一種冠心舒的生物酶解提取方法
2024-04-02 20:50:05 2
專利名稱：一種冠心舒的生物酶解提取方法
技術領域：
本發明涉及冠心舒的提取方法，具體涉及生物酶解提取冠心舒的方法。
背景技術：
冠心舒是存在於豬十二指腸中的一種酸性粘多糖類藥物，它分子量較低，屬於類肝素物質。它的化學成分含有氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸、N-乙醯氨基半乳糖和葡萄糖等。臨床觀察表明，冠心舒可治療冠心病，可改善病人的心絞痛、胸悶、心悸、氣急等症狀，並使心電圖有所改善，對血脂、血壓無明顯影響，無毒性，副作用小。藥物作用平緩，療效隨著療程的增加而提高，宜長期服用。現有提取冠心舒的方法包括專提取液製備、減壓濃縮、除去蛋白質、脫脂、乙醇沉澱、脫水、乾燥等步驟，其中脫脂為汽油脫脂，過濾採用紗布過濾，除去蛋白質採用苯酚和氫氧化鈉，如發明專利號CN99111448.5發明方法由水解、收集濾液進行減壓濃縮、除去蛋白質、脫脂、乙醇沉澱、脫水、乾燥等步驟組成。其採用汽油脫脂、簡單用紗布過濾的原始方法，生產周期長，達到130個小時。上述方法資源浪費大，生產周期長，環境汙染和安全隱患大。本發明是提供一種無需汽油等危險材料脫脂來提取，直接利用生物酶解和機械脫脂提取冠心舒的一種方法。採用機械脫脂，代替了汽油，方便快捷，節省了能源，同時，生物酶解代替自然沉澱，縮短生產周期。本發明的目的是提供一種冠心舒的提取方法。為了實現上述發明目的，本發明所提供的冠心舒的生物酶解提取方法包括以下步驟:
(1)將豬的十二指腸去掉脂肪，洗淨後絞碎，製得腸漿；
(2)向腸漿中加入3-4倍於十二指腸重量的純水，調PH值至2.4-3.0，攪拌提取9_11小時，靜置後將上層的提取液和下層的沉澱分離；
(3)調提取液的PH值至7.8-8.5，將提取液升溫至50-55°C，然後加入十二指腸重量的1%-2%的複合蛋白酶，在該溫度和攪拌條件下酶解6-8小時，製得酶解液；
(4)加熱酶解液至溫度90-95°C進行滅酶，然後過濾得到濾液；
(5)脫除濾液中的脂肪，得到去脂液；
(6)濃縮去脂液，製得濃縮液；
(7)向濃縮液中加入乙醇，使含醇量達到65-70%，攪拌均勻後靜置，分離出沉澱物並用丙酮對其脫水，乾燥脫水後的產物即得冠心舒。為了提高原料的利用率，腸漿經步驟(2)進行一次提取製得提取液後，再向步驟
(2)產生的沉澱中加入3-4倍於十二指腸重量的純水，按步驟(2)所述方法再提取一遍；合併2次提取液用於步驟(3)。為了過濾效率的提高和使雜質去除的徹底，所述將步驟(4)中的過濾通過孔徑為
0.2-0.5um的微孔過濾機實現。為了節約能源，所述步驟(5)中脂肪的脫除通過機械方式進行，為提高脂肪的脫除率和脫除速度，脂肪的脫除通過分離筒轉速為16000-16300r/min的管式離心機實現。所述步驟(6)中的濃縮通過孔徑為Inm的納濾機實現。所述步驟(7)中的乾燥為在溫度60_90°C條件下進行的真空乾燥。本發明步驟(2 )中所述PH值的調節，採用鹽酸進行調節；步驟(3 )中所述PH值的調節採用濃度為40%的氫氧化鈉溶液進行。本發明所用設備均為市售產品，其結構和使用方式皆為公知技術。本發明所述的複合蛋白酶選用丹麥諾維信公司生產的諾維信複合蛋白酶。本發明有以下優點:環境汙染小和安全隱患少；採用機械脫脂，代替了原始的汽油脫脂，節省了能源；通過酶解工藝把蛋白質酶解成胺基酸，使去除雜蛋白更方便，代替了原始工藝的自然沉澱方法，大大節省了生產時間，提高了生產效率。
具體實施例方式實施例1
