防治農業害蟲的木香提取物的製作方法

2024-03-03 02:58:15

專利名稱：：防治農業害蟲的木香提取物的製作方法
技術領域：
：本發明屬於生物農藥開發領域，利用木香(Aucklandial即paDecne.)提取物作為新型殺蟲劑防治稻飛蝨等多種農業害蟲。二
背景技術：
：稻飛蝨是水稻主要害蟲，包括褐飛蝨(Nil即arvatalugensStM)、灰飛蝨(LaodelphaxstriatellusFall6n)等，具有突發性、隱蔽性和毀滅性的為害特點，不僅直接吸食為害植株，灰飛蝨還傳播多種植物病毒病。自1982年以來，稻飛蝨在我國有8次大發生，對水稻生產造成嚴重危害。在應急防控措施中，化學防治一直佔據主要位置，但長期大量使用化學藥劑不僅使生態環境失衡，而且使許多害蟲對化學藥劑產生了抗藥性，致使害蟲再猖獗問題嚴重。如上世紀90年代吡蟲啉還是公認的防治褐飛蝨(NilaparvatalugensSt&l)高效殺蟲劑，但是十年後的今天，吡蟲啉在我國大多數稻區對稻飛蝨的防效均較差，已不推薦使用。隨著人們對環境、可持續發展、食品安全等問題的重視，對植物源農藥的開發已經提上日程。植物源農藥較化學農藥，具有源於自然、易降解、在環境中不濃縮富集、無汙染等優點備受人們關注。該類生物農藥的有效成分多，是天然的混配複合物，對害蟲的作用方式多樣，因而害蟲不易產生抗藥性，對非靶標生物亦比較安全。目前，世界各國已對3000多種植物的殺蟲活性進行了研究，其中不乏傳統中草藥，主要包括楝科(Meliaceae)植物印楝、川楝，菊科(Compositae)植物除蟲菊，豆科(Leguminosae)植物魚藤、苦豆子等，杜鵑花科(Ericaceae)植物黃杜鵑，衛矛科(Celastraceae)植物雷公藤、苦皮藤，唇形科(Labiatae)植物，瑞香科(Thymelaeaceae)植物瑞香狼毒等。國內外報導中草藥提取物對害蟲或蟎具有生物活性的，有印楝、川楝、苦楝、除蟲菊、魚藤、雷公藤、苦皮藤、百部、毒藜、大黃、藜蘆、苦參、銀杏等，其中印楝、川楝、苦楝、除蟲菊、魚藤、雷公藤、苦皮藤等植物提取液已商業化生產，用於倉儲、蔬菜及大田作物害蟲防治。在藥物發展的早期階段，利用天然產物防治作物病蟲草害幾乎是唯一選擇。從天然物質中開發藥物和農藥已經有著十分悠久的歷史。例如，三大植物性殺蟲劑(除蟲菊、魚藤和菸草)已經被使用了數百年，但由於早期天然產物的相關基礎學科的發展相對較為緩慢，隨著提取及分離分析科學的不斷發展和一系列先進的結構鑑定手段的廣泛採用，天然產物的研究開發邁上了一個新的臺階。時至今日，從動植物和微生物體內分離、鑑定具有生物活性的物質，仍然是獲得先導化合物的重要手段。各種分離手段如層析法(薄層層析、氣象層析和高效液相層析等)，電泳、凝膠過濾等方法的採用和包括物質結構的四大譜(紅外光譜、紫外掃描儀、核磁共振、質譜)的儀器分析方法用於確定天然產物的化學結構、絕對構型和構象，使分離鑑定天然產物的研究工作能夠迅速、準確地完成，微量複雜結構成分也因使用先進的鑑定手段而得以成為有價值的先導化合物。已有的系列室內生物活性和生理生化指標的測定結果。以及用藥後試蟲行為變化及中毒症狀等方面的觀察，發現植物源殺蟲劑對害蟲的作用方式多種多樣，例如胃毒、觸殺、拒食、忌避、忌產卵、引誘、燻殺、麻醉、抑制生長發育等。木香(Aucklandiala卯aDecne.)為菊科植物木香的乾燥根，醫學上主要用於行氣止痛，用於脾胃氣滯所致的脘腹脹痛、食少嘔吐；理氣疏肝，用於肝膽氣滯引起的脅痛；健脾消滯，可調胃腸滯氣，治療腹痛、腹瀉、裡急後重。而用於對農業害蟲的觸殺活性的研究和應用還未見報導。三
