一種以半夏為原料發酵植物促生菌在抗蟲中的應用的製作方法

2023-11-11 18:38:47 1

一種微生物發酵製備殺蟲劑的方法，涉及到用市售短小芽孢桿菌、蘇雲桿菌和解澱粉芽孢桿菌h47凍乾粉，以半夏為原料發酵製備殺蟲劑的方法，屬於生物工程及發酵技術領域。

背景技術：

半夏為天南星科多年生草本植物。高15-35cm，塊莖近球形，直徑0.5-3.0cm，基生葉1～4枚，葉出自塊莖頂端，葉柄長5-25cm，葉柄下部有一白色或棕色珠芽，直徑3-8cm，偶見葉片基部亦具一白色或棕色小珠芽，直徑2-4mm。花單性，花序軸下著生雌花，無花被，有雌蕊20-70個，花柱短，雌雄同株；雄花位於花序軸上部，白色，無被，雄蕊密集成圓筒形，與雌花間隔3-7mm，其間佛焰苞合圍處有一直徑為1mm的小孔，連通上下，花序末端尾狀，伸出佛焰苞，綠色或表紫色，直立，或呈「s」形彎曲。半夏塊莖含揮髮油、β-谷甾醇-β-d-葡萄糖甙、3，4-二羥基苯甲醛，又含藥理作用與毒芹鹼及菸鹼相似的生物鹼具有一定的殺蟲作用。但植物性殺蟲劑多用有機溶劑或煎煮提取，1)不利於節能也有較大的環境風險；2)影響活性物質的穩定性和遺失活性物質；3)增加成本使得開發應用困難較大，作用效果緩慢，因此給植物源殺蟲劑的研發和生產帶來了巨大的經濟困難。利用合適的植物促生菌發酵半夏，不僅有利於生理活性物質的提取，還不易造成活性物質的失活，促生菌本身還有較好的殺蟲防病和促生作用。有利於改善植物生長和增強殺蟲效果。有利於環境保護和半夏植物本身的有效利用。

技術實現要素：

本發明利用半夏的豐富資源，通過微生物進行發酵產生抗氧化因子及植物促生菌產生酶類、醇類及芳香物質等多類有義代謝產物從而提高殺蟲劑的藥效及其功能，本發明擁有著發酵時間短，有害微生物滋生少甚至沒有，避免由於過長時間發酵而產生的病毒，以及能產生脂肽等生理活性物質等優點，從而提高殺蟲防病的功效和植物生長的促生作用。

本發明配方及用法：

(1)挑選材料：選擇新鮮、質量好的半夏為發酵主原料。

(2)材料的處理：先用自來水衝洗，再使用無錫百年尚水飲品有限公司提供的百年尚水清水洗兩遍，最後再用0.9％的nacl溶液侵泡120秒，瀝乾備用。

(3)菌種培養：使用無錫百年尚水飲品有限公司提供的百年尚水配製lb培養基，將原保存菌株活化，培養約48小時得到的菌液備用；

(4)接種發酵：均按照接種比例1～3％，將市售短小芽孢桿菌、蘇雲桿菌和解澱粉芽孢桿菌h47按一定的比例接入發酵原液，各菌濃度為106cfu/ml，發酵3～9d，ph值5.0～8.0，溫度25℃～35℃。

(5)後期處理製作：粗過濾，初步篩掉大顆粒殘渣，避免半夏久放容易造成酸敗，過濾條件：過濾篩數目為20～32目。細過濾：進一步濾掉小型顆粒殘渣，使液態呈現較清澈的狀態，過濾條件：過濾篩數目為80～100目，既得以半夏發酵原料的殺蟲劑。

步驟(1)原料的製備方法包括如下步驟：

(11)所使用的工具、器具均要滅菌，無油膩。

(12)把半夏用純淨水洗淨，再用純淨水或0.9％的鹽水浸泡瀝乾。

(13)再將半夏置於已滅菌的容器中，後加入生活垃圾及澱粉類物質和純淨水，其中發酵原液中體積比半夏：生活垃圾：澱粉類物質:純淨水＝1～3:1～2:0.01:7～8，即得半夏發酵原液。

發明的有益效果：

本利用合適的植物促生菌發酵半夏，不僅有利於生理活性物質的提取，保持活性物質的穩定性，促生菌本身可通過優勢菌株抑制了其他雜菌滋生從而有較好的殺蟲防病和促生作用。有利於改善植物生長和增強殺蟲效果。有利於環境保護和半夏植物本身的有效利用。提高殺蟲劑的經濟價值。

具體實施方式

下面將結合本發明實施例，對本發明的技術方案進行清楚、完善地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動的前提下所獲得的其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。

