMl)，如它們記載於WO 2003/037992的，特別是免疫綴合物T-MCC-DMl，其化學名稱是 N2』 -脫乙醯基-N2』-(3-巰基-1-氧丙基)-美登素-4-馬來醯亞胺基甲基-環己基-1-羧基-曲妥單抗。對於皮下投遞，可以經由合適的裝置，諸如(但不限於)注射器；注射裝置(例如inject-ease 和genject 裝置)；輸注泵(諸如例如accu-Chek )；注射筆(諸如 genpen ；一種無針裝置(例如Meddectort^biojectortm)；或者經由皮下貼片投遞系統來施用配製劑。適合於依照本發明的配製劑的投遞系統記載於WO 2010/(^9054。此類裝置包含約5至約15ml或更具體地5ml依照本發明的液體配製劑。對於預防或治療疾病，抗體的合適劑量會取決於要治療的疾病類型(如上文所限定的)、疾病的嚴重性和過程、抗體是出於預防還是治療目的施用、先前的療法、患者的臨床史及他對抗體的響應、和主治內科醫生的判斷。在一次或一系列治療裡對患者適當地施用抗體。根據疾病的類型和嚴重性，約ι μ g/kg至50mg/kg體重或更具體地約0. lmg/kg至 20mg/kg體重的抗HER2抗體是對患者施用的候選初始劑量，其例如通過一次或多次分開的施用，或者通過連續輸注來進行。更具體地，抗體的劑量會在約0. 05mg抗HER2抗體/kg 體重至約IOmg抗HER2抗體/kg體重的範圍中。若施用化療劑，因此它通常以已知的劑量施用，或者任選地由於藥物的組合作用或可歸因於化療劑施用的負面副作用而降低。可以依照製造商的指令或如熟練從業人員憑經驗確定的那樣使用此類化療劑的製備和劑量給藥日程表。此類化學療法的製備和劑量給藥日程表也記載於Chemotherapy Service Ed.， Μ. C. Perry, Williams & ffilkins, Baltimore, MD(1992)。其它治療方案可以與抗體組合，包括但不限於第二(第三、第四等)化療劑(換言之，不同化療劑的「混合物(cocktail) 」)；另一種單克隆抗體；生長抑制劑；細胞毒劑；化療劑；egfr靶向藥物；酪氨酸激酶抑制劑；抗血管生成劑；和/或細胞因子等；或其任何合適的組合。在上述治療方案外，患者可以進行癌細胞的手術除去和/或放射療法。在本發明的另一個實施方案中，提供了製品，其含有本發明的藥物配製劑且提供其使用指令。此製品包含容器。合適的容器包含例如瓶、管形瓶(例如多或雙室管形瓶)、 注射器(諸如多或雙室注射器)和試管。容器可以自多種材料諸如玻璃或塑料形成。容器容納配製劑，並且容器上或與容器結合的標籤可以指示使用指導。容納配製劑的容器可以是多次使用管形瓶，其容許重建配製劑的重複施用(例如2至6次施用)。製品可以進一步包含從商業和用戶觀點看期望的其它材料，包括其它緩衝液、稀釋劑、濾器、針、注射器、和具有使用指令的包裝插頁。術語「藥物配製劑」指處於使得容許活性成分的生物學活性有效的形式，且不含對於會接受配製劑施用的受試者具有不可接受的毒性的別的組分的製劑。此類配製劑是無菌的。「無菌」配製劑是無菌的或沒有所有活的微生物及其孢子。「穩定的」配製劑是其中的所有蛋白質在於預期的貯存溫度，例如2_8°C貯存後基本上保留其物理穩定性和/或化學穩定性和/或生物學活性的配製劑。期望的是，配製劑在貯存後基本上保留其物理和化學穩定性，及其生物學活性。一般地，基於配製劑的預期保存期選擇貯存期。此外，配製劑在冷凍(至例如-70°C )和融化配製劑後，例如1、2或3個循環的冷凍和融化後應當是穩定的。用於測量蛋白質穩定性的各種分析技術在本領域中是可用的，並且綜述見例如 P印tide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc. , New York, New York, Pubs. (1991)禾口 Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10 :29-90(1993)。可以於選定的溫度對穩定性測量選定的時間段。可以以多種不同方式定性和/或定量評估穩定性，包括評估聚集體形成(例如使用大小排阻層析，通過測量濁度，和/或通過目視檢查進行)；使用陽離子交換層析或毛細管區帶電泳通過評估電荷異質性；氨基端或羧基端序列分析；質譜分析；SDS-PAGE分析以比較縮小的和完整的抗體；肽圖 (例如胰蛋白酶消化或LYS-C)分析；評估抗體的生物學活性或抗原結合功能等。不穩定性可以牽涉下列任何一項或多項聚集、脫醯胺化(例如Asn脫醯胺化)、氧化(例如Met氧化)、異構化(例如Asp異構化)、剪裁(clipping) /水解/片段化(例如鉸鏈區片段化)、 琥珀醯亞胺形成、不成對的半胱氨酸、N端延伸、C端加工、糖基化變化等。本文中的「脫醯胺化」單克隆抗體是其中已經通過翻譯後修飾將其一個或多個天冬醯胺殘基修飾為例如天冬氨酸或異天冬氨酸的。如本文中所使用的，術語「提供pH 5. 5士2.0的緩衝劑」指通過其酸/鹼共軛組分的作用提供包含其的溶液抵抗PH變化的試劑。依照本發明的配製劑中使用的緩衝液具有範圍為約5. 0至約7. 0，或約5. 0至約6. 5，或約5. 3至約5. 8的pH。已經發現了 pH約5. 5 是最合適的。會控制此範圍中的PH的緩衝劑的例子包括乙酸鹽、琥珀酸鹽、葡糖酸鹽、組氨酸、檸檬酸鹽、雙甘氨肽和其它有機酸緩衝液。依照本發明的最合適的緩衝液是組氨酸緩衝液，諸如例如L-組氨酸/HCl。「組氨酸緩衝液」是包含胺基酸組氨酸的緩衝液。組氨酸緩衝液的例子包括鹽酸組氨酸、乙酸組氨酸、磷酸組氨酸、硫酸組氨酸。實施例中鑑定為最合適的組氨酸緩衝液是鹽酸組氨酸緩衝液。通過用稀釋的氫氯酸滴定L-組氨酸(游離鹼，固體)來製備此類鹽酸組氨酸緩衝液。具體地，組氨酸緩衝液或鹽酸組氨酸緩衝液為PH 5. 5士0. 6，更具體地為pH約 5. 3至約5. 8，且最具體地具有pH 5. 5。「等張的」意指感興趣的配製劑與人血液具有基本上相同的滲透壓。等張配製劑一般會具有約250至350m0sm的滲透壓。可以使用蒸汽壓或凝固點降低型滲壓計來測量等滲壓性。本文中的「糖類」包含通用組成(CH2O)n及其衍生物，包括單糖、二糖、三糖、多糖、 糖醇、還原糖、非還原糖等。本文中糖類的例子包括葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、果糖、麥芽糖、右旋糖苷、甘油、右旋糖苷、赤蘚糖醇、甘油、阿拉伯糖醇、木糖醇(sylitol)、山梨糖醇、 甘露糖醇、蜜二糖(mellibiose)、松三糖、棉子糖、甘露三糖、水蘇糖(stachyose)、麥芽糖、 乳酮糖(lactulose)、麥芽酮糖(maltulose)、葡糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、異麥芽酮糖等。特別地，本文中所描述的配製劑包含非還原性二糖作為穩定劑，諸如選自下組的糖類海藻糖 (例如為二水合α，α -海藻糖形式)和蔗糖。在本文中，「表面活性劑」指一種表面-活性劑，例如非離子型表面活性劑。