一種防治菸草黑脛病的菌株及其菌劑的製作方法
2024-03-01 16:17:15
專利名稱：一種防治菸草黑脛病的菌株及其菌劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及微生物領域，更確切的說，涉及用於植物根部病害，特別是一 種用於防治菸草黑脛病的菌抹及菌劑。
背景技術：
菸草黑脛病菌最早是由Breda de Haan於1896年在印度尼西亞的爪哇首 次發現和描述的，並將其命名為菸草疫黴(腳鄉力M，戸甜/.〃ca var./ /co"a/7ae ( Breda de Haan) Tucker)，由i亥病菌引起的;):因草黑胚病是一 種分布廣泛， 為害嚴重的世界性菸草主要病害之一。菸草黑脛病可以在菸草的 任何生育階段侵染為害，但主要為害大田煙林。苗期發病往往造成煙苗成片死 亡，成猝倒狀；大田期發病則可以造成整個煙株突然凋萎並伴有根部或莖基部 變黑症狀，造成無法挽救的損失。我國20世紀80年代以後隨著菸草種植面積 的擴大，菸草黑脛病迅速發展。據1989-1991年全國16個省市主要煙區調查， 除黑龍江尚未發生外，其餘各煙區均有發生，以河南、山東、安徽、雲南等省 發生較重， 一般發生率為5%一15%,重者達30%以上，給菸草生產造成很大損失。 長期以來，主要用化學農藥一甲霜靈。隨著曱霜靈在菸草生產上的大量使用， 菸草黑脛病逐步產生抗藥性。20世紀60年後，由於化學農藥"3R" (residue, resistance, resurgence )問題嚴重^A類對環境保護及自身健康意識的增強， 生物防治已經成為人們研究的熱點。生物防治的優點是對人畜安全，對環境沒 有或極少汙染，使用成本較低，便於利用。利用微生物對菸草黑脛病進行防治 是生物防治 一個重要的例子。發明內容本發明的目的正是針對上述現有技術所存在問題而的提供的一種防治菸草黑脛病的菌抹及其菌劑，該菌林對菸草黑脛病有較好的抑制作用。本案發明人從福建、河南、安徽、雲南、湖北採集了菸草根際土樣ioo份，用幾丁質選擇培養基法共分離出產幾丁質酶菌林62林，其中真菌32抹、細 菌22抹、放線菌8抹。通過透明圈法和還原糖法對分離的菌抹進行了篩選，得 到一抹幾丁質酶高產菌林。經過鑑定，該菌抹為淡紫擬青黴(Pacilomyces lilacinus。該菌林被送往位於武漢大學的中國典型培養物保藏中心保藏，保藏 曰期為2007年12月10日，保藏號為CCTCCNO: M207196;其名稱為淡紫擬青 黴ZY-19-2。經試驗該菌抹對菸草黑脛病菌(戶A^o/7/^力roa paraW〃ca Dast var. /2/co〃a朋e)有較強的抑制作用(見附圖)。由附圖看出隨著黑脛病菌 絲的不斷生長，當遇到牛津杯中的菌抹發酵液時，黑脛病菌絲停止擴散，而向 沒有菌林發酵液的地方延伸，表明菌林發酵液對黑脛病菌有抑制作用。本發明的防治菸草黑脛病的菌林是淡紫擬青黴ZY-19-2 (Pacilomyces lilacinus ZY-19-2),保藏編號為CCTCCN0: M207196。本發明的防治菸草黑脛病的菌劑是採用淡紫擬青黴CCTCCN0: M207196為原 菌種通過發酵工藝而製成，最佳發酵條件如下以0. 8~2. 0%膠體幾丁質為碳 源，發酵液初始pH值為5.5-7.0，以0.8~1. 5%蛋白腖為氮源，0.05%~0.2% 吐溫80作為表面活性劑，發酵時間為48~72 h，接種量為0.8-2 °/。，搖床轉 速為100 - 180 r/min 。本發明的製備該菌劑的發酵工藝按三角搖瓶—種子罐—發酵罐的三級工藝 培養。本發明的菌劑可為液體製劑，即通過三級發酵工藝培養後的培養液直接作 為液體殺菌劑使用，製成的培養液中的孢子量約為1. 0x 15個/ml。本發明的菌劑也可為固體製劑，即用硅藻土和草木灰吸附已製成的培養液， 自然晾乾後製成孢子量為2xiS個/g固體殺菌製劑。本發明的液體菌劑的使用方法如下用量為50 L/畝，菸草植抹大田移栽 後10 ~ l5天第一次施藥，移栽後25 ~ 30天第二次施藥，移栽後40 ~ 45天第三 次施藥，移栽後55~60天第四次施藥。此外，還可以採用其它後處理工藝，例如將液體菌劑濃縮後復配，或將其發酵過濾，將固、液分別處理包裝，待混合後施用或者用固體載體(硅藻土+ 草炭)作液體菌劑的吸附劑，晾乾後施用。與現有的技術化學農藥或類似生物農藥相比，本發明用於防治菸草黑脛病的菌抹及其製劑具有如下優點1.菌林淡紫擬青黴生長快，產幾丁質酶能力強 等優點；2.能分解蠅蛆的體壁，可以在蠅蛆體壁或體壁降解產物和水配製的培 養基上生長；3.可定殖在菸草植林的根際，抵抗菸草黑脛病的侵染；4.能有效 地克服土壤的抑菌作用，可以長期保持淡紫擬青黴的抑制菸草黑脛病的能力。
