西番蓮組織培養培養基的製作方法

2023-11-30 13:19:41

西番蓮組織培養培養基的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種西番蓮組織培養培養基，該培養基包括繼代培養基、第一步生根培養基和第二步生根培養基。在培養基的選擇上一般採用基本培養基(MS)和生長調節劑的結合，側重點不一樣，具有縮短了繼代周期，芽的質量好，得到的苗生根率高，出根能力強，愈傷組織少，葉片深綠色等優點。
【專利說明】西番蓮組織培養培養基
【技術領域】
[0001]本發明涉及組織培養基，尤其涉及一種西番蓮組織培養培養基。
【背景技術】
[0002]西番蓮(學名:Passiflora caerulea L.)是一種芳香可口的水果，有「果汁之王」的美譽，為多年生常綠攀緣木質藤本植物，株態優美，四季常青，葉型奇特，花色鮮豔，氣味芬芳，果實甜酸可口，果實芳香，食用果瓤，酸甜可口。風味濃鬱，芳香怡人。西番蓮原產於巴西,後來在南美、南非、東南亞各國、澳洲和南太平洋各地區都有種植。由於西番蓮的果實形似雞蛋，果汁色澤如雞蛋黃並具有菠蘿、番石榴、香蕉、芒果、草毒、西瓜、酸梅、甘蔗和桃李等多種水果的的風味，所以又有雞蛋果、百香果之稱。西番蓮全身都是寶，據測定，西番蓮果實含有超過135種以上的芳香物質，據化學分析測定，西番蓮果內維生素A、B、C含量豐富，還含有磷、鈣、鉀、鐵和17種胺基酸、歷5種的化合物，營養和藥用價值很高。其整、根、葉可以入藥，有消炎、止痛、活血強身、降脂降血壓等功效，果皮可以加工成飼料。
[0003]西番蓮果汁中有165種化合物，最適於加工成果汁，或與其它水果(如芒果、菠蘿、番石榴、柑橙和蘋果等)加工混配成混合果汁，可以顯著地提高這些水果汁的口感與香味；西番蓮果汁構成特殊香味，有養顏美容、去除疲勞、防衰老、抗高血壓的療效。具有很高的營養價值、經濟價值和觀賞價值。
[0004]西番蓮以種子繁育的植株性別表現較遲，用種子繁育實生苗很大程度影響了生產。另外，採用扦插、嫁接等常規的無性繁殖技術成活率又低，不適合西番蓮的快速繁殖。因此，通過組培技術快速繁 殖西番蓮株性一致的優良種苗倍受關注。大量研究表明，西番蓮利用組培快繁技術育苗是非常理想的途徑，具有保持優良品種的遺傳穩定性；生產無病種苗的優點；種苗繁殖迅速等特點。
[0005]目前，國內已有許多西番蓮組培技術研究報導，在生產應用上也初具規模。但是，西番蓮品種繁多，不同的品種對培養基的要求不同，一般工廠化生產同時生產幾個品種，如果一個品種使用一種培養基，生產操作難度大，成本高，不利於規模化生產。目前繼代培養基重點是芽分化，但能用於生根誘導的芽(即有效芽)卻很少，且芽的質量也不好，細弱、矮、黃葉；生根培養基配方很多，但是出根不整齊，不穩定，根系愈傷化，數量少等，由於存在以上問題，西番蓮組培育苗成本高，工廠化生產比較困難。在培養基的選擇上一般採用基本培養基(MS)和生長調節劑的結合，基本培養基一般設1/2MS、MS、3/2MS等3種，生長調節劑選用IBA (吲哚丁酸)和NAA (萘乙酸)兩種，但是繼代培養基和生根培養基的側重點不一樣，如不區分，得到的苗生根率低，根膨化，愈傷組織多，且葉片黃花等，存在很多不足。

【發明內容】

[0006]本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種西番蓮組織培養培養基，該培養基包括繼代培養基、第一步生根培養基和第二步生根培養基，其中:
[0007]每升(L)繼代培養基的組分及各組分的含量如下:[0008](I)大量元素:硝酸鉀2450mg/L、硝酸銨2100mg/L、七水硫酸鎂450mg/L、磷酸二氫鉀 350mg/L、氯化鈣 450mg/L ；
[0009](2)微量元素:一水硫酸錳22.0mg/L、七水硫酸鋅8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水鑰酸鈉0.025mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L、鈉鹽35.5mg/L、七水硫酸亞鐵 26.5mg/L、碘化鉀 0.75mg/L ；
[0010](3)有機物:甘氨酸2.0mg/L、鹽酸硫胺素10.0mg/L、鹽酸吡卩多醇0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、肌醇 100.0mg/L ；
[0011](4)植物 生長調節劑:6_苄基腺嘌呤0.25-0.35mg/L、萘乙酸0.15-0.25mg/L ；
[0012]餘量為蒸餾水。
[0013]每升(L)第一步生根培養基的組分及各組分的含量如下:
