一種用於檢測三聚氰胺殘留的薄層色譜展開劑及分析方法
2023-12-08 07:51:06 1
專利名稱：一種用於檢測三聚氰胺殘留的薄層色譜展開劑及分析方法
技術領域：
本發明涉及一種檢測食品中三聚氰胺殘留量的展開劑及分析方法。
背景技術：
三聚氰胺(Melanmine)，簡稱三胺，學名三氨三嗪，別名蜜胺、氰尿醯胺、三 聚醯胺，是一種重要的氮雜環有機化工原料，白色結晶粉末，無味。這種化學試劑 常被用於生產塑料、膠水和阻燃劑，在部分亞洲國家，它也被用於製造化肥。它是 一種禁止用於食品、飼料的化學物質，人和動物食用後會發生腎衰竭並導致死亡。
原料乳中三聚氰胺的檢測採用《中華人民共和國國家標準》〔GB/T 22400-2008) 所述的高效液相法，具體方法為稱取混合均勻的15 g原料乳樣品(準確至0. 01 g)， 置於50 mL具塞刻度試管中，加入30 mL乙腈，劇烈振蕩6 min，加水定容至滿刻 度，充分混勻後靜置3 min，用一次性注射器吸取上清液用針式過濾器過濾後，作 為高效液相色譜分析用試樣。試樣進行液相分析，依據保留時間一致性進行定性識 別的方法。根據三聚氰胺標準物質的保留時間，確定樣品中是否含有三聚氰胺。
對其他奶製品則沒有統一的標準，借鑑美國FDA的檢測方法，具體方法為a. 稱取奶粉樣品5g (或牛奶10mL),加入50mL 1%三氯乙酸提取液，充分混勻，加入 2mL 2%乙酸鉛溶液，超聲20min;b.取部分溶液轉移至lOmL離心管中，8000rpm/min 離心10min。固相萃取柱PCX小柱活化及平衡3ml甲醇，3ml水；上樣加入提取 液3ml;淋冼3ml水，3ml甲醇，棄去淋冼液並將小拄抽乾；洗脫5ml 5%氨化 甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配製5ml氨水+95ml甲醇)；濃縮50°C ，氮氣 吹乾，20。％甲醇/水定容至2ml。試樣進行液相分析，依據保留時間一致性進行定 性識別的方法。根據三聚氰胺標準物質的保留時間，確定樣品中是否含有三聚氰胺。
現有的國標三聚氰胺的檢測方法為色譜法，但是該方法需要有完善的實驗室， 有經驗的技術人員，複雜和昂貴的儀器，而且奶製品前處理過程十分繁瑣，不適合 大量樣品的篩查。
發明內容
本發明的目的是針對上述現狀，旨在提供一種操作簡便、便宜、準確、快捷的 一種用於檢測三聚氰胺殘留的薄層色譜展開劑及分析方法。本發明目的的實現方式為， 一種用於檢測三聚氰胺殘留的薄層色譜展開劑，由 以下重量份數的成分組成正丁醇4一8份，乙酸乙酯1一4份，水O. 1-l份。 一種用於檢測三聚氰胺殘留的薄層色譜分析方法，具體步驟如下
1) 矽膠板的預處理用氯仿、甲醇清洗液處理矽膠薄層板
2) 配製展開劑取重量份數為正丁醇4一8份，乙酸乙酯l一4份，水0. 1-1 份或濃度為0. 2-0. 5%的KC1水溶液0. 05-1份配製成展開劑，
3) 顯色劑的配製取重量份數為，l一5份0.01 — 2% HgCl2乙醇溶液和l一5 份的0. 1-2%二苯卡巴腙乙醇溶液混合配製成複合顯色劑。
4) 被測試樣品預處理樣品進行透析分離，取透析液蒸乾，加其重量50-500 倍量的水溶解，作為待測試樣。
5) 薄層色譜分析首先將步驟4)的待測試樣，點樣到經過步驟l)處理的矽膠 板上，再將薄層板放入倒入展開劑的展開缸中，上行展開至上沿，取出薄層板，吹 千溶劑。
6) 顯色將步驟5)中展開的薄層板噴上步驟3)配製的顯色劑，在105'C下， 加熱10min，顯色，完成色譜分析。
本發明作為食品，如奶製品、飼料等中添加和殘留三聚氰胺的定性鑑別方法， 經反覆試驗，該方法操作簡便、靈敏度高、重現性好，斑點清晰、分離效果好，經 陰性樣品對照，陰性樣品無幹擾，證明此方法具有專屬性及可行性。使用本發明不 需要經驗豐富的檢驗人員和價格高昂的檢測設備，即可準確方便地鑑別被測樣品中 是否含有三聚氰胺。
圖J為奶粉中三聚氰胺的薄層鑑別圖，
圖2為奶粉中不含三聚氰胺的陰性和陽性薄層對照鑑別圖。
具體實施例方式
本發明的展開劑，由以下重量份數的成分組成正丁醇4一8份，乙酸乙酯1 一4份，水O.卜1份。
還可由以下重量份數的成分組成正丁醇4一8份，乙酸乙酯1一4份、濃度為 0. 2-0. 5%的KC1水溶液0. 05-1份。
下面舉出本發明的具體實施例
例1 、取一塊矽膠薄層板，放入已加有lml氯仿和甲醇(1:1體積比)，展開至上沿，取出晾乾，在ll(TC加熱烘15min，冷卻備用。
把2. 5g奶粉樣品用10ml水溶解，或取10ml液體奶樣，加入透析處理裝置中， 在超聲和加熱條件下進行透析10-20 min，取透析液蒸乾，加其重量200倍量的水 溶解，作為待測試樣。
