西甜瓜品種蔓枯病抗性快速鑑定方法
2024-02-26 11:04:15 2
專利名稱：：西甜瓜品種蔓枯病抗性快速鑑定方法
技術領域：
：本發明涉及植物病害抗性鑑定的
技術領域：
，尤其是涉及一種西甜瓜品種蔓枯病抗性的快速鑑定方法。
背景技術：
：西甜瓜植物在全世界範圍內廣泛栽培，以其營養價值高、產值好，備受消費者和廣大農民的歡迎。西甜瓜品種很多，而西甜瓜植物的蔓枯病(stemblight)是一種危害非常嚴重的病害，育種學家、植物病理學家和農民等都非常關注。西甜瓜蔓枯病無論在保護地或露地栽培均有發生，其病原無性世代為半知菌亞門，瓜殼二孢真菌(D/辦me〃a(Auersw.)Rehn)，有性世代為子囊菌亞門，甜瓜球腔菌，病菌以分生孢子器和子囊殼在病殘體或土壤越冬，翌年以分生孢子進行初次侵染，通過氣流、水、土壤傳播，也可由帶菌種子傳播。該病在西甜瓜的幼苗期至採收期均可發生，植株的地上各部均能被侵染，生育前期易發病，生殖生長盛期達高峰。無論是在冬春日光溫室，還是早春和秋後大棚栽培均有發生，其危害程度遠高於西甜瓜枯萎病和疫病，在生產上若不及早防治，植株死亡率可達30%40%，造成嚴重減產。目前該病的防治措施主要是種子消毒、無菌苗移栽、水肥科學管理和藥劑保護等，其中，農業防治效果有限，化學防治又容易產生抗藥性、農藥殘留和環境汙染，因此，推廣使用西甜瓜抗性品種是最為經濟有效的辦法。但抗性品種的應用必須與快速、準確、簡單的病害抗性鑑定方法相結合，才有利於該西甜瓜抗性品種的推廣。以往國內外對西甜瓜蔓枯病的抗性鑑定主要是活體鑑定，比如3-4葉期的真葉瓜苗，或者開花期的瓜苗通過西甜瓜蔓枯病孢子懸浮液的噴霧接種。但這種方法既要求條件較高，如苗子需要在保溫、保溼條件較好的溫室中種植，才有利於噴霧接種，苗子的數量要求也較多，而且接種至調査結果的時間較長，一般需15天左右才能看出不同品種之間的抗性差異。因此，生產上急需有一種西甜瓜品種蔓枯病抗性快速、簡易鑑定的方法。
發明內容本發明目的是，針對現有西甜瓜品種蔓枯病抗性鑑定方法所存在的對設備條件要求較高，以及接菌種至調査出結果的時間較長等缺陷，提出一種簡便、快速、準確的西甜瓜品種蔓枯病抗性鑑定的方法。本發明目的是通過以下技術方案予以實現。西甜瓜品種蔓枯病抗性快速鑑定方法，該方法按如下步驟進行(1)植株苗子準備西甜瓜種子消毒、播種，出苗後長至3-5片真葉，備用；(2)蔓枯病菌孢子懸浮液的準備將西甜瓜蔓枯病菌接種在PDA培養基上，並在紫外燈下處理4d誘導產孢；用滅菌水洗下孢子，配成5xl05個/mL孢子懸浮液，備用；(3)培養皿準備取9cm直徑培養皿，底部鋪設用11.8mg/L苯駢咪唑(Benzimidazole)植物保鮮水溶液浸溼的濾紙，消毒後，備用；(4)葉片準備取步驟(1)苗子第3-5片真葉剪成3cmx5cm的葉條，平展置於步驟(3)培養皿濾紙之上，備用；(5)孢子接種把步驟(2)孢子懸浮液用軟毛筆接種至步驟(4)培養皿內的葉條上；另設內含不接種病菌葉條的培養皿為對照；(6)保溫、保溼培養把步驟(5)培養皿放置人工氣候箱內，溫度調至25-30"C下進行培養，培養皿內每天添加一次植物保鮮水溶液1-3mL;(7)病情調査接種培養3-5天後，按以下分級標準進行病情級數的調查，並劃分出病情指數0級葉片沒有發病l級葉片發病面積在10%以下3級葉片發病面積在10%-25%之間5級葉片發病面積在250%-50%之間7級葉片發病面積在50%-75%之間9級葉片發病面積在75%-100%之間病情指數二i:[病級株數x該級代表數值]xlO/(調査總株x發病最高一級代:數值)免疫(I)病情指數0高抗(HR)病情指數0.01-15抗病(R)病情指數15-35中抗(MR)病情指數35-55感病(S)病情指數55-75高感(HS)病情指數75-100。