一種微生態製劑及其製備方法與流程
2023-12-12 08:17:17 3
本發明涉及一種複合微生態製劑領域，尤其是一種汙水脫氮除磷微生態製劑及其製備方法。
背景技術：
目前，我國水環境汙染相當嚴重，全國七大江河水系中，40％左右水質劣於五類標準；全國75％的湖泊出現不同程度的富營養化；城市河段汙染突出；沿海河口地區和城市附近海域汙染汙染嚴重，赤潮發生頻次增加，面積擴大。水環境的汙染已直接威脅著城市飲用水的安全和人民的健康。所以，對受汙染的江河湖泊水體進行修復，已是社會經濟發展及生態環境建設的迫切需要。
水體富營養化(eutrophication)指的是水體中n、p等營養鹽含量過多而引起的水質汙染現象。其實質是由於營養鹽的輸入輸出失去平衡性，從而導致水生態系統物種分布失衡，單一物種瘋長，破壞了系統的物質與能量的流動，使整個水生態系統逐漸走向滅亡。
氮和磷是生物的重要營養源，目前化肥、洗滌劑和農藥使用普遍，天然水體中氮、磷含量急劇增加，導致水體富營養化，水體中藍藻、綠藻大量繁殖，水體缺氧並產生毒素，使水質惡化，對水生生物和人體健康產生很大的危害。
使用微生物進行水體淨化是目前應用較多的水質淨化方法，常用於江河湖泊水體淨化、汙水治理及修復的生物產品，由多種微生物菌群組成，採用生物工程手段對自然微生物進行改性、強化、馴化培養而成的高效專用微生物應用於水體淨化方面。
國內目前使用微生物淨水方面的應用日益被接受和重視，但研究僅於起步階段。在應用方面，國內獨立開發的主要是一些單一菌株，如光合細菌、芽孢桿菌、蛭弧菌等；複合製劑主要是仿製或引進國外的商品，且多數是對生長速率、餌料轉化率、存活率等方面的數據，還沒有用更科學的研究手段和內容評價作用機理和使用效果。
技術實現要素：
為了解決現有技術中存在的上述技術問題，本發明提供一種用於淨化富營養化水體的複合微生態製劑，具體是通過以下技術方案得以實現的：
以枯草芽孢桿菌及約氏不動桿菌為主要菌群，以乳酸桿菌、酵母菌為輔助菌群配置微生態製劑；其中枯草芽孢桿菌40-60％，約氏不動桿菌20-40％，乳酸桿菌10-20％，酵母菌10-20％。
具體製備方法：
(1)原菌種斜面培養：將冷凍保藏管中的枯草芽孢桿菌、約氏不動桿菌、乳酸桿菌、及酵母菌分別在斜面中活化，之後分別置於90mm培養皿中進行純化，得枯草芽孢桿菌斜面菌種、約氏不動桿菌斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及酵母菌斜面菌種，備用；
(2)原菌種液體培養：將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅰ中，之後於28℃-30℃厭氧鎢絲燈光照培養5-7天得枯草芽孢桿菌原菌液；將約氏不動桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅱ中，接著於25℃-28℃下好氧培養3-5天得約氏不動桿菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅲ中，接著於37℃下厭氧培養1-2天得乳酸桿菌原菌液；將酵母菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅳ中，之後於28℃-30℃下好氧培養3天得酵母菌原菌液；
(3)一級種子培養：將枯草芽孢桿菌原菌液、約氏不動桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液、及酵母菌原菌液按枯草芽孢桿菌40-60％，約氏不動桿菌20-40％，乳酸桿菌10-20％，酵母菌10-20％的菌量比接種於已滅菌的發酵培養基ⅰ中進行培養，具體地：先接種約氏不動桿菌原菌液、酵母菌原菌液並於28℃-30℃下好氧培養3天，然後再接種枯草芽孢桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液37℃厭氧培養3天，得複合微生態製劑的一級種子；
(4)二級種子培養：將所得的一級種子按5％的接種量接種於已滅菌的發酵培養基ⅱ中，並於28℃-30℃下先好氧培養3-5天再厭氧培養3-5天，得複合微生態製劑的二級種子；
(5)成品培養：將所得的二級種子按5％的接種量接種至已滅菌的發酵培養基ⅲ中，並於28℃-30℃下先好氧培養3-5天再厭氧培養3-5天，獲得所述複合微生態製劑的成品；
其中，步驟(2)中所用液體培養基i-iv分別為：
液體培養基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、ph7.0-7.2；
液體培養基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、水1000ml、ph自然；
液體培養基ⅲ的組分：蛋白腖10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、水1000ml、ph6.5；
液體培養基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、ph自然；
步驟(3)中所用發酵培養基ⅰ的組分：桔水5％、酵母粉0.5％、蛋白腖1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
步驟(4)中所用發酵培養基ⅱ的組分：桔水5％、酵母粉0.1％、蛋白腖0.1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
步驟(5)中所用發酵培養基ⅲ的組分：桔水5％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.05％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水。
優選的步驟(1)中所述的枯草芽孢桿菌、約氏不動桿菌、乳酸桿菌、及酵母菌在斜面中活化的具體操作分別為：
步驟(1)中枯草芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將枯草芽孢桿菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅰ上，之後於28℃-30℃厭氧鎢絲燈光照培養5-7天；所述斜面培養基ⅰ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為15min；且該斜面培養基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、ph7.0-7.2。
