糖肽組合物的製作方法
2023-12-05 18:23:51
專利名稱：糖肽組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及由糖苷與肽所組成的糖肽組合物及其作為生物材料的應用。本發明的特殊實施方案是針對以幾丁聚糖為基礎所形成的糖肽所作的描述，而更多的特殊實施方案則是關於幾丁聚糖與聚胺基酸形成糖肽的描述。
背景技術：
在生物系統中，不同的醫療用途對於生物材料都有持續性的需求，例如人類及其它哺乳類。這些醫療用途遍及目前所有可能的治療。舉例來說某些生物材料可用於醫療器材或植入人體以作為結構或生化目的之用。此外，也可作為藥劑載具(drug delivery vehicle)或直接作為藥物。
生物材料的預期用途經常會影響其材料的選擇，但一般大多會選擇使用具有生物可降解性或生物可清除性的材料。簡單來說，即使以具有某種程度的毒性或危害的材料來製造生物材料也是可被接受的，但仍大多會選擇不具毒性的材料。
由於生物材料具有廣泛的用途以及所需要的特性，因此，目前持續需要一種新的生物材料。
發明內容
本發明涉及由至少一個糖苷與至少一個肽所共價結合的糖肽。雖然糖苷與肽及鍵結其上的藥劑在本發明的描述中都是指單體，但根據本發明的聚合物特性，本領域的普通技術人員都應能了解糖肽的性質比單一糖苷與肽的性質要來得複雜。進一步而言，由於糖肽具有多個結合位，因此，不同的藥劑可結合到單一個糖肽。而控制糖肽單體相對數目的方法以及聚合物上各種藥劑的取代度已屬於本領域的公知技術，故在本發明的通常實驗中即可加以應用。
在本發明的一個實施方案中，即包含一個糖肽，其是具有至少一個糖苷基團藉由醯胺鍵與至少一個肽產生共價鍵結，並且，有一診斷劑或一治療劑共軛結合至糖苷或肽基團之一。
即，本發明的糖肽包含至少兩基團，包含一糖苷；一肽；其中所述糖苷是藉由醯胺鍵共價鍵結至所述肽；一診斷劑或一治療劑共軛結合至糖苷或肽基團。
再者，金屬也可共軛結合至無診斷劑或治療劑鍵結的基團。
所述診斷劑或治療劑可通過羧酸經由肽鍵與糖苷共軛鍵結；而金屬則可螯合至肽；或者，也可通過氨基並經由肽鍵與肽共軛鍵結；而金屬則可螯合至糖苷。而所述糖肽的分子量大約可為5,000-30,000道爾頓。
所述糖苷可包含至少兩個共價結合的單體單元，進一步來說，此類糖苷可包含胺糖(aminated sugar)。更具體地說，所述糖苷可以是幾丁聚糖、膠原蛋白、軟骨素、hyauraniate、肝素及其任何組合物；且所述糖苷可選自能以血管內皮細胞(如血管組織)為作用標的的物質，包括血管組織胞外蛋白，如整合素(integrin)。而糖苷的分子量約3,000-10,000道爾頓。
所述肽可包含聚胺基酸或肽或標的序列，而在某些實施方案中，會傾向採用主要由酸性胺基酸所組成的聚胺基酸。所述聚胺基酸可包含聚穀氨酸或聚天門冬氨酸及其任何組合物；所述糖肽包含約5％-50％重量的肽，進一步來說，所述肽的分子量為750-3,000道爾頓，是以癌細胞為其作用標的。
所述診斷劑或治療劑構成糖肽重量的約10-60％，並且，任何可共軛鍵結於糖肽的都可用於本發明。在某些實施方案中，所述診斷劑或治療劑可為抗癌藥物、風溼性關節炎藥物、抗凝血劑、抗血管增生藥物、細胞凋亡藥物、骨質疏鬆藥物、類固醇及抗發炎藥物或其任何組合物。舉例來說，該診斷劑或治療劑可包含甲氨蝶呤或帕米磷酸鹽。
