一種鐵皮石斛莖尖組培快速繁殖的育苗方法

2024-02-28 12:59:15

專利名稱：一種鐵皮石斛莖尖組培快速繁殖的育苗方法
技術領域：
本發明涉及一種鐵皮石斛莖尖組培快速繁殖的育苗方法，屬於生物工程技術領域。
背景技術：
石斛是我國傳統名貴中藥，分為鐵皮、黃草、金釵、霍山、環草、馬鞭等數
十個品種，其中鐵皮石斛(Zfe/7Q(roW腿ca/^i由歷丄i/ W)是石斛中的極 品，主要分布於江南和西南各省。鐵皮石斛具有滋陰清熱、生津益胃、潤肺止咳 等功能，用於熱病傷津、口乾煩渴、病後虛熱等多種病症。現代藥理學研究表明， 鐵皮石斛所含的多糖具有抗腫瘤、抗衰老、增強人體免疫力和擴張血管等作用。 鐵皮石斛多生懸崖峭壁上，由於種子極小、無胚乳，自然條件下萌發需與某些真 菌共生，自然繁殖率低，且我國多年來對鐵皮石斛的採集量遠大於其生長量，由 於長期採挖，自然資源枯竭，已瀕臨絕跡，被國家列為重點保護的野生藥材品種。 為保護這一珍稀中藥品種，國內許多科研人員對鐵皮石斛進行了快速繁殖技術的 研究，但大多研究集中在由野生種子萌發形成愈傷組織、原球莖，然後進行分化 培養獲得再生苗。這些技術存在培育周期長、成本高等缺點。因此，如何縮短組 培苗的培育周期，成為鐵皮石斛實現人工規模化栽培的關鍵。

