Hplc法分析分離鹽酸蘭地洛爾及其中間體的方法
2023-12-10 05:59:47 1
專利名稱：Hplc法分析分離鹽酸蘭地洛爾及其中間體的方法
技術領域：
本發明涉及鹽酸蘭地洛爾分析與分離方法，尤其是一種高效液相色譜法。
技術背景鹽酸蘭地洛爾用於手術時心動過速性心率失常的緊急處置，如心房纖維性顫 動，心房撲動基竇性心動過速等，其結構式為o在其合成的過程當中會引入四個中間體，其結構式分別為OH對於合成鹽酸蘭地洛爾的過程中引入的中間體雜質，不論是在原料藥還是制 劑的過程中都需要進行控制，因此發現一種鹽酸蘭地洛爾分析分離方法具有現實 意義。申請人發現，用以十八垸基鍵合矽膠為固定相的色譜柱(C18 (250mmx4.6 mm))，採用乙腈一 (0.02mol/L憐酸二氫鈉，0.01mol/L的十二垸基硫酸鈉)=50:50為流動相，可以將鹽酸蘭地洛爾及其雜質進行有效分離，從而可以準確控 製鹽酸蘭地洛爾原料藥及製劑的質量。本發明的方法能簡單、快速、準確地分析 鹽酸蘭地洛爾的純度和含量並能有效的控制中間體雜質。 發明內容本發明的提供一種分析分離鹽酸蘭地洛爾及其中間體雜質的高效液相色譜 方法，從而實現鹽酸蘭地洛爾及其中間體雜質的分離測定。本發明所說的用高效液相色譜法分析分離鹽酸蘭地洛爾及其中間體雜質的 方法，是採用以烷基鍵合矽膠為固定相的色譜柱，以一定比例的有機相一離子對 試劑緩衝液為流動相。上述所說的烷基鍵合矽膠為固定相的色譜柱選自辛基鍵合矽膠或十八烷基 鍵合矽膠為固定相的色譜柱，優選十八烷基鍵合矽膠的色譜柱。。本發明的流動相中的有機相選自乙腈或甲醇，優選乙腈。本發明的方法，有機相一離子對試劑緩衝液的比例為40:60 60:40，優選50 : 50。本發明採用的離子對試劑緩衝液選自磷酸鹽緩衝液、醋酸鹽緩衝液，優選磷酸鹽緩衝液，最優選磷酸二氫鈉緩衝液，緩衝液的濃度範圍為0.01mol/L 0.05 mol/L，優選0.01 mol/L 0.03 mol/L，最優選0.02 mol/L。本發明採用的離子對試劑選自10 12個碳的垸基磺酸鈉或硫酸鈉，離子對 試劑的濃度範圍為0.01mol/L 0.05mol/L，優選0.01 mol/L。本發明所述的分析分離方法，可按照以下方法實現(1) 取待處理樣品適量，用甲醇溶解，配製成每0.2mg/ml的混合樣品溶液。(2) 設置流動相流速為1.0mL/min，檢測波長為204 nm,色譜柱溫度為室溫。(3) 取(l)的樣品溶液10 注入液相色譜儀。本發明通過選擇適當的固定相和流動相，以及適當的測定條件，為準確的完成鹽酸蘭地洛爾分離分析提供可一種穩定的方法
圖l最優選條件的HPLCl中l號峰為中間體l、 2號峰為中間體4， 3號峰為中間體2， 4號峰為 鹽酸蘭地洛爾主峰，5號峰為中間體3;可以看出在該條fKF鹽酸蘭地洛爾主峰 可以和四個中間體完全分離開來，且鹽酸蘭地洛爾主峰在11 min左右。圖2流動相為甲醇一 (0.01mol/L磷酸二氫鈉，0.01mol/L十二垸基硫酸鈉) =60 : 40的HPLC2中1號峰為中間體1、 2號峰為中間體4， 3號峰為中間體2， 4號峰為 鹽酸蘭地洛爾主峰，5號峰為中間體3;可以看出在該條件下鹽酸蘭地洛爾主峰 可以和四個中間體完全分離開來，且鹽酸蘭地洛爾主峰在10min左右。圖3流動相為乙腈一 (0.01mol/L磷酸二氫鈉，0.01mol/L十二垸基硫酸鈉) =45 : 55的HPLC3中1號峰為中間體1、 2號峰為中間體4， 3號峰為中間體2， 4號峰為 中間體3， 5號峰為鹽酸蘭地洛爾主峰；可以看出在該條件下鹽酸蘭地洛爾主峰 可以和四個中間體完全分離開來，且鹽酸蘭地洛爾主峰在20min左右。圖4流動相為乙腈一 (0.01mol/L磷酸二氫鈉，0.01mol/L癸垸磺酸鈉)= 50 : 50的HPLC4中1號峰為中間體1、 2號峰為中間體4， 3號峰為中間體2， 4號峰為 鹽酸蘭地洛爾主峰，5號峰為中間體3;可以看出在該條件下鹽酸蘭地洛爾主峰 可以和四個中間體完全分離開來，且鹽酸蘭地洛爾主峰在9min左右。圖5流動相為乙腈一 (0.05mol/L磷酸二氫鈉，0.05mol/L十二烷基磺酸鈉) =50 : 50的HPLC5中1號峰為中間體1、 2號峰為中間體4， 3號峰為中間體2， 4號峰為 鹽酸蘭地洛爾主峰，5號峰為中間體3;可以看出在該條件下鹽酸蘭地洛爾主峰 可以和四個中間體完全分離開來，且鹽酸蘭地洛爾主峰在11 mm左右。
