一種山羊生長性狀的mstn基因分子標記選擇方法
2024-01-19 12:57:15 5
一種山羊生長性狀的mstn基因分子標記選擇方法
【專利摘要】本發明公開了一種山羊生長性狀的MSTN基因分子標記選擇方法。該方法包括以下步驟：（1）針對山羊MSTN基因5』UTR區域設計特異性核酸引物對待檢山羊基因組DNA進行PCR擴增，得到593bp的擴增產物；（2）利用DraⅠ限制性內切酶對PCR產物進行酶切、電泳分析，出現3種基因型，AA型為593bp，AB型為593bp、424bp、174bp，BB型為424bp、174bp；（3）AB型和BB型個體多個體重、體尺指標顯著高於AA型，因此選擇AB型和BB型個體留種。該方法可以提高波爾山羊生長性狀選擇的準確性，加快以波爾山羊為育種素材的山羊新品種培育進程。
【專利說明】一種山羊生長性狀的MSTN基因分子標記選擇方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及山羊肌肉生長抑制素基因（Myostatin，MSTN)5'UTR區域一個多態性 位點的檢測方法和應用範圍，屬於分子生物學領域。
【背景技術】
[0002] 生長是肉用山羊主要的經濟性狀，同時也是數量性狀，表型選擇遺傳進展緩慢， 開發輔助選擇的分子標記可以加快遺傳進展。肌肉生長抑制素基因（Myostatin，MSTN) 又稱生長分化因子8(61'〇￥1:11〇1€€616111:;[-31:;[011?3(31:018,60?-8)，屬於轉化生長因子 3(TransformingGrowthFactorbeta,TGF-0)超家族成員。MePherron等（1997)首先 在小鼠中發現MSTN是影響動物肌肉骨骼肌重量的重要基因。MSTN基因的正常功能是調節 動物骨骼肌的總量，使之保持適當的比例，在肌肉的生長發育中起著重要的調節作用，該基 因突變可引起多種動物雙肌性狀的產生。
[0003] 在肉牛中，MSTN的3個外顯子上有9個影響胺基酸序列的變異，其中6個可導致 雙肌，表現出肌肉發達、初生重增加和生長速度快的優勢。如比利時藍牛和皮埃蒙特牛的 雙肌性狀就是該基因突變造成的。關學敏等報導豬MSTN基因發生在5'調控區的突變可能 與豬的生長性狀有關。Johnson等在特克塞爾綿羊MSTN基因區域發現存在一個影響肌肉和 脂肪性狀的QTL。ClopA等進一步研究發現特克塞爾綿羊MSTN基因3'UTR區G/A突變可 能產生了一個microRNA祀點，使得MSTN基因翻譯受到抑制，造成肌肉肥大。Marcq等分析 了比利時特克塞爾雙肌綿羊的可能遺傳機制，與普通綿羊相比，雙肌羊的MSTN基因的編碼 區雖然沒有鹼基的差異，但採用該基因側翼序列的微衛星標記進行連鎖分析表明，在綿羊 染色體2q遠端區存在一個對肌肉發育產生效應的QTL，該基因座可能就是MSTN基因，推測 影響該基因表達的區域很可能在C端或N端的非翻譯區域或內含子部分。Li等分析了 24 個山羊品種，8個綿羊品種MSTN基因部分內含子2序列的遺傳變異，結果在山羊測序區域發 現7個多態性位點。以上研究表明，MSTN基因對家畜的生長性狀起重要的調節作用。但有 關山羊MSTN基因5'UTR區突變與生長性狀的關聯研究未見報導，而該區域很可能對山羊 MSTN基因表達起到調控作用，從而影響山羊的生長。
[0004] 波爾山羊是世界著名的肉用山羊品種，生長速度快，產肉率高。自引進以來，對我 國肉用山羊產業的發展起了十分重要的作用，但引進的波爾山羊質量參差不齊以及多年缺 乏選育後的種質嚴重退化，給肉用山羊產業帶來了危機，以波爾山羊與本地山羊雜交選育 適合當地飼養環境的肉用山羊新品種（系）和通過本品種選育恢復波爾山羊的優良生產性 能具有現實的緊迫性。如何提高選則的準確性、加快育種進程是目前面臨的主要問題。