步驟(1)中約氏不動桿菌在斜面中活化的具體操作為：製備斜面培養基ⅱ，並將斜面培養基ⅱ置於121℃下滅菌20min，之後用接種環將約氏不動桿菌接種於斜面培養基ⅱ上，然後於25℃-28℃下好氧培養3-5天；所述斜面培養基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、瓊脂50克、水1000ml、ph自然。
步驟(1)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將乳酸桿菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅲ上，之後於37℃下厭氧培養1-2天；所述斜面培養基ⅲ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為20min；且該斜面培養基ⅲ的組分：蛋白腖10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、瓊脂15克、水1000ml、ph6.5。
步驟(1)中酵母菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將酵母菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅳ上，之後於28-30℃下好氧培養3天；所述斜面培養基ⅳ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為30min；且該斜面培養基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂15-20克、水1000ml、ph自然。
進一步優選方案選用納米多孔材料作為基質將本微生態製劑製成固體製劑，優選二氧化矽。二氧化矽粒徑小，比表面積大，表面吸附力強，表面能大，分散性能好，能使活菌寄居多孔結構內，減少環境對活菌的影響，並在水體中緩慢釋放菌體，延長微生態製劑在水中起效的時間。
與現有技術相比，本發明創造的技術效果體現在：
採用所述複合微生態製劑對富營養化的水體進行淨化，通過枯草芽孢桿菌的氨化、硝化、反硝化作用及約氏不動桿菌的聚磷作用，可以有效降低水體中的氨氮和亞硝酸鹽濃度、磷酸鹽濃度，從而降低水體中的n、p兩種元素的含量，大幅減少水體的富營養化程度，達到對富營養化水體全面淨化的效果。
具體實施方式
下面結合具體的實施方式來對本發明的技術方案做進一步的限定，但要求保護的範圍不僅局限於所作的描述。
實施例1
一種微生態製劑，通過如下步驟製備：
(1)原菌種斜面培養：將冷凍保藏管中的枯草芽孢桿菌、約氏不動桿菌、乳酸桿菌、及酵母菌分別在斜面中活化，之後分別置於90mm培養皿中進行純化，得枯草芽孢桿菌斜面菌種、約氏不動桿菌斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及酵母菌斜面菌種，備用；
(2)原菌種液體培養：將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅰ中，之後於29℃厭氧鎢絲燈光照培養6天得枯草芽孢桿菌原菌液；將約氏不動桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅱ中，接著於27℃下好氧培養4天得約氏不動桿菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅲ中，接著於37℃下厭氧培養2天得乳酸桿菌原菌液；將酵母菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅳ中，之後於29℃下好氧培養3天得酵母菌原菌液；
(3)一級種子培養：將枯草芽孢桿菌原菌液、約氏不動桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液、及酵母菌原菌液按枯草芽孢桿菌50％，約氏不動桿菌30％，乳酸桿菌10％，酵母菌10％的菌量比接種於已滅菌的發酵培養基ⅰ中進行培養，具體地：先接種約氏不動桿菌原菌液、酵母菌原菌液並於29℃下好氧培養3天，然後再接種枯草芽孢桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液37℃厭氧培養3天，得複合微生態製劑的一級種子；
(4)二級種子培養：將所得的一級種子按5％的接種量接種於已滅菌的發酵培養基ⅱ中，並於29℃下先好氧培養4天再厭氧培養4天，得複合微生態製劑的二級種子；
(5)成品培養：將所得的二級種子按5％的接種量接種至已滅菌的發酵培養基ⅲ中，並於28℃-30℃下先好氧培養4天再厭氧培養3-5天，獲得所述複合微生態製劑的成品；
其中：步驟(1)中枯草芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將枯草芽孢桿菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅰ上，之後於29℃厭氧鎢絲燈光照培養6天；所述斜面培養基ⅰ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為15min；且該斜面培養基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、ph7.0-7.2；
步驟(1)中約氏不動桿菌在斜面中活化的具體操作為：製備斜面培養基ⅱ，並將斜面培養基ⅱ置於121℃下滅菌20min，之後用接種環將約氏不動桿菌接種於斜面培養基ⅱ上，然後於27℃下好氧培養4天；所述斜面培養基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、瓊脂50克、水1000ml、ph自然；
步驟(1)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將乳酸桿菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅲ上，之後於37℃下厭氧培養2天；所述斜面培養基ⅲ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為20min；且該斜面培養基ⅲ的組分：蛋白腖10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、瓊脂15克、水1000ml、ph6.5；