[0014](I)大量元素:硝酸鉀2100mg/L、硝酸銨1824mg/L、七水硫酸鎂352mg/L、磷酸二氫鉀 222mg/L、氯化鈣 490mg/L ；
[0015](2)微量元素:一水硫酸錳22.0mg/L、七水硫酸鋅8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水鑰酸鈉0.025mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L、鈉鹽35.5mg/L、七水硫酸亞鐵 26.5mg/L、碘化鉀 0.75mg/L ；
[0016](3)有機物:甘氨酸2.0mg/L、鹽酸硫胺素10.0mg/L、鹽酸吡卩多醇0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、肌醇 100.0mg/L ；
[0017](4)植物生長調節劑:萘乙酸0.1-0.2mg/L、吲哚丁酸1.5-2.5mg/L ；
[0018](5)其他添加物:活性炭2.0-3.0mg/L ；
[0019]餘量為蒸餾水。
[0020]每升(L)第二步生根培養基的組分及各組分的含量如下:
[0021](I)大量元素:硝酸鉀1050mg/L、硝酸銨912mg/L、七水硫酸鎂176mg/L、磷酸二氫鉀 11111^/1、氯化|丐 245mg/L ；
[0022](2)微量元素:一水硫酸錳22.0mg/L、七水硫酸鋅8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水鑰酸鈉0.025mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L、鈉鹽35.5mg/L、七水硫酸亞鐵 26.5mg/L、碘化鉀 0.75mg/L ；
[0023](3)有機物:甘氨酸2.0mg/L、鹽酸硫胺素10.0mg/L、鹽酸吡哆醇0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、肌醇 100.0mg/L ；
[0024](4)植物生長調節劑:吲哚丁酸0.1-0.2mg/L ；
[0025](5)其他添加物:活性炭3.0-4.0mg/L ；
[0026]餘量為蒸餾水。
[0027]本發明西番蓮培養基中的繼代培養基的配製方法為:
[0028](I)配製大量元素母液、微量元素母液、有機物母液、植物生產調節劑母液；
[0029](2)根據培養基配製量依次量取各種母液，即混合母液；
[0030](3)稱量白糖和瓊脂，其中白糖30g/L，瓊脂3.0g/L ；
[0031](4)加熱白糖和瓊脂至完全溶解；
[0032](5)然後加入量好的混合母液，用水定容，攪拌均勻；
[0033](6)用NaOH和HCl調試培養基的PH值至5.8 ；
[0034](7)調好PH值的培養基趁熱分裝到培養瓶，蓋上瓶蓋，擰緊；[0035](8)把培養基放入高溫高壓滅菌鍋，在121.6°C,0.1MPa下滅菌20分鐘；
[0036](9)滅菌後的培養基靜置冷卻至凝固，此時的培養基可以使用。
[0037]本發明西番蓮組織培養培養基中的第一步生根培養基的配製方法為:
[0038](I)配製大量元素母液、微量元素母液、有機物母液、植物生產調節劑母液、活性炭;
[0039](2)根據培養基配製量依次量取各種母液，即混合母液；
[0040](3)稱量白糖和瓊脂，其中白糖15g/L，瓊脂3.2g/L ；
[0041](4)加熱白糖和瓊脂至完全溶解；
[0042](5)然後加入量好的混合母液，用水定容，攪拌均勻；
[0043](6)用NaOH和HCl調試培養基的PH值至5.8 ；
[0044](7)調好PH值的培養基趁熱分裝到培養瓶，蓋上瓶蓋，擰緊；
[0045](8)把培養基放入高溫高壓滅菌鍋，在121.6°C,0.1MPa下滅菌20分鐘；
[0046](9)滅菌後的培養基靜置冷卻至凝固，此時的培養基可以使用。
[0047]本發明西番蓮組 織培養培養基中的第二步生根培養基的配製方法為:
[0048](I)配製大量元素母液、微量元素母液、有機物母液、活性炭；
[0049](2)根據培養基配製量依次量取各種母液，即混合母液；
[0050](3)稱量白糖和瓊脂，其中白糖15g/L,瓊脂3.4g/L ；
[0051](4)加熱白糖和瓊脂至完全溶解；
[0052](5)然後加入量好的混合母液，用水定容，攪拌均勻；
[0053](6)用NaOH和HCl調試培養基的PH值至5.8 ；
[0054](7)調好PH值的培養基趁熱分裝到培養袋，用三角架固定，夾緊；
[0055](8)把培養基放入高溫高壓滅菌鍋，在121.6°C,0.1MPa下滅菌17分鐘；
