鐵脂質體的應用的製作方法

2023-11-11 16:18:32

專利名稱：鐵脂質體的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種鐵脂質體的應用，特別是在製備治療高強度運動導致的缺鐵性貧血的藥物中的應用，屬於生命科學技術領域。
背景技術：
鐵是人體內重要的微量元素之一，廣泛參與電子傳遞，ATP合成，氧的運輸等新陳代謝活動，在體育運動的生理和代謝活動中有直接或間接的作用。鐵對於運動員來說尤為重要，不僅因為鐵是構成血紅蛋白的主要成分，還是線粒體呼吸鏈中酶的主要組成部分，與運動員的機體機能和運動能力密切相關。在激烈的競技體育活動中加劇了運動員鐵代謝速率，並影響機體鐵平衡，缺鐵導致血紅細胞的生成下降是運動性貧血的主要原因之一。在運動訓練過程中由於出現運動性貧血會影響運動員身體素質和競技水平的提高，因而運動員的缺鐵在運動學研究中備受關注，如何更有效的為運動員補鐵已成為研究的重點。脂質體是根據磷脂分子可在水相中形成穩定的脂雙層膜的趨勢而製備的人工膜。構成雙分子層的類脂親水性的頭部形成膜的內表面而親脂性的尾部則處於膜的中間， 內部為水相的閉合囊泡，大小從幾十納米到幾十微米，同時在脂質體的水相和膜內可以包裹多種物質。由天然膜成分組成的脂質體，適合於生物體內的吸收和降解，且脂質體無毒性和無免疫原性，作為藥物載體，具有靶向性。基於血紅素鐵結構的不穩定性和易氧化、 對消化道有刺激性及毒性的特點，結合脂質體作為新藥物的優越性製備的血紅素鐵脂質體能夠進一步提高血紅素鐵的穩定性，更好的提高補鐵效率，尤其是對運動性貧血的補鐵效率。2008年，本申請人向中國知識產權局提交了發明名稱為「補鐵劑脂質體鐵及其製備方法」，申請號2008100M581. 1和發明名稱為「補鐵劑鐵脂質體及其製備方法」，申請號2008100M580.7兩件專利申請，公布了兩種用於製備鐵脂質體的方法。所公開的一種補鐵劑鐵脂質體的組成以質量份數比表示為血紅素鐵和/或無機鐵膽固醇卵磷脂= (0. 1 200) (1 10) (10 100)。在上述發明的基礎上，進一步研究鐵脂質體在各類貧血治療中的作用和開發其新的用途具有積極意義。

發明內容
本發明的目的是提供一種鐵脂質體的應用，具體就是在製備治療高強度運動導致的缺鐵性貧血的藥物中的應用。本發明的構思是這樣的，本發明以運動性貧血為模型，鑑於目前的常規補鐵劑對於運動性貧血沒有明顯的補鐵效果的現狀，將鐵脂質體以各種形式如片劑、膠囊、滴丸、滴囊、口服液等作為治療運動性貧血的藥物和新型添加食品的新用途。本發明的一種鐵脂質體的應用，具體就是在製備治療運動性貧血藥物中的應用， 通過以下實驗所證實，實驗方法如下1.建立大鼠高強度運動缺鐵性貧血的模型
實驗鼠隨即分為7組，對照組，磷酸緩衝液組(PBS緩衝液組)，空白脂質體組，檸檬酸鐵組，鐵脂質體組，血紅素鐵組，血紅素鐵脂質體組。除對照組外，其餘四組按如下表格進行訓練
時間 (min)周一周二周三周三周五周六周曰第一周1357911休息第二周13/1517/1921/2325/2729/3133/35休息第三周37/3941/4345/4749/5153/5557/59休息第四周61/6365/6769/7173/7577/7981/83休息第五周83/8383/8383/8383/8383/8383/83休息第六周83/8383/8383/8383/8383/8383/83休息注運動強度均為30米/分鐘；第一周每天上午訓練一次，第二周起每天早晚訓練兩次。在第四周的周日通過尾尖取血的方法測定血常規如下
