一種新的芒果苷鈣鹽及其製備方法與用途的製作方法

2023-12-05 18:35:56

專利名稱：一種新的芒果苷鈣鹽及其製備方法與用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種芒果苷鈣鹽及其製備方法及作為胰島素增敏劑用治糖尿病及其 併發症的用途。
背景技術：
胰島素抵抗(IR)是指胰島素作用的靶器官、組織對胰島素生物效應的反應性降 低或喪失而產生的一系列病理和臨床表現。大量研究表明，IR貫穿於2型糖尿病發生發展 過程中，是2型糖尿病的顯著特徵。以IR為核心，可導致高血糖、高血壓、微量白蛋白尿、炎 症、高纖溶狀態、脂代謝異常、內皮功能障礙、動脈粥樣硬化和心血管病。所以，通過增強胰 島素作用，改善胰島素受體的敏感性，開發胰島素增敏劑治療糖尿病及其併發症(糖尿病 併發症具體指冠心病、動脈粥樣硬化、腦血管病等大血管病變；糖尿病腎病、糖尿病性視網 膜病變等微血管病變；神經病變；糖尿病足；黃斑病、白內障、青光眼、屈光改變、虹膜睫狀 體病變等眼的其他病變等)已成為近年來的研究熱點。目前，已上市的胰島素增敏劑大都價格昂貴或具有一定的不良反應而導致患者依 從性較差。因此研究開發價廉高效低毒的胰島素增敏劑具有重要的臨床意義與市場價值。芒果苷(mangiferin)是從百合科植物知母等植物中提取的天然多酚類化合物， 分子式=C19H18O11,分子量422。其化學結構如下 該成分亦可從漆樹科植物芒果樹、扁桃樹的葉或果實、樹皮中，或龍膽科植物東北 龍膽、川西獐芽菜，或水龍骨科植物光石韋中提取得到。芒果苷是一種天然的清除自由基的抗氧化劑，芒果苷的藥理研究表明其具有多種 生物活性，如抗氧化、抗腫瘤、抗菌、抗病毒、降糖、抗炎、利膽、免疫調節、降脂等。其中芒果 苷口服或腹腔注射皆可降低糖尿病鼠的血糖、血脂水平，其降糖的機制可能為通過增加胰 島素敏感性發揮其抗糖尿病活性MiuraT，Ichiki H, Hashimoto I，et al. Antidiabetic activity of a xanthonecompound,mangiferin. Phytomedicine, 2001,8 (2) :85_870但芒 果苷在溶解性、機體的生物利用、吸收等方面還存在著缺陷。

發明內容
本發明人在進行芒果苷成鹽的研究過程中，得到一系列芒果苷鹽化合物，已申請 專利申請號CN200710129584. 2 ；發明名稱一種芒果苷鹽及其製備方法與用途，其中闡述的芒果苷鹽均能提高芒果苷的溶解度和生物利用度，發明人進一步對芒果苷鹽作為胰島 素增敏劑的藥理活性進行研究時發現芒果苷鈣鹽不僅解決了芒果苷的溶解性問題，提高 口服生物利用度，而且所形成芒果苷鈣鹽具有顯著的胰島素增敏活性。具體技術方案如下本發明提供一種芒果苷鈣鹽，其特徵如下①所述芒果苷鈣鹽採用高效液相色譜法測定，其色譜特徵與芒果苷對照品一致。②所述芒果苷鈣鹽結構中含有鈣離子。具有上述特徵的芒果苷鈣鹽可以具有以下結構通式
其中η = 1 或 2 ;m = 1 或 2。當結構通式(I)中n = 2，m = 1時，所述芒果苷鈣鹽具有以下結構通式(II) 其中Rl、R2、R3、R4任意一個為0_，其餘為0H。其中最優選的化合物具有以下結構式 本發明提供了上述芒果苷鈣鹽的製備方法本發明所述的芒果苷鈣鹽可以是將芒果苷製備成芒果苷單鈉(鉀)鹽，然後再與 水溶性鈣鹽所生成的鹽，可以採用的製備方法如下
①在反應器中加入反應溶媒和芒果苷混懸得混懸液，將鹼性鈉(鉀)鹽水溶液加 入混懸液中，攪拌反應至澄明，過濾，得溶液，向溶液中加入結晶溶媒適量，攪拌，大量沉澱 產生，過濾，固體物60°C以下乾燥，得黃色芒果苷單鈉(鉀)鹽。②將芒果苷單鈉(鉀)鹽製成適宜濃度的水溶液，將水溶性鈣鹽製成適宜濃度的 溶液，向芒果苷單鈉(鉀)鹽水溶液中滴加鈣鹽溶液，滴加完畢繼續攪拌，使反應完全，大量 沉澱產生，過濾，固體物60°C以下乾燥，得芒果苷鈣鹽。上述製備方法中所述的芒果苷與鹼性鈉(鉀)鹽的摩爾配比為1 0.5-1。
