纖維蛋白溶酶原激活劑的抑制劑治療炎症和創傷的用途的製作方法

2023-12-05 15:50:11 2

專利名稱：纖維蛋白溶酶原激活劑的抑制劑治療炎症和創傷的用途的製作方法
各種疾患是由於纖維蛋白溶酶活性的調節作用受到損傷。纖維蛋白溶酶是由纖維蛋白溶酶原經纖維蛋白溶酶原激活劑(PA)如UPA(尿PA)或組織纖維蛋白溶酶原激活劑(tPA)作用而生成的。纖維蛋白溶酶原激活劑的抑制劑(PAI)可抑制各種PA。生理相關的PAI現在已知有兩種不同的類型纖維蛋白溶酶原激活劑的抑制劑Ⅰ型(PAI-1)和纖維蛋白溶酶原激活劑的抑制劑Ⅱ型(PAI02)，這兩種PAI都是蛇根平型的抑制劑。
眼睛、耳或皮膚發生炎症，例如角膜損傷時，通常淚液中纖維蛋白溶酶的活性會增高。纖維蛋白溶酶又會使細胞間質的纖維mectin降解、促進血管生成並使膠原酶原激活成有活性的膠原酶，後者可使膠原分子降解(Barlati等εxp.EyeRes.51，1-9(1990)，為了治療由於增高的纖維蛋白溶酶活性而引起作用的各種病理狀態，已使用低分子量物質如2-氨基己酸或止血環酸(反式-4-氨乙基-環已羧酸)。例如止血環酸/明適於治療骨關節炎。用止血環酸也可降低潰瘍性結腸炎及相關疾病的纖維蛋白溶解活性的過剩增高。然而上面提及的低分子量纖維蛋白溶酶抑制劑因有毒副作用是有缺點的。
另一種纖維蛋白溶酶抑制劑可用抑胰肽酶，在有些情況下用它可以治療角膜潰瘍。
現在令人意外地發現一些炎症，特別是眼、耳或(或)皮膚炎證，但也可例如在骨關節炎或潰瘍性結腸炎可以方便地用纖維蛋白溶酶原激活劑的抑制劑加以治療。
因此，本發明內容是應用纖維蛋白溶酶原激活劑的抑制劑，作為製備治療和(或)眼、耳、皮膚、骨關節炎和(或)潰瘍性結腸炎的藥物。
尿激酶(uPA)和(或)tPA，尤其是uPA和(或)tPA被抑制。適宜的抑制劑尤其是PAI-1和(或)PAI-2及其突變體或變異體，特別是PAI-2，尤其是PAI-2片斷，成熟的PAI-2的N端胺基酸1-82或1-84。該抑制劑可單獨應用或與其它藥物合用，如抗生素，既可局部用藥也可全身用藥。用於骨關節炎時，有效物質最好是關節內或手術中期給藥(開放型或關節鏡檢查)。局部用藥的有效劑量一般是1-300000尿激酶抑制單位，優選為500-50000尿激酶抑制單位，靜脈注射或加溶的肌肉注射用藥劑量為每Kg體重50-750000尿激酶抑制單位。
抑制劑特別是PAI-2可加入生理可溶性穩定劑以使穩定化，例如加入白蛋白，聚纖維物質，明膠水解液，甘氨酸，半胱氨酸，葡萄糖，乳糖，麥芽糖和(或)蔗糖。
這些抑制劑的適應症一般是眼睛炎症疾患的局部治療和(或)預防作用，例如角膜潰湯，眼色素層炎，結膜炎，術中和術後治療，眼結構。特別是炎症過程的保護，或者是炎性耳病，如中耳炎，鼓膜炎，炎症過程的鼓膜破壞，但也可用於具有炎性症候群的皮膚疾患，如紅斑，尤其是當炎證細胞浸潤到組織時，這此症細胞例如有巨噬細胞，單核細胞和粒細胞，皮膚棘層松解，水皰形成，例如天皰瘡，溼疹，接觸性皮炎和特應性皮炎，炎症過程的燒灼感，脈管炎，促進傷面癒合，開放性創傷和皮膚潰瘍的治療等。其它的適應症是治療表皮損傷，骨關節炎，潰瘍性結腸炎，節段性迴腸炎，IBD(炎性腸疾患)，胰腺炎，痤瘡，治療上皮損傷，角膜損傷，眼損傷相關的瘢痕，鞏膜炎，非治癒性角膜糜爛，乾燥病和角化病。這些抑制劑還可以單獨應用或與其它有效物質合用，優選以衝洗液用於術中和術後處理和(或)治療這些炎症的開放性創傷。另一個有利的應用方式是在配帶接觸式透鏡之前單用本抑制劑或與其它藥物合用的溶液治療，以抑制新的血管形成，並且用於治療接觸式透鏡配帶者的眼損傷，眼炎症和(或)角膜浸潤以及眼角膜炎症。
