緩解藍莓組培苗褐化的培養基及其製備方法與流程
2024-04-04 04:33:05
本發明涉及一種培養基，具體涉及一種緩解藍莓組培苗褐化的培養基及其製備方法。
背景技術：
：藍莓是一種小漿果，果實呈藍色、果肉細膩、種子極小，具有「漿果之王」和「水果皇后」的美譽。藍莓果實平均重0.5～2.5g，最大重5g，可食率為100％，甜酸適口，且具有香爽宜人的香氣，為鮮食佳品。藍莓不僅富含常規營養成分，如蛋白質、維生素、礦物質及微量元素等，而且還含有極為豐富的花青素、黃酮類和多糖類化合物，具有緩解視力疲勞，促進視網膜細胞中的視紫質再生，預防近視，改善和增進視力等功效。除緩解視力疲勞外，藍莓還具有諸多保健功能，如預防心腦血管疾病、防癌、提高免疫力、緩解咽喉疼痛及腹瀉等等，所以，對藍莓的利用和衍生品開發越來越受到重視。鑑於藍莓的廣闊市場前景，對藍莓苗木的研發也越來越受到重視。其中快速脫毒製備藍莓組培苗成為最佳藍莓苗木繁殖手段。然而在組培快繁過程中，因為外植體創面的細胞受傷害造成細胞內酚類化合物外泌，在酚氧化酶的作用下形成褐色的醌類物質，在培養基中積聚並逐漸擴散，抑制其它酶的活性，毒害整個外植體，進而造成組培苗死亡，不利於藍莓苗的快速繁殖，是限制藍莓組培苗成功與否的決定性因素之一。基於上述問題，研究出一種緩解藍莓組培苗褐化的培養基非常重要。技術實現要素：針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種緩解藍莓組培苗褐化的培養基，緩解藍莓苗組培快繁過程中的褐化，使得藍莓苗組培快繁技術更加高效；本發明同時提供其製備方法。本發明所述的緩解藍莓組培苗褐化的培養基，基本培養基為WPM，並添加有3-6g/L瓊脂、0.2-0.8g/L水解乳蛋白、0.5-1.5g/L聚乙烯吡咯烷酮、0.5-1.2g/L維生素C、0.5-1.2g/L穀胱甘肽和0.2-0.8g/L檸檬酸。所述的培養基優選為：基本培養基為WPM，並添加有4.5g/L瓊脂、0.5g/L水解乳蛋白、1.0g/L聚乙烯吡咯烷酮、0.8g/L維生素C、0.8g/L穀胱甘肽和0.6g/L檸檬酸。所述的緩解藍莓組培苗褐化的培養基的製備方法，將瓊脂、水解乳蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、維生素C、穀胱甘肽和檸檬酸加入到基本培養基中，混合均勻後分裝，滅菌後備用。所述的分裝規格為20-30mL/瓶。與現有技術相比，本發明的有益效果如下：(1)本發明WPM基本培養基提供了藍莓組培苗的生長所需營養成份，而維生素C、穀胱甘肽、檸檬酸和水解乳蛋白具有防止酚類物質氧化及抑制酚氧化酶活性的功能，四者協同增效可以減少褐化物的形成；瓊脂濃度不僅影響培養基的硬度，同時可以調節醌類物質的擴散，使褐化物能夠快速擴散而不發生局部積聚，減輕對藍莓組培苗的毒害；聚乙烯吡咯烷酮是一種良好的吸附劑，可以對培養基中的已經生成的褐化物質進行吸附，以減輕褐化物在培養基中的分散作用及對藍莓組培苗的毒害。(2)本發明所述的緩解藍莓組培苗褐化的培養基，能夠顯著緩解藍莓組培苗的褐化，極大提高藍莓組培苗成活率。(3)本發明所述的製備方法，簡單易行、便於操作。具體實施方式下面結合實施例對本發明做進一步說明。實施例中採用的基本培養基WPM採用本領域人員公知配方進行配製。實施例1所述的緩解藍莓組培苗褐化的培養基，基本培養基為WPM，並添加有4.5g/L瓊脂、0.5g/L水解乳蛋白、1.0g/L聚乙烯吡咯烷酮、0.8g/L維生素C、0.8g/L穀胱甘肽和0.6g/L檸檬酸。其製備方法為：將瓊脂、水解乳蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、維生素C、穀胱甘肽和檸檬酸加入到基本培養基中，混合均勻後分裝，滅菌後備用。分裝規格為25mL/瓶。實施例2所述的緩解藍莓組培苗褐化的培養基，基本培養基為WPM，並添加有3g/L瓊脂、0.2g/L水解乳蛋白、0.5g/L聚乙烯吡咯烷酮、0.5g/L維生素C、0.5g/L穀胱甘肽和0.2g/L檸檬酸。其製備方法為：將瓊脂、水解乳蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、維生素C、穀胱甘肽和檸檬酸加入到基本培養基中，混合均勻後分裝，滅菌後備用。分裝規格為20mL/瓶。實施例3所述的緩解藍莓組培苗褐化的培養基，基本培養基為WPM，並添加有6g/L瓊脂、0.8g/L水解乳蛋白、1.5g/L聚乙烯吡咯烷酮、1.2g/L維生素C、1.2g/L穀胱甘肽和0.8g/L檸檬酸。其製備方法為：將瓊脂、水解乳蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、維生素C、穀胱甘肽和檸檬酸加入到基本培養基中，混合均勻後分裝，滅菌後備用。分裝規格為30mL/瓶。將藍莓苗分別接種到基本培養基WPM以及實施例1-3製備得到的培養基上，5周後觀察在不同培養基上藍莓苗的褐化情況和藍莓苗的成活情況，具體見表1。其中：褐化情況用褐化率表示，成活情況用成活率表示。褐化率計算公式為：褐化率＝每個培養瓶中的褐化藍莓苗棵數/每個培養瓶中所接種的總藍莓苗棵數；成活率計算公式為：成活率＝每個培養瓶中成活的藍莓苗棵數/每個培養瓶中所接種的總藍莓苗棵數。表1藍莓苗在不同培養基上的生長情況每瓶接種總數褐化棵數褐化率(％)成活棵數成活率(％)WPM基本培養基302893.31240實施例1培養基3026.630100實施例2培養基3013.32996.7實施例3培養基303102893.3觀察發現：實施例1-3製備的培養基對藍莓組培苗具有保護作用，能夠緩解藍莓組培快繁苗的褐化問題，緩解褐化物對藍莓組培苗的毒害作用。實施例1-3培養基上的藍莓苗的生長情況遠遠優於基本培養基上的，其中實施例1培養基上的藍莓苗生長情況最優。當前第1頁1 2 3