上述製備方法中所述的芒果苷單鈉(鉀)鹽與水溶性鈣鹽摩爾配比為1 0.5。上述製備方法中所述的鹼性鈉(鉀)鹽可以選自碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸 氫鉀、醋酸鈉、醋酸鉀等中的一種或兩種以上的混合物。上述製備方法中所述的水溶性鈣鹽可以選自氯化鈣、葡萄糖酸鈣、乳酸鈣、戊酸 鈣、甘油磷酸鈣、碘化鈣等中的一種或兩種以上的混合物。上述製備方法中所述反應溶媒為水與乙醇、甲醇、丙酮等可與水混溶的有機溶劑 中一種或兩種以上的混合物，其中水的體積比10-90% (ν/ν) 0上述製備方法中所述的結晶溶媒可以選自乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷、二氯 甲烷等有機溶劑中一種或兩種以上的混合物。本發明所獲得芒果苷鈣鹽可以是結晶水合物，具有0-9摩爾的水。芒果苷鈣鹽可以通過適宜的手段進行純化，如過濾、水衝洗，並進行乾燥。本發明所述的芒果苷鈣鹽還可以是芒果苷與鹼性鈣化合物所成的芒果苷鈣鹽，可 採用的製備方法如下加入芒果苷及適當溶劑溶解(所獲溶液簡稱芒果苷溶液)，鹼性鈣化合物加入適 當溶劑溶解(所獲溶液簡稱鹼性溶液)，在攪拌狀態下緩慢向芒果苷溶液中加入鹼性溶液， 攪拌反應完全，獲得反應液，向反應液中加入適量有機溶劑，攪拌析出大量黃色沉澱，過濾， 低於60°C乾燥，得黃綠色固體。此製備方法中所述的芒果苷與鹼性鈣化合物的摩爾配比為1 0.5-2。此製備方法中所述的鹼性鈣化合物可以是氫氧化鈣、碳酸氫鈣、丙酸鈣、醋酸鈣等 有機或無機鹼性鈣化合物中的一種或幾種，優選氫氧化鈣。此製備方法中所述的溶劑可以選自水、二甲基亞碸(DMSO)、甲醇、乙醇、丙酮等溶 劑中的一種或幾種的混合物。本發明在研究過程中發現1、採用上述兩種製備方法製備的芒果苷鈣鹽採用高效液相色譜法測定，其色譜特 徵皆與芒果苷對照品一致。2、採用滴定法測定上述兩種方法製備的芒果苷鈣鹽，其中皆含有鈣離子。3、芒果苷與氫氧化鈣所成的鈣鹽在水溶液中穩定性較差，兩小時內有較大變化， 其他鹼性鈣化合物如碳酸氫鈣、醋酸鈣等由於鹼性較弱，與芒果苷反應形成鈣鹽較困難，收 率很低；4、將芒果苷與氯化鈣水溶液混合放置數十天或持續加熱10小時，也有少量芒果 苷鈣鹽形成，但不具備工業價值。5、將芒果苷與鹼性鈉(鉀)鹽反應製備成芒果苷單鈉(鉀)鹽後，再與水溶性鈣鹽所成的芒果苷鈣鹽性質穩定，收率高。通過以上研究和分析，本發明優選芒果苷製備成芒果苷單鈉(鉀)鹽後，再與水溶 性鈣鹽形成的鈣鹽的方法製備芒果苷鈣鹽。化合物結構確證①芒果苷單鈉(鉀)鹽的結構確證
芒果苷核磁數據1HnMR(DMSO-CI6) ( δ ppm)中，4. 60 (1H, d, J = 9. 8Hz)為 1 個葡萄糖端基質子，且為 B-苷鍵形式存在；另有6. 37 (1H，s)、6· 86 (1H，s)和7. 39 (1H，s) 3個芳香質子的信號。13CNMR (DMSO-Cl6) ( δ ppm) 162. 7 (C-I) , 108. 4 (C-2) , 164. 7 (C-3)，94. 2 (C-4)， 157. 1 (C-4a) , 102. 2 (C_4b) , 103. 5 (C_5) , 154. 9 (C_6) , 144. 6 (C_7) , 108. 9 (C_8)， 112. 6 (C-8a) , 151. 7 (C_8b) , 180. 0 (C_9) , 73. 9 (C-Γ ) , 71. 5 (C_2，) , 79. 8 (C_3，)， 71. l(C-4，)，82.4(C-5，)，62.4(C_6，)。芒果苷單鈉(鉀)鹽核磁數據1HnMR(DMSO-CI6) ( δ ppm)中，4. 60 (1H, d, J = 9. 8Hz)為 1 個葡萄糖端基質子，且為 B-苷鍵形式存在；另有6. 05 (1H, s)、6. 19 (1H，s)和6. 95 (1H，s) 3個芳香質子的信號。13CNMR (DMSO-Cl6) ( δ ppm) 162. 4 (C-I)，106. 95 (C-2), 167. 6 (C-3)，94. 7 (C-4)， 157. 1 (C-4a) , 101. 7 (C_4b) , 104. 6 (C_5) , 154. 1 (C_6) , 147. 4(C~7) , 108. 0 (C_8)， 178. 3(C-9)，74· 4(C-1，)，71· 0(C-2，)，80· 0(C-3，)，71· 0(C-4，)，81· 9(C-5，)，61· 8(C-6，)。芒果苷單鈉(鉀)鹽的結構鑑定數據分析，與芒果苷比，芒果苷單鈉(鉀)鹽的 13cnmr數據中，c-3和c-7信號向低場區顯著位移；1hnmr數據中，3個苯基質子信號均向高 場區顯著位移。由於芒果苷結構中1-羥基與9-羰基形成分子內氫鍵，其酸性很弱，不能與弱鹼性 的鈉(鉀)鹽反應；3-羥基和7-羥基的酸性較強，能與弱鹼性的鈉鉀鹽反應。