下面詳細說明纖維蛋白溶酶原激活劑的抑制劑如PAI-2的一些優選的用途。
1.用於治療雷射角膜切除術造成的眼角膜損傷，但也可用於角膜切開術的治療。這種雷射角膜切除方法可用於校正近視和遠視的折光率，校正散光，校正角膜缺損，去除瘢痕，用於角膜成形術，角膜出現乾燥時使其平滑，角膜的新近損傷，眼睛的感染，例如病毒(如皰疹)、細菌、真菌或寄生蟲，上皮層下的鈣沉積(衰老象徵)，結膜與角膜的粘連(翼狀胬肉)。
2.用於眼睛發炎和眼睛混濁，例如雷射治療後，正常眼科手術(例如玻璃體切開術，白內障手術，晶狀體手術，晶狀體置換，晶狀體移植，角膜成形術，角膜移植)，結膜炎，角膜結膜炎，角膜結膜炎乾燥症，虹膜炎，虹膜睫狀體炎，角膜炎，格雷夫斯眼病，莫倫潰瘍，脈管炎，眼色素層炎，眼睛過敏性症候，感染，代謝紊亂，炎性疾病和自家免疫性疾病(例如全身性紅斑狼瘡，維格奈肉芽腫病，風溼性關節炎，肉樣瘤病，多關節炎，類天皰瘡，天皰瘡，多形性紅斑，斯耶格倫綜合症，炎性腸病，多發性硬化病，重症肌無力，角化病，鞏膜炎。
3.用於預防眼外科手術或損傷後的瘢痕。
4.用於提高創傷癒合和最佳再生的速度(例如使老的基質和新生成的上皮之間的界面平滑)，使手術或損傷後上皮組織與基質的代謝功能正常化和穩定化。
5.用於抑制由於視網膜病特別是糖尿病引起的新血管形成;視網膜脫離，視網膜血管損傷，視網膜和眼色素層炎症，角膜移植。
6.用於眼球移植，特別是(角膜移植，這是由於PAI-2降低了PMN的吸附作用，可以降低敏感性和阻止新血管形成，而對創傷癒合不會同時有不良作用，這就減少了排斥作用的危險。
7.用於眼部水腫，例如斑-水腫，斑下-水腫，光照性凝固後的水腫，角膜水腫，結膜水腫，視網膜水腫，眼部周圍的水腫。
8.用於眼部區域的浸潤，特別是角膜附近，眼房區域，結膜和鞏膜區域。
9.用於治療角膜潰瘍。
PIA-2例如可按如下方法製備如EP0238275所述，分出PAI-2CDNA，克隆，連接到載體上，用本領域熟知的方法將其轉移或轉染到適宜的宿主細胞上。按已知的方法使細胞繁殖，破壞，為了純化由例如大腸桿菌溶菌液得到的rPAI-2，適於且各種組合的層析方法(例如經Q-瓊脂糖凝膠進行離子交換層析，經苯基-瓊脂糖凝膠的疏水層析，於Sephacryl或Fractogel上凝膠過濾)。由酵母溶菌液純化rPAI02的適宜方法包括有基本純化(去除細胞，用球磨破碎細胞，支叉流動過濾，交叉流動濃縮)和最後高純化(層析法，如WO91/02057中所述或用離子交換層析和免疫親和層析)。比活性按對人尿激酶抑制作用計，一般為150000單位/ml或更高。
PAI-1可按類似的方法製備，如WO90/13648所述。
纖維蛋白溶酶原激活劑的抑制劑的優點特別表現在對同時具有抑制新血管形成的這些炎症的單一治療中，一般是無毒的，沒有副作用。由於對纖維蛋白溶酶原激活劑的抑制作用允許用藥的濃度明顯低於纖維蛋白溶酶抑制劑的濃度，所以同時用其它類有效物質或與之合用，例如抗生素特別有優點。此外，纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑的用量明顯低於纖維蛋白溶酶抑制劑的用量，而且，通常減低了過敏反應的危險，也觀察到它與纖維蛋白溶酶抑制劑相比，有優越的長效作用。
