器官的停止、保護和保存的製作方法

2023-11-04 03:01:17

專利名稱：器官的停止、保護和保存的製作方法
技術領域：
本發明涉及用於停止(停跳)、保護和/或保存器官(尤其是心臟直視手術、心血管診斷或治療性介入時的心臟)的方法和藥物或獸用組合物。
每年在澳大利亞有20,000次以上的心臟直視手術，在美國則超過800,000次，在歐洲有1,000,000次左右。在這些需要心臟直視手術的人約1.2％是新生兒/嬰兒，主要是因為先天性心臟病。
在心臟直視手術(open heart surgery)中可能需要停止心博長達3小時。高鉀心麻痺(超過15-20mM)用作心肌停止和保護的基礎已有40多年。目前所使用的大部分溶液含有高鉀包括廣泛使用的St Thomas No.2 Hospital溶液，其通常含有110mM NaCl、16mM KCl、16mM MgCl2、1.2mM CaCl2和10mMNaHCO3，且pH約為7.8。高鉀溶液通常導致膜去極化從約-80到-50mV。儘管高鉀溶液能提供令人接受的臨床結果，但是最近有證據表明進行性鉀引發的去極化導致離子和代謝失衡，這可能與再灌注過程中的心肌功能喪失、室性心律失常、缺血性損傷、內皮細胞腫脹、微脈管受損、細胞死亡和泵功能喪失有關。與成年人的心臟相比，嬰兒的心臟更易被高鉀的心麻痺停止而受到損傷。假設的主要離子失衡與鈉內流的增加相連，繼而活化Na+/Ca2+交換從而導致細胞內Ca2+升高。然後就發生了Na+和Ca2+離子泵的代償性活化，激活厭氧代謝補充了ATP，並伴發組織的乳酸鹽增加和組織的pH下降。在鉀停止中還連累到自由基的產生和氧化性應激反應，通過給予抗氧化劑可部分逆轉。在一些情況中，已報導了高鉀引發的缺血將損傷平滑肌和內皮的功能。
為了將心麻痺停止中的缺血損傷最小化，有大量實驗研究使用鉀通道開啟劑來替代高鉀。據信使用尼可地爾、阿里卡林、或松脂的心臟保護與鉀通道的開啟有關，其導致超極化狀態、動作電位的縮短和流入細胞的Ca2+流減少。但存在的一個缺點是與高鉀心麻痺溶液相比，在相同或更長時間恢復後功能並沒有改善。另一缺陷是由於松脂在水溶液中的低溶解性所以需要載體。常規使用的載體是二甲基亞碸(DMSO)，在用於動物或人的治療中是有爭議的。
大部分研究者包括那些提倡使用鉀通道開啟劑的研究者，認為一旦將血流停止並給予停止溶液，就發生缺血且隨著時間而不斷增加。為了降低危險的可能性，我們尋找到一種心臟麻痺的溶液，能將心臟置於一種可逆的代謝減退狀態(模擬於冬眠海龜、蟄伏的蜂鳥或夏眠的沙漠蛙(desert-frog)等的組織)。當這些動物的代謝速率降低(有些達到90％以上)，它們的組織不再變成進行性缺血，但保持在下調的穩定狀態，這期間供給和需求相匹配。理想的心麻痺溶液應能產生易逆轉、快速的電化學停止，而組織的缺血最小。心臟應積聚較小量的組織乳酸鹽，利用小量糖原，表現出高能磷酸鹽胞液氧化還原(NAD/NADH)和生物能磷酸化(ATP/ADP Pi)的比例和ATP自由能等變化最小。胞液pH和游離鎂離子可以有很小的變化或沒有變化，或在細胞內液和細胞外液間只有最少量水的遷移，和對細胞器如線粒體沒有重要的超微結構的損傷。理想的心麻痺溶液應能100％功能性恢復，而無室性心律失常、胞液鈣過量或其他泵功能異常。而至今未有能滿足所有這些要求的心麻痺溶液。現在我們發現可以用鉀通道開啟劑腺苷和局部麻醉的利多卡因，在停止和恢復過程中較好地保護心臟。
人們對腺苷的作用是有爭議的。腺苷已表明能增加冠脈血流量、使細胞膜超級化和通過ATP-敏感的鉀通道和腺苷相關的通路(包括腺苷受體特別是A1受體)作為預處理劑。已知腺苷能改善心肌恢復，以輔助高鉀心麻痺。另外，腺苷還能用於預處理(無論其是否存在於停止溶液中)以減少致死的傷害。在一項研究中，腺苷表明可與鉀停止溶液相媲美，且在最近的血液心麻痺中其防止了缺血損傷心臟的缺血後功能紊亂。有時將腺苷作為輔助劑加到鉀心麻痺中。
利多卡因是一種局部麻醉劑，其封阻鈉快速通道，且通過降低內向鈉流的量值具有抗心律失常的特性。據信伴隨動作電位的縮短直接減少鈣通過Ca2+選擇性通道和Na+/Ca2+交換而進入細胞。最近報導還表明在再灌注過程中利多卡因與清除心臟中的游離基如羥基或單態氧有關。與這種清除功能相聯，利多卡因還可抑制磷酸酯酶的活性和最小化缺血過程中的膜退化。利多卡因還表現出具有保護心肌的作用，在一項研究中發現比高鉀溶液更出眾。但我們的實驗顯示單用0.5、1.0和1.5mM的利多卡因得到高度易變的功能恢復(用分離的博動的大鼠心臟)。
一方面，本發明提供了一種停止、保護和/或保存器官的方法，所述的方法包括給予需要的對象有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑。
另一方面，本發明提供了(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑在製備用於停止、保護和/或保存器官的藥物中的用途。
本發明還提供了(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑，用於停止、保護和/或保存器官。
另一方面，本發明還提供了藥物或獸用組合物，包括有效量的(i)鉀通道開啟劑和/或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑。
本發明特別適用於停止、保護和/或保存對象體內完整的器官，可以看出也可用於停止、保護和/或保存分離的器官。
所以，本發明還提供了停止、保護和/或保存器官的方法，包括給予一種組合物，該組合物含有有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)該器官的局部麻醉劑。
本文所用的術語「加入」指其最廣泛的含義，即將本發明的組合物與器官接觸的任何方法，例如浸浴、灌注或通過各種途徑的泵送。
本文所用的所用「器官」也是取其最廣泛的含義，指具有特性功能的身體的任何部位包括組織和細胞或它們的一部分，例如細胞株或細胞器製備物。其他例子包括循環器官(如心臟)、呼吸器官(如肺)、泌尿器官(如腎和膀胱)、消化器官(如胃、肝、胰或脾)、生殖器官(如陰囊、睪丸、卵巢或子宮)、神經器官(如腦)、生殖細胞(如精子或卵子)和體細胞(如皮膚細胞、心臟細胞)即肌細胞、神經細胞、腦細胞或腎細胞。
本發明的方法特別適用於在心臟直視手術(包括心臟移植)中停止、保護和/或保存心臟。其他應用包括在心血管介入性治療之前、期間或之後(可能包括心臟病發作、血管成形或血管造影)減少心臟的損傷。例如，可將組合物給予患或正發展心臟病的對象，且還可在使用溶血凝藥如鏈激酶的同時給藥。一旦凝塊溶解，存在的組合物就可保護心臟免受進一步的傷害如重灌注損傷。對那些缺少正常血流、營養和/或氧(不同時間段)的心臟部分而言該組合物可作為心臟保護劑特別有效。例如，可用該組合物治療在心血管介入性治療前存在的或由其引發的心臟缺血。
所以，本發明還提供了心臟麻痺性或心臟保護性組合物，它包括有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑。
鉀通道開啟劑或促效劑可選自尼可地爾、二氮嗪、米諾地爾、吡那地爾(pinicadil)、阿里卡林(aprikalim)、克羅卡林(cromokulim)、NS-1619(1，3-二氫-1-[2-羥基-5-(三氟甲基)苯基]-5-(三氟甲基)-2-H-苯並咪唑(benimidazol)-酮)、氨氯地平、Bay K86644(L型)(1，4-二氫-2，6-二甲基-5-硝基-4-[2(三氟甲基)苯基]-3-吡啶羧酸(甲酯)、苄普地爾HCl(L型)、鈣賽普汀(calciseptine)(L型)、ω-芋螺毒素GVIA(N型)、ω-芋螺毒素MVIIC(Q型)、HCl賽康啶、丹曲林鈉(Ca2+釋放抑制劑)、HCl地爾硫(L型)、非洛地平(filodipine)、氟桂嗪HCl(Ca2+/Na+)、弗斯匹林(L型)、HA-1077 2HCl(1-(5-異喹啉基磺醯基)高哌嗪·HCl)、伊拉地平、洛哌丁胺HCl、曼諾力得(Ca2+釋放抑制劑)、HCl尼卡地平(L型)、硝苯地平(L型)、HCl尼古地平(L型)、尼莫地平(L型)、尼群地平(L型)、匹莫齊特(L-和T-型)、釕紅、斯裡蘭卡肉桂鹼(SR通道)、taicvatoxin、維拉帕米HCl(L型)、HCl甲氧基-維拉帕米(L型)、YS-035HCl(L型)N[2(3，4-二甲氧基苯基)乙基]-3，4-二甲氧基-N-甲基苯乙胺HCl)和AV封阻劑如維拉帕米和腺苷。可以理解以上列出的包括鈣拮抗劑，因為鉀通道開啟劑是間接鈣拮抗劑。
