從秋茄葉片中提取齊墩果酸的方法
2023-11-03 07:18:22
專利名稱：從秋茄葉片中提取齊墩果酸的方法
技術領域：
本發明涉及一種齊墩果酸，尤其是涉及一種從紅樹植物秋茄葉片中提取純化齊墩果酸的 方法。
背景技術：
秋茄(《amfe//aca"&/)是一種生長在熱帶、亞熱帶海岸的紅樹植物，屬紅樹科秋茄屬。 秋茄為灌木或小喬木，高2 3m;具支柱根；葉革質、互對生；花為腋生；樹皮平滑呈紅褐 色；枝粗壯，有膨大的節。秋茄主要分布於印度、泰國、越南、馬來西亞、日本琉球群島南 部；在中國，主要分布於廣東、廣西、福建、臺灣地區。民間將秋茄作為藥物使用，其皮具 有收斂、止血和抗菌作用，而且其根的乙醇提取液可以治療風溼性關節炎。研究資料表明， 秋茄中含有多糖、鞣質、脂肪酸、甾醇、三萜和黃酮類等活性化合物，其中就包括了曾從秋 茄莖皮中分離到的齊墩果酸這種五環三萜類化合物。
齊墩果酸的分子式為C3QH4803，為白色針狀結晶，無味、無臭，存在於多種植物中。研 究表明，齊墩果酸作為一種天然產物化學成分，具多種生物活性，包括護肝、解肝毒、降糖、 降脂、消炎、抗病毒、抗過氧化、抗突變及抗癌等，且毒副作用小，安全性高，已在臨床上 用於治療急性黃疸型和慢性病毒型肝炎，被認為是保肝良藥和抗癌輔助藥物。因齊墩果酸結 構複雜，難以人工合成獲得，目前依賴於從植物中提取純化得到。生產齊墩果酸的植物原料 主要有女貞子、雪膽、青葉膽、遼東木和雲南木等，其中大部分為野生資源，採集不便，產 量不穩定，且採集根皮、莖皮等部位會破壞資源。另外，雖然目前一般採用的提純方法可以 提取出齊Jt果酸，但存在工藝複雜、耗時長、提取率低、分離效率低，產品純度低等缺點。
有關從植物中提取齊墩果酸的方法已有報導。
公開號為CN1045585的發明專利申請提供一種從植物中提取齊墩果酸的方法，是從含有 齊墩果酸的三萜皂甙的植物中提取齊墩果酸，它由水提、水解，酸性醇液重結晶等三個步驟 完成，採用該發明提取齊墩果酸，可節省醇，而且提高了提取率，方法簡單，適合工業生產。
公開號為CN1449372的發明專利申請提供一種製備齊墩果酸和/或山楂酸及其生理上可 接受的鹽的方法，包括用水和/或有機溶劑提取橄欖植物和/或在橄欖油製備過程中所形成的產 品，然後進行濃縮和/或精餾及純化。公告號為CN1303850的發明專利提供一種生產齊墩果酸的新方法，以五加科Z.木屬 Aralia植物太白.'.木Araliataibaiensisz.z.wangetH.C.zheng為原料，經70%乙醇熱提取、酸沉 澱分離總皂甙、單獨酸水解總皂甙、精製純化等步聚得到齊墩果酸。採用本方法生產齊墩果 酸，其得率為目前用女貞子生產齊墩果酸得率的10倍左右。該發明降低生產難度，縮短生產 周期，大大提高產率，而且成品純度高，解決目前生產中濃縮時起泡問題及酸水、廢氣汙染 等問題。
公開號CN1558942的發明專利申請提供一種含有齊墩果酸和/或山楂酸的油脂組合物的 製造方法，包括使用有機溶劑或含水有機溶劑對橄欖植物和/或橄欖油製造過程中得到的副產 物進行提取處理，是在工業上高效率地製造含有齊墩果酸、山楂酸，這些的生理上容許的鹽 以及這些的衍生物的油脂組合物的方法。