[0056](9)滅菌後的培養基靜置冷卻至凝固，此時的培養基可以使用。
[0057]本發明西番蓮組織培養培養基中繼代培養的方法為:
[0058](I)先弱光培養7至8天，繼代苗切口癒合，頂芽上挺，分化出側芽，苗木恢復長勢；
[0059](2)然後強光培養8至12天，頂芽側芽高3釐米以上，葉片舒展，莖幹半木質化。此時的芽即可用於生根培養。培養溫度保持在25-30°C。
[0060]本發明西番蓮培養基第一步生根培養的方法為:
[0061](I)暗培養5至7天，生根苗基部膨脹，形成根原基。溫度要求比較粗放，不低於15°C即可，最佳溫度25-30°C。
[0062](2)此時的生根苗轉入第二步生根培養基繼續培養。
[0063]本發明西番蓮培養基第二步生根培養的方法為:
[0064](I)強光培養10至15天，室溫培養即可。
[0065](2)此時生根苗高4-5釐米，根系5條以上，葉片舒展，苗莖木質化，即可出圃移植。
[0066]與目前現有技術的西番蓮組織培養基相比，本發明的優點是:
[0067]
【權利要求】
1.一種西番蓮組織培養培養基，該培養基包括繼代培養基、第一步生根培養基和第二步生根培養基，其特徵在於: 每升(L)繼代培養基的組分及各組分的含量如下: (1)大量元素:硝酸鉀2450mg/L、硝酸銨2100mg/L、七水硫酸鎂450mg/L、磷酸二氫鉀350mg/L、氯化鈣 450mg/L ； (2)微量元素:一水硫酸錳22.0mg/L、七水硫酸鋅8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水鑰酸鈉0.025mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L、鈉鹽35.5mg/L、七水硫酸亞鐵26.5mg/L、碘化鉀 0.75mg/L ； (3)有機物:甘氨酸2.0mg/L、鹽酸硫胺素10.0mg/L、鹽酸吡卩多醇0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、肌醇 100.0mg/L ； (4)植物生長調節劑:6_苄基腺嘌呤0.25-0.35mg/L、萘乙酸0.15-0.25mg/L ； 餘量為蒸餾水； 每升(L)第一步生根培養基的組分及各組分的含量如下: (1)大量元素:硝酸鉀2100mg/L、硝酸銨1824mg/L、七水硫酸鎂352mg/L、磷酸二氫鉀222mg/L、氯化鈣 490mg/L ； (2)微量元素:一水硫酸錳22.0mg/L、七水硫酸鋅8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水鑰酸鈉0.025mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L、鈉鹽35.5mg/L、七水硫酸亞鐵26.5mg/L、碘化鉀 0.75mg/L ； (3)有機物:甘氨酸2.0mg/L、鹽酸硫胺素10.0mg/L、鹽酸吡卩多醇0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、肌醇 100.0mg/L ； (4)植物生長調節劑:萘乙酸0.1-0.2mg/L、吲哚丁酸1.5-2.5mg/L ； (5)其他添加物:活性炭2.0-3.0mg/L ； 餘量為蒸餾水； 每升(L)第二步生根培養基的組分及各組分的含量如下: (1)大量元素:硝酸鉀1050mg/L、硝酸銨912mg/L、七水硫酸鎂176mg/L、磷酸二氫鉀lllmg/L、氯化?丐 245mg/L ； (2)微量元素:一水硫酸錳22.0mg/L、七水硫酸鋅8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水鑰酸鈉0.025mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L、鈉鹽35.5mg/L、七水硫酸亞鐵26.5mg/L、碘化鉀 0.75mg/L ； (3)有機物:甘氨酸2.0mg/L、鹽酸硫胺素10.0mg/L、鹽酸吡卩多醇0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、肌醇 100.0mg/L ； (4)植物生長調節劑:吲哚丁酸0.1-0.2mg/L ； (5)其他添加物:活性炭3.0-4.0mg/L ； 餘量為蒸餾水。
【文檔編號】A01H4/00GK103947553SQ201410180433
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年4月30日 優先權日:2014年4月30日
【發明者】周冠旻 申請人:桂林軍供生化技術開發有限公司