本文中的表面活性劑的例子包括聚山梨酯(例如聚山梨酯20和聚山梨酯80) ；Poloxamer (例如Poloxamer 188) ；Triton ；十二烷基硫酸鈉(SDS)；月桂基硫酸鈉；辛基糖苷鈉；月桂基_、肉豆寇基_、亞油醯(linoleyl-)、或硬脂醯-磺基甜菜鹼；月桂基_、肉豆寇基_、亞油醯基或硬脂醯基-肌氨酸；亞油醯基_、肉豆蔻基_、或鯨蠟基-甜菜鹼；月桂醯胺基丙基_、椰油醯胺基丙基_、亞油醯胺基丙基_、肉豆蔻醯胺基丙基_、棕櫚醯胺基丙基 (palmidopropyl)-、或異硬脂醯胺基丙基-甜菜鹼(例如月桂醯胺基丙基)；肉豆蔻醯胺基丙基_、棕櫚醯胺基丙基_、或異硬脂醯胺基丙基-二甲胺；甲基椰油醯基(cocoyl)牛磺酸鈉、或甲基油烯基牛磺酸二鈉；和MONAQU AT 系列(Mona Industries, Inc. ,Paterson,New Jersey)；聚乙二醇、聚丙二醇、和乙烯和丙二醇的共聚物(例如Pluronics、PF68等)等。 已經分別發現了聚山梨酯20(PS20)和聚山梨酯80(PS80)在本文中所描述的配製劑中是特別合適的。本文中的術語「抗體」以最廣義使用，並且明確涵蓋全長單克隆抗體、多克隆抗體、 自至少兩種全長抗體形成的多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)、及抗體片段，只要它們展現出期望的生物學活性。如本文中所使用的，術語「單克隆抗體」指自基本上同質的抗體群體獲得的抗體， 即除了可以在單克隆抗體的生成期間生成的可能的變體(此類變體一般以少量存在)夕卜， 構成群體的抗體個體相同和/或結合相同表位。與通常包含針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體製備物相反，每種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。在其特異性夕卜，單克隆抗體的有利之處在於它們不受其它免疫球蛋白汙染。修飾語「單克隆」指示抗體為自基本上同質的抗體群體獲得的特徵，並且不應解釋為要求通過任何特定的方法生成抗體。例如，可以通過第一次由K0hler等，Nature，256 :495(1975)描述的雜交瘤方法來生成， 或者可以通過重組DNA方法(見例如美國專利No. 4,816, 567)來生成要依照本發明使用的單克隆抗體。也可以使用 Clarkson 等，Nature, 352 :624-628 (1991)和 Marks 等，J. Mol. Biol.，222 :581-597(1991)中所描述的技術自噬菌體抗體文庫分離「單克隆抗體」。「抗體片段」包含全長抗體的一部分，特別地包含其抗原結合或可變區。抗體片段的例子包括Fab、Fab，、F(ab，)2、和Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；和自抗體片段形成的多特異性抗體。「全長抗體」是包含抗原結合可變區及輕鏈恆定域(CL)和重鏈恆定域、CH1、CH2和 CH3的抗體。恆定域可以是天然序列恆定域(例如人天然序列恆定域)或其胺基酸序列變體。特別地，全長抗體具有一種或多種效應器功能。本文中的「胺基酸序列變體」抗體是具有與主要種類抗體不同的胺基酸序列的抗體。通常，胺基酸序列變體會擁有與主要種類抗體至少約70%的同源性，且優選地，它們會與主要種類抗體至少約80%，更優選地至少約90%同源。胺基酸序列變體在主要種類抗體的胺基酸序列內或附近的某些位置擁有替代、刪除、和/或添加。本文中的胺基酸序列變體的例子包括酸性變體(例如脫醯胺化的抗體變體)、鹼性變體、在其一條或兩條輕鏈上具有氨基端前導延伸(例如VHS-)的抗體、在其一條或兩條重鏈上具有C端賴氨酸殘基的抗體等，並且包括對重和/或輕鏈的胺基酸序列的改變的組合。相對於主要種類抗體，本文中特別感興趣的抗體變體是包含在其一條或兩條輕鏈上的氨基端前導延伸，任選地進一步包含其它胺基酸序列和/或糖基化差異的抗體。本文中的「糖基化變體」抗體是具有與附著於主要種類抗體的一個或多個碳水化合物模塊不同的其附著的一個或多個碳水化合物模塊的抗體。本文中的糖基化變體的例子包括具有附著於其Fc區的Gl或G2寡糖結構，而不是GO寡糖結構的抗體、具有附著於其一條或兩條輕鏈的一個或兩個碳水化合物模塊的抗體、沒有附著於抗體的一條或兩條重鏈的碳水化合物的抗體等，及糖基化變化的組合。此外，術語「糖基化變體」還包括糖工程化改造抗體諸如那些記載於EP 1，331 『266和USP 7，517，670的。抗體「效應器功能」指那些可歸因於抗體的Fc區(天然序列Fc區或胺基酸序列變體Fc區)的生物學活性。抗體效應器功能的例子包括Clq結合；補體依賴性細胞毒性 (CDC) ；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)；吞噬；細胞表面受體(例如 B細胞受體；BCR)的下調，等等。根據全長抗體重鏈恆定域的胺基酸序列，它可以歸入不同「類」。存在著5類主要的全長抗體IgA、IgD、IgE、IgG、和IgM，這些中的幾種可以進一步分成「亞類」(同種型)，例如1861、1862、1863、1864、18々、和18々2。對應於不同類抗體的重鏈恆定域分別稱作α [阿爾法]、β [德耳塔]、ε [厄普西隆]、Y [伽馬]、和μ [謬]。不同類免疫球蛋白的亞基結構和三維結構是公知的。在本文中，單克隆抗體的「生物學活性」指抗體結合抗原，並且產生可以在體外或在體內測量的可測量生物學應答的能力。此類活性可以是拮抗的(例如在抗體是HER2抗體的情況中)或激動的。在帕妥珠單抗的情況中，在一個實施方案中，生物學活性指配製的抗體抑制人乳腺癌細胞系MDA-MB-175-VII增殖的能力。本文中的術語「單克隆抗體」明確包括所謂的嵌合抗體，其中重和/或輕鏈的一部分與自特定物種衍生的或屬於特定抗體類或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，而鏈的剩餘部分與自另一物種衍生的或屬於另一抗體類或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，及此類抗體的片段，只要它們展現出期望的生物學活性(美國專利No. 4，816，567 ；及 Morrison 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81 :6851-6855 (1984))。本文中感興趣的嵌合抗體包括「靈長源化(primatized)」抗體，其包含自非人靈長類(例如舊世界猴(Old World Monkey)、猿等)衍生的可變域抗原結合序列和人恆定區序列。非人(例如嚙齒類)抗體的「人源化」形式指最低限度包含自非人免疫球蛋衍生的序列的嵌合抗體。大體上，人源化抗體指來自接受體的高變區殘基用來自具有期望特異性、 親和力和性能的非人物種(供體抗體)諸如小鼠、大鼠、家兔或非人靈長類的高變區的殘基替換的人免疫球蛋白(接受抗體)。在有些情況中，將人免疫球蛋白的框架區(FR)殘基用相應的非人殘基替換。此外，人源化抗體可以包含在接受抗體或供體抗體中沒有找到的殘基。 做出這些修飾以進一步改進抗體性能。一般地，人源化抗體會包含至少一個、通常為兩個基本上整個可變域，其中所有或基本上所有高變環對應於非人免疫球蛋白的高變環，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR。任選地，人源化抗體還會包含至少部分免疫球蛋白恆定區(Fe)，通常是人免疫球蛋白的恆定區。關於更多詳情，見Jones等，Nature 321 522-525(1986) ；Riechmann 等，Nature 332:323—329(1988)；及 Presta，Curr. Op. Struct. Biol. 2 :593-596(1992)。人源化HER2 抗體包括 huMAb4D5_l、huMAb4D5_2、huMAb4D5_3、huMAb4D5_4、 huMAb4D5-5、huMAb4D5-6、huMAb4D5-7 和 huMAb4D5_8 或曲妥單抗(HERCEPTIN )，如美國專利5，821，337的表3中所描述的；人源化520C9 (W093/21319)和人源化2C4抗體，諸如帕妥