但由於6， 7-二羥基因為相鄰羥基締合的緣故，7-羥基的酸性稍弱於3-羥基。芒果苷與碳酸氫鈉(碳 酸氫鉀)以摩爾比1 1反應(簡稱碳酸氫鹽路線)時，生成3位芒果苷單鈉鹽(即在芒 果苷碳3位羥基位置與鈉相連)的數量多於7位芒果苷單鈉鹽(即在芒果苷碳7位羥基位 置與鈉相連)的數量。而芒果苷與碳酸鈉(碳酸鉀)以摩爾比1 0.5反應(簡稱碳酸鹽 路線)時，由於碳酸鈉(碳酸鉀)鹼性比碳酸氫鈉(碳酸氫鉀)強，所以生成3位芒果苷單 鈉鹽與7位芒果苷單鈉鹽機會均等。因此，可以通過芒果苷與碳酸氫鈉或碳酸鈉反應獲得芒果苷單鈉鹽。綜合以上分析和波譜數據，推斷芒果苷單鈉鹽是由3位芒果苷單鈉鹽與7位芒果 苷單鈉鹽的組合物。②芒果苷鈣鹽的結構確證芒果苷鈣鹽核磁數據ESI-MSm/z 442 [M/2+H]423 [Mmgf+H]推測分子量為 882 ；IR(KBr) cm" :3411， 3180 (肩峰，0H)，2926, 2900,1650,1620 (共軛羰基)，1474 (芳環)。1HnMR(DMSO-CI6) ( δ ppm)中，4. 60 (1H, d, J = 9. 8Hz)為 1 個葡萄糖端基質子，且為 B-苷鍵形式存在；另有6. 18 (1H，s)、6· 25 (1H，s)和7. 05 (1H，s) 3個芳香質子的信號。13CNMR (DMSO-Cl6) ( δ ppm) 162. 5 (C-I)，106. 5 (C-2)，166. 7 (C-3) , 94. 9 (C-4)，157. 1 (C-4a) , 102. 2 (C_4b) , 104. 2 (C_5) , 154. 3 (C_6) , 148. 75 (C_7) , 107. 99 (C_8)， 178. 3(C-9)，74· 7(C-1，)，71· 1 (C_2，)，80. 2 (C_3，)，71. 1(C_4，)，82. 1 (C_5，)，61. 8 (C_6，)。芒果苷鈣鹽的結構鑑定數據分析，與芒果苷比，芒果苷鈣鹽的13CNMR數據中，C-3 和C-7信號向低場區顯著位移。1HNMR數據中，3個苯基質子信號均向高場區顯著位移。我們的研究表明以碳酸氫鹽路線製備的芒果苷鈣鹽的收率顯著低於以碳酸鹽路 線製備的芒果苷鈣鹽的收率。這是由於在碳酸氫鹽路線中，生成3位芒果苷單鈉鹽多於7 位芒果苷單鈉鹽。由於分子空間位阻的原因，芒果苷單鈉(鉀)鹽在形成芒果苷鈣鹽過程 中，具有以下結構式的芒果苷鈣鹽很難獲得。 而易於形成具有以下結構式的芒果苷鈣鹽。 因為碳酸鹽路線中，生成3位芒果苷單鈉鹽與7位芒果苷單鈉鹽的機會均等，所以 以碳酸鹽路線製備的芒果苷鈣鹽的收率顯著高於以碳酸氫鹽路線製備的芒果苷鈣鹽的收率。綜合以上分析和數據，推斷採用經芒果苷單鈉(鉀)鹽製得的芒果苷鈣鹽結構式
如下 本發明的另一目的是提供該芒果苷鈣鹽可以與藥學上可接受的藥用輔料製成臨床可接受的劑型，即可製成臨床適用的任何一種口服製劑、外用製劑或注射劑，例如片劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、丸劑、口服溶液劑、口服混懸劑、凝膠劑、凍乾粉針等。本發明還提供芒果苷鈣鹽在製備胰島素增敏劑中的應用。其中所述胰島素增敏劑 還可以為降糖藥、降脂藥。其作為胰島素增敏劑可以用於防治2型糖尿病及其慢性併發症。 其中所述的2型糖尿病慢性併發症，具體指2型糖尿病並發冠心病、動脈粥樣硬化、腦血管 病等大血管病變、糖尿病腎病、糖尿病性視網膜病變等微血管病變、神經病變、糖尿病足、黃 斑病、白內障、青光眼、屈光改變、虹膜睫狀體病變中的一種或幾種。其作為降脂藥可以用於 防治高脂血症。本發明提供的芒果苷鈣鹽用作胰島素增敏劑的大鼠有效劑量範圍為10-80mg/kg/ 日，按照不同種類動物間劑量換算公式折到人體為IOO-SOOmg/日/人。給藥途徑為口服， 每日3次。因動物與人體之間的差異，故允許實際臨床應用劑量與方法有所調整。下面給出具體實施方式
對本發明作進一步說明，但不限於此。
