一種調肝補腎、化瘀祛斑的藥物組合物及其製備方法

2023-10-09 08:42:34 1

專利名稱：一種調肝補腎、化瘀祛斑的藥物組合物及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物組合物及其製備方法，特別涉及一種可以調肝補腎，化瘀祛 斑的藥物組合物及其製備方法、質量檢測方法和用途。
背景技術：
黃褐斑，從青春期到絕經期的婦女均有發生，特別是由於工作壓力，生活緊張，更 易導致發病。該病已影響到廣大婦女的心身健康，因此對該病的治療越一越引起重視。黃褐斑的病因及發病機制尚不明確。其發病因素較多，發病過程較為複雜，臨床大 多表現為黑色素過量表達及代謝障礙所導致的面部色素過度沉著。一般認為影響黑色素合 成和代謝過程的細胞內外因素均可能誘發本病，目前研究較多的包括體內氧化抗氧平衡失 調、內分泌失調、皮損區微生態失衡、微量元素異常、血液流變學性質異常、日照及遺傳。黃褐斑的治療方式主要包括藥物療法、生物療法、化學療法、物理療法等。目前仍 無特殊有效治療藥物，可根據不同病因給予分別處理，治療途徑大多是阻止黑色素細胞的 增生，抑制黑色素小體的形成和促使其分解。以對症治療為主，雖有一定的療效，但毒副作 用亦明顯，如產生外源性褐黃病，皮膚萎縮，永久性脫色造成的「點彩樣」，有些還可致腎毒 性及神經、精神症狀。局部應用氫醌(Hydroquinone)治療黃褐斑最常用，療效也較肯定，常用濃度 2% -4%。氫醌可能通過抑制酪氨酸酶活性、阻斷黑色素生成，也可能抑制DNA和RNA合成， 降解色素顆粒，破壞色素細胞結構，以達到治療效果。氫醌長時間外用可出現色素過度減退 及皮炎後色素沉著。同類的幹擾色素沉著的藥物還包括酚化合物、維甲酸、壬二酸及氫醌復 方製劑等。此外，化學剝脫術和雷射治療均有應用。目前動物實驗或臨床觀察報導對黃褐斑有效的中藥有排毒養顏膠囊等數種，近期 臨床報導逐漸增多，但缺乏客觀療效標準和對其進行深入地藥效學方面的研究，對黃褐斑 的療效驗稱滿意，所以鮮有運用。內服藥物很少，而且療效極不確切。外用塗抹劑多為保健 品和護膚品，更不能獲得滿意的效果。發揮中醫藥學對人體整體調節的優勢，研發出中藥祛 斑新藥已為臨床必需，而且可行。

發明內容
本發明目的在於公開一種調肝補腎，化瘀祛斑的藥物組合物，本發明的目的還在 於公開該藥物組合物的製備方法，本發明的目的還在於公開該藥物組合物的質量檢測方 法，本發明的目的還在於公開該藥物組合物的用途。本發明的目的是通過如下技術方案實現的本發明藥物組合物的原料藥組成為柴胡300-400重量份 丹參300-800重量份 熟地300-800重量份白芷300-400重量份 牡丹皮300-400重量份 甘草50-150重量份。本發明藥物組合物的原料藥組成優選為
柴胡333. 3重量份 丹參500重量份熟地500重量份白芷333. 3重量份 牡丹皮333. 3重量份 甘草100重量份。本發明藥物組合物的原料藥組成優選為柴胡310重量份 丹參750重量份 熟地350重量份白芷390重量份 牡丹皮310重量份 甘草130重量份。本發明藥物組合物的原料藥組成優選為柴胡390重量份 丹參350重量份 熟地750重量份白芷310重量份 牡丹皮390重量份 甘草70重量份。取上述原料藥，加入常規輔料，按照常規工藝製成臨床藥用劑型顆粒劑、丸劑、散 劑、膠囊劑、片劑、緩釋劑、口服液體製劑或凍乾粉針劑。本發明藥物組合物的製備方法包括如下步驟取原料藥，牡丹皮用10-20倍量的水蒸餾，收集牡丹皮5-15倍量的蒸餾液，於0 10°C下冷藏6-12小時，濾過，得丹皮酚結晶I，濾液加入牡丹皮重量3-8%的氯化鈉，重蒸 餾，收集牡丹皮2-4倍量的蒸餾液，於0 10°C下冷藏6-12小時，濾過，得丹皮酚結晶II， 合併丹皮酚結晶I和II，於30-50°C低溫乾燥，即得丹皮酚，備用，濾液A另器收集，藥渣與 其餘柴胡、丹參、熟地、白芷和甘草五味原料藥，加水煎煮1-3次，每次加水5-12重量倍，每 次煎煮1-3小時，濾過，合併濾液得濾液B，混合濾液A和B，濃縮至50 70°C下相對密度為 1. 10 1. 35的稠膏，乾燥，粉碎，過60目篩，得浸膏粉，備用；取上述丹皮酚研細，與佔浸膏 粉重量1-1. 5%的硬脂酸鎂混合均勻，加入上述浸膏粉中，混勻，加入常規輔料，按照常規工 藝製成臨床藥用劑型顆粒劑、丸劑、散劑、膠囊劑、片劑、緩釋劑、口服液體製劑或凍乾粉針 劑。本發明藥物組合物的製備方法優選包括如下步驟取原料藥，牡丹皮用15倍量的水蒸餾，收集牡丹皮10倍量的蒸餾液，於0 10°C 下冷藏8小時，濾過，得丹皮酚結晶I，濾液加入牡丹皮重量5%的氯化鈉，重蒸餾，收集牡丹 皮3倍量的蒸餾液，於0 10°C下冷藏8小時，濾過，得丹皮酚結晶II，合併丹皮酚結晶I和 II，於40°C低溫乾燥，即得丹皮酚，備用，濾液A另器收集，藥渣與其餘柴胡、丹參、熟地、白 芷和甘草五味原料藥，加水煎煮二次，第一次加水10重量倍，第2次加水8重量倍，每次煎 煮2小時，濾過，合併濾液得濾液B，混合濾液A和B，濃縮至60 65°C下相對密度為1. 20 1. 25的稠膏，乾燥，粉碎，過60目篩，得浸膏粉，備用；取上述丹皮酚研細，與佔浸膏粉重量 0.5%的硬脂酸鎂混合均勻，加入上述浸膏粉中，混勻，加入常規輔料，按照常規工藝製成臨 床藥用劑型顆粒劑、丸劑、散劑、膠囊劑、片劑、緩釋劑、口服液體製劑或凍乾粉針劑。本發明藥物組合物的質量檢測方法包括如下鑑別和含量測定方法中的一種或幾 種鑑別A.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/12，加水20-30體積份使溶解，濾過，濾液 置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取2-4次，每次用10-20體積份，合併正丁醇提取 液，加入等體積的氨試液，搖勻，放置使分層，分取正丁醇液，蒸乾，殘渣加甲醇0. 5-1. 5體 積份使溶解，作為供試品溶液；另取柴胡對照藥材1重量份，加甲醇10-30體積份，加熱回流20-40分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水10-30體積份，加熱回流20-40分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水10-30體 積份使溶解，加熱回流0. 