發明內容
為克服現有技術存在的上述缺陷，本發明提供一種鐵皮石斛莖尖組培快速繁殖 的育苗方法。
本發明按以下技術方案完成 一種鐵皮石斛莖尖組培快速繁殖的育苗萬法，其 特徵在於經過下列工藝步驟 A、圓球莖誘導培養
選取健壯的野生鐵皮石斛苗，用其莖尖或芽尖作為外植體，先用流水衝洗幹 淨，再用7(F。的乙醇溶液消毒30 60秒，用無菌水衝洗一遍，把材料放入瓶子中， 用濃度為0. 1°/。的升汞浸泡6 10min,然後用無菌水衝洗4 5遍，接種於下列無 菌誘導培養基中B5+KT1. 5 2. 0 mg/L+NMO. 4 0. 8 mg/L+濃度為10 15%的 香蕉汁，在溫度25-28°C、光照強度1800 20(X)lx、光照時間為12個小時的條件 下，培養55 65天，即可形成圓球莖；
B、 圓球莖增殖培養
將生長良好的圓球莖轉接入下列增殖培養基中B5 + NAA1.5 2.0 mg/L + KT0.8 1.0 mg/L+濃度為10 15%的馬鈴薯汁，進行增殖培養，培養的環境條件 為溫度25-28°C，光照強度2000 22001x，光照13小時，培養周期為35—45 天；
C、 圓球莖分化培養
將圓球莖轉入下列分化培養基中B5+NAA0. 8 1. 0 mg/L+KTO. 1 0. 5 mg/L +濃度為10 15%的香蕉汁，控制溫度25-28°C，光照強度2000 22001x，光照 時間12小時，培養55 65天，得到分化苗；
D、 壯苗和生根培養
將分化苗轉入下列生根壯苗培養基中B5+NAA1.0 1.5tng/L +濃度為10 15%的香蕉汁，控制溫度25-28°C，光照強度1800 20001x，光照時間12小時， 培養35 45天，得到生根苗，即可出瓶煉苗、移栽。
本發明具有下列優點和積極效果
a)本發明縮短了鐵皮石斛苗的培育周期，從圓球莖至生根苗的培育周期僅為
5 6個月，大大降低了生產成本。
(2)本發明採用莖尖組培技術培育的石斛苗，遺傳性狀穩定，其多糖和石斛生 物鹼含量與野生鐵皮石斛相近。
具體實施例方式
以下結合具體實施例，對本發明做進一步描述。 實施例1
選取健壯的野生鐵皮石斛苗，用其莖尖或芽尖作為外植體，先用流水衝洗幹 淨，再用70%的乙醇溶液消毒30秒，用無菌水衝洗一遍，把材料放入瓶子中，然 後用0. 1%的升汞浸泡6min，之後用無菌水衝洗4遍，接種於下列無菌誘導培養基 中B5+KT2.0mg/L+NM0.8mg/L+濃度為10%的香蕉汁，在溫度為25-28°C、光
照強度為1800lx、光照時間為12小時的條件下，誘導培養55天，得圓球莖；將
生長良好的圓球莖轉接入下列增殖培養基中Bs+NAA2.0 mg/L+KT1.0 mg/L+濃 度為10%的馬鈴薯，在溫度為25-28°C，光照強度20001x，光照時間為13小時的 條件下，增殖培養35天，增殖係數8.5;將圓球莖轉入下列分化培養基中B5+ NAA1.0mg/L + KT0. lmg/L+濃度為10%的香蕉汁，控制溫度25-28°C，光照強度 20001x，光照時間12小時，分化培養60天，得到高度為1釐米左右的分化苗； 將分化苗轉入下列生根壯苗培養基中B5+NAAL0 mg/L+濃度為10%的香蕉汁， 控制溫度25-28。C，光照強度1800bc，光照時間12小時，培養35天，得到高度 為3 5釐米的生根苗，其中5釐米左右的生根苗佔65%。 實施例2
選取健壯的野生鐵皮石斛苗，用其莖尖或芽尖作為外植體，先用流水衝^fe幹 淨，再用70%的乙醇溶液消毒55秒，用無菌水衝洗一遍，把材料放入瓶子中，然 後用Q. 1%的升汞浸泡10min，之後用無菌水衝洗5遍，接種於下列無菌誘導培養 基中B5+KT1.5mg/L+NAA0.4mg/L+濃度為15%的香蕉汁，在溫度為25-28°C、 光照強度為20001x、光照時間為12小時的條件下，誘導培養65天，得圓球莖； 將生長良好的圓球莖轉接入下列增殖培養基中Bs+NAAL5 mg/L +KTO. 8 mg/L + 濃度為15%的馬鈴薯汁中進行增殖培養，培養條件溫度25-28°C，光照強度 22001x，光照13小時條件下，培養45天，增殖係數9;將圓球莖轉入下列分化 培養基中B5+NAA0.8mg/L+KT0.5mg/L+濃度為15%的香蕉汁，控制溫度25-28 °C，光照強度22001x，光照時間12小時，培養65天，得到高度為1釐米左右的 分化苗；將分化苗轉入下列生根壯苗培養基中B5+NM1. 5mg/L+濃度為15%的香 蕉汁，控制溫度25-28°C，光照強度20Q01x，光照時間12小時，培養45天，得 到高度為3 5釐米左右的生根苗，其中5釐米左右的生根苗佔68%。
權利要求
1、一種鐵皮石斛莖尖組培快速繁殖的育苗方法，其特徵在於經過下列工藝步驟A、圓球莖誘導培養選取健壯的野生鐵皮石斛苗，用其莖尖或芽尖作為外植體，先用流水衝洗乾淨，再用70％的乙醇溶液消毒30～60秒，用無菌水衝洗一遍，把材料放入瓶子中，用濃度為0.1％的升汞浸泡6-10min，然後用無菌水衝洗4～5遍，接種於下列無菌誘導培養基中B5+KT1.5～2.0mg/L+NAA0.4～0.8mg/L+濃度為10～15％的香蕉汁，在溫度25-28℃、光照強度1800～2000lx、光照時間為12個小時的條件下，培養55-65天，即可形成圓球莖；B、圓球莖增殖培養將生長良好的圓球莖轉接入下列增殖培養基中B5+NAA1.5～2.0mg/L+KT0.8～1.0mg/L+濃度為10～15％的馬鈴薯汁，進行增殖培養，培養的環境條件為溫度25-28℃，光照強度2000～2200lx，光照13小時，培養周期為35-45天；C、圓球莖分化培養將圓球莖轉入下列分化培養基中B5+NAA0.8～1.0mg/L+KT0.1～0.5mg/L+濃度為10～15％的香蕉汁，控制溫度25-28℃，光照強度2000～2200lx，光照時間12小時，培養55-65天，得到分化苗；D、壯苗和生根培養將分化苗轉入下列生根壯苗培養基中B5+NAA1.0～1.5mg/L+濃度為10～15％的香蕉汁，控制溫度25-28℃，光照強度1800～2000lx，光照時間12小時，培養35-45天，得到生根苗，即可出瓶煉苗、移栽。
全文摘要
本發明提供一種鐵皮石斛莖尖組培快速繁殖的育苗方法，依次經過圓球莖誘導培養、圓球莖增殖培養、圓球莖分化培養、壯苗和生根培養後，得到生根苗，即可出瓶煉苗、移栽。本發明縮短了鐵皮石斛苗的培育周期，從圓球莖至生根苗的培育周期僅為5～6個月，大大降低了生產成本，而且本發明培育的石斛苗，遺傳性狀穩定，其多糖和石斛生物鹼含量與野生鐵皮石斛相近。
文檔編號A01H4/00GK101180949SQ200710066480
公開日2008年5月21日 申請日期2007年12月20日 優先權日2007年12月20日
發明者孔祥瑩, 昊楨芬, 督 王, 蘇有勇 申請人:昆明理工大學