實施例1PAI-2用於治療角膜潰瘍在Cejkova等1975年(HistoChemistry4571-75)所述的角膜潰瘍的家兔模型，將PAI-2以不同的濃度(5-100μg/ml)局部用於眼睛上(25μg/ml，每日三次;100μg/ml每日兩次)。對照組用等體積(1ml)的溶劑(生理鹽水，pH7.2)，每日兩次。參比物是抑胰肽酶(前兩周用5000IU/ml，每日兩次;後兩周劑量降為2500IU/ml)。
用0.75M氫氧化鈉處理後，藉助內徑為11mm的塑料管流出大量炎症細胞這些分泌蛋白水解活性，同時誘發角化細胞在角膜上皮組織合成其它一系列的蛋白多糖。這引起角膜的次序結構發生紊亂，從而不導致失去透明度。
測定下面的參數，角膜的穿孔，潰瘍的形成，新血管形成，淚液中纖維蛋白溶酶的活性，炎症特徵，如炎證細胞的流入，眼睛透明性，虹膜的可見性(表1)。與安慰劑組比較，PAI-2組有如下優點可將纖維蛋白溶酶活性降到最低程度。用抑胰肽酶降低纖維蛋白溶酶活性，為了達到同樣的程度，須經常頻繁地用藥。用PAI-2可完成阻止穿孔和潰瘍的形成。用抑胰肽酶也可得到同樣的效果。令人意外的是，用PAI-2對由於實驗性刺激所流入的炎症細胞數目劇烈地經久地降低，甚至降到健康組織的正常水平。
下面陽性的作用又令人意外地得到了PAI-2發生的對完全治癒所絕對必要的抑制新血管形成，以致可以恢復眼睛的透明度，並且虹膜又可以看見了。用抑胰肽酶治療雖然可阻斷角膜潰瘍和穿孔，但仍然失去了透明度。甚至用比較低劑量的PAI-2所得到的陽性效果，用較高劑量的抑胰肽酶也不能達到。
用PAI-2對纖給蛋白溶酶原激活劑的抑制作用與用例如抑胰肽酶對纖維蛋白溶酶的抑制作用相比甚至還有另外的優點用纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑單獨治療，其結果與常規法治療相比有優點。所用的有效成分的極其強的作用可以用非常低的抑制劑濃度，以致也可以很好地與例如抗生素如氯黴素聯合治療。
另一個試驗是在例如用鹼作用後不馬上治療角膜潰瘍，而是在10天後才開始。在這後來的時刻淚液中纖維蛋白溶每活性已經升高達2-2.5μg/ml。
在相同的時間(誘導後的10天)開始用抑胰肽酶治療(5000國際單位/ml，局部應用，每日2次)，使淚液中可檢測出的活性纖維蛋白溶酶的濃度回復到正常值。但這種作用只維持大約2小時，而後纖維蛋白溶酶的水平又升高。
在同樣的時間開始用PAI-2治療(例如100μg/ml，局部應用)，活性的纖維蛋白溶酶的濃度回復到正常值(0.4-0.6μg/ml)，一次應用PAI-2的效果意外地保持非常長的時間。因此，例如PAI-2一次給藥後，淚液中纖維蛋白溶酶的濃度48小時後仍然是1μg/ml。在這種情況下，受試的PAI-2的所有三種濃度(5，25，100μg/ml)都適於降低潰瘍過程。用PAI-225μg/ml濃度可獲得最佳治療結果。
這種意外長時間的持續作用只能在用PAI-2抑制纖維蛋白溶酯原激活劑才觀察到，而用抑胰肽酶不能抑制纖維蛋白溶酶。