腺苷是特別優選的，因為它能開啟鉀通道、超極化細胞、抑制代謝功能、還可能保護內皮細胞、提高組織的預先準備和保護免受缺血或損傷。腺苷還是間接的鈣拮抗劑、血管舒張劑、抗心率失常劑、抗腎上腺素、游離基清除劑、停止劑、抗炎藥(降低中性白細胞活性)、代謝劑和可能的氧化氮供體。
在一優選實施例中，本發明提供了停止、保護和/或保存器官的方法，該方法包括給予有此需要的對象有效量的腺苷和局部麻醉劑。
合適的腺苷受體促效劑包括N6-環戊基腺苷(CPA)、N-乙基羧醯胺基腺苷(NEAC)、2-[p-(2-羧基乙基)苯乙基-氨基-5』-N-乙基羧醯胺基腺苷(CGS-21680)、2-氯腺苷、N6-[2-(3，5-二甲氧基苯基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基腺苷、2-氯-N6-環戊基腺苷(CCPA)、N-(4-氨基苄基)-9-[5-(甲基羰基)-β-D-呋喃核糖基]-腺苷(AB-MECA)、([IS-[1a，2b，3b，4a(S*)]]-4-[7-[[2-(3-氯-2-噻吩基)-1-甲基-丙基]氨基]-3H-咪唑[4，5-b]吡啶基-3-基]環戊烷甲醯胺(AMP579)、N6-(R)-苯基異丙基腺苷(R-PLA)、氨基苯基乙基腺苷(APNEA)和環己基腺苷(CHA)。
局部麻醉劑可選自美西律、二苯海因、丙胺卡因、普魯卡因、馬比佛卡因、和1B類抗心律失常藥如利多卡因或其衍生物(如QX-314)。利多卡因是優選的，因為它能通過封阻鈉快速通道、抑制代謝功能、降低游離胞液鈣、防止細胞釋放酶、可能保護內皮細胞和保護肌絲損傷，而作為局部麻醉劑。利多卡因還能作為游離基清除劑和抗心律失常藥。
因為利多卡因能封阻鈉快速通道，可以理解其他鈉通道封阻劑也可替代或與局部麻醉劑聯用於本發明的方法和組合物中。合適的鈉通道封阻劑的例子包括毒物如河豚毒素。
所以，在本發明的一優選實施例中，提供了一種停止、保護和/或保存器官的方法，所述的方法包括給予有此需要的對象有效量的腺苷和利多卡因。
在另一優選實施例中，提供了藥物或獸用組合物，其包括有效量的腺苷和利多卡因。
為易於參考，本文以下將「鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑」和「局部麻醉劑」稱為「活性成分」。
本發明的方法包括給予有效量的活性成分，其時間和條件足以停止、保護和/或保存器官。可以分開、順序或同時給予單劑量或系列劑量的活性成分。
對象可以是人或動物，如家畜(如綿羊、母牛或馬)、實驗室試驗用動物(如小鼠、兔或豚鼠)或寵物(如狗或貓)，尤其是那些有經濟價值的動物。
可看出，按對象的特性、待停止、保護和/或保存的器官類型和提出的應用，來確定組合物中存在的活性成分的量。對在心臟直視手術中需要停止心跳的人而言，腺苷的濃度宜為約0.001到20mM，較佳地約為0.01到10mM，更佳地約為0.05到5mM，利多卡因的濃度宜為約0.001到20mM，較佳地約為0.01到10mM，更佳地約為0.05到5mM。對在心臟病發作或心血管介入性治療之前、期間或之後需要治療的人對象而言，下表列出了腺苷和利多卡因的優選濃度。注射利多卡因的類型/單位 腺苷位點靜脈內灌輸 1. 0.001-10 1. 0.0001-20mg/分鐘/kg2. 0.01-52. 0.01-103. 0.01-13. 0.5-3靜脈內快速注射 1. 0.0001-1001. 0.001-1000mg/kg 2. 0.001-10 2. 0.01-100冠狀動脈內灌注 1. 0.0001-1001. 005-50mg/分鐘 2. 0.001-1 2. 0.005-5(每個心臟)3. 0.01-0.5 3. 0.05-2.5冠狀動脈內快速注射 1. 0.001-10001. 0.01-10,000μg 2. 0.1-100 2. 1-1000(每個心臟)3. 1-20 3. 10-2001＝較佳地2＝更佳地3＝最佳地可以任何適當的途徑給予活性成分，包括口服、植入、直腸、吸入或吹入(通過嘴或鼻)、局部(包括頰和舌下)、陰道和腸道外(包括皮下、肌內、靜脈內、胸骨內和皮內)。較佳地，通過將活性成分與對象或有類似血型的對象的血液混合，實現心臟直視手術或心血管介入性治療中的給藥。然後活性成分一般通過主動脈進入冠脈循環。通過連續或間歇給藥達到停止。例如，在Langendorff模式通過主動脈逆行由連續或間歇灌注，發生心臟停止。但可以看出最佳路徑可因對象的病症和年齡和所選用的活性成分而改變。
本發明的組合物在約15℃-37℃是高效的，較佳地為約20℃到37℃，用St Thomas No.2溶液只當溫度較低(如降到4℃)才可完成較長的停止時間。
當可以將一種或兩種活性成分單獨給予時，較佳地是將它們中的一種或兩者與一種或多種藥學上可接受的載體、稀釋劑和/或賦形劑一起給予。各種載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑必須與組合物中的其他成分是藥學上「相容」的，且對對象無害。這些組合物可常規地以單位劑量存在，且可用製藥領域熟知的方法準備。這些方法包括將活性成分與載體(由一種或多種副成分組成)混合。較佳地，通過均勻地、精細地將活性成分與液態載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑混合來製備這些組合物。
本發明還涉及藥物組合物或獸用組合物，包括活性成分和藥學上或獸用可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑。
本發明的適用於口服的組合物可以為離散的單位，如膠囊、囊劑或片劑(各含有預定量的活性成分)、粉末或顆粒、溶液或懸浮液(在水性或非水性液體中)、或水包油的液態乳化劑或油包水液態乳化劑。活性成分也可以丸劑、膏劑或糊劑的形式存在。
通過壓制或壓模(任選地與一種或多種副成分)製備片劑。通過用適當的機器將呈自由流動形式(如粉末或顆粒)的活性成分，且其任選地與結合劑(如預膠凝玉米粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)、填充劑(如乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)、潤滑劑(如硬脂酸鎂、滑石粉或矽膠)、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(如硬脂酸鎂、滑石粉或矽膠)、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(如羥基乙酸澱粉鈉、交聯聚乙烯吡啶酮、交聯羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑混合，來製備壓制的片劑。可以用適當的機器將用惰性液態稀釋劑潤溼的粉末狀化合物壓制製得模製片劑。這些片劑可任選地塗層或壓刻，且可將其製備成能提供緩慢或受控地釋放其中的活性成分，如利用不同比例的羥丙基甲基纖維素以提供理想的釋放特性。片劑還可任選地具有腸溶衣，從而在胃以外的腸道部分釋放。
在停止、保護和/或保存器官前給予的液態製備物可以是如溶液、糖漿或懸浮液的形式或它們也可以是在使用前需與水或其他適當載體混合的乾產品。可用藥學上可接受的添加劑如懸浮劑(如山梨糖醇糖漿、纖維素衍生物或氫化的可食脂肪)、乳化劑(如卵磷脂或阿拉伯樹膠)、非水性載體(如扁桃油、油酯、酒精或分級的植物油)、防腐劑(如對羥基苯甲酸或山梨酸甲酯或丙酯)和能源(如碳水化合物如葡萄糖、脂肪如棕櫚酸酯或胺基酸)，通過常規的方法製備這些液態製備物。
適用於在嘴中局部給藥的組合物包括錠劑(含有可口基質通常為蔗糖和阿拉伯樹膠或黃蓍膠的活性成分)、軟錠劑(含有在惰性基質如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯樹膠的活性成分)和漱口水(含有在適當液態載體中的活性成分)。
對皮膚上的局部應用而言，活性成分可以乳膏、油膏、凝膠、溶液或懸浮液的形式。