5-1. 5小時，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取2-4次，每 次用10-20體積份，合併正丁醇提取液，加入等體積的氨試液，搖勻，放置使分層，分取正丁 醇液，蒸乾，殘渣加甲醇0. 5-1. 5體積份使溶解，製備對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各0. 003-0. 008體積份， 分別點於同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水= 10-15 5-10 1-3在5-15°C以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以 0. 5-1. 5 %對二甲氨基苯甲醛硫酸乙醇溶液，取0. 5-1. 5 %對二甲氨基苯甲醛硫酸溶液 lmL，用乙醇稀釋至10mL，取該溶液噴矽膠G薄層板，在60-80°C加熱至斑點顯色清晰；供試 品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；置紫外燈365nm下檢 視，顯相同黃色的螢光斑點；B.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/12，加水20-40體積份使溶解，濾過，濾液 用稀鹽酸調PH值至1-2，置分液漏鬥中，用醋酸乙酯振搖提取2-4次，每次10-30體積份，合 並醋酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯至幹，殘渣加甲醇1-3體積份使溶解，作為供試品溶液；另取丹參對照藥材0. 5重量份，加甲醇10-30體積份，超聲處理20_40分鐘，濾過， 濾液濃縮至1-3體積份，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各0. 003-0. 008體積份，分 別點於同一用0. 5-1. 5%氫氧化鈉溶液製備的矽膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋 酸-水=10-20 0.5-1.5 0.5-1.5 1-3為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外燈365nm 下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的螢光斑點；C.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/6，加乙醇10-30體積份，密塞，振搖5_15 分鐘，濾過，濾液濃縮至0. 5-1. 5體積份，作為供試品溶液；另取丹皮酚對照品，加丙酮製成每1體積份含0. 003-0. 008重量份的溶液，作為對 照品溶液；照薄層色譜法(附錄VI B試驗)，吸取上述兩種溶液各0. 008-0. 012體積份，分別 點於同一矽膠G薄層板上，以環己烷-醋酸乙酯=2-4 0.5-1. 5為展開劑，展開，取出，晾 幹，噴以鹽酸酸性3-8%三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對 照品色譜相應的位置上，顯相同的藍褐色斑點；D.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/12，加水20-30體積份使溶解，濾過，濾液 置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取2-4次，每次用10-20體積份，合併正丁醇提取 液，加入等體積的氨試液，搖勻，放置使分層，分取正丁醇液，蒸乾，殘渣加甲醇0. 5-1. 5體 積份使溶解，作為供試品溶液；另取白芷對照藥材0. 5重量份，加甲醇5-15體積份，超聲處理20_40分鐘，濾過， 濾液濃縮至1-3體積份，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各0. 003-0. 008體積份，分別 點於同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G薄層板上，以30-60°C石油醚-醋酸乙酯= 0.5-1.5 0.5-1. 5為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中， 在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；E.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/6，加水20-40體積份使溶解，濾過，濾液置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取2-4次，每次10-30體積份，合併正丁醇液，用水 10-30體積份洗滌1-3次，棄去水層，分取正丁醇液，蒸乾，殘渣加甲醇0. 5-1. 5體積份使溶 解，作為供試品溶液；另取甘草對照藥材0. 5重量份，加甲醇3-5體積份，超聲處理20-40分鐘，取上清 液作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各0. 003-0. 008體積份，分 別點於同一用0. 5-1. 5%氫氧化鈉溶液製備的矽膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋 酸-水=10-20 0.5-1.5 0.5-1.5 1-3為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以5-15%硫酸 乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，在紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對 照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；含量測定照高效液相色譜法(附錄VI D)測定A.