一種測量菸草中蛋白質的方法
2024-04-08 05:58:05
專利名稱：：一種測量菸草中蛋白質的方法
技術領域：
：本發明屬於測量菸草中蛋白質的方法，特別涉及用分析連續流動分析法測定菸草中蛋白質的方法。
背景技術：
：蛋白質是菸草中的重要化合物，但菸葉中蛋白質含量過高，則會使煙氣強度過大，香氣和吃味變差，產生辛辣味、苦味和刺激性，還會產生一種如同燃燒羽毛的蛋白臭味。因此，蛋白質含量已成為評價菸草品質的重要指標，快速準確測定菸葉中蛋白質含量有重要意義。國際上常採用經典的克達爾法或改良的凱氏定氮法測定蛋白質含量，國內菸草行業主要採用克達爾法。這些方法的檢測結果比較準確，但操作繁瑣、費時，且不能進行批量檢測。
發明內容本發明所要解決的技術問題是提供一種操作簡單的測量菸草中蛋白質方法。本發明解決技術問題的技術方案為一種測量菸草中蛋白質的方法，稱取0.3g(精確至0.0001g)煙末於錐形瓶，加入30mL0.5%醋酸，加熱煮沸15min，趁熱抽濾，並用0.5%醋酸溶液衝洗錐形瓶和沉澱物至濾液無色，然後轉移濾紙和沉澱於75mL消化管，加入0.lgHgO，1.0gK2S04，5mL重量濃度為98%硫酸，搖勻後置於消化器消化，消化器工作參數150。C消化1小時，370QC消化4小時；消化結束後稍冷，加入少量水，搖勻，冷卻至室溫，用水定容至刻度，搖勻，利用連續流動分析儀測定樣品中總氮含量，將測量出的總氮含量，換算成蛋白質含量即可，同時做空白實驗做為對照，菸草中蛋白質的含量按下式計算蛋白質(%)=^lz^*6.25附(l—W式中Gl~"#品稀'|^鵬(%);GO^空白樣品翻値(%);m~~ffl葉樣品I^M(g);w~~樣品的水^fc6.25—總氮與蛋白質s^mm戶的消化器及消化管由德國布朗盧比公司製造。所述的連續流動分析儀的型號為AA3，由德國布朗盧比公司製造。申請人:認為目前連續流動分析儀在菸草行業己經普及，利用流動分析儀測定總氮的方法也已經非常成熟，而經典的克達爾法測定蛋白質與流動分析儀法測定總氮在原理上是相同的。由於菸草中含氮化合物可分為能溶於水及不溶於水兩大類，不溶於水的含氮化合物主要是蛋白質類的大分子化合物，當抽提液pH為4左右較為適合，其不溶性氮和可溶性氮分離得較好即利用0.5%醋酸將菸葉中的蛋白質沉澱，洗去可溶性氮，然後測定樣品中的不溶性氮，換算成蛋白質含量，通過比對實驗發現，檢測結果更為準確。本發明與現有技術相比，操作簡便，快速，且測定結果更為準確。利用該方法測定蛋白質，可以節省大量的勞動力。目前流動分析儀在菸草行業已經普及，因此該方法在行業內可以推廣應用。具體實施例方式下面結合實施例對本發明做詳細的說明。儀器與試劑AA3連續流動分析儀，消化器及消化管(德國布朗盧比公司)；SHB-III循環水式多用真空泵(鄭州長城科工貿有限公司)；電子萬用電爐(浙江省上虞市道墟寶民儀器設備廠)；AG204電子天平(感量0.OOOlg，瑞士)；抽濾裝置(直徑120ram布氏漏鬥，真空抽濾裝置)及實驗室常用玻璃儀器。冰醋酸、硫酸鉀、水楊酸鈉、亞硝基鐵氰化鈉、硫酸銨(國藥集團化學試劑有限公司)；98%濃硫酸、次氯酸鈉、氫氧化鈉、氯化鈉(上海實意化學試劑有限公司)；紅色氧化汞(泰興市化學試劑廠)；四水合酒石酸鉀鈉、磷酸氫二鈉(合肥工業大學化學試劑廠)；以上試劑均為分析純；酪蛋白(含氮量13%,生化試劑，Sigma公司)。2003年雲南、福^^的復烤菸葉。實施例1:準確稱取0.3g煙末(精確至0.0001g)於250ml錐形瓶，加入30mL0.5%醋酸，加熱煮沸15min，迅速用定量濾紙在真空抽濾裝置上抽濾，並用0.5%醋酸溶液衝洗錐形瓶和沉澱物至濾液無色，然後轉移濾紙和沉澱於75mL消化管，加入0.lgHgO，1.0gK2S04，5mL濃硫酸，搖勻後置於消化器消化，消化器工作參數150QC消化1小時，370flC消化4小時。