[0005] 發明人在《8個綿山羊群體中肌肉生長抑制素基因DraI酶切多態性分析》中採用 限制性內切酶DraI對8個綿羊、山羊群體(湖羊、小尾寒羊、陶賽特、特克塞爾、杜泊羊、波 爾山羊、長江三角洲白山羊、黃淮山羊）中MSTN基因5'UTR區進行PCR-RFLP分析，篩選多 態性位點。結果表明，在所有受檢綿羊群體中只檢測到BB1種基因型；而在山羊群體中均檢 測到3種基因型，其中波爾山羊、長江三角洲白山羊以AA居多，AB型次之，BB型很少；黃淮 山羊則以AB型居多，BB型次之，AA型較少。但是，該文並沒有公開上述基因型與生長性狀 的關係。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的在於克服山羊育種中生長性狀表型選擇準確性低，遺傳進展慢的缺 陷，提供一種山羊生長性狀的MSTN基因分子標記選擇方法，提高波爾山羊生長性狀選擇的 準確性，加快以波爾山羊為育種素材的山羊新品種培育進程。
[0007] 本發明的目的可通過如下技術方案實現：
[0008] 1)提取山羊基因組DNA;
[0009] 2)利用兩條特異性引物擴增MSTN5'UTR區(序列DQ167575,23-615bp區域)，得到 593bp擴增產物；所述的兩條特異性引物序列為
【權利要求】
1. 一種山羊生長性狀的MSTN基因分子標記選擇方法，其特徵在於包括以下步驟： 1) 提取山羊基因組DNA; 2) 利用兩條特異性引物PCR擴增MSTN5' UTR區，得到593bp擴增產物；所述的兩條特 異性引物序列為 PI :SEQ ID NO. 1，P2 :SEQ ID NO. 2 ; 3) 利用Dra I限制性內切酶對所述的擴增產物進行酶切，電泳分型，僅獲得593bp片段 的定義為AA型，獲得593bp、424bp、174bp三個片段的定義為AB型，獲得424bp、174bp兩個 片段的定義為BB型； 4. AB型和BB型的生長性狀明顯優於AA型，選擇AB型和BB型個體留種。
2. 依據權利要求1所述的方法，其特徵在於：所述生長性狀為初生體重、六月齡體重、 六月齡日增重、九月齡體重、九月齡日增重、初生體高、六月齡體高、九月齡體高、初生胸圍、 六月齡管圍。
3. 依據權利要求1或2中任意一項所述的方法，其特徵在於：所述山羊為波爾山羊。
4. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於：所述PCR擴增的反應總體系為20 y L，模 板 DNA15-100ng，5U/ ii L Taq 聚合酶 0? 2 ii L，10mM 的 dNTPO. 4 ii L，引物 P1 和 P2 各 0? 6 ii L， 25mM的MgCl2l. 2 ii L，10X緩衝液2 ii L，加滅菌雙蒸水至20 ii L ;所述PCR擴增的反應程 序為：94°C預變性5min ;94°C變性30s，55°C退火30s，72°C延伸45s，35個循環；72°C延伸 7min〇
5. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於：所述酶切的反應體系為15 y L，PCR產物 61^，15。/1^0四1酶0.5111，10\緩衝液1.5111，滅菌雙蒸水7111;371：酶切411。
【文檔編號】C12Q1/68GK104342492SQ201410140093
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2014年4月9日 優先權日:2014年4月9日
【發明者】孟春花, 曹少先, 傅澤紅, 豐秀靜, 張俊, 錢勇 申請人:江蘇省農業科學院