(I)稱取豬的十二指腸lKg，剪去脂肪，洗淨後，用絞肉機絞碎，製得腸漿；(2)向腸漿中加入4Kg純水，用鹽酸調PH值至2.4，攪拌提取9小時，靜置後將上層的提取液和下層的沉澱分離；向下層的沉澱中加入4Kg純水，用鹽酸調PH值至2.4，攪拌提取10小時，靜置後將上層的提取液和下層的沉澱分離，再次得到提取液，合併兩次提取的提取液；(3)用濃度為40%的氫氧化鈉溶液調節步驟(2)製得的提取液的PH值至7.8，將提取液升溫至50°C，然後加入IOg複合蛋白酶，在該溫度和攪拌條件下酶解8小時，製得酶解液；(4)加熱酶解液至溫度90°C，並保持該溫度條件15min進行滅酶，滅酶後用孔徑為0.2um的微孔過濾機過濾，除去雜質得到濾液；(5)用管式離心機脫除濾液中的脂肪，脫脂過程中分離筒轉速保持為16000r/min，脫脂後得到去脂液；(6)用孔徑為Inm的納濾機對去脂液進行濃縮，製得濃縮液；(7)向濃縮液中加入濃度為95%的工業乙醇，使濃縮液的含醇量達到65%，攪拌均勻後靜置12小時，將上層的液體和下層的沉澱物分離，上層的液體供回收酒精用，向沉澱物中加入5倍於其重量的丙酮，對沉澱物進行脫水8小時，過濾後得到濾餅即脫水後的產物，將濾餅在溫度60°C條件下真空乾燥後，即得產品冠心舒。實施例2
(I)稱取豬的十二指腸2Kg，剪去脂肪，洗淨後，用絞肉機絞碎，製得腸漿；(2)向腸漿中加入7Kg純水，用鹽酸調PH值至2.8，攪拌提取10小時，靜置後將上層的提取液和下層的沉澱分離；向下層的沉澱中加入7Kg純水，用鹽酸調PH值至2.8，攪拌提取11小時，靜置後將上層的提取液和下層的沉澱分離，再次得到提取液，合併兩次提取的提取液；(3)用濃度為40%的氫氧化鈉溶液調節步驟(2)製得的提取液的PH值至8.0，將提取液升溫至52°C，然後加入30g複合蛋白酶，在該溫度和攪拌條件下酶解6小時，製得酶解液；(4)加熱酶解液至溫度92°C，並保持該溫度條件13min進行滅酶，滅酶後用孔徑為0.3um的微孔過濾機過濾，除去雜質得到濾液；(5)用管式離心機脫除濾液中的脂肪，脫脂過程中分離筒轉速保持為16100r/min，脫脂後得到去脂液；(6)用孔徑為Inm的納濾機對去脂液進行濃縮，製得濃縮液；(7)向濃縮液中加入濃度為95%的工業乙醇，使濃縮液的含醇量達到68%，攪拌均勻後靜置12小時，將上層的液體和下層的沉澱物分離，上層的液體供回收酒精用，向沉澱物中加入5倍於其重量的丙酮，對沉澱物進行脫水8小時，過濾後得到濾餅即脫水後的產物，將濾餅在溫度70°C條件下真空乾燥後，即得產品冠心舒。實施例3
(I)稱取豬的十二指腸10Kg，剪去脂肪，洗淨後，用絞肉機絞碎，製得腸漿；(2)向腸漿中加入30Kg純水，用鹽酸調PH值至3.0，攪拌提取11小時，靜置後將上層的提取液和下層的沉澱分離；向下層的沉澱中加入30Kg純水，用鹽酸調PH值至3.0，攪拌提取9小時，靜置後將上層的提取液和下層的沉澱分離，再次得到提取液，合併兩次提取的提取液；(3)用濃度為40%的氫氧化鈉溶液調節步驟(2)製得的提取液的PH值至8.5，將提取液升溫至55 °C，然後加入200g複合蛋白酶，在該溫度和攪拌條件下酶解7小時，製得酶解液；(4)加熱酶解液至溫度95°C，並保持該溫度條件IOmin進行滅酶，滅酶後用孔徑為0.4um的微孔過濾機過濾，除去雜質得到濾液；(5)用管式離心機脫除濾液中的脂肪，脫脂過程中分離筒轉速保持為16300r/min，脫脂後得 到去脂液；(6)用孔徑為Inm的納濾機對去脂液進行濃縮，製得濃縮液；(7)向濃縮液中加入濃度為95%的工業乙醇，使濃縮液的含醇量達到65%，攪拌均勻後靜置12小時，將上層的液體和下層的沉澱物分離，上層的液體供回收酒精用，向沉澱物中加入5倍於其重量的丙酮，對沉澱物進行脫水其脫水8小時，過濾後得到濾餅即脫水後的產物，將濾餅在溫度80°C條件下真空乾燥後，即得產品冠心舒。實施例4