具體實施例方式
實施例l儀器與條件高效液相色譜儀日本島津LC-10Av戶，SPD-10Ayp; 色譜柱C18 (250mmx4.6mm);流動相甲醇—(0.01mol/L磷酸二氫鈉，0.01mol/L十二烷基硫酸鈉)=60:40流速1.0mL/min; 檢測波長204 nm;柱溫室溫；進樣體積10|iL。 實驗步驟分別稱取各中間體與鹽酸蘭地洛爾各5 mg,置於25 mL容量瓶中，加流動 相溶解並稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。並分別稱取單一中間體及鹽酸 蘭地洛爾各5mg，分別置於4個25mL容量瓶中，加流動相溶解並稀釋置刻度， 搖勻，作為定性對照溶液。分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖2，圖1中1號峰為中間體l、 2號峰為中間體4， 3號峰 為中間體2， 4號峰為鹽酸蘭地洛爾主峰，5號峰為中間體3;可以看出在該條件 下鹽酸蘭地洛爾主峰可以和四個中間體完全分離開來，且鹽酸蘭地洛爾主峰在 11 min左右。實施例2儀器與條件高效液相色譜儀日本島津LC-10A甲，SPD-10A甲；色譜柱C18 (250mmx4.6mm);流動相乙腈一 (0.01mol/L磷酸二氫鈉，0.01mol/L十二烷基硫酸鈉)=45 55;流速1.0mL/min; 檢測波長204 nm;柱溫室溫； 進樣體積10pL。 實驗步驟分別稱取各中間體與鹽酸蘭地洛爾各5mg，置於25mL容量瓶中，加流動 相溶解並稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。並分別稱取單一中間體及鹽酸 蘭地洛爾各5mg，分別置於4個25mL容量瓶中，加流動相溶解並稀釋置刻度， 搖勻，作為定性對照溶液。分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖3，圖中l號峰為中間體l、 2號峰為中間體4， 3號峰為 中間體2， 4號峰為中間體3， 5號峰為鹽酸蘭地洛爾主峰；可以看出在該條j牛下 鹽酸蘭地洛爾主峰可以和四個中間體完全分離開來，且鹽酸蘭地洛爾主峰在206min左右o 實施例3儀器與條件高效液相色譜儀日本島津LC-10Avp， SPD-10A， 色譜柱C18 (250mmx4.6mm);流動相乙腈一 (0.01mol/L磷酸二氫鈉，0.01mol/L癸烷磺酸鈉)=50 : 50; 流速1.0mL/min; 檢測波長237 nm;柱溫室溫； 進樣體積lOpL。實驗步驟分別稱取各中間體與鹽酸蘭地洛爾各5mg，置於25mL容量瓶中，加流動 相溶解並稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。並分別稱取單一中間體及鹽酸 蘭地洛爾各5mg,分別置於4個25mL容量瓶中，加流動相溶解並稀釋置刻度， 搖勻，作為定性對照溶液。