附圖菌林ZY-19-2對黑脛病的抑菌效果。
具體實施方式
本發明下面通過具體實施例來進一步說明，但並不是限制本發明。 實施例1液體製劑採用試管培養的淡紫擬青黴(ZY-19-2)原種，再按三角搖瓶—種子罐—發 酵罐的三級工藝培養。在50L發酵罐中，裝入30L的2%膠態幾丁質液體培養基， 發酵液初始pH值為6. 5,以1. 0%蛋白腖為氮源，0. 1%吐溫80作為表面活性劑， 經0. 05mpa滅菌30分鐘，冷卻至室溫後，接入2. OL菌4朱ZY-19-2液體種子， 培養溫度28。C，通氣量為1. 5M7h,攪拌速度為120r/min,經48小時後，培養 液可以直接作為液體殺菌劑，供大田生產使用。淡紫擬青黴(ZY-19-2)液體殺菌劑使用方法用量為50L/畝，在裡縣'汾 陳鄉，對曾經有黑脛病發生的大田期菸草植4朱施藥四次第一次，大田移栽15 天，噴淋菸草幼苗的根和莖；第二次，大田移栽後30天，噴淋菸草植抹的根和 莖；第三次，大田移栽後"天，噴淋菸草植株的根、莖和發病菸葉的基部；第 四次，大田移栽後60天，噴淋菸草植林的根、莖和發病菸葉的基部。實施例2固體製劑用硅藻土和草炭配製成發酵菌液的載體吸附劑。載體吸附劑的製備方法是,按每升培養液用lkg的硅藻土 ( 60% )和草炭(40% )作為載體吸附，自然晾乾 後成為孢子量為2 x 18個/g固體殺菌製劑，再包裝成為產品，供大田生產使用。淡紫擬青黴(ZY-19-2)固體殺菌劑使用方法1、於菸草幼苗移栽前，將 固體殺菌劑撒施在種植穴內，每穴施固體殺菌劑15g，然後將菸草幼苗移栽於 穴內定植。2、在菸草幼苗移栽黑脛病發生前，將固體殺菌劑(15g)撒播在煙 草莖根處的土壤表面，澆300mL清水。結果表明，在使用本發明製劑的河南省裡城縣3畝煙田中，黑脛病症狀明 顯減輕，較對照減少50%，菸葉平均畝產要比未使用本發明製劑的平均畝產高 出15%左右。
權利要求
1、一種防治菸草黑脛病的菌株，其特徵在於它是淡紫擬青黴，保藏編號為CCTCCNOM207196。
2.一種利用權利要求1所述的菌林製備防治菸草黑脛病的菌劑，其特徵 在於它是釆用淡紫擬青黴CCTCCNO:M207196為原菌種通過發酵工藝而製成， 發酵條件如下以0. 8 ~ 2. 0 %膠體幾丁質為碳源，發酵液初始pH值為5. 5 ~ 7. 0， 以0. 8 ~ 1. 5°/。蛋白腖為氮源，0. 05% ~ 0. 2V土溫80作為表面活性劑，發酵時間 為48 ~ 72 h，接種量為0. 8 ~ 2 %，搖床轉速為100 ~ 180 r/min 。
3. 根據權利要求2所述的防治菸草黑脛病的菌劑，其特徵在於製備該 菌劑的發酵工藝按三角搖瓶—種子罐—發酵罐的三級工藝培養。
4. 根據權利要求2所述的防治菸草黑脛病的菌劑，其特徵在於該菌劑 為液體製劑。
5. 根據權利要求2所述的防治菸草黑脛病的菌劑，其特徵在於該菌劑 為固體製劑。
全文摘要
一種防治菸草黑脛病的菌株及其菌劑，其特徵是採用淡紫擬青黴ZY-19-2，保藏編號CCTCCNOM207196為原菌種通過發酵工藝而製成菌劑，發酵條件如下以0.8～2.0％膠體幾丁質為碳源，發酵液初始pH值為5.5～7.0，以0.8～1.5％蛋白腖為氮源，0.1％吐溫80作為表面活性劑，發酵時間為48～72h，接種量為0.8～2％，搖床轉速為100～180r/min。本發明具有如下優點1.菌株淡紫擬青黴生長快，產幾丁質酶能力強；2.能分解蠅蛆的體壁，可在蠅蛆體壁或體壁降解產物和水配製的培養基上生長；3.可定殖在菸草植株的根際，抵抗菸草黑脛病的侵染；4.能有效地克服土壤的抑菌作用，長期保持抑制菸草黑脛病的能力。
文檔編號C12N1/14GK101220335SQ20071030008
公開日2008年7月16日 申請日期2007年12月28日 優先權日2007年12月28日
發明者周漢平, 奚家勤, 宋紀真, 尹啟生, 軍 楊, 王廣山, 蔡憲傑, 薛超群, 魏春陽 申請人:中國菸草總公司鄭州菸草研究院