具體實施例方式本發明所述的芒果苷可以採用市售品(具有相應提取設備的廠家均可以生產，如 廣西昌洲天然產物開發有限公司)，亦可以由知母或芒果葉等植物中提取分離後得到。碳酸 氫鈉、碳酸鈉、碳酸氫鉀、碳酸鉀、醋酸鈉、醋酸鉀、碳酸氫鈣、葡萄糖酸鈣等均採用市售品。 乙醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯等試劑均採用市售品。芒果苷對照品(供含量測 定用)由中國藥品生物製品檢定所提供。製備例1 芒果苷製備IOOkg知母飲片加80%乙醇80°C提取兩次，濃縮，大孔樹脂吸附，水洗後，用40% 乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮得粗芒果苷。粗品芒果苷經溶劑_ 二氧雜環乙烷_水重結晶精 制獲得芒果苷純品，芒果苷樣品經與芒果苷對照品進行鑑別，確定所獲得樣品為芒果苷，純 度經HPLC測定為98. 5%。化合物鑑定1HnMR(DMSO-CI6) ( δ ppm)中，4. 60 (1H, d, J = 9. 8Hz)為 1 個葡萄糖端基質子，且為 B-苷鍵形式存在；另有6. 37 (1H，s)、6· 86 (1H，s)和7. 39 (1H，s) 3個芳香質子的信號。13CNMR (DMSO-Cl6) ( δ ppm) 162. 7 (C-I) , 108. 4 (C-2) , 164. 7 (C-3)，94. 2 (C-4)， 157. 1 (C-4a) , 102. 2 (C_4b) , 103. 5 (C_5) , 154. 9 (C_6) , 144. 6 (C_7) , 108. 9 (C_8)， 112. 6 (C-8a) , 151. 7 (C_8b) , 180. 0 (C_9) , 73. 9 (C-Γ ) , 71. 5 (C_2，) , 79. 8 (C_3，)， 71. l(C-4，)，82.4(C-5，)，62.4(C_6，)。參考文獻洪永福，韓公羽.西陵知母中新芒果苷的分離與結構鑑定.藥學學報， 1997 ；32 (6) :473-475中芒果苷 13CNMR 數據:1HnMR(DMSO-CI6) ( δ ppm)中，4. 68 (1H，d, J = 9. 8Hz)為 1 個葡萄糖端基質子，且為 B-苷鍵形式存在；另有6. 46 (1H，s)、6· 95 (1H，s)和7. 50 (1H，s) 3個芳香質子的信號。13CNMR (DMSO-Cl6) ( δ ppm) 161. 6(C-1)，107. 3 (C-2)，163. 6(C-3) ,93. 9 (C-4)， 156. 1 (C-4a) , 101. 2 (C_4b) , 102. 5 (C_5) , 153. 6 (C_6) , 143. 7 (C_7) , 108. 1 (C_8)， 118. 7 (C-8a) , 150. 7 (C_8b) , 179. 0 (C_9) , 73. 0 (C-Γ ) , 70. 5 (C_2，) , 78. 8 (C_3，)， 70. 3 (C-4，)，81· 3(C-5，)，61· 4(C_6，)。
所得化合物的波譜數據與文獻一致，故所獲得的化合物為芒果苷。實施例1 芒果苷單鈉鹽的製備在反應器中加入芒果苷42. 2g(0. lmol)、水1800ml、乙醇600ml充分混懸，將碳酸 氫鈉8.4g(0. lmol)加水製成0.5% (w/v)溶液，緩慢加入攪拌狀態的混懸液中，反應至澄 清，過濾，向溶液中加入無水乙醇-乙酸乙酯(1 1.5v/v)適量，充分攪拌，有大量沉澱析 出，抽濾，固體物低於60°C乾燥，得淡黃色固體芒果苷單鈉鹽31. 2g，收率為74. 0%。樣品純 度經HPLC測定為98.6%。實施例2 芒果苷單鈉鹽的製備 在反應器中加入芒果苷42. 2g(0. lmol)、水1800ml、乙醇900ml充分混懸，將碳酸 鈉5.30g(0.05mol)加水製成0.5% (w/v)溶液，緩慢加入攪拌狀態的混懸液中，反應至澄 清，過濾，向溶液中加入丙酮適量，充分攪拌，有大量沉澱析出，抽濾，固體物低於60°C乾燥， 得淡黃色固體芒果苷單鈉鹽31. 4g，收率為74. 5%。樣品純度經HPLC測定為98. 5%。實施例3 芒果苷單鉀鹽的製備在反應器中加入芒果苷42. 2g(0. lmol)、水200ml、甲醇1800ml充分混懸，將碳酸 鉀6.9g(0.05mol)加水製成0.2% (w/v)溶液，緩慢加入攪拌狀態的混懸液中，反應至澄 清，過濾，向溶液中加入無水乙醇-三氯甲烷(4 lv/v)適量，充分攪拌，有大量沉澱析出， 抽濾，固體物低於60°C乾燥，得淡黃色固體芒果苷單鉀鹽31g，收率為73. 4%。樣品純度經 HPLC 測定為 98. 6%。實施例4 芒果苷單鉀鹽的製備在反應器中加入芒果苷42. 2g(0. lmol)、水1000ml、甲醇1000ml充分混懸，將碳酸 氫鉀10.0g(0. lmol)加水製成0. 