一種微生物(no.j1)及其製備方法
2023-10-11 14:21:09 1
專利名稱：一種微生物(no.j1)及其製備方法
技術領域：
本發明涉及微生物技術領域，具體地說是一種微生物(No.J1)及其製備方法。
背景技術：
目前由於未自然發酵好的原煙和青煙在摻入工業配方中使用時，給煙氣帶來了刺激性大、吸味辛辣、粗糙、澀口、滯舌，香氣不足或缺乏香氣，燃燒性不好等缺點。這不僅給捲菸成品的內在質量、產品風格等方面帶來了較大的損壞。再者，目前全國各大煙廠、菸草公司有近60％的上部菸葉和低次菸葉由於使用率低，大量積壓，佔用大量倉庫和資金。
發明內容
本發明的目的是針對目前沒有有效的菸葉醇化劑，提供一種能用於改善成品菸品質和上部菸葉、低次菸葉的可用性的微生物及其製備方法。
本發明是採用分離菸葉本身有益微生物的方法而得到的微生物，該微生物是枯草芽孢桿菌No.J1(Bacillus subtilis)，其保藏登記號為CGMCCNO.0677。
本發明的微生物經檢測具有以下性質細胞杆狀，革蘭氏陽性，大小為0.6*1.0～2.0m，產生近中生的橢圓狀芽孢，孢囊不膨大。細胞內無聚-β-羥基丁酸鹽(PHB)顆粒。在肉汁培養基上的菌落為圓形、擴展低凸面、邊緣呈鋸齒狀，白色，無光澤，18小時後菌落直徑大於1毫米。產生乙醯甲基甲醇(V-P反應陽性)，VP液最終pH為6.8。接觸酶陽性。卵磷脂酯陰性，還原硝酸鹽。在p5.7和7％NaCl中生長，營嚴格好氧生活。從葡萄糖、阿拉伯糖、木糖和甘露醇產酸。石蕊牛奶呈還原反應，分解酪素和澱粉。利用檸檬酸鹽。
本發明的微生物的培養方法是先採用固體豆芽汁培養基YBA，將上述菌在試管斜面培養基上接種後，27-29℃下活化培養，二天後，再採用流體豆芽汁培養基YB，將試管中枯草芽孢桿菌接種在錐形瓶YB豆芽汁流體培養基中28℃搖床培養24小時。
該微生物的液體發酵製備方法按以下步驟進行1)試管培養基採用滅菌固體豆芽汁(YBA)培養基，將枯草芽孢桿菌接種在試管培養基上，接種後27-29℃下活化培養48小時；
2)擴大培養基採用滅菌液體YB豆芽汁培養基，將試管培養基中枯草芽孢桿菌接種在錐形瓶中，置於搖床上28℃，振蕩培養24-46小時，作為種子液；3)液體發酵培養基在發酵缺罐中採用液體YB豆芽汁培養液，121℃高壓滅菌30分鐘左右，待滅菌培養液冷卻至27.5℃時，將錐形瓶中的培養物按5-7％的比例接種發酵液，27-28℃培養48小時，可得到枯草芽孢桿菌菌液。
該微生物的分離方法是將煙末加入已滅菌的豆芽汁培養液YB中，於25℃搖床培養24小時後，用吸管吸取培養液，採用稀釋塗布法在滅菌固體豆芽汁培養基YBA上進行塗布平板，待菌長出後，用接種針在另一滅菌固體豆芽汁培養基YBA上進行劃線法分離，經純化培養後得該單菌落純培養菌。
本發明的微生物用於菸草加工工藝過程中，作為降低捲菸煙氣的刺激性以及雜氣，增加捲菸煙氣協調性，香氣細膩性以及改善餘味具有良好的效果。通過以一定比例加入本發明的微生物後，可有效降低上部菸葉和低次菸葉中的蛋白質、菸鹼等含量，使煙氣更協調，香氣顯現，改善餘味。本發明的微生物能使菸草業中庫存的上部菸葉加快其可使和性，節約倉庫、減少大量資金積壓，減少庫存菸葉和因長期貯存蟲害黴變引致的損失，同時可配合開發不同吸味、風格品牌的捲菸。
具體實施方案本發明的微生物是從菸草葉片上分離得到的枯草芽孢桿菌No.j1，其保減登記號為CGMCC NO.0677。