本發明的有益效果一是本發明應用簡便、快速，僅需剪刀、濾紙、一組培養皿和一個人工氣候箱，即可在室內進行操作。二是本發明技術原理明確，即利用西甜瓜蔓枯病菌主要由植株傷口侵入，且在較大溼度環境下發病迅速的特點，在人工模擬設計，並每個品種重複三次的條件下，使接種發病試驗既快速，又準確可靠。三是試驗表明，應用本發明方法能在室內簡易、可控條件下，接種培養3-5天後，即可快速鑑定出西甜瓜品種對蔓枯病的抗性程度，省時省力，與傳統的蔓枯病抗性鑑定方法相比，既節省了IO天以上的時間，又簡化了接種鑑定的條件，顯著降低了鑑定成本，並極大地提高了工作效率。圖1本發明方法快速鑑定流程示意圖。具體實施例方式以下實施例結合附圖對本發明作進一步的詳細描述，但應該理解本發明並不受以下內容所限制。實施例1:(應用本發明方法對西甜瓜品種蔓枯病抗性的快速鑑定)西甜瓜品種蔓枯病抗性快速鑑定方法，該方法按如下步驟進行(1)植株苗子準備選擇生產上常用的栽培品種西瓜24種，甜瓜10種，種子經消毒、播種，出苗後長至3-5片真葉，備用；(2)蔓枯病菌孢子懸浮液的準備將西甜瓜蔓枯病菌(系由浙江省農業科學院植物保護與微生物研究所經濟作物病害研究室，對田間發病植株進行採樣、分離並低溫保存)接種在PDA培養基上，在40W紫外燈(12h紫外燈/12h黑暗)下處理4d誘導產孢；用滅菌水洗下孢子，配成5xl05個/mL孢子懸浮液，備用；PDA培養基的配製馬鈴薯200克煮沸IO分鐘，過濾，棄固體薯塊，取濾液，加蔗糖20克，瓊脂17克，純水定容至l升，滅菌，製成；(3)培養皿準備取9cm直徑培養皿，底部鋪設用植物保鮮液浸溼的濾紙，消毒後，備用；植物保鮮液的配製由苯駢咪唑(Benzimidazole)與水按重量體積11.8mg:1000ml比例配製而成；(4)葉片準備取步驟(1)苗子第3-5片真葉剪成3cm"cm的葉條，平展擺放到步驟(3)培養皿濾紙之上，每皿擺2條，每品種取6個葉條，擺三皿,備用5(5)孢子接種把步驟(2)的孢子懸浮液用軟毛筆接種至步驟(4)培養皿內的葉條之上；另設內含不接種病菌葉條的培養皿為對照；(6)保溫、保溼培養把步驟(5)的培養皿放置人工氣候箱內，調溫度至25-30"C下培養，並每天添加保鮮液1-3mL;(7)病情調査培養3-5天後，按以下分級標準進行病情級數的調査，並劃分出病情指數；其中，病情級數分級標準如下0級葉片沒有發病1級葉片發病面積在10%以下3級葉片發病面積在10%-25。％之間5級葉片發病面積在25%-50%之間7級葉片發病面積在50%-75%之間9級葉片發病面積在75%-100%之間。病情指數二n病級株數x該級代表數值]xlOO/(調査總株x發病最高一級代表數值)免疫(I)病情指數0高抗(HR)病情指數0.01-15抗病(R)病情指數15-35中抗(MR)病情指數35-55感病(S)病情指數55-75高感(HS)病情指數75-100鑑定結果見附表l。