一種生脈注射液中莽草酸的測定方法
2023-04-29 07:32:56 2
一種生脈注射液中莽草酸的測定方法
【專利摘要】本發明涉及一種生脈注射液中莽草酸的測定方法，包括將生脈注射液適當稀釋後注入高效液相色譜儀中，採用外標法測定莽草酸的含量。
【專利說明】一種生脈注射液中莽草酸的測定方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥領域，具體涉及一種生脈注射液中莽草酸的測定方法。
【背景技術】
[0002]生脈注射液是根據中醫著名經典古方「生脈散」研製而成的可供靜脈注射的中藥注射液，由人參、麥冬、五味子三味中藥配伍並採用現代科學技術提取精製而成。
[0003]古方「生脈散」歷經上千年長期應用，安全有效，經久不衰。古代醫家既用於搶救熱傷元氣、津液耗傷、脈微欲絕等重症，又用以作為氣陰兩虛病人的補益劑。關於生脈散方名的含義，吳琨在《醫方考》中說:「名曰生脈者，以脈得氣則充，失氣則弱，故名之」。中醫之脈者，主於心，而發源於肺，然肺中之氣，所賴以生者，尤必資籍於腎陰。故《醫方集解》曰:「蓋心主脈，肺朝百脈，補肺清心，則氣充而脈復，故曰生脈也。」可以說，生脈散是依據其功效而命名的。生脈亦可解之為復脈，「人有將死脈絕者，服此能復生之」。較形象地說明了生脈散的功效及其在急重症搶救中的作用。
[0004]莽草酸(Shikimic Acid，化學名:3，4，5-三羥基-1-環己烯-1-羧酸)是植物及微生物中，苯丙氨酸、酪氨酸及色氨酸生物合成時，從磷酸烯醇丙酮酸開始，與4-磷酸赤蘚糖合成的三羥基芳香族中間產物。是各種芳香族化合物的來源，也是一些次生代謝產物的重要原料。
[0005]目前，生脈注射液中尚未報導莽草酸。莽草酸主要來源於八角茴香，是八角茴香的有效成分，是抗病毒藥物「達菲」的主要原料。另五味子與八角茴香同屬於木蘭科植物，據我們測定五味子藥材中也含有大量的莽草酸成分，故認為可將莽草酸作為五味子藥材中一有效特徵成分進行控制。
[0006]生脈注射液處方中，五味子生藥佔較高比例，且本品成品中據測定很高。故以莽草酸成分作為生脈注射液質量標準中五味子特徵有效成分為測定指標項，比五味子醇甲含量測定更具合理性。
[0007]由於中藥具有複雜的物質基礎，因此其質量控制手段無法表徵其複雜的生物物質成分，實際上難以控制其內在品質。因此，如何有效地、特異性的控制生脈注射液的品質成為人們研究的熱點。
【發明內容】
[0008]本發明目的在於提供一種生脈注射液中莽草酸的測定方法。該方法針對性強，為中藥注射劑的質量標準控制提供了新的手段。
[0009]本發明一種生脈注射液中莽草酸含量測定方法，通過以下技術方案實施:
a.取生脈注射液樣品，適當稀釋後作為供試品；
b.取莽草酸對照品，配製成約80μ g/ml ；
c.進行高效液相色譜測定,其中色譜條件為，色譜柱:PhenomenexSynergi 4 μ mHydro-RP 80A 250X4.60mm 4micron，檢測波長:20(T230nm ；柱溫:25?40 O ;流速:0.5~0.7ml/mim ;流動相:15~25mM /L 的 KH2PO4 溶液(H3PO4 調 pH 到 2.0~3.0)；
d.採用外標法，利用峰面積計算出莽草酸的含量。
[0010]優選地，本發明一種生脈注射液中莽草酸含量測定方法，通過以下技術方案實施:
a.取生脈注射液樣品，稀釋20-50倍後，作為供試品；
b.取莽草酸對照品，配製成約80μ g/ml ；
c.進行高效液相色譜測定,其中色譜條件為，色譜柱:PhenomenexSynergi 4 μ mHydro-RP 80A 250X4.60mm，4micron，檢測波長:200-230nm ；柱溫:25-40 O ;流速:
0.5-0.7ml/mim ;流動相:15~25mM /L 的 KH2PO4 溶液，H3PO4 調 pH 到 2.0~3.0 ；
d.採用外標法，利用峰面積計算出莽草酸的含量。
[0011]最優選地，本發明一種生脈注射液中莽草酸含量測定方法，通過以下技術方案實施:
a.取生脈注射液樣品，稀釋20倍後，作為供試品；
b.取莽草酸對照品，配製成約80μ g/ml ；
