一種自由狀態下非人靈長類動物的腸道菌群收集方法與流程

2024-03-30 12:59:05

本發明涉及動物腸道菌群的收集技術領域，具體涉及自由狀態下非人靈長類動物的腸道菌群收集方法。

背景技術：

人體腸道是一個多元化和充滿活力的微生態系統，擁有很多種細菌腸道菌群。腸道菌群對人類健康有著重要的影響，已被報導與心腦血管疾病、肥胖、糖尿病、愛滋病、自閉症、抑鬱症及老年痴呆症等有密切關聯，因此，腸道菌群研究成為近年來的研究熱點。

非人靈長類動物(主要為猴)由於其在親緣關係上與人最接近，與人類的遺傳物質有75％-85％的同源性，在生理結構以及免疫代謝方面與人類高度的相似，在腦科學腦認知研究中相比其他的實驗動物具有強大的優勢。因此在腸道菌群的研究當中，作為最接近人類的動物模型，非人靈長類腸道菌群(又稱「糞便細菌」、「糞菌」)的收集就至關重要。

目前非人靈長類腸道菌群收集的方法包括：1)撿拾自由活動動物的糞便；2)麻醉狀態下用藥棉籤插入肛門採取直腸內的糞菌；3)屍體解剖時直接在小腸、直腸處取樣。方法1)通常是在固定時間(每天早晨)撿拾猴籠底部的糞便，該方法可以長期重複採樣、採樣量高；但存在的缺點是掉落在猴籠底部的糞便通常已與尿液混合在一起，變成糊狀，其潮溼的質地和長時間的存放不利於保持腸道菌群基因樣本的完整性。方法2)通常是用棉籤深入肛門到達直腸採取糞菌，該方法可以短時間內可以將腸道菌群樣品迅速冷凍，保證菌群基因樣本的完整性，但藥棉籤採樣量小，採樣效率低。方法3)既可以保證菌群基因樣本的完整性也 能保證採樣量，但由於動物已處死，無法長期重複取樣，長時程對動物腸道菌群的檢測變得不可能。

因此，有必要提供一種取樣效率高、可重複採用、可保持在菌群基因樣本完整性的腸道菌群採集方法。

技術實現要素：

有鑑於此，本發明提供了一種自由狀態下非人靈長類動物的腸道菌群收集方法。該方法可以在對自由活動狀態下的非人靈長類動物的腸道菌群進行取樣時，避免腸道菌群樣品與尿液混合變成糊狀，有效提高菌群基因樣本完整性，從而使該方法兼具重複採樣性好、採樣量高、菌群基因樣本完整性好的優點。

本發明提供的自由狀態下非人靈長類動物的腸道菌群收集方法，包括以下步驟：

(1)在非人靈長類動物的飼養容器的底部放置一柔性墊巾，以及承載所述柔性墊巾的硬質墊板，其中，所述柔性墊巾包括吸水層和防水層，所述防水層與所述硬質墊板接觸；

(2)觀察到所述動物排便後，從所述飼養容器中取出所述硬質墊板及柔性墊巾，收集所述柔性墊巾上的腸道菌群樣品。

本發明中，所述柔性墊巾的上層為吸水層，下層為防水層，當自由活動狀態下的動物排便、排尿掉落到所述飼養容器底部後，尿液可被吸水層吸收，避免帶腸道菌群的糞便與尿液混合變成糊狀，以免造成部分腸道菌群的死亡，同時下層的防水層又可避免帶腸道菌群的糞便中原有的水分被吸乾，便於保持糞便原有的乾燥度，所述柔性墊巾可有效保持糞菌樣品的形態完整性，提高菌群基因樣本的完整性；下層的硬質墊板起承託柔性墊巾的作用，在拖拉所述硬質墊板的過程中，由於所述柔性墊巾被支撐在所述硬質墊板上，帶有腸道菌群樣品的柔性墊巾也被帶出所述飼養容器，便於進行腸道菌群樣品的收集和低溫存儲，同時也利於同一動物的不同糞便堆的分別取樣、儲存和分析。

