人早期胚胎因子及其製取法和在製藥中的應用的製作方法
2023-12-06 16:17:16 1
專利名稱：人早期胚胎因子及其製取法和在製藥中的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬醫療領域，涉及到人胚胎因子及其製取方法，以及人早期胚胎因子的抗癌治癌用途。
攻克癌症是當今生物科學和醫學上的重大課題，近幾十年來，細胞學、遺傳學、組織培養學、生物化學、分子生物學等學科的建立和發展，為人類徵服癌症提供了新的途徑——生物療法，如幹擾素、轉移因子、白介素-2，以及基因療法均屬此類。目前國內的醫藥研究，有人從胎兒腦中提取神經生長因子，也有人從胎盤中提取胎盤轉移因子，還有用胎兒肝脾細胞製成胎兒細胞懸浮液的報導，但都不是從人的早期整體胚胎提取。無疑，從人的早期整體胚胎中提取高活性的因子和物質，在醫藥上將具有重大的意義。
本發明的目的就是試圖從人的早期胚胎中提取一種具有直接逆抑癌細胞作用又能刺激、調節人體免疫細胞抗癌功能的活性因子，製取一種新的抗癌藥品，應用於臨床抗癌治療。
本發明是這樣實現的依據現代生物科學原理，人的早期胚胎組織是人體生命活力最強的組織，採用如下的方法，可以製成人早期胚胎因子生物製劑。
(一)原料收集的標準要求(1)製取人早期胚胎因子的組織材料，應由健康婦女提供，時期為2—3個月，胚胎組織在體內為活體，無病態異常。
(2)取出胚胎組織後，觀察無異常，應迅速放置-20℃以下保存。
(3)對胚胎組織進行B肝、C肝等血液的病毒抗原抗體×檢測，陰性方可選為正式原料。
(二)將收集到的符合標準要求的胚胎組織用無菌蒸餾水衝洗乾淨，然後置高速絞碎機內，加冷蒸餾水進行勻漿，轉速10000—12000轉/分，時間3—5分鐘，將勻漿置-20℃以下冰凍，然後取出，在35—37℃水浴融化，融化後立即速凍，將勻漿混懸液調整PH值為4.6—4.8，在4—6℃下放置1—2小時，然後離心(轉速3000轉/分)以上，取出上清液。將上清液調為PH6.9—7.1，澄清過濾。將澄清液倒入超濾器內進行超濾。所得超濾液即為人早期胚胎因子製劑。對超濾所得製劑進行除菌，各類血液病毒抗原抗體檢測，全部為陰性後進行分裝成品。
採用上述方法，提取了人早期胚胎因子，並同時完成了人早期胚胎因子作為製備治癌症藥的應用。
其藥性檢測符合國家生物製品標準要求1、外觀液體製劑無色澄明。
2、PH值7.0±23、分子量2萬4、紫外分析測定多肽為1000mg/ml以上，核糖體為100mg/ml以上。
5、蛋白質反應3%磺基水楊酸法(一)性。
6、熱流反應(一)。
7、過敏反應(一)。
8、藥物刺激試驗皮下注射無紅腫、硬變、壞死、症狀、眼結膜滴入無紅腫、充血現象。
實驗證明，人早期胚胎因子，具有下列醫學應用價值和用途(一)人早期胚胎因子對癌細胞有顯著的直接抑殺作用經組織培養，反覆實驗，人早期胚胎因子對人癌細胞(如人宮頸癌細胞、人猴頭癌細胞等)有顯著的抑殺作用，人癌細胞加入人早期胚胎因子後，在35℃條件下，孵育120小時，90%以上的癌細胞崩解死亡，而同樣條件下的對照組癌細胞卻正常生長。具有重要意義的是人早期胚胎因子對人體正常細胞無毒副作用，加入人早期胚胎因子的人體正常細胞，(如人胎肺二倍體細胞等)與對照組一樣，生長良好。
(二)動物實驗，有明顯的抑瘤作用①小鼠皮下實體瘤實驗經對40隻小鼠分批實驗，注射人早期胚胎因子組與對照組相比，對實體瘤的抑瘤率達39.19%，P＜0.001，有顯著差異。