c.進行高效液相色譜測定,其中色譜條件為，色譜柱:PhenomenexSynergi 4 μ mHydro-RP 80A 250 X 4.60mm, 4micron,檢測波長:218nm ;柱溫:30°C ;流速:0.6ml/mim ;流動相:20mM /L 的 KH2PO4 溶液(H3PO4 調 pH 到 2.5)；
d.採用外標法，利用峰面積計算出莽草酸的含量。
[0012]本發明生脈注射液中以莽草酸計，含量不得低於1.2mg/ml。
[0013]本申請的生脈注射液的製備方法如下: a.按照下述重量份取藥材:紅參25份，五味子39份，麥冬78份；
b.紅參提取:取紅參切薄片或粉碎，加乙醇進行連續或分次回流提取，合併提取液，冷藏,濾過,適當濃縮回收乙醇,加適量活性炭,攪拌過濾,濾液調節pH值近中性，靜置，濾液濃縮至稠膏，加注射用水，攪勻，冷藏，濾過，加入適量活性炭煮沸，濾過，待配製；
c.五味子蒸餾液:取五味子，粉碎後加水蒸餾，收集蒸餾液，冷藏，待配製；
d.五味子提取液:蒸餾後的藥渣加水煎煮，合併煎煮液，濾過，濾液濃縮至稠膏，加入乙醇進行二次醇沉，濾液調節pH值近中性，冷藏，濾過，回收乙醇並濃縮至稠膏,加入注射用水，攪拌，冷藏，濾過，濾液加入適量活性炭煮沸30分鐘，稍冷，過濾至澄明，待配製；
e.麥冬提取:取麥冬，加水煎煮，後同五味子提取液的方法，待配製；
f.取上述紅參提取液、麥冬提取液、五味子提取液，五味子蒸餾液，，混合，加熱，靜置，濾過，加入聚山梨酯80，混合均勻，使其完全溶解，補水，攪勻，調pH值，濾過，灌封，滅菌，得生脈注射液。
[0014]優選地，本申請的生脈注射液的製備方法如下:
a.按照下述重量份取藥材:紅參25份，五味子39份，麥冬78份；
b.紅參提取:取紅參片加入回流提取罐中，90%以上乙醇加熱回流提取4-5次，每次2小時，或者連續回流提取6.5小時，合併回流液，冷藏，濾過，回收乙醇至每Iml含生藥
0.3~0.4g，加適量活性炭，攪拌過濾，濾液調節pH值近中性，靜置，濾液濃縮至稠膏，加注射用水，攪勻，冷藏，濾過，加入適量活性炭煮沸，濾過，待配製；
c.五味子蒸餾:取五味子，粉碎後加水蒸餾，收集蒸餾液，冷藏，待配製；d.五味子提取液:蒸餾後的藥渣加水煎煮，合併煎煮液，濾過，濾液濃縮至稠膏，加入乙醇進行二次醇沉，第一次使含醇量達到80%，第二次使含醇量達到85%，濾液調節pH值近中性，冷藏，濾過，回收乙醇並濃縮至稠膏,加入注射用水,攪拌,冷藏,濾過,濾液加入適量活性炭煮沸30分鐘，稍冷，過濾至澄明，待配製；
e.麥冬提取:取麥冬，加水煎煮，後同五味子提取液方法；
f.取紅參提取液、麥冬提取液、五味子提取液，五味子蒸餾液，分別初濾後再超濾，混合濾液，加入0.5-0.9%聚山梨酯80，使其完全溶解，補水至藥材三味藥材總量1.5~2.0倍的體積，攪勻，調pH值7.5。精濾，灌封，滅菌。
[0015]本申請的生脈注射液中莽草酸的測定方法，專屬性強，在4-128 μ g/ml的濃度範圍內，線性良好，該方法可以用於生脈注射液中莽草酸的含量測定。
[0016]以下通過方法學考察，說明本發明的有益效果。
[0017]1、專屬性研究
按照實施例1的方法，取生脈注射液生產中的紅參注射液、麥冬注射液和吐溫，按配製比例配成不含五味子液生生脈注射液陰性樣。將生脈注射液和缺五味子液陰性用注射用水稀釋50倍後，按方法進樣。A:莽草酸對照品；B:生脈注射液；C:缺五味子液陰性，各樣均進5μ I。結果見圖1-圖3 ;
2、檢測波長的確定
精密稱取莽草酸對照品適量，用2m mo I/L的ΚΗ2Ρ04、Η3Ρ04調pH = 2.5的水溶液，稀釋至含量約為40 μ g/ml的對照品溶液。取對照品溶液190-400nm波長掃描，得莽草酸紫外光譜圖，見圖4。可以看出，莽草酸在190-250nm有吸收，最大吸收值在218nm ；
3、色譜條件
色譜柱:Synergi 4u Hydro-RP 80A, 250 x 4.6 mm ;檢測波長:218nm ;柱溫:25°C ;流動相:單泵，20mM/L 的 KH2PO4 (H3PO4 調 pH 到 2.5);流速:0.6ml/mim ;進樣量:10μ L ；以莽草酸計塔板數不得低於15000 ；
4重複性實驗 4.1日內精密度
按照實施例1的方法製備樣品，取生脈注射液樣，稀釋50倍後，進樣5μ 1，連續進樣6次，所得莽草酸峰峰面積計算RSD = 0.12%，見表1。說明本方法對於測定莽草酸日內精密度好；
表1、精密度實驗數據測定表
【權利要求】