而在某些實施方案中，所述糖肽也可額外包含金屬類診斷劑或治療劑。更明確地說，該金屬可藉由螯合劑，如二乙烯三胺五乙酸(diethylenetriamine pentaacetic acid，DTPA)共軛鍵結於糖肽。所述金屬可為放射性核素，例如Tc-99m、Cu-60、Cu-61、Cu-62Cu-67、In-111、T1-201、Ga-67、Ga-68、As-72、Re-186、Re-188、Ho-166、Y-90、Sm-153、Sr-89、Gd-157、Bi-212及Bi-213或其任何組合物，而放射性核素金屬可同時作為診斷及治療之用。
診斷劑可使許多診療步驟易於進行，包括增強放射性核素顯像的清晰度。在某些實施方案中，糖肽可結合其診斷與治療的功能而作為測量劑量之用；並且，也可與放射性核素結合，除了能夠增強放射性核素影像的清晰度外，也可作為抗癌劑。或者，通過糖肽與金屬及治療劑的結合，可用以測量治療劑輸送到目標區域的量。在其它的選擇上，兩種不同的糖肽可合併使用。首先，可針對個體施予治療性糖肽，再測量其到達目標區域的作用量；再者，藉由診斷性糖肽到達目標區域的作用量的估算，可修正治療性糖肽的劑量。
本發明的其它實施例是關於一包含由幾丁聚糖藉由醯胺鍵與聚胺基酸共價鍵結而組成的糖肽。所述幾丁聚糖可為未經修飾或經修飾的，例如烷基硫酸鹽幾丁聚糖。同樣地，聚胺基酸也可為任何型態，不過，在許多實施方案中，是使用酸性胺基酸，如聚穀氨酸或聚天門冬氨酸。
本發明中由幾丁聚糖所形成的糖肽，也可使用於如本發明所述的糖肽的相同方式。例如幾丁聚糖所形成的糖肽可結合診斷劑或治療劑，包括金屬，也可共軛結合於其上。
至於本發明的其它實施方案中關於製造糖肽的方法則同上所述。具體而言，該類方法是藉由在碳二亞胺與酸基活化劑存在下所形成的醯胺鍵來結合糖苷與肽。而所述糖苷可進一步反應，以形成糖苷或肽及診斷劑或治療劑間的醯胺鍵或酯鍵。此外，也可藉由螯合劑將金屬共軛結合至糖苷或肽。
圖1A、圖1B、圖1C、圖1D為說明糖肽的四種組合方案的示意圖。其中，G-(G)n-G幾丁聚糖，A-(A)n-A聚穀氨酸。
圖2A與圖2B分別為說明形成糖肽及糖肽結合物的合成反應示意圖。其中，A-(A)n-A聚穀氨酸，EDCN-(3-二甲胺基丙基)-N』-乙基碳二亞胺，Sulfo-NHSN-羥基硫代琥珀硫亞胺。
圖3A與圖3B分別說明兩種不同的同時具有金屬及不同藥劑鍵結於糖肽之上糖肽結合物。
圖4A、圖4B、圖4C、圖4D說明糖肽及幾丁聚糖的結構對腫瘤與骨骼的定位能力。
圖5顯示乳腺腫瘤細胞在體外攝取99mTc-GP(99mTc所標定的糖)、99mTc-PGA(99mTc所標定的聚穀氨酸)及99mTc-CH(99mTc所標定的幾定聚糖)(100％)的情形。
圖6A與圖6B揭示體內乳癌細胞(13762細胞系)攝取放射線的檢測結果。在注射99mTc-CH-10(50％)、99mTc-CH-10(100％)、99mTc-PGA(750)及99mTc-G-P(1∶2)120分鐘後，利用平面造影術(planar scintography)觀察乳癌細胞系及具有發炎症狀的老鼠(280～300Ci/rat，i.v.injection，acquired 500,000count)的腫瘤影像，圖中顯示了腫瘤對肌肉及腫瘤對發炎的比例(T＝腫瘤，M＝肌肉，I＝發炎)。