丹參素色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；甲醇-0. 5%冰 醋酸=10-30 60-100為流動相；檢測波長為^Onm;理論板數按丹參素峰計算應不低於 2000 ；對照品溶液製備取丹參素鈉對照品，精密稱定，加甲醇製成每1體積份含 0. 00004-0. 00008重量份的溶液，即得；供試品溶液的製備取本發明藥物組合物日用製劑量的1/12，置100體積份三角 瓶中，精密加甲醇40-60體積份，超聲處理20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失 的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5-15體積份，置50體積份圓底燒瓶中，回收溶劑至幹， 殘渣加流動相溶解並轉入5-15體積份量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液0. 003-0. 008體積份和0. 005-0. 015體積份、供 試品溶液0. 005-0. 015體積份，注入液相色譜儀，測定，即得；本發明藥物組合物每日用製劑量中含丹參以丹參素(C9HltlO5)計，不得少於 19. 2mg ；B.丹皮酚色譜色條與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；甲醇-水-冰 醋酸=40-80 30-50 0. 5-1. 5為流動相；檢測波長為27nm ；理論板數按丹皮酚峰計算 應不低於2000 ；對照品溶液的製備取丹皮酚對照品，精密稱定，加甲醇製成每1體積份含 0. 000003-0. 000008重量份的溶液，即得；供試品溶液的製備取本發明藥物組合物日用製劑量的1/24，置100體積份三角 瓶中，精密加甲醇40-60體積份，超生處理20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失 的重，搖勻，濾過，精密量取續濾液0. 5-1. 5體積份，置10體積份量瓶中，加甲醇至刻度，搖 勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各0. 005-0. 015體積份，注入色 譜儀，測定，即得；本發明藥物組合物每日用製劑量中含牡丹皮以丹皮酚(C9HltlO3)計，不得少於 31. 2mg0
本發明藥物組合的的質量檢測方法優選包括如下鑑別和含量測定方法中的一種 或幾種鑑別A.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/12，加水25體積份使溶解，濾過，濾液置 分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次用15體積份，合併正丁醇提取液，加入 等體積的氨試液，搖勻，放置使分層，分取正丁醇液，蒸乾，殘渣加甲醇1體積份使溶解，作 為供試品溶液；另取柴胡對照藥材1重量份，加甲醇20體積份，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸 幹，殘渣加水20體積份，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水20體積份使溶解，加 熱回流1小時，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次用15體積份，合併正 丁醇提取液，加入等體積的氨試液，搖勻，放置使分層，分取正丁醇液，蒸乾，殘渣加甲醇1 體積份使溶解，製備對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各0. 005體積份，分別點於 同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水=13 7 2在 10°C以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以對二甲氨基苯甲醛硫酸乙醇 溶液，取0. 5-1. 5%對二甲氨基苯甲醛硫酸溶液lmL，用乙醇稀釋至10mL，取該溶液噴矽膠G 薄層板，在70°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯 相同顏色的主斑點；置紫外燈365nm下檢視，顯相同黃色的螢光斑點；B.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/12，加水30體積份使溶解，濾過，濾液用 稀鹽酸調PH值至1-2，置分液漏鬥中，用醋酸乙酯振搖提取3次，每次20體積份，合併醋酸 乙酯液，減壓回收醋酸乙酯至幹，殘渣加甲醇2體積份使溶解，作為供試品溶液；另取丹參對照藥材0. 5重量份，加甲醇20體積份，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃 縮至2體積份，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各0.005體積份，分別點 於同一用1 %氫氧化鈉溶液製備的矽膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水= 15 1 1 2為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與 對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的螢光斑點；C.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/6，加乙醇20體積份，密塞，振搖10分鐘， 濾過，濾液濃縮至1體積份，作為供試品溶液；另取丹皮酚對照品，加丙酮製成每1體積份含0. 005重量份的溶液，作為對照品溶 液；照薄層色譜法(附錄VI B試驗)，吸取上述兩種溶液各0.010體積份，分別點於同 一矽膠G薄層板上，以環己烷-醋酸乙酯=3 1為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以鹽酸酸 性5%三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位 置上，顯相同的藍褐色斑點；D.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/12，加水25體積份使溶解，濾過，濾液置 分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次用15體積份，合併正丁醇提取液，加入 等體積的氨試液，搖勻，放置使分層，分取正丁醇液，蒸乾，殘渣加甲醇1體積份使溶解，作 為供試品溶液；