發明內容1、發明目的旨在發現新型、高效、安全的生物農藥防治稻飛蝨、蚜蟲等農業害蟲，為生產上提供殺蟲速度快、環保、成本低的植物源農藥。2、技術方案(1)植物源殺蟲活性提取物的篩選利用不同極性的溶劑(水、乙醇和石油醚)分別浸提多種中草藥，首先以褐飛蝨為測定對象，篩選出具有明顯殺蟲活性的高效植物源提取物。(2)對篩選出來的具有明顯殺蟲活性的新型植物源提取物進行殺蟲譜分析對篩選出來的具有高效殺蟲活性的新型植物提取物(木香提取物)，分別採用飼毒法和噴霧法，進一步測定其對不同類別害蟲如甜菜夜蛾(鱗翅目)、褐飛蝨(半翅目)、灰飛蝨(半翅目)等的殺蟲活性，以確定其殺蟲譜。(3)主要殺蟲活性成分分析進一步採取液-液萃取法，明確木香提取物中主要殺蟲活性成分的溶解特性、極性等。3、有益效果植物源農藥有作用方式多樣、環境風險低等多種優點，是綠色農藥研究與創製的重點。完成之後可以獲得可能商品化的中草藥殺蟲劑，這樣就可以解決目前稻飛蝨防治中殺蟲劑用量大、品種單一的問題，從而減少化學農藥的使用，降低環境風險。四具體實施方式(—)試驗材料1、供試昆蟲甜菜夜蛾(SpodopteraexiguaHiib證)、褐飛蝨(NilaparvatalugensSt&l)、灰飛蝨(XaodelphaxstriatellusFall6n)禾口岈蟲(Xip即hissp.)均為實驗室長期飼養多代的敏感品系。2、供試木香購自南京同仁堂藥店。(l)提取的流程見說明書附圖1，圖1為提取流程圖。(2)0.8g/ml提取物配製(a)抽濾後溶液體積VI，濃度為0.4g/ml(b)蒸完後溶劑溶液的體積V2(c)在V2中用蒸餾水定容至Vl/2，即最後提取物濃度為0.8g/ml(二)對稻飛蝨觸殺活性的測定方法採用噴霧法。待稻苗長到7天後，在每個杯子中接入10頭3齡試蟲，每個處理設四個重複，然後用Potter噴霧塔噴霧，處理後置人工氣候箱內(28士rC，L:D=16:8)4觀察。分別於24、48、72、96、120小時後檢查結果，根據死亡率判斷木香提取物對稻飛蝨的殺蟲活性。以毛筆觸動試蟲的足和觸角等附肢，完全不動視為死亡。校正死亡率用abbott公式計算。毒力回歸方程、致死中濃度(LC5。)用DPSv7.05處理得到。相對毒力，以最大LCs。的藥劑的相對毒力為l，用其他各藥劑LC5。值除以該藥劑的LC5。值計算獲得。(三)對甜菜夜蛾3齡幼蟲胃毒作用測定採用飼料載毒法。將飼料切成大小一致放入24孔板裡，再往飼料裡加入15iil中藥提取物，待其完全滲入飼料後，每孔接入1頭3齡幼蟲，分別於24、48、72、96、120小時後檢查結果。以幼蟲身體發僵、觸及全身不動者視為死亡。實施效果實施例1:室內生測結果(表1)表明，13種中草藥對褐飛蝨均具有很好的殺蟲效果，其中木香首次報導用於農業害蟲的防治，是一種新型的植物源提取物。木香的石油醚提取物對褐飛蝨具有很強的觸殺活性，24h後能將所有試蟲殺死，其乙醇提取物對褐飛蝨的觸殺活性略低，24h後校正死亡率為81.08X，其水提取物對褐飛蝨的觸殺活性最低，96h後的校正死亡率為65.79%。表明木香的乙醇和石油醚提取物對褐飛蝨具有很強的觸殺活性。表113種中草藥提取物對褐飛蝨3齡若蟲的觸殺活性a)Table1Contactactivityofextractsof13Chinesetraditionalherbalplantstothe3rdnymphsofNilaparvatalugenstableseeoriginaldocumentpage6a)劑量為0.8g/ml，表2同。b)校正死亡率，數據為4次重複平均數值；同列數據後標有相同字母者表示在5%水平上差異不顯著(匿RT)，表2同。