用於治療癌症和血管發生的硝基呋喃化合物的製作方法

2023-12-08 20:58:31

專利名稱：：用於治療癌症和血管發生的硝基呋喃化合物的製作方法
技術領域：
：本發明涉及硝基呋喃化合物(例如硝呋替莫)的合成和用於治療癌症及抑制血管發生的用途。本發明還提供了包含硝基呋喃化合物的治療性組合物和試劑盒。
背景技術：
：癌症是美國的第二大的死亡原因。由於美國不斷增加的老年人群，可以合理地預計癌症發病率會持續增長。目前使用多種方式治療癌症，包括手術、放射療法和化學療法。治療的選擇取決於癌症的類型、定位和擴散情況。手術和放射療法的優點之一是能夠將療法的影響控制在一定程度，從而限制對體內正常組織的毒性。按理說化學療法是針對擴散型癌症如白血病和淋巴瘤以及轉移的最合適治療。化學療法通常全身性施用，因此對正常組織的毒性是一個重要的問題。然而，並非所有的肺瘤都對化學治療劑有反應，其他一些儘管最初對化學治療劑有反應，但是也可能發展出抗性。因此，需要更好地了解癌症形成和發展以及發展出治療抗性的內在機制。還需要更有效的癌症治療。在過去的若干年間積累了支持下述假說的證據血管發生促進實體瘤和白血病的生長和發展。血管發生有利於增生轉化為瘤形成，即從細胞增殖狀態轉化為腫瘤細胞特徵性的失控增殖狀態。血管發生還影響癌細胞擴散至整個身體，最終導致轉移形成。更近期的證據暗示血管發生與除癌症外的其他疾病的發病機制也有聯繫。例如，血管發生似乎為炎性細胞提供了進入慢性炎症(例如克羅恩病和慢性膀胱炎)位點的通道，並在類風溼性關節炎中破壞軟骨。血管發生還促進動脈粥樣硬化斑的生長和出血，在子宮內膜異位症中導致腹膜內出血，並且是失明的一個原因。血管發生還牽涉其他疾病的發病機制，因此更強烈要求尋找有效的血管發生抑制劑。目前已經發現了若干種血管發生抑制劑，有一些目前正在臨床試驗中。成神經細胞瘤是兒童癌症死亡的最主要原因；它是兒童中最常見的顱外實體瘤，其預後很差。目前的高強度化療、手術、放射和自體骨髓移植術常常是不成功的，使得患者未治癒、虛弱並且不能夠承受更強烈的治療。目前大部分年齡大於1歲的兒童在標準療法中不成功。這些兒童中只有30%在診斷後存活長達5年"2。因此，需要治療策略中的新進展來改善成神經細胞瘤中的總體存活率。
發明內容本發明提供了用於改進的硝基呋喃化合物合成的方法，以及用於在哺乳動物(特別是人)受試者中治療癌症及抑制血管發生的方法和組合物。本發明部分基於下述偶然發現在用硝呋替莫治療查加斯病(Chagasdisease)的患者中，一種已知作為抗真菌劑使用的硝基呋喃化合物硝呋替莫減小了成神經細胞瘤肺瘤的大小。還發現硝呋替莫在體外抑制成神硝呋替莫屬於稱為硝基呋喃的化合物組(圖1)。硝基呋喃(包括硝呋替莫)是硝基雜環化合物，其中許多具有在哺乳動物中抵抗原生動物和細菌感染的生物活性。4迄今為止，沒有研究將硝基呋喃用於治療人類癌症，因為在獸醫學動物中觀察到了毒效應。例如，發現一種獸用抗微生物劑呋喃西林在動物中引起乳房和卵巢腫瘤。5硝呋替莫減小腫瘤大小、抑制成神經細胞瘤細胞的增殖和抑制血管發生的這些新的觀察結果表明，硝呋替莫和其他硝基呋喃化合物能夠用於治療癌症和由血管發生所介導或引起的疾病或病症。本文中描述了一些這類疾病和病症作為治療的靶標。因此，本發明的一個方面提供了治療患有癌症的哺乳動物(優選人)受試者的方法。該方法包括以治療癌症的有效量對該受試者施用硝基呋喃化合物。所述癌症可以是轉移癌。在一些優選的實施方案中，所述癌症可以是實體瘤，例如成神經細胞瘤、成髄細胞瘤(medulloblastoma)、周圍惡性神經鞘瘤、室管膜瘤、顱咽管瘤、星形細胞瘤(青少年纖維性星形細胞瘤、室管膜下巨細胞性星形細胞瘤、多形性黃色星形細胞瘤(pleimorphicxanthoastrocytoma)、間變性星形細胞瘤(anaplastic。本發明還部分基於硝呋替莫抑制血管發生這一發astrocytoma)或大腦膠質瘤病(gliomatosiscerebri))、腦脊膜瘤、生殖細胞瘤、膠質瘤、混合性膠質瘤、脈絡叢瘤、少突膠質瘤(混合性膠質瘤(例如少星形細胞瘤(oligoastrocytoma))或間變性少突膠質瘤)、周圍神經外胚層瘤、原始神經外胚層瘤(PNET)、CNS淋巴瘤、垂體腺瘤或施萬鞘瘤。在一些特別優選的實施方案中，所述癌症是成神經細胞瘤或成髄細胞瘤。在任何實施方案中，受試者可以沒有需要用硝基呋喃治療的其他適應症，即受試者不需要還患有查加斯病或例如由微生物感染引起的其他一些適應症。該方法還可額外包括用化學療法、手術和/或放射療法治療受試者。另一方面，本發明提供了在哺乳動物(優選人)受試者中抑制血管發生的方法。該方法包括以有效抑制血管發生的有效量對該受試者施用硝基呋喃化合物。受試者可患有癌症、眼病(例如黃斑變性、黃斑病變、糖尿病性視網膜病或早熟性視網膜病(晶狀體後纖維組織形成))、皮膚病(例如嬰兒血管瘤、尋常疣、銀屑病、神經纖維瘤病或大皰性表皮鬆解)、自身免疫性病(例如類風溼性關節炎)、婦科疾病(例如子宮內膜息肉、子宮內膜異位、功能障礙性子宮出血、卵巢過度刺激症候群、多囊性卵巢症候群(PCO)或先兆子癇)、心血管疾病(例如冠心病、缺血性心肌病、心肌缺血、動脈硬化、動脈粥樣硬化、動脈粥樣硬化斑塊新血管形成(atheroscleroticplaqueneovascularization)、動脈阻塞性疾病、缺血、缺血性潰瘍、缺血或心肌缺血後血運重建、外周血管疾病，或間歇性跛行)，或胃腸疾病(例如克羅恩病和潰瘍性結腸炎、伯格病(BuergerDisease)、血栓閉塞性血管炎、閉塞性動脈硬化、缺血性潰瘍、多發性硬化、特發性肺纖維化、HIV感染、足底筋膜炎(plantarfasciitis),希普爾病(VonHippel-LandauDisease)、CNS成血管細胞瘤、視網膜成血管細胞瘤、甲狀腺炎、良性前列腺肥大、腎小球腎炎、異位骨形成(ectopicboneformation)或瘢痕疙疼)。癌症可以是膽管癌；膀胱癌；骨癌；腦癌或CNS癌；乳腺癌；子宮頸癌；絨毛膜癌；結腸和直腸癌；結締組織癌；消化系統癌；子宮內膜癌；食管癌；眼癌；flbromael;頭與頸癌；胃癌；上皮內贅生物；腎癌；喉癌；白血病，包括急性髄細胞樣白血病、急性淋巴樣白血病、慢性髓細胞樣白血病、慢性淋巴樣白血病；肝癌；肺癌(例如小細胞和非小細胞的)；淋巴瘤，包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤；黑色素瘤；口腔癌(例如唇、舌、口和咽癌);卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；視網膜母細胞瘤；橫紋肌肉瘤；直腸癌；6腎癌；呼吸系統癌；肉瘤；皮膚癌；胃癌；睪丸癌；甲狀腺癌；子宮癌；泌尿系統癌；肉瘤或癌瘤(carcinoma),所述癌症可以是轉移癌。在任何實施方案中，受試者可以沒有需要用硝基吹喃治療的任何其他適應症，例如不患有查加斯病。該方法還可額外包括用化學療法、手術和/或放射療法治療患者。另一方面，本發明提供了用於治療前述疾病、病症或狀況的藥物組合物。該組合物包含與可藥用載體混合的一種或多於一種的硝基呋喃化合物。優選地，所述硝基呋喃化合物為硝呋替莫、呋喃唑酮(furazolidine)或硝呋太爾。更優選地，所述硝基呋喃化合物為硝呋替莫。在一個非常具體的方面中，該組合物包含藥物單位劑型，其含有有效治療成神經細胞瘤或其他相關癌症(即中樞神經系統癌)的用量的硝基呋喃化合物，優選硝呋替莫。優選地，該單位劑型為與可藥用栽體混合的約200-300mg藥物。在另一個非常具體的方面中，所述組合物包含硝基呋喃化合物，特別是硝呋替莫，並且也可以包含抗壞血酸或丁疏氨酸亞碸胺(buthioninesulfoximine)作為第二活性成分或藥劑。這些組合物可以配製為用於經口、鞘內、靜脈內或肌內給藥；優選經口給藥配方。在另一方面中，本發明是包含與合適的可藥用載體混合的硝基呋喃化合物(例如硝呋替莫)的試劑盒，其被配製為用於經口、鞘內、靜脈內或肌內給藥。優選經口配方。該試劑盒還可以包含同樣在合適的可藥用栽體中的有效量的抗壞血酸或丁硫氨酸亞碸胺或二者都有。該試劑盒還可包含使用說明。在一些實施方案中，使用說明教導保健提供者如何施用硝呋替莫。如上所述，所述組合物、其用途及試劑盒可額外包括第二藥劑或成分。該第二藥劑可以是穀胱甘肽的拮抗劑或耗竭劑。穀胱甘肽的拮抗劑或耗竭劑的實例包括但不限於丁硫氨酸亞碸胺、異硫氰酸鹽或酯、環磷醯胺、異環褲醯胺(ifosphamide)、放線菌素D或N-(4-羥基苯基)維甲醯胺(N國(4國hydroxyphenyl)retinamide，4誦HPR)。該第二藥劑可以是促氧化劑。促氧化劑的實例包括但不限於抗壞血酸、過氧化氫和氫醌。促氧化劑是本領域普通技術人員已知的。在一些重要的實施方案中，促氧化劑(例如抗壞血酸)與硝基呋喃化合物同時施用，或在硝基呋喃化合物之前施用。第二藥劑可以是化學治療劑。一些重要的化學治療劑實例包括但不限於拓樸替康(t叩otecan);有機金屬如順鉑、卡鉑；多柔比星、長春新鹼、長春鹼、紫杉醇及其同源物(congener)、放線菌素D。這些化學治療劑的實例在下文列出。第二藥劑可以是血管破壞劑(vasculardisruptingagent)。血管破壞劑的例子包括但不限於考布他汀(combretostatin)、天然異硫氰酸鹽或酯或其合成衍生物和類似物。第二藥劑可以是血管發生抑制劑。血管發生抑制劑的實例包括但不限於2-甲氧雌二醇(2-ME)、AG3340、制管張素、抗凝血酶III、抗VEGF抗體、巴馬司他、貝伐單抗(avastatin)、BMS國275291、CAI、Canstatin、卡託普利、軟骨來源的抑制劑(CDI)、CC-5013、塞來考昔(CELEBREX)、COL-3、考布他汀、考布他汀A4砩酸鹽、Dalteparin(FRAGIN⑧)、EMD121974(西侖吉肽)、內皮抑制素、Erlotinib(TARCEVA)、gefitinib(Iressa)、高金雀花鹼、氫溴酸囟夫酮(TEMPOSTATINTM)、Idl、Id3、IM862、曱碌酸伊馬替尼、可誘導蛋白10、幹擾素-cx、白介素12、薰草菌素A、LY317615或AE-941(NEOVASTATTM)、馬立馬司他、Maspin、乙酸甲羥孕酮、Meth-l、Meth-2、新伐司他、骨橋蛋白切割產物、PEX、色素上皮生長因子(PEGF)、血小板因子4、促乳素片段、增殖蛋白相關蛋白(PRP)、PTK787/ZK222584、重組人血小板因子4(rPF4)、Restin、角篁胺、SU5416、SU6668、蘇拉明、紫杉醇、Tecogalan、沙利度胺、血小板反應素、TNP-470、肌鈣蛋白I、Vasostatin、VEG1、VEGF-Trap和ZD6474。所述血管發生抑制劑可以是VEGF拮抗劑。在一些實施方案中，所述VEGF拮抗劑是VEGF結合分子。VEGF結合分子可以是VEGF抗體或其抗原結合片段。在一些實施方案中，所述VEGF拮抗劑是NeXstar。本發明的治療組合物可以經口、舌下、向頰、鼻內、靜脈內、肌內、鞘內、顱內、腹膜內、皮下、皮內、局部、直腸、陰道、滑膜內或玻璃體內給藥。另一方面，本發明包括製造本發明硝基呋喃化合物和硝基呋喃類似物的改進方法。該方法可以更有效和更無害地合成硝基呋喃和硝基呋喃類似物的側鏈，並在"發明詳述"中詳細描述。參考"詳細描述"後，本發明的這些方面和其他方面以及多種優點和效用將是很明顯的。應當理解本發明的各方面均可包括多種實施方案。圖l是硝基呋喃化合物主鏈的結構。圖2A是顯示不同硝呋替莫劑量下成神經細胞瘤細胞的細胞生存力的直方圖。細胞生存力測定在48孔平板中培養SMS-KCN、SMS-KCNR和IMR-32細胞(50,000個細胞/孔)，並用1pg/ml、10ng/ml或20jig/ml硝呋替莫處理120個小時。如"材料和方法"中所述使用MTS測定法測定細胞生存力，並表述為以運栽體處理的對照的百分比。數據表示為四個重複的均值士SD。圖2B是顯示不同的硝呋替莫劑量下BrdU摻入的直方圖。細胞增殖測定在48孔平板中培養SMS-KCNR細胞並用0、1.0、5.0、10和20fig/ml硝呋替莫處理48小時。如實施例中所述通過BrdU摻入測定法來測定DNA合成。結果表述為未處理對照的百分比和六個重複的平均值(iSD)。圖3A是顯示硝呋替莫對成神經細胞瘤細胞的影響的一組直方圖。用0、1.0、10和20ng/ml硝呔替莫將SMS-KCNR細胞的亞匯合培養物處理96小時。如"材料和方法"中所述使用光學顯微鏡在IOO倍放大率下對細胞照相。使用經運載體處理的細胞作為對照。圖i:運載體對照；ii:1pg/ml、iii:10fig/ml和iv:20ftg/ml硝吹替莫。圖3B是顯示硝呋替莫引起成神經細胞瘤細胞的凋亡性細胞死亡的一組圖片。培養SMS-KCNR細胞並與0、1.0、10和20ng/ml硝呔替莫孵育96小時，如實施例中所述進行TUNEL測定，照相併加工。放大率=100倍。i到iv是疊加的凋亡染色和核染色的代表性圖片。由SMS-KCNR細胞中DNA斷裂造成的TUNEL陽性核表明，硝吹替莫處理引起了凋亡性細胞死亡的發生，(i):運載體對照，(ii):1fig/ml，(iii):10Hg/ml和(iv):20fig/ml。凋亡性核的數目隨著硝呋替莫劑量的提高而增加。9圖4A是顯示硝吹替莫對成神經細胞瘤細胞中胱天蛋白酶-3活化的影響的槽圖。培養SMS-KCNR細胞並用濃度遞增的硝呋替莫孵育96小時。裂解細胞、在12%SDSPAGE上分離、印跡至PVDF膜上並用對活化的胱天蛋白酶-3具有特異性的抗體探測，如實施例所述。清洗印跡並用肌動蛋白抗體作為上樣對照進行再探測。上圖-活化的胱天蛋白酶-3，下圖-肌動蛋白。圖4B是顯示不存在或存在Z-VAD-FMK時硝呋替莫對成神經細胞瘤細胞生存力的影響的直方圖。用pancaspase抑制劑Z-VAD-FMK預處理SMS-KCNR細胞。用50jiMZ-VAD-FMK將SMS-KCNR細胞預處理90分鐘，之後用硝吹替莫(IOjig/ml)處理96小時。通過MTS測定法測量細胞生存力。如下測定pancaspase抑制劑對細胞毒性的反轉比較存在或不存在pancaspase抑制劑時經硝呋替莫處理的細胞的生存力。數值為四個重複的均值士SD。圖5是顯示硝呋替莫對Akt磷醯化的影響的Western印跡圖。(A):將SMS-KCNR細胞去血清處理18小時，用0、1.0、10和20ng/ml硝呋替莫處理90分鐘，然後用BDNF(100fig/ml)刺激10分鐘。敘解細胞並使用磷酸-Akt抗體通過Western印跡進行分析(上圖)。清洗印跡並用對總Akt蛋白質特異的抗體再探測(下圖)。(B):在存在血清時用硝呋替莫將SMS-KCNR細胞處理卯分鐘。然後裂解細胞並使用抗體通過Western印跡進行分析。圖6是一組圖片，其顯示生長因子刺激的主動脈環測定法中硝呋替莫對微血管萌發的血管發生抑制。(A)運載體處理的主動脈，無生長因子；(B)運栽體處理的主動脈，有生長因子。(C)、(D)、(E)表示存在生長因子時l、10和20ug/ml濃度的硝呋替莫處理。