WBCX 10/LRBCX 10/LHGB g/LHCT對照組33.186678. 190667154. 40. 493933運動組36.153335. 19898. 466670.3124由此可判斷造模成功。通過對貧血模型建立後血清鐵、總鐵結合力的檢測，結果如下，說明模型可以作為運動性貧血模型。
血清鐵(mg/L)總鐵結合力(mg/L)對照組5. 606813.4966運動組3. 28217.950332、鐵脂質體補鐵效果實驗在運動的第五、六周，分別用磷酸緩衝液，空白脂質體，檸檬酸鐵，檸檬酸鐵脂質體，血紅素鐵，血紅素鐵脂質體進行灌胃，並保持運動強度和時間不變。其中鐵脂質體的配比方式為血紅素鐵(檸檬酸鐵)膽固醇卵磷脂=(0.1 200) (1 10) (10 100)。(1)大鼠血常規指標的檢驗結果
經過14天的灌胃處理，發現檸檬酸鐵脂質體組和血紅素鐵脂質體組的紅細胞數(RBC)、紅細胞壓積(HCT)及血紅蛋白(HGB))與檸檬酸鐵和血紅素鐵灌胃組相比均有明顯提高。就紅細胞平均數量而言，PBS緩衝液組為5.81X1012/L，空白脂質體組為 5. 54 X IO12ZU檸檬酸鐵組為5. 46 X 1012/L,檸檬酸鐵脂質體組為7. 28 X 1012/L,血紅素鐵組為4. 5 X 1012/L,血紅素鐵脂質體組為7. 11 X 1012/L，檸檬酸鐵脂質體組與檸檬酸鐵組相比P =0. 039577差異顯著，血紅素鐵與血紅素鐵脂質體相比P = O. 043356差異顯著(見附圖 1)；就紅細胞壓積的平均值而言，PBS緩衝液組為0. 389667L/L，空白脂質體組為0. 338L/L， 檸檬酸鐵組為0. 314667L/L，檸檬酸鐵脂質體組為0. 401333L/L，血紅素鐵組為0. 302L/L, 血紅素鐵脂質體組為0. 428667L/L，檸檬酸鐵脂質體組與檸檬酸鐵組相比P = O. 034946差異顯著，血紅素鐵與血紅素鐵脂質體相比P = 0.08772差異不顯著(見附圖幻；血紅蛋白平均含量，PBS緩衝液組為116. 67g/L，空白脂質體組為113. 33g/L，檸檬酸鐵組為91. 33g/L， 檸檬酸鐵脂質體組為136. 67g/L，血紅素鐵組為87. 67g/L，血紅素鐵脂質體組為131. 67g/ L，檸檬酸鐵脂質體組與檸檬酸鐵組相比P = 0. 034289差異顯著，血紅素鐵與血紅素鐵脂質體相比P = O. 02927差異顯著(見附圖幻；這說明鐵脂質體能夠有效提高運動性貧血情況下的血紅蛋白，紅細胞總數及血細胞壓積的水平。(2)血清鐵的檢驗結果血清鐵反映血液血液中可利用的鐵量，血清鐵含量越高，則可利用的鐵越多。經過 14天的灌胃處理，我們發現檸檬酸鐵脂質體組和血紅素鐵脂質體組較其他四組的血清鐵水平有明顯提高。其平均值分別為PBS緩衝液組3. 228mg/ml，空白脂質體組為3. 193mg/ml, 檸檬酸鐵組為3. 620mg/ml，檸檬酸鐵脂質體組為4. 377mg/ml，血紅素鐵組為3. 934mg/ml, 血紅素鐵脂質體組為4. 90;3mg/ml，檸檬酸鐵脂質體組與檸檬酸鐵組相比P = 0. 012195差異顯著，血紅素鐵與血紅素鐵脂質體相比P = O. 049105差異顯著(見附圖4)這說明鐵脂質體能夠有效的提高運動性貧血模型中血清中的可利用鐵量。(3)鐵脂質體毒性的檢測超氧化物歧化酶(SOD)是機體防禦系統中酶促系統的重要組成部分，對機體的氧化與抗氧化平衡起著至關重要的作用，此酶能清除超氧陰離子自由基，保護細胞免受損傷， 是藥物毒性試驗的重要指標。