另取白芷對照藥材0. 5重量份，加甲醇10體積份，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃 縮至2體積份，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各0. 005體積份，分別點於同 一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G薄層板上，以30-60°C石油醚-醋酸乙酯=1 1.1 為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜 相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；E.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/6，加水30體積份使溶解，濾過，濾液置分 液漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20體積份，合併正丁醇液，用水20體積份 洗滌2次，棄去水層，分取正丁醇液，蒸乾，殘渣加甲醇1體積份使溶解，作為供試品溶液；
另取甘草對照藥材0. 5重量份，加甲醇4體積份，超聲處理30分鐘，取上清液作為 對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各0.005體積份，分別點 於同一用1 %氫氧化鈉溶液製備的矽膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水= 15 1 1 2為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點 顯色清晰，在紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯 相同顏色的螢光斑點；含量測定照高效液相色譜法(附錄VI D)測定A.丹參素色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；甲醇-0. 5%冰 醋酸=20 80為流動相；檢測波長為^Onm;理論板數按丹參素峰計算應不低於2000;對照品溶液製備取丹參素鈉對照品，精密稱定，加甲醇製成每1體積份含 0. 00006重量份的溶液，即得；供試品溶液的製備取本發明藥物組合物日用製劑量的1/12，置100體積份三角 瓶中，精密加甲醇50體積份，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量， 搖勻，濾過，精密量取續濾液10體積份，置50體積份圓底燒瓶中，回收溶劑至幹，殘渣加流 動相溶解並轉入10體積份量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液0. 005體積份和0. 010體積份、供試品溶液 0. 010體積份，注入液相色譜儀，測定，即得；本發明藥物組合物每日用製劑量中含丹參以丹參素(C9HltlO5)計，不得少於 19. 2mg ；B.丹皮酚色譜色條與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；甲醇-水-冰 醋酸=60 40 1為流動相；檢測波長為27nm;理論板數按丹皮酚峰計算應不低於2000 ；對照品溶液的製備取丹皮酚對照品，精密稱定，加甲醇製成每1體積份含 0. 000005重量份的溶液，即得；供試品溶液的製備取本發明藥物組合物日用製劑量的1/24，置100體積份三角 瓶中，精密加甲醇50體積份，超生處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重，搖 勻，濾過，精密量取續濾液1體積份，置10體積份量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各0. 010體積份，注入色譜儀，測定，即得；本發明藥物組合物每日用製劑量中含牡丹皮以丹皮酚(C9HltlO3)計，不得少於 31. 2mg。本發明所述的重量份與體積份的比例為克/毫升。本發明藥物組合物的質量檢測方法可以應用於組合物的各種劑型，如片劑、顆粒 劑、丸劑、膠囊劑、滴丸、軟膠囊劑、緩釋劑、口服液體製劑或凍乾粉針劑等臨床可接受的劑 型，由於不同劑型的製劑每日用製劑量中所含的相當生藥量是相同的，因此各個劑型在進 行含量測定時，所選用樣品量可統一折算為每日用製劑量，本含量測定方法所述的每日用 製劑量是指每日使用的總片數、總粒數或總丸數等。


圖1 本發明藥物組合物體外抑制B-16增殖的影響；圖2 本發明藥物組合物對酪氨酸酶活性影響；A、本發明藥物組合物；B、排毒養顏 膠囊圖3 本發明藥物組合物對黑色素生成的影響；A、本發明藥物組合物；B、排毒養顏
膠囊圖4 激素紊亂致小鼠黃褐斑模型皮膚黑色素免疫組織化學染色，SP法，A 正常對 照組，偶見的皮膚表面和附件上皮細胞胞漿中呈現棕色反應B 模型對照組，易見散在的皮膚表面和附件上皮細胞胞漿中呈現棕色反應C 本發明藥物組合物組，少見的皮膚表面和附件上皮細胞胞漿中呈現棕色反應；圖5 丹參素含量測定-標準曲線的HPLC色譜圖；圖6 丹參素含量測定-對照品、供試品和陰性對照品的HPLC色譜圖；圖7 丹參素含量測定-樣品穩定性考察的HPLC色譜圖；圖8 丹參素含量測定-方法精密度考察的HPLC色譜圖；圖9 丹參素含量測定-方法重現性考察的HPLC色譜圖；圖10丹參素含量測定-樣品測定的HPLC色譜圖；圖11丹皮酚含量測定-標準曲線的HPLC色譜圖；圖12丹皮酚含量測定-對照品、供試品和陰性對照品的HPLC色譜圖；圖13丹皮酚含量測定-樣品穩定性考察的HPLC色譜圖；圖14丹皮酚含量測定-方法精密度考察的HPLC色譜圖；圖15丹皮酚含量測定-方法重現性考察的HPLC色譜圖；圖16丹皮酚含量測定-樣品測定的HPLC色譜圖。本發明藥物組合物屬調肝補腎，化瘀祛斑方藥，主治肝鬱腎虛，氣血淤滯所致婦女