圖7是直方圖，其顯示硝呋替莫以劑量依賴性方式抑制人主動脈內皮細胞增殖，這通過DNA合成中溴代脫氧尿普(BrDu)摻入的減少來反映。圖8(A-C)是顯示硝呋替莫以劑量依賴性方式抑制管形成(tubeformation)(血管發生過程中的關鍵步驟)的一組圖。(A)經運載體處理的內皮細胞，無生長因子，(B)經運栽體處理的內皮細胞，有生長因子。10(C)表示存在生長因子時20ug/ml濃度硝呋替莫處理的圖片和定量圖。(D)是顯示硝呋替莫對融合形成測定法(fuseformationsassay)的影響的定量分析。圖9是顯示與丁硫氨酸亞碸胺(BSO)組合的硝呋替莫對成神經細胞瘤細胞生存力的影響的直方圖。過夜培養SMSKCNR細胞，然後用與1、50或100fiMBSO組合的0、l或10ng/ml硝吹替莫處理48小時。用CalceinAM測定法測量細胞生存力。圖10是顯示與抗壞血酸或BSO任一組合的硝呋替莫對成神經細胞瘤細胞生存力的影響的直方圖。過夜培養SY5Y細胞，然後用10[ig/ml硝吹替莫(N)、0.3mM抗壞血酸(A)或50jiMBSO(B)單獨或組合(NB,NA,NBA)處理24小時。用CalceinAM測定法測量細胞生存力。結果表述為運栽體對照的百分比。圖ll是直方圖，其顯示硝呋替莫處理對實施例12中所述成神經細胞瘤異種移植小鼠的影響。圖12是展示如實施例16中詳述的本發明硝基呋喃化合物的合成方案的示意圖。發明詳述本發明部分基於下述的偶然發現(如實施例13中詳述)4-[5-硝基亞糠基氨基]-3-甲基硫代嗎啉l,l-二氧化物(也被稱作其非專有名稱"硝呋替莫")的施用減小腫瘤大小、抑制成神經細胞瘤細胞的增殖並抑制血管發生。因此，本發明在一些方面包括對患有癌症的受試者施用藥物形式的硝基呋喃化合物，以治療該受試者的癌症。本發明在一些方面還包括對受試者施用硝基呋喃化合物，以抑制該受試者中的血管發生。所述硝基呋喃化合物以有效且在生理上可接受的量施用，以治療受試者的癌症。儘管不希望受任何具體理論的束綽，但是我們相信硝呋替莫具體是通過產生自由基來發揮其細胞毒效應。硝呋替莫是一種硝基雜環化合物；其硝基可以在無細胞體系中通過與細胞色素P-450還原酶、黃嘌呤氧化酶、抗壞血酸和兒茶酚胺類反應而還原為硝基陰離子基團。然後硝基陰離子能將氧還原為超氧陰離子基團和過氧化氫。在查加斯病中，硝基陰離子自由基和氧自由基已經顯示對寄生蟲克氏錐蟲(t:CW^i')具ii有細胞毒性。硝基的還原不僅產生陰離子基團，而且與兒茶酚胺3的相互作用似乎也產生半醌自由基，該自由基加重了對在功能上具有重要性的生物分子的損傷，導致成神經細胞瘤細胞系的凋亡。已知成神經細胞瘤細胞含有高水平的兒茶酚胺，從而可能導致相對特異性地靶向這些細胞。成神經細胞瘤細胞系中與兒茶酚胺的反應通過用AMPT預處理使細胞毒性降低來證實，AMPT是減少細胞中儲存的兒茶酚胺總量的酪氨酸羥化酶抑制劑。另外，交感神經元(而非副交感神經元或非神經元細胞)對硝呋替莫增強的敏感性支持了該結論。術語"治療，，包括改善、治癒或維持(即防止復發)病症。患病後治療的目的在於減少、改善或完全消除病症和/或其相關的症狀、預防其惡化或者當病症初被消除時預防其再次發生(即防止復發)。受試者是指哺乳動物物種，包括但不限於犬、貓、馬、牛、豬、綿羊、山羊、雞、齧齒動物或靈長類。受試者可以是室內寵物(例如犬、貓)、農業家畜(agriculturalstockanimal)(例如牛、馬、豬、雞等)、實驗動物(例如小鼠、大鼠、兔等)、動物園動物(例如獅子、長頸鹿等)，但不僅限於此。優選的受試者是人受試者。人受試者可以是兒童、成人或老年受試者。本文使用的術語"硝基呋喃"和"硝基呋喃化合物"可互換使用，並包括具有側鏈的呋喃，所述側鏈含有一個或多個氮原子。如本領域所公知的，呋喃是由四個碳原子和一個氧原子組成的不飽和芳香雜環化合物。參閱Ege,OrganicChemistry,第三版,D.C.Heath&Co.,Lexington,MA(1994)。硝基呋喃的實例包括但不僅限於硝呋替莫、呋響唑酮和硝吹太爾。參閱RaetherW,HanelH.NitroheterocyclicDrugswithBroadSpectrumAcitivity,ParasitRes2003;卯:S19-S39;Albrecht等，J.Med.Chem.13(4):736(1970);Albrecht等，Arzneimittel-Forsch叫g(DrugRes.)21(1):127-31(1971);Pozas等,Bioorganic&MedicinalChemistryLetters15:1417-21(2005)。"4匕合體內產生的硝基呋喃化合物。、、、本文使用的"癌症，，是指影響身體器官和系統的正常功能的不受控制的細胞生長。從其原始部位遷移出來並在至關重要的器官中紮根的癌細胞能夠通過該患病器官的功能衰退而最終導致受試者死亡。癌細胞是由於失去正常的生長控制而異常裂解和增殖的細胞。癌細胞幾乎總是來自於至少一個遺傳突變。在一些情況下，有可能根據所表達基因和蛋白質的譜及其表達水平來區分癌細胞與其對應的正常細胞。在癌細胞中通常受到影響的基因包括癌基因如ras、neu/HER2/erbB、myb、myc和abl，以及腫瘤抑制基因如p53、Rb、DCC、RET和WT。這些i因中一些基因內的癌症相關突變導致其表達降低或完全缺失。在其他情況下，突變引起表達提高或者正常對應物的活化變體的表達。術語"肺瘤"通常等同於贅生物，在字面上表示"新的生長"，並可與"癌症"互換使用。"腫瘤性病症"是與細胞增殖、特別是與贅生物相關的任何病症。"贅生物"是在撤除啟動贅生物出現的致癌因子後繼續存在和增殖的異常組織塊。存在兩種類型的贅生物，良性的和惡性的。幾乎所有的良性胂瘤都是被包裹的並且是非侵襲性的；相反，惡性肺瘤幾乎都不是被包袞的，而是通過浸潤性的破壞性生長來侵入相鄰組織。這種浸潤性生長之後可以是腫瘤細胞植入與原始腫瘤不連續的部位。轉移是與原發性腫瘤位點不同的癌細胞區域，由來自原發性腫瘤的癌細胞擴散至身體的其他部分而引起。在診斷原發性肺瘤塊時，可監測受試者中轉移的存在情況。除監測特定的症狀外，通常通過單獨或組合使用磁共振成像(MRI)掃描、計算機斷層攝影術(CT)掃描、血和血小板計數、肝功能研究、胸部X射線和骨掃描來檢測轉移灶。本發明的方法可用於在受試者中治療癌症。在一些實施方案中，所述癌症是中樞神經系統(CNS)癌症。一些重要的CNS癌症包括但不限於成神經細胞瘤、成髄細胞瘤、周圍惡性神經鞘瘤、室管膜瘤、顱咽管瘤、星形細胞瘤、腦脊膜瘤、生殖細胞瘤、膠質瘤、混合性膠質瘤、脈絡叢瘤、少突膠質瘤、周圍神經外胚層瘤、原始神經外胚層瘤(PNET)、CNS淋巴瘤、垂體腺瘤和施萬鞘瘤。在一些實施方案中，所述星形細胞瘤為I級、II級、III級或IV級。星形細胞瘤可以是低級的或高級的。星形細胞瘤可以是青少年纖維星形細胞瘤、室管膜下巨細胞性星形細胞瘤、多形性黃色星形細胞瘤、間變型星形細胞瘤或大腦膠質瘤病。在一些實施方案中，所述少突膠質瘤為混合性膠質瘤(少星形細胞瘤)或間變型13少突膠質瘤。在一個優選的實施方案中，所述癌症為成神經細胞瘤。可以通過本發明的方法治療的其他癌症包括但不僅限於基底細胞癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、腦癌和CNS癌、乳腺癌、子宮頸癌、絨毛膜癌、結腸和直腸癌、結締組織癌、消化系統癌、子宮內膜癌、食管癌、眼癌、纖維瘤、頭與頸癌、胃癌、上皮內贅生物、腎癌、喉癌、白血病(包括急性髓細胞樣白血病、急性淋巴樣白血病、慢性髓細胞樣白血病、慢性淋巴樣白血病)、肝癌、肺癌(例如小細胞和非小細胞的)、淋巴瘤(包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤)、黑色素瘤、口腔癌(例如唇、舌、口和咽癌)、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、直腸癌、腎癌、呼吸系統癌、肉瘤、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、曱狀腺癌、子宮癌、泌尿系統癌以及其他癌瘤(carcinoma)和肉瘤。癌瘤是上皮起源的癌症。旨在用本發明的方法治療的癌瘤包括但不限於腺泡癌、腺泡狀癌、腺泡狀腺癌(也稱作嚢性腺樣癌、腺肌上皮瘤、篩狀癌和圓柱瘤)、腺癌(carcinomaadenomatosum)、腺癌(adenocarcinoma)、腎上腺皮質癌、蜂窩狀癌、肺泡細胞癌(也稱作細支氣管癌、肺泡細胞瘤和肺腺瘤病)、基底細胞癌(basalcellcarcinoma)、基底細胞癌(carcinomabasocellulare)(也稱作basaloma或者basiloma和毛母質癌(hairmatrixcarcinoma))、基底細胞樣癌(basaloidcarcinoma)、基底鱗狀細胞癌(basosquamouscellcarcinoma)、乳腺癌、細支氣管肺泡癌、細支氣管癌、支氣管癌、髓樣癌、膽管細胞癌(也稱作膽管瘤和膽管癌)、絨毛膜癌、膠樣癌、粉刺狀癌、子宮體癌、篩狀癌、胸廊癌、carcinomacutaneum、柱狀癌(cylindricalcarcinoma)、柱狀細胞癌(cylindricalcellcarcinoma)、導管癌、硬癌、胚胎性癌、髓樣癌、眼球上癌、表皮樣癌、腺樣上皮細胞癌、carcinomaexulcere、纖維癌、股樣癌(gelatiniformcarcinoma)、膠樣癌(gelatinouscarcinoma)、巨細胞癌(giantcellcarcinoma)、巨細胞癌(gigantocellulare)、腺癌、粒層細胞癌、毛母質癌、多血癌、肝細胞癌(也稱作肝瘤、惡性肝瘤和肝癌)、Hurthle細胞癌、玻璃樣癌(hyalinecarcinoma)、腎上腺樣癌、幼稚型胚胎性癌(infantileembryonalcarcinoma)、原位癌、表皮內癌、上皮內癌、Krompecher，s癌、庫爾切茨基細胞癌、豆狀癌(lenticularcarcinoma)、旦4^L癌(carcinomalenticulare)、脂瘤樣癌、'淋巴上皮癌、乳腺炎性癌(carcinomamastitoides)、黑色素癌(carcinomamedullare)、黑色素癌(medullarycarcinoma)、黑色素癌(carcinomamelanodes)、黑色素癌(melanoticcarcinoma)、粘液癌(mucinouscarcinoma)、粘液癌(carcinomamuciparum)、粘液細胞癌、粘液表皮樣癌、粘液癌(carcinomamucosum)、粘液癌(mucouscarcinoma)、粘液瘤樣癌、鼻咽癌、惡性黑色素瘤、燕麥細胞癌、骨化性癌(carcinomaossificans)、骨化性癌(osteoidcarcinoma)、卵巢癌、乳頭狀癌、門脈周癌、原位癌、前列腺癌、腎細胞癌(也稱作腎腺癌和腎上腺樣癌)、reservecellcarcinoma、肉瘤樣癌、施奈德癌(scheinderiancarcinoma)、硬癌、陰嚢癌、印戒細胞癌、單純癌、小細胞癌、硬癌、球狀細胞癌、梭形細胞癌、髓樣癌、鱗癌、鱗狀細胞癌、繩捆癌、血管擴張性癌(carcinomatelangiectaticum)、血管擴張性癌(carcinomatelangiectodes)、移行細胞癌、結節性皮癌(carcinomatuberosum)、結節性皮癌(tuberouscarcinoma)、疾狀癌、絨毛狀癌。肉瘤是來自於骨和軟組織的罕見的間質腫瘤。識別了不同類型的肉瘤，其包括脂肪肉瘤(包括粘液樣脂肉瘤和多形型脂肪肉瘤)、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、惡性外周神經鞘瘤(也稱作惡性神經鞘瘤、神經纖維肉瘤或神經原性肉瘤)、尤因瘤(包括骨尤因肉瘤、骨外(即非骨)尤因肉瘤和原發性神經外胚層瘤[PNET)、滑膜肉瘤、血管肉瘤(angiosarcomas)、血管肉瘤(hemangiosarcomas)、'淋巴管肉瘤、卡波西肉瘤、血管內皮瘤、纖維肉瘤、硬纖維瘤(也稱作侵襲性纖維瘤病)、隆凸性皮膚纖維肉瘤(DFSP)、隆凸性皮膚纖維肉瘤(MFH)、血管外皮細胞瘤、惡性間葉瘤、腺泡狀軟組織肉瘤、上皮樣肉瘤、明細胞肉瘤、促結締組織增生性小細胞瘤(desmoplasticsmallcelltumor)、胃腸道間質瘤(GIST)(也稱為GI間質肉瘤)、骨肉瘤(也稱作骨和骨外的成骨肉瘤以及軟骨肉瘤。待治療的癌症可以是難治性癌症(refractorycancer)。本文使用的難治性癌症是對處方中護理的常規標準有抗性的癌症。這些癌症可能最初看來對治療有反應，隨後復發，或者它們可以對治療完全沒有反應。因此，根據本發明對難治性癌症進行治療的受試者可能已經進行了針對其癌症的其他治療。或者，如果癌症很可能是難治性的(例如考慮到癌細胞的分析或受試者的病史)，則受試者可能尚未進行其他治療。難治性癌症的實例包括但不限於白血病、黑色素瘤、腎細胞癌、結腸癌、肝癌、胰腺癌、非霍奇金淋巴癌和肺癌。本發明還可用於治療免疫原性的癌症。免疫原性的癌症是已知(或很可能)在其表面上或在細胞死亡時表達免疫原的癌症。這些免疫原是癌症抗原的體內內生性來源，它們的釋放可以通過本發明的方法加以利用來治療癌症。免疫原性癌症的實例包括惡性黑色素瘤和腎細胞癌。套細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、T細胞急性成淋巴細胞性白血病、伯基特淋巴瘤、骨髓瘤、免疫細胞瘤、急性早幼粒細胞性白血病、慢性髄樣/急性成淋巴細胞性白血病、急性非白血性白血病、B細胞急性成淋巴細胞性白血病、間變性大細胞-淋巴瘤、骨髓增生異常症候群/急性髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、急性成淋巴細胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、常見(前B細胞)急性淋巴細胞性白血病、惡性黑色素瘤、T細胞淋巴瘤、白血病、B細胞淋巴瘤、上皮惡性腫瘤(epithelialmalignancy)、淋巴樣惡性腫瘤(lymphoidmalignancy)、婦科癌症、膽腺癌(biliaryadenocarcinoma)和胰腺導管腺癌。本發明在一些方面中涉及抑制受試者中血管發生的方法。血管發生是內皮細胞的異常快速增殖，其導致異常新血管(微血管)的形成持續且不減退。持續數月或數年的血管發生能夠支持癌症的生長和發展，並可導致對多種器官和組織(例如眼、皮膚、心、血管、肺、胃腸道和生殖泌尿道)的損傷。本發明的方法包括以有效抑制血管發生的量對受試者施用硝基呋喃化合物。所述硝基呋喃化合物以抑制受試者中血管發生的有效量施用。優選地，該化合物為硝呋替莫，該受試者為人受試者。本文使用的術語"抑制血管發生"是指減少異常微血管的數目或密度。異常微血管數目的減少是指減少現有異常微血管的數目或減少新微血管的產生。本文使用的"減少"包括總體的消除或根除，以及不導致總體根除的其他減少.可以通過多種方法或技術來評估血管發生。