Ip-10抗體劑量遞增方法

2023-11-11 12:25:42 2

Ip-10抗體劑量遞增方法【專利摘要】在某些實施方案中，本發明提供了一種治療受試者體內IP-10相關疾病的方法，包括：(a)向受試者施用預定劑量的抗IP10抗體；(b)檢測該受試者的樣品中抗-IP10抗體的水平；和(c)如果步驟(b)中抗-IP10抗體的水平低於閾值暴露水平，則增加受試者體內抗-IP10抗體的劑量，從而使受試者的IP-10相關疾病得到治療。【專利說明】IP-10抗體劑量遞增方法[0001]發明背景[0002]Y幹擾素誘導蛋白IO(IP-1O)(也稱作CXCL10)是一種IOkDa趨化因子，由多種細胞，包括內皮細胞、單核細胞、成纖維細胞和角質形成細胞，響應IFN-Y而分泌。IP-10還存在於人遲髮型超敏(DTH)反應的皮膚巨噬細胞和內皮細胞中。儘管IP-10最初是基於它被IFN-Y誘導的性質而得名的，但是它也可以被IFN-a誘導，例如在樹突細胞中。在中樞神經系統的細胞中，例如在星形膠質細胞和小膠質細胞中，IP-10表達還可以被刺激物如IFN-y、病毒和脂多糖等所誘導。[0003]IP-10的受體已經被驗明為CXCR3，一種七次跨膜受體。CXCR3在活化的T淋巴細胞上表達，但不在靜息T淋巴細胞以及B淋巴細胞、單核細胞或粒細胞上表達。在NK細胞上，CXCR3在TGF-PI的刺激下上調。還鑑定了CXCR3的其它兩種配體:MIG和ITAC。在活化的T細胞中，IP-10與CXCR3的結合介導鈣動員和趨化作用。IP-10與活化的NK細胞上的CXCR3的結合也可誘導趨化作用和細胞內鈣動員。在胸腺內，IP-10是TCRa@+CD8+T細胞，TCRYS+T細胞和NK-型細胞的化學引誘物。[0004]IP-10或其受體CXCR3已經在多種不同的炎症和自身免疫性疾病中被鑑定，包括多發性硬化、類風溼性關節炎、潰瘍性結腸炎、肝炎、脊髓損傷、系統性紅斑狼瘡、移植排斥反應、乾燥症候群。因此，需要有用於治療IP-10相關疾病(例如炎症和自身免疫性疾病)的治療劑(例如抗-1PlO抗體)以及治療方法。發明概要[0005]在某些實施方案中，本發明提供了用於治療需要治療的受試者的IPlO-相關疾病的方法。該方法包括:(a)向受試者施用預定劑量的抗-1PlO抗體；(b)檢測該受試者的樣品中抗-1PlO抗體的水平；和(c)如果步驟(b)中抗-1PlO抗體的水平低於閾值暴露水平，則增加受試者體內抗-1PlO抗體的劑量,從而使受試者的IP-10相關疾病得到治療。任選地，該方法中使用的抗-1PlO抗體特異結合人IP-10，而不與人MIG或人ITAC交叉反應。優選地，抗-1PlO抗體是MDX-1100(—種全長人單克隆抗體)。一種示例抗-1PlO抗體包括:(a)包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的重鏈可變區；和(b)包含SEQIDNO:7的胺基酸序列的輕鏈可變區。另一種示例抗-1PlO抗體包括:(a)包含SEQIDN0:3的重鏈可變區⑶Rl；(b)包含SEQIDNO:4的重鏈可變區CDR2；(c)包含SEQIDNO:5的重鏈可變區CDR3；(d)包含SEQIDNO:8的輕鏈可變區CDRl；(e)包含SEQIDNO:9的輕鏈可變區CDR2;和(f)包含SEQIDNO:10的輕鏈可變區CDR3。[0006]在某些方面中，上述方法的步驟(b)通過如下的方法檢測抗-1PlO抗體的水平，其包括在適合於抗體-抗原複合物形成的條件下使所述樣品與結合該抗-1PlO抗體的抗體接觸，隨後檢測抗體-抗原複合物的形成。優選地，與抗-1PlO抗體結合的抗體是抗獨特型抗體。例如，該抗獨特型抗體與MDX-1100的一個或多個CDR結合。示例性抗獨特型抗體包括，但不僅限於，在工作實施例中描述的10C8，6C9,2F5和23H10。在一個具體的實例中，該檢測方法利用兩種抗獨特型抗體，即10C8和23H10，分別作為捕獲抗體和可檢測抗體(也稱作「檢測抗體」)。任選地，檢測的完成是通過選自下組的方法實現的:EIA、ELISA、RIA、間接競爭免疫測定、直接競爭免疫測定、非競爭免疫測定、夾心式免疫測定和凝集測定。[0007]在某些方面中，上述方法的IPlO-相關疾病是炎症或自身免疫性疾病。炎症或自身免疫性疾病的實例包括但不限於:多發性硬化、類風溼性關節炎、炎性腸病(例如，潰瘍性結腸炎、克羅恩病)、系統性紅斑狼瘡、I型糖尿病、炎性皮膚病症(例如，銀屑病，扁平苔蘚)、自身免疫性甲狀腺疾病(例如格雷夫斯病(Graves』disease)、橋本氏甲狀腺炎(HashimotoJsthyroiditis))、sjdgren症候群、肺部炎症(例如，哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺結節病、淋巴細胞肺泡炎(lymphocyticalveolitis))、移植排斥、脊髓損傷、腦損傷(例如，中風)、神經變性性疾病(例如，阿爾茨海默病、帕金森氏病)、齦炎、基因治療誘導的炎症、血管生成疾病、炎性腎臟病(例如，IgA腎病、膜增生性腎小球腎炎、急進型腎小球腎炎)和動脈粥樣硬化。炎症或自身免疫性疾病的一個具體實例是炎性腸病(例如潰瘍性結腸炎或克羅恩病)。[0008]在某些實施方案中，本發明提供了一種分離的單克隆抗體(例如抗獨特型抗體)或其抗原結合部分，其特異結合抗-1Pio抗體。優選地，抗-1PlO抗體是MDX-1100。一種示例性抗-1PlO抗體包括:(a)包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的重鏈可變區；和(b)包含SEQIDN0:7的胺基酸序列的輕鏈可變區。另一種示例性抗-1PlO抗體包括:(a)包含SEQIDNO:3的重鏈可變區CDRl；(b)包含SEQIDNO:4的重鏈可變區CDR2；(c)包含SEQIDNO:5的重鏈可變區CDR3；(d)包含SEQIDNO:8的輕鏈可變區CDRl；(e)包含SEQIDNO:9的輕鏈可變區⑶R2;和(f)包含SEQIDNO:10的輕鏈可變區⑶R3。示例性抗獨特型抗體包括，但不僅限於，如工作實施例中描述的10C8，6C9,2F5和23H10。[0009]在某些實施方案中，本發明提供了一種雜交瘤細胞系，其產生特異結合抗-1P抗體(例如MDX-1100)的單克隆抗體(例如抗獨特型抗體)或其抗原結合部分。[0010]在某些實施方案中，本發明提供了一種藥物組合物，其包含(I)特異結合抗-1PlO抗體(例如MDX-1100)的單克隆抗體(例如抗獨特型抗體)或其抗原結合部分；和(2)藥物可接受的載體。[0011]在某些實施方案中，本發明提供了用於檢測樣品中治療性抗-1PlO抗體(例如MDX-1100)的方法。該方法包括在適合於抗體-抗原複合物形成的條件下使所述樣品與針對抗-1PlO抗體的抗體(例如抗獨特型抗體)或其抗原結合部分接觸，隨後檢測所述複合物的形成。例如，抗獨特型抗體與MDX-1100的一個或多個CDR結合。示例性抗獨特型抗體包括，但不僅限於，如工作實施例中描述的10C8，6C9,2F5和23H10。在一個具體實例中，檢測方法利用兩種抗獨特型抗體，即10C8和23H10，分別作為捕獲抗體和可檢測抗體(也稱作「檢測抗體」)。任選地，檢測的完成是通過選自下組的方法完成的:EIA、ELISA、RIA、間接競爭免疫測定、直接競爭免疫測定、非競爭免疫測定、夾心式免疫測定和凝集測定。[0012]在某些實施方案中，本發明提供了一種試劑盒，其包括(I)特異性結合抗-1PlO抗體(例如MDX-1100)的單克隆抗體(例如抗獨特型抗體)或其抗原結合部分；和(2)幫助抗體-抗原複合物形成所需要的試劑。[0013]在某些實施方案中，本發明提供了一種用於治療需要治療的受試者的IPlO-相關疾病的方法，包括:(a)向受試者施用抗-1PlO抗體；(b)通過免疫測定檢測該受試者的樣品中抗-1PlO抗體的水平；和(C)如果該抗-1PlO抗體的水平低於閾值暴露水平，則增加受試者體內抗-1PlO抗體的劑量；如果抗-1Pio抗體的水平處於或高於閾值暴露水平，則不增加受試者體內抗-1PlO抗體的劑量。