1% (w/v)溶液，緩慢加入攪拌狀態的混懸液中，反應至澄 清，過濾，向溶液中加入無水乙醇-二氯甲烷(7 lv/v)適量，充分攪拌，有大量沉澱析出， 抽濾，固體物低於60°C乾燥，得淡黃色固體芒果苷單鉀鹽31. 7g，收率為75%。樣品純度經 HPLC 測定為 98. 7%。實施例5 芒果苷單鈉鹽的製備在反應器中加入芒果苷42. 2g(0. lmol)、水1800ml、甲醇900ml充分混懸，將碳 酸鈉5.30g(0.05mol)加水製成5% (w/v)溶液，緩慢加入攪拌狀態的混懸液中，反應至澄 清，過濾，向溶液中加入乙酸乙酯適量，充分攪拌，有大量沉澱析出，靜置，抽濾，固體物低 於60°C乾燥，得淡黃色固體芒果苷單鈉鹽32. 3g，收率為76. 5%。樣品純度經HPLC測定為 98. 5%。實施例6 芒果苷鈣鹽的製備將實施例1所製得的芒果苷單鈉鹽4. 44g(0. Olmol)水500ml製成的水溶液，將無 水氯化鈣0. 55g((0. 005mol)加水150ml製成溶液，在攪拌狀態下緩慢滴加氯化鈣溶液，滴 加完畢繼續攪拌，使反應完全，大量沉澱產生。4°C冷藏3小時以上，過濾，固體物低於60°C 乾燥，得淡黃色固體芒果苷鈣鹽2. 7g，收率為61.4%。經HPLC測定純度為98. 8%。實施例7 芒果苷鈣鹽的製備將實施例2所製得的芒果苷單鈉鹽4. 44g(0. Olmol)水500ml製成的水溶液，將無 水氯化鈣0. 55g(0. 005mol)加水150ml製成溶液，在攪拌狀態下緩慢滴加氯化鈣溶液，滴加 完畢繼續攪拌，使反應完全，大量沉澱產生。4°C冷藏3小時以上，過濾，固體物低於60°C乾燥，得淡黃色固體芒果苷鈣鹽3. 4g，收率為77. 2%。經HPLC測定純度為98. 3%。實施例8 芒果苷鈣鹽的製備將實施例3製備的芒果苷單鉀鹽4. 6g(0. Olmol)水300ml製成的水溶液，將無水 氯化鈣0. 55g (0. 005mol)加水300ml製成溶液，在攪拌狀態下緩慢滴加氯化鈣溶液，滴加完 畢繼續攪拌，使反應完全，大量沉澱產生，4°C冷藏3小時以上，過濾，固體物低於60°C乾燥， 得淡黃色固體芒果苷鈣鹽3. 5g，收率為76. 3%。經HPLC測定純度為98. 6%。實施例9 芒果苷鈣鹽的製備 將實施例4製備的芒果苷單鉀鹽4. 6g(0. Olmol)水300ml製成的水溶液，將無水 氯化鈣0. 55g (0. 005mol)加水300ml製成溶液，在攪拌狀態下緩慢滴加氯化鈣溶液，滴加完 畢繼續攪拌，使反應完全，大量沉澱產生，4°C冷藏3小時以上，過濾，固體物低於60°C乾燥， 得淡黃色固體芒果苷鈣鹽2. 9g，收率為63. 0%。經HPLC測定純度為98. 4%。實施例10 芒果苷鈣鹽的製備將實施例2製備的芒果苷鈉鹽4. 44g(0. Olmol)水IOOOml製成的水溶液，將葡萄 糖酸鈣2. 15g(0. 005mol)加水150ml製成溶液，在攪拌狀態下緩慢滴加葡萄糖酸鈣溶液，滴 加完畢繼續攪拌，使反應完全，大量沉澱產生。4°C冷藏3小時以上，過濾，固體物低於60°C 乾燥，得淡黃色固體芒果苷鈣鹽3. 18g，收率為71.7%。經HPLC測定純度為98%。實施例11 芒果苷鈣鹽的製備將芒果苷4. 2g(0. Olmol) 二甲基亞碸50ml製成的溶液，將氫氧化鈣 0. 37g(0. 005mol)加甘油80g製成溶液，芒果苷溶液在攪拌狀態下緩慢滴加氫氧化鈣溶液， 滴加完畢繼續攪拌，使反應完全，加入適量無水乙醇攪拌，產生大量黃色沉澱，過濾，固體物 低於60°C乾燥，得黃綠色固體3. 8g，收率為90. 4%。經HPLC測定純度為71.2%。實施例12 芒果苷鈣鹽的製備將芒果苷4. 2g(0. Olmol) 二甲基亞碸80ml製成的溶液，將氫氧化鈣 1.48g(0. 02mol)加甘油200g製成溶液，芒果苷溶液在攪拌狀態下緩慢滴加氫氧化鈣溶液， 滴加完畢繼續攪拌，使反應完全，加入適量無水乙醇攪拌，產生大量黃色沉澱，過濾，固體物 低於60°C乾燥，得黃綠色固體3. 83g，收率為91. 2%。經HPLC測定純度為63. 8%。製備例13 芒果苷鈣鹽膠囊的製備稱取按實施例7方法製備的芒果苷鈣鹽400g，粉碎成細粉，加入羧甲基纖維素 300g、預膠化澱粉300g作為稀釋劑組成製劑配方，混勻，加入粘合劑制軟材，制粒，乾燥後 整粒，裝膠囊，製成10000粒，即得，含藥量為40mg/粒。製備例14 芒果苷鈣鹽片劑的製備稱取實施例7方法製備的芒果苷鈣鹽500g，粉碎成細粉，加入微晶纖維素200g、藥 用澱粉300g作為稀釋劑組成製劑配方，混勻，加入粘合劑制軟材，制粒，乾燥後整粒，加入 適量潤滑劑，壓片機壓片，製成10000片，包衣，即得，含藥量為50mg/片。實施例15 芒果苷鈣鹽顆粒的製備稱取按實施例7方法製備的芒果苷鈣鹽100g，粉碎成細粉，加入羧甲基纖維 素300g、預膠化澱粉100g、木糖500g，混勻，加入粘合劑制軟材，制粒，乾燥後整粒，製成 lOOOg，即得，含藥量為100mg/g。實施例16 芒果苷鈣鹽凝膠劑的製備