對眼睛的局部給藥而言，活性成分可以是在適當的無菌水性或非水性載體中的溶液或懸浮液的形式。另外，緩衝劑包括殺菌劑和殺真菌劑的防腐劑，如乙酸苯汞或硝酸鹽、苯扎氯銨或雙氯苯雙胍己烷(chlorohexidine)和增稠劑如羥丙甲纖維素(hypromellose)也可加入。
還可將活性成分製備成儲備製劑。通過植入(如皮下或肌內)或肌內注射，可給予這些持久作用的製劑。所以，可將活性成分與適當的聚合物或疏水材料一起製備(如在可接受的油或離子交換樹脂中的乳劑，或溶解性較差的衍生物，如難溶的鹽)。
直腸給予的製劑可以是與適當的非刺激性賦形劑混合的栓劑或保留灌腸劑，所述的賦形劑在常溫時是固體，在直腸溫度中則為液體，從而在直腸中融化釋放出活性成分。這些賦形劑包括可可豆油或水楊酸酯。
對鼻內和肺部給藥而言，可將活性成分製備成通過適當計量裝置或單位劑量裝置給予的溶液或懸浮液，或任選地與適當的給藥載體混合的粉末，用適當的送遞裝置給藥。
對用於陰道給藥的組合物而言，可以是陰道環、填塞物、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫或噴霧劑，它們除活性成分外還含有本領域已知的那些載體。
適用於腸道外給藥的組合物包括水性或非水性等滲無菌注射液，含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑和維持組合物在接受對象的血液中等滲的溶質；水性和非水性的無菌懸浮液，包括懸浮劑和增稠劑。這些組合物還可裝在單位劑量或多劑量的密封容器中，如安培和小瓶，且還可在冷凍乾燥(凍幹)條件下保存(僅需要在使用前立即添加無菌液態載體如注射用水)。還可從上述的無菌粉末、顆粒和片劑製備即用的注射溶液和懸浮液。
當組合物是獸用時，可用該領域的常規方法製備。這些獸用組合物的例子包括那些適用於
(a)口服、外用的，如獸用頓服藥(如水性或非水性溶液或懸浮液)；片劑或丸劑；與飼料混合用的粉末、顆粒或藥丸；用於舌的貼片；(b)腸道外的給藥，如通過皮下、肌內或靜脈內注射，如無菌水或懸浮液；或(當適合時)通過乳房內注射，通過通過乳頭將懸浮液或溶液引入乳房；(c)局部給藥，如用於皮膚的乳膏、油膏或噴霧劑；或(d)陰道內，如陰道環、乳膏或泡沫。
可以看出除上述提到的成分外，本發明的組合物還可含有其他本領域常用的試劑(取決於所述的組合物)，例如那些用於口服的組合物還可含有結合劑、甜味劑、增稠劑、香料、崩解劑、塗層、防腐劑、潤滑劑和/或延遲劑。
合適的甜味劑包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、天冬苯丙二肽酯或糖精。合適的崩解劑包括玉米粉、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、黃原膠、皂土、海藻酸或瓊脂。合適的香精包括薄荷油、鹿蹄草油、櫻桃、柑橘或樹莓香精。適當的塗層包括丙烯酸和/或異丁烯酸和/或它們酯的聚合物或共聚物、石蠟、脂肪醇、玉米醇溶蛋白、紫膠或谷蛋白。適當的防腐劑包括苯甲酸鈉、維生素E、α-生育酚、維生素C、羥苯甲酸甲酯、羥苯甲酸丙酯或亞硫酸氫鈉。適當的潤滑劑包括硬脂酸鎂、硬脂酸、油酸鈉、氯化鈉或滑石粉。適當的延遲時間的試劑包括單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
一優選的藥學上可接受的載體是pH約為6-9的緩衝液，較佳地pH約為7，更佳地pH約為7.4，和/或低濃度的鉀如至多約10mM，較佳地為約2-8mM，更佳地約為4-6mM。合適的緩衝液包括Krebs-Henseleit(其通常含有10mM葡萄糖、117mMNaCl、5.9mM KCl、25mM NaHCO3、1.2mM NaH2PO4、1.12mMCaCl2(游離Ca2+＝1.07mM)和0.512mM MgCl2+(游離Mg2+＝0.5mM))、St.Thomas No.2溶液、Tyrodes溶液(其通常含有10mM葡萄糖、126mM NaCl、5.4mM KCl、1mM CaCl2、1mM MgCl2、0.33mM NaH2PO4和10mM HEPES(N-[2-羥基乙基]哌嗪-N』-[2-乙基磺酸])、Fremes溶液、Hartmanns溶液(其通常含有129NaCl、5mM KCl、2mMCaCl2和29mM乳酸鹽)和Ringers-Lactate。用低鉀的一個優點是使本發明的組合物對對象的傷害較少，尤其是那些兒科對象如新生兒/嬰兒。高鉀與鈣的積蓄有關，而鈣的積蓄又與心臟損傷、細胞膨脹和恢復過程中的心律失常相聯。在心臟停止中新生兒/嬰兒比成年人更易受高鉀的損傷。缺陷手術後，新生兒/嬰兒的心臟可能需要許多天才能恢復正常，有時需要加強治療或生命維持。所以使用低濃度鎂的載體是有利的，如低於約2.5mM，但可以看出需要時而且對組合物的活性基本沒有影響，也可使用高濃度鎂(如高達約20mM)。
在本發明的另一實施例中，提供了一種藥物組合物或獸用組合物，包括腺苷、利多卡因和藥學上可接受的載體(其含有至多約10mM的鉀)。
在另一優選實施例中，本發明提供了藥物組合物或獸用組合物，包括腺苷、利多卡因和Krebs-Henseleit緩衝液。
組合物還可便利地以試劑盒的形式存在，將活性成分分開安置，以分開、順序或同時給予。
可以看出本發明的組合物還包括和/或與已知的藥物聯用，這取決於所需的應用。例如，對用於基本預防血液中腺苷降解的藥物如核苷轉運抑制劑如雙嘧達莫，可作為本發明組合物的添加劑。腺苷在血液中的半衰期約為10秒，所以存在防止其降解的藥物能將本發明的組合物的效果最大化。較佳地含有的雙嘧達莫的濃度範圍約為0.1nM到10mM，且對保護心臟非常有利。通過抑制腺苷轉運(增加血管舒張)雙嘧達莫可以輔助腺苷的作用。當組合物是間歇給予時這尤其重要。
藥物的其他例子包括凝塊破裂藥如鏈激酶。如上所述，可在給予患著或正發展成心臟病的對象鏈激酶的同時給予組合物。
本發明還參考以下實施例進行了描述。這些實施例不構成任何限制。
在實施例中，可以參考以下附圖

圖1是比較用Krebs-Henseleit配的100μM腺苷和0.5mM利多卡因與St.Thomas Hospital No.2溶液進行的心臟停止的主動脈流與時間的圖；圖2六張圖顯示30分鐘間歇缺血後心率、心收縮壓、主動脈流、冠脈流、MV02和心率壓力乘積；圖3六張圖顯示2小時間歇缺血後心率、心收縮壓、主動脈流、冠脈流、MV02和心率壓力乘積；圖4六張圖顯示4小時歇缺血後心率、心收縮壓、主動脈流、冠脈流、MV02和心率壓力乘積；
圖5圖2-圖4結果總結的柱狀圖；圖6六張圖顯示用新生兒心臟進行2小時歇缺血後心率、心收縮壓、主動脈流、冠脈流、MV02和心率壓力乘積；圖7四張圖顯示冠狀動脈結紮後(無腺苷-利多卡因灌注)體內大鼠心臟20分鐘缺血。
圖8四張圖顯示冠狀動脈結紮後體內大鼠心臟20分鐘缺血，用腺苷(6.3mg/ml)和利多卡因(12.6mg/ml)以1ml/小時/300g大鼠的速率灌注；圖9顯示冠狀動脈結紮後體內大鼠心臟30分鐘缺血，用腺苷(6.3mg/ml)和利多卡因(12.6mg/ml)以1ml/小時/300g大鼠的速率灌注；圖10四張圖顯示冠狀動脈結紮後體內大鼠心臟20分鐘缺血，用腺苷(3.15mg/ml)和利多卡因(12.6mg/ml)以1ml/小時/300g大鼠的速率灌注；圖11四張圖顯示冠狀動脈結紮後體內大鼠心臟30分鐘缺血，用腺苷(1.6mg/ml)和利多卡因(12.6mg/ml)以1ml/小時/300g大鼠的速率灌注；圖12顯示冠狀動脈結紮後體內大鼠心臟30分鐘缺血，用腺苷(1.6mg/ml)和利多卡因(12.6mg/ml)以1ml/小時/300g大鼠的速率灌注；圖13兩張圖顯示用和不用AL在體內心臟病的發病過程中ATp和PCr相對於缺血時間的變化；圖14兩張圖顯示用和不用AL在體內心臟病的發病過程中乳酸鹽和心肌pH相對於缺血時間的變化；圖15兩張圖顯示用和不用AL在體內心臟病的發病過程中糖原和心率壓力乘積相對於缺血時間的變化；在實施例中，「AL」指含有腺苷和利多卡因的組合物。
實施例1本實施例比較了腺苷(100μM)心麻痺劑與高鉀St.Thomas Hospital No.2溶液(16mM K+)對連續灌注全程缺血後的功能性恢復的影響。