當局部應用甾體如地塞米松-磷酸納治療眼睛時，會產生副作用，如玻璃體腫脹的變化和眼內壓的變化，而且PAI-2治療正常眼睛時，不會有副作用。因此，組織學上例如動脈基質的層狀結構樣式和生化指標，例如角膜的氫化作用、酶活性(乳酸脫氫酶，酸性磷酸酶，酸性糖苷酶，鹼性磷酸酶，琥珀酸脫氫酶)都沒有變化。此外，還可指出，除了對炎症有成功的抑制作用外，不會對上皮再生作用產生抑制。
淚液中纖維蛋白溶酶活性的測定小紙盤(Whatman濾紙，直徑5mm)用D-Val-Leu-Lys-三氟甲胺基香豆素(FCA，酶系統產物出品，LiVermore，加州，美國)的底物溶液浸潤並乾燥，底物溶液製備如下1mg底物溶解於4滴N，N-二甲基甲醯胺中，加入1ml0.1Mtris-Hcl(pH7.2)。纖維蛋白溶酶0.2-0.5μg/ml溶液的製備是將纖維蛋白溶酶(Sigma)溶解於0.1Mtris-Hcl的pH7.2緩衝溶液。各種濃度的溶液20μl放到預先用底物溶液處理的紙盤中，然後與用淚液浸潤的紙盤一起在潮溼房室中37℃恆溫中保溫。為了測定淚液中纖維蛋白溶酶的濃度，將紙盤放在角膜上，淚液被吸收5秒鐘。於37℃紙盤保溫時，每隔2h於紫外光下測定。淚液樣80在紫外光下發射的黃色螢光的強度與已知濃度的纖維蛋白溶酶樣品樣比較(已知纖維蛋白溶酶濃度的紙盤的校正圖)，從而可以確定樣品中的纖維蛋白溶酶的活性。
表1鹼誘導的角膜潰瘍的治療試驗組第1組安慰劑組(生理鹽水;一日兩次)第2組抑胰肽酶組(5000國際單位/ml，一日兩次)第3組rPAI-2(100μg/ml;一日兩次)第4組rPAI-2(25μg/ml;一日兩次)
實施例2PAI-2用於角膜上皮組織的再生用家兔模型研究了PAI-2對角膜上皮組織的再生作用。
模型說明用體重為2.5～3.0kg成年灰兔進行研究。動物靜脈注射硫賁妥(25mg/ml/kg體重)使麻醉。然後將眼睛固定，機械造成角膜損傷用格雷費刀仔細將上皮組織兩次去除(間隔一周)，將不同濃度(5-50μg/ml)PAI-2(於PBS緩衝液，pH7.2)局部點在眼上，每日三次。對照組織動物用同體積(0.5ml)PBS緩衝液(pH7.2)或抑胰肽酶(60μg/ml)或氟比洛芬(0.1%溶液)的PBS緩衝溶液(pH7.2)。產生損傷後的動物在不同時間(1，4，7，14，21，28天後)被處死，用組織學和組織化學方法檢查角膜結構。測定淚液中纖維蛋白溶酶活性並與組織學數據作相關性處理。照相記錄眼睛的光學形象，每周兩次。纖維蛋白溶酶活性按實施例1所述方法進行。處死動物後立刻摘除眼球，切除角膜或眼睛的整個前部。
一些角膜用麥克格溫銀浸滲法處理(1955)。剝離上皮組織後，將樣品置於明膠中。所有其它的方法用於整個眼睛的前部。一部分用被丙酮-乾冰冷卻的石油醚使其停止。在冷凍狀態下，平行於或垂直於眼表面切片(12μm厚)。將切片轉移到未預冷的載片或半透膜上，進行葡萄糖胺聚糖，氨基肽酶M(APM)，二肽肽酶Ⅳ(DPPⅣ)，r-穀氨醯轉肽酶(GGT)，鹼性磷酸酶(AlP)，Na+/K+一依頓的三磷酸腺苷酶(ATPase)和脫氫酶(琥珀酸脫氫酶SDH，乳酸脫氫酶LDH)測定。在測定APM，DPPⅣ、GGT和AlP之前，將切片用氯仿和丙酮(1∶1)的冷混合物固定2分鐘。