一種用無籽刺梨製備發酵型煙用香料的方法
2024-03-02 19:22:15 2
一種用無籽刺梨製備發酵型煙用香料的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬於煙用添加劑製備技術領域，具體設及一種W無巧刺梨為原料，利用微 生物並結合酶技術生產特色煙用香料的方法。
【背景技術】
[0002] 加香加料是捲菸工藝中的關鍵環節，是有效提升捲菸抽吸品質，形成捲菸特有風 格的有效手段之一。目前我國菸草中添加的煙用香料大多是採用傳統方法萃取再加 W調配 所得，雖然生產操作簡單，但也存在香氣單調、改善捲菸抽吸效果不明顯等缺點。利用微生 物發酵及酶製劑處理可W增加傳統提取香料中多種香氣物質的含量，提升香氣豐富性，進 而生產出香氣豐富、高品質的捲菸，滿足消費者對捲菸品質的要求。
[0003] 無巧刺梨(Rosa SteriliS)屬菩薇科，多年生落葉攀援性灌木，高4-6m，生長強旺。 幼果長滿青刺形似海參奇特美觀，果實成熟金黃亮麗，老果呈澄黃色，完全成熟的果實表皮 毛刺基本脫落，果肉比普通刺梨肉厚，呈豔麗的澄黃色，非常脆嫩，香甜爽口，酸味適中，其 雄蕊敗育，幾無花粉，故名無巧刺梨。無巧刺梨營養成分豐富，經分析測定，果實含糖量較 高，是普通刺梨的6倍W上，含酸較低，幾無單寧，富含維生素 C，S0D等抗氧化酶，胡蘿h素含 量較高，還含多種礦物質營養元素。果實酸甜適宜、極少澀味，口感明顯優於普通刺梨。現有 技術中，未見有W無巧刺梨為底物發酵製備煙用香料的報導。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在於針對現有技術的不足，提供一種W無巧刺梨為原料，利用微生 物並結合酶技術，製備發酵型煙用香料的方法。
[0005] 本發明的目的通過W下技術方案予W實現。
[0006] 除非另有說明，本發明所採用的百分數均為質量百分數。
[0007] -種用無巧刺梨製備發酵型煙用香料的方法，包括W下步驟：
[000引 （1)發酵菌株粗酶液製備:將黃綠木黴HLMM-04CGMCC No. 10839菌株活化兩次後， 接種於裝有200mL PDA液體培養基的S角瓶中，在28°C，180巧m下發酵培養5d;所述的PDA液 體培養基：馬鈴馨200g，葡萄糖20g，補蒸饋水至IL，pH7.0，115°C高壓滅菌15min;發酵液過 濾去除菌體，取上清液緩慢加入硫酸氨至80%飽和度，4°C下靜置過夜，離屯、收集沉澱物並 溶於2mL緩衝液中，再用緩衝液進行透析，得到粗酶液備用；所述的緩衝液為：0.02mol/L Na2HP04-Na也P04，pH 7.3;
[0009] (2)將無巧刺梨洗淨後壓棒、過濾、分離汁液與殘渣；
[0010] (3)將果膠酶和糖化酶按1:1的質量比混合，然後在40°C水中溶解活化，再按0.1~ 0.2 %質量比加入無巧刺梨汁液中，40°C酶解2~4h;
[0011] (4)在無巧刺梨殘渣中加入兩倍重量的水，混勻，加入備用的黃綠木黴 酶液進行發酵;粗酶液添加量為無巧刺梨殘渣重量的5%~10%，發酵溫度為40°C，發酵時 間2~地；
[0012] (5)取酶解後的無巧刺梨汁液和發酵後的無巧刺梨殘渣混合，回流提取化，過濾除 渣，將上清液減壓濃縮，即得所需的發酵型煙用香料。
[0013] 本發明具有W下優點:通過酶解和微生物發酵，可W增加無巧刺梨提取物的得率， 豐富香氣物質含量。在捲菸加香中進行應用，與煙氣協調性更好，具有增加煙氣豐富性，改 善口感的作用。
[0014] 保藏生物材料的說明
[0015] 本發明的菌株，已於2015年5月22日，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通 微生物中屯、(CGMCG);該中屯、地址：中國北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生 物研究所。該菌株分類命名為黃綠木黴（Trichoderma aureoViride)HLMM-04，保藏號為 CGMCC No.10839。
【具體實施方式】
[0016] 下面通過實施例對本發明做進一步的詳細說明，但實施例並不是對本發明技術方 案的限定。
[0017]實施例1