臨床情況下最廣泛使用的方法依賴於活檢(切口或針刺)或標本中血管(微血管)的組織化學或免疫組織化學染色。可以檢查的血管發生特徵包括例如血管密度和/或形態和/或血管周圍套(perivascularcuff)的厚度。定量組織活檢或標本中的微血管區域密度。例如，高微血管密度區域("熱點")可能含有最多的肺瘤細胞和/或具有最高的轉移可能性。測定微血管密度的一種技術是測量毛細管間距離。評估血管發生的另一種方法是測量血管周圍套的厚度。血管周圍套厚度的增加與血管發生的發展相關，並可指示疾病的惡化。也可以通過測量血管發生(血管原性)因子的血、血清、血漿或組織水平來評估血管發生。血管原性因子水平可充當血管發生的代用標記物。可以作為血管發生代用標記物的血管原性因子的實例包括但不僅限於血管生成素、血管生成素-l，Del-l、酸性成纖維細胞生長因子(aFGF)和鹼性成纖維細胞生長因子(bFGF)、卵泡抑素、粒細胞集落刺激因子(G-CSF)、肝細胞生長因子(HGF)/散射因子(scatterfactor,SF)、白介素-8(IL-8)、瘦素、中期因子、胎盤生長因子、血小板來源的內皮細胞生長因子(PD-ECGF)、血小板來源的生長因子-BB(PDGF-BB)、多效營養因子(PTN)、前顆粒蛋白(Progranulin)、增殖蛋白、轉化生長因子-a(TGF-a)/轉化生長因子-p(TGF-p)、肺瘤壞死因子-a(TNF-a)、血管內皮生長因子(VEGF)/血管通透性因子(VPF)。成像技術也可用於評估血管發生。合適的成像技術或設備包括非侵入性設備，如CT、旋轉式CT、顯微-CT、多能計算機斷層攝影術(multipleenergycomputedtomography,MECT)、單檢測器CT(SDCT)、多檢測器CT(MDCT)、容積CT(VCT)、MRI、顯微-MR、X光、旋轉式X光、PET、近紅外線/可見光以及可在受試者體外使用或非侵入性地插入體腔的其他非侵入性掃描技術和設備。還可以通過CT血管造影術(CTA)、斷層攝影合成(tomosynthesis),X光微血管造影術和其他技術對血管發生進行成像。一種血管發生成像技術涉及使用與超聲和對比增強成像模式(contrastspecificimagingmodality)糹且合的基於微氣泡的造影劑(SonoVue)，以檢測腫瘤微血管灌流液的灌流改變。其他血管發生成像技術包括彩色都卜勒和乳房造影術(mammography)。彩色都卜勒成像可揭示腫瘤如乳腺癌中的血管發生。乳房造影術可揭示乳腺腫瘤的血管化邊緣。可以通過染料增強多種成像或放射學體徵。受試者中的血管發生還可以通過包括向感興趣的身體區域中引入至少一種造影劑的方法來評估。例如，可以向血管中注射用於檢測血管17的造影劑。可以局部引入少量造影劑，以增強在感興趣的特定身體區域中的血管檢測。或者，造影劑可以以足以在更大的身體區域或整個受試者身體中增強血管檢測的量提供。可以獲得針對受試者身體的結構數據，或可獲得針對一個或多個靶器官(例如肺、心、乳腺、結腸等)、器官部分或受試者身體的另一靶區的結構數據。靶區可以是受試者身體的任何部分，例如四肢、腹、軀幹、頸、頭，或者其任何部分。可為了本發明的目的也可使用本文中未描述的其他方法或技術來評估血管發生。評估血管發生的方法和技術是本領域普通技術人員已知的。硝基呋喃可以與其他療法(例如放射療法、手術、常規化學療法)組合施用，或與一種或多種其他療法的組合一起組合施用。硝基呋喃可以在藥物組合物中單獨施用，或與治療有效且生理可接受的量的一種或多種其他活性成分或藥劑一起組合施用。這樣的其他活性成分包括但不僅限於穀胱甘肽拮抗劑、血管發生抑制劑、化學治療劑和抗體(例如癌症抗體)。硝基呋喃化合物和其他活性成分或藥劑可以同時施用或依次施用。當硝基呋喃化合物與其他活性劑同時施用或與其他活性成分組合施用時，該硝基呋喃化合物和其他活性成分可以在相同或分開的配方中施用，但是同時施用。當所述其他活性劑和硝基呋喃的施用在時間上分開時，所述其他活性劑可以彼此依次施用並與硝基呋喃化合物依次施用。各施用之間的時間間隔可以是大概數分鐘、數小時、數天，或可以更長。穀胱甘肽拮抗劑的實例包括但不僅限於丁硫氨酸亞碸胺、環磷醯胺、異環磷醯胺(ifosphamide)、放線菌素D和N-(4-羥苯基)維甲醯胺(4國HPR)。血管發生抑制劑的實例包括但不僅限於2-甲氧雌二醇(2-ME)、AG3340、制管張素、抗凝血酶III、抗VEGF抗體、圖巴馬司他、貝伐單抗(阿瓦斯汀)、BMS-275291、CAI、Canstatin、卡託普利、軟骨源抑制因子(CDI)、CC-5013、塞來昔布(CELEBREX⑧)、COL-3、考布他汀、考布他汀A4砩酸鹽、達肝素(FRAGIN⑧)、EMD121974(西侖吉肽)、恩多斯塔汀、埃羅替尼(TARCEVA⑧)、吉非替尼(易瑞沙)、金雀異黃素、氫溴酸卣夫酮(TEMPOSTATINTM)、Idl、Id3、IM862、甲磺酸伊馬替尼、誘導蛋白10、幹擾素P、白細胞介素12、燻草菌素A、LY317615orAE-941(NEOVASTATTM)、馬立馬司他、乳腺絲抑蛋白、乙酸曱鞋孕酮、Meth-l、Meth-2、新伐司他、骨橋蛋白分離產品、PEX、色素上皮增長因子(PEGF)、血小板因子4、催乳素片段、增殖素蛋白(PRP)、PTK787/ZK222584、重組人類血小板因子4(rPF4)、休眠蛋白、角篁胺、SU5416、SU6668、蘇拉明、紫杉醇、Tecogalan、沙利度胺、血小板反應蛋白、TNP-470、肌鉀蛋白I、血管形成抑制素、VEG1、VEGF-Trap和ZD6474。在一些實施方案中，所述血管發生抑制劑是VEGF拮抗劑。VEGF拮抗劑可以是VEGF結合分子。VEGF結合分子包括VEGF抗體或其抗原結合片段。VEGF拮抗劑的一個實例是NeXstar。可以用作額外的活性成分的化學治療劑類別的實例包括但不僅限於DNA損傷劑，其包括拓樸異構酶抑制劑(例如依託泊戒、ramptothecin、拓樸替康、替尼泊苷、米託蒽醌)、抗微管物質(例如聞克斯丁、文拉亭)、抗代謝製劑(例如阿糖胞苷、甲氨碟呤、羥基脲、5-ftJl嘧啶、氟尿苷、6-硫鳥嘌呤、6-巰基嘌呤、氟ii4i濱、噴司他丁、氯脫氧腺苷)、DNA烷化劑(例如順鉑、鹽酸氮芥、環磷醯胺、異環磷跣胺、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安、噢替哌、卡莫司汀、洛莫司汀、卡鉑、氮烯唑胺、甲基苄肼)和DNA鏈斷裂誘導劑(例如博來黴素、阿黴素、柔紅黴素、去甲氡基柔紅黴素、絲裂黴素C)。化學治療劑包括合成的、半合成的和天然來源的藥劑。重要的化學治療劑包括但不僅限於阿西維辛、阿柔比星、阿考達哇、阿克羅寧、阿多來新、阿黴素、阿地白介素、阿維A皿囊、別嘌醇鈉、六曱蜜胺、安波黴素、阿美蒽醌、氨魯米特、胺苯丫啶、阿那曲唑、AimonaceousAcetogenin、安麴黴素、巴婆(雙吹)內酯、門冬醯胺酶、曲林菌素、阿扎胞普、阿扎替派、阿佐黴素、巴馬司他、苯佐替派、貝沙羅汀、比卡魯胺、鹽酸比卡魯胺、雙奈法德二去鐵胺、比折來新、硫酸博來黴素、布會那鈉、溴匹立明、Bullatacin、白消安、卡麥角林、放線菌素C、卡普睪酮、卡醋胺、卡貝替姆、卡鉑、卡莫司汀、鹽酸卡柔比星、卡折來新、西地芬戈、塞來考昔、苯丁酸氮芥、西羅黴素、順鉑、克拉屈濱、克立那託去鐵胺、環磷醯胺、阿糖胞苷、達卡巴嗓、DACA(N-P-(二甲基-氨基)乙基吖咬鬥羧醯胺)、更生黴素、鹽酸柔紅黴素、柔紅黴素、地西他濱、地尼白介素、右奧馬鉑、地扎胍寧、地扎胍寧去鐵胺、地吖醌、多西紫杉醇、多柔比星、鹽酸多柔比星、屈洛昔芬、杵檬酸屈洛昔芬、丙酸屈他雄酮、達佐黴素、依達曲沙、鹽酸依氟鳥氨酸、依沙聲星、恩洛柏、恩普氨酯、依匹腺咬、鹽^柔比星、厄布洛唑、鹽酸依索比星、雌莫司汀、雌氮M酸鈉、依他硝唑、乙碘油I131、依託泊普、磷酸依託泊苷、氯苯乙嘧胺、鹽酸法羅唑啉、法扎拉濱、芬維A胺、氟脲嘧g氧核苷、磷酸氟達拉濱、氟尿嘧啶、5-FdUMP、氟西他濱、磷喹酮、福司曲星鈉、FK-317、FK-973、FR-66979、FR-900482、吉西他濱、鹽酸吉西他濱、吉姆單抗奧佐米星、GoldAu198、乙酸戈舍瑞林、胍那決爾、羥基脲、鹽酸伊達比星、異環磷醯胺、伊莫福新、幹擾素oc-2a、幹擾素cx-2b、幹擾素cx-nl、幹擾素oc-n3、幹擾素P-la、幹擾素Y-lb、異丙鉑、鹽酸伊立替康、醋酸蘭瑞肽、來曲唑、醋酸亮丙瑞林、鹽酸利阿唑、洛美曲索鈉、洛莫司汀、鹽酸洛索蒽醌、馬索羅酚、Maytansine、鹽酸氮芥、醋酸甲地孕酮、醋酸美侖孕酮、美法侖、美諾立爾、巰嘌呤、氨曱喋呤、氨曱蝶呤鈉、甲氧沙林、氯n咬、美妥替哌、米丁度胺、Mitocarcin、絲裂紅素、米託潔林、米託馬星、絲裂黴素、絲裂黴素C、米託司培、米託坦、鹽酸米託蒽醒、麥考酚酸、諾考達唑、諾拉黴素、奧普瑞白介素、奧馬鉑、奧昔舒侖、紫杉醇、氨羥二磷酸二鈉、培門冬酶、培利黴素、戊氮芥、硫酸培普利歐黴素、培磷醯胺、哌泊溴烷、哌泊舒凡、鹽酸吡羅蒽醌、普卡黴素、普洛美坦、卟#鈉、泊非黴素、潑尼莫司汀、鹽酸丙卡巴肼、嘌羅黴素、鹽酸嘌呤黴素、Pyrazofurin、利波腺普、利妥昔單抗、羅谷亞胺、Rolliniastatin、沙芬戈、鹽酸沙芬戈、釤/來昔決南、司莫司汀、辛曲秦、磷乙醯天冬氨酸鈉、司帕黴素、鹽酸螺旋鍺、螺莫司汀、螺鉑、Squamocin、Squainotacin、鏈黑菌素、鏈佐星、氯化鍶Sr89、磺氯苯脲、他利黴素、紫杉烷、Taxoid、替可加蘭鈉、替加氟、鹽酸替洛蒽醌、替莫泊芬、替尼泊苷、替羅昔隆、睪內酪、硫咪噪呤、疏鳥噪呤、塞替派、Thymitaq、漆哇咬林、替糾L明、雷替曲塞、TOP-53、鹽酸拓樸替康、檸檬酸託瑞米芬、曲妥珠單抗、醋酸曲託龍、磷酸曲西立濱、三曱曲沙、葡萄糖眵酸三甲曲沙、曲普瑞林、鹽酸妥布氯唑、尿嘧啶氮芥、烏瑞替派、戊柔比星、伐普肽、維替泊芬、"^*鹼、硫酸W鹼、長春新鹼、硫酸M新鹼、M地辛、硫酸長春地辛、硫酸長春匹定、硫酸長春甘酯、硫酸長春羅新、酒石酸長春瑞濱、疏酸異長*^、硫酸^利定、伏氯唑、折尼鉑、淨司他丁、鹽酸佐柔比星、2-氯脫氧腺苷、2，-脫氧間型黴素、9-氨基喜樹鹼、雷替曲塞、N-炔丙基-5,8-二去氮雜葉酸、2-氯-2'-阿糖-氟-2'-脫氧腺苷、2-氯-2'-脫氧腺普、茴香黴素、曲古抑菌素A、hPRL國G129R、CEP畫751、利諾胺、硫芥、氮芥(雙氯乙基甲胺)、雙氯乙基甲胺、美法侖、苯丁酸氮芥、20異環磷醯胺、白消安、N國甲基-N畫亞硝基脲(MNU)、N、N'-雙(2國氯乙基)國N國亞硝基脲(BCNU)、N-(2-氯乙基)-N'-環己基-N-亞硝基脲(CCNU)、N-(2-氯乙基)-N'-(反式-4-甲基環己基-N-亞硝基脲(MeCCNU)、N-(2-氯乙基)-N，-(二甲基)磷酸乙酯-N-亞硝基脲(福莫司汀)、鏈唑黴素、達卡巴嗪(DTIC)、米託哇胺、替莫唑胺、替莫唑胺、絲裂黴素C、AZQ、阿多來新、順鉑、卡柏、奧馬柏、奧沙利柏、C1-973、DWA2114RJM216、JM335、二鉑、雷替曲塞、阿扎胞苷、阿糖胞苷、吉西他濱、6-巰噪呤、6-硫鳥噤呤、次黃嘌呤、替尼泊苷、9-M喜樹鹼、喜樹鹼、CPT-ll、多柔比星、多柔比星、表柔比星、依達比星、米託蒽醌、洛索蒽醌、更生黴素(更生黴素D)、安吖啶、吡唑啉吖啶、全反式視黃醇14-羥基-反式視黃醇、全反式維甲酸、N-(4-羥苯基)維胺酯、13-順式維甲酸、3-曱基TTNEB、9-順式維甲酸、氟達拉濱(2-F-阿糖-AMP)和2-氯脫氧腺苷(2-Cda)。其他化學治療劑包括20-表-1，25二羥維生素D3、5-乙炔基尿嘧啶、阿比特龍、阿柔比星、acylfulvene、adecypenol、阿多來新、阿地白介素、ALL-TK拮抗劑、六甲蜜胺、氨莫司汀、amidox、氨褲汀、#^乙醯丙酸、氨柔比星、安吖啶、阿那格雷、阿那曲唑、穿心蓮內酯、血管生成抑制劑、拮抗劑D、拮抗劑G、antarelix、抗dorsalizingmorphogeneticprotein-l、抗雄激素、前列腺癌、抗雌激素、antineoplaston、反義寡核苷酸、aphidicolinglycinate、凋亡基因調節劑、凋亡調節劑、脫噪呤核酸、ara-CDP-DL-PTBA、精氨酸脫氨酶、asulacrine、阿他美坦、阿莫司'汀、axinastatin1、axinastatin2、axinastatin3、阿扎司瓊、阿扎毒素、重氮酪氨酸、漿果赤黴素HI衍生物、balano1、巴馬司他、BCR/ABL拮抗劑、苯佐利定、benzoylstaurosporine、P內醯胺衍生物、P-alethine、betaclamycinB、betulinicacid、bFGF抑制劑、比卡魯胺、t匕生群、bisaziridinylspermine、艱奈'法德、bistrateneA、》匕折來新、breflate、博來黴素A2、博來黴素B2、溴匹立明、布度鈥、buthioninesulfoximine、卡泊三醇、calphostinC、喜樹>^衍生物(例如10-羥基國喜樹鹼)、金絲雀痘IL-2;卡培他濱、氨甲醯-氨基三唑、carboxyamidotriazole、CaRestM3、CARN700、軟骨來源的抑制劑、卡折來新、酪蛋白激酶抑制劑(ICOS)、castanospermine、殺菌肽B、西曲瑞克、氯、chloroquinoxalinesulfonamide,西卡前歹'J素、順式p卜啉、克拉屈濱、氯米芬類似物、克黴唑、collismycinA、collismycinB、考布他汀A4、考布他汀類似物、conagenin、crambesddin816、克立那21託、cryptophycin8、cryptophycinA衍生物、curacinA、cyclopentanthraquinones、cycloplatam、cypemycin、cytarabineocfosfate、溶胞因子、cytostatin、達昔單抗、地西他濱、dehydrodidemninB、2'deoxycoformycin(DCF)、地洛瑞林、dexifosfamide、右雷佐生、右維拉帕米、地吖醌、代代寧B、didox、diethylnorspermine、二氳-5畫阿扎胞普、二氫紫杉醇、dioxamycin、聯苯螺莫司汀、discodermolide、二十二醇、多拉司瓊、去氧氟尿苷、屈洛昔芬、屈大麻酚、duocarmycinSA、依布硒、依考莫司汀、依地福新、依決洛單抗、依氟鳥氨酸、欖烯、乙嘧替氟、表柔比星、epothilones(A、R=H、B、R=Me)、epithilones、依立雄胺、雌莫司汀類似物、雌激素激動劑、雌激素拮抗劑、依他硝唑、依託泊苷、依託泊苷4'-磷酸(凡畢復)、依西美坦、法倔唑、法扎拉濱、芬維A胺、非格司亭、非那雄胺、flavopiridol、氟卓斯汀、fluasterone、氟ii4^濱、fluorodaunorunicinhydrochloride、福酚美克、福美坦、福司曲星、福莫司汀、gadoliniumtexaphyrin、賄酸嫁、加^flfc濱、加尼瑞克、明膠酶抑制劑、吉西他濱、穀胱甘肽抑制劑、hepsulfam、heregulin、六亞曱基二乙醯胺、高三尖杉酯鹼(HHT)、金絲桃素、伊班膦酸、伊達比星、艾多昔芬、伊決孟酮、伊莫福新、伊洛馬司他、imidazoacridone、咪會莫特、免疫刺激肽、胰島素樣生長因子-l受體抑制劑、幹擾素激動劑、幹擾素、白介素、碘千胍、碘阿黴素、甘薯苦醇、4-、伊立替康、伊羅普拉、伊索拉定、isobengazole、isohomohalicondrinB、寸尹他司瓊、jasplakinolide、kahalalideF、lamellarin-Ntriacetate、蘭瑞肽、leinamycin、來格司亭、疏酸蘑菇多糖、leptolstatin、來曲唑、非白血性白血病抑制因子、白細胞a幹擾素、亮丙立德+雌激素+孕酮、亮丙瑞林、左旋咪唑、利阿唑、直鏈多胺類似物、親脂二糖肽、親脂鉑化合物、lissoclinamide7、洛柏、胍乙基磷酸絲氨酸、洛美曲索、氯尼達明、洛索蒽醌、^f戈他汀、洛索立賓、勒託替康、lutetiumtexaphyrin、lysofylline、裂解肽、美坦新、mannostatinA、馬立馬司他、馬索羅酚、maspin、matrilysin抑制劑、基質金屬蛋白酶抑制劑、美諾立爾、merbarone、美替瑞林、曱硫氨酸酶、甲氧氯普胺、MIF抑制劑、米非司酮、米替福新、米立司亭、錯配的雙鏈RNA、普卡黴素、米託胍腙、二溴衛矛醇、絲裂黴素類似物、米託萘胺、絲裂毒素(mitotoxin)成纖維細胞生長因子-皂草素、米託蒽醌、莫法羅汀、莫拉司亭、單克隆抗體、人絨毛膜促性腺激素、單磷醯脂質A+分枝桿菌細胞壁sk、單磷醯脂質A、多重抗藥性基因抑制劑、基於多瘤抑制基因-1的療法、芥抗癌劑、mycaperoxideB、分支桿菌細胞壁提取物、myriaporone、N-acetyldinaline、N-取代苯醯胺、那法瑞林、那瑞替噴、納洛酮+噴他佐辛、napavin、naphterpin、那託司亭、奈達鉑、奈莫柔比星、奈立膦酸、中性肽鏈內切酶、尼魯米特、nisamycin、氧化亞氮調節劑、一氧化二氮抗氧化劑、nitmllyn、06-千基鳥嘌呤、奧曲肽、okicenone、寡核普酸、奧那司酮、昂丹司瓊、昂丹司瓊、oracin、口服細胞因子誘導劑、奧馬鉑、奧沙特隆、奧沙利鉑、oxaiinomydn、紫杉醇類似物、紫杉醇衍生物、palauamine、palmitoylrhizoxin、帕米磷酸、人參三醇、中白諾米芬、parabactin、帕折普汀、培門冬酶、培得星、木聚硫鈉、噴司他丁、pentrozole、全氟溴烷、培磷酖胺、perillylalcohol、phenazinomycin、乙酸苯酯、磷酸酶抑制劑、picibanil、鹽酸毛果芸香鹼、吡柔比星、吡曲克辛、placetinA、placetinB、纖溶酶原激活物抑制劑、賴絡合物、鉑化合物、鉑-三胺絡合物、鬼臼毒素、卟#鈉、泊非黴素、丙基雙吖啶酮、前列腺素J2、蛋白酶體抑制劑、基於蛋白A的免疫調節劑、蛋白激酶C抑制劑、蛋白激酶C抑制劑、microalgal、蛋白酪氨酸磷酸酶抑制劑、嘌呤核苷磷酸化酶抑制劑、紅紫素、吡唑啉吖吱、吡噴基化的(pyridoxylated)血紅蛋白聚氧乙烯綴合物、raf拮抗劑、雷替曲塞、雷莫司瓊、ras法呢基蛋白轉移酶抑制劑、ras抑制劑、ras-GAP抑制劑、脫甲基化的瑞替普汀、依替膦酸錸Re186、根黴素、核酶、RII維胺酯、羅谷亞胺、rohitukine、羅莫肽、羅全美克、rubiginoneBl、ruboxyl、沙芬戈、saintopin、SarCNU、sarcophytolA、沙格司亭、Sdi1模擬體、司莫司汀、衰老來源的抑制劑1、有義寡核苷酸、信號轉導抑制劑、信號轉導調節劑、單鏈抗原結合蛋白、西佐喃、索布佐生、硼卡鈉、乙酸苯酯鈉、solverol、生長調節素結合蛋白、索納明、膦門冬酸、spicamycinD、螺莫司汀、splenopentin、spongistatin1、角鯊胺、幹細l&抑制劑、幹細胞分裂抑制劑、stipiamide、間充質溶解素抑制劑、sulfinosine、強效舒血管腸肽拮抗劑、suradista、蘇拉明、苦馬豆鹼、合成的JUJMI、他莫司汀、他莫昔芬甲碘化物、牛磺莫司汀、他扎羅汀、替可加蘭鈉、替加氟、tellurapyrylium、端粒酶抑制劑、替莫泊芬、替莫唑胺、替尼泊苷、tetrachlorodecaoxide、tetrazomine、thaliblastine、沙利度胺、漆可拉林、血小板生成素、血小板生成素模擬體、胸腺法新、胸腺生成素受體激動劑、胸腺曲南、甲狀腺刺激激素、錫本紫紅素乙酯、替4ML明、二氯環戊二烯鈥、託泊替康、topsentin、託瑞米芬、全能幹細胞因子、翻譯抑制劑、維甲酸、triacetyluridine、曲西立濱、三曱曲沙、曲普瑞林、託烷司瓊、妥羅雄脲、酪氨酸激酶抑制劑、tyrphostin、UBC抑制劑、烏苯美司、尿殖竇來源的生長抑制抑制、尿激酶受體拮抗劑、伐普肽、variolinB、載體系統、紅細胞基因療法、維拉雷瑣、藜聲明、verdins、維替泊芬、長春瑞濱、vinxaltine、vitaxin、伏氯唑、扎諾特隆、折尼鉑、亞節維和淨司他丁斯酯。其他化學治療劑包括抗增殖劑(例如異蘇氨酸吡曲克辛)、抗前列腺肥大劑(例如西託糖普)、良性前列腺增生治療劑(例如鹽酸坦索羅辛)、前列腺生長抑制劑(例如噴託普利)以;O:射劑[1251血纖維蛋白原、[氟18FI脫氧葡糖、氟[18F多巴、碘[125I胰島素、碘[131I胰島素、碘[123I碘苄胍、碘[131I膽影酸鈉、碘[131I安替比林、碘[131I膽甾醇、碘[123I馬尿酸鈉、碘[125I馬尿酸鈉、碘[131I馬尿酸鈉、碘[125I碘奧酮、碘[13U碘奧酮，鹽酸碟[123I非他胺、碘[125I雙胺喹、碘[131I雙胺喹、[1251碘酞鈉、[1311碘酞鈉、[1311碘酪氨酸、碘[125I塞羅寧、碘[131I塞羅寧、汞[179Hg丙醇醋酸鹽、汞[203Hg丙醇醋酸鹽、汞[197Hg丙醇、曱M代苯甲酸鳥噪呤(MIBG-131I和MIBG-123I)、硒[75Se蛋氨酸、鎝[99mTc銻三硫化物膠體、鎝[99mTc比西酸、鎝[99mTc地索苯寧、鎝[99mTc羥乙二膦酸、鎝[99mTc依沙美肟、鎝[99mTc呋膦、葡庚糖酸鎝[99mTc，鎝[99mTc利多苯寧、鎝[99mTc甲溴菲寧、99m鎝美羅酸鹽、99m鎝美羅酸鹽二鈉、鎝[99mTc巰替肽、鎝[99mTc羥亞甲基二膦酸鹽、鎝[99mTc二乙三胺五乙酸鹽、鎝[99mTc三胺五乙酸一釣三鈉、99m-鎝曱氧基異丁基異腈、西硼肟鎝[99mTc、鎝[99mTc二巰丁二酸、鎝[99mTc膠體硫、替將鎝[99mTc、替曲膦[99mTc、鎝[99mTcTiatide、碘[1251甲狀腺素、碘[13U甲狀腺素、碘[131I託泊酮、碘[125I]甘油三油酸酯和碘[131I甘油三油酸酯。MIBG-131I和MIBG-123I是用於和本發明的含硝基呋喃的藥物組合物共同施用的特別優選的化學治療劑。化學治療劑的另一類別是抗癌的補充性增效劑，包括三環類抗抑鬱劑(例如丙咪嚷、地昔帕明、amitryptyline、氯丙咪，秦、曲米帕明、多慮平、去甲替林、普羅替林、阿莫沙平和馬普替標)、非三環類抗抑鬱劑(例如舍曲林、曲拉哇酮和西狀普蘭)、Ca^拮抗劑(例如維拉帕米、硝苯地平、尼群地平和卡羅維林)、鈣調蛋白抑制劑(例如普尼拉明、三氟拉溱和氯丙咪噪)、兩性黴素B、曲帕拉醇類似物(例如三苯氧胺)、抗心律失常藥(例如奎納定)、抗高血壓藥物(例如利舍平)、硫醇消耗劑(例如布替諾林和亞碸胺(sulfoximine))和多數藥物抗性還原藥劑例如CremaphorEL.其它化學治療劑包括番篇枝內酯、內酯、rolliniastatin、胍那克林、squamocin、泡番菡枝辛、squamotacin、紫杉烷、紫杉醇、吉西他濱、氨甲喋呤、鍅國900482、FK國973、鍅-66979、FK-317、5-FUFUDR、FdUMP、羥基脲素、多西他賽、discodermolide、大環內酯類抗腫瘤藥、長春新鹼、長春喊、長春瑞濱、meta-pac、依利替康、錫-38、10-OH開普拓、拓樸替康、依託泊苷、阿黴素、黃酮類抗腫瘤藥、順鉑、卡鉑、博來黴素、絲裂黴素C、普卡黴素、卡培他濱、阿糖胞苷、2-Cl-2'脫氧腺苷、氟錄賓-P04、米託蒽醌、米託唑胺、噴司他丁和雷替曲塞.重要的一類化學治療劑是紫杉烷(例如紫杉醇和多西紫杉醇)。與他莫昔芬或芳香酶抑制劑瑞寧得(即阿那曲唑)組合的硝基呋喃化合物尤其適用於乳腺癌和婦科癌症。可用作本發明其它活性成分的抗體實例包括但不僅限於抗CD20mAb(單克隆抗體)、利妥昔單抗、RituxanTM、抗CD20mAb、託西莫單抗Bexxar、抗HER2、曲妥珠單抗、HerceptinTM、抗HER2、MDX-210、抗CA125mAb、oregovomab、B43.13、OvarexTM、Breva-Rex、AR54、GivaRex、ProstaRex、抗EGF受體mAb、IMC-C225、ErbituxTM、抗EGF受體mAb、MDX-447、吉姆單抗奧佐米星、Mylotarg、CMA-676、抗CD33(WyethPharmaceuticals)、抗糹且織因子蛋白(TF)、(Sunol)、ior-c5、c5、抗EGF受體mAb、MDX-447、抗17-1AmAb、依決洛單抗、Panorex、抗CD20mAb(Y-卯labded)、#^莫單抗(10￡^應的配體、II類MHC抗原、氨基磷脂如磷脂醯絲氨酸和磷脂醯乙醇胺(如美國專利No.6,312,694中所述)、VEGFRl(FIt畫l)和VEGFR2(KDR/Flk國l),以及其他腫瘤血管系統相關抗原，如美國專利No.5,776,427中所述的那些。針對內皮糖蛋白的抗體描述於美國專利No.5,660,827中，包括TEC-4和TEC-ll以及識別與這些抗體相同的表位的抗體。針對^J^磷脂的抗體描述於美國專利No.6,312,694中。抑制VEGF的抗體描述於美國專利No.6，342，219中，包括2C3(ATCCPTA1595)。對肺瘤血管系統具有特異性的其他抗體包括與生長因子及其受體的複合體反應的抗體，所述複合體如FGF和FGFR的複合體或TGF卩和TGF卩R的複合體。後一類抗體描述於美國專利No.5,965,132中，包括GV39和GV97。應當理解，本發明所包括的抗體包括在本文中明確提及的這些，也包括與本文所提及的相同表位結合的抗體。例如以下的抗體也可用於本發明，它們均是可購得的細胞凋亡抗體BAX抗體:抗人Bax抗體(單克隆)、抗人Bax抗體(多克隆)、抗鼠Bax抗體(單克隆)、抗鼠Bax抗體(多克隆)；Fas/Fas配體抗體抗人Fas/Fas配體抗體、抗鼠Fas/Fas配體抗體、粒酶抗體、粒酶B抗體；BCL抗體抗細胞色素C抗體、抗人BCL抗體(單克隆)、抗人bcl抗體(多克隆)、抗鼠bcl抗體(單克隆)、抗鼠bcl抗體(多克隆)；雜項凋亡抗體抗TRADD、TRAIL、TRAFF、DR3抗體、抗人Fas/Fas配體抗體、抗鼠Fas/Fas配體抗體；雜項凋亡相關抗體BIM抗體抗人、鼠bim抗體(多克隆)；^A、鼠bim抗體(單克隆)；PARP抗體抗人PARP抗體(單克隆)、抗人PARP抗體(多克隆)、抗鼠PARP抗體；胱天蛋白酶抗體抗人胱天蛋白酶抗體(單克隆)、抗鼠胱天蛋白酶抗體；27抗CD抗體抗CD29、PL18-5PanVera、抗CD29、PL4-3PanVera、抗CD41a、PT25-2PanVera、抗CD42b、PL52畫4PanVera、抗CD42bGUR20-5PanVera、抗CD42b、WGA國3PanVera、抗CD43、1D4PanVera、抗CD46、MCP75-6PanVera、抗CD61、PL11-7PanVera、抗CD61、PL8-5PanVera、抗CD62/P國slctn、PL7國6PanVera、抗CD62/P-slctn、WGA-1PanVera、抗CD154、5F3PanVera;以及抗CD1、抗CD2、抗CD3、抗CD4、抗CD5、抗CD6、抗CD7、抗CD8、抗CD9、抗CDIO、抗CDll、抗CD12、抗CD13、抗CD14、抗CD15、抗CD16、抗CD17、抗CD18、抗CD19、抗CD20、抗CD21、抗CD22、抗CD23、抗CD24、抗CD25、抗CD26、抗CD27、抗CD28、抗CD29、抗CD30、抗CD31、抗CD32、抗CD33、抗CD34、抗CD35、抗CD36、抗CD37、抗CD38、抗CD39、抗CD40、抗CD41、抗CD42、抗CD43、抗CD44、抗CD45、抗CD46、抗CD47、抗CD48、抗CD49、抗CD50、抗CD51、抗CD52、抗CD53、抗CD54、抗CD55、抗CD56、抗CD57、抗CD58、抗CD59、抗CD60、抗CD61、抗CD62、抗CD63、抗CD64、抗CD65、抗CD66、抗CD67、抗CD68、抗CD69、抗CD70、抗CD71、抗CD72、抗CD73、抗CD74、抗CD75、抗CD76、抗CD77、抗CD78、抗CD79、抗CD80、抗CD81、抗CD82、抗CD83、抗CD84、抗CD85、抗CD86、抗CD87、抗CD88、抗CD89、抗CD卯、抗CD91、抗CD92、抗CD93、抗CD94、抗CD95、抗CD96、抗CD97、抗CD98、抗CD99、抗CD100、抗CD101、抗CD102、抗CD103、抗CD104、抗CD105、抗CD106、抗CD107、抗CD108、抗CD109、抗CDllO、抗CDlll、抗CD112、抗CD113、抗CD114、抗CD115、抗CD116、抗CD117、抗CD118、抗CD119、抗CD120、抗CD121、抗CD122、抗CD123、抗CD124、抗CD125、抗CD126、抗CD127、抗CD128、抗CD129、抗CD130、抗CD131、抗CD132、抗CD133、抗CD134、抗CD135、抗CD136、抗CD137、抗CD138、抗CD139、抗CD140、抗CD141、抗CD142、抗CD143、抗CD144、抗CD145、抗CD146、抗CD147、抗CD148、抗CD149、抗CD150、抗CD151、抗CD152、抗CD153、抗CD154、抗CD155、抗CD156、抗CD157、抗CD158、抗CD159、抗CD160、抗CD161、抗CD162、抗CD163、抗CD164、抗CD165、抗CD166、抗CD167、抗CD168、抗CD169、抗CD170、抗CD171、抗CD172、抗CD173、抗CD174、抗CD175、抗CD176、抗CD177、抗CD178、抗CD179、抗CD180、抗CD181、抗CD182、抗CD183、抗CD184、抗CD185、抗CD186、抗CD187、抗CD188、抗CD189、抗CD1卯、抗CD191、抗CD192、抗CD193、抗CD194、抗CD195、抗CD196、抗CD197、抗CD198、抗CD199、抗CD200、抗CD201、抗CD202、抗CD203、抗CD204、抗CD205、抗CD206、抗CD207、抗CD208、抗CD209、抗CD210、抗CD211、抗CD212、抗CD213、抗CD214、抗CD215、抗CD216、抗CD217、抗CD218、抗CD219、抗CD220、抗CD221、抗CD222、抗CD223、抗CD224、抗CD225、抗CD226、抗CD227、抗CD228、抗CD229、抗CD230、抗CD231、抗CD232、抗CD233、抗CD234、抗CD235、抗CD236、抗CD237、抗CD238、抗CD239、抗CD240、抗CD241、抗CD242、抗CD243、抗CD244、抗CD245、抗CD246、抗CD247、抗CD248、抗CD249、抗CD250等。