取2mg三聚氰胺樣品溶於1L水中，製成對照品溶液。
檢驗過程，照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VIB)試驗，取供試品溶 液25ul矽膠板點樣，正丁醇6份，乙酸乙酯2份和水0.5份為展開劑展開，取出 晾千，噴以複合顯色劑顯色，100'C加熱顯色5min，至斑點清晰。複合顯色劑為2 份0. ]% HgCl2乙醇溶液和4份的0. 5%二苯卡巴腙乙醇溶液的混合液。
結果見圖1、圖2:供試品色譜中，與三聚氰胺對照品相應的位置上，顯相同 顏色的斑點；陰性奶樣色譜中，在與三聚氰胺色譜相應位置上，無相同顏色斑點。 說明奶樣中是否含有三聚氰胺。
圖1中1、 3為奶粉樣品，2為三聚氰胺對照品。圖2中1、 3為陽性樣品，2 為陰性樣品。
例2、同例l，不同的是，加其重量50倍量的水溶解，正丁醇8份，乙酸乙酯 2份和水0. 1份為展開劑，複合顯色劑為1份0. 01% HgCl2乙醇溶液和1份的0. 1% 二苯卡巴腙乙醇溶液的混合液。
例3、同例l，不同的是，加其重量500倍量的水溶解，正丁醇8份，乙酸乙 酯4份和水1份為展開劑，複合顯色劑為5份2% HgCl2乙醇溶液和2份的0. 5%二 苯卡巴腙乙醇溶液的混合液。
例4、同例1，不同的是，加其重量IOO倍量的水溶解，正丁醇4份，乙酸乙 酯1份和0. 5%的KC1水溶液0. 05份為展開劑，複合顯色劑為1份0. 02% HgCl2乙 醇溶液和1份的0. 2%二苯卡巴腙乙醇溶液的混合液。
例5、同例l，不同的是，加其重量200倍量的水溶解，正丁醇6份，乙酸乙 酯2份和0. 2%的KC1水溶液0. 4份為展開劑，複合顯色劑為3份0. 1% HgCl2乙醇 溶液和5份的1%二苯卡巴腙乙醇溶液的混合液。
例6、同例1，不同的是，加其重量300倍量的水溶解，正丁醇6份，乙酸乙 酯3份和0. 2%的KC1水溶液1份為展開劑，複合顯色劑為4份0. 3% HgCl2乙醇溶 液和3份的0. 3%二苯卡巴腙乙醇溶液的混合液。
權利要求
1、一種用於檢測三聚氰胺殘留的薄層色譜展開劑，其特徵在於由以下重量份數的成分組成正丁醇4—8份，乙酸乙酯1—4份。
2、 根據權利要求1所述的一種用於檢測三聚氰胺殘留的薄層色譜展開劑，其 特徵在於以下重量份數的成分組成正丁醇4 —8份，乙酸乙酯1—4份、水O. l-l 份或濃度為0. 2-0. 5%的KC1水溶液0. 05-1份。
3、 一種用於檢測三聚氰胺殘留的薄層色譜顯色劑，其特徵在於以下重量份數 的成分組成取重量份數為，1—5份0.01—2% HgCl2乙醇溶液和l一5份的0.1-2% 二苯卡巴腙乙醇溶液混合配製成複合顯色劑。
4、 用權利要求1所述的一種用於檢測三聚氰胺殘留的薄層色譜展開劑進行薄 層色譜分析的方法，其特徵在於具體步驟如下1) 矽膠板的預處理用氯仿、甲醇清洗液處理矽膠薄層板2) 配製展開劑取重量份數為正丁醇4一8份，乙酸乙酯l一4份，水0. 1-1 份或濃度為0. 2-0. 5%的KC1水溶液0. 05-1份配製成展開劑。3) 顯色劑的配製取重量份數為，1—5份0.01 — 2% HgCl2乙醇溶液和l一5 份的0. 1-2%二苯卡巴腙乙醇溶液混合配製成複合顯色劑。4) 被測試樣品預處理樣品進行透析分離，取透析液蒸乾，加其重量50-500 倍量的水溶解，作為待測試樣。5) 薄層色譜分析首先將步驟4)的待測試樣，點樣到經過步驟l)處理的矽膠 板上，再將薄層板放入倒入展開劑的展開缸中，上行展開至上沿，取出薄層板，吹 幹溶劑。6) 顯色將步驟5)中展開的薄層板噴上步驟3)配製的顯色劑，在105'C下， 加熱10miri，顯色，完成色譜分析。
全文摘要
一種用於檢測三聚氰胺殘留的薄層色譜展開劑及分析方法，涉及一種檢測食品中三聚氰胺殘留量的展開劑及分析方法。展開劑，由正丁醇、乙酸乙酯等組成。分析方法是矽膠板的預處理、配製展開劑、配製顯色劑，被測試樣品透析分離，作為待測試樣，薄層色譜分析，噴顯色劑顯色，完成色譜分析。本發明作為食品，如奶製品、飼料等中添加和殘留三聚氰胺的定性鑑別方法，經反覆試驗，該方法操作簡便、靈敏度高、重現性好，斑點清晰、分離效果好，經陰性樣品對照，陰性樣品無幹擾，證明此方法具有專屬性及可行性。使用本發明不需要經驗豐富的檢驗人員和價格高昂的檢測設備，即可準確方便地鑑別被測樣品中是否含有三聚氰胺。
文檔編號G01N30/94GK101458240SQ200810236780
公開日2009年6月17日 申請日期2008年12月11日 優先權日2008年12月11日
發明者張長春, 嫻 汪, 肖晏嬰, 胡中澤, 鄭翹楚, 平 陳, 新 陳, 冰 高 申請人:武漢工業學院