提高藍莓脫毒苗快速繁殖成活率用培養基及其製備方法與流程
2024-03-27 19:29:05
本發明涉及一種培養基，具體涉及一種提高藍莓脫毒苗快速繁殖成活率用培養基及其製備方法。
背景技術：
：藍莓是一種小漿果，果實呈藍色、果肉細膩、種子極小，具有「漿果之王」和「水果皇后」的美譽。藍莓果實平均重0.5～2.5g，最大重5g，可食率為100％，甜酸適口，且具有香爽宜人的香氣，為鮮食佳品。藍莓不僅富含常規營養成分，如蛋白質、維生素、礦物質及微量元素等，而且還含有極為豐富的花青素、黃酮類和多糖類化合物，具有緩解視力疲勞，促進視網膜細胞中的視紫質再生，預防近視，改善和增進視力等功效。除緩解視力疲勞外，藍莓還具有諸多保健功能，如預防心腦血管疾病、防癌、提高免疫力、緩解咽喉疼痛及腹瀉等等，所以，對藍莓的利用和衍生品開發越來越受到重視。鑑於藍莓的廣闊市場前景，對藍莓苗木的研發也越來越受到重視。在藍莓苗木培育中，可以通過扦插和組織培養脫毒方式。扦插苗由於可能含有病毒病菌等而造成一定時間後藍莓品質退化，從而影響藍莓的產量、質量和經濟效益。因此，為防止藍莓品質退化現象出現，保證藍莓的質量和產量及藍莓生產企業的經濟效益，通過製作藍莓脫毒苗進行繁育就成為優秀科技企業或者科技工作人員的首選品種繁育方式。脫毒苗製作，一般選取藍莓莖尖或者葉芽等具有較強分生能力的分生組織，在實驗室中經過滅菌除病毒處理，然後接種於無菌無病毒的培養基中，通過逐步培養，然後觀察藍莓苗的染毒染菌情況，篩選出沒有病毒和細菌侵染的藍莓幼苗，通過現代生物技術手段進一步切段快繁，從而實現獲得大量藍莓脫毒苗的目的。藍莓脫毒苗製作過程中，如何保證已經獲得的脫毒苗能夠快速生長繁殖是藍莓脫毒苗製作成功與否的關鍵因素。技術實現要素：針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種提高藍莓脫毒苗快速繁殖成活率用培養基，能夠使藍莓脫毒苗在組培快繁過程中的保持良好生長狀態及極高的成活率，為藍莓組織培養製作脫毒苗奠定基礎；本發明同時提供其製備方法。本發明所述的提高藍莓脫毒苗快速繁殖成活率用培養基，基本培養基為WPM，並添加有0.2-1.0g/L水解乳蛋白、0.4-1.2g/L維生素E、0.002-0.006g/L玉米素、0.002-0.008g/L6-苄基腺嘌呤、0.003-0.01g/L萘乙酸、0.004-0.02g/L2,4-二氯苯氧乙酸和10-40g/L蔗糖。所述的培養基優選為：基本培養基為WPM，並添加有0.5g/L水解乳蛋白、0.6g/L維生素E、0.003g/L玉米素、0.004g/L6-苄基腺嘌呤、0.004g/L萘乙酸、0.008g/L2,4-二氯苯氧乙酸和20g/L蔗糖。所述的提高藍莓脫毒苗快速繁殖成活率用培養基的製備方法，將水解乳蛋白、維生素E、玉米素、6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸和蔗糖加入到基本培養基中，混合均勻後分裝，滅菌後備用。所述的分裝規格為20-30mL/瓶。與現有技術相比，本發明的有益效果如下：(1)本發明中，WPM基本培養基提供了藍莓組培苗的生長所需營養成分，而維生素E，水解乳蛋白具有抑制酚氧化酶活性的功能，其組合可以減輕組培苗代謝產物對藍莓苗的毒害作用，水解乳蛋白作為營養元素還可以供給幼苗所需養分；玉米素、6-苄基腺嘌呤、萘乙酸和2,4-二氯苯氧乙酸等作為植物激素成分，具有促進細胞分裂，促進根系形成，促進葉芽分化等功能，四者協同增效保證了藍莓組培苗的快速分裂增殖；蔗糖不僅提供了藍莓組培幼苗生長所需的碳元素供應，同時可以調節細胞滲透壓力，保證了藍莓瓶苗的正常生長。(2)本發明所述的提高藍莓脫毒苗快速繁殖成活率用培養基，能夠保證藍莓脫毒苗在組培快繁中的良好生長狀態及極高的成活率，為藍莓組織培養製作脫毒苗奠定了基礎。(3)本發明所述的製備方法，簡單易行、便於操作。具體實施方式下面結合實施例對本發明做進一步說明。實施例中採用的基本培養基WPM採用本領域人員公知配方進行配製。實施例1所述的提高藍莓脫毒苗快速繁殖成活率用培養基，基本培養基為WPM，並添加有0.5g/L水解乳蛋白、0.6g/L維生素E、0.003g/L玉米素、0.004g/L6-苄基腺嘌呤、0.004g/L萘乙酸、0.008g/L2,4-二氯苯氧乙酸和20g/L蔗糖。其製備方法為：將水解乳蛋白、維生素E、玉米素、6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸和蔗糖加入到基本培養基中，混合均勻後分裝，滅菌後備用。分裝規格為25mL/瓶。實施例2所述的提高藍莓脫毒苗快速繁殖成活率用培養基，基本培養基為WPM，並添加有0.2g/L水解乳蛋白、0.4g/L維生素E、0.002g/L玉米素、0.002g/L6-苄基腺嘌呤、0.003g/L萘乙酸、0.004g/L2,4-二氯苯氧乙酸和10g/L蔗糖。其製備方法為：將水解乳蛋白、維生素E、玉米素、6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸和蔗糖加入到基本培養基中，混合均勻後分裝，滅菌後備用。分裝規格為20mL/瓶。實施例3基本培養基為WPM，並添加有1.0g/L水解乳蛋白、1.2g/L維生素E、0.006g/L玉米素、0.008g/L6-苄基腺嘌呤、0.01g/L萘乙酸、0.02g/L2,4-二氯苯氧乙酸和40g/L蔗糖。其製備方法為：將水解乳蛋白、維生素E、玉米素、6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸和蔗糖加入到基本培養基中，混合均勻後分裝，滅菌後備用。分裝規格為30mL/瓶。將藍莓苗分別接種到WPM基本培養基以及實施例1-3製備的培養基上，5周後觀察藍莓苗在不同培養基上的生長情況，具體見表1。成活情況用成活率表示。成活率計算公式為：成活率＝每個培養瓶中成活的藍莓苗棵數/每個培養瓶中所接種的總藍莓苗棵數。表1不同培養基上藍莓苗的生長情況每瓶接種總數成活棵數成活率(％)WPM基本培養基30826.7實施例1培養基3030100實施例2培養基302686.7實施例3培養基302480觀察發現：實施例1-3製備的培養基能夠顯著提高藍莓脫毒快速繁殖組培苗的成活率，改善瓶苗的生長狀態。實施例1-3培養基上的藍莓苗的生長情況遠遠優於基本培養基上的，其中實施例1培養基上的藍莓苗生長情況最優。當前第1頁1 2 3