[0014]附圖簡述[0015]圖1顯示了基於研究第57天的MDX-1IOOCminss而分層(stratified)的臨床響應率、臨床緩解率和黏膜癒合率的暴露-響應(E-R)關係。[0016]圖2顯示了臨床響應率相對於研究第57天的MDX-1IOOCminss的Logistic回歸分析。[0017]圖3顯示了臨床緩解率相對於研究第57天的MDX-1IOOCminss的Logistic回歸分析。[0018]圖4顯示了黏膜癒合率相對於研究第57天的MDX-1IOOCminss的Logistic回歸分析。[0019]圖5顯示了經負1glO轉化的P-值相對於作為可能的目標暴露(targetexposure)的不同Cminss的作圖。[0020]圖6A和6B顯示了兩種抗獨特型克隆10C8和6C9的結合活性的分析。[0021]圖7顯示了兩種抗獨特型克隆2F5和23H10的結合活性的分析。[0022]圖8顯示了亞克隆10C8的結合活性的分析。[0023]圖9顯示了亞克隆6C9，2F5和23H10的結合活性的分析。[0024]圖10顯示了克隆10C8與IPlO競爭的結合活性的分析。[0025]圖11顯示了克隆2F5和23H10與IPlO競爭的結合活性的分析。[0026]圖12A顯示了6A5人單克隆抗體重鏈可變區的核苷酸序列(SEQIDNO:1)和胺基酸序歹Ij(SEQIDNO:2)。繪出了CDRl(SEQIDNO:3)，CDR2(SEQIDNO:4)和CDR3(SEQIDNO:5)區，並指示了V、D和J種系衍生。[0027]圖12B顯示了6A5人單克隆抗體輕鏈可變區的核苷酸序列(SEQIDNO:6)和胺基酸序歹Ij(SEQIDNO:7)。繪出了CDR1(SEQIDNO:8)，CDR2(SEQIDNO:9)和CDR3(SEQIDNO:10)區，並指示了V和J種系衍生。[0028]發明詳細說明[0029]本發明涉及分離的單克隆抗體，特別是人單克隆抗體，其特異結合IP-10(本文稱作「IPlO抗體」或「抗-1Pio抗體」)並抑制IP-10的功能性質。在某些實施方案中，本發明提供了結合IP-10抗體的抗獨特型抗體。在某些實施方案中，本發明提供了使用這樣的抗獨特型抗體檢測生物樣品中IPlO抗體的方法。在進一步的實施方案中，本發明提供了新型有效的治療IPlO相關疾病(例如炎症或自身免疫性疾病)的方法，其包括:(I)給受試者使用抗-1Pio抗體；(b)檢測該受試者的樣品中抗-1Pio抗體的水平；和(C)如果步驟(b)中抗-1Pio抗體的水平低於某一水平，則增加施與受試者的抗-1PlO抗體的劑量，從而治療受試者的IP-10相關疾病。在進一步的實施方案中，本發明提供了一種治療需要治療的受試者的IPlO相關疾病的方法，包括:(I)對受試者施用抗-1PlO抗體；(b)通過免疫測定檢測該受試者的樣品中抗-1PlO抗體的水平；和(C)如果抗-1PlO抗體的水平低於閾值暴露水平，則增加施與受試者的抗-1PlO抗體的劑量；如果抗-1Pio抗體的水平處於或高於閾值暴露水平，則不增加施與受試者的抗-1PlO抗體的劑量。[0030]為了使本發明更加容易理解，首先對一些術語進行定義。其他定義在詳細說明各處中給出。[0031]術語「Y幹擾素誘導蛋白10」、「IP_10」和「CXCL10」可互換使用，包括人IPlO的變體、同種型和物種同源物。因此，在某些情況下，本發明的人IPlO抗體可以和來自其它非人物種的IPlO交叉反應。在其它情況下，所述抗體可以完全對人IP-10特異，而不會顯示物種交叉反應性或其它類型的交叉反應性。人IP-10的完整胺基酸序列的GENBANK?登錄號為NP_001556。獼猴IP-10的完整胺基酸序列的GENBANK?登錄號為AAK95955。小鼠IP-10的完整胺基酸序列的GENBANK?登錄號為NP_067249。[0032]術語「CXCR3」是指IP-10(CXCLlO)的受體。人CXCR3的完整胺基酸序列的GENBANK?登錄號為NP_001495。[0033]術語「MIG」是指CXCR3的配體，也稱作幹擾素-Y誘導的單核因子，其與IP-10不同。人MIG的完整胺基酸序列的GENBANK?登錄號為NP_002407。[0034]術語「ITAC」是指CXCR3的配體，也稱作幹擾素誘導的T細胞a化學引誘物，其與IP-10不同。人ITAC的完整胺基酸序列的GENBANK?登錄號為NP_005400。[0035]如這裡所使用的，術語「抗體」包括完全抗體和其任何抗原結合片段(即「抗原結合部分」)或單鏈。「抗體」是指一種至少包含由二硫鍵互聯的兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈的糖蛋白，或其抗原結合部分。每條重鏈由重鏈可變區(這裡縮寫為Vh)和重鏈恆定區構成。重鏈恆定區由三個結構域CH1,CH2和CH3構成。每條輕鏈由輕鏈可變區(這裡縮寫為')和輕鏈恆定區構成。輕鏈恆定區由一個結構域CL構成。V1^P'區可以被進一步細分為稱作互補決定區(CDR)的超變區，它們之間被稱作框架區(FR)的更保守的區域分隔。每個Vh和'區由三個CDR和四個FR構成，從氨基端到羧基端的排列順序如下:FRl,⑶Rl，FR2,⑶R2，FR3,⑶R3，FR4。重鏈和輕鏈的可變區含有一個與抗原相互作用的結合域。抗體的恆定區可以介導免疫球蛋白與宿主或因子的結合，包括免疫系統的各種細胞(例如效應細胞)和經典補體系統中的第一補體(Clq)。[0036]如這裡所使用的，術語抗體的「抗原結合部分」(或簡稱為「抗體部分」)是指抗體的一個或多個保持特異性結合抗原(例如IP-10或IPlO抗體)能力的片段。已經顯示，抗體的抗原結合功能可以由全長抗體的片段實現。術語抗體的「抗原結合部分」所涵蓋的結合片段的實例包括:(i)Fab片段，一種由VH，VL,Cl和Chi結構域構成的單價片段；(ii)F(ab，)2片段，一種包含兩條通過鉸鏈區二硫鍵相連的Fab片段的二價片段；(iii)Fd片段，由Vh和Chi結構域構成；(iv)Fv片段，由抗體單條臂的Vlj和Vh結構域構成；(V)dAb片段(Wardetal.,Nature,341:544-546(1989))，其由一個Vh結構域構成；和(vi)分離的互補決定區(CDR)。而且，儘管Fv片段的兩個結構域，八和Vh，由不同的基因編碼，但是可以用重組方法通過一段合成接頭將它們連接起來，使它們能夠構建成為一個單一蛋白鏈，其中\和Vh區配對形成單價分子(稱作單鏈Fv(scFv);見例如Birdetal.，Science,242:423-426(1988);和Hustonetal.,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA,85:5879-5883(1988))。這種單鏈抗體也意圖包含在術語抗體的「抗原結合部分」之內。使用本領域技術人員已知的傳統技術獲得這些抗體片段，並且以與完整抗體相同的方式篩選所獲得的片段的功用。[0037]如這裡所使用的，「分離的抗體」是指這樣的抗體,其基本上沒有(substantiallyfreeof)其它具有不同抗原特異性的抗體(例如分離的特異性結合IPlO的抗體基本上沒有特異結合除IPlO之外的抗原的抗體)。然而，特異結合IPlO的分離抗體可能與其它抗原，例如來自其它物種的IPlO分子，具有交叉反應性。而且，分離抗體可以基本上沒有其它細胞材料和/或化學劑。[0038]如這裡所使用的，術語「單克隆抗體」或「單克隆抗體組合物」是指具有單一分子組成的抗體分子製備物。單克隆抗體組分對某個特定的表位顯示單一的結合特異性和親和力。[0039]如這裡所使用的，術語「人抗體」意圖包含如下的抗體，其可變區的框架和CDR區均來自人種系免疫球蛋白序列。而且，如果抗體含有恆定區,則恆定區也來自人種系免疫球蛋白序列。本發明的人抗體可以包含不是由人種系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基(例如通過體外隨機或定點誘變或通過體內體細胞突變引入的突變)。