圖7揭示體內骨骼細胞攝取放射性核素的檢測結果。在注射99mTc-帕米磷酸鹽(P)、99mTc-糖肽(GP)、99mTc-帕米磷酸鹽-糖肽結合物(GPP)120分鐘後(300μCi/rat，i.v.injection，acquired 500,000count)，利用平面造影術(planar scintography)觀察影像。
圖8揭示體內骨骼細胞攝取放射性核素的檢測結果，該圖是在注射99mTc-帕米磷酸鹽(P)、99mTc-糖肽(GP)、99mTc-帕米磷酸鹽-糖肽結合物(GPP)120分鐘後(300μCi/rat，i.v.injection，acquired 500,000count)的線掃瞄圖。
具體實施例方式
為對本發明的實施方案及其優點有更完整而透徹的了解，現通過下列文字並結合附圖進行描述。
本發明涉及包含一糖苷與一肽所組成的糖肽組合物，其可作為生物材料。在某些實施方案中，這類生物材料可以滅菌粉末的形式提供使用。而治療劑或診斷劑則可共軛結合至糖肽。
在特殊的實施方案中，糖苷與肽可藉由醯胺鍵相互結合，其中，所述糖苷可為一胺糖。所述糖肽可包含約5％-50％重量的肽，但若含過量肽，將導致糖肽間形成不被接受的交聯層。而所述糖苷的分子量為3,000-10,000道爾頓，肽的分子量為750-3,000道爾頓，糖肽的分子量為5,000-30,000道爾頓。
在更特殊的實施方案中，糖肽可由幾丁聚糖及聚胺基酸所組成，尤其是聚穀氨酸。這種糖肽不需添加標靶藥物(targeting agent)進行修飾，本身即具有腫瘤標定的能力(tumor targeting capacity)。幾丁聚糖(CH)屬於一種氨基多糖類(polyaminosaccharide)，可多方面應用。如同其它多種氨基多糖類，幾丁聚糖可自許多天然物質中快速取得。而且，幾丁聚糖雖然也可獲自蟹或其它甲殼動物或昆蟲的殼或真菌類植物，但目前其主要的來源為龍蝦、淡水螯蝦或小蝦脫掉的殼。正常情況下，幾丁聚糖不具毒性，且能與許多生命系統兼容，如人體組織。然而，如同其它多種多糖類，幾丁聚糖在水中僅具有有限的溶解度。為了改善其溶解度，可使用烷基硫酸鹽幾丁聚糖，例如，在美國專利申請第10/871,890號(申請日06/18/2004)中即對此有所描述。
至於其它適當糖苷包含膠原蛋白、軟骨素、hyauraniate及肝素。
聚穀氨酸(PGA)也可立即從市面上購得(Sigma Chemical Company，St.Louis，MO)或利用各種方法加以合成。由於聚穀氨酸在生理環境下帶正電荷且為生物所能分解，故具有廣泛的生物用途。
而其它種類的肽則可用於本發明的其它實施方案。這些肽可包含其它同樣具有特殊序列或特殊胺基酸組成的聚胺基酸。在某些實施例中，肽可具有標定(targeting)的功能；而在特殊的實施方案中，可利用聚天門冬氨酸執行這一功能。但由於腫瘤細胞無法自行製造天門冬氨酸，大部分需要由外界獲取，故腫瘤細胞對聚天門冬氨酸的攝取會因此提高。因為聚胺基酸具有酸基，可使糖肽與不同的藥劑結合或可形成鹽類，以改善幾丁聚糖的溶解度。
本發明的糖肽是由糖苷及肽利用多種排列方式所組成，而幾丁聚糖與聚穀氨酸的四種排列方式如圖1A-圖1D所示。在本發明的多個實施方案中，不同排列方式的糖肽可混合使用，或者分別使用一種或多種排列方式的糖肽。至於要何種排列方式則需要考量多種因素，包括糖肽的最終用途或共軛結合於糖肽之物為何等等。在大多數的合成方法中，圖1A所示的糖肽結構是可能的主要排列方式。
