一種甘草發酵所得煙用香料及其應用的製作方法

2024-03-02 20:39:15

一種甘草發酵所得煙用香料及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種甘草發酵所得煙用香料及其應用。從烤菸新鮮菸葉中分離了一株優勢微生物，分類命名為長孢洛德酵母(Lodderomyces elongisporus).CGMCC 6645。將該酵母接種到以甘草為原料的培養基中進行發酵培養。培養之後的發酵產物具有天然香味，含有2,4-二羥基苯乙酮、2,4,5-三甲基苯酚、3,4-二甲基苯甲醇、苯乙醇等多種致香成分。將該煙用香料添加到菸絲中，可以增加捲菸的香氣質和保潤效果，改善捲菸品質。煙氣的甜韻感豐富，地方性雜氣和木質氣減少，喉部舒適性增加，餘味較為舒適，口腔收斂較強。整個生產工藝簡單、實用，具有良好的應用前景。
CGMCC No.6645
2012.10.08
【專利說明】一種甘草發酵所得煙用香料及其應用

【技術領域】
[0001] 本發明屬於捲菸香精香料【技術領域】，具體是涉及一種用酵母菌發酵甘草後得到的 煙用香料。同時，本發明還涉及該煙用香料在捲菸生產中的具體應用。

【背景技術】
[0002] 在菸草行業中，香精香料對捲菸產品的口味起著決定性作用。現今生產的香料、香 精中約85%的產品是通過化學合成方法得到的。但是用化學法合成的香料不僅合成較困 難、且大量的使用會給人們的健康造成影響。隨著人們生活水平的提高，對香料的需求趨向 於天然、健康、安全、營養和多功能性。
[0003] 天然香精香料是高價值的精細化工產品，而原來從天然動、植物提取的天然香料， 由於原料有限，提取成本高，遠遠滿足不了捲菸香料市場的需求。利用微生物發酵技術可以 製備香料或進行香料的轉化，製備得到的香料為天然級產品，在提高香料產品質量的同時， 節約能源、降低成本，實現了天然香料加工技術的革命。因此，人們對香料的生物合成越來 越感興趣，生物技術將在天然香精香料研究和製備中發揮越來越大的作用。
[0004] 甘草為豆科植物甘草的根，是常用中藥之一，有補脾益氣、清熱解毒、潤肺止咳、緩 急止痛、調和諸藥之功效。現有技術中，以甘草為底物，以產香酵母菌進行發酵，製備煙用香 料添加劑的研究尚未見報導。


【發明內容】

[0005] 本發明的目的在於針對現有技術的不足，提供一種以特殊的產香酵母發酵甘草後 製備得到的煙用香料，該香料符合天然香料的要求，能夠與煙香形成良好的配伍。
[0006] 本發明的目的還在於提供所述煙用香料在捲菸生產中的具體應用。
[0007] 本發明的目的通過下述技術方案予以實現。
[0008] 除非另有說明，本發明中所採用的百分數均為質量百分數。
[0009] 本發明從烤菸新鮮菸葉中分離了一株優勢微生物0F-08作為試驗菌種，對其進 行了 26SrDNA分析，鑑定結果表明該細菌屬於長孢洛德酵母，其分類命名為Lodderomyces elongisporus，保藏號為 CGMCC No. 6645。
[0010] 本發明所述的長孢洛德酵母（Lodderomyces elongisporus)菌株的形態學特徵 為：菌落較大，呈卵球形，奶白色凸起，菌落比較粗糙，邊緣整齊；在液體培養基中，培養液 澄清有沉澱，且有菌蹼。
[0011] 本發明所述的長孢洛德酵母0F-08的分子鑑定特徵為：利用通用引物NL-I (5'CAT ATCAATAAGCGGAGGAAAAG3'）和 NL-4 (5' GGTCCGTGITTCAAGACGG3'），以長孢洛德酵母 0F-08 的 基因組DNA作為模板擴增得到600bp左右的PCR產物，回收測序、校正之後得到的0F-08菌 株的部分26SrDNA基因序列578bp，該序列已經提交國際核苷酸序列資料庫（GenBank)，序 列索引號為JQ916053。
[0012] 利用所述長孢洛德酵母菌發酵甘草，製備得到一種煙用香料，其特徵在於：將甘草 片或甘草粉與水按1:5?1:50的質量比配製成發酵培養基，高壓滅菌後按1%的質量比接 種長孢洛德酵母CGMCC6645,發酵培養2天後對發酵液進行過濾濃縮，即得所需煙用香料。
[0013] 所述的甘草物料與水的質量比優選為1:20。
[0014] 所述甘草發酵所得煙用香料在捲菸生產中的應用，具體為：在捲菸制絲加料階段， 將所述煙用香料噴灑在預先平衡好的菸絲上，添加量為8?12g/箱菸絲；其中，菸絲平衡的 條件為：溫度22±2°C，相對溼度60% ±2%，平衡時間24h。
[0015] 與現有技術相比，本發明具有以下突出的優點：
[0016] (1)通過長孢洛德酵母菌發酵甘草得到的煙用香料，具有天然香料的香味，通過 GC-MS檢測，結果表明發酵液中含有2, 4-二羥基苯乙酮、2, 4, 5-三甲基苯酚、3, 4-二甲基 苯甲醇、苯乙醇等物質成分；將該香料添加到捲菸中進行評吸，評吸結果表明香氣量較為充 足，甜韻感豐富，地方性雜氣、木質氣減少，喉部舒適性增加，餘味較為舒適，口腔收斂較強。
[0017] (2)本發明合理利用甘草的藥用功效，而且可以增加捲菸的香氣質和保潤效果，改 善捲菸品質。
[0018] (3)原料價格低廉，來源豐富；所用菌株易於保存，易於活化和發酵；
[0019] (4)生產工藝簡單、操作性、規範性及可控性強，便於實現大規模工業化生產，具有 良好的開發應用前景。
[0020] 保藏生物材料的說明
[0021] 本發明的菌株，已於2012年10月08日，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會 普通微生物中心（CGMCC);該中心地址：中國北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研 究所。該菌株分類命名為長孢洛德酵母（Lodderomyces elongisporus);保藏號為CGMCC No.6645〇