然而，如這裡所使用的，術語「人抗體」不意圖包含如下的抗體，其中來源於另一種哺乳動物物種(例如小鼠)的種系的CDR序列被嫁接到人框架序列上。[0040]術語「人單克隆抗體」是指顯示單一結合特異性的抗體(antibodies),它們的可變區的框架和CDR區均來源於人種系免疫球蛋白序列。在一個實施方案中，人單克隆抗體由雜交瘤產生，雜交瘤包括從轉基因非人動物(例如轉基因小鼠)獲得的、基因組中包含人重鏈轉基因和輕鏈轉基因的B細胞，與永生細胞融合。[0041]如這裡所使用的，術語「重組人抗體」包括所有通過重組方法製備、表達、產生或分離的人抗體，例如(a)從用人免疫球蛋白基因轉基因或轉染色體的動物(例如小鼠)或由其製備的雜交瘤分離得到的抗體，(b)從被轉染從而表達人抗體的宿主細胞，例如從轉染瘤，分離得到的抗體，(C)從重組、組合人抗體文庫分離得到的抗體，和(d)通過其它涉及將人免疫球蛋白基因序列剪接到其它DNA序列的手段製備、表達、產生或分離的抗體。這些重組人抗體的可變區中的框架區和CDR區均來自人種系免疫球蛋白序列。然而，在某些實施方案中，可以對這樣的重組人抗體進行體外突變(或者當使用被人Ig序列轉基因的動物時，進行體內體細胞突變)，以至於重組抗體Vh和\區的胺基酸序列雖然來自於人種系Vh和\序列並與人種系Vh和\序列近緣，但不是體內人抗體種系庫中天然存在的序列。[0042]結合抗-1P抗體的抗體[0043]在某些方面中，本發明提供了特異針對抗-1PlO抗體(例如MDX-1100)的單克隆或多克隆抗體。優選地，此類抗體是抗獨特型(抗-1d)抗體。抗獨特型(抗-1d)抗體是一種如下的抗體，其識別一般與抗體之抗原結合位點相關的獨特決定簇。Id抗體可以通過用要製備抗-1d的抗體免疫動物來製備。被免疫的動物會識別免疫用抗體的獨特型決定簇並對進行響應，產生針對這些獨特型決定簇的抗體(抗-1d抗體)。見例如美國專利N0.4，699，880。下面提供了用於產生與抗IPlO抗體結合的單克隆抗體的示例技術。[0044]單克隆抗體可以從一群基本上同質的抗體獲得,基本上同質的抗體即構成該群體的各個抗體是相同的，只是可能存在少量自然發生的突變。因此，修飾語「單克隆」是指抗體的如下特徵，即其不是離散(discrete)抗體的混合物。例如，單克隆抗體可以用首先由Kohler等，Nature,256:495(1975)描述的雜交瘤方法製備，或者可以通過重組DNA方法(美國專利N0.4，816，567)製備。在雜交瘤方法中，小鼠或其它合適的宿主動物，例如倉鼠，被如上所述地免疫，引發產生或能夠產生特異結合用於免疫的蛋白的抗體的淋巴細胞。可選擇地，淋巴細胞可以被體外免疫。然後，用合適的融合劑，例如聚乙二醇，將淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，形成雜交瘤細胞(Goding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,59-103頁,AcademicPress(1986))。[0045]將這樣製備的雜交瘤細胞接種並生長於合適的培養基中，其優選地含有一種或多種可以抑制未融合的親本骨髓瘤細胞生長或生存的物質。例如，如果親本骨髓瘤細胞缺少次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(HGPRT或HPRT)，則用於雜交瘤的培養基通常包含次黃嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT培養基)，這些物質會阻止HGPRT缺陷細胞的生長。優選的骨髓瘤細胞是這樣的細胞，其融合效率高，支持選出的抗體產生細胞穩定高水平地產生抗體，並且對培養基例如HAT培養基敏感。其中，骨髓瘤細胞系的實例是小鼠骨髓瘤細胞系，例如來自M0PC-21和MPC-1l小鼠腫瘤的細胞系，其可以從索爾克研究所細胞供應中心(SalkInstituteCellDistributionCenter)(SanDiego,Calif.USA)獲得，而SP-2,P3X63Ag.U.1,orX63_Ag8_653細胞可以從美國典型微生物菌種保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)(Manassas.Va.USA)獲得。人骨髓瘤和小鼠-人異源骨髓瘤細胞系也已被描述用於產生人單克隆抗體(Kozbor,J.1mmunol.,133:3001(1984);Brodeur等,MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,51-63頁，MarcelDekker,Inc.,NewYork(1987))。[0046]對於雜交瘤在其中生長的培養基，測定其中是否有興趣抗體的單克隆抗體產生。優選地，通過免疫沉澱或通過體外結合測定，例如放射免疫(RIA)或ELISA，來確定雜交瘤細胞產生的單克隆抗體的結合特異性。還對這些克隆進行篩選，選出當用作捕獲劑和/或可檢測抗體時在測定中產生背景噪音最小者。單克隆抗體的結合親和性可以通過例如Munson等，Anal.Biochem.,107:220(1980)的Scatchard分析加以確定。在鑑定出可以產生具有期望特異性、親和力和/或活性的抗體的雜交瘤細胞之後，可以通過有限稀釋程序對克隆進行亞克隆，並通過標準方法進行培養(Goding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,59-103頁，AcademicPress(1986))。用於該目的的合適培養基包括例如D-MEM或RPM1-1640培養基。此外，雜交瘤細胞可以作為動物體內的腹水瘤在體內生長。通過亞克隆篩選的單克隆抗體適當地通過常規免疫球蛋白純化程序，例如蛋白A-SEPHAROSE?j:;;^糖色譜、羥磷灰石色譜、凝膠電泳、透析或親和色譜，從培養基、腹水或血清中分離。[0047]一種具體的使用雜交瘤技術的製備技術包括用混於佐劑(例如單磷醯脂質A/海藻糖二棒分枝菌酸酯)中的感興趣抗體、或者感興趣抗體與鑰孔戚血藍蛋白(KLH)或與鱟血藍蛋白的綴合物免疫(例如通過注射到足掌或脾臟)小鼠(例如CAFl小鼠或Balb/c)。注射的次數依需要而定。處死小鼠並從被免疫的小鼠，特別是具有高滴度的小鼠，獲得胭窩淋巴結或脾細胞，並與鼠骨髓瘤細胞系如SP2/0或P3X63Ag.U.1(美國典型培養物保藏中心(ATCC,Manassas,Va.))融合。對所得的雜交瘤篩選對感興趣的抗體具有結合親和力的抗體，而排除結合不同抗原的其它抗體。這種篩選可以通過常規的ELISA來實施，檢測可結合固定的感興趣抗體的抗體的分泌，或者檢測具有超過約95%的抑制能力(抑制興趣抗體與蛋白抗原的結合)的IgG的產生。該篩選限定了一個對感興趣抗體具有正常或更高反應性、並且具有選擇性的抗體群體。可以進行進一步的篩選以鑑定具有對ELISA而言特別優選的性質的抗體。用於篩選優選抗獨特型抗體的標準包括其以相對高的親和力(Kd〈大約10_8M)結合感興趣抗體，且其與感興趣抗體的結合應當與對分析物跨膜蛋白的結合互斥。還應當提供具有最少背景噪音的最清晰的測定。[0048]陽性克隆可以使用BIACOR.E?裝置通過表面等離子體共振進行再次篩選，測量抗獨特型抗體對感興趣抗體的親和性以及結合的互斥性。可以將兔抗-小鼠IgG(Fc)固定到生物傳感器表面上，並用於從雜交瘤培養上清液捕獲抗獨特型抗體。可以將0.2nM的感興趣抗體單獨或與0.9nMC反應蛋白(CRP)—起注射到被固定的抗獨特型抗體的表面上，並比較相對質量積累。通過有限稀釋對選出的雜交瘤細胞進行克隆，獲得期望的克隆。然後從這些克隆純化並分離抗獨特型抗體。製備抗獨特型抗體的實例見例如美國公開Nos.2002/0142356和2008/0176257,以及Durrant等，Int.J.Cancer,1:92(3):414-420(2001)和Bhattacharya-Chatterjee,Curr.0pin.Mo1.Ther.,3(1):63-69(2001)。