實施例1

一種以半夏為原料發酵製備殺蟲劑的方法，包括以下步驟：

(1)選擇新鮮、質量好的半夏做為發酵主要原料。

(2)純淨水清水洗兩遍，最後再用0.9％的nacl溶液浸泡，低溫殺菌，然後瀝乾，裝入純淨水清洗好的容器中，大概佔體積的20％，加入佔總液體體積5％的生活垃圾及1％的澱粉類物質為發酵原液備用。

(3)配製lb培養基，將原保存菌株活化，100r/min振蕩培養約48小時得到的發酵菌液備用；

(4)均按照接種比例3％，將市售短小芽孢桿菌、蘇雲桿菌和解澱粉芽孢桿菌h47按等比分別取接入發酵原液，120r/min振蕩培養發酵6d，ph值6.0，溫度25℃。

(5)先進行粗過濾，過濾篩數目為20～32目。然後細過濾，過濾篩數目為為80～100目，即得半夏為發酵原料的殺蟲劑。

實施例2

一種以半夏為原料發酵製備殺蟲劑的方法，包括以下步驟：

(1)選擇新鮮、質量好的半夏做為發酵主要原料。

(2)純淨水清水洗兩遍，最後再用0.9％的nacl溶液浸泡，低溫殺菌，然後瀝乾，裝入純淨水清洗好的容器中，大概佔體積的30％，加入佔總液體體積10％的生活垃圾及1％的澱粉類物質為發酵原液備用。

(3)配製lb培養基，將原保存菌株活化，100r/min振蕩培養約48小時得到的發酵菌液備用；

(4)按照不同接種比例(市售短小芽孢桿菌：蘇雲桿菌：解澱粉芽孢桿菌＝2：3：1)，將接種量為2％市售短小芽孢桿菌：3％蘇雲桿菌：1％解澱粉芽孢桿菌h47分別取接入發酵原液，120r/min振蕩發酵6d，ph值6.0，溫度25℃。

(5)先進行粗過濾，過濾篩數目為20～32目。然後細過濾，過濾篩數目為為80～100目，即得半夏為發酵原料的殺蟲劑。

實施例3

一種以半夏為原料發酵製備殺蟲劑的方法，包括以下步驟：

(1)選擇新鮮、質量好的半夏做為發酵主要原料。

(2)純淨水清水洗兩遍，最後再用0.9％的nacl溶液浸泡，低溫殺菌，然後瀝乾，裝入純淨水清洗好的容器中，大概佔體積的40％，加入佔總液體體積15％的生活垃圾及1％的澱粉類物質為發酵原液備用。

(3)配製lb培養基，將原保存菌株活化，100r/min振蕩培養約48小時得到的發酵菌液備用；

(4)按照不同的接種比例(市售短小芽孢桿菌：蘇雲桿菌：解澱粉芽孢桿菌＝1：2：3)，將接種量1％市售短小芽孢桿菌、2％蘇雲桿菌和3％解澱粉芽孢桿菌h47分別取接入發酵原液，120r/min振蕩發酵6d，ph值6.0，溫度25℃。

(5)先進行粗過濾，過濾篩數目為20～32目。然後細過濾，過濾篩數目為為80～100目，即得半夏為發酵原料的殺蟲劑。

實施例4

一種以半夏為原料發酵製備殺蟲劑的方法，包括以下步驟：

(1)選擇新鮮、質量好的半夏做為發酵主要原料。

(2)純淨水清水洗兩遍，最後再用0.9％的nacl溶液浸泡，低溫殺菌，然後瀝乾，裝入純淨水清洗好的容器中，大概佔體積的50％，加入佔總液體體積20％的生活垃圾及1％的澱粉類物質為發酵原液備用。

(3)配製lb培養基，將原保存菌株活化，100r/min振蕩培養約48小時得到的發酵菌液備用；

(4)按照不同的接種比例(市售短小芽孢桿菌：蘇雲桿菌：解澱粉芽孢桿菌＝1：3：2)，將接種量為1％市售短小芽孢桿菌、3％蘇雲桿菌和2％解澱粉芽孢桿菌h47分別取接入發酵原液，120r/min振蕩發酵6d，ph值6.0，溫度25℃。

先進行粗過濾，過濾篩數目為20～32目。然後細過濾，過濾篩數目為為80～100目，即得半夏為發酵原料的殺蟲劑。

本發明中的半夏含有豐富的次級代謝物質以及半夏醚提物及醇提物等對植物具有促生作用且藥效明顯，但是不僅僅限於此，可以根據實際情況，確定半夏的鮮重或是乾重的添加量或者選擇澱粉類物質及生活垃圾混合在一起，只要能達到殺蟲劑配比合理、殺蟲劑的藥效就可以發揮明顯作用。

另外發酵原液的選擇和配比、接菌量也不限於實施例所舉的組合，可根據實際情況選擇不同的組合。

以上所述僅為本發明的較佳實例而已，並不用以限制本發明，凡在本發明的思路和原則之內，所做的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。