實施例2:室內生測結果(表2)表明，木香的石油醚提取物24h後能將所有供試灰飛蝨殺死，其乙醇提取物對灰飛蝨觸殺活性略低，48h的校正死亡率達92.11%。表明木香的乙醇和石油醚提取物對灰飛蝨具有很強的觸殺活性。表2木香提取物對灰飛蝨3齡若蟲的觸殺活性Table2ContactactivityofextractsofAucklandialappaDecnetothe3rdnymphsofLaode/phgaxstriatellustableseeoriginaldocumentpage7實施例3:室內測定結果表明木香石油醚提取物對褐飛蝨3齡若蟲的LC5。為0.0033g/ml，相對毒力為25.O，表明木香對褐飛蝨具有很高的觸殺活性。實施例4:室內生測結果(表3)表明，木香的乙醇和石油醚提取物對甜菜夜蛾具有一定的胃毒作用。表3木香提取物對甜菜夜蛾3齡幼蟲的胃毒作用Table3StomachactivityofextractsofAucklandialappaDecnetothe3rdlarvaofSpodopteraexigimtableseeoriginaldocumentpage7實施例5:室內生測結果還發現，木香的乙醇和石油醚提取物不僅對甜菜夜蛾和稻飛蝨具有殺蟲活性，同時在濃度為0.0020-0.0050g/ml時還對菜岈(岈蟲混合種群)等具有70-95%的殺蟲效果。實施例6採用系統溶劑萃取法分析木香的活性物質特點。在304(TC水浴條件下用蒸餾水將木香提取物溶解，分別用等體積的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，合併同種溶劑的萃取液並蒸乾溶劑，得到油狀或者膏狀物質即為木香的有機溶劑萃取物，保存於4t:冰箱中備用。結果(表3)表明木香的氯仿萃取物對稻飛蝨3齡若蟲的觸殺效果最好，12h後將褐飛蝨完全殺死。其次是石油醚萃和乙酸乙酯取物，水萃取物效果最不明顯。說明木香對褐飛蝨觸殺活性物質最主要集中在氯仿萃取液中，這與前面的篩選結果一致。表3木香萃取物對褐飛蝨3齡若蟲的活性測定Table4ContracttoxicityofisolationsofAucklandialappaDecnetothe3rdnymphsofNilaparvatalugens種名tableseeoriginaldocumentpage81、木香的乙醇和石油醚提取物對稻飛蝨和蚜蟲具有很強的觸殺活性。2、木香的乙醇和石油醚提取物對褐飛蝨和灰飛蝨的致死終濃度較低，具有殺蟲效果好，見效快等特點。3、木香的乙醇和石油醚提取物對甜菜夜蛾也具有一定的殺蟲活性。8權利要求一種高效、環保的防治植物害蟲的植物源殺蟲提取物，其特徵在於所述植物源提取物為鶴蝨(CarpesiumabrotanoidesL.)的溶劑提取物，可防治褐飛蝨、灰飛蝨、蚜蟲、甜菜夜蛾等農業害蟲。全文摘要本發明涉及一種高效防治稻飛蝨的環保型植物源殺蟲劑，它的殺蟲活性成分為木香的石油醚、氯仿、乙醇等溶劑提取物。該植物源殺蟲活性成分的優點是(1)對稻飛蝨具有很強的觸殺活性，24h內能將稻飛蝨全部殺死；(2)一藥多治，能防治褐飛蝨、灰飛蝨、甜菜夜蛾、蚜蟲等害蟲；(3)為天然植物源成分，替代化學農藥，可降低生態環境汙染和稻米、水產中化學農藥殘留。文檔編號A01P7/04GK101785484SQ200910232940公開日2010年7月28日申請日期2009年10月19日優先權日2009年10月19日發明者劉寶生,張志春,方繼朝,李秀梅,王利華,郭慧芳申請人:江蘇省農業科學院