而本發明合成糖肽的另一方法如圖2A與圖2B所示，但其它的方法也可行，例如可設計有利於形成某種糖肽結構的合成反應。特別的實施方案如圖2A與圖2B所示，糖苷與肽是藉由碳二亞胺作為偶合劑而相互結合。同時，圖2A與圖2B也揭示N-羥基硫代琥珀硫亞氨(sulfo-NHS)可作為酸基活化劑，以促進糖肽的形成；而且，在本發明中，其它酸基活化劑也可用於形成糖肽。
本發明將揭示多種糖肽的生物學特性，包括可使多種藥劑結合於其上。相關的藥劑有標定劑、顯影劑及治療劑。而多種藥劑或不同型態的藥劑都可與相同的糖肽分子在同一時間結合。在特殊的實施方案中，所述的藥劑可構成糖肽結合物(glycopeptide conjugate)重量的約10-60％。
雖然糖肽對於腫瘤組織具有與生俱來的標定腫瘤組織的能力，但加入藥劑更能促進對腫瘤的標記或對於腫瘤的標記更具特異性。當然，標記其它組織的藥劑，如標記骨骼的帕米磷酸(pamidronate)及標記葉酸受器的甲氨蝶呤(methotrexate)也可與糖肽共軛結合。而許多顯影劑所含的金屬離子，則是利用螯合劑與顯影劑結合，如DPTA。而可用以螯合價金屬離子(valent metal ion)的放射線核素包括99mTc、60Cu、61Cu、62Cu、67Cu、111In、201T1、67Ga、68Ga、72As、186Re、188Re、166Ho、90Y、153Sm、89Sr、157Gd、212Bi及213Bi，藉由這些金屬螯合物，可反映出疾病所造成的損害程度。在某些實施方案中，糖肽本身所具有的羧基及胺基即足以螯合金屬離子。
治療劑對於被標定的組織大多具有特異性，如化療藥物或及其它抗癌藥物對於被標定的腫瘤所具有的特異性。風溼性關節炎藥物、抗凝血劑、抗血管增生藥物、細胞凋亡藥物、類固醇、抗發炎藥物及骨質疏鬆藥物也可與糖肽共軛結合。
在許多實施例中，除了藉由生物可變性的鍵結(如醯胺鍵或酯鍵)，治療劑可以任何可接受的方式與糖肽共軛結合。圖2B即在說明骨質疏鬆藥物及帕米磷酸鹽與糖肽共軛結合的方法，而相同或近似的方法也可用於其它藥劑的結合。此外，藉由藥劑上的羧酸或胺基，也可與糖肽相結合，尤其當糖肽與不溶於水的藥劑結合時，會加入二甲基亞醯胺(DMF)或二甲基亞碸(DMSO)參與反應。
在特殊的實施方案中，顯影性及治療性結合物兩者都可提供至標的物。其中，可藉由在標定區域中，顯影複合物量的多寡來決定未經標定的治療性複合物的最佳或建議劑量。
某些顯影複合物可使用具有放射療效的小的金屬離子，通過這些複合物的顯影，可直接決定個體需接受放射治療的劑量。
同樣地，若放射治療劑或其它顯影劑併入相同的複合物中作為治療劑，則個體內治療劑的劑量也可直接加以測量。上述的複合物如圖3A與圖3B所示。
藥劑與糖肽的結合尤其可維持藥劑的釋放，尤其是在生物系統中，如哺乳類。同時，結合物也可增加藥劑在水中的溶解度及低水溶性藥劑的療效指數(therapeutic index)。
腫瘤相關應用本發明的實施方案可用於腫瘤的治療，尤其是藉由細胞毒劑(cytotoxic agent)的傳輸。相對於加入細胞生長抑制劑(cytostaticagent)，細胞毒劑的傳輸更能改善先前治療上的問題。雖然在本發明中，糖肽是用以傳輸細胞生長抑制劑，但其傳輸細胞毒劑的能力更能增添其做為治療工具的價值。