A^化因子抗體人CNTF抗體、人Eotaxin抗體、人上皮嗜中性粒細胞激活肽-78、人Exodus抗體、人GRO抗體、人HCC-1抗體、人1-309抗體、人IP-10抗體、人I-TAC抗體、人LIF抗體、人肝表達的趨化因子抗體、人淋巴毒素抗體、人MCP抗體、人MIP抗體、由IFN-y抗體資導的人單核因子、人NAP-2抗體、人NP-1抗體、AJi小板因子-4抗體、人RANTES抗體、人SDF抗體、人TECK抗體；鼠趨化因子抗體人B-細胞吸引鼠趨化因子抗體、趨化因子-l抗體、鼠Eotaxin抗體、鼠Exodus抗體、鼠GCP-2抗體、鼠KC抗體、鼠MCP抗體、鼠MIP抗體、鼠RANTES抗體、大鼠趨化因子抗體、大鼠趨化因子抗體、大鼠CNTF抗體、大鼠GRO抗體、大鼠MCP抗體、大鼠MIP抗體、大鼠RANTES抗體；細胞因子/細胞因子受體抗體人生物素化的細胞因子/細胞因子受體抗體、人IFN抗體、人IL抗體、人瘦素抗體、人制瘤素抗體、人TNF抗體、人TNF受體家族抗體、鼠生物素化的細胞因子/細胞因子受體抗體、鼠IFN抗體、鼠IL抗體、鼠TNF抗體、鼠TNF受體抗體；抗CCR4抗體；大鼠細胞因子/細胞因子受體抗體大鼠生物素化的細胞因子/細胞因子受體抗體、大鼠IFN抗體、大鼠IL抗體、大鼠TNF抗體；ECM抗體J!^f/前J!Lf、層粘連蛋白、J3^^、(人)、層粘連蛋白(人)、前膠原(人)、玻璃粘連蛋白/玻璃粘連蛋白受體、玻璃粘連蛋白(人)、玻璃粘連蛋白受體(人)、奸連蛋白/纖連蛋白受體、纖連蛋白(人)、纖連蛋白受體(人)；生長因子抗體人生長因子抗體、鼠生長因子抗體、豬生長因子抗體；雜項抗體杆狀病毒抗體、釣粘蛋白抗體、補體抗體、Clq抗體、VonWillebrand因子抗體、Cre抗體、HIV抗體、流感抗體、人瘦素抗體、鼠瘦素抗體、鼠CTLA-4抗體、人CTLA國4抗體、P450抗體、RNA聚合酶抗體；神經生物學抗體澱粉樣蛋白抗體、GFAP抗體、人NGF抗體、人NT-3抗體、人NT-4抗體。仍然有其他抗體可以用於本發明中，其包括在參考文獻(如MSRSCatalogofPrimaryAntibodies和Linscott目錄)中歹'J出的抗體。在本發明的一些優選的實施方案中，實施抗體為Avastin(貝伐單抗)、BEC2(米妥莫單抗)、Bexxar(託西莫單抗)、Campath(阿侖單抗)、CeaVac、Herceptin(曲妥珠單抗)、IMC-C225(centuximab)、LymphoCide(依帕珠單抗)、MDX-210、Mylotarg(吉姆單抗奧佐米星)、Panorex(依決洛單抗)、Rituxan(利妥昔單抗)、Theragyn(pemtumomab)、Zamyl和Zevalin(ibritumomabtituxetan)。本發明還包括其抗體片段。在一些優選的實施方案中，癌症抗原是VEGF、抗獨特型mAb(GD3神經節苷脂模擬物)、CD20、CD52、抗獨特型mAb(CEA模擬物)、ERBB2、EGFR、CD22、ERBB2XCD65(fc則、EpCam、PEM和CD33。本發明包括抗體和抗體片段二者的用途。抗體可以是單克隆的或多克隆的，並可以通過常規方法製備。它們可進一步分離或存在於腹水中。這類抗體可進一步加工以產生嵌合抗體或人源化抗體，在下文中將更加詳細討論。重要的是，如本領域所公知的，抗體分子中只有一小部分(互補位)涉及抗體與其表位的結合(一般參閱Clark,W.R.(1986)TheExperimentalFoundationsofModernImmunologyWiley&Sons,Inc.,NewYork;Roitt,I.(1991)EssentialImmunology,第七版，BlackwellScientificPublications,Oxford)。例如，pFc，和Fc區是補體級聯的效應器，但是不涉及抗原結合。Sl^切下了pFc'區的的抗體或生產為無pFc'區的抗體命名為F(ab')2片段，其保留了完整抗體的全部兩個抗原結合位點。類似地，a切下了Fc區的抗體或生產為無Fc區的抗體命名為Fab片段，其保留了完整抗體分子的一個抗原結合位點。更進一步，Fab片段由共價結合的抗體輕鏈和一部30分抗體重鏈(名為Fd)組成。Fd片段是抗體特異性的主要決定蔟(單個Fd片段可以與多達十種不同的輕鏈結合而不改變抗體特異性)，且Fd片段在分離中保留表位結合能力。如本領域所公知的，在抗體的抗原結合部分中存在互補性決定區(CDR)和構架區(FR)，互補性決定區直接與抗原的表位相互作用，構架區維持互補位的三級結構(一般參閱Clark,1986;Roitt,1991)。在IgG免疫球蛋白的重鏈Fd片段和輕鏈二者中，都有分別被三個互補性決定區(CDR1到CDR3)分隔開的四個構架區(FR1到FR4)。CDR(尤其是CDR3區，更尤其是重鏈CDR3)主要負責抗體特異性。本領域目前明確，哺乳動物抗體的非CDR區可以被共特異性抗體(co-specificantibody)或異特異性抗體的類似區域取代，而同時保留原始抗體的表位特異性。這最明顯地表現在"人源化"抗體的開發和使用中，其中非人CDR與人FR和/或Fc/pFc，區共價接合，產生功能抗體。因此，例如PCT國際公布號WO92/04381教導了人源化鼠RSV抗體的生產和使用，其中鼠FR區的至少一部分已經^LA來源的FR區取代。這類抗體(包括完整抗體中具有抗原結合能力的片段)通常被稱作"嵌合"抗體。人源化抗體或嵌合抗體的商業來源包括GenPharm、Xenotech、AbGenix和CellGeneSys。因此，本領域普通技術人員應當明白，本發明還提供了F(ab，)2、Fab、Fv和Fd片段；嵌合抗體，其中Fc和/或FR和/或CDR1和/或CDR2和/或輕鏈CDR3鏈已經被同源的人或非/J^列取代；嵌合F(ab')2片段抗體，其中FR和/或CDR1和/或CDR2和/或輕鏈CDR3區已經被同源的人或非人序列取代；嵌合的Fab片段抗體，其中FR和/或CDR1和/或CDR2和/或輕鏈CDR3區已經被同源的人或非A^列取代；和嵌合的Fd片段抗體，其中FR和/或CDR1和/或CDR2區已經被同源的人或非人序列取代。本發明還包括所謂的單鏈抗體。硝基呋喃化合物以治療有效且生理可接受的量施用，該量是受試者在生理上能夠容忍的、實現想要的有益生物效應所必需或足夠的量，所述有益的生物效應在該情況下是治療癌症或抑制血管發生。可以例如通過在進行治療後測量治療的生理效應來測量有益生物效應。生物有益效應可以是改善或完全消除由被治療病症所引起的症狀，或是抑制被治療病症中的血管發生，這例如通過成像時微血管(例如異常徵血管)數量的減少if^明。治療有效且生理可接受的量可以取決於使用的具體化合物或化合物組合和/或療法而變化。其也可以取決於下述因素，如受治療的病症(例如癌症)、受試者的身材或者疾病或病症的嚴重性。本領域普通技術人員能夠根據經驗確定具體的硝基呋喃化合物或組合的有效量，而無需過度實驗。結合本文提供的教導，通it^多種化合物和權重因子中選擇，可以規劃出不引起重大的毒性然而能夠完全有效治療具體受試者的有效的預防性或治療性治療方案，所iii5L重因子如效力、相對生物利用率、患者體重、不良副作用的嚴重性和優選的給藥模式。在一些情況下，使用硝基呋喃化合物或第二藥劑的亞治療劑量進行治療，或者二者均使用亞治療劑量來治療。例如，當硝基呋喃化合物與抗癌劑一起l吏用時，硝基呋喃化合物和抗癌劑可以以亞治療劑量施用，並仍然產生想要的治療效果。本文使用的"亞治療劑量"是指這樣的劑量，其低於在不存在另一藥劑的情況下施用時在受試者中產生治療性結果的劑量。因此，抗癌劑的亞治療劑量是在不施用硝基呋喃化合物時不會在受試者中產生相同的或基^目似的治療結果的劑量。抗癌劑的治療劑量是醫學領域中已知的。這些劑量已經廣泛描述於參考文獻中，並且是本領域所公知的，如Remington'sPharmaceuticalSciences,第十八版,1990或thePhysicianDesktopReference;以及醫務人員作為治療癌症的指南而依賴的許多其他醫學參考文獻。對於本文所述的任何化合物而言，治療有效量首先可以通過體外測定法如細胞培養物測定法來測定。也可以在動物研究中測定治療有效量。例如，可以使用體內測定來評估帶有或不帶有第二藥劑時硝基呋喃化合物的有效量，所述測定例如腫瘤消退和/或防止腫瘤形成的測定。相關的動物模型包括如向動物受試者中注射(通常在確定的部位中)惡性細胞的測定。一般地，對動物施用一定範圍的硝基呋喃化合物劑量。注射惡性細胞後肺瘤生長的抑制指示著降低癌症發生風險的能力。抑制預先存在的肺瘤的進一步生長(或減小其大小)指示著治療癌症的能力。可以根據所施用化合物的相對生物利用率和效力來調節兩種藥劑的應用劑量。基於上文所述的方法和其他方法調節劑量以實現最高效力，這在普通技術人員的能力範圍內。本文所述化合物的受試者劑量通常範圍在從約O.l照到30,000mg，更通常從約1jig/天到加，000mg，甚至更通常從約10照到15,000mg，最通常從約IOOng到10,000ng。就受試者體重而言，典型的劑量範圍從約0.1jig到200mg/kg/天，更通常從約0.5到150mg/kg/天。在一些重要的實施方案中，以從約l到100mg/kg/天的量施用化合物。在一些其他的重要的實施方案中，以10-60mg/kg/天的量施用化合物。本文使用的"常規時間表"是指預先確定的指定時間段。常規時間表可包括長度相同或不同的時間段，只要該時間表是預先確定的即可。例如，常規時間表可涉及每天2、3、4或6次施用、以以下為^ftfe施用每天、每兩天、每三天、每四天、每五天、每六天、每周、每月或其間任何固定數目的天或周、每兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月、七個月、八個月、九個月、十個月、十一個月、十二個月等。或者，預先確定的常規時間表可包括在第一周每日施用，然後在數月中每月施用，之後每三個月施用。任何具體的組合都應當涵蓋在常規時間表中，只要預先確定適當的時間表包括在某天施用即可。本發明的化合物可以在可藥用的運栽體中施用，或在載體或遞送體系中施用。本發明的化學/物理栽體的一個實例^J^體^:體系。膠體^t體系包括基於脂質的體系，包括水包油乳劑、膠束、混合的膠束和脂質體。本發明的一個優選的膠體體系AJ3旨質體。脂質體是適合用作體內或體外遞送載體的人工容器。已經顯示尺寸範圍從0.2-4.0nm的大單層容器(largeunilamellarvessel,LUV)能夠包封大的大分子。RNA、DNA和完整的病毒粒可以被包封在水性內部中，並以生物活性形式遞送至細胞(Fraley等，TrendsBiochem.Sci，(1981)6:77)。可以通過與特異性配體如糖、糖脂或蛋白質偶聯而將脂質體靶向特定組織。可用於將脂質體靶向細胞的配體包括但不僅限於與細胞特異性受體及分子相互作用的完整分子或片段，如抗體，其與細胞的細胞表面標記相互作用。這類配體可以通過本領域技術人員公知的結合測定法容易地鑑定。在另一些實施方案中，可以通過例如與前文所述的免疫治療抗體之一偶聯而將脂質體靶向癌。另外，載體可以與核靶向肽偶聯，所述核靶向肽會引導載體至宿主細胞核。脂質體可購自GibcoBRL，例如LIPOFECTIN和LIPOFECTACETM,其由陽離子脂質如N國[l-(2,3二油醯|tJ0-丙基■N，N，N國三曱基氯化銨(DOTMA)和二曱基雙十八烷基溴化銨(DDAB)形成。用於製造月旨質體的方法是本領域公知的，並描述於許多出版物中。脂質體還綜述於Gregoriadis，(i，TrendsinBiotechnology,(1985)3:235-241。在另一實施方案中，所述化學/物理載體是適用於遞送(例如口服或黏膜遞送)的生物相容性#^。這類微^/〉開於Chickering等,Biotech.AndBioeng"(1996)52:96-101和Mathiowitz等，Nature,(1997)386:.410-414和PCT專利申請WO97/03702中。不可生物降解的和可生物降解的聚合物基質均可用於將硝基呋喃化合物和/或第二藥劑遞送給受試者。優選可生物降解的基質。這類聚合物可以是天然或合成的聚合物。所述聚合物根據想要釋放的時間來選擇，一般在數小時到一年或更長的量級中。通常，最理想的是範圍在數小時和三到十二個月之間的時間中釋放。該聚合物任選地是在水中能夠吸收多至其重量的約卯。/。的^J^形式，並且還任選地與多價離子或其他聚合物交聯。聚合物基質優選地是微粒形式，如微球(其中藥劑分散於整個固體聚合物基質中)或m囊(其中藥劑儲存於聚合物殼的核心中)。用於包含藥劑的其他聚合物基質形式包括膜、包衣、■、^物和支架。選擇聚合物基質設備的大小和組成，使得在引入該基質的組織中產生良好的釋放動力學。還根據JH吏用的本發明遞送方法來選擇聚合物的大小，所述遞送方法通常是注射進組織中或通過氣霧劑將懸浮液施用至鼻和/或肺區域中。優選地，當使用氣霧劑途徑時，聚合物基質和硝基呋喃化合物包含在表面活性劑栽體中。可以將聚合物基質組成選擇為既具有有利的降解速率，又由具有生物粘附性(bioadhesive)的材料形成，從而在基質被施用給受損的鼻和/或肺表面時進一步提高轉移效率。基質組成也可以被選擇為不降解，而是通過擴散在更長的時間段中釋放。在一些優選的實施方案中，硝基呋喃化合物通過植入物施用給受試者。尤其感興趣的生物粘附性聚合物包括由H.S.Sawhney,CP.Pathak和J.A.Hubdl在Macromolecules，(1993)26:581-587中描述的生物蝕解水凝膠，該參考文獻的教導併入本文，還包括polyhyaluronicacids、SS^白、明膠、明膠蛋白、聚酸酐、聚丙烯酸、藻酸鹽/酯、殼聚糖、聚甲基丙烯酸曱酯、聚曱基丙烯酸乙酯、聚甲基丙烯酸丁酯、聚甲基丙烯酸異丁酯、聚曱基丙烯酸己酯、聚甲基丙烯酸異癸酯、聚甲基丙烯酸月桂酯、聚甲基丙烯酸苯酯、聚丙烯酸甲酯、聚丙烯酸異丙酯、聚丙烯酸異丁酯和聚丙烯酸十八烷酯。本發明的組合物和方法在某些情況下可用於替換現有的手術方法或34藥物療法，儘管在大部分情況下本發明可用於政善現有的療法治療這類病症的效力。因此，組合療法可用於治療經受或將要經受癌症治療的受試者。例如，藥劑可以與其他抗增殖(例如抗癌)療法組合施用於受試者。合適的抗癌療法包括去除肺瘤塊的手術方法、化學療法或局部^L射。所述其他抗增殖療法可以在用本發明的藥劑治療之前、同時或之後施用。