人白細胞介素-12的編碼基因、真核宿主細胞和表達方法
2024-04-04 10:56:05 1
人白細胞介素-12的編碼基因、真核宿主細胞和表達方法
【專利摘要】本發明提供了人白細胞介素-12的編碼基因、真核宿主細胞和表達方法。具體而言，本發明的人白細胞介素-12的編碼基因包含(a)編碼人白細胞介素-12的P35亞基的核苷酸序列SEQ?ID?NO:9或其互補核苷酸序列以及編碼人白細胞介素-12的P40亞基的SEQ?ID?NO:10或其互補核苷酸序列；或者(b)編碼人白細胞介素-12的P35亞基的核苷酸序列SEQ?ID?NO:21或其互補核苷酸序列以及編碼人白細胞介素-12的P40亞基的SEQ?ID?NO:22或其互補核苷酸序列。本發明的核苷酸序列能夠使IL-12在真核宿主細胞，特別是中國倉鼠卵巢細胞(CHO細胞)中穩定高效表達，尤其是在無血清條件下穩定高效表達。
【專利說明】人白細胞介素-12的編碼基因、真核宿主細胞和表達方法
[0001]本申請是分案申請，其原申請的中國國家申請號為201210345021.8，申請日為 2012年9月17日，發明名稱為「人白細胞介素-12的編碼基因、真核宿主細胞和表達方法」。
【技術領域】
[0002]本發明屬於生物工程【技術領域】，涉及人白細胞介素-12 (IL-12)的編碼基因、真核宿主細胞和表達方法，具體而言，本發明涉及對人白細胞介素-12的編碼基因進行優化，從而能夠使IL-12在真核宿主細胞，特別是中國倉鼠卵巢細胞(CH0細胞)中穩定高效表達， 尤其是在無血清條件下穩定聞效表達。 【背景技術】
[0003]白細胞介素-12 (IL-12)於1989年和1990由Trinchieri和Gately等發現，起初命名為NK細胞刺激因子(NKSF)和細胞毒淋巴細胞成熟因子(CLMF)，1991年統一命名為白介素-12。
[0004]白細胞介素-12是一種70kDa的異二聚體，由兩條共價連接的多肽鏈組成，一條為 35kDa (P35亞基)，另一條為40kDa (P40亞基)。P35亞基由多種細胞產生，包括T、B淋巴細胞、NK細胞和大單核細胞等，而P40鏈主要由激活的單核細胞和B細胞產生，P35和P40 單獨存在時均無任何IL-12的生物活性。
[0005]IL-12具有調節和參與免疫應答細胞的活性，刺激NK細胞和T細胞產生幹擾素-伽瑪(IFN-Y )，促進Thl細胞的分化，是連接固有免疫和獲得性免疫的核心因子。同時，
[0006]IL-12可促進造血功能的恢復，用於機體造血功能的降低導致的疾病，如急性放射病、放射性治療、化學治療等。另外，IL-12還具有抗腫瘤，抗病毒的效果，具有良好的臨床應用前景。
[0007]在目前報導的利用真核細胞表達產生重組IL-12的方法中，重組IL-12的表達強度仍不令人滿意。
[0008]以下表1列出了現有技術相關技術的培養條件和最高產量。
[0009]
【權利要求】
1.人白細胞介素-12的編碼基因，其特徵在於，所述編碼基因包含: 編碼人白細胞介素-12的P35亞基的核苷酸序列SEQ ID NO:21或其互補核苷酸序列以及編碼人白細胞介素-12的P40亞基的SEQ ID NO:22或其互補核苷酸序列。
2.如權利要求1所述的編碼基因，其特徵在於，所述編碼基因包含編碼P35亞基的核苷酸序列SEQ ID N0:21以及編碼P40亞基的SEQ ID N0:22。
3.—種表達人白細胞介素-12的真核宿主細胞，其特徵在於，所述真核宿主細胞包含: 具有編碼P35亞基的核苷酸序列SEQ ID NO:21或其互補核苷酸序列的第一表達載體和具有編碼P40亞基的核苷酸序列SEQ ID NO:22或其互補核苷酸序列的第二表達載體。
4.如權利要求3所述的真核宿主細胞，其特徵在於，所述真核宿主細胞包含具有編碼P35亞基的核苷酸序列SEQ ID NO: 21的第一表達載體和具有編碼P40亞基的SEQ ID NO: 22的第二表達載體。
5.如權利要求3或4所述的真核宿主細胞，其特徵在於，所述真核宿主細胞為中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，優選為CH0-DG44或CH0-3E7細胞。
6.如權利要求3或4所述的真核宿主細胞，其特徵在於，所述第一表達載體為pGN-35質粒。
7.如權利要求3或4所述的真核宿主細胞，其特徵在於，所述第二表達載體為PCDNA3.1 質粒。
8.一種人白細胞介素-12的表達方法，其特徵在於，所述方法包括: 分別構建包含編碼P35亞基的核苷酸序列SEQ ID NO:21或其互補核苷酸序列的pGN-35質粒和包含編碼P40亞基的核苷酸序列SEQ ID NO:22或其互補核苷酸序列的PCDNA3.1 質粒； 然後用所述PGN-35質粒和所述pCDNA3.1質粒共轉染真核宿主細胞，優選為中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，更優選為CH0-DG44或CH0-3E7細胞。
【文檔編號】C12N15/24GK103555734SQ201310507082
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2012年9月17日 優先權日:2012年9月17日
【發明者】趙毅, 李友海, 章方良, 柳振宇 申請人:青島康立泰藥業有限公司