步驟(1)中酵母菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將酵母菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅳ上，之後於29℃下好氧培養3天；所述斜面培養基ⅳ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為30min；且該斜面培養基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂18克、水1000ml、ph自然；
步驟(2)中液體培養基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、ph7.0-7.2；
液體培養基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、水1000ml、ph自然；
液體培養基ⅲ的組分：蛋白腖10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、水1000ml、ph6.5；
液體培養基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、ph自然；
步驟(3)中發酵培養基ⅰ的組分：桔水5％、酵母粉0.5％、蛋白腖1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
步驟(4)中發酵培養基ⅱ的組分：桔水5％、酵母粉0.1％、蛋白腖0.1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
步驟(5)中發酵培養基ⅲ的組分：桔水5％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.05％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
所述各培養基的百分比均為質量百分比。
實施例2
一種微生態製劑，通過如下步驟製備：
(1)原菌種斜面培養：將冷凍保藏管中的枯草芽孢桿菌、約氏不動桿菌、乳酸桿菌、及酵母菌分別在斜面中活化，之後分別置於90mm培養皿中進行純化，得枯草芽孢桿菌斜面菌種、約氏不動桿菌斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及酵母菌斜面菌種，備用；
(2)原菌種液體培養：將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅰ中，之後於29℃厭氧鎢絲燈光照培養6天得枯草芽孢桿菌原菌液；將約氏不動桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅱ中，接著於27℃下好氧培養4天得約氏不動桿菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅲ中，接著於37℃下厭氧培養2天得乳酸桿菌原菌液；將酵母菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅳ中，之後於29℃下好氧培養3天得酵母菌原菌液；
(3)一級種子培養：將枯草芽孢桿菌原菌液、約氏不動桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液、及酵母菌原菌液按枯草芽孢桿菌40％，約氏不動桿菌40％，乳酸桿菌10％，酵母菌10％的菌量比接種於已滅菌的發酵培養基ⅰ中進行培養，具體地：先接種約氏不動桿菌原菌液、酵母菌原菌液並於29℃下好氧培養3天，然後再接種枯草芽孢桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液37℃厭氧培養3天，得複合微生態製劑的一級種子；
(4)二級種子培養：將所得的一級種子按5％的接種量接種於已滅菌的發酵培養基ⅱ中，並於29℃下先好氧培養4天再厭氧培養4天，得複合微生態製劑的二級種子；
(5)成品培養：將所得的二級種子按5％的接種量接種至已滅菌的發酵培養基ⅲ中，並於29℃下先好氧培養4天再厭氧培養4天，獲得所述複合微生態製劑的成品；
其中：步驟(1)中枯草芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將枯草芽孢桿菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅰ上，之後於28℃-30℃厭氧鎢絲燈光照培養6天；所述斜面培養基ⅰ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為15min；且該斜面培養基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、ph7.0-7.2；
步驟(1)中約氏不動桿菌在斜面中活化的具體操作為：製備斜面培養基ⅱ，並將斜面培養基ⅱ置於121℃下滅菌20min，之後用接種環將約氏不動桿菌接種於斜面培養基ⅱ上，然後於27℃下好氧培養4天；所述斜面培養基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、瓊脂50克、水1000ml、ph自然；
步驟(1)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將乳酸桿菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅲ上，之後於37℃下厭氧培養2天；所述斜面培養基ⅲ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為20min；且該斜面培養基ⅲ的組分：蛋白腖10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、瓊脂15克、水1000ml、ph6.5；
步驟(1)中酵母菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將酵母菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅳ上，之後於28-30℃下好氧培養3天；所述斜面培養基ⅳ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為30min；且該斜面培養基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂18克、水1000ml、ph自然；
步驟(2)中液體培養基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、ph7.0-7.2；