處方芒果苷鈣鹽IOg聚山梨酯802g卡波姆940IOg氫氧化鈉4g乙醇80g將卡波姆940 (carbomer)與聚山梨酯80及300ml蒸餾水混合(溶液1)，將按實施例7方法製備的芒果苷鈣鹽IOg加入適量水和乙醇中溶解(溶液2)，氫氧化鈉溶於IOOml 水加入溶液1中，攪拌，得透明凝膠基質，將溶液2加入基質中攪拌均勻，加蒸餾水至lOOOg， 攪勻，即得。實施例17 芒果苷鈣鹽凍乾粉針的製備處方芒果苷鈣鹽IOg甘露醇40g其餘為蒸餾水，共2000ml。稱取40g甘露醇，置於適當容器內，加入1500ml注射用水，加針用炭，加熱至80°C， 攪拌30min，0. 22 μ m微孔濾膜過濾，濾液備用。稱取按實施例7方法製備的IOg芒果苷鈣鹽，加入甘露醇溶液中，攪拌使完全溶 解。補加注射用水至2000ml，用0. 22 μ m微孔濾膜過濾，分裝，裝量為每支含10mg，冷凍幹 燥。真空壓塞，軋蓋，貼籤，包裝即得。試驗例1 液相色譜法測定芒果苷鈣鹽1100系列高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；包括G1312A 二元泵，G1313A自 動進樣器；色譜條件色譜柱discoverODS 柱(250mmX6mm，5 μ m)；流動相乙腈-0. 1 % H3P04 水溶液(13 87v/v)；流速 1. 0ml/min 檢測波長:254nm 柱溫:30°C。取芒果苷鈣鹽適量，精密稱定，加去離子水溶解，定容，得供試品溶液。取芒果苷對 照品適量，精密稱定，加適量甲醇溶解，定容，得對照品溶液。分別將對照品溶液和供試品溶 液注入色譜儀中，記錄數據，計算，即得。按照實施例7製備的芒果苷鈣鹽的色譜特徵與芒果苷對照品一致。所得芒果苷鈣 鹽的純度為98. 3%。按照實施例11製備的芒果苷鈣鹽的色譜特徵與芒果苷對照品一致。所得芒果苷 鈣鹽的純度為71.2%。試驗例2滴定法測定芒果苷鈣鹽中鈣離子含量取芒果苷鈣鹽細粉約25mg，精密稱定，置錐形瓶中，加去離子水20ml溶解，加 NH3-NH4Cl緩衝液(pH = 10. 0) 3ml，加鉻黑T指示劑少許，用EDTA標準溶液(0. 0297mol/L) 進行滴定至溶液由酒紅色變為黃綠色為止，根據EDTA標準溶液消耗量計算鈣離子含量。平 行進行4次實驗，結果如下 根據以上數據計算芒果苷鈣鹽中芒果苷離子與鈣離子的摩爾比為2 1。
試驗例3 芒果苷鈣鹽溶解度測定精密稱取研成細粉芒果苷5mg，置於50ml蒸餾水中，每隔5分鐘強力振搖該溶液 30秒鐘，30分鐘芒果苷不能溶解，其水溶解度小於0. lmg/ml，屬水幾乎不溶物質；精密稱取按製備例7方法獲得芒果苷鈣鹽50mg，置於50ml蒸餾水中，每隔5分鐘 強力振搖該溶液30秒鐘，30分鐘芒果苷鈣鹽可以溶解。另精密稱取研成按製備例7方法製備的細粉芒果苷鈣鹽lOOmg，置於50ml蒸餾水 中，每隔5分鐘強力振搖該溶液30秒鐘；30分鐘芒果苷鈣鹽不能完全溶解。因此芒果苷鈣鹽水溶解度大於lmg/ml，屬水微溶物質。試驗例4 芒果苷鈣鹽與芒果苷口服藥代動力學。1.藥液配製稱取芒果苷，加羧甲基纖維素鈉溶液混懸，製成lOmg/mL混懸液，為樣A ；稱取 按製備例7方法獲得的芒果苷鈣鹽，加羧甲基纖維素鈉溶液，配成濃度為lOmg/mL溶液， 為樣B。2.灌胃給藥方案大鼠禁食16h，自由飲水，分別灌胃給藥樣Α、樣B，劑量分別 為 100mg/kg。分別於給藥前 5min 和給藥後 15min、30min、45min、60min、90min、120min、 18011^11、24011^11、30011^11、、36011^11、48011^11取血，分離血清。3.血漿樣品處理血漿樣品的處理精密吸取血漿樣品0.2mL，分別置於離心管中，精密加入冷藏的 10%三氯乙酸40 μ L，渦旋3min，12000r/min離心lOmin，吸取上清液約120 μ L置於尖底進 樣瓶中，HPLC檢測。4.樣品的測定4. 