AlP用萘酚-AS-MX-磷酸鹽(Cal-biochem，La Jolla;加州，美國)和快藍B鹽(Michrome，Gurr，Poole，英國)的偶氨偶聯方法測定;APM用丙氨醯-4-甲氧基-β-萘胺-丙氨醯-MNA(Bachem，Bubendorf，瑞士)和快藍B鹽(Michrome，Gurr，英國)測定;DppⅣ用Gly-Pro-MNA(Bachem，瑞士)和快藍B鹽(Michorme，Gurr，英國)測定;GGT用r-Glr-MNA(Bachem，瑞士)，Gly(Lachema，Brmo，捷克)和快藍B按Lojda等(1979)的方法測定。半透膜上的切片用來測定酸性磷酸酶(AcP)-用偶氮偶聯反應測定，即同萘酚-AS-BI-磷酸鹽(Calbiochem)和P-品紅六偶氮鹽反應，後一試劑是由無吖啶的品紅(Merck，Darmstadt，德國)製備的;半透膜上的切片還測定β-葡糖苷酸酶(β-glu)和N-乙醯-β-D-氨基葡糖苷酶(Ac-Glu)底物是萘酚-AS-BI-β-葡糖苷酸和萘酚-AS-BI-N-乙醯-β-D-氨基葡糖苷(二者為Calbiochem出品)，二者的偶聯反應都用P-品紅六偶氮鹽。酸性β-半乳糖苷酶(β-Gal)用Lojda的靛藍生成方法(Cejkova和Lojda，1975;Lojda等，1979)用4-氯-5-溴-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷(Cyclo Chemicals，洛杉磯，加州，美國)測定。ATP酶用ATP-Tris和Ba2+鹽按Cejkova和Lojda(1978)方法測定。脫氫酶用Lojda等(1979)方法在未固定的冷凍切片上用硝基BT(Lachema，Brno，捷克)作為電子受體加以測定。為了測定氨基葡萄糖聚糖，將切片固定在冷乙醇中5分鐘，用1%濃度的含有不同濃度NgCl2的Alcian藍溶液染色(Cejkova等，1973)，但也可用1%濃度的Alcian藍在3%乙酸的溶液(pH2.5)染色，眼球前部的其餘部分用4%多聚甲醛於0.1M磷酸緩衝液(pH7.2)固定，然後冷凍切片。將12μm厚的切片轉移到用白蛋白覆蓋的載片上，解凍乾燥。被固定的切片用來測定DPPⅣ(用Gly-Arg-MNA，Bachem，瑞士，和硝基水楊醛，NSA，Merck)和DPPⅡ(用Lys-pro-MNA和快藍B)(Lojda法1985和Cejkova和Lojda，1986)。一些被固定的角膜用於作組織學變化的檢查(用蘇木素-曙紅染色)。
緩衝液對照未處理眼睛的纖維蛋白溶酶活性在損傷後2h內由0.2-0.4μg/ml增加，1日後達到1.0-2.0μg/ml，到第7日仍維持此水平，到第14日降至0.2～0.4μg/ml，21日後低於0.2μg/mg(見表2)。
上皮組織從角膜邊緣開始再生，含有各種不同的酶活性(DPPⅣ，酸性糖苷酶和溶酶體蛋白酶(見表3))。去上皮後4天內，炎症細胞(特別是多形核嗜中性粒細胞，DMN)向角膜基質大量滲入。在外周發生角膜新血管形成作用。一些角化細胞壞死，這些被鄰近的角化細胞取代。在14-21日後，上皮細胞再生成完全。應當提及的負性結果是血管形成作用和失掉透明度(透明度未能完全恢復)。發生的角膜渾濁是不可逆的。
用氟比咯芬治療淚液中纖維蛋白溶酶活性的增加與緩衝液對照組相同(見表2)。但與緩衝液對照組相反，炎症細胞流入角膜基質較少，新血管形成作用受阻但未完全阻斷。某些眼睛未發生上皮再生成作用，一些甚至被抑制了。角膜上皮組織只有很低的ATPase和GGT活性。這些數據列於表3。