液體培養基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、水1000ml、ph自然；
液體培養基ⅲ的組分：蛋白腖10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、水1000ml、ph6.5；
液體培養基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、ph自然；
步驟(3)中發酵培養基ⅰ的組分：桔水5％、酵母粉0.5％、蛋白腖1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
步驟(4)中發酵培養基ⅱ的組分：桔水5％、酵母粉0.1％、蛋白腖0.1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
步驟(5)中發酵培養基ⅲ的組分：桔水5％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.05％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
所述各培養基的百分比均為質量百分比。
實施例3
一種微生態製劑，通過如下步驟製備：
(1)原菌種斜面培養：將冷凍保藏管中的枯草芽孢桿菌、約氏不動桿菌、乳酸桿菌、及酵母菌分別在斜面中活化，之後分別置於90mm培養皿中進行純化，得枯草芽孢桿菌斜面菌種、約氏不動桿菌斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及酵母菌斜面菌種，備用；
(2)原菌種液體培養：將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅰ中，之後於29℃厭氧鎢絲燈光照培養6天得枯草芽孢桿菌原菌液；將約氏不動桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅱ中，接著於27℃下好氧培養4天得約氏不動桿菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅲ中，接著於37℃下厭氧培養2天得乳酸桿菌原菌液；將酵母菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅳ中，之後於29℃下好氧培養3天得酵母菌原菌液；
(3)一級種子培養：將枯草芽孢桿菌原菌液、約氏不動桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液、及酵母菌原菌液按枯草芽孢桿菌60％，約氏不動桿菌20％，乳酸桿菌10％，酵母菌10％的菌量比接種於已滅菌的發酵培養基ⅰ中進行培養，具體地：先接種約氏不動桿菌原菌液、酵母菌原菌液並於29℃下好氧培養3天，然後再接種枯草芽孢桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液37℃厭氧培養3天，得複合微生態製劑的一級種子；
(4)二級種子培養：將所得的一級種子按5％的接種量接種於已滅菌的發酵培養基ⅱ中，並於29℃下先好氧培養4天再厭氧培養4天，得複合微生態製劑的二級種子；
(5)成品培養：將所得的二級種子按5％的接種量接種至已滅菌的發酵培養基ⅲ中，並於28℃-30℃下先好氧培養4天再厭氧培養4天，獲得所述複合微生態製劑的成品；
其中：步驟(1)中枯草芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將枯草芽孢桿菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅰ上，之後於29℃厭氧鎢絲燈光照培養6天；所述斜面培養基ⅰ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為15min；且該斜面培養基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、ph7.0-7.2；
步驟(1)中約氏不動桿菌在斜面中活化的具體操作為：製備斜面培養基ⅱ，並將斜面培養基ⅱ置於121℃下滅菌20min，之後用接種環將約氏不動桿菌接種於斜面培養基ⅱ上，然後於27℃下好氧培養4天；所述斜面培養基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、瓊脂50克、水1000ml、ph自然；
步驟(1)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將乳酸桿菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅲ上，之後於37℃下厭氧培養2天；所述斜面培養基ⅲ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為20min；且該斜面培養基ⅲ的組分：蛋白腖10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、瓊脂15克、水1000ml、ph6.5；
步驟(1)中酵母菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將酵母菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅳ上，之後於29℃下好氧培養3天；所述斜面培養基ⅳ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為30min；且該斜面培養基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂18克、水1000ml、ph自然；
步驟(2)中液體培養基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、ph7.0-7.2；
液體培養基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、水1000ml、ph自然；
液體培養基ⅲ的組分：蛋白腖10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、水1000ml、ph6.5；
液體培養基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、ph自然；
步驟(3)中發酵培養基ⅰ的組分：桔水5％、酵母粉0.5％、蛋白腖1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
