一種植物白絹病的微生物防治方法與流程
2024-03-01 08:09:15 2
本發明屬於微生物應用技術領域，具體涉及一種植物白絹病的微生物防治方法。
背景技術：
白絹病（Scleritiumrolfsii）又稱菌核性根腐病和菌核性苗枯病，是一種在熱帶、亞熱帶地區普遍發生的植物病害。自1891 年美國弗羅裡達州首次報導了番茄白絹病（南方枯萎病）以來，關於各種植物白絹病的研究報導一直是植物病害研究中的熱點問題。
白絹病病菌能為害多種植物，但感病植物的症狀基本相似。病害主要發生在幼苗近地面的根莖部。初發生時，病部的皮層變褐，逐漸向四周發展。在病斑上產生白色絹絲狀的菌絲，菌絲體多呈輻射狀擴展，蔓延至附近的土表上。植株發病後，莖基部及根部皮層腐爛，水分和養分的輸送被阻斷，葉片變黃凋萎，全株枯死。枯死根莖僅剩下木質纖維組織，似"亂麻"狀，極易從土中拔出。在土壤較乾燥的條件下，病部呈灰白色幹朽狀，有時可見白色黴層；潮溼時, 病部布滿白色菌絲體，甚至周圍地表也覆蓋一層菌絲體，並形成油菜籽狀菌核。
白絹病病原的無性階段是半知菌亞門的孢目(Mycelia Sterilia) 小菌核菌屬( SclerotiumTode ex Fr.)齊整小菌核菌（ScleritiumrolfsiiSacc.），該菌是腐生性很強的土壤習居菌。病原的有性階段屬於擔子菌亞門、伏革菌屬的白絹伏革菌[Corticiumrolfsii (Sacc.) Curzi.]。該病自然條件下很少出現，只在溼熱環境中，偶見病斑邊緣產生擔子和擔孢子。
對於土傳性病害，輪作是一條重要防治措施。合理輪作，禁止連作或與其他感病寄主輪作，與禾本科作物輪作，或者是水旱輪作，對預防該病很有作用。研究發現，花生與美洲雀稗輪作對白絹病有很好的防治作用。藥農們在長期的生產實踐中也認識到與玉米、紅薯、油菜等作物輪作3年以上，可有效地防治白絹病。
在藥劑防治方面，柳惠慶等室內藥效測定發現，退菌特、克腐特、甲醛、代森錳鋅對菌核萌發有很強的抑制作用，多菌靈、甲基託布津、百菌清亦有一定效果。藥劑進一步試驗結果表明，50%多菌靈、75%百菌清、36%甲醛抑菌圈明顯（抑制菌絲生長）。
在生物防治方面，很多報導認為木黴菌對白絹病有良好效果。何可佳用綠色木黴防治辣椒白絹病，防效達69%~72%；防治魔芋白絹病，防效為65.1%~69.6%。另一種有用的生防真菌是綠粘帚黴，研究發現綠粘帚黴有防治蕃茄、甜椒和馬鈴薯、胡椒白絹病的效果。螢光假單胞菌能抑制大豆白絹病和棉、馬鈴薯枯萎病的發生。
白絹病是一種普發性、毀滅性的病害，其寄主範圍廣，嚴重危害時可導致作物嚴重減產。由於人們對環境問題的日益關注和對綠色食品的需求，生物防治是一個很有發展前途的領域。因此，急需篩選出高效、環保、安全的生防菌，控制白絹病的發病和危害，從而取得良好的經濟和社會效益。
技術實現要素：
本發明為解決現有技術問題，提供了一種白絹病的微生物防治方法。所述方法是通過施用拜萊青黴（Penicillium bilaji）抑制白絹病致病菌小核菌的繁殖，進而達到防治白絹病的效果。
本發明一方面提供了一種植物白絹病的防治方法，是通過在土壤中和/或在植物根部和/或在植物全株施用拜萊青黴菌液實現的。
所述植物白絹病的防治方法，包括：
（1）在植物播種或栽植前，按40-60mL/m2的用量將拜萊青黴菌液均勻噴灑在土壤上，將表層10-20cm厚的土壤進行有效混勻；
（2）在植物栽植後，按100-500mL/株的用量將拜萊青黴菌液灌施於植物根部，15-30天後再按相同用量灌施一遍，連用3-5次；
（3）在白絹病發病初期，按50-100mL/m2的用量將拜萊青黴菌液均勻噴灑在植物全株和土壤中，5-10天後再按相同用量噴灑一遍；連用3-5次。
