毒蠟樣芽胞桿菌快檢試劑的製作方法

2023-11-12 05:13:07

毒蠟樣芽胞桿菌快檢試劑的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種引起食物中毒沙門氏菌屬快檢試劑，特別是食源性鼠傷寒沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、付傷寒甲、乙沙門氏菌的快檢試劑及其製備方法。該快檢試劑具有快速、準確、靈敏度高等特點。較傳統方法更具有應用價值，對指導臨床診斷和治療，防止濫用抗菌藥物具有重要意義。本發明是將增菌液中增加了特異性的沙門氏菌屬多價及單價血清，使檢測確診過程縮短至2-6小時，增菌時能夠利用特異血清的血清凝集反應，鑑定的準確率均在97％以上。檢測致病菌時耗時少、靈敏度高，準確性強。
【專利說明】毒蠟樣芽胞桿菌快檢試劑
[0001]【技術領域】本發明涉及一種毒蠟樣芽胞桿菌快檢試劑，特別是最常見的在外環境中生活力較強，在水、牛乳及肉類食品中能生存幾個月，最適溫度下繁殖迅速的毒蠟樣芽胞桿菌的快檢試劑。毒蠟樣芽胞桿菌食物中毒多由米飯、動物性食品，特別是肉類引起(如病死牲畜肉、熟肉製品)，也可由家禽、蛋類、奶類食品引起。以急性胃腸炎為主，主要症狀有嘔吐，腹瀉，腹痛，糞便為黃綠色水樣便。發熱3 8 0C-4 (TC。重病人出現寒戰，驚厥，抽搐和昏迷。老人，兒童和體弱者如不及時進行急救處理也可導致死亡。傳統常規檢測診斷方法為細菌培養分離，選擇標準典型菌株再進行血清學鑑定檢測。整個檢測確診過程耗時長、一般需要72-120小時，靈敏度不高，對快速準確診斷，搶救病人帶來極大的不便，本發明打破傳統常規分步檢測手段，在快速鑑別診斷食物中毒致病菌毒蠟樣芽胞桿菌的應用上具有明顯的優勢。從而減少由於檢測手段落後而造成對人體健康的危害，具有快速、準確、靈敏度高等特點。較傳統方法更具有應用價值，對指導臨床診斷和治療，防止濫用抗菌藥物具有重要意義。
[0002]【背景技術】本發明的目的在於提供一種毒蠟樣芽胞桿菌快檢試劑，蠟樣芽胞桿菌引起食物中毒。全年都可發生，多由米飯、動物性食品如肉類引起引起。傳統常規檢測診斷方法是要經過標本採集、分離鑑定、小白鼠餵飼實驗、雙份血清凝集實驗、沉澱實驗等鑑定實驗才能確診。傳統生化鑑定試驗周期長，操作繁瑣，試劑質量無法保證，嚴重影響了致病菌確認工作、選擇性分離培養的培養基上挑選可疑菌落需要經驗，存在漏檢的可能，而毒蠟樣芽胞桿菌的腸毒素穩定性很高，加工後的食物雖然有時檢不出，但仍有可能存在腸毒素，而腸毒素的常規檢驗方法需要做動物實驗，難度大，周期長。整個檢測確診過程耗時長約4-15天。本發明是將增菌液中增加了特異性的毒蠟樣芽胞桿菌多價及單價血清，使檢測確診過程縮短至2-6小時，增菌時能夠利用特異血清的血清凝集反應，鑑定的準確率均在97%以上。檢測致病菌時耗時少、靈敏度高，準確性強。
[0003]
【發明內容】
本發明的要點在於選擇合適的培養基組分，並進行合理混配，經加溫、溶解、混合、冷卻、分裝、高溫滅菌、無菌製備血清等工藝而成一種毒蠟樣芽胞桿菌快檢試劑。
[0004]本發明選擇的快檢試劑配方如下`(克/每升蒸餾水)蛋白腖5.0-10.0 ;乳糖
3.5-4.5 ;磷酸氫二鈉4.0-5.0 ;磷酸二氫鈉5.0-6.0 ;複合生長因子10.0-20.0 ;無菌毒蠟樣芽胞桿菌多價及單價血清10-20ml ;蒸餾水加至1000 mL，調pH7.1