經過14天的灌胃處理，測定SOD水平，發現檸檬酸鐵脂質體組的SOD水平比檸檬酸鐵組有明顯升高，各組平均值分別為PBS緩衝液組70. 61467U/mg，空白脂質體組為92. 79167U/mg，檸檬酸鐵組為110. 9097U/mg，檸檬酸鐵脂質體組為139. 7413U/ mg，血紅素鐵組為121. 84U/mg，血紅素鐵脂質體組為123. 0233U/mg，檸檬酸鐵脂質體組與檸檬酸鐵組相比P = O. 000824差異非常顯著，說明在補鐵的同時，檸檬酸鐵脂質體不但對機體沒有毒害作用，還有助於提高機體清除氧自由基的能力。血紅素鐵與血紅素鐵脂質體相比P = O. 955514差異不顯著，說明血紅素鐵脂質體對機體沒有顯著影響(見附圖5)。機體通過酶系統與非酶系統產生氧自由基，後者能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發脂質過氧化作用，並因此形成脂質過氧化物如丙二醛(MDA)，因此測試MDA的量常常可反映機體內脂質過氧化的程度，間接地反映出細胞損傷的程度。通過14天的灌胃處理後，我們發現檸檬酸鐵脂質體組與檸檬酸鐵組、血紅素鐵脂質體組與血紅素鐵組的MDA 水平相比均顯著降低。具體平均數值PBS緩衝液組為4. M7nm0l/mg，空白脂質體組為 8. 817667nmol/mg,檸檬酸鐵組為17. 53267nmol/mg,檸檬酸鐵脂質體組為9. 714333nmol/mg,血紅素鐵組為16. 66667nmol/mg,血紅素鐵脂質體組為10. 79nmol/mg,檸檬酸鐵脂質體組與檸檬酸鐵組相比P = 0. 029799差異顯著，血紅素鐵與血紅素鐵脂質體相比P = 0. 004716差異顯著(見附圖6)，說明普通的鐵製劑對機體是有一定的損傷作用的而鐵脂質體對機體的損傷程度幾乎沒有。 本發明取得的積極效果是本發明使用的鐵脂質體治療運動性貧血效果有顯著提高，經過14天的灌胃處理，在反映貧血的重要指標上檸檬酸鐵脂質體組和血紅素鐵脂質體組的治療效果明顯優於檸檬酸鐵組和血紅素鐵組的治療效果，這說明鐵脂質體能夠有效的提高運動性貧血模型中的血清中的可利用鐵量，血清鐵含量明顯增高，促進血紅蛋白合成迅速改善動物的運動性貧血症狀。同時鐵脂質體處理後，不會對機體有損壞作用，反而對機體清除自由基的能力有所提高，能夠有效的補充機體可利用鐵。


圖1灌胃後大鼠RBC水平的變化。
圖2灌胃後大鼠HCT水平的變化。
圖3灌胃後大鼠HGB水平的變化。
圖4灌胃後大鼠血清鐵水平的變化。
圖5灌胃後大鼠SOD水平的變化。
圖6灌胃後大鼠MDA水平的變化。
具體實施例方式本實驗利用鐵脂質體口服液對大鼠高強度運動導致的缺鐵性貧血進行治療，作為實施例說明本發明。包括應用方法和取得的效果。一、大鼠運動性貧血模型的建立及檢驗除對照組實驗大鼠不用參加跑步訓練外，用於灌餵磷酸緩衝液、空白脂質體、檸檬酸鐵、檸檬酸鐵脂質體、血紅素鐵、血紅素鐵脂質體組大鼠每天按計劃早晚依次遞增跑步時間直至達到高強度運動水平保持運動強度和時間不變，第四周後通過尾尖取血做血常規檢驗，運動組大鼠血液指標平均值出現顯著改變，紅細胞由8. 190667X 1012/L減少到5. 198X 1012/L，血紅蛋白含量由154. 4g/L減少至Ij 98. 46667g/L,紅細胞壓積由0. 493933L/L減少到0. 3124L/L，血清鐵由5. 6068mg/ml減少到3. ^ang/ml，總鐵結合力由13. 