黃褐斑，具有養榮祛斑的作用。症見面部暗斑，常可伴有頭暈神疲，胸悶多煩，腰膝酸軟，月 經不調等，脈多沉弦，舌黯或有瘀斑。藥效實驗表明，本發明藥物組合物可以顯著降低雌孕 激素所致小鼠皮膚免疫組織化學染色黑色素陽性目標的平均面積、目標與統計面積之比 (面密度)，對小鼠皮膚黑色素的形成具有抑制作用；可以顯著減輕紫外線致小鼠皮膚的紅 斑、水腫、明顯減輕紫外線照射小鼠皮膚表面的變性、壞死，以及炎細胞浸潤、充血、水腫；對 粉刺丙酸桿菌、藤黃微球菌均有明顯抑制和殺滅作用；對紫外線照射致皮膚損傷模型小鼠以及四氧嘧啶致小鼠高過氧化脂質動物模型的血清和肝臟過氧化脂質形成均有一定抑制 作用；本發明藥物組合物還可以抑制和殺滅粉刺丙酸桿菌、藤黃微球菌，對腎上腺素和冰水 致大鼠血瘀模型血液流變性有一定改善作用。從本發明藥物組合物的急性毒性所試劑量以 及絕對值藥後毒性表現判斷，本發明藥物組合物屬無明顯毒性藥物。下述實驗例和實施例用於進一步說明但不限於本發明。實驗例1提取工藝技術條件的研究1、丹皮酚提取條件的研究(1)蒸餾液體積對丹皮酚提取率的影響收集蒸餾液的體積對丹皮酚提取率(轉移率)影響很大，應予篩選。取牡丹皮(丹 皮酚含量為2. 34% )50g，加水1000ml，加熱蒸餾，收集蒸餾液，每份50ml，置IOOml量瓶中， 加95 %乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取適量，置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。照分 光光度法(附錄VA)，在274nm的波長處側定吸收度，按丹皮酚的吸收係數(Elem1%)為862 計算，詳見中國藥典2000版一部137頁牡丹皮項下的含量測定方法，即得每份蒸餾液中丹 皮酚的濃度和總量，結果見表1。表1蒸餾液體積對丹皮酚提取效率的影響
權利要求
1.一種調肝補腎，化瘀祛斑的藥物組合物，其特徵在於該藥物組合物的原料藥組成柴胡300-400重量份 丹參300-800重量份 熟地300-800重量份 白芷300-400重量份 牡丹皮300-400重量份 甘草50-150重量份。
2.如權利要求1所述的藥物組合物，其特徵在於該藥物組合物的原料藥組成為 柴胡333. 3重量份 丹參500重量份 熟地500重量份白芷333. 3重量份 牡丹皮333. 3重量份甘草100重量份； 或柴胡310重量份 白芷390重量份 或柴胡390重量份 白芷310重量份丹參750重量份 熟地350重量份 牡丹皮310重量份甘草130重量份；丹參350重量份 熟地750重量份 牡丹皮390重量份 甘草70重量份。
3.如權利要求1-2任一所述的藥物組合物，其特徵在於取上述原料藥，加入常規輔料， 按照常規工藝製成臨床藥用劑型顆粒劑、丸劑、散劑、膠囊劑、片劑、緩釋劑、口服液體製劑 或凍乾粉針劑。
4.如權利要求1-2任一所述的藥物組合物的製備方法，其特徵在於該方法包括如下步驟取原料藥，牡丹皮用10-20倍量的水蒸餾，收集牡丹皮5-15倍量的蒸餾液，於0 10°C 下冷藏6-12小時，濾過，得丹皮酚結晶I，濾液加入牡丹皮重量3-8%的氯化鈉，重蒸餾，收 集牡丹皮2-4倍量的蒸餾液，於0 10°C下冷藏6-12小時，濾過，得濾液A和丹皮酚結晶 II，合併丹皮酚結晶I和II，於30-50°C低溫乾燥，即得丹皮酚，備用，濾液A另器收集，藥渣 與其餘柴胡、丹參、熟地、白芷和甘草五味原料藥，加水煎煮1-3次，每次加水5-12重量倍， 每次煎煮1-3小時，濾過，合併濾液得濾液B，混合濾液A和B，濃縮至50 70°C下相對密度 為1. 10 1. 35的稠膏，乾燥，粉碎，過60目篩，得浸膏粉，備用；取上述丹皮酚研細，與佔浸 膏粉重量1-1. 5%的硬脂酸鎂混合均勻，加入上述浸膏粉中，混勻，加入常規輔料，按照常規 工藝製成臨床藥用劑型顆粒劑、丸劑、散劑、膠囊劑、片劑、緩釋劑、口服液體製劑或凍乾粉 針劑。
5.如權利要求4所述的藥物組合物的製備方法，其特徵在於該方法包括如下步驟取原料藥，牡丹皮用15倍量的水蒸餾，收集牡丹皮10倍量的蒸餾液，於0 10°C下冷藏8小時，濾過，得丹皮酚結晶I，濾液加入牡丹皮重量5%的氯化鈉，重蒸餾，收集牡丹皮3 倍量的蒸餾液，於0 10°C下冷藏8小時，濾過，得濾液A和丹皮酚結晶II，合併丹皮酚結 晶I和II，於40°C低溫乾燥，即得丹皮酚，備用，濾液A另器收集，藥渣與其餘柴胡、丹參、熟 地、白芷和甘草五味原料藥，加水煎煮二次，第一次加水10重量倍，第2次加水8重量倍， 每次煎煮2小時，濾過，合併濾液得濾液B，混合濾液A和B，濃縮至60 65 °C下相對密度 為1. 20 1. 25的稠膏，乾燥，粉碎，過60目篩，得浸膏粉，備用；取上述丹皮酚研細，與佔浸 膏粉重量0. 5 %的硬脂酸鎂混合均勻，加入上述浸膏粉中，混勻，加入常規輔料，按照常規工 藝製成臨床藥用劑型顆粒劑、丸劑、散劑、膠囊劑、片劑、緩釋劑、口服液體製劑或凍乾粉針 劑。