37℃用Krebs-Henseleit pH7.4緩衝液以工作模式(預負荷7.5mmHg；後負荷100mmHg)灌注雄性450g Sprague-Dawley大鼠的心臟(n＝19)30分鐘。然後在70mmHg恆壓的逆行模式，用(i)含有100μM腺苷和0.5mM利多卡因的過濾的Krebs-Henseleit(10mM葡萄糖，pH7.6-7.8在37℃)(n＝11)的溶液或(ii)St.Thomas No.2溶液(0.2微米過濾)(n＝8)使心臟停止。停止30分鐘或4小時後，恢復用37℃ Krebs-Henseleit pH7.4進行正常的順行灌注心臟。監測心率、冠脈流、主動脈流、主動脈壓和耗氧。用Student t-測試測得統計學差異。
結果與St.Thomas No.2溶液相比，用腺苷心麻痺進行心臟停止30分鐘達到靜止狀態只要一半時間(77秒與33秒，p＜0.0001)。在恆定的灌注壓下進行停止，用腺苷心麻痺劑冠脈血流要大30％(p＜0.05)。在再灌注過程中發現AL心臟的主動脈壓、主動脈流和心排血量較快恢復。再灌注後5分鐘，AL心臟的心率、主動脈壓、主動脈流、冠脈流、心排血量和氧耗都較高(表1)。在100mmHg灌注壓(perfusion head)15、25和35分鐘後也發現較高的主動脈流(圖1)。表130分鐘連續停止體溫正常的工作大鼠心臟後，比較腺苷和利多卡因心麻痺劑與St Thomas No.2 Hospital溶液(37℃)腺苷和利多卡因(n＝11) Thomas No.2溶液(n＝12)電動停止(秒) 30±2秒 77±6秒參數 對照 5分鐘恢復 ％對照 對照 5分鐘恢復％對照心臟(bpm) 292±9213±8 73％ 285±14 150±35 53％心收縮壓(mmHg) 122±3126±4 103％126±388±14 70％*舒張壓(mmHg) 76±1 74±1.397％ 78.5±1.2 59±8.5 75％主動脈流(ml/分鐘) 35.6±3 24±4 67％ 31.5±4.1 9.96±2.832％*冠脈流(ml/分鐘)16.4±0.7 13.6±0.9 83％ 17.4±0.7410±1.9 57％心排血量(ml/分鐘) 52±3 37.2±4.7 72％ 50±4 20±4.5 40％*氧耗(μmol/分鐘/溼重) 6.97±0.285.39±0.38 77％ 7.28±0.304.14±0.557％在30分鐘停止流程前5分鐘採集取對照值。*顯著P＜0.05由功能性參數來看，與St.Thomas Hospital No.2溶液相比，100μM和0.5mM利多卡因心麻痺劑引導較短的停止時間和提高的恢復特性。下表2列出了4小時心臟停止的結果。表2比較S-D大鼠心臟用腺苷/利多卡因心臟麻痺劑進行或St Thomas Hospital溶液No.2進行連續心臟麻痺30分鐘後的功能性恢復穩定灌注過程n 心率 心收縮壓 冠脈流主動脈流心排血量 MV02停止(bpm) (mmHg) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 7 292.18 122.38 16.44 35.66 526.97 在70mmHg穩+利多卡因 ±8.82 ±3.58 ±1.07 ±3.33 ±2.73±0.28 定灌注壓力送心麻痺 ％100100100 100 100 100 遞進行30分St Thomas102.85 128.08 17.431.53 48.93 7.28 鍾心臟停止Hosptial ±13.48±3.14 ±0.74 ±4.09 ±4.15±0.3No.2溶液 ％100 100 100 100 100 100表2續再灌注後5分鐘n心率 心收縮壓冠脈流 主動脈流 心排血量 MV02(bpm) (mmHg)(ml/分鐘)(ml/分鐘)(ml/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 7212.91126.09 13.6 23.6437.24 5.39+利多卡因 ±7.62±4.15 ±0.92 ±4.09 ±4.73±0.38心麻痺劑 ％ 73103 83 66 7277St Thomas10 150.3688.08 10.099.96 20.06 4.14Hospital ±34.45 ±14.21 ±1.93 ±2.83 ±4.49±0.5No.2溶液％5370 57 32 4057再灌注後15分鐘n 心率 心收縮壓冠脈流 主動脈流 心排血量MV02(bpm) (mmHg)(ml/分鐘)(ml/分鐘)(ml/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 7 262.18 114.9112.5525.0737.82 5.89+利多卡因 ±10.36±4.18±1.03 ±3.08 ±3.89 ±0.32心麻痺劑 ％90 9476 71 72 86St Thomas10257.09 118.8215.0516.1831.24 6.1Hospital ±14.81±3.81±1.24 ±2.95 ±3.73 ±0.45No.2溶液 ％90 9486 51 64 84表2續再灌注後25分鐘n 心率 心收縮壓冠脈流 主動脈流心排血量MV02(bpm) (mmHg)(ml/分鐘)(ml/分鐘)(ml/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 7 253.54 118.4 14.08 30.5244.8 8.06+利多卡因 ±28.47±3.58 ±0.75±2.73 ±3 ±0.31心麻痺劑 ％ 8797 8686 8687St Thomas10 266.91 118.09 15.05 23.1138.16 6.6Hospital±15.16±3.43 ±1.04±3.94 ±4.47±0.48No.2溶液 ％ 9494 8673 7891再灌注後35分鐘n 心率 心收縮壓冠脈流 主動脈流 心排血量MV02(bpm) (mmHg)(ml/分鐘) (ml/分鐘)(ml/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷7 283.83 118.88 14.2 32.1346.33 6.54+利多卡因 ±11.74±4.62 ±0.68±2.94 ±3.43±0.09心麻痺劑％97 97 8890 8994St Thomas 10271.27 120.45 15.38 25.3540.74 6.74Hospital ±14.04±3.11 ±1.37±4.03 ±4.4 ±0.48No.2溶液％96 96 8880 8996
實施例2用實施例2所述的方法製備成年Wistar大鼠(350g)，然後進行以下的間歇灌注。
在將心臟從工作模式回到成Lagndorff模式後，在70mmHg的恆壓下進行間歇逆行灌注。穩定後，用50ml腺苷加利多卡因心麻痺劑或St Thomas HospitalNo.2溶液使心臟停止。然後交叉夾住主動脈，讓心臟停止20分鐘(除30分鐘間歇停止流程中)，然後解除夾子，自70mmHg壓頭送遞停止溶液2分鐘。再安置夾子，連續進行此流程30分鐘、2小時和4小時(37℃)。
與實施例1的連續灌注相反，間歇心麻痺送遞是臨床上常用的方法。在間歇停止過程中，夾住對象的主動脈，然後給予停止溶液。幾分鐘後，心臟停止，停止心麻痺送遞。心臟保持不動可進行手術。每30分鐘給予停止溶液幾分鐘，從而維持心臟的停止狀態以保留和保護心肌。在這些時間過程中，由乳酸鹽的產生和心肌pH的下降表明心肌慢慢地變得缺血。由此，間歇灌注送遞通常被稱為間歇缺血停止。下表3-7和圖2-5顯示這些結果。
37℃缺血停止30分鐘表3和圖2顯示AL的停止時間是St Thomas溶液的一半，21s(n＝7)與53s(n＝10)。在重灌注後所有心臟的功能都恢復到相同水平(組間沒有明顯差異)。