進一步的，所述拜萊青黴優選拜萊青黴VLD-11（Penicillium bilaji VLD-11），篩選自山東省萊州市彭家磷礦區的土壤，已於2015年11月23日保藏於中國武漢 武漢大學的中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：M2015690。
所述拜萊青黴菌液中孢子含量不低於106CFU/mL。
所述植物優選胡蘿蔔、花生和茉莉中的任意一種。
所述拜萊青黴菌液的製備方法，具體為：先將上述拜萊青黴VLD-11接種到PDA固體培養基上，30℃培養3-4天至孢子成熟，將長好的孢子用適量無菌生理鹽水洗下，轉接入馬鈴薯液體培養基中，充分混合均勻，於30℃培養4-6天，即得拜萊青黴菌液。
本發明提供的方法是通過施用拜萊青黴菌液實現對植物白絹病的防治。所述拜萊青黴VLD-11對翠雀小核菌和齊整小核菌的抑制率分別達到85.9％和82.6%，抑菌效果顯著。所述拜萊青黴VLD-11能有效防治植物白絹病。在對胡蘿蔔白絹病的防治中，通過向全株和土壤噴施所述拜萊青黴100倍稀釋液，可將胡蘿蔔白絹病的發病率降低到0.5%以下，防治效率超過88%；在對花生白絹病的防治中，先利用所述拜萊青黴對土壤進行處理，在白絹病發病初期，再對全株和土壤進行合理噴施，能有效降低花生白絹病的病情指數，50倍稀釋液對花生白絹病的平均防治效率高達83.6%；在對茉莉白絹病的防治中，通過在茉莉花苗根部直接灌施所述拜萊青黴VLD-11，能有效減少後期茉莉白絹病的發病率， 100倍稀釋液對白絹病的防治效率高於85%，效果顯著。
具體實施方式
本發明實施例中選用的拜萊青黴VLD-11（Penicillium bilaji VLD-11），篩選自山東省萊州市彭家磷礦區的土壤，已於2015年11月23日保藏於中國武漢 武漢大學的中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：M2015690。
本發明所應用的試劑可以應用任一款市售產品，下面結合具體實施例對本發明的方法進行詳細描述。
實施例1拜萊青黴抑菌實驗
1、拜萊青黴VLD-11菌液的製備：
先將上述拜萊青黴VLD-11接種到PDA固體培養基上，30℃培養3-4天至孢子成熟，將長好的孢子用適量無菌生理鹽水洗下，轉接入馬鈴薯液體培養基中，充分混合均勻，於30℃培養4天，發酵液中孢子含量約為109CFU/mL。
2、拜萊青黴VLD-11對小核菌的抑制作用 1、將拜萊青黴VLD-11接種至PDA培養基平板，30℃培養7d；
2、取完成步驟1的PDA培養基平板，在菌落前沿用打孔器打取直徑為5mm的菌餅(生防菌餅)； 3、分別將翠雀小核菌和齊整小核菌單菌落接種至PDA培養基平板，30℃培養7d； 4、取完成步驟3的PDA培養基平板，在菌落前沿用打孔器打取直徑為5mm的菌餅(致病菌餅)； 5、取新的PDA培養基平板，用打孔器打取直徑為5mm的培養基，作為對照物。 6、分組處理 （1）試驗組：取新的PDA培養基平板，在上面放置1個生防菌餅和1個致病菌餅，兩個菌餅中心的直線距離為3cm，30℃培養； （2）對照組：取新的PDA培養基平板，在上面放置1個對照物和1個致病菌餅，兩者中心的直線距離為3cm，30℃培養。 7、培養3天後分別測量致病菌的菌落直徑，計算抑制率。
抑制率＝(對照組致病菌菌落直徑-試驗組致病菌菌落直徑)÷對照組致病菌菌落直徑×100％。
結果顯示：拜萊青黴VLD-11對翠雀小核菌和齊整小核菌的抑制率分別達到85.9％和82.6%(三次重複的平均值)，說明所述拜萊青黴VLD-11對小核菌的生長繁殖具有較強的抑制作用，有望應用於白絹病的防治。
