生薑及其炮製品中姜辣素成分的檢測方法與流程
2024-03-31 06:12:05
本發明屬於中藥成分檢測技術領域，涉及一種生薑及其炮製品中姜辣素成分的檢測方法。
背景技術：
生薑為姜科植物姜zingiberofficinalerosc.的新鮮根莖，其傳統炮製品有乾薑、煨姜、炮姜、姜炭等，系分別採用乾燥、煨制(包裹燙)、以沙(土)燙炒至一定程度、炒炭等所得。《日本藥典》記載有採用蒸或煮製的方法炮製生薑，其稱為亁姜。
生薑的化學成分包含多糖、生薑蛋白、黃酮類成分、姜辣素類成分、揮髮油類成分。而姜辣素類成分(結構中包含3-甲氧基-4-羥基苯基官能團)作為生薑中公認的活性成分，其類型包括姜酚、姜烯酚和薑酮等。
常用的中藥的定量評價方法有理化分析的方法如滴定法、重量法等；儀器分析的方法如紫外分光光度法、高效液相色譜法、氣相色譜法等，而儀器分析的方法在實現準確定量時均需要使用標準物質(對照品)，一些對照品由於自身化學性狀的穩定性、含量等因素導致其難以獲得、價格高，進行多成分的測定時其檢測成本尤高。採用儀器分析的方法實現含量測定時，有兩個關鍵因素，一是取得保留時間實現對物質的色譜峰進行定位，二是取得對應物質的響應值(儀器信號強度，如峰面積、峰高等，與物質實際濃度的關係)實現定量的目的。
目前色譜峰的定位方法有對照品直接定位法，該方法是目前定位最為準確的方法，但由於對照品價格昂貴，進行多成分測定時價格尤高。對照提取物法，但是對照提取物的製備本身不易，使用前還需要進行對照提取物中各成分的標定，雖然能夠實現多成分的測定，但應用中成本亦較高。
一測多評法使用的相對保留時間法、線性回歸色譜峰校正法、保留時間差法等間接定位的方法，通過計算進行色譜峰的定位，但是這些方法均存在誤差，在應用中受到色譜柱、測定儀器、流動相等硬體的影響較大。同時，姜類產品色譜圖中色譜峰較為豐富，通過計算得到的保留時間附近往往有多個色譜峰，該方法在實際應用中亦存在問題。
技術實現要素：
本發明的目的在於：針對現有技術存在的問題，提供一種生薑及其炮製品中姜辣素成分的檢測方法，能以1-3種對照品實現多種姜辣素成分的色譜峰定位檢測，且定位準確，成本低。
為了實現上述目的，本發明採用的技術方案為：
一種生薑及其炮製品中姜辣素成分的檢測方法，包括以下步驟：
(1)取6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚對照品中的一種或幾種，置於容器中，然後加熱；
(2)將步驟(1)加熱後的容器取出，冷卻後加入溶劑溶解，得到同時含有薑酮、姜酚及姜烯酚的定位用混合對照品溶液；
(3)將步驟(2)得到的混合對照品溶液注入色譜儀，在色譜圖上出峰，利用該色譜圖可實現生薑及其炮製品中姜辣素成分的色譜峰定位檢測。
作為本發明的優選方案，所述步驟(1)中，加熱前先往容器中加水並密閉，加入的水的質量與對照品的總質量之比為1:1-10。
作為本發明的優選方案，所述步驟(1)中，加熱方式為烘箱烘製、紅外加熱或微波加熱。
作為本發明的優選方案，所述步驟(1)中，加熱溫度為60-220℃，加熱時間為0.5-4h。
作為本發明的優選方案，所述步驟(1)中，加熱溫度為120-140℃，加熱時間為2-4h。
作為本發明的優選方案，所述步驟(2)中，加入的溶劑為乙腈。
本發明的有益效果在於：
本發明利用生薑中成分本身的化學性質，通過簡單的工藝促進姜酚類成分轉變為姜烯酚及薑酮，以1-3種對照品實現多種姜辣素成分的色譜峰定位檢測，且相對於一測多評法定位更加準確，而相對於對照品直接定位法，定位同等準確，但減少了對照品的種類，成本更低。
因此，本發明準確、低成本的實現了生薑及其炮製品中姜辣素成分的色譜峰定位檢測，能節約生薑及其炮製品質量控制的成本，方便快捷，環保經濟，應用廣泛。
附圖說明
圖1為僅將6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚混合加乙腈得到混合對照品溶液，未經過實施例1處理而直接進樣分析得到的色譜圖；
圖2為實施例1得到的色譜圖；
圖3為對比例1得到的色譜圖。
具體實施方式
為了使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將結合附圖對本發明的優選實施例進行詳細的描述。
本發明中，姜辣素成分包括薑酮(英文名稱zingerone)、6-姜酚(英文名稱6-gingerol)、8-姜酚(英文名稱8-gingerol)、10-姜酚(英文名稱10-gingerol)、6-姜烯酚(英文名稱6-shogaol)、8-姜烯酚(英文名稱8-shogaol)和10-姜烯酚(英文名稱10-shogaol)。
以下實施例與對比例的色譜條件為：
色譜柱：watersbridgetmc18(250×4.6nm，5μm)；流動相為a相：0.2％甲酸-水，b相：0.2％甲酸-乙腈；採用二元梯度洗脫，洗脫程序為0-3min，b相60％～60％；3-8min，b相60％-50％；8-10min，b相50％～40％；10-20min，b相40％～32％；20-30min，b相32％～25％；30-35min，b相25％～5％；35-40min，b相5％～5％；流速：0.8ml/min；檢測波長：280nm；柱溫：30℃；進樣量：10μl。