表3用腺苷/利多卡因心麻痺劑和St Thomas Hospital溶液No.2進行成年心臟30分鐘間歇停止*的特徵*(15分鐘後的主動脈夾制後，有節奏地重複2分鐘心麻痺)腺苷/利多卡因心 St Thomas Hospital P麻痺劑(n＝7) 溶液No.2(n＝10)停止時間(秒) 21.4352.78 p＜0.01±3.92 ±5.65首次收縮時間 147.14 133.67 ns重灌注後(秒) ±14.95 ±31.44恢復到100mmHg的時間 302.14 309.44 ns±21.87 ±30.15表4比較用腺苷/利多卡因心臟麻痺劑或St Thomas Hospital溶液No.2進行間歇缺血*30分鐘後大鼠心臟的功能性恢復穩定灌注過程n心率 心收縮壓 主動脈流冠脈流心排血量 RP乘積 MV02 停止(bpm) (mmHg)(ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷+利多卡 7254.38128.23 34.33 21.64 58.29 31504±1651 6.31 在15分鐘因心麻痺劑±11.01 ±2.83 ±3.64 ±2.02±4.63 ±0.65 送遞心麻St Thomas10 276.74123.64 32.78 19.38 55.36 34090 5.97 痺劑進行Hosptial ±11.87 ±1.30 ±2.09 ±1.62±2.59 ±1111 ±0.56 30分鐘缺No.2溶液 100 100 100100 100 100 100血停止表4續再灌注後5分鐘n 心率心收縮壓 主動脈流冠脈流 心排血量 RP乘積 MV02(bpm)(mmHg)(ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷7 180.48 132.79 22.06*22.15 47.5924074 6.81+利多卡因 ±26.83 ±6.65 ±4.48 ±2.20 ±2.70 ±3330 ±0.97心麻痺劑74 10464 102 82 76 108St Thomas 10 135.94 81.82 19.04*13.48 34.6123281 5.02Hospital±32.71 ±15.94±4.69 ±2.47 ±6.96 ±4069 ±0.79No.2溶液49 58 70 636884*用Students T測驗的統計學顯著差異(n＜0.05)表4續再灌注後15分鐘n心率心收縮壓 主動脈流冠脈流心排血量 RP乘積 MV02 停止(bpm)(mmHg) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 7225.31 126.1729.21 17.14 48.9928228 5.03+利多卡因 ±19.17 ±2.88±3.20 ±1.81 ±3.76 ±2015 ±0.49心麻痺劑92 9885 79 84 90 80St Thomas 10 255.88 121.5624.84 17.00 45.0731131 5.41Hospital±9.69 ±1.32±2.36 ±1.64 ±2.47 ±1267 ±0.53No.2溶液92 9876 88 81 91 91表4續再灌注後30分鐘n 心率心收縮壓 主動脈流冠脈流 心排血量 RP乘積 MV02(bpm) (mmHg) (ml/分鐘) (ml/分鐘)(ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 7236.94124.8429.60 16.4949.09 29403 5.42+利多卡因 ±13.75 ±2.61±2.83 ±1.51 ±1.95 ±1231 ±0.70心麻痺劑979786 76 84 93 86St Thomas 10 255.17122.1622.26 17.0842.41 31154 5.26Hospital±12.29 ±1.62±3.32 ±1.20 ±3.28 ±1464 ±0.38No.2溶液929968 88 77 91 88再灌注後60分鐘n心率 心收縮壓主動脈流 冠脈流 心排血量 RP乘積 MV02(bpm) (mmHg)(ml/分鐘)(ml/分鐘)(ml/分鐘)(mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 7244.97119.80 22.42 15.52 41.53292695.25+利多卡因 ±11.48 ±2.95 ±3.48 ±0.49±2.78 ±1240 ±0.55心麻痺劑100 93 65 7271 93 83St Thomas 10 258.16117.57 17.01 15.46 35.89303925.08Hospital±13.88 ±1.68 ±3.08 ±1.21±3.46 ±1727 ±0.33No.2溶液9395 52 8065 89 85
37℃缺血停止2小時表5和圖3顯示A-L停止的時間是St Thomas溶液的一半，33s(n＝7)與81s(n＝8)。用St Thomas停止的8隻心臟中有4隻不能恢復。所有A-L心臟都存活(n＝7)。恢復的St Thomas心臟的主動脈流為50-90％，心率70-120％和心收縮壓90-100％恢復。恢復的A-L心臟的主動脈流80％、心率95％和心收縮壓95-100％恢復。
表5用腺苷/利多卡因心麻痺劑和St Thomas Hospital溶液No.2進行成年大鼠心臟缺血停止*2小時的特性(*20分鐘主動脈夾制後，有節奏地重複2分鐘心麻痺)n腺苷/利多卡 n St Thomas Hospital p因心麻痺劑溶液No.2停止時間(秒)7 338 810.0003±5 ±8重灌注後的第一次收 7 360±19 4 260±95 NS縮的時間(秒)恢復到100mmHg的 7 541±46 4 2400±3261 NS時間和得到主動脈流的時間(秒)心臟重灌注後存活的 100 50百分比
37℃缺血停止4小時表6和7及圖4顯示A-L停止的時間是St Thomas溶液的一半，26s(n＝9)與78s(n＝7)。用St Thomas停止的7隻心臟中有6隻不能恢復。所有A-L心臟都存活(n＝9)。唯一恢復的St Thomas心臟的主動脈流為40％，心率80％和心收縮壓90％恢復。恢復的A-L心臟的主動脈流70％、心率90％和心收縮壓95-100％恢復。
表6用腺苷/利多卡因心麻痺劑和St Thomas Hospital溶液No.2進行成年大鼠心臟缺血停止*4小時的特性(*20分鐘主動脈夾制後，有節奏地重複2分鐘心麻痺)腺苷/利多卡 St Thomas Hospital p因心麻痺劑溶液No.2停止時間(秒) 26.44 77.86 ＜0.001±2.77 ±10(n＝9) (n＝7)重灌注後的第一次收 401.67 390.00縮的時間(秒) 28.48 (n＝1)(n＝9)恢復到100mmHg的 549.22 480.00時間和得到主動脈流 40.68 (n＝1)的時間(秒) (n＝9)心臟重灌注後存活的 100 14 ＜百分比 (n＝9) (n＝1) 0.0001表7比較用腺苷/利多卡因心臟麻痺劑或St Thomas Hospital溶液No.2進行間歇心臟缺血性停止4小時後大鼠心臟的功能性恢復穩定灌注過程n 心率心收縮壓 主動脈流冠脈流心排血量 RP乘積 MV02停止(bpm) (mmHg) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷+利多卡 9275.33118.44 36.47 16.28 53.88 32338 6.71 在每20分因心麻痺劑±12.91 ±3.50 ±1.65 ±1.03 ±1.73 ±1084 ±0.45 鍾送遞心St Thomas7259.21121.57 41.23 16.03 57.26 31508 7.64 麻痺劑進Hosptial ±12.84 ±2.42 ±4.18 ±1.26 ±5.30 ±1672 ±0.24 行4小時No.2溶液n＝1 270 117.00 51 19.8 70.8 315900 7.28 缺血停止表7續再灌注後15分鐘n 心率心收縮壓 主動脈流冠脈流 心排血量 RP乘積 MV02(bpm)(mmHg)(ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 9 229.89110.8919.81 13.92 36.4925327 5.94+利多卡因±16.10 ±1.86±3.56 ±1.53 ±4.13 ±1555 ±0.69心麻痺劑 ％83 9454 86 68 78 89St Thomas 1 220.00100 18.60 16.20 36.4022000 5.303Hospital ％81 8536 82 51 70 73No.2溶液再灌注後30分鐘n心率 心收縮壓 主動脈流冠脈流 心排血量 RP乘積 MV02(bpm) (mmHg) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 9239.444113.0024.62 11.5339.4426684 4.946+利多卡因 ±18.7165 ±3.07±2.917±1.001 ±4.259 ±1669 ±0.443心麻痺劑％87 9568 71 73 83 74St Thomas 1220105.0016.8 20.4 39.2 23100 5.303Hospital％81 9033 103 55 73 73No.2溶液表7續再灌注後60分鐘n 心率心收縮壓主動脈流 冠脈流 心排血量 RP乘積 MV02(bpm)(mmHg) (ml/分鐘) (ml/分鐘)(ml/分鐘)(mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷 9 249.22 111.89 25.58 11.3940.63 275705.04+利多卡因±17.19 ±3.29 ±3.26 ±1.32 ±4.72±1577 ±0.49心麻痺劑 ％91 94 70 70 7585 75St Thomas 1 250.00 102.00 14.40 18.0034.40 255006.29Hospital ％93 87 28 91 4981 86No.2溶液圖5是圖2-4結果的總結，顯示在30分鐘缺血間歇停止(n＝7)、2小時缺血間歇停止(n＝7)和4小時缺血間歇停止(n＝9)後，用AL溶液停止的心臟全部存活。相反，用St Thomas溶液停止的心臟，30分鐘後全部(n＝10)存活，50％(8隻測試的心臟中有4隻)和14％(7隻測試的心臟中有1隻)存活。另外，成功地用AL停止兩隻心臟達6小時。
圖2-4顯示0.5小時停止(圖2)、2小時停止(圖3)和4小時停止(圖4)後的60分鐘過程中的功能特性(心率、心收縮壓、主動脈流、冠脈流、氧耗和心率-壓力乘積)。在所有實驗中，用AL溶液進行心臟停止的功能性恢復參數較高。0.5小時停止後，除接受AL停止溶液的心臟主動脈流恢復外，這些差異都不明顯。30分鐘時70mmHg壓頭下的主動脈流恢復到對照的90％，而相比之下St Thomas心臟只有65％。2小時間歇缺血停止後功能性恢復的差異就更大。AL停止的心臟心率和心收縮壓恢復到幾近對照值的100％，而St.Thomas心臟僅恢復40-50％。AL心臟中主動脈流、冠脈流、氧耗和心率-壓力乘積恢復到對照的80％和更高，St Thomas心臟僅為20-40％。4小時停止後，差異就更大了，7隻StThomas心臟只有1隻恢復。而所有AL心臟在4小時停止後，都恢復到上述2小時停止的功能性參數。可以得到如下結論AL停止在2和4小時停止過程中提供對成年心臟的優良保護和恢復。
實施例3用實施例2所述的方法，37℃用間歇灌注方法製備新生/幼大鼠(用50-70g 20天齡的大鼠)心臟2小時，但將送遞和後負荷的壓頭減至50mmHg。下表8和9及圖6列出的結果顯示顯示A-L停止的時間是St Thomas溶液的三分之一，19s(n＝7)與66s(n＝7)。用St Thomas停止的7隻心臟中有3隻不能恢復。所有A-L心臟都存活(n＝7)，恢復80％主動脈流。恢復的St Thomas心臟恢復到平均80％主動脈流速，但變異非常大。
所有用AL溶液停止的新生/幼大鼠心臟都在2小時間歇缺血停止後恢復。而用St Thomas溶液停止的7隻心臟在2小時間歇缺血停止後只有4隻恢復。在AL停止心臟中，心率和心收縮壓恢復到對照值的90-100％，而St Thomas心臟僅恢復50-60％。AL心臟的主動脈流、冠脈流和心率-壓力乘積恢復到對照的80％及更高，而St Thomas心臟僅約50％。AL心臟的氧耗為對照的70-85％，而St Thomas溶液進行的心臟停止僅為約60％。可以得出如下結論在新生/幼大鼠心臟的2小時停止和恢復過程中AL能提供優良的保護。
表8用腺苷/利多卡因心麻痺劑和St Thomas Hospital溶液No.2進行新生未成熟大鼠心臟的停止*的特性(*20分鐘主動脈夾制後，有節奏地重複2分鐘心麻痺)重灌注後負荷50mmHg腺苷/利多卡 St Thomas Hospital p因心麻痺劑 溶液No.2停止時間(秒) 18.57 65.71*＜0.05±3.27(7) ±12.71(7)重灌注後的第一次收 23.83 55.75*＜0.05縮的時間(秒) ±3.03(7) ±12.97(4)恢復到100mmHg的165 270 ns時間和得到主動脈流 ±29.48(7) ±83.5(4)的時間(秒)心臟重灌注後存活的 100(7) 57*(4) ＜0.05百分比心律失常發生率(％) 14(7) 25(4)ns*用Student t測驗顯示統計學差異p＜0.05表9比較用腺苷/利多卡因心臟麻痺劑或St Thomas Hospital溶液No.2進行缺血*停止2小時後未成熟大鼠心臟的功能性恢復*(20分鐘主動脈夾制後，有節奏地重複2分鐘心麻痺)穩定灌注過程n心率 主動脈流 冠脈流 心排血量 RP乘積 MV02 停止(bpm) (ml/分鐘)(ml/分鐘) (ml/分鐘)(mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷+利多卡 7261.98 6.99 4.8013.45*16579 4.60每20分鐘送遞心因心麻痺劑±12.81 ±1.30 ±0.56 ±1.16±853 ±0.52 麻痺劑2分鐘進行St Thomas7239.96 4.43 4.299.95*15515 5.392小時缺血停止Hosptial ±19.52 ±1.05 ±0.76 ±1.01±1149±0.61No.2溶液表9續再灌注後15分鐘n 心率 主動脈流 冠脈流 心排血量 RP乘積 MV02(bpm) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷+利多卡因心麻痺劑 7 230.94 5.37 4.0311.77 14046 4.71±12.33±1.63 ±0.61 ±1.84±1297±0.33St Thomas Hospital 4 233.45 3.78 4.58 10.87 13818 4.36No.2溶液 ±36.2 ±1.51 ±1.2 ±1.99±3103±0.67再灌注後30分鐘n心率 主動脈流冠脈流心排血量 RP乘積 MV02(bpm)(ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷+利多卡因心麻痺劑 7235.39 6.67 4.09 12.45 14994 4.43±8.99 ±1.58±0.68 ±1.71 ±709 ±0.24St Thomas Hospital 4228.55 4.38 4.00 10.63 13522 4.14No.2溶液±32.67±1.68±1.14 ±1.97 ±2912 ±0.69再灌注後60分鐘n心率 主動脈流冠脈流心排血量 RP乘積 MV02(bpm)(ml/分鐘) (ml/分鐘) (ml/分鐘) (mmHg/分鐘) (μmol/分鐘/g)腺苷+利多卡因心麻痺劑 7242.78 6 3.75 13.05 13272 4.13±30.35±1.66±0.57 ±1.55 ±2643 ±0.62St Thomas Hospital 4234.48 3.88 3.58 9.6813910 4.02No.2溶液±40.16±1.41±0.92 ±1.50 ±3262 ±0.75
實施例4下表10顯示腺苷和利多卡因對1-2天齡的新生豬心臟的心麻痺有效。(每20分鐘主動脈夾制間給予2分鐘心麻痺劑脈衝共2小時)。
表10