在施用不同的治療之間也可以有數小時、數天和在一些情況下為數周的延遲，使得所述藥劑可以在所述其他治療之前或之後施用。在一些實施方案中，硝基呋喃化合物可以與其他抗增殖治療一起施用(例如在手術、放射或化學療法之前)或單獨施用，但時間並不僅限於此。硝基呋喃化合物也可以與非手術的抗增殖(例如抗癌)藥物療法組合施用。在一個實施方案中，該藥劑可以與抗癌劑如細胞抑制化合物組合白質)。在一些實施方案中，細胞抑制化合物針對肺瘤的惡性細胞。在另一些實施方案中，細胞抑制化合物是抑制血管平滑肌細胞或成纖維細胞生長和/或增殖的化合物。根據本發明的方法，硝基呋喃或硝基呋喃類似物可以在其他抗癌劑之前、同時或之後被施用。施用時間表可包括以交替方式施用不同的藥劑。在另一些實施方案中，本發明的組合療法可以在用其他為法治療之前和期間、或期間和之後、或之前和之後遞送。在一些情況下，在施用其他抗增殖治療之前24小時以上施用藥劑。在另一些實施方案中，可以對受試者施用多於一種抗增殖療法。例如，受試者可接受與手術和至少一種其他抗增殖化合物組合的本發明藥劑。或者，該藥劑可以與多於一種抗癌劑組合施用。硝基呋喃化合物可以與其他治療劑如佐劑組合，以增強免疫應答。硝基呋喃或硝基呋喃類似物和其他治療劑可以同時或依次施用。當同時施用其他治療劑時，它們可以在相同的配方中施用，或在獨立的配方中施用但同時施用。所述其他治療劑與硝基呋喃或硝基呋喃類似物的施用也可以在時間上分開，即在施用硝基呋喃或硝基呋喃類似物之前或之後的不同時間施用治療劑。這些化合物與藥劑的施用之間的時間間隔可以是大約數分鐘，或可以更長。其他治療劑包括但不僅限於核酸佐劑、非核酸佐劑、細胞因子、非免疫治療性抗體、抗原等。核酸佐劑是屬於核酸的佐劑。實例包括免疫刺激性核酸分子，如含35有CpG二核苷酸的免疫刺激核酸分子，如2001年2月27日提交的美國專利US6,194,388Bl，2001年3月27日提交的US6,207,646Bl和2001年5月29日提交的US6,239,116Bl中所述。"非核酸佐劑"是能夠刺激體液和/或細胞免疫應答的除本文所述免疫刺激性核酸之外的任何分子或化合物。非核酸佐劑包括例如產生d印o效應的佐劑、免疫刺激佐劑、產生depo效應並且刺激免疫系統的佐劑，以及黏膜佐劑。本文使用的"產生depo效應的佐劑"是引起抗原(例如存在於癌症疫苗中的癌症抗原)在體內緩慢釋放從而延長免疫細胞與抗原的接觸的佐劑。這類佐劑包括但不僅限於明礬(例如氫氧化鋁、磷酸鋁)；或基於乳劑的配方，包括礦物油、非礦物油、油包水或油包水包油乳劑、水包油乳劑，如SeppicISA系列的Montanide佐劑(例如MontanideISA720，AirLiquide，Paris,France);MF-59(用Span85和Tween80穩定的水包角鯊烯乳劑；ChironCorporation,Emeryville,CA)和PROVAX(含有穩定去汙劑和膠束形成劑的一種水包油乳劑；IDECPharmaceuticalsCorporation,SanDiego，CA)。"免疫刺激劑"是引起免疫系統細胞活化的佐劑。例如，它可以引起免疫細胞產生和分泌細胞因子。這類佐劑包括但不僅限於從皂樹(Q.saponaria)的樹皮中純化的急苷類，如QS21(在HPLC分級分離的21st峰中洗脫的糖脂；Antigenics，Inc.,Waltham，MA);聚二羧絲苯IL^磷腈(poly[di(carboxylatophenoxy)phosphazene,PCPP聚合物；VirusResearchInstitute,USA);脂多糖衍生物如單罅脂跣脂質A(MPL;RibiImmunoChemResearch,Inc.,Hamilton,MT)、胞壁醯二肽(MDP;Ribi)和蘇氨醯-胞壁醯二肽(t-MDP;Ribi);OM-174(與脂質A相關的葡糖胺二糖；OMPharmaSA,Meyrin,Switzerland);和利什曼原蟲(Leishmania)i^伸因子(純化的利什曼原蟲蛋白；CorixaCorporation,Seattle,WA)。"產生depo效應並刺激免疫系統的佐劑"是上述兩種功能都具有的化合物。這類佐劑包括但不僅限於ISCOMS(免疫刺激複合體，其含有混合的皂苷類、脂質並形成帶孔的病毒大小的顆粒，所述孔能夠容納抗原；CSL,Melbourne,Australia);SB-AS2(SmithKlineBeecham佐劑系統#2，其為含有MPL和QS21的水包油乳劑SmithKlineBeechamBiologicals[SBBIRixensart,Belgium);SB-AS4(SmithKlineBeecham佐劑系統#4，其含有明鞏和MPL;SBB,Belgium);形成膠束的非離子嵌段共聚物，如CRL1005(其含有疏水性聚氧丙烯的直鏈，側翼是聚氧乙烯鏈;Vaxcel,Inc.,Norcross,GA);以及Syntex佐劑製劑(SAF,含有Tween80和非離子嵌段共聚物的水包油乳劑；SyntexChemicals,Inc.,Boulder,CO)。本文使用的"非核酸黏膜佐劑"是與抗原結合施用至黏膜表面時能夠在受試者中誘導粘J^疫應答的除免疫刺激核酸外的佐劑。黏膜佐劑包括但不僅限於細菌毒素例如霍亂毒素(CT)，CT衍生物包括但不僅限於CTB亞基(CTB)(Wu等，1998，Tochikubo等1998)、CTD53(Val到Asp)(Fontana等，1995)、CTK97(Val到Lys)(Fontana等，1995)、CTK104(Tyr到Lys)(Fontana等,1995)、CTD53/K63(Val到Asp，Ser到Lys)(Fontana等，1995)、CTH54(Arg到His)(Fontana等，1995)、CTN107(His到Asn)(Fontana等，1995)、CTE114(Ser到Glu)(Fontana等，1995)、CTE112K(Glu到Lys)(Yamamoto等，1997a)、CTS61F(Ser到Phe)(Yamamoto等，1997a，1997b)、CTS106(Pro到Lys)(Douce等，1997,Fontana等，1995)和CTK63(Ser到Lys)(Douce等，1997,Fontana等，1995);緊密連接毒素(Zonulaoccludenstoxin)、zot;大腸桿菌不耐熱腸毒素、不耐熱毒素(LT)、LT衍生物包括但不僅限於LTB亞基(LTB)(Verweij等，l"8)、LT7K(Arg到Lys)(Komase等,1998，Douce等，1995)、LT61F(Ser到Phe)(Komase等，1998)、LT112K(Glu到Lys)(Komase等，1998)、LT118E(GIy到Glu)(Komase等，1998)、LT146E(Arg到Glu)(Komase等，1998)、LT192G(Arg到GIy)(Komase等，1998)、LTK63(Ser到Lys)(Marchetti等，1998，Douce等，1997，1998,DiTommaso等，1996)和LTR72(Ala到Arg)(Giuliani等，1998);百日咳毒素(PT)(Lycke等，1992,SpanglerBD，1992,Freytag和Clemments,1999,Roberts砵，1995,Wilson等，1995)包括PT-9K/129G(Roberts等，1995，Cropley等，1995);毒素衍生物(見下文)(Holmgren等，1993，Verweij等，1998，Rappuoli等，1995，Freytag和Clements,1999);脂質A衍生物(例如單褲醯脂產A,MPL)(Sasaki等，1998，Vancott等，1998;胞壁跣二肽(MDP)衍生物(Fukushima等，1996,Ogawa等，1989，Michalek等，1983，Morisaki等，1983);細菌外膜蛋白(例如博氏螺旋體(Borreliaburgdorferi)外表面蛋白A(OspA)脂蛋白、腦膜炎奈瑟氏菌外膜蛋白)(Marinaro等，1999，VandeVerg等，1996);水包油乳劑(例如MF59)(Barchfield等，1999，Verschoor等，1999,O'Hagan，1998);鋁鹽(Isaka等，1998，1999);以及急苦類(例如QS21)AquilaBi叩harmaceuticals,Inc.,37Worcester,MA)(Sasaki等，1998,MacNeal等，1998)、ISCOMS、MF曙59(用Span85和Tween80穩定的水包角篁烯乳劑；ChironCorporation,Emeryville,CA);SeppicISA序列的Montanide佐劑(例如MontanideISA720;AirLiquide,Paris,France);PROVAXC^有穩定去汙劑和膠束形成劑的水包油乳劑；IDECPharmaceuticalsCorporation,SanDiego,CA);Syntext佐劑製劑(SAF;SyntexChemicals,Inc.,Boulder，CO);聚二羧^S^苯IL^褲腈(PCPP聚合物；VirusResearchInstitute,USA)和利什曼原蟲延伸因子(CorixaCorporation,Seattle,WA)。本發明還提供試劑盒，其包含本發明的化合物和/或藥劑並任選地包含使用說明。所述化合物和/或藥劑可以以腸胃外形式(例如靜脈內、肌內或鞘內給藥)或口服形式如片劑、丸劑、膠嚢劑、小膠嚢等等存在。試劑盒還可含有第二活性成分或藥劑，其與硝基呋喃配製在一起或單獨地配製。以各個形式提供的單位劑量應取決於硝基呋喃化合物是與第二活性成分或藥劑一起使用還是單獨使用。試劑盒可任選地包含外包裝如盒子或袋子。使用說明可以與^t單位或外包裝分別提供，或它可以印在分配單位或外包裝中之一或之二上。所述化合物和/或藥劑可以在一天^t單位如鼓泡包裝(blisterpack)或刻度包裝(dialpack)型分配器中提供，優選地將周的天數或月的天數(例如l、2、3、4等)印刷在分配器上。如果每隔一天或一天兩次(或更多)施用化合物和/或藥劑，則可以相應地更改分配單位。提供以下的實施例以舉例說明實施本發明的具體情況。它們不旨在限制本發明的範圍。本領域普通技術人員應當明白，本發明可應用於多種方法和組合物。在實施例中，使用三種成神經細胞瘤細胞系(SMS-KCNR、SMS-KCN和IMR-32)證明了硝吹替莫對成神經細胞瘤的治療潛能，所述成神經細胞瘤細胞系是成神經細胞瘤的3型兒童期形式的代表16。不旨在受任何具體的理論束綽，相信硝吹替莫作用的分子機制包括在細胞內形成自由基9，17。由自由基導致的細胞損傷引起對調亡的誘導，導致觀察到的硝呔替莫毒性18-2°。較早的研究顯示，用硝吹替莫治療泰氏錐蟲(T.cruzi)短膜蟲期降低了細胞生存力，這與細胞中提高的超微結構損傷相關1，21。如實施例4中所述，觀察到硝呔替莫對SMS-KCNR、SMS-KCN和IMR-32成神經細胞瘤細胞系類似的細胞毒效應。在所使用的不同成神經細胞瘤細胞系之間，發現SMS-KCNR對硝呔替莫最為敏感，並使用該細胞系進行進一步的研究。硝呋替莫顯示劑量和時間依賴性的細胞生存力降低(圖2A)。細胞生存力的降低可能是由於該藥物的細胞毒性所引起的細胞死亡或缺乏增殖。如實施例5中所述，我們的研究使用BrdU測定法證明了劑量依賴性的細胞增殖降低。如實施例6中所述，硝吹替莫的細胞毒性效應在顯微鏡檢查期間是明顯的，其中發現細胞變圓並漂浮，提示發生了凋亡(圖3A)。進行TUNEL測定來證實凋亡。在該測定中，使用末端脫氧核苷酸轉移酶，用發螢光的脫氧胸苷類似物標記在凋亡的情況下斷裂後產生的DNA末端。DNA中末端數的增加導致標記增加，這繼而反映在螢光信號的增加中22。用硝吹替莫處理後觀察到提高的TUNEL染色(圖3B)，這表明該藥物在成神經細胞瘤細胞中引起了凋亡。胱天蛋白酶是細胞凋亡機器的中心組分，胱天蛋白酶-3是被若干種抗癌藥活化的執行者胱天蛋白酶(executionercaspase)23。如實施例9中所詳述的，用硝呋替莫處理後存在胱天蛋白酶-3的強活化。這通過用抗體進行的經處理細胞的免疫印跡來顯示，所述抗體對活化的胱天蛋白酶-3具有特異性(圖4A)。胱天蛋白酶-3活化是劑量依賴性的，這與經處理的細胞中以TUNEL染色提高為標誌的凋亡一致。通過使用胱天蛋白酶抑制劑來研究胱天蛋白酶在硝呋替莫誘導的凋亡中的作用。用泛胱天蛋白酶抑制劑(pan-caspaseinhibitor)Z-VAD-FMK預處理細胞24逆轉了成神經細胞瘤細胞中硝呋替莫誘導的凋亡(圖4B)，所述抑制劑具有有效抑制廣泛的胱天蛋白酶的能力。Z-VAD-FMK對凋亡的這種逆轉證實，胱天蛋白酶參與了硝呋替莫誘導的成神經細胞瘤細胞凋亡。其他人已經使用泛胱天蛋白酶抑制劑Z-VAD-FMK，通過經Flavopiridol處理的成神經細胞瘤細胞系來證實胱天蛋白酶誘導的凋亡25。TrkB是一種受體酪氨酸激酶，是神經營養蛋白的高親和力受體。與其他Trk類似，神經營養蛋白對TrkB的活化與神經元細胞中的分化和對凋亡的抑制相關26。TrkB幾乎僅在生物學方面不利的成神經細胞瘤中表達2，3。BDNF與TrkB結合導致Ras/MAPK和PI3K/Akt信號轉導途徑的活化。Akt途徑已經顯示對於細胞存活和對化學療法的抗性而言至關重要3，15。如實施例3中所詳述的，當用BDNF刺激SMS-KCNR細胞時，由於TrkB受體活化導致的Akt磷酸化在硝呋替莫存在下被抑制(圖6A)。這提示硝呋替莫可通過抑制TrkB信號轉導來發揮作用。這一發現是很重要的，因為TrkB-BDNF途徑促進細胞存活，並且已知在成神經細胞瘤細胞中為細胞提供對DNA損傷性治療劑的保護，導致化學抗性的發生"8，27。因此，抑制該途徑的藥物在治療成神經細胞瘤中是有價值的。另外，硝呋替莫降低Akt磷酸化(圖6B)，提示Akt可能是硝呋替莫的一個直接靶標。與Akt類似，ERK1/2磷酸化被認為在成神經細胞瘤中促進存活，並由BDNF/TrkB途徑活化26。然而，用硝呋替莫處理SMS-KCNR細胞並未改變ERK1/2磷酸化的磷酸化(數據未顯示)。硝呋替莫的這些不同作用很可能反映了各個途徑的獨特功能。例如，據報導，Akt介導由BDNF諸導的對細胞存活的促進，而ERK1/2介導BDNF誘導的細胞分化28。這些研究指出，硝呋替莫能夠作為抗擊成神經細胞瘤的治療劑。根據體內測試，硝呋替莫處理導致小鼠中腫瘤尺寸的顯著減小。見實施例12。在人中，單獨或與其他療法組合的硝呋替莫處理導致肺瘤消退而無毒性副作用。其他研究者發現，硝呋替莫在成人中具有許多副作用，包括噁心/嘔吐、肌痛、虛弱、頭痛、感覺異常、多神經炎、神經障礙和癲癇發作6，並確定它在兒童的耐受更好，如在針對查加斯病使用硝呋替莫的67名兒童的研究中所觀察到的"。然而在實施例13和14中詳述的我們的研究中，沒有患者由於不良藥物而被該研究排除5，11。總而言之，實施例顯示硝呋替莫對成神經細胞瘤細胞有細胞毒性。其在成神經細胞瘤中抑制增殖並誘導凋亡。凋亡由胱天蛋白酶-3的活化來介導。