步驟(4)中發酵培養基ⅱ的組分：桔水5％、酵母粉0.1％、蛋白腖0.1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
步驟(5)中發酵培養基ⅲ的組分：桔水5％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.05％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
所述各培養基的百分比均為質量百分比。
實施例4
一種微生態製劑，通過如下步驟製備：
(1)原菌種斜面培養：將冷凍保藏管中的枯草芽孢桿菌、約氏不動桿菌、乳酸桿菌、及酵母菌分別在斜面中活化，之後分別置於90mm培養皿中進行純化，得枯草芽孢桿菌斜面菌種、約氏不動桿菌斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及酵母菌斜面菌種，備用；
(2)原菌種液體培養：將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅰ中，之後於29℃厭氧鎢絲燈光照培養6天得枯草芽孢桿菌原菌液；將約氏不動桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅱ中，接著於27℃下好氧培養4天得約氏不動桿菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅲ中，接著於37℃下厭氧培養2天得乳酸桿菌原菌液；將酵母菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅳ中，之後於29℃下好氧培養3天得酵母菌原菌液；
(3)一級種子培養：將枯草芽孢桿菌原菌液、約氏不動桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液、及酵母菌原菌液按枯草芽孢桿菌40％，約氏不動桿菌20％，乳酸桿菌20％，酵母菌20％的菌量比接種於已滅菌的發酵培養基ⅰ中進行培養，具體地：先接種約氏不動桿菌原菌液、酵母菌原菌液並於29℃下好氧培養3天，然後再接種枯草芽孢桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液37℃厭氧培養3天，得複合微生態製劑的一級種子；
(4)二級種子培養：將所得的一級種子按5％的接種量接種於已滅菌的發酵培養基ⅱ中，並於29℃下先好氧培養4天再厭氧培養4天，得複合微生態製劑的二級種子；
(5)成品培養：將所得的二級種子按5％的接種量接種至已滅菌的發酵培養基ⅲ中，並於28℃-30℃下先好氧培養4天再厭氧培養4天，獲得所述複合微生態製劑的成品；
其中：步驟(1)中枯草芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將枯草芽孢桿菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅰ上，之後於29℃厭氧鎢絲燈光照培養6天；所述斜面培養基ⅰ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為15min；且該斜面培養基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、ph7.0-7.2；
步驟(1)中約氏不動桿菌在斜面中活化的具體操作為：製備斜面培養基ⅱ，並將斜面培養基ⅱ置於121℃下滅菌20min，之後用接種環將約氏不動桿菌接種於斜面培養基ⅱ上，然後於27℃下好氧培養4天；所述斜面培養基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、瓊脂50克、水1000ml、ph自然；
步驟(1)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將乳酸桿菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅲ上，之後於37℃下厭氧培養2天；所述斜面培養基ⅲ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為20min；且該斜面培養基ⅲ的組分：蛋白腖10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、瓊脂15克、水1000ml、ph6.5；
步驟(1)中酵母菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將酵母菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅳ上，之後於29℃下好氧培養3天；所述斜面培養基ⅳ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為30min；且該斜面培養基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂18克、水1000ml、ph自然；
步驟(2)中液體培養基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、ph7.0-7.2；
液體培養基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、水1000ml、ph自然；
液體培養基ⅲ的組分：蛋白腖10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、水1000ml、ph6.5；
液體培養基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、ph自然；
步驟(3)中發酵培養基ⅰ的組分：桔水5％、酵母粉0.5％、蛋白腖1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
步驟(4)中發酵培養基ⅱ的組分：桔水5％、酵母粉0.1％、蛋白腖0.1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
步驟(5)中發酵培養基ⅲ的組分：桔水5％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.05％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
所述各培養基的百分比均為質量百分比。
實施例5