優選地，所述吸水層的材質包括植物性纖維材料絨毛漿、棉花和高分子吸水 樹脂中的一種或多種，但不限於此。

優選地，所述防水層包括油氈、聚乙烯膜和無紡布中的一種或多種，但不限於此

優選地，所述吸水層和防水層是通過粘附或縫合而連接在一起。

本發明一實施方式中，所述柔性墊巾可以為常用的紙尿墊或手術墊巾。

優選地，所述硬質墊板包括木板、pvc板、硬質塑料板和硬質合金板的一種或多種，但不限於此。

優選地，所述飼養容器包括飼養籠。

本發明的有益效果是：

(1)柔性墊巾的上層吸水，下層防水，自由活動狀態下的動物排便、排尿掉落到柔性墊巾後，尿液被吸水層吸收，避免糞便與尿液混合變成糊狀，防水層又可保持糞菌的原有乾燥度，利於保持腸道菌群樣品的完整性；

(2)觀察到動物排便後，下層硬質墊板可便於承託並取出柔性墊巾，便於收集附著在吸水層上的腸道菌群樣品，同時也利於同一個動物的不同糞便堆的分別取樣，儲存和分析。

附圖說明

圖1為本發明實施例中自由狀態下非人靈長類動物的腸道菌群收集方法的示意圖，1為飼養猴籠，2為柔性墊巾(吸水層和防水層結構未示出)，3為硬質墊板，4為獼猴糞便。

具體實施方式

以下所述是本發明的優選實施方式，應當指出，對於本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也視為本發明的保護範圍。

實施例1

一種自由狀態下非人靈長類動物的腸道菌群收集方法，包括以下步驟：

(1)在非人靈長類動物的飼養容器的底部放置一硬質墊板，並在所述硬質墊板之上放置一柔性墊巾，其中，所述柔性墊巾包括吸水層和防水層，所述防水層與所述硬質墊板接觸；

(2)觀察到非人靈長類動物排便後，從所述飼養容器中中拖拉所述硬質墊板，硬質墊板及支撐在其上的柔性墊巾被帶出猴籠，收集所述柔性墊巾上的腸道菌群樣品。

本發明實施例中，所述非人靈長類動物為獼猴，所述飼養容器為飼養猴籠。

本發明實施例中，所述吸水層的材質包括植物性纖維材料絨毛漿、棉花和高分子吸水樹脂中的一種或多種。

本實施方式中，所述吸水層為純木漿和高吸水樹脂(sap)構成的複合結構。

本發明實施例中，所述防水層包括油氈、聚乙烯膜和無紡布中的一種或多種。

本實施方式中，所述防水層為防水無紡布。

本實施方式中，所述吸水層和防水層是縫合在一起。

作為本發明的另外一種實施可能，可採用醫院用紙尿墊作為所述柔性墊布。

本發明實施例中，所述硬質墊板包括木板、pvc板、硬質塑料板和硬質合金板的一種或多種。

本實施方式中，所述硬質墊板為聚氟乙烯(pvc)。

本發明中，所述柔性墊巾的上層為吸水層，下層為防水層，當自由活動狀態下的猴子的排便、排尿掉落到飼養猴籠底部後，尿液可被吸水層吸收，避免帶腸道菌群的糞便與尿液混合變成糊狀，以免造成部分腸道菌群的死亡，同時下層的防水層又可避免帶腸道菌群的糞便中原有的水分被吸乾，便於保持糞便原有的乾燥度，即所述柔性墊巾可有效保持糞菌樣品的形態完整性，提高菌群基因樣本的完整性；下層的硬質墊板起承託柔性墊巾的作用，在拖拉所述硬質墊板的過程中，帶有腸道菌群樣品的柔性墊巾也被帶出所述飼養容器，便於進行腸道菌群樣品的收集和低溫存儲，同時也利於同一動物的不同糞便堆的分別取樣、儲存和分析。

本發明中提供的所述腸道菌群收集方法，可以兼具腸道菌群樣品重複採樣性高、採樣量高、菌群基因樣本完整性好的優點。

以上所述實施例僅表達了本發明的一種實施方式，其描述較為具體和詳細，但並不能因此而理解為對本發明專利範圍的限制。應當指出的是，對於本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬於本發明的保護範圍。因此，本發明專利的保護範圍應以所附權利要求為準。