硝呋替莫抑制基本的和TrkB介導的Akt磷酸化，提示其抑制TrkB信號轉導。因此，硝呋替莫是有效的細胞毒劑和細胞凋亡劑，並可作為抗擊成神經細胞瘤的治療劑。實施例試浙斧/務將硝吹替莫(來自Bayer,Germany)溶於二甲亞碸(DMSO)中，作為20mg/ml儲存液，並以等分式樣儲存於-20X:下。將zVAD-fmk(CalbiochemLaJollaCA)以10mM的濃度溶於DMSO中並儲存於-20匸下。將腦源性神經營養因子(BDNF)溶於無菌水中(100ng/ml)並儲存於國80C下(SantaCruzBiotechnology,SantaCruz,CA)。針對已切割的胱天蛋白酶-3以及磷酸化及完整形式Akt的抗體得自CellSignalingTechnology,BeverlyMA，與HRP偶聯的第二抗兔抗體來自AmershamPharmaciaBiotech,Piscataway，NJ，碟化丙錠來自SigmaChemicalCo.,StLouis，MO。豸滋辦2:勿應潛#斧義理於37t:下在加溼的培養箱中，在補充有10。/。胎牛血清、100單位/ml青黴素和100ng/ml鏈黴素的RPMI1640培養基中培養人成神經細胞瘤細胞系IMR國32(ATCC)、SMS國KCN、SMS-KCNR(來自JohnMaris,CHOP,Philadelphia,PA)。將細胞在6孔平板或100mm平皿中培養至75%匯合，並在處理前除去血清(含0.1%BSA的RPMI1640)過夜。用硝呋替莫(O、1、10或20ng/m1))處理細胞24小時用於胱天蛋白酶活化研究，或處理2小時並用100fig/mlBDNF(SantaCruzBiotechnology,CA)刺激10分鐘，用於Trk信號轉導分析。姿磁辨3:^^#真#浙爿"禪磁必和2>/^介#時^子脊導已知SMS-KCNR細胞表達TrkB受體14。BDNF特異性刺激成神經細胞瘤上的TrkB受體，並導致在細胞存活中起關鍵作用的AktT15發生磷酸化，最終導致化學抗性3，15。為了理解成神經細胞瘤細胞中介導硝呋替莫的抗增殖和細胞毒效應的信號轉導途徑，測定SMS-KCNR細胞中的TrkB和Akt信號轉導。在沒有硝呋替莫時用BDNF刺激SMS-KCNR細胞導致提高的Akt磷酸化(圖6A，第1道)；然而，硝呋替莫的添加(10和20fig/ml)顯著地抑制Akt褲酸化，如降低的條帶強度所示(圖6A，第3和4道)。總Akt蛋白質水平不被硝呋替莫改變(圖6A)。另外，硝呋替莫抑制了血清刺激的Akt磷酸化(圖6B)。在血清存在下，存在高水平的Akt活化(圖6B，第l道)；然而，硝呋替莫的添加消除了血清刺激的Akt活化。在1.0和10jig/ml的劑量下，硝呋替莫完全抑制Akt的磷酸化(圖6B，第2道和第3道)。這些研究清楚地顯示，硝呋替莫在成神經細胞瘤中抑制Akt信號轉導。另一方面，ERK1/2(TrkB的另一下遊乾標)的磷酸化不受影響。ERK1/2磷酸化沒有改變，表明硝呋替莫可能不影響ERK介導的信號轉導(數據未顯示)。其滋辦4:屏5t參宴^新成神遂勿應癆勿應付勿應i存力通過MTS測定法來測定硝呋替莫對SMS-KCN、SMS-KCNR和IMR-32成神經細胞瘤細胞系的生長抑制作用。使用CellTiter96AQOneSolution細胞增殖測定試劑盒(Promega，MadisonWI)來測量細胞生存力4。將細胞在48孔板中培養(每孔50，000個)24小時，並用濃度遞增的硝呋替莫(O、1、10和20ng/ml)處理24、48、72和96小時。經運載體處理的細胞用作對照(0.001。/。DMSO)。孵育期結束時，在新鮮培養基中向每孔添加MTS試劑(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鹽f至0.5mg/ml的終濃度並孵育4小時。使用平板讀數儀(MultiskanRC，FisherScientificPittsburgh,PA)在4卯nm處測量吸光度。細胞生存力表達為處理之前和之後吸光度的平均百分比+/-SD。如圖2A中所示，硝呋替莫以時間和劑量依賴性的方式顯著抑制這些細胞系的生長，並且在SMS-KCNR細胞中最為顯著。在20fig/ml硝呋替莫下處理120小時後，細胞生存力下降至37%(SMS-KCNR)、59%(SMS國KCN)、78%(IMR-32)。這些細胞系的ICso值(達到50%生長抑制需要的濃度)測定為對SMS-KCNR的14.7fig/ml，對SMS-KCN的25.4jig/ml和對IMR-32的52.9ng/ml。這些研究清楚地顯示，硝呋替莫對成神經細胞瘤細胞系具有細胞毒性。重要的是，在培養的正常上皮細胞中未觀察到硝呋替莫的這類細胞毒效應、其磁辨5:^^替宴^斧/成神遂勿應膚勿應增孩和ZWJ合4細胞生存力是包括增殖和細胞死亡的事件的總和。首先，我們測試了硝呋替莫抑制DNA合成的能力，作為其對增殖的影響的度量。通過測量進入DNA的BrdU摻入來測定DNA合成，作為增殖的代用品。根據製造商的說明(RocheMolecularBiochemicals,IndianapolisIN),在DNA合成期間6，13通過BrdU(溴代脫氧尿苷)摻入測定法來測定硝呋替莫對成神經細胞瘤細胞系和上皮細胞增殖的影響。在48孔平板中將SMS-KCNR細胞(50,000個/孔)培養24小時，去血清處理18小時並用硝呋替莫(O、1、10和20ng/ml)處理24小時。用10BrdU標記細胞6小時。固定細胞並使用過氧化物酶綴合的抗BrdU抗體和TMB(3,3，,5,5'-四甲基聯苯胺)顯色底物來顯色。使用微孔板讀數儀(MultiskanRC,FisherScientific,Pittsburgh,PA)在450nm處測量吸光度。在該測定法中，色彩強度(colorintensity)與BrdU摻入量直接相關，BrdU量進而反映增殖。結果表達為BrdU摻入的百分比(+Z-SD),並示於圖2B。BrdU摻入隨藥物濃度的提高而降低，表明硝呋4莫抑制DNA合成。在18.1ng/ml硝吹替莫下觀察到50%的DNA合成抑制。BrdU摻入研究證明，硝呋替莫是成神經細胞瘤細胞增殖的有效抑制劑。結果在圖7中展示。當用硝呋替莫處理時，HEC中存在劑量依賴性的DNA合成抑制；在10ng/ml硝呋替莫下觀察到50%的抑制，在20照/ml濃度的硝呋替莫下觀察到超過80%的抑制，在低至5ng/ml硝呋替莫濃度下觀察到30%的抑制。BrdU摻入研究證明，硝呋替莫是HEC增殖的有效抑制劑。豸滋^6:席《夢宴滲爭成神遂勿應膚勿應時勿應^亡進一步研究硝呋替莫在成神經細胞瘤細胞中的細胞毒效應，以理解其內在的機制。在48孔平板中將SMS-KCNR細胞培養至60%的匯合，用濃度遞增的硝呋替莫誘導96小時。經運載體處理的細胞用作對照。處理之後，首先使用安裝了Fuji數位照相機(Japan)的倒置顯微鏡(NikonEclipseTS100,Japan),通過光學顯微術觀察形態學特徵。用PBS洗滌細胞，用多聚甲醛固定，在室溫下用TritonX-100透化處理，使用末端脫氧核苷酸轉移酶用螢光素-12-dUTP標記，並用碘化丙錠(5ng/ml)復染。每個實驗中均包括陰性對照(無末端轉移酶)。通過螢光顯微術(安裝了冷卻的CCD照相機的NikonEclipseTE2000-E,Japan)檢測細胞凋亡。使用碘化丙錠染色來檢測非凋亡細胞和凋亡細胞，並使用螢光染色來檢測凋亡細胞。經硝呋替莫處理的細胞的顯微鏡檢查揭示了形態學改變，如減小的軸突長度、指示細胞凋亡的變圓和漂浮(圖3A)。形態學改變隨著硝呋替莫濃度的提高而越來越顯著。在lfig/ml硝呋替莫下，與經運載體處理的細胞相比，軸突長度的減小是明顯的(分別為圖3A-ii和A-I)。在10嗎/ml硝呋替莫下，軸突長度的減小更加突出，並且伴隨著細胞的變圓(圖3A-m)。在20ng/ml硝呋替莫下，細胞變圓並且漂浮，少量細胞保持粘附在平板上。(圖3A-iv)。重要的是，這些形態學凋亡改變以劑量依賴性方式發生。使用TUNEL(末端脫氧核苷酸轉移酶介導的脫氧尿普5，-三磷酸(dUTP)切口末端標記)測定法來證實硝呋替莫對凋亡的誘導。使用末端核苷酸轉移酶反應在用硝呋替莫(0-20ng/ml)處理96小時的SMS-KCNR細胞中鑑定含有斷裂DNA的核。通過紅色溴化丙錠染色來鑑定核，通過PI和TUNEL疊加中的黃色斑點來鑑定TUNEL陽性核。TUNEL測定法顯示了用硝呔替莫處理72小時後SMS-KCNR細胞中凋亡的劑量依賴性增加。隨著藥物濃度的提高，在核中觀察到凋亡信號的提高(圖3B)。《/7:,咖伊逐為、浙處理後，通過刮取收集細胞並重懸於200plE緩衝液(10mMTrispH7.6、50mMNaCl、5mMEDTA、50mMNaF、0.1mMNaV04、1%Triton、10ng/ml抑肽酶、10ug/ml亮抑酶肽，ABSF)中，並在水上孵育20分鐘以裂解細胞。將細胞裂解物超聲處理10秒鐘並在4t:下以14,000rpm離心20分鐘。用BioRad蛋白質估值試劑盒(BioRad，Hercules，CA)測定蛋白質濃度。將裂解物在12%SDS-PAGE凝膠上電泳細胞並印跡在PVDF(聚偏氟乙烯)膜上。用PBST中的5%脫脂乳(BioRad,Hercules，CA)封閉印跡1小時。使用對已切割的胱天蛋白酶-3以及磷酸化及完整形式Akt和ERK1/2具有特異性的抗體來檢測標記印跡。使用辣根過氧化物酶綴合的第二抗體(Amersham-PharmaciaBiotech,Piscataway,NJ)使蛋白質條帶顯影，然後增強化學發光(Upstate,Waltham，MA)並4吏用BioRad,GelDocumentSystem,GDS8000(BioRad,HerculesCA)記錄。清洗印跡並用肌動蛋白抗體作為內部上樣對照(SigmaChemicalCompany,St.Louis，MO)進行檢測。,滋辨/TEC好5n/t/滲入謝定通過測量DNA合成期間的BrdU摻入來評估硝呋替莫對增殖的影響。在96孔板中培養人上皮細胞(HEC)(1乂104個細胞)，去血清處理16小時並在存在50ng/mlVEGF時用培養基200中0、0.15、0.3、0.6125、1.25、2.5、5、10和20ng/ml處理72小時。向細胞中添加BrdU(10jiM終濃度)並再孵育6小時。固定細胞並使用抗BrdU-POD抗體和TMB顯色底物顯色。根據製造商的說明進行測定。在這種比色法細胞增殖測定中，色彩強度與摻入DNA中的BrdU量直接相關，該量進而代表了增殖。結果表達為BrdU摻入百分比。其磁辨9:應義蛋^雜-J在^^替真摩爭放辨源亡尹辨作^;應天蛋冷通過證實胱天蛋白酶-3(凋亡級聯的抑制劑)的活化來獲得硝呋替莫處理誘導凋亡的證明。用0、1、10和20jig/ml硝呋替莫將SMS-KCNR細胞處理24小時，使用識別活化形式胱天蛋白酶-3的抗體，通過免疫印跡來測定胱天蛋白酶-3的活化。如上通過MTS測定法測量細胞生存力。在用運載體處理的細胞中觀察到最小或基礎水平的胱天蛋白酶-3活化(圖4A)。硝呋替莫的添加導致劑量依賴性且強烈的胱天蛋白酶3活化，如19kDa和17kDa條帶的出現所證明(圖4A)。硝呋替莫對胱天蛋白酶-3的活化與形態學觀察和TUNEL測定法所示的凋亡增加一致(圖3A，3B)。為了評價胱天蛋白酶在成神經細胞瘤細胞中硝呋替莫所誘導凋亡中的關鍵作用，使用Z-VAD-FMK，它是與胱天蛋白酶1到9的催化位點不可逆結合的泛胱天蛋白酶抑制劑。胱天蛋白酶的失活導致對胱天蛋白酶所介導凋亡的抑制。用50jiM泛胱天蛋白酶抑制劑Z-VAD-FMK將SMS-KCNR細胞預處理90分鐘，然後用硝呔替莫(IO照/ml)處理96小時。在用硝呋替莫處理(10jig/ml處理96小時)lj"，用50nMZ國VAD-FMK將SMS-KCNR細胞預處理卯分鐘。選擇10jig/ml硝呔替莫的劑量，因為其接近於ICs。值(圖2A)。通過MTS測定法測量細胞生存力。與用運載體處理的對照相比，硝呋替莫將SMS-KCNR細胞的生存力降低50%。然而，添加Z-VAD-FMK導致對硝呋替莫細胞毒活性的逆轉(圖4B)。用50nMZ-VAD-FMK預處理90分鐘將硝吹替莫存在下的細胞生存力提高至卯％。該研究清楚地顯示，硝呋替莫的細胞毒效應被泛胱天蛋白酶抑制劑Z-VAD-FMK逆轉，說明觀察到的硝呋替莫的凋亡效應由胱天蛋白酶介導。^^參真丼教J&營U^導f資y定法首先，我們測試了硝呋替莫對Matrigel基質上導管形成的影響。用生長因子刺激進行導致內皮細胞的形態學分化和基質上導管樣結構的形成。在Matrigel床中進行內皮導管形成測定。簡言之，通過在水上使用預冷的移液器、平板和導管來製備Matrigel床。將生長因子減少的Matrigel在4C解凍過夜並混合均勻，用0.1mlMatrigel包被培養平板45(48孔)，並使其在37t:凝膠3分鐘。將每孔(2x104)個HEC播種在Matrigel床上，並在存在或不存在VEGF(50ng/ml)時在含硝呋替莫(0、10或20ng/ml)的EBM-2基本培養基中培養8小時。使用相差顯微鏡(安裝有Fuji數位照相機的NikonEclipseTSIOO，Japan)對毛細血管網照相，並通過計數每孔四個象限的分支點來定量導管數。在Matrigel培養基上，內皮細胞形成聚集體，然後聚集的細胞開始萌芽和融合，形成導管樣結構。存在生長因子時，HEC形成有組織的、伸長的導管樣結構，模擬了帶有廣泛網絡的毛細血管。(圖8A)。然而，沒有生長因子時(對照)，沒有觀察到這樣有組織的結構(圖8B)。在存在VEGF時，硝呋替莫顯示對HEC的導管樣結構形成有顯著的抑制作用。導管的形成減少，形成毛細血管樣結構的不完全網絡(圖8C)。20ng/ml時硝呋替莫分別顯示抑制50%(±7%)的導管形成。這些發現提示，硝呋替莫抑制血管發生中的導管形成步驟。其滋辨〃^^夢^丼浙益,發'^-J:動麻豕遊定法接下來，我們使用埋入Matrigel床的大鼠主動脈環(外植體)測試了硝呋替莫抑制生長因子所誘導的毛細血管萌芽的能力。Matrigel床模擬代表其天然組成和結構的生理學細胞外基質。因為這些特性，Matrigel使得若干種細胞類型(包括內皮細胞)能夠在培養中維持其體內表型和三維組織情況。從安樂死的大鼠中取出主動脈弓並立刻轉移至含有水冷的無血清培養基的培養皿中。用小顯微解剖鑷和虹膜切除剪小心地去除主動脈周纖維脂肪組織(peri-aorticfibroadiposetissue),注意不要損傷主動脈壁。切開主動脈環(1mm厚)並在5次連續的培養基200洗滌中充分洗滌。然後將大鼠主動脈的環形外植體包埋在48孔板中的Matrigel床中，在存在或不存在生長因子時用1、10或20ng/ml硝呋替莫處理，並在組織培養箱中於37t:下孵育。每隔一天用NikonEclipseTS100倒置顯微鏡在合適的放大率下檢查外植體，並在第9天結束時拍照。第9天時，使用NikonEclipseTS100螢光顯微鏡(Japan)和Fuji數位照相機，通過分級和記錄萌芽的程度來定量毛細血管萌芽，其直接反映血管發生。在無血清培養基中培養的主動脈環顯示很少或無萌芽(圖7A)。