在特殊的實施方案中，糖肽的組成是使用包含幾丁聚糖及聚穀氨酸或聚天門冬氨酸。因為在腫瘤組織中，血管增生的速率極為快速，因此，在實施方案中標定腫瘤組織的方法，多是藉由血管增生的過程而加以實施。而位於血管細胞上的整合素分子將被多糖類所標定，例如膠原蛋白、軟骨素、hyauraniate、幾丁聚糖。由於這種血管標定的方式並未直接標定腫瘤組織，故可防止腫瘤細胞產生抗藥性。此外，腫瘤組織對於胺基酸的需求增加，且大多數腫瘤細胞的表面皆具有某種胺基酸受器，(如穀氨酸及天門冬氨酸)，因此，聚胺基酸也具有標定的功能。更明確地說，聚胺基酸可能被腫瘤細胞所攝取。
本發明中，是以γ-顯影(gamma imaging)的方式，將經99mTc標定的幾丁聚糖/聚穀氨酸(99mTc-labeled chitosan/poly(glutamic acid)所形成的糖肽的腫瘤標定能力表現出來。經99mTc標定的幾丁聚糖/聚穀氨酸可用以定量治療所需的劑量，最後，並可以此預測病人治療後的反應，而考慮是否作為治療上的選擇。188Re也可為多種腫瘤進行化療的選擇，甚至，不論糖肽是位於脈管(vasculature)系統中或內化於腫瘤之中，鍵結於糖肽之上的188Re是都頗具療效。188Re是一β及γ(15％)輻射體，其半衰期為17小時；其對組織的穿透深度為5-7mm，可同時用以顯影及治療大的腫瘤。
由於腫瘤標定能力有助於增加低水溶性化療藥劑的傳輸，因此，也可提高藥劑的療效指數。此外，由於化療藥劑會逐漸從糖肽釋放，療效指數增高，故可降低急性系統性毒性。
骨骼相關應用在本發明的特殊的實施方案中，帕米磷酸鹽可與糖肽相結合，該方法如圖2A與圖2B所示。帕米磷酸鹽是一破骨細胞劑(osteoclast agent)，利用幾丁聚糖/聚穀氨酸與帕米磷酸鹽的結合物，可觀察到帕米磷酸鹽的毒性很低，且由於其腎清除率高，因此，很快能被代謝而排出體外。而從顯影研究上顯示，骨骼為這種組合物的標定對象，是用以治療骨骼退化症，如骨質疏鬆。
以下實施例為對本發明所選出的實施方案的進一步描述。
實施例實施例1糖肽的合成在水解幾丁聚糖過程中，會製備不同分子量及百分比的胺基轉換物(amino group conversion)。在此，所述轉換物的分子量及比例是以CH[分子量][胺基轉換物]％的方式表示。舉例來說，CH10是指將分子量為10,000的幾丁聚糖百分之百水解其乙醯胺基，可形成胺基。
典型的合成過程，是先將幾丁聚糖(CH10，100％)(200mg，MW.10,000-20,000)加入5ml的水攪拌，之後，再將N-羥基硫代琥珀硫亞氨(sulfo-NHS)(232.8mg，1.07mmol)、3-乙基碳二亞胺-乙基[3-(二甲胺基]丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(3-ethylcarbodiimide1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide-HCl(EDC))(204.5mg，1.07mmol)(Pierce Chemical Company，Rockford，IL)加入，之後再加入聚穀氨酸(400mg，MW.750～3,000)。將此混合物在室溫下攪拌24小時後，以截留分子量10,000的Spectra/POR分子多孔薄膜(Spectrum Medical Industries Inc.，Houston，TX)進行48小時的透析，並將透析後的產物過濾後，以冷凍乾燥器(Labconco，Kansas City，MO)處理，獲得鹽態(salt form)的糖肽568.8mg。糖肽組合物的四種型態則如圖1A-圖1D所示。所述糖肽的混合物可用於本發明的各個實施例，混合物經過分離後，四種型態的糖肽皆可單獨使用。