分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖4，圖中l號峰為中間體l、 2號峰為中間體4， 3號峰為 中間體2， 4號峰為鹽酸蘭地洛爾主峰，5號峰為中間體3;可以看出在該條件下 鹽酸蘭地洛爾主峰可以和四個中間體完全分離開來，且鹽酸蘭地洛爾主峰在9 min左右0 實施例4儀器與條件高效液相色譜儀日本島津LC-10Av; ， SPD-10Avp; 色譜柱SAX (250mmx4.6mm)強陰離子交換柱；流動相乙腈一 (0.05mol/L磷酸二氫鈉，0.05mol/L十二垸基磺酸鈉)=50 50;流速1.0mL/min; 檢測波長204 nm;柱溫室溫； 進樣體積10pL。實驗步驟分別稱取各中間體與鹽酸蘭地洛爾各5 mg，置於25mL容量瓶中，加流動 相溶解並稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。並分別稱取單一中間體及鹽酸 蘭地洛爾各5mg，分別置於4個25mL容量瓶中，加流動相溶解並稀釋置刻度， 搖勻，作為定性對照溶液。分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖5，圖中l號峰為中間體l、 2號峰為中間體4， 3號峰為 中間體2， 4號峰為鹽酸蘭地洛爾主峰，5號峰為中間體3;可以看出在該條件下 鹽酸蘭地洛爾主峰可以和四個中間體完全分離開來，且鹽酸蘭地洛爾主峰在9 min左右o
權利要求
1. 一種分離分析鹽酸蘭地洛爾的高效液相色譜方法，其特徵在於以烷基鍵合矽膠為固定相的色譜柱，以有機相-離子對試劑緩衝液為流動相。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於選擇辛基鍵合矽膠或十八烷基鍵合 矽膠為固定相的色譜柱，優選十八垸基鍵合矽膠的色譜柱。
3. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述有機相選自甲醇或乙腈，優選 乙腈。
4. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述有機相與離子對試劑緩衝液的 比例範圍為40 : 60 60 40，優選50 50。
5. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述的離子對試劑緩衝液選自磷酸 鹽緩衝液、醋酸鹽緩衝液，優選磷酸鹽緩衝液，最優選磷酸二氫鈉緩衝液。
6. 根據權利要求4所述的方法，其特徵在於所述的離子對試劑選自10 12個碳 的烷基磺酸鈉或硫酸鈉，優選十二烷基磺酸鈉或十二烷基硫酸鈉，最優選十 二烷基硫酸鈉。
7. 根據權利要求4所述的方法，其特徵在於緩衝液的濃度範圍為0.01 mol/L 0.05 mol/L，優選0.0mo/L 0.03 mo/L，最優選0.02 moI/L。
8. 根據權利要求4所述的方法，其特徵在於離子對試劑的濃度範圍為0.01 mol/L 0.05 mol/L，優選0.01 mol/L。
9. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述的方法包括以下幾個步驟(1) 取待處理樣品適量，用甲醇溶解，配製成混合樣品溶液。(2) 設置流動相流速為0.5 1.5mL/min，檢測波長為204nm。(3) 取(1)的混合樣品溶液2-50 ^L注入液相色譜儀，完成鹽酸蘭地洛爾原料 藥及其中間體的分離與分析。
10. 根據權利要求9所述的方法，其特徵為流動相的流速為1.0 mL/min。
全文摘要
本發明涉及一種鹽酸蘭地洛爾的分離與分析測定的高效液相色譜法方法，選擇辛基鍵合矽膠或十八烷基鍵合矽膠為固定相的色譜柱，優選十八烷基鍵合矽膠的色譜柱，採用該方法可以實現鹽酸蘭地洛爾及其雜質的快速分離和分析。
文檔編號G01N30/02GK101271085SQ20071006457
公開日2008年9月24日 申請日期2007年3月21日 優先權日2007年3月21日
發明者楊 胡 申請人:北京德眾萬全藥物技術開發有限公司