消化結束後稍冷，加入少量水，搖勻，冷卻至室溫，用水定容至刻度，搖勻，利用連續流動分析儀按YC/T161-2002的方法測定總氮含量，換算成蛋白質含量。同時做空白實驗。蛋白質含量計算蛋白質(%)=(G1-G0)*6.25附(l—>V)式中Gl——樣品^#|^貝値(%);GO~~空白樣品爾直(%);m~~ffl葉樣品WM:(g);w~~樣品的水^4;6.25—總氮與蛋白質的^f、數。1、標準曲線除稱取經ll(TC乾燥2小時的硫酸銨0.943g，於燒杯中，用水溶解，轉入lOOmL容量瓶中，用水定容至刻度，此溶液氮含量為2mg/mL。分別移取2.5mL，2.OmL，1.5mL，1.OmL，0.5mL上述溶液於消化管中，夕卜，其餘與實施例1相同，測量出標準樣品的相關係數為0.9998。2、重複性試驗稱取5份陸良B2F樣品，按實施例l的方法測定蛋白質含量。結果見表l:表l:tableseeoriginaldocumentpage6由表1可得，樣品的相對標準偏差RSD為1.1%，重複性較好。3、回收率試驗稱取5份陸良B2F樣品，加入不同量的酪蛋白標準樣品，按實施例l方法處理後，測定蛋白質含量。結果見表2:表2酪蛋白的回收率tableseeoriginaldocumentpage64、流動分析儀法與克達爾法的比對:準確稱取兩份以下六種樣品，一份按實施例1方法測定蛋白質含量，一份按處理克達爾法檢測。結果如表3:表3:tableseeoriginaldocumentpage7表3結果顯示，兩種方法的測定結果差別較小，克達爾法測得的結果總體上小於流動分析儀法。可能有以下原因克達爾法檢測，操作步驟較多，樣品在操作過程中的損失比流動分析儀法多；克達爾法消化時，不能準確控溫，有部分消化產生的氨揮發，使檢測結果偏低。而流動分析法檢測，操作步驟少，樣品損失小，消化器溫度控制準確且可以程序升溫，硝化過程產生的氨損失較小。因此，流動分析儀法測定菸草中的蛋白質含量，結果更為準確。權利要求1、一種測量菸草中蛋白質的方法，其特徵在於稱取0.3g煙末於錐形瓶，加入30mL0.5%醋酸，加熱煮沸15—20min，趁熱抽濾，並用0.5%醋酸溶液衝洗錐形瓶和沉澱物至濾液無色，然後轉移濾紙和沉澱於75mL消化管，加入0.lgHgO，1.0gK2SO4，5mL重量濃度為98%硫酸，搖勻後置於消化器消化，消化器工作參數150t消化l一l.5小時，370°C消化4一6小時；消化結束後稍冷，加入少量水，搖勻，冷卻至室溫，用水定容至刻度，搖勻，將樣品送進連續流動分析儀，按YC/T161-2002的方法測定總氮含量，將測量出的總氮含量，換算成蛋白質含量即可，同時做空白實驗做為對照，菸草中蛋白質的含量按下式計算蛋白質(%)=^lz^*6.25附(l—W)式中Gl——樣品^^Iffl^貝値(%);GO~~空白樣品1t泖Jf直(%);m^菸葉樣品mft(g);w~~樣品的水^4;6.25——總氮與蛋白質6^^數。2、豐g^權禾IJ^求l所述的一種測量菸草中蛋白質的方法，其特徵在於所述的消化器及消化管由德國布朗盧比公司製造。3、豐g^權禾展求l所述的一種測量菸草中蛋白質的方法，其特徵在於所述的連續流動分析儀的型號為AA3，由德國布朗盧比公司製造。全文摘要本發明公開了一種測量菸草中蛋白質的方法，包括菸草總氮的提取，消化，連續流動分析，本發明與現有技術相比，操作簡便，快速，且測定結果更為準確。利用該方法測定蛋白質，可以節省大量的勞動力。目前流動分析儀在菸草行業已經普及，因此該方法在行業內可以推廣應用。文檔編號G01N35/00GK101144825SQ20071002603公開日2008年3月19日申請日期2007年8月15日優先權日2007年8月15日發明者瞿先中,舒俊生申請人:安徽中煙工業公司蕪湖捲菸廠