實施例2以99mTc對糖肽進行放射線標定將5mg的糖肽溶於0.2ml的水，再在室溫中加入氯化錫(0.1mg溶於0.1ml的水)，之後，添加5mCi高鎝酸鈉(sodium pertechnetate)。而放射化學純度(Radiochemical purity)是由經1∶4的甲醇∶醋酸銨混合液洗提後的TLC(ITLC SG，Gelman Science，Ann Arbor，MI)決定。而通過放射性薄層分析法(Radio-TLC)(Bioscan，Washington，DC)的分析，放射化學純度超過95％。
實施例3帕米磷酸鹽-糖肽結合物的合成將帕米磷酸鹽(100mg，0.24mmol)溶於1ml的碳酸氫鈉(1N)、N-羥基硫代琥珀硫亞氨(91.8mg，0.43mmol)、3-乙基碳二亞胺-乙基[3-(二甲胺基]丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(81.2mg，0.43mmol)中，再加入糖肽溶液(糖肽200mg+5ml去離子水)。之後，將上述溶液在室溫下攪拌24小時，經透析及冷凍乾燥後，可產生250mg的帕米磷酸鹽-糖肽結合物，其合成的流程圖如圖2A、圖2B所示。
實施例4體外細胞培養分析為了評估糖肽是否具有腫瘤標定的能力，選用哺乳類腫瘤細胞系(13762)進行分析。先將細胞置於12孔細胞培養板中，細胞密度為50,000/孔，再加入以99mTc標定的糖肽(GP)(劑量4μCi，0.148MBq)、聚穀氨酸(PGA)、幾丁聚糖(CH10，50％)或幾丁聚糖(CH10，100μg/well)一起培養，所述接受測試之物，其結構如圖4A(CH-10(50％))、圖4B(CH-10(G，100％))、圖4C(聚穀氨酸(A))、圖4D(G-P(1∶2))所示。將細胞與放射性追蹤劑在37℃下培養0.5-2小時之後，以冰的磷酸緩衝液(PhosphateBuffered Saline，PBS)洗滌兩次，再以0.5ml胰蛋白酶的溶液對細胞進行胰蛋白酶化的處理。然後，收集細胞並以伽瑪計數器(Gamma-counter)測量細胞的放射性，取三次測量值的平均值(mean±SD)，以百分比攝取率(percent uptake ratio)表示。而結果顯示，糖肽與聚穀氨酸具有近似的細胞攝取率(如圖5所示)，但糖肽可標定血管組織及細胞受器，因此較適用於真實的生物系統，而聚穀氨酸僅可標定細胞。
實施例5腫瘤閃爍造影術(Scintographic imaging)的研究為了顯示糖肽是否具有標定腫瘤組織的特異性，選用一群左腿有或無松節油所引發的發炎症狀的雌性腫瘤鼠(Fischer 344 tumor-bearing rats，右腿皆有腫瘤組織)注射300μCi經99mTc標定的糖肽、幾丁聚糖(50％、100％)或聚穀氨酸(PGA)，再以低能量、備有平行孔準直儀(parallel holecollimator)的γ閃爍攝影機(gamma camera)；於注射後0.5、2及4小時後，進行閃爍造影。事實上，每個時間點上都可獲得不錯的顯像，而當比較肽及幾丁聚糖後發現，在注射糖肽後0.5-3小時造影，其腫瘤對肌肉比例(tumor-to-muscle ration)及腫瘤對發炎比例(tumor-to-inflammation ration)較高(如圖6A與圖6B所示)。