(I)稱取豬的十二指腸lOOKg，剪去脂肪，洗淨後，用絞肉機絞碎，製得腸漿；(2)向腸漿中加入400Kg純水，用鹽酸調PH值至3.0，攪拌提取11小時，靜置後將上層的提取液和下層的沉澱分離；向下層的沉澱中加入400Kg純水，用鹽酸調PH值至2.9，攪拌提取10小時，靜置後將上層的提取液和下層的沉澱分離，再次得到提取液，合併兩次提取的提取液；(3)用濃度為40%的氫氧化鈉溶液調節步驟(2)製得的提取液的PH值至8.2，將提取液升溫至54°C，然後加入2kg複合蛋白酶，在該溫度和攪拌條件下酶解8小時，製得酶解液；(4)加熱酶解液至溫度93°C，並保持該溫度條件12min進行滅酶，滅酶後用孔徑為0.5um的微孔過濾機過濾，除去雜質得到濾液；(5)用管式離心機脫除濾液中的脂肪，脫脂過程中分離筒轉速保持為16200r/min，脫脂後得到去脂液；(6)用孔徑為Inm的納濾機對去脂液進行濃縮，製得濃縮液；(7)向濃縮液中加入濃度為95%的工業乙醇，使濃縮液的含醇量達到70%，攪拌均勻後靜置12小時，將上層的液體和下層的沉澱物分離，上層的液體供回收酒精用，向沉澱物中加入5倍於其重量的丙酮，對沉澱物進行脫水其脫水8小時，過濾後得到濾餅即脫水後的產物，將濾餅在溫度90°C條件下真空乾燥後，即得產品冠心舒。
權利要求
1.一種冠心舒的生物酶解提取方法，其特徵在於包括以下步驟: (1)將豬的十二指腸去掉脂肪，洗淨後絞碎，製得腸漿； (2)向腸漿中加入3-4倍於十二指腸重量的純水，調PH值至2.4-3.0，攪拌提取小時，靜置後將上層的提取液和下層的沉澱分離； (3)調提取液的PH值至7.8-8.5，將提取液升溫至50-55°C，然後加入十二指腸重量的1%-2%的複合蛋白酶，在該溫度和攪拌條件下酶解_^小時，製得酶解液； (4)加熱酶解液至溫度90-95°C進行滅酶，然後過濾得到濾液； (5)脫除濾液中的脂肪，得到去脂液； (6)濃縮去脂液，製得濃縮液； (7)向濃縮液中加入乙醇，使含醇量達到65-70%，攪拌均勻後靜置，分離出沉澱物並用丙酮對其脫水，乾燥脫水後的產物即得冠心舒。
2.如權利要求1所述的冠心舒的生物酶解提取方法，其特徵在於向步驟(2)的沉澱中再加入3-4倍於十二指腸重量的純水，按步驟(2)所述方法再提取一遍；合併2次提取液用於步驟(3)。
3.如權利要求1所述的冠心舒的生物酶解提取方法，其特徵在於所述步驟(4)中的過濾通過孔徑為0.2-0.5um的微孔過濾機實現。
4.如權利要求1所述的冠心舒的生物酶解提取方法，其特徵在於所述步驟(5)通過分離筒轉速為16000-16300r/min的管式離心機實現。
5.如權利要求1所述的冠心舒的生物酶解提取方法，其特徵在於所述步驟(6)中的濃縮通過孔徑為Inm的納濾機實現。
6.如權利要求1所述的 冠心舒的生物酶解提取方法，其特徵在於所述步驟(7)中的乾燥為在溫度60-90°C條件下進行的真空乾燥。
全文摘要
本發明公開了一種冠心舒的生物酶解提取方法，該方法以豬十二指腸為主要原料，通過生物酶解從中提取冠心舒。所述冠心舒的提取須經過豬十二指腸→絞碎→配水→提取→酶解→滅酶→粗濾→脫脂→納濾→沉澱→乾燥。本發明方法生產周期短、成本低、不產生任何有毒有害物質，而且所得產品安全性高，是製備冠心舒藥品的必須原料。
文檔編號A61K31/727GK103073653SQ20121059116
公開日2013年5月1日 申請日期2012年12月31日 優先權日2012年12月31日
發明者張曉東 申請人:得利斯集團有限公司