6.如權利要求1-2任一所述的藥物組合物的質量檢測方法，其特徵在於該方法包括如 下鑑別和含量測定方法中的一種或幾種鑑別A.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/12，加水20-30體積份使溶解，濾過，濾液置分 液漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取2-4次，每次用10-20體積份，合併正丁醇提取液，加 入等體積的氨試液，搖勻，放置使分層，分取正丁醇液，蒸乾，殘渣加甲醇0. 5-1. 5體積份使 溶解，作為供試品溶液；另取柴胡對照藥材1重量份，加甲醇10-30體積份，加熱回流20-40分鐘，濾過，濾液蒸 幹，殘渣加水10-30體積份，加熱回流20-40分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水10-30體積份 使溶解，加熱回流0. 5-1. 5小時，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取2-4次，每次用 10-20體積份，合併正丁醇提取液，加入等體積的氨試液，搖勻，放置使分層，分取正丁醇液， 蒸乾，殘渣加甲醇0. 5-1. 5體積份使溶解，製備對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各0.003-0. 008體積份， 分別點於同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水= 10-15 5-10 1-3在5-15°C以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以 0. 5-1. 5 %對二甲氨基苯甲醛硫酸乙醇溶液，取0. 5-1. 5 %對二甲氨基苯甲醛硫酸溶液 lmL，用乙醇稀釋至10mL，取該溶液噴矽膠G薄層板，在60-80°C加熱至斑點顯色清晰；供試 品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；置紫外燈365nm下檢 視，顯相同黃色的螢光斑點；B.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/12，加水20-40體積份使溶解，濾過，濾液用稀 鹽酸調PH值至1-2，置分液漏鬥中，用醋酸乙酯振搖提取2-4次，每次10-30體積份，合併醋 酸乙酯液，減壓回收醋酸乙酯至幹，殘渣加甲醇1-3體積份使溶解，作為供試品溶液；另取丹參對照藥材0. 5重量份，加甲醇10-30體積份，超聲處理20-40分鐘，濾過，濾液 濃縮至1-3體積份，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各0. 003-0. 008體積份，分別點於 同一用0. 5-1. 5%氫氧化鈉溶液製備的矽膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水= 10-20 0.5-1.5 0.5-1.5 1-3為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外燈365nm下檢視； 供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的螢光斑點；C.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/6，加乙醇10-30體積份，密塞，振搖5-15分 鍾，濾過，濾液濃縮至0. 5-1. 5體積份，作為供試品溶液；另取丹皮酚對照品，加丙酮製成每1體積份含0. 003-0. 008重量份的溶液，作為對照品 溶液；照薄層色譜法(附錄VI B試驗)，吸取上述兩種溶液各0.008-0. 012體積份，分別點於 同一矽膠G薄層板上，以環己烷-醋酸乙酯=2-4 0.5-1. 5為展開劑，展開，取出，晾乾， 噴以鹽酸酸性3-8%三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品 色譜相應的位置上，顯相同的藍褐色斑點；D.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/12，加水20-30體積份使溶解，濾過，濾液置分 液漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取2-4次，每次用10-20體積份，合併正丁醇提取液，加 入等體積的氨試液，搖勻，放置使分層，分取正丁醇液，蒸乾，殘渣加甲醇0. 5-1. 5體積份使溶解，作為供試品溶液；另取白芷對照藥材0. 5重量份，加甲醇5-15體積份，超聲處理20-40分鐘，濾過，濾液 濃縮至1-3體積份，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各0. 003-0. 008體積份，分別點 於同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G薄層板上，以30-60°C石油醚-醋酸乙酯= 0.5-1.5 0.5-1. 5為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中， 在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；E.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/6，加水20-40體積份使溶解，濾過，濾液置 分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取2-4次，每次10-30體積份，合併正丁醇液，用水 10-30體積份洗滌1-3次，棄去水層，分取正丁醇液，蒸乾，殘渣加甲醇0. 5-1. 5體積份使溶 解，作為供試品溶液；另取甘草對照藥材0. 5重量份，加甲醇3-5體積份，超聲處理20-40分鐘，取上清液作 為對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各0. 003-0. 008體積份，分別點於 同一用0. 5-1. 5%氫氧化鈉溶液製備的矽膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水 =10-20 0.5-1.5 0.5-1.5 1-3為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以5-15%硫酸乙醇溶 液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，在紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材 色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；含量測定照高效液相色譜法(附錄VI D)測定A.