實施例1
(1)取6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚對照品各0.1mg置於容器中，然後加0.1μl水密閉，置於烘箱中120℃烘製4h；
(2)將步驟(1)烘製後的容器取出，冷卻後加入乙腈溶解，得到同時含有薑酮、6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚、6-姜烯酚、8-姜烯酚和10-姜烯酚的定位用混合對照品溶液；
(3)將步驟(2)得到的混合對照品溶液在前述色譜條件下進樣分析，得到如表4所示的各成分保留時間和如圖2所示的色譜圖。
對比例1對照品直接定位法
(1)精密稱定薑酮、6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚、6-姜烯酚、8-姜烯酚、10-姜烯酚適量，加乙腈分別製成每1ml各含0.1mg的溶液，混合後得到混合對照品溶液；
(2)將步驟(1)得到的混合對照品溶液在前述色譜條件下進樣分析，得到如表4所示的各成分保留時間和如圖3所示的色譜圖。
對比例2相對保留時間法
(1)測定7種姜辣素成分彼此相對保留時間(相對保留時間＝6品牌色譜柱的橫坐標成分的平均保留時間/6品牌色譜柱的縱坐標成分的平均保留時間)，如下表1所示：
(2)精密稱定6-姜酚適量，加乙腈製成每1ml含0.1mg的溶液，得到6-姜酚對照品溶液；
(3)將步驟(2)得到的6-姜酚對照品溶液在前述色譜條件下進樣分析，並用以下公式計算各成分保留時間：待測成分的保留時間tx＝ft×t，其中tx為待測成分的保留時間，ft為待測成分/對照成分的相對保留時間，t為對照成分的保留時間；得到如表4所示的各成分保留時間。
對比例3保留時間差法
(1)測定7種姜辣素成分的保留時間差，如下表2和表3所示：
(2)精密稱定6-姜酚適量，加乙腈製成每1ml含0.1mg的溶液，得到6-姜酚對照品溶液；
(3)將步驟(2)得到的6-姜酚對照品溶液在前述色譜條件下進樣分析，並用以下公式計算各成分保留時間：待測成分的保留時間tx＝t+δt，其中tx為待測成分的保留時間，t為對照成分的保留時間，δt為保留時間差；得到如表4所示的各成分保留時間。
圖1為僅將6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚混合加乙腈得到混合對照品溶液，未經過實施例1處理而直接進樣分析得到的色譜圖。
通過圖1、圖2和圖3的對比可知，經過實施例1處理，能夠把6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚一次性轉變為薑酮、6-姜烯酚、8-姜烯酚以及10-姜烯酚，同時保留原有的6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚，因此在圖1的3種成分色譜峰的基礎上，增加了4種成分的色譜峰，7種成分在色譜圖上出峰順序依次為薑酮、6-姜酚、8-姜酚、6-姜烯酚、10-姜酚、8-姜烯酚、10-姜烯酚，各成分出峰順序和位置與圖3的對照品直接定位得到的色譜圖完全一致，且不出現明顯雜質，可見，實施例1能以3種對照品實現7種姜辣素成分的色譜峰準確定位檢測。
表4的結果表明，實施例1的方法得到的7種姜辣素成分保留時間與對比例1的對照品直接定位法得到的7種姜辣素成分保留時間一致，而一測多評法(對比例2的相對保留時間法、對比例3的保留時間差法等間接定位的方法)的數據存在一定的偏差，一測多評法對薑酮、8-姜烯酚、10-姜烯酚等成分定位時無法準確分辨。
綜上，實施例1以3種對照品實現7種姜辣素成分的色譜峰定位檢測，且相對於一測多評法定位更加準確，而相對於對照品直接定位法，定位同等準確，但減少了對照品的種類，成本更低。
在實施例1的7種姜辣素成分色譜峰定位檢測的基礎上，結合常規的一測多評的定量方法，根據相對校正因子，通過計算，即可以實現7種姜辣素成分的定量測定。如表5和表6所示，與對照品直接測定結果相比，準確度較高。
本發明是以1-3種對照品實現多種姜辣素成分的色譜峰定位檢測，不局限於實施例1的以3種對照品實現7種姜辣素成分的色譜峰定位檢測，本發明也可以是1種或2種對照品實現多種姜辣素成分的色譜峰定位檢測，如單獨使用6-姜酚即可實現對6-姜酚、6-姜烯酚、薑酮的定位檢測。另外，同時本發明亦不局限於在液相系統的應用，該方法原理在其他色譜系統中亦是可行的。
最後說明的是，以上實施例僅用以說明本發明的技術方案而非限制，儘管通過參照本發明的優選實施例已經對本發明進行了描述，但本領域的普通技術人員應當理解，可以在形式上和細節上對其作出各種各樣的改變，而不偏離所附權利要求書所限定的本發明的精神和範圍。