一種涼山杜鵑對照藥材的質量控制方法與流程
2024-04-12 15:02:05
1.本發明涉及一種藥品或保健品質量分析方法(ipc分類號：g01n30/02)，尤其涉及一種涼山杜鵑對照藥材的質量控制方法。
背景技術：
2.四川涼山杜鵑(rhododendrronliangshanium l.)是杜鵑花科杜鵑屬植物，杜鵑類藥物的主要有效成分是黃酮類和揮髮油，其中蘆丁及水解後的甙元槲皮素是黃酮類化合物中具有代表性的有效成分。蘆丁在酶或酸的作用下水解成槲皮素。現代藥理研究認為槲皮素具有較好的祛痰、止咳、降低血壓、增強毛細管抵抗力、調節血脂、抗過敏等作用。
3.目前，關於涼山杜鵑對照藥材的質量控制方法中，關於對槲皮素的含量的測定仍具有一定的缺陷，原因是由於槲皮素的純度和雜質的含量對涼山杜鵑對照藥材的質量控制均具有較大的影響。因此，需要對涼山杜鵑對照藥材的質量控制方法進行規範，以控制涼山杜鵑對照藥材的質量。
技術實現要素：
4.本發明的目的在於提供一種涼山杜鵑對照藥材的質量控制方法。
5.本發明採取的技術方案如下：所述涼山杜鵑為乾燥葉或乾燥帶葉枝梢。
6.本發明第一方面提供了通過涼山杜鵑對照藥材的色譜確定，性狀檢查，結構的鑑別方法來控制涼山杜鵑對照藥材的質量。
7.進一步優選的，所述的色譜確定為薄層色譜法的確定。
8.所述的薄層色譜法確定的方法具體如下：
9.1)取涼山杜鵑對照藥材粉末(過三號篩)約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-25％鹽酸(4:1)50ml，(25％鹽酸以含體積含量hcl25％計)，密塞，稱定重量，80～90℃水浴加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇-25％鹽酸(4:1)補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，蒸乾，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；
10.2)再取槲皮素對照品，加甲醇製成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；
11.3)薄層色譜分析：吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠g薄層板上，以甲苯-氯仿-丙酮-甲酸(8：5：7：1)為展開劑，展開，取出，晾乾，日光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜的相應位置上，顯相同顏色的斑點；噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視。
12.本發明中涼山杜鵑對照藥材的顯微鏡下鑑別結果為：腺鱗紅棕色或黃棕色，多破碎。完整腺鱗頂面觀呈類圓形或卵圓形，直徑140～270(350)μm，頭部由數十個細胞組成，外輪細胞輻射狀排列；側面觀多扁平，外側細胞稍延長，基部細胞2-3個。纖維淡黃色或無色，多成束，完整纖維呈長條形，有時微彎曲，直徑8～23μm，末端漸尖，壁稍厚。石細胞成群或單個散在，呈類方形、類圓形、類三角形或不規則形，直徑28～75μm。草酸鈣簇晶散在或存在於葉肉細胞中，直徑6～28μm。下表皮細胞表面觀呈類方形或類長方形，垂周壁波狀彎曲；側面
觀呈乳突狀。
13.本發明第二方面提供了涼山杜鵑對照藥材的水分，浸出物質量檢查方法來控制涼山杜鵑對照藥材的質量。
14.本發明第三方面提供了涼山杜鵑對照藥材的指標成分分析來控制涼山杜鵑對照藥材的質量。
15.作為一種優選的方案，所述指標成分為槲皮素。
16.作為一種優選的方案，所述分析為定量分析。
17.作為一種優選的方案，所述定量分析為高效液相色譜法。
18.作為一種優選的方案，所述高效液相色譜法，其操作步驟包括：
19.(1)對照品溶液的製備：取槲皮素對照品，置棕色量瓶中，加甲醇製成每1ml含20μg的溶液，即得對照品溶液；
20.供試品溶液的製備：取本品涼山杜鵑粉末，過篩，精密稱0.1～0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸溶液，密塞，稱定重量，80℃～90℃水浴加熱回流1小時，室溫放冷，再稱定重量，用甲醇-鹽酸溶液補足減失的重量，搖勻，過濾，濾液為供試品溶液；
21.(3)進樣：選用以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比50∶50的甲醇-體積分數為0.5％磷酸溶液為流動相，檢測波長為370nm，流速1ml/min，進樣量10μl，注入液相色譜儀，測定。
22.作為一種優選的方案，所述甲醇-鹽酸溶液的體積比為4：1。
23.作為一種優選的方案，所述鹽酸溶液的體積分數為20～30％。
24.作為一種優選的方案，所述鹽酸溶液的體積分數為25％。
25.作為一種優選的方案，所述涼山杜鵑對照藥材粉末為0.1～0.3g。
26.作為一種優選的方案，所述鹽酸溶液的體積分數為20～30％。
27.作為一種優選的方案，所述甲醇-鹽酸溶液的混合溶液的體積為30～100ml。
28.作為一種優選的方案，所述加熱回流的溫度為80℃～90℃。
29.作為一種優選的方案，所述加熱回流的時間為60～120min。
30.測定結果按槲皮素計算，理論板數按槲皮素峰計算≥4000，含槲皮素(c
15h10
o7)≥0.60％。
31.有益效果：