發明內容
本發明的目的是提供一種步驟簡單、生產周期短、分離效率高、純度高的從秋茄葉片中 提取齊墩果酸的方法。
本發明包括如下步驟
1) 將秋茄葉片清洗後陰乾，加入二氯甲垸進行提取，過濾，得提取液，乾燥，回收二氯 甲烷，得浸膏；
2) 將浸膏加入層析用矽膠吸附，研碎成粉，裝柱，以石油醚/丙酮為洗脫劑，進行梯度
洗脫，按質量比，以石油醚丙酮分別為30:i， 10:i和4:i，衝i 5個柱體積，最後以
甲醇衝洗，共得18個組分，其中的第12 17組分為齊墩果酸粗品，再經矽膠柱層析，以氯 仿/甲醇為洗脫劑進行洗脫，最後以甲醇衝洗，共得4個組分，其中的第3組分即為齊墩果酸 純品。
按質量比，秋茄葉片二氯甲垸最好為1 : (3 8)，提取液乾燥的溫度最好為40 50°C。
按質量比，以氯仿/甲醇為洗脫劑進行洗脫的氯仿甲醇最好為(45 60) :i。
本發明基於秋茄葉片中含有較多多酚類成分，提取液中該類成分的存在對後續分離純化 工藝造成一定的幹擾從而造成純化工藝的複雜，提出利用多酚類物質不溶於二氯甲垸而齊墩 果酸溶於二氯甲烷的性質，以二氯甲垸作提取溶劑，通過浸提和抽濾，在第一步就將齊墩果 酸與多酚類物質有效分離開來，提高提取效率，降低了後續分離純化工作的難度，利於純化， 而且二氯甲垸作為有機溶劑，有消泡作用，利於濃縮且縮短濃縮時間。另外，二氯甲烷提取 液不易發黴變質，二氯甲烷還可回收利用。同時，採用矽膠柱層析分離純化技術，可避免活 性成分的分解破壞，又可大大減少雜質幹擾，顯著提高齊墩果酸的分離度和富集率，提高分離純化效率。
由此可見，本發明僅需以二氯甲烷對秋茄葉片進行提取，提取物經兩次矽膠柱層析即可 得到齊墩果酸，純度在90%以上。與傳統的齊墩果酸提純方法相比較，本發明方法具有步驟 簡單、生產周期短、分離效率高及純度高等優點。
具體實施例方式
實施例l:將新鮮的秋茄葉片用自來水衝洗，在陰涼通風處陰乾。取400g，置於乾淨的 玻璃缸中，加入二氯甲垸進行提取，秋茄葉片二氯甲垸為1 : 8。提取24h後，將提取液以 定量濾紙過濾，在45'C下減壓乾燥，得到浸膏23.8g。將此浸膏進行矽膠柱層析。在矽膠柱 層析的過程時，將經薄層層析檢驗相同的洗脫液餾分合併為一個組分。首先以石油醚丙酮
為洗脫劑，進行梯度洗脫，石油醚丙酮分別為30 : i， io : i和4 : i，每個比例衝3個柱
體積，最後以甲醇衝洗，共得18個組分。其中第15個組分為齊墩果酸粗品，將其再經矽膠
柱層析，以55 : i的氯仿甲醇為洗脫劑，最後以甲醇衝洗，共得4個組分.其中第3個組分
即為齊墩果酸純品。 -
實施例2:將新鮮的秋茄葉片用自來水衝洗，在陰涼通風處陰千。取400g，置於乾淨的
玻璃缸中，加入二氯甲垸進行提取，秋茄葉片二氯甲烷為i : 3。提取24h後，將提取液以
定量濾紙過濾，在40'C下減壓乾燥，得到浸膏19.4g。將此浸膏進行矽膠柱層析。在矽膠柱