實施例5將雄性Wistar大鼠(250g)關養在控溫和控光的房間。提供充足的食物和水，直至實驗前1天，停止供食，讓大鼠飢餓過夜。腹腔內注射戊巴比妥(60mg/kg)麻醉大鼠。麻醉下，分別將導管植入大鼠的股靜脈和動脈，用於腺苷和利多卡因(AL)給藥，並分別測定血壓。將大鼠氣管切開，讓大鼠人工呼吸每分鐘60-70次室內空氣。將大鼠的胸部切開，固定左前降(LAD)冠狀動脈。將縫線置於LAD的下側。基線20分鐘後，綑紮實驗大鼠組的LAD 30分鐘，監測血壓和心率。缺血30分鐘後，鬆開夾子再灌輸心臟20分鐘。在對照大鼠，圖7顯示了沒有給予AL。對灌注AL的3隻大鼠，分別給予三種不同劑量的腺苷(1)如圖8和9所示，6.3mg/ml腺苷+12.6mg/ml利多卡因，以1ml/小時/300g大鼠速率灌注；(2)如圖10所示，3.15mg/ml腺苷+12.6mg/ml利多卡因，以1ml/小時/300g大鼠速率灌注；(3)如圖11和12所示，1.6mg/ml腺苷+12.6mg/ml利多卡因，以1ml/小時/300g大鼠灌注。
與30分鐘缺血(無AL灌注)的大鼠相比，發現AL以劑量依賴性形式保護心臟，在較高的劑量達到最大保護。如果腺苷的劑量減半則保護將逐漸失去。但即使在最差的狀況，心臟的功能也比無AL的要好。所有接受AL大鼠的心臟心率和壓力都恢復。
體內心臟病過程中腺苷和利多卡因的綜述在心臟病發作或心肌梗塞(MI)30分鐘的大鼠模型中，圖7顯示10分鐘血壓達到0，可將動物視為接近死亡。10分鐘，心臟恢復而且血壓上升，高度漂移由於缺血損傷。這種恢復可能是由於側支循環的補充。相反，在夾制冠狀動脈前5分鐘，將腺苷和利多卡因溶液灌注入大鼠，則10分鐘中沒有觀察到血壓的這種下跌(圖8)。而沒有接受AL溶液的大鼠都接近死亡，存在AL溶液時心臟降低了其收縮的速率且僅錯過少許心跳。值得注意的是，缺血20分鐘時心跳沒有紊亂。AL灌注停止後所有心臟都恢復其全部功能(圖9)。可以得出如下結論在AL溶液中的心臟明顯受到保護而對抗深度缺血發作(由關閉冠狀動脈引發)。AL溶液對心臟的保護作用與腺苷的劑量相關。如果將腺苷的劑量減半而利多卡因的劑量不變，在10分鐘和20分鐘可以發現較大的變化(圖10)。如果再將腺苷的劑量減半，保護進一步減少。但在所有實驗中AL灌注的大鼠都完全恢復血液動力學功能(基於血壓和心率)(圖12)。
將兩組有或無AL的經歷心臟病發作的大鼠置於核磁共振(NMR)波譜儀中，圖13-15記錄了代謝數據。NMR非侵害性地測定了閉合冠狀動脈的30分鐘過程中三磷酸腺苷(ATP)、磷酸肌酸(PCr)和pH的變化。在工作檯上進行的分開實驗中，在液氮溫度將心臟冷凍夾制，對中性化合的組織酸提取液以酶學方法(測定通過)用分光光度計測定糖原和乳酸鹽。從閉合冠狀動脈灌注中接受AL溶液的心臟觀察到主要的明顯差異(P＜0.05)。AL心臟中ATP保持在90-100％對照值，而未接受AL的心臟為60％(圖13)。這同樣也在高能磷酸儲備的PCr中可以看出，雖然未接受AL的心臟表現出更大的百分比下跌(減至20％閉合前的值)(圖14)。在接受AL的心臟中，在缺血過程中乳酸鹽(厭氧代謝的終產物)增加5倍，而未接受AL的心臟中乳酸鹽增加20倍以上(圖15)。這由心肌細胞pH的測定可以支持，在未接受AL溶液的心臟發現更大的pH下降(更多酸)。需要指出的是，在AL心臟的最初10分鐘pH的下跌很少，表明存在AL時心肌細胞根據組織乳酸鹽水平較低得到更好氧的支持。在前10分鐘有和無AL的心臟所消耗的燃料糖原量類似，但AL心臟保持約60-70％閉合前的值(單獨與缺血心臟相比)。由代謝數據可以看出接受AL的冠脈閉合的心臟比那些沒有接受AL的心臟更需氧。糖原是各心臟的主要能量來源，但AL心臟優先地從線粒體氧化磷酸化(而不是產生乳酸)再生它們的ATP。這與上述血壓和心率變化的功能性數據完全一致。
實施例6用Krebs-Henseleit(含有10mM葡萄糖，pH7.4)配製200μM和50μM局部麻醉劑丙胺卡因、普魯卡因和甲哌卡因配製停止溶液。下表11列出的結果是在70mmHg用心麻痺劑持續灌注30分鐘得到的。
表11腺苷+丙胺卡因腺苷+普魯卡因腺苷+馬比佛卡因停止時間 13秒21秒 10.5秒第一次心跳113 145036主動脈流恢復 312 3353405分鐘AF％ 67％58％ 39％實施例7將松脂溶解於0.05％二甲基亞碸(DMSO)(200μM)、局部麻醉劑丙胺卡因、普魯卡因、馬比佛卡因和利多卡因(在Krebs-Henseleit溶液中)來製備停止溶液。如下表12所示，發現松脂不如腺苷有效。
表12松脂 松脂 松脂松脂+丙胺卡因+普魯卡因+馬比佛卡因 +利多卡因停止時間128 422041 149第一次心跳 215 120056 230主動脈流恢復810 450655 4455分鐘AF％ 0％ 25％ 0％70％15分鐘AF％ 38％ 57％ 36％71％實施例8添加ATP-鉀通道封阻劑、格列苯脲(20μM)和腺苷及利多卡因，延遲的停止時間增加三倍，從26秒(AL)增至76-120秒(ALG)(n＝2)。存在格列苯脲時更慢的恢復時間和更低的主動脈流(42-53％)顯示開啟KATP通道作為AL所提供的停止和保護模式的重要性。從這些結果可以得出如下結論ATP-鉀通道是腺苷和利多卡因引發停止應答的重要靶。
表13A/L+20μM格列苯脲(n＝2) 僅A/L(n＝5)停止時間 76-120秒 26秒第一次心跳 245-255(分鐘秒)1分鐘37秒主動脈流恢復時間500-730(分鐘秒)3分鐘51秒5分鐘AF％ 42-53％ 84％
權利要求
1.一種停止、保護和/或保存器官的方法，其特徵在於，所述的方法包括給予有此需要的對象有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑。
2.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述的器官可以是對象體內完整的器官，也可以是分離的完整器官。
3.如權利要求1或2所述的方法，其特徵在於，所述的器官是循環器官、呼吸器官、泌尿器官、消化器官、生殖器官、神經器官或體細胞。
4.如權利要求3所述的方法，其特徵在於，所述的循環器官是心臟。
5.如權利要求4所述的方法，其特徵在於，所述的方法是用於在心臟直視手術過程中停止、保護和/或保存心臟；在心血管介入性治療之前、期間或之後減少心臟的受損；或保護那些已經歷缺少正常血流、營養和/或氧氣的心臟部分。
6.如權利要求1-5任一所述的方法，其特徵在於，所述的鉀通道開啟劑或促效劑選自尼可地爾、二氮嗪、米諾地爾、吡那地爾、阿里卡林、克羅卡林、NS-1619(1，3-二氫-1-[2-羥基-5-(三氟甲基)苯基]-5-(三氟甲基)-2-H-苯並咪唑-酮)、氨氯地平、Bay K86644(L型)(1，4-二氫-2，6-二甲基-5-硝基-4-[2(三氟甲基)苯基]-3-吡啶羧酸(甲酯)、苄普地爾HCl(L型)、鈣賽普汀(L型)、ω-芋螺毒素GVIA(N型)、ω-芋螺毒素MVIIC(Q型)、HCl賽康啶、丹曲林鈉(Ca2+釋放抑制劑)、HCl地爾硫(L型)、非洛地平、氟桂嗪HCl(Ca2+/Na+)、弗斯匹林(L型)、HA-10772HCl(1-(5-異喹啉基磺醯基)高哌嗪·HCl)、伊拉地平、洛哌丁胺HCl、曼諾力得(Ca2+釋放抑制劑)、HCl尼卡地平(L型)、硝苯地平(L型)、HCl尼古地平(L型)、尼莫地平(L型)、尼群地平(L型)、匹莫齊特(L-和T-型)、釕紅、斯裡蘭卡肉桂鹼(SR通道)、taicatoxin、維拉帕米HCl(L型)、HCl甲氧基-維拉帕米(L型)、YS-035HCl(L型)N[2(3，4-二甲氧基苯基)乙基]-3，4-二甲氧基-N-甲基苯乙胺HCl)和AV封阻劑。
7.如權利要求6所述的方法，其特徵在於，所述的AV封阻劑是腺苷。
8.如權利要求1-7任一所述的方法，其特徵在於，所述的腺苷受體促效劑選自N6-環戊基腺苷(CPA)、N-乙基羧醯胺基腺苷(NEAC)、2-[p-(2-羧基乙基)苯乙基-氨基-5』-N-乙基羧醯胺基腺苷(CGS-21680)、2-氯腺苷、N6-[2-(3，5-二甲氧基苯基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基腺苷、2-氯-N6-環戊基腺苷(CCPA)、N-(4-氨基苄基)-9-[5-(甲基羰基)-β-D-呋喃核糖基]-腺苷(AB-MECA)、([IS-[1a，2b，3b，4a(S*)]]-4-[7-[[2-(3-氯-2-噻吩基)-1-甲基-丙基]氨基]-3H-咪唑[4，5-b]吡啶基-3-基]環戊烷甲醯胺(AMP579)、N6-(R)-苯基異丙基腺苷(R-PLA)、氨基苯基乙基腺苷(APNEA)和環己基腺苷(CHA)。