[0049]在某些實施方案中，單克隆抗體還可以通過重組的方法產生。通過常規程序容易地對編碼單克隆抗體的DNA進行分離和測序(例如通過能夠特異結合編碼鼠抗體重鏈和輕鏈的基因的寡核苷酸探針)。雜交瘤細胞用作這些DNA的優選來源。一旦分離DNA，可以將DNA置於表達載體中，隨後轉染進入宿主細胞，例如不會產生免疫球蛋白的大腸桿菌細胞、猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或骨髓瘤細胞，在重組宿主細胞中獲得單克隆抗體的合成。關於在細菌中重組表達編碼抗體的DNA的綜述文獻見Skerra等，Curr.0pin.Tmmun01.,5:256-262(1993)和Pluckthun,Tmmuno1.Revs.,130:151-188(1992)。[0050]在進一步的實施方案中，抗體或抗體片段可以從用McCafferty等，Nature,348:552-554(1990)描述的技術產生的抗體卩遼菌體文庫中分離。Clackson等，Nature,352:624-628(1991)和Marks等，J.Mol.Biol.，222:581-597(1991)分別描述了使用噬菌體文庫分離鼠和人抗體。後續的出版物描述了通過鏈改組產生高親和性(nM範圍)人抗體(Marks等，Bio/Technology,10:779-783(1992))，使用組合感染和體內重組作為構建極大噬菌體文庫的策略(Waterhouse等，Nucl.AcidsRes.,21:2265-2266(1993))。因此，這些技術是用於分離單克隆抗體的常規單克隆抗體雜交瘤技術的可用替代。[0051]DNA也可以被修飾，例如通過用人重鏈和輕鏈恆定域的編碼序列代替同源鼠序列(見例如美國專利N0.4,816,567;Morrison等,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA，81:6851(1984))，或者通過將非免疫球蛋白多肽編碼序列的全部或部分共價連接到免疫球蛋白編碼序列上來加以修飾。[0052]許多可用於實踐本發明的操作規程，無論是否在這裡被詳細描述，均是分子生物學、生物化學、免疫學和醫學領域的技術人員所熟知的。一旦確定了感興趣抗體，產生可結合抗-1PlO抗體的抗體屬於本領域普通技術人員的技能範圍之內。[0053]檢測方法[0054]在某些實施方案中，本發明針對抗-1PlO抗體(例如MDX-1100)的抗體或其抗原結合部分可以用於檢測受試者體內的治療性抗-1PlO抗體(例如MDX-1100)和其片段或衍生物。優選地，這樣的抗體是抗獨特型(抗-1d)抗體。例如，在適合形成抗體-抗原複合物的條件下，將來自測試受試者的體液(例如血液、血清或血漿)或組織樣品與本發明的抗-MDX-1100單克隆抗體或其抗原結合部分接觸。然後可以通過本文中描述的或者本領域已知的(見例如O』Connor等，CancerRes.，48:1361-1366(1988))方法確定這些複合物的存在或量，其中將測試樣品中發現的複合物的存在或量與在一系列含有已知量的抗原的標準品或對照樣品中發現的複合物的存在或量進行比較。因此，本發明涉及用於檢測生物樣品(例如血液、血清、血漿、尿液、腦脊液、粘液或唾液)中的抗-1P10抗體例如MDX-1100(或其片段和/或衍生物)的方法。[0055]在任何所述檢測測定中，該方法可以採用免疫測定，例如酶免疫測定(EIA)、酶聯免疫吸附測定(ELISA)、放射免疫測定(RIA)、間接競爭免疫測定、直接競爭免疫測定、非競爭免疫測定、夾心式免疫測定、凝集測定或其它本文中記載的或本領域已知的免疫測定(見例如Zola,MonoclonalAntibodies:AManualofTechniques,pp.147-158，CRCPress,Inc.(1987))。免疫測定可以構建成同源或異源模式。異源免疫測定的獨特之處在於包含將結合的分離物與游離的分析物固相分離，或將結合的標籤與游離的標籤固相分離。固相可以採用本領域熟知的各種形式，包括但不僅限於，試管、平板、珠子或條(strips)。一種具體的形式是微量滴定板。固相材料可以包括各種玻璃、聚合物、塑料、紙或膜。特別期望的是塑料，例如聚苯乙烯。異源免疫測定可以是競爭或非競爭的(即三明治形式)(見例如美國專利N0.7，195,882)。[0056]在一個具體的實施方案中，本發明提供了一種檢測來自受試者的生物樣品中MDX-1100的方法，其包括如下步驟(見下文)。[0057]在測定的第一步中，使生物樣品接觸固定的捕獲抗體，例如針對MDX-1100的抗獨特型抗體，並與之一起溫育。這些抗獨特型抗體優選地是單克隆抗體，並可以來自任何物種，但優選地是來自齧齒動物，更優選地鼠(例如10C8，6C9,2F5和23H10，如工作實施例中所述)。固定常規上通過使抗體不溶化來實現，固定或是在測定程序之前進行，例如通過吸附於不溶於水的基質或表面(美國專利N0.3，720，760)，或通過非共價或共價偶聯(例如使用戊二醛或碳二亞胺交聯，事先活化(例如用硝酸和還原劑，如美國專利N0.3，645，852或Rotmans等，J.1mmunol.Methods,57:87-98(1983)所述)或者不事先活化支持物，或者在測定程序之後固定捕獲抗體，例如通過免疫沉澱。[0058]用於免疫測定的固相可以是任何基本上不溶於水、且可以用於免疫測量性測定(immunometricassays)的惰性支持物或載體,包括例如表面、顆粒、多孔材料等形式的支持物。通用的支持物的實例包括小片層(smallsheet)、SEPHADEX?凝膠、聚氯乙烯、塑料珠和用聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯等製成的測試板或試管，包括96孔滴定板，以及顆粒材料(particulatematerials),例如濾紙、瓊脂糖、交聯葡聚糖和其它多糖。或者,適當地採用活性水不溶性基質，例如氰-溴化物活化的碳水化合物和美國專利Nos.3，969，287;3，691，016;4，195，128;4，247，642;4，229，537和4，330，440中描述的活性基質來進行捕獲試劑固定。在一個具體的實施方案中，固定的捕獲抗體被包被在微滴定板上，特別地，所用的固相是可以用於一次分析幾個樣品的多孔微滴定板。最優選的是MICROTEST?或MaxiSorp96孔ELISA板,例如商品名為NUNC?MaxiSorb或IMMULON?的產品。固相被如上所述地用捕獲抗體包被，其可以合意地通過非共價或共價相互作用連接或物理連接。用於附接的技術包括在美國專利N0.4，376，110和本文引用的參考文獻中所述的那些。如果是共價的，將平板或其它固相與交聯劑和捕獲抗體一起溫育，溫育條件是本領域眾所周知的，例如在室溫下I個小時。通常使用的用於將捕獲劑附接到固相基底的交聯劑包括，例如1，1_雙(重氮乙醯)-2_苯乙烷、戊二醛、N-羥基琥珀醯亞胺酯，例如與4-疊氮水楊酸的酯，同基雙功能亞胺酸酯，包括二琥珀醯亞胺基酯如3，3'-二硫雙(琥珀醯亞胺基丙酸酯)，和雙功能馬來醯亞胺如雙-N-馬來醯亞胺基-1，8-辛烷。衍生化劑例如甲基-3-((對疊氮苯基)-二硫)丙醯異丙亞胺(propioimidate)可以產生光活化性(photoactivatable)中間產物,該中間產物能夠在光存在下形成交聯。[0059]被包被的平板隨後通常用封閉劑處理，封閉劑非特異性結合結合位點並使結合位點飽和，從而防止游離配體無謂地結合在平板的孔上的過量位點上。服務於此目的的合適封閉劑的實例包括，例如，明膠、牛血清白蛋白、卵清蛋白、酪蛋白和脫脂牛奶。封閉處理通常在環境溫度下處理大約1-4個小時，優選地大約1.5-3小時。[0060]選擇樣品與固定的捕獲抗體的溫育條件，使測試的靈敏度最大並使解離最小，並保證樣品中存在的任何感興趣抗體均與固定的捕獲抗體結合。優選地，溫育在相當恆定的溫度下完成，溫度範圍從大約0°c到大約40°C，優選地在室溫或室溫附近。溫育時間一般不超過大約10小時。優選地，溫育時間為室溫或大約室溫下大約0.5-3小時，更優選地大約1.5-3小時，以最大化感興趣抗體與捕獲抗體的結合。