一種靈芝多糖高產工程菌株Rmust及其構建方法

2024-02-26 14:02:15

一種靈芝多糖高產工程菌株Rmust及其構建方法
【專利摘要】本發明公開一種靈芝多糖高產工程菌株Rmust及其構建方法，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCCNO.8258，本發明提供的靈芝工程菌，是通過選用靈芝強啟動子P-gpd過表達編碼PGM-葡萄糖磷酸變位酶（PGM）基因，得到高產靈芝多糖靈芝工程菌Rmust；通過搖瓶發酵實驗表明，該菌在其細胞生長不受影響的情況下，轉化子菌株產靈芝多糖的含量是野生型菌株（WT菌株）含量的提1.6倍，其中1g幹菌絲體產靈芝多糖的量(mg/g)由145.9±1.65mg/g提高到236.95±1.28mg/g，因此，本高產菌株可以作為生產靈芝多糖的工程菌株，具有廣泛的應用前景。
【專利說明】一種靈芝多糖高產工程菌株Rmust及其構建方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於基因工程和代謝工程領域的，具體涉及一種通過基因工程對靈芝代謝途徑中有關靈芝多糖合成的PGM (葡萄糖磷酸變位酶)基因過表達的方法，構建了一個靈芝多糖的高產工程菌株。
【背景技術】
[0002]靈芝(Gano derma I u c i dum )是擔子菌綱,多孔菌科,靈芝屬真菌。靈芝真菌在我國有20多種，包括赤芝，黃芝，紫芝，黑芝，薄蓋靈芝，樹舌等。我國應用靈芝作為藥物已有兩千多年的歷史。靈芝對於增強人體免疫力，調節血糖，控制血壓，輔助腫瘤放化療，保肝護肝，促進睡眠等方面均具有顯著療效。由於其特殊的要用價值，靈芝的有效成分分析和藥理學研究已經引起了國際上的廣泛關注，尤其在日本，美國，韓國等國家。目前，靈芝的研究已經深入到了分子水平，一些專著相繼出版，從不同的角度介紹了靈芝的生物學特性、栽培技術、藥理學作用及臨床應用等情況。
[0003]靈芝多糖是從靈芝中提取的一種新內源活性物質，其所含的化學成分能夠顯著提高吞噬細胞的吞噬能力，增強體液免疫和細胞免疫功能，還能提高紅細胞中超氧化物歧化酶活性，對人體具有多種功能。
[0004]PGM (葡萄糖磷酸變位酶)基因是靈芝多糖合成途徑中的一個較為關鍵的基因，它能使糖原分子的葡萄糖殘基形成的葡萄糖-6-磷酸轉變為葡萄糖-1-磷酸。葡萄糖-6-磷酸是糖酵解或糖原合成的主流中間代謝產物，在細胞中的代謝比較快，但是只有葡萄糖-1-磷酸才能夠合成多糖，因此PGM對糖原的合成具有重要的作用。靈芝多糖的合成途徑如下所示:
【權利要求】
1.一種靈芝多糖高產工程菌株Rmust，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC N0.8258。
2.權利要求1所述靈芝多糖高產工程菌株Rmust的構建方法,其特徵在於包括以下步驟: 將目的片段與表達載體相連得到重組表達質粒，然後將重組表達質粒通過PEG介導的原生質體融合的方法將重組表達質粒傳化進靈芝中，從而得到高產靈芝多糖的工程菌株；其中所述的目的片段為葡萄糖磷酸變位酶PGM基因，其核苷酸序列如SEQ ID N0:1所不，其編碼的胺基酸序列如SEQ ID NO:2所不。
3.根據權利要求2所述靈芝多糖高產工程菌株Rmust的構建方法，其特徵在於:所述的表達載體為PJW-EX`P。
【文檔編號】C12N15/61GK103865814SQ201410076047
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年3月4日 優先權日:2014年3月4日
【發明者】徐軍偉, 任夢飛, 紀森林, 賀宜龍, 周降生 申請人:昆明理工大學