1 儀器1100系列高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；包括G1312A 二元泵，G1313A自 動進樣器，4. 2血漿樣品測定的色譜條件色譜柱discover ODS柱(250_X 6_，5 μ m)；流動 相乙腈-0. 1 % H3P04 水溶液(13 87v/v)；流速 1. Oml/min 檢測波長:254nm 柱溫:30°C。4. 3 結果表1芒果苷鈣鹽與芒果苷的藥代動力學參數比較 上述結果顯示口服芒果苷鈣鹽藥代參數優于于口服芒果苷，表明芒果苷成鹽後 生物利用度有較大提高。試驗例5 芒果苷鈣鹽對胰島素抵抗糖尿病大鼠(STZ模型鼠)的影響1 藥物
按實施例11方法製備芒果苷鈣鹽，按製備例1方法製備芒果苷。二者皆用3%0羧 甲基纖維素鈉混懸後使用。鹽酸羅格列酮為浙江萬馬藥業有限公司生產。2實驗動物採用SPF級三月齡雌性Wistar大鼠，購自海南省人民醫院動物實驗中心。大鼠體 重在180 200g之間。實驗期間，動物室溫控制在25 28°C，溼度70%，早6點晚6點照 明。大鼠自由飲水、進食，保持墊料乾燥。高脂飼料基礎飼料55%，豬油16%，蛋黃粉2%， 綿白糖27%。3糖尿病模型的建立大鼠禁食12h後按每公斤體重30_35mg量一次性尾靜脈注射鏈脲佐菌素(簡稱 STZ)溶液(臨用前以0. lmmol/L,pH 4. 4檸檬酸-檸檬酸鈉緩衝液配製成2%濃度)造模。 造模後第14天于禁食12h後稱重，空腹尾靜脈取血，測空腹血糖，再腹腔注射20%葡萄糖液 (2mg/kg)，測定其後0. 5h、lh、2h血糖，將糖耐量異常者納入實驗對象。正常組餵飼普通飼 料，模型組及給藥組餵飼高脂飼料。4實驗分組設立正常對照組(η = 10)。糖尿病模型建立後，將大鼠隨機分為7組，即糖尿病模 型組(η = 10)，芒果苷組[20mg/kg，40mg/kg，80mg/kg，每組10隻]，芒果苷鈣鹽組[IOmg/ kg，20mg/kg，40mg/kg，每組10隻]，鹽酸羅格列酮組[3mg/kg,n = 10]。每日以灌胃給藥的 方式進行。模型組及正常對照組皆給予等量的溶媒。共給藥8周。5觀察指標5.1大鼠胰島素敏感性測定(葡萄糖輸注率)採用血糖鉗技術，按照孔令東孔令東，朱良爭，宋菊敏，等.調脂降糖片對2型糖尿病大鼠胰島素抵抗的幹預作用.中國中 西醫結合雜誌，2006，26 :76-79方法於治療8周後開始分批進行。5. 2血糖與血脂的測定處死大鼠後取全血，分離血清後，統一測定血糖(GLU)、胰 島素(INS)、甘油三酯(TG)和游離脂肪酸(FFA)。血糖、甘油三酯採用GF-D800半自動生化分析儀(山東高密彩虹分析儀器有限公 司生產)檢測。游離脂肪酸採用銅比色法測定。游離脂肪酸測定試劑盒為南京建成生物工程研究 所產品。胰島素放射免疫法，Y計數器計數，胰島素放免分析試劑盒，山東濰坊市三維 (3V)生物公司生產。6統計學分析計量資料值以均數標準差(i±SD)表示。兩組間比較採用t檢驗。7 結果20mg/kg芒果苷未能顯著改善糖尿病大鼠GLL、TG、FFA、INS、葡萄糖輸注率。而芒 果苷鈣鹽10mg/kg起即皆能顯著改善糖尿病大鼠GLU、TG、FFA、INS、葡萄糖輸注率，且呈顯 著的量效關係。具體詳見下表2。以上結果表明因為芒果苷鈣鹽較芒果苷起效劑量大大降低，說明芒果苷鈣鹽不 但解決芒果苷溶解度問題，增加口服生物利用度，而且增強了芒果苷的藥理活性。試驗例6 芒果苷鈣鹽對胰島素抵抗糖尿病大鼠(GK大鼠)的影響
1、藥物按實施例7方法製備的芒果苷鈣鹽，按製備例1方法製備芒果苷，二者皆用3%0羧 甲基纖維素鈉混懸後使用。鹽酸羅格列酮為浙江萬馬藥業有限公司生產。2、動物
16周齡GK大鼠，雌雄各半，均購自上海斯萊克實驗動物有限公司。大鼠IVC籠具 飼養，每籠2隻，溫度22°C。3、分組及給藥GK 大鼠組(η = 10)，芒果苷組[20mg/kg，40mg/kg，80mg/kg，每組 10 只]，芒果苷 鈣鹽組[10mg/kg，20mg/kg，40mg/kg，每組 10 只]，鹽酸羅格列酮組[3mg/kg，η = 10]。每 日以灌胃給藥的方式進行。空白組給予等量的溶媒。共給藥30天。4、觀察指標血糖與血脂試驗結束時腹主動脈採血標本，血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、膽固醇 (TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)採用GF-D800型半自動生化 分析儀(山東高密彩虹分析儀器有限公司生產)檢測。