如果添加了蛋白酶抑制劑以防止生物流體中的蛋白酶降解感興趣抗體，則溫育的持續時間可以更長。[0061]在本文中的測試方法的第二步(該步驟是可選的)中，將生物樣品與被固定的捕獲抗體分離(優選地通過清洗)，以除去未被捕獲的感興趣抗體(例如MDX-1100)。清洗可以進行3次或更多次。清洗的溫度一般從冰箱溫度到中等溫度，在實驗期間保持恆定溫度，通常為大約0-40°C，更優選地大約4-30°C。如果擔心被捕獲的感興趣抗體在隨後的步驟中可能有一定程度的解離，則在此階段也可以添加交聯劑或其它合適的試劑，使當前已結合的感興趣抗體與捕獲劑共價連接。[0062]在第三步中，將結合有任何感興趣抗體(例如MDX-1100)的被固定的捕獲抗體與可檢測的抗體接觸，優選地在大約20-40°C的溫度下，更優選地大約36-38°C。雖然可檢測的抗體可以是多克隆或單克隆抗體，但優選地是單克隆抗體，更優選地是齧齒動物抗體，更加優選的是鼠抗體。在一個具體的實施方案中，本文的測定中的可檢測抗體是針對MDX-1100的抗獨特型抗體，例如工作實施例中所述的10C8，6C9,2F5和23H10。任選地，可檢測抗體可以被直接檢測，且例如是生物素化的。生物素化的標記物的檢測手段優選地是親和素或鏈親和素-HRP，檢測手段的讀取方式優選是螢光或比色。[0063]測定中的包被(捕獲)和檢測可以使用相同的抗獨特型抗體，或者，包被和檢測可以使用不同的抗體。優選地，選擇它們使背景噪音最小化。[0064]在測定方法的第四步中，使用用於可檢測抗體的檢測手段來測量樣品中當前與捕獲抗體結合的任何感興趣抗體Hf^nMDX-1lOO)的水平。如果生物樣品來自臨床病人，則該測量步驟優選地包括將上述三個步驟的反應結果與標準曲線進行比較，以確定感興趣抗體相比於已知量的水平。[0065]可檢測抗體(這裡稱作「第一抗體」)可以被直接標記或間接標記，間接標記是在洗掉多餘的第一抗體之後，添加摩爾過量的標記的第二抗體。第二抗體是針對第一抗體的動物物種的IgG的抗體。在後一種間接測定中，向樣品中添加針對第一抗體的已標記抗血清，從而在原位產生標記抗體。用於第一或第二抗體的標記物是任何不會干擾游離的感興趣抗體與抗獨特型抗體的結合的、可檢測的官能團。合適的標記物的實例是在已知的免疫測定中使用的多種標記物，包括可以被直接檢測的部分，例如螢光色素、化學發光劑和放射性標記物，以及必須經過反應或衍生化才能被檢測的部分，例如酶。這些標記物的實例包括放射性同位素32P、14C、1251、3H和1311，螢光團如稀土螯合物或螢光素及其衍生物、若丹明及其衍生物、丹磺醯(dansyl)、傘形花內酯，螢光素酶例如螢火螢光素酶和細菌螢光素酶(見例如美國專利N0.4，737，456)、螢光素、2，3-二氫雙酮酞嗪(2，3-dihydrophthalazinedione)、HRP、鹼性磷酸酶、^-半乳糖苷酶、葡糖澱粉酶、溶菌酶、糖氧化酶例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶，雜環氧化酶如尿酸酶和黃嘌呤氧化酶，與利用過氧化氫來氧化染料前體的酶(如HRP、乳過氧化物酶或微過氧化物酶)偶聯，生物素(可以通過例如親和素、鏈親和素、鏈親和素-HRP和鏈親和素-3-半乳糖苷酶與MUG檢測到)，自旋標記物(spinlabels),曬菌體標記物,穩定的自由基,等。在一個具體的實施方案中，標記物是生物素，且檢測手段是親和素或鏈親和素-HRP。[0066]可以使用常規方法將這些標記物共價連接到蛋白或多肽上。例如，可以使用偶聯劑如二醒、碳二亞胺、二馬來醯亞胺、雙亞胺(bis-1midates)、雙偶氮化聯苯胺(bis-diazotizedbenzidine)等用上述突光、化學發光和酶標記物標記抗體。見例如美國專利Nos.3，940,475(螢光法)和3，645，090(酶法)；Hunter等，Nature,144:945(1962);David等，Biochemistry,13:1014-1021(I974);Pain等，J.1mmunol.Methods,40:219-230(1981);和Nygren,J.Histochem.Cytochem.，30:407-412(1982)。一種標記物實例是生物素，使用鏈親和素-HRP用作檢測手段。這些標記物(包括酶)與抗體的連接對於免疫測定【
技術領域：
】的普通技術人員而言是標準操作程序。見例如0』Sullivan等?「MethodsforthePreparationofEnzyme-antibodyConjugatesforUseinEnzymeImmunoassay,」inMethodsinEnzymology,Langone,J.J.andVanVunakis,H.編輯?73卷，147-166頁，Academic出版社，NewYork,N.Y.(1981)。[0067]添加了最後一種標記抗體之後，如下確定已結合的抗體量:通過清洗除去多餘的未結合的標記抗體，然後使用適用於該標記物的檢測方法測量捕獲標記物的量，並將測得的量與生物樣品中感興趣抗體的量相關聯。例如，在使用酶的情況下，顯色和測量得到的顏色的量將會是所存在的感興趣抗體量的直接量度。具體地，如果標記物是HRP，則用490nm吸光度的底物OPD檢測顏色。在另一個實例中，在從固定相洗去針對未標記的第一抗體的酶標記第二抗體之後，通過將固定的捕獲試劑與酶的底物溫育來顯現顏色或化學發光，並加以測量。然後，通過與平行進行的標準感興趣抗體產生的顏色化化學發光進行比較，計算感興趣抗體的濃度。[0068]試劑盒[0069]在某些實施方案中，本發明提供了可用於上述測定的試劑盒，其包括一種或多種針對興趣抗-1PlO抗體(例如MDX-1100)的抗體(單克隆或多克隆)，或其抗原結合部分，以及幫助抗體-抗原複合物形成和/或檢測所需的試劑。優選地，這些試劑盒的抗體是抗獨特型抗體。例如，本發明的試劑盒是有包裝的組合，包括如下基本組件:(a)捕獲試劑，其包含至少一種針對MDX-1100的抗獨特型抗體(這裡稱作「捕獲抗體」)；(b)至少一種可檢測的(標記或未標記)抗獨特型抗體，其與MDX-1100上的另一不同表位結合；和(c)關於如何使用這些試劑實施測定方法的使用說明。[0070]任選地，該試劑盒還包含所述的捕獲抗體的固體支持物，固體支持物可以作為單獨的組件提供，或者可以作為上面已經固定好捕獲抗體的組件提供。因此，試劑盒中的捕獲抗體可以是固定在固體支持物上的，或者它們被固定在這樣的固體支持物上:該支持物包含在試劑盒中，或者在試劑盒之外另行提供。例如，捕獲抗體被包被在微滴定板上。可檢測抗體可以是標記抗體或者是未標記抗體，標記抗體直接檢測，未標記抗體通過在不同物種中產生的針對該未標記抗體的標記抗體來檢測。當標記物是酶時，試劑盒通常包含底物和酶所需的輔助因子，當標記物是螢光團時，可以包含提供該可檢測發色團的染料前體，而當標記物是生物素時，則可以包含親和素，例如親和素、鏈親和素、或與HRP或3-半乳糖苷酶及MUG綴合的鏈親和素。[0071]在一個具體的實施方案中，捕獲抗體是選自如工作實施例中所述的10C8，6C9,2F5和23H10的抗獨特型抗體。另外，在一個具體實施方案中，可檢測抗體是選自10C8，6C9，2F5和23H10的抗獨特型抗體，其中捕獲抗體和可檢測抗體與MDX-1100上的不同表位結合。[0072]試劑盒可以進一步包含與所述抗獨特型抗體結合的感興趣抗體(例如純化的MDX-1100)或其片段作為陽性對照。該試劑盒可以進一步包含不會與所述抗獨特型抗體反應的抗體作為陰性對照。試劑盒可以進一步包括其它添加物，例如穩定化劑、清洗緩衝液和溫育緩衝液等。試劑盒的組分可以按照預定的比例提供，適當地改變各試劑的相對量以便使試劑溶液中的濃度使測定的靈敏度實質上得到最大化。特別地，試劑可以作為乾粉提供，通常是凍乾粉，包括賦形劑，賦形劑在溶解時可以提供具有適當濃度的試劑溶液，用於與待測試的樣品組合。