9.如權利要求1-8任一所述的方法，其特徵在於，所述的局部麻醉劑選自美西律、二苯海因丙胺卡因、丙胺卡因、普魯卡因、馬比佛卡因、和1B類抗心律失常藥。
10.如權利要求9所述的方法，其特徵在於，所述的1B類抗心律失常藥是利多卡因。
11.如權利要求1-10任一所述的方法，其特徵在於，所述的活性成分(i)和(ii)與藥學上可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑一起給予。
12.如權利要求11所述的方法，其特徵在於，所述的藥學上可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑是pH約為6-9的緩衝液。
13.如權利要求11或12所述的方法，其特徵在於，所述的藥學上可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑含有低濃度的鉀。
14.如權利要求13所述的方法，其特徵在於，所述的鉀的濃度至多約為10mM。
15.如權利要求12-14任一所述的方法，其特徵在於，所述的緩衝液是Krebs-Henseleit、St.Thomas No.2溶液、Tyrodes溶液、Fremes溶液、Hartmanns溶液或Ringers-Lactate。
16.如權利要求11-15任一所述的方法，其特徵在於，所述的藥學上可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑含有低濃度的鎂。
17.如權利要求16所述的方法，其特徵在於，所述的鎂的濃度至多約為2.5mM。
18.如權利要求1-17任一所述的方法，其特徵在於，所述的活性成分(i)和(ii)與其他藥物一起給予。
19.如權利要求18所述的方法，其特徵在於，所述的藥物是雙嘧達莫或凝塊破裂藥。
20.如權利要求19所述的方法，其特徵在於，所述的凝塊破裂藥是鏈激酶。
21.如權利要求1-20任一所述的方法，其特徵在於，所述的對象是新生兒/嬰兒。
22.如權利要求4-21任一所述的方法，其特徵在於，所述的在心血管應用中的給藥是通過將活性成分與對象和/或有類似血型的對象的血液混合完成。
23.如權利要求1-22任一所述的方法，其特徵在於，所述的停止是通過連續或間歇送遞實現的。
24.如權利要求1-23任一所述的方法，其特徵在於，所述的停止是在約15℃-37℃進行的。
25.(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑在製備用於停止、保護和/或保存器官的藥物中的用途。
26.(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑在停止、保護和/或保存器官中的用途。
27.一種停止、保護和/或保存器官的方法，其特徵在於，所述的方法包括給予器官有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或器官受體促效劑和(ii)局部麻醉劑。
28.一種藥物組合物或獸用組合物，其特徵在於，所述的組合物含有有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑。
29.如權利要求28所述的組合物，其特徵在於，所述的鉀通道開啟劑或促效劑選自尼可地爾、二氮嗪、米諾地爾、吡那地爾、阿里卡林、克羅卡林、NS-1619(1，3-二氫-1-[2-羥基-5-(三氟甲基)苯基]-5-(三氟甲基)-2-H-苯並咪唑-酮)、氨氯地平、Bay K86644(L型)(1，4-二氫-2，6-二甲基-5-硝基-4-[2(三氟甲基)苯基]-3-吡啶羧酸(甲酯)、苄普地爾HCl(L型)、鈣賽普汀(L型)、ω-芋螺毒素GVIA(N型)、ω-芋螺毒素MVIIC(Q型)、HCl賽康啶、丹曲林鈉(Ca2+釋放抑制劑)、HCl地爾硫(L型)、非洛地平、氟桂嗪HCl(Ca2+/Na+)、弗斯匹林(L型)、HA-1077 2HCl(1-(5-異喹啉基磺醯基)高哌嗪·HCl)、伊拉地平、洛哌丁胺HCl、曼諾力得(Ca2+釋放抑制劑)、HCl尼卡地平(L型)、硝苯地平(L型)、HCl尼古地平(L型)、尼莫地平(L型)、尼群地平(L型)、匹莫齊特(L-和T-型)、釕紅、斯裡蘭卡肉桂鹼(SR通道)、taicatoxin、維拉帕米HCl(L型)、HCl甲氧基-維拉帕米(L型)、YS-035HCl(L型)N[2(3，4-二甲氧基苯基)乙基]-3，4-二甲氧基-N-甲基苯乙胺HCl)和AV封阻劑。
30.如權利要求29所述的組合物，其特徵在於，所述的AV封阻劑是腺苷。
31.如權利要求28-30任-所述的組合物，其特徵在於，所述的腺苷受體促效劑選自N6-環戊基腺苷(CPA)、N-乙基羧醯胺基腺苷(NEAC)、2-[p-(2-羧基乙基)苯乙基-氨基-5』-N-乙基羧醯胺基腺苷(CGS-21680)、2-氯腺苷、N6-[2-(3，5-二甲氧基苯基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基腺苷、2-氯-N6-環戊基腺苷(CCPA)、N-(4-氨基苄基)-9-[5-(甲基羰基)-β-D-呋喃核糖基]-腺苷(AB-MECA)、([IS-[1a，2b，3b，4a(S*)]]-4-[7-[[2-(3-氯-2-噻吩基)-1-甲基-丙基]氨基]-3H-咪唑[4，5-b]吡啶基-3-基]環戊烷甲醯胺(AMP579)、N6-(R)-苯基異丙基腺苷(R-PLA)、氨基苯基乙基腺苷(APNEA)和環己基腺苷(CHA)。
32.如權利要求28-31任一所述的組合物，其特徵在於，所述的局部麻醉劑選自美西律、二苯海因丙胺卡因、丙胺卡因、普魯卡因、馬比佛卡因、和1B類抗心律失常藥。
33.如權利要求28-32任一所述的組合物，其特徵在於，所述的組合物是心麻痺或心保護組合物。
34.如權利要求28-33任一所述的組合物，其特徵在於，所述的活性成分(i)和(ii)是與藥學上可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑一起給予的。
35.如權利要求34所述的組合物，其特徵在於，所述的藥學上可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑是pH約為6-9的緩衝液。
36.如權利要求34或35所述的組合物，其特徵在於，所述的藥學上可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑含有低濃度的鉀。
37.如權利要求36所述的組合物，其特徵在於，所述的鉀的濃度至多約為10mM。
38.如權利要求35-37任一所述的組合物，其特徵在於，所述的緩衝液是Krebs-Henseleit、St.Thomas No.2溶液、Tyrodes溶液、Fremes溶液、Hartmanns溶液或Ringers-Lactate。
39.如權利要求34-38任一所述的組合物，其特徵在於，所述的藥學上可接受的載體、稀釋劑、佐劑和/或賦形劑含有低濃度的鎂。
40.如權利要求39所述的組合物，其特徵在於，所述的鎂的濃度至多約為2.5mM。
41.如權利要求29-40任一所述的組合物，其特徵在於，所述的活性成分(i)和(ii)與其他藥物一起給予。
42.如權利要求41所述的組合物，其特徵在於，所述的藥物是雙嘧達莫或凝塊破裂藥。
43.如權利要求42所述的組合物，其特徵在於，所述的凝塊破裂藥是鏈激酶。
全文摘要
本發明涉及停止、保護和/或保存器官的方法,該方法包括給予有此需要的對象有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑。本發明還涉及停止、保護和/或保存器官的方法,該方法包括給予器官組合物,該組合物含有有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)器官的局部麻醉劑。本發明還提供了藥物組合物或獸用組合物,其包括有效量的(i)鉀通道開啟劑或促效劑和/或腺苷受體促效劑和(ii)局部麻醉劑。
文檔編號A61K31/4409GK1344135SQ00805408
公開日2002年4月10日 申請日期2000年3月22日 優先權日1999年3月23日
發明者G·P·多布森 申請人:詹姆斯庫克大學