珠單抗，如下文中進一步描述的。出於本文中的目的，「曲妥單抗」、「HERCEPTIN 」和「huMAb4D5-8」指針對4D5表位的抗HER2抗體。優選地，此類抗體包含例如WO 2006/044908的

圖14中所披露的輕鏈和重
鏈胺基酸序列。「表位4D5」是HER2的胞外域中抗體4D5(ATCC CRL 10463)和曲妥單抗結合的區域。此表位接近HER2的跨膜域，並且在HER2的IV域內。為了篩選結合4D5表位的抗體，可以實施諸如記載於 Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow和David Lane (1988)的常規交叉阻斷測定法。或者，可以實施表位定位以評估抗體是否結合HER2的4D5表位(例如HER2的約殘基5 至約殘基625的區域中的任何一個或多個殘基(包括端點))。「表位7C2/7F3」是HER2的胞外域的I域內7C2和/或7F3抗體結合的氨基端區域。為了篩選結合7C2/7F3表位的抗體，可以實施諸如記載於「Antibodies，A Laboratory Manual，，(Cold Spring Harbor Laboratory,Ed Harlow禾口David Lane(1988)) 的常規交叉阻斷測定法。或者，可以實施表位定位以建立抗體是否結合HER2上的7C2/7F3 表位(例如HER2的約殘基22至約殘基53的區域中的任何一個或多個殘基)。在本文中，「帕妥珠單抗」和「rhuMAb 2C4」指結合2C4表位，並且優選地包含WO 2006/044908中所披露的可變輕和可變重胺基酸序列的抗體，更具體地WO 2006/044908的表2中所披露的人源化2C4型式574。「表位2C4」是HER2的胞外域中抗體2C4結合的區域。為了篩選結合2C4表位的抗體，可以實施諸如記載於 Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory,Ed Harlow和David Lane (1988)的常規交叉阻斷測定法。或者，可以實施表位定位以評估抗體是否結合HER2的2C4表位。表位2C4包含來自HER2的胞外域中的II域的殘基。2C4和帕妥珠單抗在I、II和III域接合處結合HER2的胞外域(Franklin等Cancer Cell 5 :317-328(2004))ο「生長抑制劑」在本文中使用時指在體外或在體內抑制細胞，尤其是表達HER的癌細胞生長的化合物或組合物。如此，生長抑制劑可以是顯著降低處於S期的表達HER的細胞的百分比的。生長抑制劑的例子包括阻斷細胞周期行進(處於S期以外的位置)的藥劑，諸如誘導Gl阻滯和M期阻滯的藥劑。經典的M期阻斷劑包括長春藥類(長春新鹼和長春鹼)、紫杉烷(taxane)、和拓撲異構酶II抑制劑，諸如多柔比星、表柔比星、柔紅黴素、依託泊苷、和博來黴素。那些阻滯Gl的藥劑也溢出進入S期停滯，例如DNA烷化劑類諸如他莫昔芬(tamoxifen)、潑尼松(prednisone)、達卡巴嗪(dacartazine)、雙氯乙基甲胺(mechlorethamine)、順鉬(cisplatin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、5_ 氟尿嘧啶(5-fluorouracil)和 ara-C。更多信息可見」 The Molecular Basis of Cancer」， Mendelsohn 禾口 Israel 編，第 1 章，題為 『『Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs", Murakami 等(WB Saunders !Philadelphia, 1995), jt^jkWi 13 頁。「生長抑制性」抗體的例子是那些結合HER2並抑制過表達HER2的癌細胞生長的抗體。優選的生長抑制性HER2抗體在約0. 5至30 μ g/ml的抗體濃度時將細胞培養物中的SK-BR-3乳腺腫瘤細胞的生長抑制大於20%，且優選地大於50% (例如約50%至約 100% )，其中在將SK-BR-3細胞暴露於抗體後6天測定生長抑制(見1997年10月14日公告的美國專利No. 5，677，171)。優選的生長抑制性抗體是鼠單克隆抗體4D5的人源化變體，例如曲妥單抗。
「治療/處理」指治療性處理和防範性或預防性措施兩者。需要治療的對象包括那些已經患有疾病的對象及那些要預防疾病的對象。因此，本文中要治療的患者可以已經診斷為患有疾病或者可以有疾病的素因或者對疾病易感。如本文中所使用的，術語「細胞毒劑」指抑制或阻止細胞功能和/或引起細胞破壞的物質。該術語意圖包括放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、 P32和Lu的放射性同位素)、化療劑、和毒素諸如細菌、真菌、植物或動物起源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或變體。「化療劑」指可用於治療癌症的化學化合物。化療劑的例子包括烷化劑類 (alkylating agents)，諸如塞替派(thiotepa)禾口環憐酷胺(cyclosphosphamide) (CYTOXAN )；磺酸烴基酯類(alkyl sulfonates)，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶類(aziridines)，諸如苯佐替派(benzod印a)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturecbpa)和烏瑞替派(ured印a)；乙撐亞胺類(ethylenimines)和甲基蜜胺類(methylamelamines)， 包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撐蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撐磷醯胺 (triethylenephosphoramide)、三乙撐硫代憐酉先胺(triethylenethiophosphoramide) 和三羥甲蜜胺(trimethylolomelamine)；番荔枝內酯類(acetogenin)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone)) ； δ -9-四氫大麻酚 (tetrahydrocannabinol)(屈大麻 )(dronabinol)，MARIN0L ) ； β-拉中白酉昆(Iapachone)； 拉帕醇(Iapachol)；秋水仙素類(colchicines)；白樺脂酸(betulinic acid)；喜樹鹼 (camptothecin)(包括合成類似物託泊替康(topotecan) (HYCAMTIN )、CPT-Il (伊立替康(irinotecan)，CAMPTOSAR )、乙醯喜樹鹼、東莨菪亭(scopoletin)和9-氨基喜樹鹼)； 苔蘚抑素(bryostatin) ；callystatin ；CC-1065 (包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)和比折來新(bizelesin)合成類似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin)； 鬼白酸(podophyllinic acid)；替尼泊昔(teniposide)；隱藻素類(cryptophycins)(特別是隱藻素1和隱藻素8)；多拉司他汀(dolastatin) ；duocarmycin(包括合成類似物， KW-2189 和 CB1-TM1)；艾槽塞洛素(eleutherobin) ；pancratistatin ;sarcodictyin ；海綿抑素(spongistatin)；氮芥類(nitrogen mustards),諸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、膽磷酉先胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、雙氯乙基甲胺(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法倉(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥膽留酉享 (phenesterine)、撥尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿啼唆氮芥(uracil mustard)；亞硝脲類(nitrosoureas),諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(Iomustine)、尼莫司汀 (nimustine)和雷莫司汀(ranimustine)；抗生素類，諸如烯二炔類抗生素(enediyne) (例如加利車黴素(calicheamicin)，尤其是加利車黴素Y 11和加利車黴素ω 11 (見例如 Angew，Chemie Intl. Ed. Engl.，33 183-186 (1994))；蒽環類抗生素(dynemicin)， 包括蒽環類抗生素A ；埃斯波黴素(esperamicin)；以及新制癌素(neocarzinostatin) 發色團和相關色蛋白烯二炔類抗生素髮色團)、阿克拉黴素(aclacinomycin)、放線菌素(actinomycin)、氨茴黴素(anthramycin)、偶氮絲氨酸(azaserine)、博來黴素(bleomycin)、放線菌素 C (cactinomycin)、carabicin、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycin)、方文線菌素 D(dactinomycin)、柔紅黴素(daunorubicin)、地託比星(detorubicin)、6_ 二氮-5-氧-L-正亮氨酸、多柔比星 (doxorubicin)(包括ADRIAMYCIN 、嗎啉代多柔比星、氰基嗎啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星和鹽酸多柔比星脂質體注射液(D0XIL )、脂質體多柔比星TLC D-99(MY0CET )、 PEG化的脂質體多柔比星(CAELYX )、和脫氧多柔比星)、表柔比星(印irubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素類 (mitomycins)諸如絲裂黴素 C、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾拉黴素(nogalamycin)、 橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(ρ印lomycin)、potfiromycin、口票呤黴素(puromycin)、 三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、 鏈佐星(Sti^ptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物類，諸如甲氨蝶呤、吉西他濱 (gemcitabine) (GEMZAR )、替力Π 氟(tegafur) (UFT0RAL )、卡培他濱(capecitabine) (XEL0DA )、埃博黴素(印othi lone)和5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如二甲葉 W. (denopterin) M^f ^f(pteropterin) > H ￥ ffi ^ (trimetrexate)；
嘌呤類似物，諸如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤(mercaptopurine)、硫咪嘌呤 (thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、 阿扎胞苷(azacitidine)、6_氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙脫氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、 氟尿苷(f loxuridine)；抗腎上腺類，諸如氨魯米特(aminoglutethimide)、米託坦 (mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如亞葉酸(folinic acid)；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙醯丙酸 (aminolevulinic acid)；恩尿啼唆(eniluracil)；安口丫唆(amsacrine) ；bestrabucil ； 比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；地磷醯胺(def ο famine)；地美可辛 (demecolcine)；地口丫酉昆(diaziquone) ；elfornithine ；依禾lJSt 安(elliptinium acetate)； 依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥脲(hydroxyurea)；香菇多糖(Ientinan)；氯尼達明 (Ionidainine)；美登木素生物鹼類(maytansinoids)，諸如美登素(maytansine)和安絲菌素(ansamitocin)；米託月瓜月宗(mitoguazone)；米託惠酉昆(mitoxantrone)；莫喊達酉享 (mopidamol) ；二胺硝口丫唆(nitracrine)；噴司他丁 (pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)； 吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(Iosoxantrone) ；2-乙基醯胼(ethylhydrazide)；丙卡巴胼(procarbazine) ；PSK 多糖複合物(JHS Natural Products, Eugene, OR)；雷佐生(razoxane)；根黴素(rhizoxin)；西索菲蘭(sizofiran)；螺方寵錯(spirogermanium)； 細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone) ；2，2，，2」 -三氯三乙胺； 單端孢菌素類(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、疣孢菌素(verrucarirOA、杆孢菌素 (roridin)A 和蛇行菌素(anguidin))；烏拉坦(urethan)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露酉享氣芥(mannomustine) ；二漠甘露酉享(mitobronitol) ；二漠衛矛酉享(mitolactol)；喊泊漠 (pipobroman) ；gacytosine ；HHlfiif (arabinoside) ( 「Ara-C") ；(thiotepa)； 類紫杉醇(taxoid)，例如帕利他塞(paclitaxel) (TAXOL )、清蛋白改造的納米顆粒劑型帕利他塞(ABRAXANE )和多西他塞(doxetaxel) (TAXOTERE )；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；
256- ψι - Bf Πφ (thioguanine) 5 ^!^ (mercaptopurine)；甲 Mift^ (methotrexate)； 鉬劑，諸如順鉬(cisplatin)、奧沙利鉬(oxaliplatin)和卡鉬(carboplatin)；長春藥類(vincas)(其阻止微管蛋白聚合形成微管)，包括長春鹼(vinblastine) (VELBAN )、 長春新鹼(vincristine) (ONCOVIN )、長春地辛(vindesine) (ELDISINE )、FILDESIN )、 和長春瑞濱(vinorelbine) (NAVELBINE ))；依託泊苷(etoposide) (VP-16)；異環磷醯胺 (ifosfamide)；米酉昆(mitoxantrone)；亞口十酸(Ieucovovin)；能滅瘤(novantrone)； 依達曲沙(edatrexate)；道諾黴素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；伊本膦酸鹽(ibandronate)；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000; 二氟甲基鳥氨酸(DMFO)；類視黃酸 (retinoids)，諸如視黃酸(retinoic acid)，包括貝沙羅汀(bexarotene) (TARGRETIN )； 二膦酸鹽類(bisphosphonates)，諸如氯膦酸鹽(clodronate)(例如 B0NEF0S 或 0STAC )、依替膦酸鈉(etidronate) (DIDR0CAL )、NE-58095、唑來膦酸/唑來膦酸鹽 (zoledronic acid/zoledronate) (Ζ0ΜΕΤΑ )、阿倫膦酸鹽(alendronate) (F0SAMAJX )、中白米膦酸鹽(pamidronate) (AREDIA )、替魯膦酸鹽(tiludronate) (SKELID )或利塞膦酸鹽 (risedronate) (ACT0NEL )；曲沙他濱(troxacitabine) (1，3-二氧戊環核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，特別是抑制牽涉異常(abherant)細胞增殖的信號傳導途徑中的基因表達的反義寡核苷酸，諸如例如I3KC-α、Raf、H-RaS和表皮生長因子受體(EGF-R)；疫苗，諸如THERAT0PE 疫苗和基因療法疫苗，例如ALL0VECTIN 疫苗、LEUVECTIN 疫苗和VAXID 疫苗；拓撲異構酶1抑制劑(例如LURT0TECAN ) ；rmRH (例如ABARELIX ) ；BAY439006 (索拉非尼(sorafenib) ；Bayer) ；SU-11248 (Pfizer)；哌立福辛(perifosine)、C0X-2 抑制劑 (例如塞來考昔(celecoxib)或依託昔布(etoricoxib))、蛋白體抑制劑(例如PS341)；保特佐米(bortezomib) (VELCADE ) ；CCI-779 ；替吡法尼(tipifarnib) (Rl 1577) ；orafenib、 ABT510 ;Bcl-2 抑制劑諸如奧利默森鈉(oblimersen sodium) (GENASENSE ) ；pixantrone ； EGFR抑制劑(見下文定義)；酪氨酸激酶抑制劑(見下文定義)；及任何上述物質的藥學可接受鹽、酸或衍生物；以及兩種或更多種上述物質的組合，諸如CHOP (環磷醯胺、多柔比星、 長春新鹼和潑尼松龍聯合療法的縮寫)和F0LF0X (奧沙利鉬(EL0XATIN )聯合5-FU和亞葉酸的治療方案的縮寫)。 該定義還包括作用為調節或抑制激素對腫瘤作用的抗激素劑，諸如具有混合的激動劑/拮抗劑概況的抗雌激素，包括他莫昔芬(tamoxifen) (NOLVADEX )、4_羥基他莫昔芬、 託瑞米芬(toremifene) (FAREST0N )、艾多昔芬(idoxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、 雷洛昔芬(raloxifene) (EVTSTA )、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、和選擇性雌激素受體調節劑類(SERM)諸如SERM3 ；沒有激動劑特性的純抗雌激素，諸如氟維司群(fulvestrant) (FASL0DEX )、和EM800 (此類藥劑可以阻斷雌激素受體(ER) 二聚化、抑制DNA結合、提高ER周轉、和/或阻抑ER水平)；芳香酶抑制劑，包括類固醇芳香酶抑制劑諸如福美坦(formestane)和依西美坦(exemestane) (AR0MASIN )、和非類固醇芳香酶抑制劑諸如阿那曲唑(anastrazole) (ARIMIDEX )、來曲唑(Ietrozole) (FEMARA )和氨魯米特(aminoglutethimide)、和其它芳香酶抑制劑，包括伏羅唑(vorozole) (RIVISOR ), 醋酸甲地孕酮(megestrol acetate) (MEGASE )、法倔唑(fadrozole)、咪唑；促黃體生成激素釋放激素激動劑，包括醋酸亮丙瑞林(leuprolide) (LUPR0N 和ELIGARD )、戈舍瑞林(goserelin)、布舍瑞林(buserelin)、和曲普瑞林(triptorelin)；性類固醇，包括妊娠素(progestines)諸如醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)和醋酸甲羥孕酮 (medroxyprogesterone acetate)、雌激素諸如己烯雌酚(diethylstilbestrol)禾口倍美力 (premarin)、和雄激素/類視黃醇諸如氟甲睪酮、全反視黃酸(transretionic acid)和芬維A胺(fenretinide)；奧那司酮(onapristone)；抗孕酮；雌激素受體下調劑(ERD)；抗雄激素諸如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)和比卡米特(bicalutamide)；睪內酯(testolactone)；及任何上述物質的藥學可接受鹽、酸或衍生物；以及兩種或更多種上述物質的組合。