快檢試劑呈無色或淡黃色透明液體，無任何沉澱物。食物源性中毒樣品在接種培養2-6小時時，液面交界有處有白色沉澱凝集，鏡下有凝集包團，為陽性，即可確診。磷酸鹽為緩衝劑，保持培養基PH穩定，有利致病菌的生長繁殖。
[0005]本發明產品的製備方法是:
1)、將蛋白腖、乳糖、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、複合生長因子混合於900mL蒸餾水加熱溶解，調pH7.1，121°C 15min高壓滅菌；
2)、冷卻後以無菌操作將兩液合併，加無菌毒蠟樣芽胞桿菌多價及單價血清混勻，分裝於滅菌容器內備用。[0006]本發明具有以下優點:(1)快檢試劑營養豐富、配製簡單；(2)臨床應用效果滿意，解決了床邊接種的困難，汙染小；(3)檢測方法簡單、時間短、選擇性強、檢出率高；
(4)接種樣本2-6小時後，即能得到液體篩選增菌凝集包團，便於觀察菌落生長情況，穩定性好；(5)對快速準確診斷，搶救病人對指導臨床診斷和治療，防止濫用抗菌藥物具有重要意義。
[0007]【具體實施方式】下面結合實施例對本發明作進一步的詳細說明:
按照下表所列數據(克/每升蒸餾水)及其所述步驟進行配置:
配方一:
蛋白腖5.0-10.0 ;乳糖3.5-4.5 ;磷酸氫二鈉4.0-5.0 ;磷酸二氫鈉5.0-6.0 ;複合生長因子10.0-20.0 ;無菌毒蠟樣芽胞桿菌多價及單價血清10-20ml ;蒸餾水加至1000 mL,調 ρΗ7.I。
配方二:
蛋白腖6.0-8.0;乳糖4.0-4.5 ;磷酸氫二鈉4.5-5.0;磷酸二氫鈉5.5-6.0;複合生長因子14.0-20.0 ;無菌毒蠟樣芽胞桿菌多價及單價血清14-20ml ;蒸餾水加至1000 mL,調 ρΗ7.I。
配方三:
蛋白腖6.0-9.0;乳糖3.5-4.0 ;磷酸氫二鈉4.0-4.5 ;磷酸二氫鈉5.0-5.5 ;複合生長因子12.0-19.0 ;無菌毒蠟樣芽胞桿菌多價及單價血清ll_19ml ;蒸餾水加至1000 mL,調 ρΗ7.I。
【權利要求】
1.本發明涉及一種蠟樣芽胞桿菌快檢試劑，其特徵在於具有如下配方(克/每升蒸餾水)蛋白腖5.0-10.0;乳糖3.5-4.5 ;磷酸氫二鈉4.0-5.0 ;磷酸二氫鈉5.0-6.0 ;複合生長因子10.0-20.0 ;無菌毒蠟樣芽胞桿菌多價及單價血清10-20ml ;蒸餾水加至1000 mL,調 ρΗ7.I。
2.—種權利要求1所述蠟樣芽胞桿菌快檢試劑的製備方法，其特徵在於具有如下的步驟: 1)、將蛋白腖、乳糖、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、複合生長因子混合於900mL蒸餾水加熱溶解，調pH7.1，121°C 15min高壓滅菌； 2)、冷卻後以無菌操作將兩液合併，加無菌毒蠟樣芽胞桿菌多價及單價血清混勻，分裝於滅菌容器內備用。
【文檔編號】C12Q1/04GK103667416SQ201210354584
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2012年9月22日 優先權日:2012年9月22日
【發明者】崔瑛 申請人:青島道合生物科技有限公司