[0018] 將黃綠木黴HLMM-04菌株活化兩次後，接種於裝有200mL PDA液體培養基（馬鈴馨 200g，葡萄糖20g，補蒸饋水至IUpH 7.0，115°(：高壓滅菌15111111)的^角瓶中，在28°(：， 18化pm下發酵培養5d。過濾去除菌體。取上清液緩慢加入硫酸氨至80%飽和度，4°C下靜置 過夜，離屯、收集沉澱物並溶於少量緩衝液(0.〇2mol/L化抽P〇4和Na出P〇4的緩衝液，pH 7.3) 中，用同樣的緩衝液進行透析，得到粗酶液。
[0019] 將無巧刺梨洗淨後壓棒，過濾，將汁液與殘渣進行分離。
[0020] 將果膠酶和糖化酶在40°C水中溶解活化後，加入無巧刺梨汁液中進行酶解，果膠 酶和糖化酶添加量均為0.08%，酶解溫度為40°C，酶解時間為化。
[0021] 無巧刺梨殘渣中加入兩倍重量的水，混勻，加入黃綠木黴化MM-04粗酶液進行發 酵。粗酶液添加量為殘渣重量的8%，發酵溫度為40°C，發酵時間化。
[0022] 將經果膠酶、糖化酶酶解後的無巧刺梨汁液和黃綠木黴HLMM-04菌株粗酶液發酵 後的殘渣混合，回流提取化，過濾除渣，將上清液減壓濃縮，即得無巧刺梨發酵煙用香料。
[0023] 實施例2
[0024] 重複實施例1，有W下不同點：果膠酶和糖化酶添加量均為0.05%，酶解溫度為40 °C，酶解時間為化。粗酶液添加量為5%，發酵溫度為40°C，發酵時間化。
[0025] 實施例3
[00%]重複實施例1，有W下不同點：果膠酶和糖化酶添加量均為0.1%，酶解溫度為40 °C，酶解時間為地。粗酶液添加量為10%，發酵溫度為40°C，發酵時間地。
[0027]應用實施例1
[002引將實施例1所得無巧刺梨發酵香料按菸絲重量的0.1%、0.2%、0.3%分別添加到 菸絲上，裝入乾淨的密封袋內，於室溫下放置化後，將菸絲於12(TC烘箱中烘乾，使水分含量 達到將處理後的菸絲及對照放入恆溫恆溼箱中，在溫度22°C、溼度60%條件下 平衡2地，手工卷製成捲菸，由評吸專家組成的評吸小組進行感官評吸。W未發酵無巧刺梨 提取香料為對照。經評吸小組反覆評吸，認為無巧刺梨發酵香料與對照區別明顯，無巧刺梨 發酵香料添加量為0.1%、0.2%時效果最佳，具有提升菸葉香氣豐富性、增加酸香、果香、掩 蓋雜氣、減少刺激的作用。評價結果見表1。
[0029]表1濱橄攬發酵香料評吸結果 [00301
【主權項】
1. 一種用無籽刺梨製備發酵型煙用香料的方法，包括以下步驟： (1) 發酵菌株粗酶液製備:將黃綠木黴HLMM-04 CGMCC No. 10839菌株活化兩次後，接種 於裝有200mL TOA液體培養基的三角瓶中，在28°C，180rpm下發酵培養5d;所述的PDA液體培 養基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，補蒸餾水至1L，pH7.0，115 °C高壓滅菌15min;發酵液過濾去 除菌體，取上清液緩慢加入硫酸氨至80%飽和度，4°C下靜置過夜，離心收集沉澱物並溶於 2mL緩衝液中，再用緩衝液進行透析，得到粗酶液備用；所述的緩衝液為：0.02mol/L Na 2HP〇4-NaH2P〇4,pH 7.3； (2) 將無籽刺梨洗淨後壓榨、過濾、分離汁液與殘渣； (3) 將果膠酶和糖化酶按1:1的質量比混合，然後在40°C水中溶解活化，再按0.1~ 0.2%質量比加入無籽刺梨汁液中，40 °C酶解2~4h; (4) 在無籽刺梨殘渣中加入兩倍重量的水，混勻，加入備用的黃綠木黴HLMM-04粗酶液 進行發酵;粗酶液添加量為無籽刺梨殘渣重量的5%~10 %，發酵溫度為40°C，發酵時間2~ 4h； (5) 取酶解後的無籽刺梨汁液和發酵後的無籽刺梨殘渣混合，回流提取3h，過濾除渣， 將上清液減壓濃縮，即得所需的發酵型煙用香料。
【專利摘要】本發明公開了一種用無籽刺梨製備發酵型煙用香料的方法。將無籽刺梨洗淨後壓榨，過濾，使汁液與殘渣分離。利用果膠酶和糖化酶對無籽刺梨汁液進行酶解，同時將黃綠木黴HLMM?04菌株製備粗酶液，發酵無籽刺梨殘渣。將酶解後的汁液與發酵後的殘渣混合，經回流提取、過濾除渣、減壓濃縮，得無籽刺梨發酵型香料。所述黃綠木黴HLMM?04菌株保藏號為CGMCC No.10839，具有產纖維素酶的能力。所製得的發酵型煙用香料具有明顯的果香，與煙氣協調性較好，具有增加煙氣豐富性，改善口感的作用。CGMCC No. 1083920150522
【IPC分類】C12P1/00, C12R1/885, A24B3/12
【公開號】CN105713924
【申請號】CN201610240446
【發明人】段焰青, 楊璽, 付磊, 蔣舉興, 黨立志, 王文元, 李海濤
【申請人】雲南中煙工業有限責任公司