一種微生態製劑，通過如下步驟製備：
(1)原菌種斜面培養：將冷凍保藏管中的枯草芽孢桿菌、約氏不動桿菌、乳酸桿菌、及酵母菌分別在斜面中活化，之後分別置於90mm培養皿中進行純化，得枯草芽孢桿菌斜面菌種、約氏不動桿菌斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及酵母菌斜面菌種，備用；
(2)原菌種液體培養：將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅰ中，之後於29℃厭氧鎢絲燈光照培養6天得枯草芽孢桿菌原菌液；將約氏不動桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅱ中，接著於27℃下好氧培養4天得約氏不動桿菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅲ中，接著於37℃下厭氧培養2天得乳酸桿菌原菌液；將酵母菌斜面菌種接種於已滅菌的液體培養基ⅳ中，之後於28℃-30℃下好氧培養3天得酵母菌原菌液；
(3)一級種子培養：將枯草芽孢桿菌原菌液、約氏不動桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液、及酵母菌原菌液按枯草芽孢桿菌50％，約氏不動桿菌30％，乳酸桿菌10％，酵母菌10％的菌量比接種於已滅菌的發酵培養基ⅰ中進行培養，具體地：先接種約氏不動桿菌原菌液、酵母菌原菌液並於29℃下好氧培養3天，然後再接種枯草芽孢桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液37℃厭氧培養3天，得複合微生態製劑的一級種子；
(4)二級種子培養：將所得的一級種子按5％的接種量接種於已滅菌的發酵培養基ⅱ中，並於28℃-30℃下先好氧培養4天再厭氧培養4天，得複合微生態製劑的二級種子；
(5)成品培養：將所得的二級種子按5％的接種量接種至已滅菌的發酵培養基ⅲ中，並於28℃-30℃下先好氧培養4天再厭氧培養4天，獲得所述複合微生態製劑的成品；
其中：步驟(1)中枯草芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將枯草芽孢桿菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅰ上，之後於29℃厭氧鎢絲燈光照培養6天；所述斜面培養基ⅰ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為15min；且該斜面培養基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、ph7.0-7.2；
步驟(1)中約氏不動桿菌在斜面中活化的具體操作為：製備斜面培養基ⅱ，並將斜面培養基ⅱ置於121℃下滅菌20min，之後用接種環將約氏不動桿菌接種於斜面培養基ⅱ上，然後於25℃-28℃下好氧培養4天；所述斜面培養基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、瓊脂50克、水1000ml、ph自然；
步驟(1)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將乳酸桿菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅲ上，之後於37℃下厭氧培養2天；所述斜面培養基ⅲ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為20min；且該斜面培養基ⅲ的組分：蛋白腖10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、瓊脂15克、水1000ml、ph6.5；
步驟(1)中酵母菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環將酵母菌接種於已滅菌的斜面培養基ⅳ上，之後於29℃下好氧培養3天；所述斜面培養基ⅳ的滅菌溫度為121℃、滅菌時間為30min；且該斜面培養基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂18克、水1000ml、ph自然；
步驟(2)中液體培養基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、ph7.0-7.2；
液體培養基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、水1000ml、ph自然；
液體培養基ⅲ的組分：蛋白腖10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、水1000ml、ph6.5；
液體培養基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、ph自然；
步驟(3)中發酵培養基ⅰ的組分：桔水5％、酵母粉0.5％、蛋白腖1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
步驟(4)中發酵培養基ⅱ的組分：桔水5％、酵母粉0.1％、蛋白腖0.1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
步驟(5)中發酵培養基ⅲ的組分：桔水5％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.05％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，餘量為水；
所述各培養基的百分比均為質量百分比；
將步驟(5)中製得的複合微生態製劑成品烘乾研磨過100目篩後與二氧化矽混合，製成固體微生態製劑。
將實施例5與實施例1進行對比，實施例5將複合微生態製劑成品烘乾研磨過100目篩後與二氧化矽混合，製成固體微生態製劑，持續時間更久，抗環境幹擾能力更強，但是起效速度降低，淨化效率也有少許降低。
將各個實施例所得微生態製劑各取400ml分散於需要淨化的水10l，通氣培養14小時，分散於1000立方米水中，充分反應後取樣。
將實施例1-4進行對比：
對比可知，枯草芽孢桿菌脫氮作用明顯，約氏不動桿菌除磷效果明顯，乳酸桿菌與酵母菌聯用則對水體透明度有較好效果。
最後，應當指出，以上實施例僅是本發明較有代表性的例子。顯然，本發明的技術方案並不限於上述實施例，還可以有許多變形。本領域的普通技術人員能從本發明公開的內容直接導出或聯想到的所有變形，均應認為是本發明的保護範圍。