層析的過程時，將經薄層層析檢驗相同的洗脫液餾分合併為一個組分。首先以石油醚丙酮
為洗脫劑，進行梯度洗脫，石油醚丙酮的比例分別為30 : i， io : i和4 : i，每個比例衝3
個柱體積，最後以甲醇衝洗，共得18個組分。其中第14個組分為齊墩果酸粗品，將其再經
矽膠柱層析，以45 : i的氯仿甲醇為洗脫劑，最後以甲醇衝洗，共得4個組分.其中第3個
組分即為齊墩果酸純品。
實施例3:將新鮮的秋茄葉片用自來水衝洗，在陰涼通風處陰乾。取400g，置於乾淨的
玻璃缸中，加入二氯甲垸進行提取，秋茄葉片二氯甲烷為i : 4。提取24h後，將提取液以
定量濾紙過濾，在42'C下減壓乾燥，得到浸膏20.3g。將此浸膏進行矽膠柱層析。在矽膠柱
層析的過程時，將經薄層層析檢驗相同的洗脫液餾分合併為一個組分。首先以石油醚丙酮
為洗脫劑，進行梯度洗脫，石油醚丙酮的比例分別為30 : l， io.: l和4 : l，每個比例衝3
個柱體積，最後以甲醇衝洗，共得18個組分。其中第17個組分為齊墩果酸粗品，將其再經
矽膠柱層析，以47 : i的氯仿甲醇為洗脫劑，最後以甲醇衝洗，共得4個組分.其中第3個
組分即為齊墩果酸純品。
實施例4:將新鮮的秋茄葉片用自來水衝洗，在陰涼通風處陰乾。取400g，置於乾淨的
5玻璃缸中，加入二氯甲烷進行提取，秋茄葉片二氯甲烷為i : 5。提取24h後，將提取液以
定量濾紙過濾，在44'C下減壓乾燥，得到浸膏21.5g。將此浸膏進行矽膠柱層析。在矽膠柱
為洗脫劑，進行梯度洗脫，石油醚丙酮的比例分別為30 : l, io : i和4 : l，每個比例衝3 個柱體積，最後以甲醇衝洗，共得18個組分。其中第13個組分為齊墩果酸粗品，將其再經 矽膠柱層析，以50:i的氯仿甲醇為洗脫劑，最後以甲醇衝洗，共得4個組分.其中第3個 組分即為齊墩果酸純品。
實施例5:將新鮮的秋茄葉片用自來水衝洗，在陰涼通風處陰乾。取400g,置於乾淨的
玻璃缸中，加入二氯甲烷進行提取，秋茄葉片二氯甲烷為l : 6。提取24h後，將提取液以
定量濾紙過濾，在46'C下減壓乾燥，得到浸膏21.9g。將此浸膏進行矽膠柱層析。在矽膠柱 層析的過程時，將經薄層層析檢驗相同的洗脫液餾分合併為一個組分。首先以石油醚丙酮
為洗脫劑，進行梯度洗脫，石油醚丙酮的比例分別為30 : i, io : i和4 : i，每個比例衝3
個柱體積，最後以甲醇衝洗，共得18個組分。其中第12個組分為齊墩果酸粗品，將其再經
矽膠柱層析，以53 : i的氯仿甲醇為洗脫劑，最後以甲醇衝洗，共得4個組分.其中第3個
組分即為齊墩果酸純品。
實施例6:將新鮮的秋茄葉片用自來水衝洗，在陰涼通風處陰乾。取400g，置於乾淨的
玻璃缸中，加入二氯甲垸進行提取，秋茄葉片二氯甲垸為i : 7。提取24h後，將提取液以
定量濾紙過濾，在48。C下減壓乾燥，得到浸膏22.6g。將此浸膏進行矽膠柱層析。在矽膠柱 層析的過程時，將經薄層層析檢驗相同的洗脫液餾分合併為一個組分。首先以石油醚丙酮