丹參素色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；甲醇-0. 5%冰醋 酸=10-30 60-100為流動相；檢測波長為280nm;理論板數按丹參素峰計算應不低於 2000 ；對照品溶液製備取丹參素鈉對照品，精密稱定，加甲醇製成每1體積份含 0. 00004-0. 00008重量份的溶液，即得；供試品溶液的製備取本發明藥物組合物日用製劑量的1/12，置100體積份三角瓶中， 精密加甲醇40-60體積份，超聲處理20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重 量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5-15體積份，置50體積份圓底燒瓶中，回收溶劑至幹，殘渣 加流動相溶解並轉入5-15體積份量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液0. 003-0. 008體積份和0. 005-0. 015體積份、供試品 溶液0. 005-0. 015體積份，注入液相色譜儀，測定，即得；本發明藥物組合物每日用製劑量中含丹參以丹參素(C9HltlO5)計，不得少於19. 2mg ；B.丹皮酚色譜色條與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；甲醇-水-冰醋酸 =40-80 30-50 0.5-1. 5為流動相；檢測波長為27nm;理論板數按丹皮酚峰計算應不 低於2000 ；對照品溶液的製備取丹皮酚對照品，精密稱定，加甲醇製成每1體積份含 0. 000003-0. 000008重量份的溶液，即得；供試品溶液的製備取本發明藥物組合物日用製劑量的1/24，置100體積份三角瓶中，精密加甲醇40-60體積份，超生處理20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重， 搖勻，濾過，精密量取續濾液0. 5-1. 5體積份，置10體積份量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即 得；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各0. 005-0. 015體積份，注入色譜儀， 測定，即得；本發明藥物組合物每日用製劑量中含牡丹皮以丹皮酚(C9HltlO3)計，不得少於31.ang。
7.如權利要求6所述的藥物組合物的質量檢測方法，其特徵在於該方法包括如下鑑別 和含量測定方法中的一種或幾種鑑別A.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/12，加水25體積份使溶解，濾過，濾液置分液 漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次用15體積份，合併正丁醇提取液，加入等體 積的氨試液，搖勻，放置使分層，分取正丁醇液，蒸乾，殘渣加甲醇1體積份使溶解，作為供 試品溶液；另取柴胡對照藥材1重量份，加甲醇20體積份，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘 渣加水20體積份，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水20體積份使溶解，加熱回流 1小時，置分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次用15體積份，合併正丁醇提取 液，加入等體積的氨試液，搖勻，放置使分層，分取正丁醇液，蒸乾，殘渣加甲醇1體積份使 溶解，製備對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各0.005體積份，分別點於同一以 羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水=13 7 2在10°C以 下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以對二甲氨基苯甲醛硫酸乙醇溶液， 取0. 5-1. 5%對二甲氨基苯甲醛硫酸溶液lmL，用乙醇稀釋至10mL，取該溶液噴矽膠G薄層 板，在70°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同 顏色的主斑點；置紫外燈365nm下檢視，顯相同黃色的螢光斑點；B.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/12，加水30體積份使溶解，濾過，濾液用稀鹽 酸調PH值至1-2，置分液漏鬥中，用醋酸乙酯振搖提取3次，每次20體積份，合併醋酸乙酯 液，減壓回收醋酸乙酯至幹，殘渣加甲醇2體積份使溶解，作為供試品溶液；另取丹參對照藥材0. 5重量份，加甲醇20體積份，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至 2體積份，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各0.005體積份，分別點於同一用 氫氧化鈉溶液製備的矽膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水=15 :1:1:2 為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相 應的位置上，顯相同的螢光斑點；C.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/6，加乙醇20體積份，密塞，振搖10分鐘，濾 過，濾液濃縮至1體積份，作為供試品溶液；另取丹皮酚對照品，加丙酮製成每ι體積份含0. 005重量份的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(附錄VI B試驗)，吸取上述兩種溶液各0. 