胰島素(INS)放射免疫法，Y計數器計數，胰島素放免分析試劑盒，山東濰坊市 三維(3V)生物公司生產。5、統計學分析計量資料值以均數標準差(LSD)表示。兩組間比較採用t檢驗。6 結果20mg/kg 芒果苷未能顯著改善 GK 大鼠 GLU、TG、TC、HDL、LDL、INS,40mg/kg 對 TG、 HDL,LDL有所改善。而芒果苷鈣鹽10mg/kg即能顯著改善GK大鼠的TC、HDL、LDL，20mg/kg、 40mg/kg能顯著改善GK大鼠GLU、TG、TC、HDL、LDL、INS。具體詳見下表3。以上結果表明因為芒果苷鈣鹽較芒果苷起效劑量大大降低，說明芒果苷鈣鹽不 但解決芒果苷溶解度問題，增加口服生物利用度，而且增強了芒果苷的藥理活性。
權利要求
一種芒果苷鈣鹽，其特徵在於，所述芒果苷鈣鹽具有如下特徵①所述芒果苷鈣鹽採用高效液相色譜法測定，其色譜特徵與芒果苷對照品一致。②所述芒果苷鈣鹽結構中含有鈣離子。
2.根據權利要求1所述的芒果苷鈣鹽，其特徵在於，所述芒果苷鈣鹽具有以下結構通式 其中η = 1或2 ;m = 1或2。
3.根據權利要求2所述的芒果苷鈣鹽，其特徵在於當結構通式(I)中n= 2，m= 1 時，所述芒果苷鈣鹽為 其中R1、R2、R3、R4任意一個為0_，其餘為0H。
4.根據權利要求3所述的芒果苷鈣鹽，其特徵在於所述芒果苷鈣鹽具有以下結構式
5.根據權利要求4所述的芒果苷鈣鹽的製備方法，其特徵在於①將芒果苷與鹼性鈉(鉀)鹽反應製備成芒果苷單鈉(鉀)鹽；②將芒果苷單鈉(鉀)鹽與水溶性鈣鹽反應生成芒果苷鈣鹽。
6.根據權利要求5所述的芒果苷鈣鹽的製備方法，其特徵在於所述芒果苷與鹼性鈉 (鉀)鹽的摩爾配比為1 0.5-1。
7.根據權利要求5所述的芒果苷鈣鹽的製備方法，其特徵在於所述芒果苷單鈉(鉀) 鹽與水溶性鈣鹽摩爾配比為1 0.5。
8.根據權利要求5所述的芒果苷鈣鹽的製備方法，其特徵在於所述鹼性鈉(鉀)鹽 可以選自碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀、醋酸鈉、醋酸鉀中的一種或兩種以上的混合 物。
9.根據權利要求5所述的芒果苷鈣鹽的製備方法，其特徵在於所述水溶性鈣鹽可以 選自氯化鈣、葡萄糖酸鈣、乳酸鈣、戊酸鈣、甘油磷酸鈣、碘化鈣中的一種或兩種以上的混合 物。
10.一種藥物，其特徵在於所述藥物由權利要求1所述的芒果苷鈣鹽與可藥用輔料組成。
11.一種藥物，其特徵在於所述藥物由權利要求4所述的芒果苷鈣鹽與可藥用輔料組成。
12.權利要求10或11所述的藥物，其特徵在於所述藥物可以製成臨床適用的各種劑 型，具體為片劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、丸劑、口服溶液劑、口服混懸劑、凝膠劑、凍幹 粉針。
13.權利要求1所述的芒果苷鈣鹽在製備胰島素增敏劑的應用。
14.權利要求4所述的芒果苷鈣鹽在製備胰島素增敏劑的應用。
15.根據權利要求13或14所述的芒果苷鈣鹽在製備胰島素增敏劑的應用，其特徵在 於，所述胰島素增敏劑還可以為降糖藥。
16.根據權利要求13或14中所述的芒果苷鈣鹽在製備胰島素增敏劑的應用，其特徵在 於，所述胰島素增敏劑還可以為降脂藥。
17.根據權利要求13或14所述的芒果苷鈣鹽在製備胰島素增敏劑的應用，其特徵在 於，所述胰島素增敏劑可以用於防治2型糖尿病及其慢性併發症。
18.根據權利要求17所述的芒果苷鈣鹽在製備胰島素增敏劑的應用，其特徵在於，所 述的2型糖尿病慢性併發症，具體指2型糖尿病並發大血管病變、微血管病變、神經病變、糖 尿病足、黃斑病、白內障、青光眼、屈光改變、虹膜睫狀體病變中的一種或幾種。
19.根據權利要求16所述的芒果苷鈣鹽在製備胰島素增敏劑的應用，其特徵在於，所 述降脂藥可以用於防治高脂血症。
20.權利要求10或11所述的藥物在製備胰島素增敏劑的應用。
全文摘要
本發明提供了一種芒果苷鈣鹽及其製備方法與用途。該芒果苷鈣鹽不但具有降糖、降脂、降胰島素作用，而且可以提高芒果苷的溶解性與口服生物利用度。
文檔編號A61P3/10GK101848922SQ200880115720
公開日2010年9月29日 申請日期2008年5月23日 優先權日2007年11月22日
發明者吳巍, 徐廣愛, 滕厚雷 申請人:海南德澤藥物研究有限公司