1.一種生脈注射液中莽草酸的測定方法，由下述步驟組成: a.取生脈注射液樣品，適當稀釋後作為供試品； b.取莽草酸對照品，配製成約80μ g/ml ； c.進行高效液相色譜測定,其中色譜條件為，色譜柱:PhenomenexSynergi 4 μ mHydro-RP 80A 250X4.60mm 4micron，檢測波長:200-230nm ；柱溫:25-40 O ;流速:0.5-0.7ml/mim ;流動相:15~25mM /L 的 KH2PO4 溶液，H3PO4 調 pH 到 2.0~3.0 ； d.採用外標法，利用峰面積計算出莽草酸的含量。
2.權利要求1所述的方法，其中步驟a中稀釋為20-50倍。
3.權利要求1所述的方法，其中步驟c中流動相為:15~25mM/L的KH2PO4溶液，H3PO4調pH到2.0~3.0。
4.權利要求1所述的方法，其特徵在於由下述步驟組成: a.取生脈注射液樣品，稀釋20-50倍後，作為供試品； b.取莽草酸對照品，配製成約80μ g/ml ； c.進行高效液相色譜測定,其中色譜條件為，色譜柱:PhenomenexSynergi 4 μ mHydro-RP 80A 250X4.60mm，4micron，檢測波長:200-230nm ；柱溫:25-40 O ;流速:0.5-0.7ml/mim ;流動相:15~25mM /L 的 KH2PO4 溶液，H3PO4 調 pH 到 2.0~3.0 ； d.採用外標法，利用峰面積計算出莽草酸的含量。
5.權利要求1所述的方法，其中生脈注射液按照下述步驟製成: a.按照下述重量份取藥材:紅參25份，五味子39份，麥冬78份； b.紅參提取:取紅參切薄片或粉碎，加乙醇進行連續或分次回流提取，合併提取液，冷藏,濾過,適當濃縮回收乙醇,加適量活性炭,攪拌過濾,濾液調節pH值近中性，靜置，濾液濃縮至稠膏，加注射用水，攪勻，冷藏，濾過，加入適量活性炭煮沸，濾過，待配製； c.五味子蒸餾液:取五味子，粉碎後加水蒸餾，收集蒸餾液，冷藏，待配製； d.五味子提取液:蒸餾後的藥渣加水煎煮，合併煎煮液，濾過，濾液濃縮至稠膏，加入乙醇進行二次醇沉，濾液調節pH值近中性，冷藏，濾過，回收乙醇並濃縮至稠膏,加入注射用水，攪拌，冷藏，濾過，濾液加入適量活性炭煮沸30分鐘，稍冷，過濾至澄明，待配製； e.麥冬提取:取麥冬，加水煎煮，後同五味子提取液的方法，待配製； f.取上述紅參提取液、麥冬提取液、五味子提取液，五味子蒸餾液，混合，加熱，靜置，濾過，加入聚山梨酯80，混合均勻，使其完全溶解，補水，攪勻，調pH值，濾過，灌封，滅菌，得生脈注射液。
6.權利要求5的方法，其特徵在於，生脈注射液由下述步驟組成: a.按照下述重量份取藥材:紅參25份，五味子39份，麥冬78份； b.紅參提取:取紅參片加入回流提取罐中，90%以上乙醇加熱回流提取4-5次，每次2小時，或者連續回流提取6.5小時，合併回流液，冷藏，濾過，回收乙醇至每Iml含生藥0.3~0.4g，加適量活性炭，攪拌過濾，濾液調節pH值近中性，靜置，濾液濃縮至稠膏，加注射用水，攪勻，冷藏，濾過，加入適量活性炭煮沸，濾過，待配製； c.五味子蒸餾:取五味子，粉碎後加水蒸餾，收集蒸餾液，冷藏，待配製； d.五味子提取液:蒸餾後的藥渣加水煎煮，合併煎煮液，濾過，濾液濃縮至稠膏，加入乙醇進行二次醇沉，第一次使含醇量達到80%，第二次使含醇量達到85%，濾液調節pH值近中性，冷藏，濾過，回收乙醇並濃縮至稠膏,加入注射用水,攪拌,冷藏,濾過,濾液加入適量活性炭煮沸30分鐘，稍冷，過濾至澄明，待配製； e.麥冬提取:取麥冬，加水煎煮，後同五味子提取液方法； f.取紅參提取液、麥冬提取液、五味子提取液，五味子蒸餾液，分別初濾後再超濾，混合濾液，加入0.5-0.9%聚山梨酯80，使其完全溶解，補水至藥材三味藥材總量1.5~2.0倍的體積，攪勻，調PH值7.5 ;精濾，灌封，滅菌。
7.權利要求1所述的方法，其中生脈注射液中以莽草酸計，含量不得低於1.2mg/ml。
【文檔編號】G01N30/02GK103837610SQ201210486122
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2012年11月26日 優先權日:2012年11月26日
【發明者】趙炳祥, 朱雅寧, 董禮, 王虎山, 侯新蓮, 吳建國, 祝勇軍 申請人:雅安三九藥業有限公司