010體積份，分別點於同一 矽膠G薄層板上，以環己烷-醋酸乙酯=3 1為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以鹽酸酸性 5%三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍褐色斑點；D.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/12，加水25體積份使溶解，濾過，濾液置分液 漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次用15體積份，合併正丁醇提取液，加入等體 積的氨試液，搖勻，放置使分層，分取正丁醇液，蒸乾，殘渣加甲醇1體積份使溶解，作為供 試品溶液；另取白芷對照藥材0. 5重量份，加甲醇10體積份，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至 2體積份，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各0.005體積份，分別點於同一以 羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G薄層板上，以30-60°C石油醚-醋酸乙酯=1 1.1為展 開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應 的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；E.取本發明藥物組合物日用製劑量的1/6，加水30體積份使溶解，濾過，濾液置分液漏 鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20體積份，合併正丁醇液，用水20體積份洗滌 2次，棄去水層，分取正丁醇液，蒸乾，殘渣加甲醇1體積份使溶解，作為供試品溶液；另取甘草對照藥材0. 5重量份，加甲醇4體積份，超聲處理30分鐘，取上清液作為對照 藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各0.005體積份，分別點於同一用 氫氧化鈉溶液製備的矽膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水=15 :1:1:2 為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，在紫 外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光 斑點；含量測定照高效液相色譜法(附錄VI D)測定A.丹參素色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；甲醇-0. 5%冰醋酸 =20 80為流動相；檢測波長為^Onm ；理論板數按丹參素峰計算應不低於2000 ；對照品溶液製備取丹參素鈉對照品，精密稱定，加甲醇製成每1體積份含0. 00006重 量份的溶液，即得；供試品溶液的製備取本發明藥物組合物日用製劑量的1/12，置100體積份三角瓶中， 精密加甲醇50體積份，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻， 濾過，精密量取續濾液10體積份，置50體積份圓底燒瓶中，回收溶劑至幹，殘渣加流動相溶 解並轉入10體積份量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液0. 005體積份和0. 010體積份、供試品溶液0. 010體 積份，注入液相色譜儀，測定，即得；本發明藥物組合物每日用製劑量中含丹參以丹參素(C9HltlO5)計，不得少於19. 2mg ；B.丹皮酚色譜色條與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；甲醇-水-冰醋酸 =60 40 1為流動相；檢測波長為27nm;理論板數按丹皮酚峰計算應不低於2000;對照品溶液的製備取丹皮酚對照品，精密稱定，加甲醇製成每1體積份含0. 000005重 量份的溶液，即得；供試品溶液的製備取本發明藥物組合物日用製劑量的1/24，置100體積份三角瓶中， 精密加甲醇50體積份，超生處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重，搖勻，濾 過，精密量取續濾液1體積份，置10體積份量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各0. 010體積份，注入色譜儀，測定， 即得；本發明藥物組合物每日用製劑量中含牡丹皮以丹皮酚(C9HltlO3)計，不得少於31.ang。
8.如權利要求1-3任一所述的藥物組合物在製備調肝補腎，化瘀祛斑的藥物中的應用。
9.如權利要求8所述的應用，其特徵在於其中所述的化瘀祛斑是指治療黃褐斑。
10.如權利要求8所述的應用，其特徵在於其中所述的化瘀祛斑是指抑制B16細胞增 殖；或抑制B-16黑色素瘤細胞株的酪氨酸酶活性；或抑制黑色素形成；或抑制紫外線照射 致皮膚損傷模型小鼠血清過氧化脂質形成；或抑制和殺滅粉刺丙酸桿菌、藤黃微球菌；或 改善血液流變性。
全文摘要
本發明公開了一種可以調肝補腎，化瘀祛斑的藥物組合物及其製備方法、質量檢測方法和用途。本發明藥物組合物原料藥組成為柴胡、丹參、熟地、白芷、牡丹皮和甘草，在製備過程中先將牡丹皮蒸餾得結晶，將其他原料藥水煎煮，濃縮得浸膏，與結晶混合製成臨床可接受的各種劑型。本發明藥物組合物的質量檢測方法包括鑑別和丹參素、丹皮酚含量測定方法中的一種或幾種。藥效實驗表明，本發明藥物組合物具有養榮祛斑的作用，可以有效抑制B16細胞增殖，抑制B-16黑色素瘤細胞株的酪氨酸酶活性，抑制黑色素形成，抑制紫外線照射致皮膚損傷模型小鼠血清過氧化脂質形成，達到治療黃褐斑的目的。
文檔編號A61P17/00GK102145075SQ20101010955
公開日2011年8月10日 申請日期2010年2月9日 優先權日2010年2月9日
發明者陳永泰 申請人:陳永泰