用抑胰肽酶或PAI-2治療整個實驗過程中纖維蛋白溶酶活性顯著降低。抑胰肽酶治療組的最大濃度為1.0μg/ml，而PAI-2治療組只有0.4μg/ml(見表2)。這兩個治療組的DPPⅣ，酸性糖苷酶和溶酶體水解酶的活性比較弱，而ATPase和GGT的活性是正常的。用抑胰肽酶治療時，只有較少的炎症細胞流到角膜基質中，在PAI-2組中，幾乎未檢測到炎症細胞的流入。兩個治療組都恢復了透明度。抑胰肽酶組至14日後創傷癒合尚未完全，而PAI-2組在去上皮後第10天創傷癒合就已完全。用抑胰肽酶治療時不能避免角膜的新血管形成作用，而PAI-2治療時則完全阻斷了血管形成(各種濃度均阻斷)。
因此，用PAI-2或纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑治療的優點是增加了上皮再生成的速率，完全阻止了新血管形成，完全而迅速恢復透明度(比用抑胰肽酶或其它物質要迅速得多)。PAI-2非常好地抑制了角膜和基質的炎症。因此，由於不會在炎症區域檢測出任何PWN。用PAI-2治療過程中，角膜上皮組織的酶活性會非常迅速地回復正常。另一個優點是所用的PAI-2濃度比用抑胰肽酶濃度低得多。PAI-2濃度甚至為10ag/ml時仍完全有活性。PAI-2是另一優點因此可同時與其它有效物質合用。
表3家兔眼角膜的反覆去上皮組織化
實施例3PAI-2用於治療眼損傷和術中和術後治療本實驗按實施例2所述方法進行和評價。然而此處不剝離上皮組織，而是用手術刀切口使角膜損傷，切的深度是角膜基質厚度的60-80%，並包括了角膜的所有表面(由邊緣到5mm)。角膜切口後，淚液中纖維蛋白溶酶活性較迅速地增高(2小時內)，數日內維持高水平(見表4)。僅在1日後炎症細胞就移入到創傷2區域。這就有可能測定創傷附近的溶酶體水解酶和糖苷酶增加的活性。從第1到第7日上皮細胞就移入到切口傷處。10日後切口傷處被上皮細胞充滿。不過，移入到基質底層的細胞的附著力非常差，因而真正的傷封口來得緩慢遲滯。傷癒合時膠原-原纖維的排布是無規則的。在創傷部位檢測不到氨基葡萄糖聚糖。而在該部位的糖苷酶特別是β-半乳糖苷酶的活性增加了。肉眼觀察表明切口傷處在一些情況下暫時失去了透明度，在創傷癒合的第4到第7日失去透明度達最大程度。角膜被非透明性的疤痕組織癒合。角膜透明度變化是非可逆的，數據列於表5。
用PAI-2治療在治療的全過程中，用PAI-2治療的動物淚液中只檢出最低量的纖維蛋白溶酶的活性。最大活性為0.4μg/ml。與緩衝液對照組相反，用PAI-2治療的動物完全停止了炎症。例如用PAI-2治療的第1天在緊靠眼基質創傷處就檢測不到炎症細胞。角化細胞的激活發生得較早。移入的上皮細胞只有比較低的溶酶體水解酶的活性，而GGT、ATPase和SDH的活性則很快回復正常。只4日後切口傷處完全被上皮細胞充滿。這些細胞非常好地附著在基質底層。在第10日原來形成的裂開的切口傷處又完全長平。基質的較深層被鄰近的角化細胞的參與(代謝和細胞分裂活性)而癒合。14日後創傷完全癒合。新形成的角化細胞呈現正常的代謝活性(例如有關GGT活性)，而沒有炎證的證據。總之，用PAI-2治療可以使創傷以相當快的速度癒合並且癒合的質量大大改善了。角膜創傷的癒合生成完全透明的組織，完全不會出現瘢痕。本發明的重要指標是PAI-2在兩種濃度(10μg/ml和20μg/ml)下就能達到治療效果。