從細胞攝取檢測中顯示，糖肽及聚穀氨酸的攝取率(0.4-0.5％)高於幾丁聚糖的攝取率(0.2％)。從經99mTc標定的糖肽在患乳癌鼠的生體分布(biodistribution)可發現腫瘤對組織計算密度比例(tumor-to-tissuecount density ratio)是一個隨時間變化的函數，而從平面造影則可清楚看見腫瘤的存在。在2小時時，糖肽、聚穀氨酸及幾丁聚糖的腫瘤/肌肉比例(tumor/muscle ration)各為3.9、3.0及4.89，雖然單獨使用幾丁聚糖的腫瘤/肌肉比例較高，但由於糖肽同時可標定細胞及血管，因此較常被採用。而且，糖肽在組織內整體的保留性也較佳。
實施例6腫瘤對於紫杉醇治療的反應為了評估「抑制血管增生」治療的反應，將老鼠分別施打紫杉醇(paclitaxil)(40mg/kg，iv)，並於第四天利用經99mTc標定的糖肽(99mTc-糖肽)加以顯影。此外，在紫杉醇治療前後，需進行腫瘤攝取(tumor uptake)、原位雜交(in situ hybridization，ISH)及TUNEL Assay。在第四天利用99mTc-糖肽進行觀察施打過紫杉醇的老鼠，並未發現明顯的腫瘤進程(tumorprogression)，反而可以在治療後觀察到腫瘤壞死的現象。而且，從原位雜交及TUNEL Assay中也顯現出腫瘤對放射線攝取與細胞標定表現間的關聯性。
實施例7骨骼閃爍造影術的研究為了顯示糖肽可標定骨骼，在正常雌鼠(Fischer 344 rats，125-175g)體內施打經99mTc標定的帕米磷酸鹽(300μCi)、糖肽及帕米磷酸鹽-糖肽結合物。而結果顯示，帕米磷酸鹽-糖肽結合物可標定骨骼(如圖7、圖8所示)。
實施例8預防骨質流失將不同劑量的帕米磷酸鹽-糖肽結合物、糖肽或帕米磷酸鹽注入已移除卵巢的老鼠體內後，發現切除卵巢與類似骨質疏鬆的骨質流失現象有極大的關聯。由於帕米磷酸鹽-糖肽結合物具有標定骨骼的傾向，因此數月中持續觀察其是否可預防或減輕雌鼠因卵巢切除所導致的骨質流失。進而，由於帕米磷酸鹽標定骨骼的效果不佳，因此應可預期使用帕米磷酸鹽-糖肽結合物比單獨使用帕米磷酸鹽將有較佳的標定效果。
雖然本發明及其優點已詳述如上，但在不背離本發明的的精神與範圍的情況下，當可對本發明做不同的修改、取代及替換。
權利要求
1.一種糖肽，包含至少兩基團，包含一糖苷；一肽；其中所述糖苷是藉由醯胺鍵共價鍵結至所述肽；一診斷劑或一治療劑共軛結合至糖苷或肽基團。
2.如權利要求1所述的糖肽，進一步包含一金屬共軛結合至無診斷劑或治療劑結合的基團。
3.如權利要求2所述的糖肽，進一步包含所述診斷劑或治療劑通過羧酸並經由肽鍵與糖苷共軛鍵結；及金屬螯合至肽。
4.如權利要求2所述的糖肽，進一步包含所述診斷劑或治療劑通過氨基並經由肽鍵與肽共軛鍵結；及金屬螯合至糖苷。
5.如權利要求1所述的糖肽，其中所述糖苷至少包含兩個共價結合的單體單元，且其中所述肽包含聚胺基酸。
6.如權利要求1所述的糖肽，其中所述糖苷包含胺糖。