為洗脫劑，進行梯度洗脫，石油醚丙酮的比例分別為30 : i， io : l和4 : l，每個比例衝3
個柱體積，最後以甲醇衝洗，共得18個組分。其中第16個組分為齊墩果酸粗品，將其再經
矽膠柱層析，以60:i的氯仿甲醇為洗脫劑，最後以甲醇衝洗，共得4個組分.其中第3個
組分即為齊墩果酸純品。
實驗表明，秋茄葉片中齊墩果酸的含量較高，達0.3%左右，與目前常用來生產齊墩果酸
的青葉膽等植物中齊墩果酸含量相當，可見秋茄葉片是值得開發利用的植物資源。而秋茄在 我國南方海岸資源豐富，既有天然林，也有人工林，尤其是人工秋茄林區近年來發展迅速， 這是因為目前我國正積極開展紅樹林恢復性造林工程，而秋茄正是一種主要恢復種類，並且， 秋茄葉片的採集簡便易行，不會破壞資源。這些都為利用秋茄葉片生產齊墩果酸提供了穩定 的原料來源。另一方面，本發明使秋茄葉片變廢為寶，生產高價值的藥物產品，使秋茄葉片 的藥用價值被充分利用，提升了紅樹植物秋茄的綜合經濟價值，將促進紅樹林的恢復工作。
權利要求
1. 從秋茄葉片中提取齊墩果酸的方法，其特徵在於包括如下步驟1)將秋茄葉片清洗後陰乾，加入二氯甲烷進行提取，過濾，得提取液，乾燥，回收二氯甲烷，得浸膏；2)將浸膏加入層析用矽膠吸附，研碎成粉，裝柱，以石油醚/丙酮為洗脫劑，進行梯度洗脫，按質量比，以石油醚丙酮分別為30∶1，10∶1和4∶1，衝1～5個柱體積，最後以甲醇衝洗，共得18個組分，其中的第12～17組分為齊墩果酸粗品，再經矽膠柱層析，以氯仿/甲醇為洗脫劑進行洗脫，最後以甲醇衝洗，共得4個組分，其中的第3組分即為齊墩果酸純品。
2. 如權利要求l所述的從秋茄葉片中提取齊墩果酸的方法，其特徵在於按質量比，秋茄葉片二氯甲烷為i : 3 8。
3. 如權利要求l所述的從秋茄葉片中提取齊墩果酸的方法，其特徵在於提取液乾燥的溫 度為40 50°C。
4. 如權利要求l所述的從秋茄葉片中提取齊墩果酸的方法，其特徵在於按質量比，以氯仿/甲醇為洗脫劑進行洗脫的氯仿甲醇為45 60 : i。
全文摘要
從秋茄葉片中提取齊墩果酸的方法，涉及一種齊墩果酸，尤其是涉及一種從紅樹植物秋茄葉片中提取純化齊墩果酸的方法。提供一種步驟簡單、生產周期短、分離效率高、純度高的從秋茄葉片中提取齊墩果酸的方法。將秋茄葉片清洗後陰乾，加入二氯甲烷提取，過濾得提取液，乾燥，得浸膏；將浸膏加入層析用矽膠吸附，研碎成粉，裝柱，以石油醚/丙酮為洗脫劑，進行梯度洗脫，按質量比，以石油醚∶丙酮分別為30∶1，10∶1和4∶1，衝1～5個柱體積，最後以甲醇衝洗，共得18個組分，其中的第12～17組分為齊墩果酸粗品，再經矽膠柱層析，以氯仿/甲醇為洗脫劑進行洗脫，最後以甲醇衝洗，共得4個組分，其中的第3組分即為齊墩果酸純品。
文檔編號C07J63/00GK101450962SQ200810189179
公開日2009年6月10日 申請日期2008年12月30日 優先權日2008年12月30日
發明者馮丹青, 盧昌義, 成 向, 柯才煥 申請人:廈門大學