PAI-2數據列於表5。
用抑胰肽酶的治療與緩衝液對照組相比，淚液中纖維蛋白溶酶的濃度降低了(見表3)。切口傷處以正常速率癒合(低於PAI-2)。移入的上皮細胞中溶酶體水解酶和糖苷酶活性與PAI-2的效果相比較降低了。新生成的上皮細胞與基質的附著力不像用PAI-2治療動物的那樣強。切口傷處的癒合較慢，但仍生成透明組織。創傷部位的組織化學與用PAI-2治療動物的非常相似。
緩衝液對照組緩衝液對照組動物的淚液中纖維蛋白溶酶活性在較長時間內增高了(見表4)。同時，可觀察到炎症細胞(主要是PMN)移入到角膜內很明顯。上皮細胞增高了水解能力，這主要是由例如溶酶體水解酶構成，而GGT和ATP酶活性降低了。創傷本身封口很慢(大約10天)，新生成的上皮細胞對基質底層的附著力非常差，生成白色的瘢痕，透明度部分地喪失，且不可逆轉。
用PAI-2或纖維蛋白溶酶/纖維蛋白溶酶激活劑抑制劑系統進行治療的優點在於只用這個方法就達到迅速且完全滿意的角膜恢復-完全透明，無瘢痕，良好附著性，無新血管形成，角膜的正常代謝活性-根據組織學檢查也是如此。
表4淚液中纖維蛋白溶酶活性角膜深度切開創傷
表5家兔角膜深度切開創傷
實施例4雷射手術後用PAI-2治療用Lohmann等1991年敘述的方法(193nm激態原子雷射)給家兔實行光屈折雷射角膜切除術，然後以20μg/ml濃度的PAI-2局部點眼(每日2-3次)。對照組用同體積的溶劑(20mM甘氨酸，pH7.2;150mMNaCl，0.3%明膠水解液)。參比組用抑胰肽酶(5000國際單位/ml;每日2次，2周)或0.1%強的松龍乙酸酯(1日2次，1周;1日1次11周)，或0.1%氟比咯芬(用法同強的松龍乙酸酯)。測定的參數是渾濁的生成，淚液中纖維蛋白溶酶的濃度和組織學指標。
對照組的纖維蛋白溶酶濃度在短時間內由大約1μg/ml升到50μg/ml，但1周後恢復正常。在新生的上皮組織與原來的基質之間的封口部位不平滑。此外可檢測到新生成的基質物質，例如膠原。在基質中可觀察到一些空泡。若不作治療，就有退化成近視的趨勢。由於形成錯誤的結構和新合成，會觀察到眼睛的渾濁。用強的松龍乙酸酯治療，結果原則上相同，只是膠原的新合成略有減少，而用氟比洛芬治療時除了渾濁外，可觀察到顯著的膠原新合成。用抑胰肽酶治療時，在舊基質和新生成的上皮組織之間的交界處是平滑的。然而與光屈折有關的角膜渾濁還是可見的。未見空泡，基底細胞大小正常，但合成了新的膠原。用PAI-2治療會得到絕對清亮透明的眼睛(見表6)。即使3個月之後也不會有渾濁-通常渾濁的出現不會遲於3-5周後。上皮細胞再生得非常好;舊基質與新生的上皮細胞之間的交界處是平滑的，無沉積物，無空泡，無膠原的新合成，無上皮細胞增生。不會退還成近視。即使將所有參比物聯合應用，治療結果也不會比PAI-2治療效果好。與PAI-2治療相比，這種聯合治療或用參比物治療的缺點是-局部應用甾體3個月或更長時間會有生成不希望有的繼發性青光眼的高度危險(取決於切除的程度)。
-抑胰肽酶證明不能與強的松龍合用。
-已知對抑胰肽酶有超敏感性。
-BSE問題，純度，外源性蛋白質性質等都不宜於抑胰蛋白的應用。
表6雷射角膜切開術後的治療
1)但有一種新合成的尚屬未知的物質
權利要求