實施例2拜萊青黴對胡蘿蔔白絹病的防治效果
1、實驗地點：青島平度南村鎮胡蘿蔔發病區
2、實驗方法
選取三個處理組，每個處理組3壟胡蘿蔔，每壟約100棵胡蘿蔔，處理組之間設立保護行。將上述拜萊青黴VLD-11發酵液分別加水稀釋100倍、200倍、400倍。在胡蘿蔔發病初期，按50-100mL/m2的用量用靜電噴霧器將拜萊青黴菌液對全株及土壤進行充分噴施，間隔5天再按相同用量噴施1次，共防治3次。對照組為噴施相同用量的清水。最後一次防治6天後，檢查胡蘿蔔白絹病的治療情況。
3、結果分析
防治效率的計算公式=［1－（處理的病株率/對照的病株率）］×100%
結果如表1所示：
表1 拜萊青黴VLD-11對胡蘿蔔白絹病的防治效果
從表1的數據可以看出，在胡蘿蔔白絹病發病初期，通過向全株和土壤噴施拜萊青黴VLD-11，能顯著抑制白絹病的發病率，100倍發酵液稀釋液可將胡蘿蔔白絹病的發病率降低到0.5%以下，防治效率超過88%，效果顯著。
實施例3 拜萊青黴VLD-11對花生白絹病的防治效果
1、實驗地點：青島膠南市花生種植髮病區
2、實驗方法：
將拜萊青黴VLD-11發酵液加水分別稀釋50倍、100倍、200倍，在花生播種期，先按40-60mL/m2的用量將拜萊青黴菌液均勻噴灑在土壤上，將表層10-20cm厚的土壤進行有效混勻，然後再進行播種；在花生白絹病發病初期，按50-100mL/m2的用量用靜電噴霧器將拜萊青黴菌液對全株及土壤進行充分噴施，間隔5天再按相同用量噴施1次，共噴施3次。最後一次防治6天後，檢查花生白絹病的治療情況。對照組使用清水。
3、結果分析：
病情指數=［∑（病級值×該級發病株樹）/(發病總株數×最高病級值)］×100%
防治效率=［1-（處理的病情指數/對照的病情指數）］×100%
結果如表2所示：
表2 拜萊青黴VLD-11對花生白絹病的防治效果
從表2的數據可以看出，在花生播種時，先利用本發明提供的拜萊青黴VLD-11對土壤進行處理，在白絹病發病初期，再對全株和土壤進行合理噴施，能有效降低花生白絹病的病情指數。拜萊青黴VLD-11發酵液稀釋50倍時對花生白絹病的平均防治效率高達83.6%，效果顯著。
實施例4 拜萊青黴VLD-11對茉莉白絹病的防治效果
1、實驗地點：
青島市嶗山區枯桃花卉市場茉莉園。
2、實驗設置
設三個處理組，將拜萊青黴VLD-11發酵液加水分別稀釋100倍、200倍、400倍。
2016年4月初，在移栽茉莉花苗後，按300 mL/株的用量分別將拜萊青黴VLD-11稀釋液直接施用到花苗的根部，20天後再施用1次，共施4次。每處理組3次重複，每個重複50株茉莉花。對照組施用清水。
3、茉莉白絹病防治效果統計
2016年11月初，調查各處理組茉莉發病情況，計算茉莉白絹病的防治效果。
病情分級標準：0級-未見枯黃病葉病枝；1級-染病枯黃枝葉比例佔25%以下；3級-染病枯黃枝葉比例≥25%，但≤50%；5級-染病枯黃枝葉比例>50%，但植株未枯死；7級-整株枯死。
病情指數=［∑（病級值×該級發病株樹）/(發病總株數×最高病級值)］×100%；
防治效率=［1-（處理的病情指數/對照的病情指數）］×100%；
結果如表3所示：
表3 拜萊青黴VLD-11對茉莉白絹病的防治效果
從表3的結果可以看出，通過在茉莉花苗根部直接灌施本發明提供的拜萊青黴VLD-11，能有效減少後期茉莉白絹病的發病率，拜萊青黴VLD-11 100倍稀釋液對白絹病的防治效率高於85%，效果顯著。
除了胡蘿蔔，花生和茉莉之外，本發明提供的拜萊青黴VLD-11還可以對辣椒、大蔥、核桃、馬尾松、蘋果、柑橘等植物的白絹病具有顯著的防治效果，防治效率達到80%以上，應用前景廣泛。