實施例2:(應用傳統方法對西甜瓜品種蔓枯病抗性的鑑定)(1)植株苗子準備選擇實施例1中病情指數分布不同的西瓜品種10個，甜瓜品種10個(具體品種名稱見附表2);在保溫，保溼條件較好的大棚或溫室內以盆栽方式進行播種，出苗後長至3-5片真葉時，備用；(2)蔓枯病菌準備同實施例l;(3)蔓枯病菌孢子懸浮液準備同實施例l;(4)孢子接種把歩驟(3)的孢子懸浮液用噴霧器均勻噴至植株葉片上，以不滴水為準，每品種30棵苗，不接種病菌植株做為隱性對照；(5)保溫和保溼把步驟(4)苗子在大棚或溫室內溫度保持25-3(TC，並保溼3天；(6)病情調查接種培養7-15大後，進行病情級數與病情指數調査，調査標準與公式同實施例1;鑑定結果見附表2。通過對實例1和2鑑定結果的比較可發現，兩者結果基本一致，說明以簡單、快速的本發明方法代替了傳統的鑑定方法，可取得同樣的鑑定效果。表1本發明方法的鑑定結果tableseeoriginaldocumentpage10表2傳統接種方法的鑑定結果tableseeoriginaldocumentpage11權利要求1、西甜瓜品種蔓枯病抗性快速鑑定方法，其特徵在於該方法按如下步驟進行(1)植株苗子準備西甜瓜種子消毒、播種，出苗後長至3-5片真葉，備用；(2)蔓枯病菌孢子懸浮液的準備將西甜瓜蔓枯病菌接種在PDA培養基上，並在紫外燈下處理4d誘導產孢；用滅菌水洗下孢子，配成5×105個/mL孢子懸浮液，備用；(3)培養皿準備取9cm直徑培養皿，底部鋪設用11.8mg/L苯駢咪唑(Benzimidazole)植物保鮮水溶液浸溼的濾紙，消毒後，備用；(4)葉片準備取步驟(1)苗子第3-5片真葉剪成3cm×5cm的葉條，平展置於步驟(3)培養皿濾紙之上，備用；(5)孢子接種把步驟(2)孢子懸浮液用軟毛筆接種至步驟(4)培養皿內的葉條上；另設內含不接種病菌葉條的培養皿為對照；(6)保溫、保溼培養把步驟(5)培養皿放置人工氣候箱內，溫度調至25-30℃下進行培養，培養皿內每天添加一次植物保鮮水溶液1-3mL；(7)病情調查接種培養3-5天後，按以下分級標準進行病情級數的調查，並劃分出病情指數0級葉片沒有發病1級葉片發病面積在10％以下3級葉片發病面積在10％-25％之間5級葉片發病面積在25％-50％之間7級葉片發病面積在50％-75％之間9級葉片發病面積在75％-100％之間病情指數＝∑[病級株數×該級代表數值]×100/(調查總株×發病最高一級代表數值)免疫(I)病情指數0高抗(HR)病情指數0.01-15抗病(R)病情指數15-35中抗(MR)病情指數35-55感病(S)病情指數55-75高感(HS)病情指數75-100。全文摘要本發明公開了西甜瓜品種蔓枯病抗性快速鑑定方法，屬於植物病害抗性鑑定
技術領域：
。該方法包括(1)植株苗子準備；(2)蔓枯病菌孢子懸浮液的準備；(3)培養皿準備；(4)葉片準備；(5)孢子接種；(6)保溫、保溼培養；及(7)病情調查接種培養3-5天後進行病情級數與病情指數調查等步驟組成。該方法技術依據明確，具有設備簡單、簡便快速、判斷準確等特點，與傳統鑑定方法相比，既節省了10天以上的時間，又簡化了接種鑑定的條件，降低了鑑定成本，提高了工作效率。本方法適於在西甜瓜病原菌的致病性測定或西甜瓜品種抗性鑑定的應用。文檔編號G01N33/48GK101408540SQ20081016205公開日2009年4月15日申請日期2008年11月17日優先權日2008年11月17日發明者任海英,麗方,王漢榮,茹水江申請人:浙江省農業科學院