[0073]治療方法[0074]在某些實施方案中，本發明提供了全新而有效的治療IPlO相關疾病(例如炎症或自身免疫性疾病)的方法，其包括:(a)向受試者施用預定劑量的抗IPlO抗體；(b)檢測該受試者的樣品中抗-1PlO抗體的水平；和(C)如果步驟(b)中抗-1PlO抗體的水平低於閾值暴露水平，則增加受試者體內抗-1PlO抗體的劑量(例如，增加至治療有效劑量)，從而使受試者的IP-10相關疾病得到治療；和如果步驟(b)中抗-1PlO抗體的水平處於或高於閾值暴露水平，則不增加受試者體內抗-1PlO抗體的劑量。特別地,樣品中抗-1PlO抗體的水平可以通過上述任何一種測定方法加以檢測。[0075]術語「治療」包括施用抗-1PlO抗體防止或延遲IPlO-相關疾病症狀、併發症或生物化學指徵的出現，緩解症狀，或阻滯或抑制疾病(例如炎症或自身免疫性疾病)的進一步發展。治療可以是預防性的(防止或延遲疾病的發生，或防止臨床或亞臨床症狀的顯現)或者在疾病顯現後治療性抑制或減輕症狀。[0076]如這裡所使用的，術語「劑量」是指施用給受試者的抗-1PlO抗體的量。[0077]如這裡所使用的，術語「治療有效劑量」是指如下的抗-1PlO抗體的劑量，其優選地導致疾病症狀嚴重程度降低，無疾病症狀期的頻率和持續時間增加，或防止由病患導致的損傷或失能。本領域的普通技術人員能夠根據受試者的身材、受試者病症的嚴重程度和所選的特殊組合物或給藥途徑等因素確定這些量。[0078]如這裡所使用的，術語「閾值暴露水平」是指在誘發期和/或維持期向受試者施用抗-1PlO抗體後可實現臨床上有意義的誘發和/或保持疾病緩解的最低暴露水平。閾值暴露水平可以通過如工作實施例中所述的暴露-響應分析容易地加以確定。例如，閾值暴露水平可以是40-150iig/mL範圍的波谷濃度(例如40，50，60，70，80，90，100，110，120，130，140，150ug/mL)。[0079]本發明至少部分地基於在對一種人抗-1PlO抗體(即MDX-1100)進行臨床試驗治療炎性腸病(IBD)期間獲得的觀察結果，如下文所述。該試驗證明了在用MDX-1lOO治療的患者體內MDX-1100的藥代動力學(PK)參數的變化性。同時，該試驗證明了MDX-1100在本研究中具有極低的免疫原性。而且，該試驗證明存在強烈的藥物暴露/響應關係，波谷藥物水平與效力直接相關。[0080]對於許多炎症或自身免疫性疾病(例如IBD)，常規的治療包括(I)在誘導期用相對高的藥物劑量，旨在將急性病置於控制之下；和(2)維持期(或治療期)用相對低的劑量，旨在防止疾病復發(見例如美國專利公布號2006/0009385)。儘管上述臨床試驗結果是在誘導期獲得的，但是這些觀察結果(例如PK參數的可變性、極低的免疫原性或強的暴露-響應關係)似乎是該分子性質和/或其作用機制所固有的。因此，申請人:預期在維持期也有相似的觀察結果。[0081]本發明的一個方面是使患者用藥過量最小化，同時優化效力(例如在維持期)。在一個具體實例中，本發明提供了一種治療IP-10相關病症的方法，包括:(I)向受試者施用維持劑量(例如預定劑量)的抗IP-10抗體；(2)如果受試者不能保持響應(也稱作「喪失響應」或「復發」)，將進行診斷性測定來測量受試者體內抗-1PlO抗體的暴露水平(例如血液濃度)；(3)如果抗-1PlO抗體的暴露水平低於閾值暴露水平，則遞增受試者體內的劑量，從而在受試者體內保持藥物響應。這可以保證在長期治療期間，患者接受個人化劑量(例如僅保持必需的藥物量)，這通過臨床評估和目標藥物濃度測量來確定。[0082]1.抗-1PlO抗體[0083]在某些方面中，本發明涉及抗-1PlO抗體的用途，其特徵是具有特殊的功能特徵或性質。例如，抗體特異結合人IP-10。此外，抗體可以和來自一種或多種非人靈長動物，例如獼猴，的IP-10交叉反應。優選地，抗體不與小鼠IP-10交叉反應。而且，儘管MIG和ITAC也是CXCR3受體的配體，但是本發明的抗體優選地不與人MIG或人ITAC交叉反應。進一步，本發明的抗體能夠抑制IP-10的一種或多種功能活性。例如，在一個實施方案中，抗體抑制IP-10對CXCR3的結合。在另一個實施方案中，抗體抑制IP-10誘導的鈣內流。在另外一個實施方案中，抗體抑制IP-10誘導的細胞遷移(趨化作用)。抗-1PlO抗體的其它功能特徵或性質在美國申請公布號2005/0191293中也有描述，其內容在此明確通過引用併入。[0084]抗-1PlO抗體的實例是單克隆抗體1D4,1E1,2G1,3C4,6A5,6A8,6B10,7C10,8F6,I0A12和13C4，如美國申請公布號2005/0191293中所述，其內容在此明確通過引用併入。[0085]在一個優選實施方案中，抗-1PlO抗體包括:(a)包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的重鏈可變區；和(b)包含SEQIDNO:7的胺基酸序列的輕鏈可變區。[0086]在另一個優選實施方案中，抗-1PlO抗體包括:(a)包含SEQIDNO:3的重鏈可變區CDRl；(b)包含SEQIDNO:4的重鏈可變區CDR2；(c)包含SEQIDNO:5的重鏈可變區CDR3;(d)包含SEQIDNO:8的輕鏈可變區CDRl;(e)包含SEQIDNO:9的輕鏈可變區CDR2;和(f)包含SEQIDNO:10的輕鏈可變區CDR3。[0087]如本文中定義的，本發明的抗-1PlO抗體包括這樣的抗體，其重鏈和輕鏈區的胺基酸序列與本文中所述的優選抗體的胺基酸序列同源，並且其中該抗體保持本發明抗-1PlO抗體的期望功能性質。例如，抗-1Pio抗體包括這樣的抗體，其包含(a)重鏈可變區，其包含與選自SEQIDNO:2的胺基酸序列至少80%，90%,95%,98%或99%相同的胺基酸序列；(b)輕鏈可變區，其包含與選自SEQIDNO:7的胺基酸序列至少80%，90%,95%,98%或99%相同的胺基酸序列。在另一個實例中，抗-1PlO抗體包括這樣的抗體，其包含:(a)重鏈可變區CDRl，其包含與SEQIDNO:3至少80%,90%,95%,98%或99%相同的胺基酸序列；(b)重鏈可變區CDR2，其包含與SEQIDNO:4至少80%,90%,95%,98%或99%相同的胺基酸序列；(c)重鏈可變區CDR3，其包含與SEQIDNO:5至少80%,90%,95%,98%或99%相同的胺基酸序列；(d)輕鏈可變區CDRl，其包含與SEQIDNO:8至少80%,90%,95%,98%或99%相同的胺基酸序列；(e)輕鏈可變區CDR2，其包含與SEQIDNO:9至少80%,90%,95%,98%或99%相同的胺基酸序列；和(f)輕鏈可變區CDR3，其包含與SEQIDNO:10至少80%,90%,95%,98%或99%相同的胺基酸序列。任何同源抗體均特異性結合IP-10，並顯示至少一種如下的功能性質:⑴該抗體抑制IP-10與CXCR3的結合；(ii)該抗體抑制IP-10誘導的鈣內流；(iii)該抗體抑制IP-10誘導的細胞遷移；(iv)該抗體與獼猴IP-10交叉反應；(v)該抗體不與小鼠IP-10交叉反應；(vi)該抗體不與人MIG交叉反應；(vii)該抗體不與人ITAC交叉反應。同源的抗-1PlO抗體在美國申請公布號2005/0191293中也有描述，將其內容明確通過引用併入本文。[0088]如本文所定義的，本發明的抗-1PlO抗體還包括與治療部分綴合的抗-1PlO抗體或其片段，治療部分例如細胞毒素、藥物(例如免疫抑制劑)或放射性毒素，。這些綴合物在本文中稱作「免疫綴合物」。包含一種或多種細胞毒素的免疫綴合物被稱作「免疫毒素」。細胞毒素或細胞毒性劑包括任何對細胞有害(例如可殺死細胞)的作用劑。實例包括TAXOL?，細胞鬆弛素B，短桿菌肽D，溴化乙錠，伊米丁，絲裂黴素，依託泊苷，替尼泊苷，長春新鹼，長春鹼，秋水仙鹼，多柔比星，柔紅黴素，二羥基炭疽菌素二酮，米託蒽醌，普卡黴素，放線菌素D，1-去氫睪酮，糖皮質激素，丁卡因，利多卡因，普魯卡因，普萘洛爾，及嘌呤黴素及其類似物或其同系物。