4966mg/ml升高到17. 95033mg/ml,由此可判斷運動型貧血模型建模成功。二、鐵脂質體補鐵效果和毒性的檢驗運動性貧血模型建造成功後，將運動的大鼠隨即分為六組分別進行磷酸緩衝液、 空白脂質體、檸檬酸鐵、檸檬酸鐵脂質體、血紅素鐵、血紅素鐵脂質體的灌胃處理。連續灌胃 14天後取材，分別檢測大鼠的紅細胞數、紅細胞壓積、血紅蛋白、血清鐵、SOD水平和MDA水平變化。發現灌鐵脂質體組的大鼠各項生理指標均比灌普通鐵組的大鼠要好。檸檬酸鐵脂質體組和血紅素鐵脂質體組的紅細胞數分別為7. 28 X 1012/L和7. 11X1012/L，檸檬酸鐵組和血紅素鐵組的紅細胞數分別為5. 46 X 1012/L和4. 5 X1012/L,均有明顯差異；檸檬酸鐵脂質體組和血紅素鐵脂質體組的血紅蛋白分別為136. 67g/L和131. 67g/L，檸檬酸鐵組和血紅素鐵組的血紅蛋白分別為91. 33g/L和87. 67g/L，均有明顯差異；檸檬酸鐵脂質體組和血紅素鐵脂質體組的紅細胞壓積分別為0. 4L/L和0. 43L/L，檸檬酸鐵組和血紅素鐵組的紅細胞壓積分別為0. 31L/L和0. 30L/L，檸檬酸鐵脂質體組與檸檬酸鐵組有明顯差異；檸檬酸鐵脂質體組和血紅素鐵脂質體組的血清鐵分別為4. 38mg/ml和4. 90mg/ml，檸檬酸鐵組和血紅素鐵組的血清鐵分別為3. 62mg/ml和3. 93mg/ml，均有明顯差異；檸檬酸鐵脂質體組和血紅素鐵脂質體組的超氧化物歧化酶分別為139. 74U/mg和123. 02U/mg，檸檬酸鐵組和血紅素鐵組的超氧化物歧化酶分別為110.91U/mg和121.84U/mg，檸檬酸鐵脂質體組與檸檬酸鐵組有明顯差異；檸檬酸鐵脂質體組和血紅素鐵脂質體組的丙二醛分別為9. 71nmol/mg和 10. 79nmol/mg，檸檬酸鐵組和血紅素鐵組的丙二醛分別為17. 53nmol/mg和16. 67nmol/mg, 均有明顯差異。因動物服用鐵脂質體僅限於液體，因此，在人類進行口服時，鐵脂質體可設計成片齊U、膠囊、滴丸和食品添加劑等多種形式。其中每日服用量相當於鐵10-200mg，除鐵脂質體為其主要成分外，其他成分和具體製備工藝同常規鐵製劑的製備。實施例的詳細內容，與發明內容部分一致。
權利要求
1.一種鐵脂質體的應用，其特徵是鐵脂質體作為運動性貧血補鐵劑在製備治療運動性貧血藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的一種鐵脂質體的應用，其特徵是製備成含有鐵脂質體的片劑、滴丸、膠囊、口服液或添加食品。
全文摘要
本發明公開了一種鐵脂質體作為運動性貧血補鐵劑的應用。以大鼠運動性貧血為模型，在製備治療運動性貧血藥物中的應用通過動物實驗所證實。使用鐵脂質體口服液治療運動性貧血，經過灌胃處理，在反映貧血的重要指標上鐵脂質體組的治療效果明顯優於檸檬酸鐵和血紅素鐵組的治療效果，這說明鐵脂質體能夠有效的提高運動性貧血模型中的血清中的可利用鐵量，血清鐵含量明顯增高，促進血紅蛋白合成迅速改善動物的運動性貧血症狀。同時鐵脂質體處理後，不會對機體有損壞作用，反而對機體清除自由基的能力有所提高，能夠有效的補充機體可利用鐵。可做成如片劑、膠囊、滴丸、滴囊、口服液等作為治療運動性貧血的藥物和新型添加食品。
文檔編號A23L1/304GK102335193SQ20111030550
公開日2012年2月1日 申請日期2011年10月10日 優先權日2011年10月10日
發明者劉上元, 常彥忠, 段相林, 許梓 申請人:河北師範大學