32.1.本發明通過高效液相色譜法，對涼山杜鵑對照藥材中的槲皮素含量的色譜條件在經過多次實驗，以體積比為50∶50的甲醇-質量分數為0.5％磷酸溶液才能夠達到較好的分離度，同時可以提高槲皮素的理論塔板數，另外，水相中保持一定的酸度可以提高主峰與雜質峰的分離效果。
33.2.本發明通過將加熱回流的溫度和時間進行了考察，當加熱回流的溫度為80℃～90℃，加熱回流的時間為60～100min時，即可水解完全，並且雜質少，從而更加簡便的，快速，精準的對涼山杜鵑對照藥材中的槲皮素進行含量的測定。
34.3.在本發明中關於展開劑的選擇，是嘗試了各種展開溶劑，包括石油醚，氯仿，乙酸乙酯，甲醇，丙酮，甲苯，甲酸等溶劑，進入了深入的研究，不斷地組合篩選，而最後確定了較理想的展開體系即甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲酸，通過調整三者間的相互比例，最終研究確定了最合理的展開系統：甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲酸(8：5：7：1)。
具體實施方式
35.實施例
36.實施例1
37.本實施例第一方面提供了通過涼山杜鵑對照藥材的色譜確定，性狀檢查，結構的鑑別方法來控制涼山杜鵑對照藥材的質量。
38.本實施例中的涼山杜鵑對照藥材的薄層色譜確定，其步驟包括：
39.1)取涼山杜鵑對照藥材粉末(過三號篩)0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-25％鹽酸(4:1)50ml，(25％鹽酸以含質量hcl25％計)，密塞，稱定重量，85℃水浴加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇-25％鹽酸(4:1)補足減失的重量，搖勻，濾過，取濾液，蒸乾，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；
40.2)再取槲皮素對照品，加甲醇製成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；
41.3)薄層色譜分析：吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠g薄層板上，以甲苯-氯仿-丙酮-甲酸(8：5：7：1)為展開劑，展開，取出，晾乾，日光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜的相應位置上，顯相同顏色的斑點；噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視。
42.實驗結果表明：樣品中均含有槲皮素且螢光斑點清晰，分離效果理想。
43.所述槲皮素對照品購買自中國食品藥品檢定研究院。
44.所述涼山杜鵑對照藥材由成都楊天萬應製藥有限公司自製，四川省藥品檢驗研究院標定。
45.所述涼山杜鵑購買自四川省西昌地區。
46.本實施例中涼山杜鵑對照藥材的性狀鑑別：為黃褐色或灰褐色的粉末，氣芳香特異，味微澀，微辛；
47.本實施例中涼山杜鵑對照藥材的顯微結構分析為：腺鱗紅棕色或黃棕色，多破碎。完整腺鱗頂面觀呈類圓形或卵圓形，直徑350μm，頭部由數十個細胞組成，外輪細胞輻射狀排列；側面觀多扁平，外側細胞稍延長，基部細胞2-3個。纖維淡黃色或無色，多成束，完整纖維呈長條形，有時微彎曲，直徑8～23μm，末端漸尖，壁稍厚。石細胞成群或單個散在，呈類方形、類圓形、類三角形或不規則形，直徑28～75μm。草酸鈣簇晶散在或存在於葉肉細胞中，直徑6～28μm。下表皮細胞表面觀呈類方形或類長方形，垂周壁波狀彎曲；側面觀呈乳突狀。本實施例第二方面提供了涼山杜鵑對照藥材的水分，浸出物質量檢查方法來控制涼山杜鵑對照藥材的質量。
48.本實施例第三方面提供了涼山杜鵑對照藥材的指標成分分析來控制涼山杜鵑對照藥材的質量。所述指標成分為槲皮素。所述分析為定量分析。所述定量分析為高效液相色譜法。
49.所述高效液相色譜法的操作步驟包括：
50.(1)對照品溶液的製備：取槲皮素對照品，置棕色量瓶中，加甲醇製成每1ml含20μg的溶液，即得對照品溶液；
51.(2)供試品溶液的製備：取本品涼山杜鵑藥材粉末，過篩，精密稱取0.2g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸溶液，密塞，稱定重量，85℃水浴加熱回流1小時，室溫放冷，再稱定重量，用甲醇-鹽酸溶液補足減失的重量，搖勻，過濾，濾液為供試品溶液；
52.所述鹽酸溶液的體積分數為25％。所述甲醇-鹽酸溶液的甲醇和鹽酸溶液的質量比為4：1。所述甲醇-鹽酸溶液的混合溶液的體積為50ml；所述加熱回流的溫度為85℃。所述加熱回流的時間為100min。
53.(3)進樣：選用以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比50∶50的甲醇-體積分數為0.5％磷酸溶液為流動相，檢測波長為370nm，流速1ml/min，進樣量10μl，注入液相色譜儀，測定。
54.測定結果：
55.1.水分：按照《中國藥典(2020版)》(通則0832第二法)。
56.2.醇溶性浸出物：按照《中國藥典(2020版)》醇溶性浸出物測定法(通則2201)項下熱浸法測定。
57.將涼山杜鵑對照藥材的水分，醇溶性浸出物以及浸出物以及槲皮素的質量含量(％)，記錄在表1.
58.表1
[0059][0060]