治療劑還包括，例如，抗代謝藥(例如，氨甲喋呤，6-巰基嘌呤，6-硫代鳥嘌呤，阿糖胞苷，5-氟脲嘧啶，氮烯咪胺)，烷基化劑(例如，氮芥，thioepa苯丁酸氮芥，美法侖，卡莫司汀(BSNU)和洛莫司汀(CCNU)，環磷醯胺，白消安，二溴甘露醇，鏈脲黴素，絲裂黴素C，和順二氯二氨鉬(DDP)順鉬)，蒽環類藥物(例如，柔紅黴素(原名道諾黴素)和多柔比星)，抗生素(例如，更生黴素(原名放線菌素)，博萊黴素，普卡黴素，和氨茴黴素(AMC)),和抗有絲分裂劑(例如，長春新鹼和長春花鹼)。其它可以和本發明抗體綴合的治療性細胞毒素優選實例duocarmycins,卡裡奇黴素(calichemamicin),美登木素(maytansines)和auristatins,及其衍生物。抗體綴合物的一個實例是商品化的(Mylotarg?;Wyeth-Ayerst)。抗-1PlO抗體的免疫綴合物在美國申請公布號2005/0191293中也有描述，將其內容明確通過引用併入本文。[0089]如本文中所定義的，本發明的抗-1PlO抗體還包括含有抗-1PlO抗體或其片段的雙特異性分子。抗-1PlO抗體或其抗原結合部分可以被衍生化或連接於另一功能分子，例如另一肽或蛋白(例如另一抗體或某個受體的配體)，以產生能夠結合至少兩個不同結合位點或靶分子的雙特異性分子。抗-1PlO抗體或其片段可能實際上被衍生化或連接於多於一種其它功能分子，以產生能夠結合多於兩個不同結合位點和/或靶分子的多特異性分子；這些多特異性分子也意圖包含在本文中所使用的術語「雙特異性分子」的範圍內。為了產生雙特異性分子，抗-1PlO抗體可以功能性連接於(例如通過化學綴合、遺傳融合、非共價締合或其它)一種或多種其它結合分子，例如另一種抗體、抗體片段、肽或結合模擬物，從而產生雙特異性分子。雙特異性抗-1PlO抗體在美國申請公布號2005/0191293中也有描述，其內容明確通過引用併入本文。[0090]2.治療IPlO相關疾病的方法[0091]在某些方面中，本發明涉及使用抗-1PlO抗體(包括免疫綴合物和雙特異性分子)治療受試者體內的IPlO相關疾病。如本文中所使用的，術語「受試者」意圖包括人和非人動物。非人動物包括所有脊椎動物，例如哺乳動物和非哺乳動物，例如非人靈長動物、綿羊、狗、貓、牛、馬、雞、兩棲動物和爬行動物。這些方法特別適合於治療患有與IP-10表達異常有關的疾病的人類患者。當針對IP-10的抗體與另一種試劑一同施加時，兩種藥物可以順次或同時施用。[0092]術語「IPlO相關疾病或病症」或「IP-10介導的疾病或病症」是指局部和/或系統性生理病症，其中IPlO是導致該病症表現的主要介導者。IPlO相關疾病的一個實例是炎症或自身免疫性疾病，包括但不僅限於，多發性硬化、類風溼性關節炎、炎性腸病(例如，潰瘍性結腸炎、克羅恩病)、系統性紅斑狼瘡、I型糖尿病、炎性皮膚疾病(例如，銀屑病，扁平苔蘚)、自身免疫性甲狀腺疾病(例如格雷夫斯病(Graves』disease)、橋本氏甲狀腺炎(HashimotoJsthyroiditis))、乾燥症候群、肺部炎症(例如，哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺結節病、淋巴細胞肺泡炎(lymphocyticalveolitis))、移植排斥、脊髓損傷、腦損傷(例如，中風)、神經變性性疾病(例如，阿爾茨海默病、帕金森氏病)、齦炎、基因治療誘導的炎症、血管生成疾病、炎性腎臟病(例如，IgA腎病、膜增生性腎小球腎炎、急進型腎小球腎炎)和動脈粥樣硬化。IPlO相關疾病在美國申請公布號2005/0191293中也有描述，將其內容明確通過引用併入本文。[0093]3.藥物組合物和施用途徑[0094]在某些方面中，本發明涉及一種組合物(例如藥物組合物)，其含有與藥物可接受載體配製在一起的一種或一組抗-1PlO單克隆抗體或其抗原結合部分。這些組合物可以包含一種或一組(例如兩種或更多種不同的)本發明抗體或免疫綴合物或雙特異性分子。例如，藥物組合物可以包含與靶抗原上的不同表位結合，或者具有互補的活性的一組抗體(或免疫綴合物或雙特異性分子)。任選地，本發明提供了組合療法，該組合療法是通過使用包含抗-1PlO抗體和其它作用劑的藥物組合物實現的。例如，該組合療法可以包含抗-1PlO抗體和至少一種其它抗炎劑或免疫抑制劑。可以在組合療法中使用的治療劑的實例在美國申請公布號2005/0191293中有更詳細的描述，將其內容明確通過引用併入本文。[0095]如本文中所使用的，「藥物可接受的載體」包括任何和全部生理相容的溶劑、分散介質、包衣、抗細菌和抗真菌劑、等張劑和吸收延遲劑、及類似物。優選地，載體適合於靜脈內、肌肉內、皮下、腸胃外、脊柱或表皮施用(例如通過注射或輸注)。根據施用途徑，活性化合物，即抗體、免疫綴合物或雙特異性分子，可以被包被在某種材料中，以保護該化合物免於受到可能使化合物失活的酸和其它自然條件的作用。藥物組合物可以包含一種或多種藥物可接受的鹽。藥物組合物的其它成分在美國申請公布號2005/0191293中有更詳細的描述，將其內容明確通過引用併入本文。[0096]調整劑量方案以提供最佳的期望響應(例如治療響應)。例如，可以給予單次推注(bolus)，隨時間推移給予數個細分的劑量，或者可以根據治療狀況的危急程度成比例地減少或增加劑量。特別有利的是，將腸胃外組合物配製成劑量單位的形式，以方便施用和使劑量均一。如本文中所使用的，劑量單位形式是指物理上離散的單位，這些單位被調整為供要治療的受試者使用的單元(unitary)劑量；每個單位含有據計算可以產生期望的治療效果的預定量的抗-1PlO抗體，以及與之一起的所需的藥物載體。劑量單位形式的規格可取決於並依賴於(a)抗-1PlO抗體的獨特特徵以及希望獲得特定治療效果，和(b)為治療個體中的敏感性而配合這樣的抗-1PlO抗體的技術的內在限制。[0097]為了抗-1PlO抗體的施用，劑量範圍是大約l_50mg/kg宿主體重。例如，劑量可以是lmg/kg,3mg/kg,5mg/kg,10mg/kg,15mg/kg,20mg/kg,25mg/kg,30mg/kg,35mg/kg,40mg/kg,45mg/kg或50mg/kg體重。一個治療方案的實例採用每天施用I次，每周3次,每周2次，每周I次，每2周I次，每3周I次，每4周I次，每月I次，每3個月I次，或者每3-6個月I次。在一個實例中，抗-1PlO抗體的劑量方案包括通過靜脈內給藥lmg/kg體重或3mg/kg體重，抗體以如下的劑量時間表給藥:(i)每4周I次，共6次，然後每3個月I次；(ii)每3周I次；(iii)3mg/kg體重I次,隨後每3周給予lmg/kg體重I次。[0098]在一個具體實施方案中，抗-1PlO抗體在誘導期通過靜脈內輸注施用，在維持期通過皮下注射施用。施用頻率可以從每天I次到每月I次。如果受試者在維持期不能保持響應(也稱作「喪失響應」或「復發」)，則可以使用診斷測定，測量受試者體內抗-1PlO抗體的暴露水平(例如血液水平)；(3)如果抗-1PlO抗體的暴露水平低於閾值暴露水平，則遞增受試者體內的劑量。任選地，可以通過增加施用頻率(例如將頻率從每周I次增加到每周2次)遞增受試者體內的劑量。[0099]在一些實施方案中，將兩種或多種具有不同結合特異性的單克隆抗體同時施用，在這種情況下，每種抗體的施用劑量處於標明的範圍內。抗-1PlO抗體通常多次施加。單次劑量之間的間隔可以是例如每周，每月，每3個月或每年。時間間隔還可以是不規律的，通過測量患者體內IP-10抗體的血液水平決定。在某些方面中，調節劑量使血漿濃度為大約1-600V-g/ml,在一些方法中為大約25-300ug/ml。[0100]或者，抗-1P10抗體可以作為持續釋放形式施用，在這種情況下，所需的施用頻率更低。劑量和頻率隨著抗體在患者體內的半衰期而改變。一般地，人抗體顯示的半衰期最長，隨後是人源化抗體、嵌合抗體`和非人抗體。施用的劑量和頻率可以根據治療是預防性還是治療性而不同。在預防應用中，在較長的時期內以相對不頻繁的間隔施用相對低的劑量。一些患者在其餘生中持續接受治療。在治療應用中，有時需要在相對短的時間間隔內接受相對高的劑量，直至疾病被減輕或消除，優選地直至患者的疾病症狀顯示部分或完全緩解。之後，患者可以按照預防方案給藥。