【具體實施方式】
[0022] 為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下通過實施例及試驗數 據，對本發明作進一步的詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發 明，並不用於限定本發明。
[0023] 實施例1
[0024] -長孢洛德酵母菌0F-08 (L. elongisporus 0F-08)的篩選方法。
[0025] 菸葉樣品用自來水衝洗3_5min並用細毛刷清除葉片表面汙垢。葉片自然晾乾後， 隨機選5片葉子，在健康部位（無病斑）用無菌剪刀隨機取下3X3cm 2的組織塊3-5片，混 合後用無菌水漂洗5min並用無菌濾紙吸乾水分。稱取IOg葉塊，按下述程序進行表面消 毒：75%的無菌酒精浸泡lmin，無菌水清洗3次，並用無菌濾紙吸乾水分，避免酒精殘留； 再用有效氯含量為3 %的NaClO溶液浸泡2min，無菌水清洗後吸乾水分，置於超淨工作檯中 備用。取200 μ L最後一次洗滌組織的無菌水塗布在YH)培養基平板，28°C培養2d後無酵 母菌菌落出現，表明消毒徹底。將經過表面消毒的組織塊放在無菌研缽中研磨至漿狀，加入 IOmL無菌水，混勻後用3層無菌擦鏡紙過濾，獲得的濾液用無菌水稀釋至ΙΟ'ΙΟ'ΚΓ3。每 一稀釋度取200 μ L塗布一個YH)培養基平板，每個濃度設定3個重複，三個濃度共9皿。塗 布平板在超淨工作檯中放置5h後於32°C下倒置培養2d，統計每平板的微生物菌落數，並對 所得的內生酵母進行純化、保存和鑑定，得到長孢洛德酵母（L. elongisporus 0F-08)。
[0026] 實施例2
[0027] --發酵甘草材料
[0028] 取適量甘草材料（包括甘草片、甘草粉等），分別用蒸餾水稀釋5倍、10倍、15倍、 20倍、30倍和50倍，高壓滅菌後按1 %的接種量接入長孢洛德酵母菌CGMCC6645對其進行 發酵，培養兩天後觀察發酵液變化情況，結果表明，發酵液具有天然香味。通過比較不同的 甘草材料發酵情況，結果表明，發酵甘草粉所得的香料，甜韻感豐富，香氣比較濃厚。並且， 發酵材料和水的比例不同，發酵液的變化情況不一樣，產香效果也不一樣。甘草材料和水的 比例為1:20時，發酵效果比較明顯。
[0029] 實施例3
[0030] --發酵液的萃取
[0031] 將實施例2所得的發酵液過濾除渣後，用二氯甲烷溶劑同時蒸餾萃取3h，萃取液 用無水硫酸鈉乾燥,置於4°C過夜，過濾，濾液導入濃縮瓶中用Vigreux株濃縮至約lml，濃 縮液用於GC-MS分析。對照為不接種酵母菌的培養基。
[0032] --發酵液物質成分測定
[0033] 發酵液物質成分檢測結果如下（詳見表1)。在經長孢洛德酵母菌CGMCC6645處理 過的發酵液中，含量較多的成分為3, 4-二甲基苯甲醇，為7. 66 %，其次為苯乙醇，在物質 總成分含量中佔7. 21 %。結果表明，長孢洛德酵母菌CGMCC6645對甘草材料的發酵可以產 生多種香料物質成分，在香料行業具有應用前景。
[0034] 表1甘草材料發酵液物質成分含量檢測結果

【權利要求】
1. 一種甘草發酵所得煙用香料，其特徵在於：將甘草片或甘草粉與水按1:5?1:50的 質量比配製成發酵培養基，高壓滅菌後按1 %的質量比接種長孢洛德酵母CGMCC6645,發酵 培養2天後對發酵液進行過濾濃縮，即得所需煙用香料。
2. 根據權利要求1所述的甘草發酵所得煙用香料，其特徵在於：所述的甘草物料與水 的質量比優選為1:20。
3. 權利要求1所述甘草發酵所得煙用香料在捲菸生產中的應用，具體為：在捲菸制絲 加料階段，將所述煙用香料噴灑在預先平衡好的菸絲上，添加量為8?12g/箱菸絲；其中， 平衡的條件為：溫度22±2°C，相對溼度60% ±2%，平衡時間24h。
【文檔編號】C12R1/645GK104223352SQ201410408762
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年8月19日 優先權日:2014年8月19日
【發明者】段焰青, 者為, 李青青, 葉靈, 張偉, 夏建軍, 黨立志, 王文元 申請人:雲南中煙工業有限責任公司