其培養方法是先採用固體豆芽汁培養基YBA，將上述菌在試管斜面培養基上接種後，27-29℃下活化培養，二天後，再採用流體豆芽汁培養基YB，將試管中枯草芽孢桿菌接種在錐形瓶YB豆芽汁流體培養基中28℃搖床培養24小時。
其液體發酵製備方法按以下步驟進行1)試管培養基採用滅菌固體豆芽汁(YBA)培養基，將枯草芽孢桿菌接種在試管培養基上，接種後27-29℃下活化培養48小時2)擴大培養基採用滅菌液體YB豆芽汁培養基，將試管培養基中枯草芽孢桿菌接種在錐形瓶中，置於搖床上28℃，振蕩培養24-46小時，作為種子液；
3)液體發酵培養基在發酵缺罐中採用液體YB豆芽汁培養液，121℃高壓滅菌30分鐘左右，待滅菌培養液冷卻至27.5℃時，將錐形瓶中的培養物按6％的比例接種發酵液，27-28℃培養48小時，可得到枯草芽孢桿菌菌液。
上述微生物的分離方法是將煙末加入已滅菌的豆芽汁培養液培養液YB中，於25℃搖床培養24小時後，用吸管吸取培養液，採用稀釋塗布法在滅菌固體豆芽汁培養基YBA上進行塗布平板，待菌長出後，用接種針在另一滅菌固體豆芽汁培養基YBA上進行劃線法分離，經純化培養後得該單菌落純培養菌。
權利要求
1.一種微生物，其特徵在於它是從菸草葉片上分離得到的枯草芽孢桿菌No.J1(Bacillus subtilis)，其保藏登記號為CGMCC NO.0677。
2.根據權利要求1所述的微生物的培養方法，其特徵在於先採用固體豆芽汁培養基YBA，將上述菌在試管斜面培養基上接種後，27-29℃下活化培養，二天後，再採用流體豆芽汁培養基YB，將試管中枯草芽孢桿菌接種在錐形瓶YB豆芽汁流體培養基中28℃搖床培養24小時。
3.根據權利要求1所述的微生物的液體發酵製備方法，其特徵在於按以下步驟進行1)試管培養基採用滅菌固體豆芽汁(YBA)培養基，將枯草芽孢桿菌接種在試管培養基上，接種後27-29℃下活化培養48小時；2)擴大培養基採用滅菌液體YB豆芽汁培養基，將試管培養基中枯草芽孢桿菌接種在錐形瓶中，置於搖床上28℃，振蕩培養24-46小時，作為種子液；3)液體發酵培養基在發酵缺罐中採用液體YB豆芽汁培養液，121℃高壓滅菌30分鐘左右，待滅菌培養液冷卻至27.5℃時，將錐形瓶中的培養物按5-7％的比例接種發酵液，27-28℃培養48小時，可得到枯草芽孢桿菌菌液。
4.根據權利要求1所述的微生物的分離方法，其特徵在於將煙末加入已滅菌的豆芽汁培養液培養液YB中，於25℃搖床培養24小時後，用吸管吸取培養液，採用稀釋塗布法在滅菌固體豆芽汁培養基YBA上進行塗布平板，待菌長出後，用接種針在另一滅菌固體豆芽汁培養基YBA上進行劃線法分離，經純化培養後得該單菌落純培養菌。
全文摘要
本發明是一種微生物及其製備方法。其特徵在於它是從菸草葉片上分離得到的枯草芽孢桿菌No.Jl(Bacillussubtilis)，其保藏登記號為CGMCC NO.0677。本發明的微生物用於菸草加工工藝過程中，作為降低捲菸煙氣的刺激性以及雜氣，增加捲菸煙氣協調性，香氣細膩性以及改善餘味具有良好的效果。可有效降低上部菸葉和低次菸葉中的蛋白質、菸鹼等含量，使煙氣更協調，香氣顯現，改善餘味。本發明的微生物能使菸草業中庫存的上部菸葉加快其可使和性，節約倉庫、減少大量資金積壓，減少庫存菸葉和因長期貯存蟲害黴變引致的損失，同時可配合開發不同吸味、風格品牌的捲菸。
文檔編號A24B15/20GK1439716SQ0211339
公開日2003年9月3日 申請日期2002年2月23日 優先權日2002年2月23日
發明者王革 申請人:王革