7.如權利要求1所述的糖肽，其中所述糖苷包含幾丁聚糖；所述肽包含聚穀氨酸或聚天門冬氨酸。
8.如權利要求1所述的糖肽，其中所述糖肽包含約5％-50％重量的肽。
9.如權利要求1所述的糖肽，其中所述糖苷的分子量約3,000-10,000道爾頓，所述肽的分子量約750-3,000道爾頓。
10.如權利要求1所述的糖肽，其中所述糖肽的分子量約5,000-30,000道爾頓。
11.如權利要求1所述的糖肽，其中所述糖苷選自由膠原蛋白、軟骨素、hyauraniate、肝素及其任何組合物所組成的群組；所述肽選自由聚穀氨酸及聚天門冬氨酸及其任何組合物所組成的群組。
12.如權利要求1所述的糖肽，其中所述診斷劑或治療劑選自由抗癌藥物、風溼性關節炎藥物、抗凝血劑、抗血管生成藥物、細胞凋亡藥物、骨質疏鬆藥物、類固醇、抗發炎藥物及其任何組合物所組成的群組。
13.如權利要求1所述的糖肽，其中所述診斷劑或治療劑包含甲氨蝶呤或帕米磷酸鹽。
14.如權利要求2所述的糖肽，其中所述金屬包含放射性核素。
15.如權利要求14所述的糖肽，其中所述金屬選自由Tc-99m、Cu-60、Cu-61、Cu-62、Cu-67、In-111、Tl-201、Ga-67、Ga-68、As-72、Re-186、Re-188、Ho-166、Y-90、Sm-153、Sr-89、Gd-157、Bi-212、Bi-213及其任何組合物所組成的群組。
16.如權利要求1所述的糖肽，其中所述診斷劑或治療劑構成糖肽重量的約10-60％。
17.如權利要求1所述的糖肽，其中所述糖苷是以血管內皮細胞為作用標的，而所述肽是以癌細胞為作用標的。
18.一種糖肽，包含幾丁聚糖；及一聚胺基酸，其中所述幾丁聚糖及聚胺基酸是藉由醯胺鍵共價鍵結。
19.如權利要求18所述的糖肽，其中所述幾丁聚糖包含烷基硫酸鹽幾丁聚糖。
20.如權利要求18所述的糖肽，其中所述聚胺基酸包含聚穀氨酸或聚天門冬氨酸。
21.如權利要求18所述的糖肽，進一步包含共軛鍵結至幾丁聚糖或聚胺基酸的診斷劑或治療劑。
22.如權利要求18所述的糖肽，進一步包含共軛鍵結至幾丁聚糖或聚胺基酸的金屬。
23.一種製造糖肽的方法，包含藉由碳二亞胺與酸基活化劑存在下，於糖苷與肽之間形成醯胺鍵以結合糖苷與肽。
24.如權利要求23所述的方法，進一步包含形成結合糖苷或肽及診斷劑或治療劑間的醯胺鍵或酯鍵。
25.如權利要求23所述的方法，進一步包含將螯合劑及金屬共軛結合至糖苷或肽。
全文摘要
本發明涉及由糖苷與肽利用醯胺鍵共價鍵結所形成的糖肽。該糖肽也可包含有診斷劑或治療劑鍵結於其上。而金屬類，如放射性核素，也可螯合至糖肽。本發明的特殊實施方案涉及幾丁聚糖共價鍵結至聚胺基酸，如聚穀氨酸、聚天門冬氨酸而製得的糖肽。當診斷劑共軛結合至糖肽時，可增強放射性核素顯像的清晰度；而特殊治療劑中，可共軛結合至糖肽的包括抗癌藥物、風溼性關節炎藥物、抗凝血劑、抗血管增生藥物、細胞凋亡藥物、骨質疏鬆藥物、類固醇及抗發炎藥物。其中某些藥劑，如放射性核素，同時具有診斷性或治療性功效。而糖苷與肽藉由碳二亞胺與酸基活化劑存在下所形成的醯胺鍵相結合後，可形成糖肽。
文檔編號A61P19/02GK1827635SQ20061005837
公開日2006年9月6日 申請日期2006年3月3日 優先權日2005年3月4日
發明者魏一健, 楊敬文, 於東防 申請人:聚和國際股份有限公司