如本文中所使用的，術語「EGFR靶向藥物」指結合EGFR並任選地抑制EGFR活化的治療劑。此類藥劑的例子包括結合EGFR的抗體和小分子。結合EGFR的抗體的例子包括單抗 579(ATCC CRL HB 8506)、單抗 455 (ATCC CRL HB8507)、單抗 225 (ATCC CRL 8508)、單抗 528 (ATCC CRL 8509)(見美國專利No. 4，943，533，Mendelsohn等)及其變體，諸如嵌合化 225(C225 或西妥昔單抗(Cetuximab) ；ERBITUX )和重構人 225 (H225)(見 WO 96/40210， Imclone Systems he.)；結合II型突變體EGFR的抗體(美國專利No. 5，212，290)；結合 EGFR的人源化的和嵌合的抗體，如美國專利No. 5，891，996中所描述的；和結合EGFR的人抗體，諸如ABX-EGF (見W098/50433，Abgenix)。抗EGFR抗體可以與細胞毒劑綴合，如此生成免疫綴合物(見例如EP-A-659439，Merck Patent GmbH)。結合EGFR的小分子的例子包括 ZD1839 或吉非替尼(Gefitinib) (IRESSA ；Astra Zeneca)、CP_;358774 或鹽酸厄洛替尼 (Erlotinib HCl)(TARCEVA Genentech/Roche/OSI)和 AG1478，AG1571(SU 5271 ；Sugen)。「酪氨酸激酶抑制劑」指以某種程度抑制酪氨酸激酶諸如HER受體的酪氨酸激酶活性的分子。此類抑制劑的例子包括上一段中記錄的EGFR靶向藥物及小分子HER2 酪氨酸激酶抑制劑諸如可獲自iTakeda的TAKl 65、優先結合EGFR但抑制HER2和EGFR 二者過表達細胞的雙重HER抑制劑諸如EKB-569 (可獲自Wyeth)、GW572016 (可獲自 Glaxo)，一種口服HER2和EGFR酪氨酸激酶抑制劑、和PKI_166(可獲自Novartis)；泛 HER(pan-HER)抑制劑諸如卡奈替尼(canertinib) (CI-1033 ；Pharmacia) ；Raf-I 抑制劑，諸如可獲自ISIS Pharmaceuticals的、抑制Raf-I信號傳導的反義劑ISIS-5132 ； 非HER靶向TK抑制劑，諸如可獲自Novartis的甲磺酸伊馬替尼(Imatinib mesylate) (Gleevec ) ；MAPK胞外調節激酶I抑制劑CI_1040(可獲自Pharmacia)；喹唑啉類，諸如PD 153035,4-(3-氯苯胺基)喹唑啉；吡啶並嘧啶類；嘧啶並嘧啶類；吡咯並嘧啶類， 諸如CGP 59326、CGP 60261和CGP 62706 ；吡唑並嘧啶類，4-(苯氨基)-7H-吡咯[2， 3-d]嘧啶；薑黃素(二阿魏醯甲烷，4，5_雙(4-氟苯胺基)-酞亞胺)；含硝基噻吩模土夬的 tyrphostines ；PD-0183805 (Warner-Larnber)；反義分子(例如那些結合 HER 編碼核酸的反義分子)；喹喔啉類(美國專利Νο·5，804，396) ； tryphostins (美國專利 No. 5，804，396) ；ZD6474 (Astra Zeneca) ；PTK-787 (Novartis/Schering AG)；泛 HER 抑制劑，諸如 CI-1033(Pfizer) ；Affinitac (ISIS 3521 ；Isis/Lilly) ；PKI 166(Novartis)； GW2016 (Glaxo SmithKline) ；CI-1033 (Pfizer) ；EKB-569 (Wyeth)；司馬沙尼(Semaxinib) (Sugen) ；ZD6474(AstraZeneca) ；PTK-787(Novartis/Schering AG) ；INC-ICll(Imclone)； 或任何如下專利出版物中所記載的美國專利No. 5，804，396 ；W099/09016 (American Cyanamid) ；W098/43960 (American Cyanamid) ；W097/38983 (Warner Lambert)； W099/06378(Warner Lambert) ；W099/06396(Warner Lambert) ；W096/30347(Pfizer,Inc)；W096/33978(Zeneca) ；W096/3397 (Zeneca)；及 W096/33980(Zeneca)。「抗血管生成劑」指以某種程度阻斷或幹擾血管形成的化合物。例如，抗血管生成因子可以是結合牽涉促進血管發生的生長因子或生長因子受體的小分子或抗體。本文中優選的抗血管生成因子是結合血管內皮生長因子(VEGF)的抗體，諸如貝伐單抗(AVASTIN )。術語「細胞因子」指由一種細胞群體釋放的作為細胞間介導物對另一細胞起作用的蛋白質的通稱。此類細胞因子的例子是淋巴因子、單核因子、和傳統的多肽激素。細胞因子中包括生長激素諸如人生長激素、N-甲硫氨醯人生長激素、和牛生長激素、甲狀旁腺素、 甲狀腺素、胰島素、胰島素原、鬆弛素；鬆弛素原、糖蛋白激素諸如促卵泡激素(FSH)、促甲狀腺激素(TSH)、和黃體生成素(LH)、肝生長因子；成纖維細胞生長因子、促乳素、胎盤催乳激素、腫瘤壞死因子α和β、Mullerian抑制物質、小鼠促性腺激素相關肽、抑制素；激活蛋白、血管內皮生長因子、整聯蛋白、血小板生成素(TPO)、神經生長因子諸如NGF-β、血小板生長因子；轉化生長因子(TGF)諸如TGF-α和TGF-β、胰島素樣生長因子-I和-II、紅細胞生成素(EPO)、骨誘導因子；幹擾素諸如幹擾素-α、-β和-Y、集落刺激因子(CSF)諸如巨噬細胞-CSF(M-CSF)、粒細胞-巨噬細胞-CSF(GM-CSF)、和粒細胞-CSF(G-CSF)、白介素(IL)諸如 IL-1, IL-I α，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-7，IL-8，IL-9，IL-10，IL-11， IL-12，腫瘤壞死因子諸如TNF-α或TNF-β，及其它多肽因子，包括LIF和kit配體(KL)。 如本文中所使用的，術語細胞因子包括來自天然來源或來自重組細胞培養物的蛋白質和天然序列細胞因子的生物學活性等同物。術語「有效量」指提供期望效果的量。在配製劑成分諸如依照本發明的透明質酸酶酶的情況中，有效量是以如下方式提高共施用的抗HER2抗體的分散和吸收，使得抗HER2 抗體能以治療有效方式起作用必需的量，如上文所概述的。在藥用藥物物質的情況中，它是活性成分有效治療患者中的疾病的量。