1.纖維蛋白酶原激活劑的抑制劑在製備用於治療和(或)預防眼、耳、皮膚、骨、關節、腸或其它內臟、手術中和(或)手術後治療以及(或)開放性創傷治療藥物製劑中的用途。
2.按照權利要求1的用途，其特徵是，這些纖維蛋白溶酶原激活劑是尿激酶和(或)tPA。
3.按照權利要求1的用途，其特徵是，該抑制劑是PAI-1和(或)PAI-2，優選為PAI-2片段。
4.按照權利要求1用於治療角膜潰瘍，眼色素層炎，結膜炎，中耳炎，鼓膜炎，炎症過程的鼓膜破裂，皮膚紅斑，皮膚棘層松解，天皰瘡，溼疹，接觸性皮炎，特應性皮炎，炎症過程的灼燒感，脈管炎，皮膚潰湯，骨關節炎，IBD(炎性腸病)，胰腺炎，座瘡，治療上皮損傷，角膜損傷，治療眼損傷的瘢痕形成，鞏膜炎的治療，非癒合性角膜糜爛，乾燥病和(或)角化病。
5.按照權利要求1用於術中的(或)術後治療和(或)治療開放性創傷或上述炎症。
6.按照權利要求1用於抑制新血管形成，治療眼角膜浸潤或配帶接觸性透鏡者的角膜炎症。
7.按照權利要求1的用途，其特徵是，該手術治療是雷射角膜切除術和(或)開放性創傷和炎症是雷射角膜切除術的後果。
8.按照權利要求1治療眼睛炎症和眼渾濁的用途，例如雷射治療後，正常的眼外科(如玻璃體切開術，白內障手術，囊外白內障摘除，晶狀體手術，晶狀體置換，晶狀體移植，角膜成形術，角膜移植)以及如下疾病的後果，結膜炎，角膜結膜炎，角膜結膜炎乾燥症，虹膜炎，虹膜睫狀體炎，角膜炎，格雷夫斯眼病，莫倫潰瘍，脈管炎，眼色素層炎，眼睛過敏性症候，感染，代謝紊亂，炎性疾病和自家免疫性疾病(例如全身性紅斑狼瘡，維格奈肉芽腫病，風溼性關節炎，肉樣瘤病，多關節炎，天皰瘡，類天皰瘡，多形性紅斑，斯耶格倫綜合症，炎性腸病，多發性硬化病，重症肌無力，角化病，鞏膜炎。
9.按照權利要求1用於阻止眼睛手術後或損傷後瘢痕的產生。
10.按照權利要求1用於阻止視網膜病的新血管形成，特別是糖尿病患者，視網膜脫離，視網膜血管損傷，或視網膜和眼色素層炎症或角膜移植。
11.按照權利要求1用於眼睛移植特別是角膜移植的用途。
12.按照權利要求1用於治療眼部水腫，例如斑-水腫，斑下-水腫，光照凝固後水腫，角膜水腫，結膜水腫，視網膜水腫，眼部周圍的水腫。
13.按照權利要求1用於治療眼部的浸潤，特別是角膜，眼房，結膜和鞏膜的浸潤。
14.按照權利要求1用於加速創傷癒合，特別是眼科領域。
15.按照權利要求1用於局部注射，例如注射到結膜下，玻璃體，眼房或鞏膜。
16.按照權利要求1用於微量注射的用途。
17.按照權利要求1用於衝洗溶液。
18.按照權利要求1的抑制劑與生理可溶性載體聯合的應用。
19.按照權利要求1的抑制劑與生理可溶性載體的聯合應用，例如與纖維素衍生物，聚合物基質或接觸性透鏡。
20.按照權利要求1抑制劑與穩定劑聯合的應用。
21.按照權利要求1抑制與其它有效物質的聯合應用。
22.按照權利要求1抑制劑的用途，其特徵是，其它的有效物質是一個或多個抗生素。
全文摘要
本發明涉及纖維蛋白溶酶原激活劑如尿激酶、uPA或tPA的抑制劑，用於術中與術後治療，治療損傷，以及治療和預防炎性疾病。適宜的抑制劑尤其為PAI—1和PAI—2。
文檔編號A61P27/02GK1080873SQ9310525
公開日1994年1月19日 申請日期1993年4月29日 優先權日1992年4月30日
發明者E·舒勒, J·羅米舒, E-P·帕庫斯, G·迪克尼特 申請人:柏林魏克股份公司