[0101]抗-1PlO抗體在藥物組合物中的實際劑量水平可以加以變化，以便使活性成分的量可以有效地為特定患者、組合物、施用模式實現期望的治療響應，而不會對患者有毒性。所選的劑量水平取決於各種藥代動力學因素，包括所用抗-1PlO抗體或其酯、鹽或亞胺的活性，施用途徑，施用時間，所用抗-1Pio抗體的排洩速度，治療的持續時間，與所用的特定組合物組合使用的其它藥物、化合物和/或材料，被治療患者的年齡、性別、體重、病症、一般健康狀況和先前用藥歷史，以及醫學領域眾所周知的其它因素。[0102]本發明進一步通過如下的實施例加以例證，這些實施例不應視為進一步的限制。本專利說明書明確通過援引併入所有附圖和所有參考文獻、專利、公開的專利申請。[0103]實施例1[0104]MDX-1100在潰瘍性結腸炎患者體內的暴露-響應分析及用於治療潰瘍性結腸炎患者的MDX-1100的目標暴露(TargetExposure)的確定[0105]在一項II期、雙盲、安慰劑對照、隨機、多中心、多劑量的臨床研究中，研究了MDX-1100在患有中度至嚴重潰瘍性結腸炎(UC)患者體內誘發的臨床響應，並與安慰劑進行比較。臨床數據的暴露-響應(E-R)分析確定了安全對治療UC患者而言安全且有效的MDX-1100的目標暴露。[0106]方法[0107]1.E-R分析中的患者群體[0108]將109名來自7個國家40個站點的UC患者隨機分組，接受安慰劑(N=54)或IOmg/kgMDX-1100(N=55)，每隔一周靜脈內輸注I次，總共給予4個劑量(劑量在研究的第1、15、29和43天施用)。[0109]本研究遵循由國際協調會議制定的良好臨床試驗規範(GoodClinicalPractice),並遵循歐盟指南(EuropeanUnionDirective)2001/20/EC和美國聯邦法規集第21編第5部分(UnitedStatesCodeofFederalRegulations,Title21,Part50(21CFR50))中的倫理學原則，以及源自《赫爾辛基宣言》的倫理學原則。在本研究開始之前，本研究方案、修正案和受試者告知同意得到了臨床審查委員會(IRB)/獨立倫理委員會(IEC)的批准。在本研究開始之前，研究者為每位受試者提供了IRB/IEC的書面知情同意書的書面批准/贊成意見和任何其它相關信息。在參與研究之前，從每位受試者，或者在不能獲得受試者授予的知情同意書的情況下，從受試者的法律上可以接受的代表獲得了自由授予的書面知情同意書，包括為確認受試者適合於本研究進行的任何篩選程序的知情同意書。[0110]所有患者都具有活動UC,活動UC定義為Mayo得分(Mayoscore)6-10,且根據內窺鏡檢查從中度到嚴重的活躍疾病(Mayo內窺鏡檢查亞得分>2)。所有患者均在接受穩定劑量的5-氨基水楊酸(5-ASA)、皮質類固醇、咪唑硫嘌呤(AZA)和/或6-巰嘌呤(6-MP)。[0111]這109位患者被定義為意向性治療(intent-to-treat)(ITT)群體,並且是用於評估效力量度的主要群體。這109位患者中，有2位患者(均被指派到安慰劑組)經過了隨機化但未接受治療。因此，將其餘107位患者被定義為安全性群體，其中包括所有接受過至少I次完全或部分劑量安慰劑(N=52)或MDX-1100(N=55)的患者。表1和2總結了患者處置方式和人口統計情況。[0112]表1[0113]患者處置(ITT群體)[0114]【權利要求】1.一種用於治療需要治療的受試者的IPlO相關疾病的方法，包括:(a)向受試者施用預定劑量的抗IPlO抗體；(b)檢測該受試者的樣品中抗-1PlO抗體的水平；和(C)如果步驟(b)中所述抗-1PlO抗體的水平低於閾值暴露水平，則增加該受試者中所述抗-1Pio抗體的劑量,使得受試者的所述IP-10相關疾病得到治療。2.權利要求1的方法，其中所述抗-1PlO抗體特異性結合人IP-10，而不與人MIG或人ITAC交叉反應。3.權利要求2的方法，其中所述抗-1PlO抗體是MDX-1100。4.權利要求1的方法，其中所述抗-1PlO抗體包括:(a)包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的重鏈可變區；和(b)包含SEQIDNO:7的胺基酸序列的輕鏈可變區。5.權利要求4的方法，其中抗-1PlO抗體包括:(a)包含SEQIDNO:3的重鏈可變區CDRl；(b)包含SEQIDNO:4的重鏈可變區CDR2；(c)包含SEQIDNO:5的重鏈可變區CDR3；(d)包含SEQIDNO:8的輕鏈可變區CDRl；(e)包含SEQIDNO:9的輕鏈可變區CDR2;和(f)包含SEQIDNO:10的輕鏈可變區CDR3。6.權利要求1的方法,其中步驟(b)中抗-1PlO抗體的水平通過如下的方法進行檢測，所述方法包括在適合於抗體-抗原複合物形成的條件下使所述樣品與結合抗-1PlO抗體的抗體接觸，隨後探測抗體-抗原複合物的形成。7.權利要求6的方法，其中所述與抗-1PlO抗體結合的抗體是抗獨特型抗體。8.權利要求6的方法，其中所述抗獨特型抗體與MDX-1100的一個或多個CDR結合。9.權利要求8的方法，其中所述抗獨特型抗體選自10C8，6C9,2F5和23H10。10.權利要求9的方法，其中所述抗獨特型抗體是10C8。11.權利要求9的方法，其中所述抗獨特型抗體是23H10。12.權利要求6的方法，其中所述探測是通過選自下組的方法實現的:EIA、ELISA、RIA、間接競爭免疫測定、直接競爭免疫測定、非競爭免疫測定、夾心式免疫測定和凝集測定。13.權利要求1的方法，其中所述IPlO-相關疾病是炎症疾病或自身免疫疾病。14.權利要求13的方法，其中所述炎症疾病或自身免疫疾病選自下組:多發性硬化、類風溼性關節炎、炎性腸病(例如，潰瘍性結腸炎、克羅恩病)、系統性紅斑狼瘡、I型糖尿病、炎性皮膚病症(例如，銀屑病，扁平苔蘚)、自身免疫性甲狀腺疾病(例如格雷夫斯病、橋本氏甲狀腺炎)、乾燥症候群、肺部炎症(例如，哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺結節病、淋巴細胞肺泡炎)、移植排斥、脊髓損傷、腦損傷(例如中風)、神經變性疾病(例如阿爾茨海默病、帕金森氏病)、齦炎、基因治療誘導的炎症、血管發生的疾病、炎性腎臟疾病(例如IgA腎病、膜性增生性腎小球性腎炎、急進型腎小球性腎炎)和動脈粥樣硬化。15.權利要求14的方法，其中所述炎症疾病或自身免疫疾病是炎性腸病。16.權利要求15的方法，其中所述炎性腸病是潰瘍性結腸炎。17.權利要求15的方法，其中所述炎性腸病是克羅恩病。18.一種分離的單克隆抗體或其抗原結合部分，其特異性結合抗-1PlO抗體。19.權利要求18的抗體或其抗原結合部分，其中該抗體是抗獨特型抗體。20.權利要求18的抗體或其抗原結合部分，其中所述抗-1PlO抗體是MDX-1100。21.權利要求20的抗體或其抗原結合部分，其中該抗體與MDX-1100的一個或多個CDR結合?22.權利要求20的抗體或其抗原結合部分，其中該抗體選自10C8，6C9,2F5和23H10。23.—種雜交瘤細胞系，其產生權利要求18的單克隆抗體。24.一種試劑盒，包括:(I)特異性結合抗-1PlO抗體的抗體或其抗原結合部分；和(2)幫助抗體-抗原複合物形成所需要的試劑。25.一種用於治療需要治療的受試者的IPlO-相關疾病的方法，包括:(a)向受試者施用抗-1PlO抗體；(b)通過免疫測定檢測該受試者的樣品中所述抗-1PlO抗體的水平；和(C)如果所述抗-1PlO抗體的水平低於閾值暴露水平，則增加受試者體內所述抗-1PlO抗體的劑量；如果所述抗-1PlO抗體的水平處於或高於閾值暴露水平，則不增加該受試者體內所述抗-1PlO抗體的劑量。【文檔編號】C07K16/42GK103619880SQ201280032766【公開日】2014年3月5日申請日期:2012年4月27日優先權日:2011年4月29日【發明者】A.Y.羅,W.L.特裡岡納,J.沈,L-A.許,Y.張,B.斯託佛,陳海濱,H.黃,陶曉路,C.布羅庫思申請人:百時美施貴寶公司