在疾病是癌症的情況中，藥物的有效量可以降低癌細胞的數目；降低腫瘤大小；抑制(即以某種程度減緩且優選地停止)癌細胞浸潤入周圍器官中；抑制(即以某種程度減緩且優選地停止)腫瘤轉移；以某種程度抑制腫瘤生長；和 /或以某種程度減輕一種或多種與癌症有關的症狀。就藥物可以阻止生長和/或殺死存在的癌細胞的程度而言，它可以是細胞抑制的和/或細胞毒性的。有效量可以延長無進展存活，產生客觀響應(包括部分響應I3R或完全響應CR)，增加總體存活時間，和/或改善一種或多種癌症症狀。依照本發明配製的抗體優選是基本上純的，且期望地基本上同質的(即沒有汙染性蛋白質等，其中認為依照本發明的配製劑中的透明質酸酶酶不是依照本發明的抗HER2 單克隆抗體的汙染性蛋白質)。「基本上純的」抗體意指包含至少約90% (按重量計)，優選地至少約95% (按重量計)的抗體(基於組合物的總重量)的組合物。「基本上同質的」 抗體意指包含至少約99% (按重量計)的抗體(基於組合物的總重量)的組合物。本發明通過參照以下實施例會得到更完整的理解。然而，它們不應解釋為限制本發明的範圍。通過提及而將所有文獻和專利引用收入本文。附圖簡述通過附圖進一步例示實施例，附圖顯示以下實驗結果圖1 就通過大小排阻-HPLC檢出的低分子量(LMW)種類而言配製劑A至F (見下文表1)在8周後的穩定性。如此圖中所顯示的，在於30°C貯存後，PS20配製劑A、C和E比PS80配製劑B、D和F顯示略好的穩定性。圖2 就通過大小排阻-HPLC檢出的高分子量(HMW)種類而言配製劑A至F (見下文表1)在8周後的穩定性。如此圖中所顯示的，含有海藻糖而沒有添加氯化鈉的配製劑A 和B在8周貯存時間後顯示較小的HMW增加。圖3 就濁度而言在8周後的穩定性。如此圖中所顯示的，含有海藻糖的配製劑A 和B顯示低濁度；而含有NaCl的配製劑C至F顯示高得多的濁度。含有海藻糖及NaCl的配製劑E和F顯示中間的濁度。在貯存8周後沒有觀察到顯著升高。圖4 液體配製劑A至F(見下文表1)的粘度，如通過於周圍溫度使用板-錐 (plate-cone)粘度測定法所測量的。所有配製劑在容許皮下注射的低粘度範圍中。
實施例使用如下文所概述的通用製備和分析方法和測定法，基於如下文所提供的實驗結果開發依照本發明的供皮下施用的抗HER2配製劑。A)製備配製劑的組分通過一般已知用於生成重組蛋白的技術來製造曲妥單抗。自母細胞庫將如在 EP-B-590058中所描述的那樣製備的經遺傳工程改造的中國倉鼠卵巢細胞(CHO)系在細胞培養物中擴充。自細胞培養物流體收穫曲妥單抗單克隆抗體，並使用固定化的蛋白A親和層析、陽離子交換層析(例如SP-S印harose FF)、除去病毒汙染的過濾步驟(例如PVDF膜 (由Milipore以名稱Viresolve濾器銷售))，接著進行陰離子交換層析(例如Q-kpharose FF)和超濾/滲濾步驟來純化。為了製備依照這些實施例的配製劑，在20mM組氨酸緩衝液 (pH約6. 0)中以約100mg/ml的濃度提供曲妥單抗。通過一般已知用於生成重組蛋白的技術製造rHuPH20。該方法以自工作細胞庫 (WCB)或母細胞庫(MCB)融化細胞開始，並經由在一系列轉瓶中細胞培養來擴充，接著在生物反應器中擴充。在完成生產階段後，通過過濾使細胞培養物液體澄清，然後用溶劑/去汙劑處理以使病毒滅活。然後，通過一系列柱層析工藝來純化蛋白質以除去工藝和產品相關雜質。實施病毒過濾步驟，然後將過濾後的散劑濃縮，配製入最終的緩衝液20mM L-組氨酸/HCl 緩衝液，pH 6. 5、130mM NaCl,0. 05% (w/v)聚山梨酯 80 中的 10mg/mL rHuPH20。將 rHuPH20散劑在_70°C之下貯存。依照本發明的配製劑的其它賦形劑在實踐中廣泛使用，並且是本領域技術人員已知的。因此，不需要在這裡詳細解釋它們。如下開發依照本發明的供皮下施用的液體藥物產品配製劑。實施例1 液體配製劑的製備為了製備液體配製劑，將曲妥單抗針對含有預期的緩衝液組成的滲濾緩衝液進行緩衝液交換，並且在需要時，通過滲濾濃縮成約150mg/ml的抗體濃度。完成滲濾操作後，將賦形劑(例如海藻糖、rHuPH20)以儲備溶液添加至抗體溶液。然後，以50至200倍儲備溶液添加表面活性劑。最後，用緩衝液將蛋白質濃度調節至約110mg/ml、120mg/ml或130mg/ ml的最終曲妥單抗濃度，如下文進一步的特定配製劑中規定的。將所有配製劑無菌過濾通過0. 22 μ m低蛋白質結合濾器，並在無菌條件下填充入無菌6ml玻璃管形瓶中，用經ETFE(乙烯和四氟乙烯的共聚物)包被的橡膠塞和Alucrimp帽密封。填充體積是約3. 0ml。將這些配製劑在不同氣候條件(5°C、25°C和30°C)貯存不同時間間隔，並通過搖動(於5°C和25°C以ZOOmirr1的搖動頻率持續1周)和冷凍-融化壓力法來施壓。在應用壓力測試之前和之後通過下列分析方法來分析樣品1) UV分光光度法；2)大小排阻層析(SEC)；3)通過離子交換層析(IEC)；4)通過溶液的濁度；幻在可見顆粒方面；及6)在 rHuPH20 活性方面。在Perkin Elmer λ 35UV分光光度計上以240nm至400nm的波長範圍實施用於測定蛋白質含量的UV分光術。用相應的配製劑緩衝液將純的蛋白質樣品稀釋至約0. 5mg/ml。 依照等式1計算蛋白質濃度。
^(280)-^(320)χ 稀釋因於等式1:<cmyJ)xd
蛋白質含量=、1針對320nm的光散射校正^Onm的UV光吸收，並乘以稀釋因子(其自純樣品和稀釋緩衝液的加權質量和密度確定)。用分子除以比色皿的路徑長度d和消光係數ε的乘積。使用大小排阻層析(SEC)來檢測配製劑中的可溶性高分子量種類(聚集體)和低分子量水解產物(LMW)。在具有Waters W2487雙吸光度檢測儀並裝備有2個行內TosoHaas TSK 凝膠 SuperSW3000，4，6x300mm 柱的 Waters Alliance ^95HPLC 儀上實施該方法。使用 50mM磷酸鈉、420mM高氯酸鈉，pH 7. 0作為流動相通過等度洗脫概況來分開完整的單體、聚集體和水解產物，並於^Onm的波長檢測。實施離子交換層析(IEC)以檢測配製劑中改變曲妥單抗的淨電荷的化學降解產物。出於此目的，用羧肽酶B消化曲妥單抗。該方法使用裝備有UV檢測儀(檢測波長214nm) 和Dionex ProPac WCX-10分析用陽離子交換柱Gx250mm)的合適的HPLC儀。分別使用 H2O中的IOmM磷酸鈉緩衝液pH 7. 5和IOmM磷酸鈉緩衝液pH 7. 5和IOOmM NaCl作為流動相A和B，流動速率為0. 8ml/分鐘。為了測定濁度，於室溫使用HACH 2100AN濁度計以FTU(濁度單位)測量乳光。通過使用kidenader V90-T目視檢查儀對樣品分析可見顆粒。使用rHuPH20作為透明質酸酶的體外酶測定法作為活性測定法。該測定法基於在乙醯透明質酸(透明質酸鈉)結合陽離子沉澱劑時形成不溶性沉澱物。通過將rHuPH20與乙醯透明質酸底物一起溫育，然後用酸化的血清清蛋白(馬血清)沉澱未消化的乙醯透明質酸來測量酶活性。以640nm的波長測量濁度，並且源自對乙醯透明質酸底物的酶活性的濁度降低是酶活性的測量。使用用rHuPH20測定參照標準品的稀釋物產生的標準曲線運行該規程，並自曲線閱讀樣品活性。實施進一步的實驗，包括下列變化-約5.0至約6. 0的pH變化-約110mg/ml至約130mg/ml的蛋白質含量變化