當在生長因子存在下(完全培養基)培養主動脈環時，最初在第3-4天46注意到微血管的萌芽，微血管的數量和長度隨著培養時間的延長而增加。微血管從植入環的邊緣起向外生長。HEC的最初的線性萌芽逐漸分支、分開，並產生複雜的微血管網絡。從外植體的周圍發展出帶有管和環的分支微血管的稠密毛細血管網，發現其向朝向孔的邊緣伸展(圖7B)。相反，向完全培養基中添加硝呋替莫時，這種微血管形成以劑量依賴性的方式顯著減少。在用硝呋替莫處理的主動脈環中，觀察到萌芽從外植體向外的生長有顯著的延遲，微血管的數量和分支的數量均退化。在較低劑量(l和10照/ml)的硝呋替莫下，毛細血管網絡是稀疏和不完全的(圖7C和D)，在較高劑量(20jig/ml)的硝呋替莫下，存在微血管萌芽的完全抑制(圖7E)。通過用Dil-Ac-LDL染色主動脈環來證明微血管的內皮性質(數據未顯示)。Dil-Ac-LDL被內皮細胞選擇性攝入並且不破壞其生長、存活或功能。根據其內皮來源，管狀向外生長物發出螢光，並且與相差顯微照片一致。向外生長的微血管的分析揭示，硝呋替莫強烈抑制血管發生。小薦#>^潛義1/"^減'/、異種移植實驗使用107個SMS-KCNR細胞注射進棵鼠中，並在食物塊中含有或不含有150mg/kg/天的硝呋替莫，連續處理30天。收穫後測量肺瘤尺寸。結果在圖11中顯示。觀察到大於三倍的腫瘤尺寸減小(1.14克與0.3克)。其滋辨"治;^悉^f成神遂勿應潛々查餘遊病辨人,悉者用常規的化療藥物環磷醯胺(50ml/m2NS中250mg/m2"'J，在30分鐘中輸注)和託泊替康(50mlNS或D5W中0.75mg/m2/劑，在30分鐘中輸注)治療的患有進行性難治性成神經細胞瘤的五歲齡女性患者通過輸血患上了查加斯病。查加斯病是由南美洲特有的克氏錐蟲(Trypanosomacruzi)引起的寄生蟲病。儘管硝吹替莫目前在美國尚未被FDA批准用於查加斯病或任何其他疾病，但是其通過疾病控制中心(CenterforDiseaseControl(CDC))獲得，用於治療患者的查加斯病。患者通過每天三次口服片劑開始15-20mg/kg/天的硝呋替莫給藥；患者的腫瘤隨後消退、減少和切斷所有藥物時患者復發，重新開始使用硝呋替莫、環磷醯胺和託泊替康，並再次顯示腫瘤消退。該患者中沒47有顯著的副作用或顯著的器官毒性跡象。泉遂辨W:浴^農,悉才試神遂勿應膚種乂,悉者用單獨或與下文所述的其他治療組合的20mg/kg/day(三次給藥)硝呋替莫來治療患復發性成神經細胞瘤(但未患查加斯病)的三名其他患者。他們均顯示腫瘤消退，並且對其治療方案的耐受良好，沒有顯著的副作用或器官毒性的跡象。tableseeoriginaldocumentpage48患者A患有多次復發的成神經細胞瘤，並以上文所述的劑量開始使用硝呋替莫。兩周後患者的生活質量改善，並觀察到腫瘤的穩定。與環磷醯胺和託泊替康共同施用硝呋替莫治療四個月後，觀察到顯著和持續的腫瘤消退。開始治療方案兩個月後，患者B的腫瘤標記物發生正常化；骨髓吸取物澄清，並且疾病和MIBG掃描為陰性，在掃描時顯示多個點的所述MIBG掃描顯示剩餘一個點。患者C具有22個初始腫瘤標記物VMA，並且骨髄是腫瘤陽性的。在開始抗壞血酸共同施用前的第21天，患者的胂瘤標記物VMA減少至17個，並且患者的骨髓為陰性。3個治療循環後，患者的肺瘤標記物VMA進一步減少至13。實施例15:人患者中的劑量毒性研究兒童中用於治療查加斯病的標準治療劑量為15-20mg/kg/天。這些劑量下的毒性通常很低。為了進行劑量毒性研究，使用下表中公開的遞增劑量。劑量梯度tableseeoriginaldocumentpage49在第l-21天，每天三次口服僅用硝呋替莫治療受試者。之後，向硝呋替莫治療方案中添加環磷醯胺和託泊替康。如下，每21天在連續5天中如下給予各個化學療法循環在30-60分鐘中用500ml/m2D5WV;jNS預水合，配合止吐療法。環褲醯胺，50ml/m2NS中250mg/m2/劑，在30分鐘中輸注。託泊替康，50mlNS或D5W中0.75mg/m2/劑，在30分鐘中輸注。FILGRASTIM,在第5天的化學療法完成後24-48小時開始每天皮下給予5微克/kg，直到中性粒細胞恢復。在治療醫生的斟酌下可以針對>40kg的患者替換為PEG-非格司亭皮下6mg。這種21天的循環總計重複3次，在每個循環之前重新評估。重新評估將包括CBCLDH、鐵蛋白、尿兒茶酚胺、原發部位的MRI和MIBG掃描，如果在方案開始時是陽性的話加上骨髓抽吸和/或活檢。4個循環療法後的治療根據治療醫生的斟酌保留。其滋夢06;炎進W^^^喊廣掙身^IK參寞J合成完成了一種改進的、更有效的、更無害的硝基呋喃側鏈合成，示於圖12中並在下文中描述。參考圖12，在作為溶劑的乙醇中，在回流下用巰基乙醇對環氧丙烷鹼促進的親核加成反應來實現二醇(l)的合成。如本領域技術人員所知，該反應可以用除乙醇外的溶劑和除乙醇鈉外的鹼來實現。'HNMR(CDC13):83.868(1H),3.734(2H)，2.725(4H)，2,465(2H),1.222(3H)MS(FAB):159[M+NaJ+碸二醇(2)的合成在回流下在催化量的酸(如磷酸)中用過氧化氫溶液來實現。在減壓下或在空氣、N2或氬氣的氣流中去除溶劑，然後在高真空下乾燥。lHNMR(CDC1，):S4.48(1H)，4,12(2H),3.31(3H),3'13(1H),1,31(3H);MS(FAB):191〖M+Na〗+.在過夜回流下，用tBoc-NHNH2(1.25當量)通過鹼促進的阱嵌入(hydrazineinsertion)實現碸二醇(2)(1當量)環化為化合物(3)。用乙酸乙酯萃取反應混合物並在減壓下濃縮，提供半固體的產物。MS(FAB):165.M+H]+,187[M+Na]+.在長至24小時的回流下，通過化合物(3)(1.1當量)與5-硝基-2-糠醛(1當量)在醇溶劑(如乙醇，優選無水的)中實現硝呔替莫的合成。在抽吸下熱過濾或冷過濾反應混合物，提供想要的產物。'HNMR(CDC13+CD30D):S7,40(1H)，7'32(1H〉，6.67(IH)，4.64,23(1H)，3.訴-4.04(lH),3.64-3.74(lH),2.80-3,02(4H)幼d1.45-1.47(43H)在本公開的啟發下，本文公開和要求保護的所有組合物和方法無需過度實驗即可製造和實施。儘管本發明的組合物和方法已經就優選實施方案進行了描述，但是本領域普通技術人員應當明白，可以對所述組合物和方法進行變更，而不偏離本發明的概念、構思和範圍。例如，如果能夠達到相同或類似的結果，則化學上相關的某些藥劑和組合物可以替換本文所述的藥劑。所有這些類似的取代和修改對本領域技術人員是很明顯的，認為是在本發明的構思、範圍和概念中。本文引用的所有出版物、專利申請、專利和其他文件都通過參考以其整體併入本文。在衝突的情況下，以包括定義的本+兌明書為準。另外，材料、方法和實施例僅用於說明，而不旨在限制。參考文獻1-BrodeurGM，PritehardJ，BertholdF，etal.，Revisionsoftheinternationalcriteriafornewoblastoraadiagnosis,staging,andresponsetotreatment.JClinOncol1993;11:1466-1477,2.BrodeurGMMarisJM>YamashiroDJ，HogartyMD，WhitePS.BiologyandGeneticsofH咖抑Neuroblastomas.JPcdiatrHematolOncol1997;19:93-101.3,HoRjEggertA，HishikiT.etal,，ResistancetoChemotherapyMediatedbyTrkBinNeuroblastomas.CanoeiRes2002;62:6462-6466，4-RaetherW，HanelH.NitroheterocycHcDrugswithBroadSpectrumActivity,P咖sitRes2003;卯:S19-S39,5.HirakiY，SeJcineA，NabeshiH，Midorika柳K,MurateM,KumagaiY,KawanishiS,Mechanismofcarcinogenesisinducedbyaveterinaryantimicrobialdmg,nitrofUrazo加，viaoxidativeDNAdamageandceproliferation.CancerLetters2004;2〗5:4-150,.6.Cas加J，DiazDeToranzoEG.ToxicEffectsofNiflirtimoxandBenznidazokjTwoDrugsusedagainstAmericanTrypanosomiasis(Chagas，Disease).Bio咖dEnvironScil卿；1:19-33.7.FaundezMPinoL，LetdierP.eta!.，ButhioninesulfoxinsineincreasesthetoxicityofnifbrtitnoxandbenznidazoletoTrypanosomacruzi,AntimicitobAgentsChemother2005;49:126-30.8.DocampoR，StoppaniAOM,GenerationofSuperoxideanionandHydrog幼PeroxideinducedbyNifbrtimoxinr/^pcrKMo加flcth^/.ArchBioch咖Biophys1979;197:317-321.9.MontaltodoMeccaM,DiazEG,CastroJA.NifUrti咖xbiotransformationtoreactivemetabolitesornitriteinliversubcellularfi:actionsandmodelsystems,ToxicoJlLett2002;136:1-8,10.Muelas-SerranoS，Perez-Serr咖J,Gomez-BarrioA，AranVJ'Rodriguez-C祖beiroF.UntrastructuralAlterationsInducedbyNifurtinioxandanotherNi加DerivativeonEpimastigotesof7>^pflwawiacrwf曙ParasitolRes2002;88:97-101.5111.SolariA,OrtizS,SotoA，etal.，TreatmentofTiypanosomacruzi-infectedchildrenwhhMifiirdmox:a3yearfollow-邵byPCR.〗Antimi咖bCh加olher2001;48:515-519.12.MalichG，MarkovicB,WinderC，ThesensitivityandspecificityoftheMTStetrazoliumassayfordetectingthe'invitrocytotoxicityof20chemicalsusinghumancelllines.Toxicology1997;124:179-192.13.GratznerHG.Mo加clona〗antibodyto5-brorao加d5-iodo-d柳yuridine:AnewreagentfordetectionofDNAreplication.Science1982;218:474475.14.FengXJi加gH,BaikJC,EdgarC，EideFF.BDNFDependenceinNeuroblastoma^JNeurosciRes2001;64(4):355-63,15.JaboinJ,'KimCJ,KaplanDR,ThieleCJ.Brain-derivedNeurotrophicFactorActivationofTrkBProtectsNeuroblastomaCellsfromChemotherapy-inducedApoptosisviaPhosphatidyllnositol3，-KiriasePathway.CancerRes2002;62:6756-6763,16.ReynoldsCP,BiedlerJL，SpenglerBA,ReynoldsDA,EossRA,FrenkelEP,SmithRG,Characterizationofhumanneuroblastomacelllinesestablishedbeforeandaftertherapy.JNatlCancerInst1986;76:375-87.17.More加SNJ'MasonRP'DocampoR-ReductionofNifiirtimoxandNitrofluantointoFreeRadicalMetabolitesbyRatLiverMitochondria.JBiolCheml訴4;259:位鄰-6305.18.HilemanEO，LiuJ,AlbitarM，KeatingMJ，HuangP.IntrinsicOxidativeStressinCancerCells:aBiochemicalBasisforTherapeuticSelectivity.C加cerChe咖therPhannacol2004;53:209-219.19.BebrendL,HendersonG,ZwackaRM.ReactiveOxygenSpeciesinOncogenicTransformation.BiochemSocTrans2003;31:1441-1444,20.CarrerasMC,FrancoMC,PeraltaJG,PoderosoJJ.NitricOxide,complexI,andthe■ModulationofMitochondrialReactiveOxygenSpeciesinBiologyandDisease.MolAspectsMed2004;25:125國39.21.Muelas-SerranoS,Le-SenneA,Fernandez-PortilloC,NogalJJ,OchoaC，Gomez-BairioA.InVitroandInVivo'Anti-TrypanosomacnoiActivityofaNovelNitro-derivative.MemInstOswaldoCruz2002;97:553-557.22.Attan站ioA,SchifferD,UltrastructuralDelecticmofDNAStrandBreaksby|nsituEnd-labelingTechniques.JPathol1995;176:27-35.23.ThornbenyNA,LazebnikY,Caspases:enemieswithin.Science1998;281:1312-1316.24.VanNoordenCJ.TheHistory,ofZ>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