-約0.02 %至約0. 06 %的表面活性劑變化-約5mM至約15mM的穩定劑(甲硫氨酸)變化下文表1中提供了液體抗HER-2藥物產品配製劑(配製劑A至X)的組成和穩定性測試的結果，其中使用下列縮寫ffp :=沒有顆粒；effp :=基本上沒有顆粒；wafp :=具有少許顆粒F/T :=冷凍/融化；skg :=搖動；nd :=未測定下文規定的配製劑顯示了，有可能提供具有高濃度的兩種不同蛋白質的液體配製齊U。可以比凍幹配製劑以更大的便利且更低的成本製備此類配製劑。此外，此類配製劑更易於處理，因為不需要溶解凍幹的終產物(重建)(準備好使用)。已經發現了，表1、3和4 中規定的配製劑也適合於配製缺乏透明質酸酶酶的藥學活性抗HER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物配製劑。因此，在一方面，本發明還涉及具有規定的成分，但是缺乏透明質酸酶酶的配製劑。
權利要求
1.藥學活性抗HER2抗體的高度濃縮的穩定的藥物配製劑，其包含a.約50 至;350mg/ml 抗 HER2 抗體；b.約1至IOOmM緩衝劑，其提供pH5. 5 士 2. 0 ；c.約1至500mM穩定劑或兩種或更多種穩定劑的混合物；d.約0.01至0. 08%非離子型表面活性劑；和e.有效量的至少一種透明質酸酶酶。
2.依照權利要求1的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其中所述抗HER2抗體濃度分別是 100 至 150mg/ml、120±18mg/mU々 110mg/ml、約 120mg/ml、或約 130mg/ml。
3.依照權利要求1或2的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其分別包含大於 150至約16』 000個U/ml、約2』 000個U/ml、或約12』 000個U/ml透明質酸酶酶。
4.依照權利要求1至3中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其中所述緩衝劑的濃度為1至50mM。
5.依照權利要求1至4中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其中所述緩衝劑提供PH 5. 5 士 0.6。
6.依照權利要求1至5中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其中所述緩衝劑是組氨酸緩衝液，例如20mM組氨酸/HCl。
7.依照權利要求1至6中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其中所述穩定劑是糖類，諸如例如二水合α，α-海藻糖或蔗糖。
8.依照權利要求1至7中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其中所述穩定劑的濃度分別是15至250mM或約210mM。
9.依照權利要求7或8的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其中甲硫氨酸作為第二穩定劑使用，例如濃度為5至25mM。
10.依照權利要求1至9中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其中所述非離子型表面活性劑是聚山梨酯，其選自下組聚山梨酯20、聚山梨酯80、和聚乙烯-聚丙烯共聚物。
11.依照權利要求10的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其中所述聚山梨酯的濃度分別是 0.02% (w/v),0. 04% (w/v)或 0.06% (w/v)。
12.依照權利要求1至11中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其中所述抗HER2抗體選自下組曲妥單抗、帕妥珠單抗和T-DMl或此類抗體的組合。
13.依照權利要求1至12中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其在冷凍和融化後是穩定的。
14.依照權利要求1至13中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其中所述透明質酸酶酶是rHuPH20。
15.依照權利要求1至13中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其缺乏所述透明質酸酶酶。
16.依照權利要求1至14中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其用於皮下或肌肉內施用。
17.依照權利要求1至16中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其為液體形式。
18.依照權利要求1至16中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其為凍幹形式。
19.依照權利要求1至18中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗HER2抗體配製劑，其用於治療適合於用抗HER2抗體治療的疾病或病症，諸如例如癌症或非惡性疾病。
20.一種注射裝置，其包含依照權利要求1至19中任一項的高度濃縮的穩定的藥物抗 HER2抗體配製劑。
21.依照權利要求1至19中任一項的配製劑用於製備可用於治療受試者中適合於用抗HER2抗體治療的疾病或病症，諸如例如癌症或非惡性疾病的藥物的用途，包括以有效治療所述疾病或病症的量對受試者施用本文中所描述的配製劑。
22.依照權利要求20的注射裝置或依照權利要求21的用途，其中與化療劑伴隨或序貫共施用所述配製劑。
23.一種治療受試者中適合於用抗HER2抗體治療的疾病或病症，諸如癌症或非惡性疾病的方法，包括以有效治療所述疾病或病症的量對受試者施用依照權利要求1至19中任一項的配製劑。
24.一種試劑盒，其包含裝有依照權利要求1至19中任一項的配製劑的一個或多個管形瓶和關於對患者皮下施用所述配製劑的指令。
25.依照權利要求M的試劑盒，其進一步包含用於對患者皮下施用所述配製劑的注射直ο
26.如本文中所描述的發明。
全文摘要
本發明涉及供皮下注射用的藥學活性抗HER2抗體，諸如例如曲妥單抗(HERCEPINTM)、帕妥珠單抗或T-DM1，或此類抗體分子的混合物的高度濃縮的穩定的藥物配製劑。特別地，本發明涉及在合適量的抗HER2抗體外包含作為組合配製劑或以共配製形式使用的有效量的至少一種透明質酸酶酶的配製劑。所述配製劑另外包含至少一種緩衝劑，諸如例如組氨酸緩衝液、穩定劑或兩種或更多種穩定劑的混合物(例如，糖類，諸如例如二水合α，α-海藻糖或蔗糖，和任選地作為第二穩定劑的甲硫氨酸)、非離子型表面活性劑和有效量的至少一種透明質酸酶酶。還提供了用於製備此類配製劑的方法及其用途。
文檔編號A61K9/00GK102573789SQ201080043414
公開日2012年7月11日 申請日期2010年7月28日 優先權日2009年7月31日
發明者H-C.馬勒, M.阿德勒, O.B.斯託赫, U.格勞肖普夫 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司