②小鼠腹水癌實驗經對30隻小鼠實驗，注射人早期胚胎因子組的小鼠平均腹圍每隻增加0.51釐米，P值＞0.050，而對照組平均每隻增加0.98釐米，P值＜0.001，兩者相差明顯。
③動物病理切片檢驗經對小鼠皮下實體瘤病理切片檢驗，注射人早期胚胎因子的皮下實體瘤的癌細胞大量壞死，對照組癌細胞沒有壞死現象，顯示人早期胚胎因子對動物腫瘤生長有破壞和抑制作用。
(三)有類似白介素—2作用，能高效誘導Lak細胞產生很強的殺癌能力Lak細胞是人血中分離出來的一種特定淋巴細胞，它在白介素-2(一種淋巴細胞生長因子)的誘導下能成為一種識別性很高、殺癌性很強的專門細胞，將它回輸給病人，可獲得抗腫瘤的治療效果，因此白介素-2是一種有重要醫學臨床應用價值的細胞因子。現經實驗證明，人早期胚胎因子具有類似白介素-2的作用，也能高效誘導Lak細胞，並使之產生很強殺癌率。經生物化學檢測證明，人早期胚胎因子與白介素-2是兩種不同的物質，前者的成分中也不含有後者的物質。又經10次實驗證明，人早期胚胎因子，在誘導Lak細胞形態上和數量上，與白介素-2的誘導結果是類似的，而且在殺癌率上也十分接近，白介素-2最佳殺癌率為93.2%，人早期胚胎因子最佳殺癌率為89.2%，而對照組僅為10.3%。(採用的實驗方法細菌培養加MTT酶標儀測定法)。
(四)能高效激活NK細胞，提高NK細胞的殺癌力NK細胞是哺乳動物體內的自然殺癌細胞，它無需預先致敏，也不需要由抗體參加，即可對自身的各種腫瘤有迅速的溶解作用，因此，能否激活NK細胞是檢驗某種生物製劑有無抗癌作用的重要標誌。經10次人血實驗證明，人早期胚胎因子激活NK細胞，其激活殺癌率與白介素-2十分接近。實驗結果人早期胚胎因子組殺癌率為88.2%(平均值)，白介素-2組殺癌率為91.1%(平均值)，而對照組僅為47.2%，顯示人早期胚胎因子組明顯高於對照組，P值＜0.001。
經對20隻小白鼠實驗證明，僅注射8針人早期胚胎因子，即可使小白鼠脾臟NK細胞殺癌活性上升11%，經統計學處理P＜0.001。
(五)能顯著提高免疫功能經取40個人血實驗，人早期胚胎因子可使人白細胞吞噬率比對照組上升88.06%，比豬胸腺組高23.53%；可使人白細胞吞噬指數比對照組上升161.4%，比豬胸腺素組高72.5%，通過α—醋酸萘酯酶實驗，可使T淋巴細胞活性上升37.26%，比豬胸腺素組高7%。
經對15隻大白鼠實驗證明，用人早期胚胎因子後比用人早期胚胎因子前血白細胞吞噬率上升118.8%，吞噬指數上升207.7%，可使大鼠T淋巴細胞活性上升117.7%。
從以上可以看出，人早期胚胎因子對癌細胞有顯著的抑殺作用，它類似白介素-2，能高效誘導Lak細胞，高效激活NK細胞，提高細胞的殺癌力，能顯著提高免疫功能，對人體正常細胞無毒副作用。人早期胚胎因子原料為人工流產的廢棄物，成本低，產品價格便宜，效價成本僅是白介素-2的1/7—1/10(白介素-2國內價格為每克60萬元)。製造方法簡單，一般的生物製品研究所均可製造，該藥品及其製取方法，有廣闊的醫藥應用前景。
權利要求
1.一種人早期胚胎因子及其製取法和在製藥中的應用，其特徵是所說的人早期胚胎因子的物理-化學參數是①外觀液體製劑為無色澄明；②PH值7.0±2；③分子量2萬；④紫外分析測定多肽為1000mg/ml以上，核糖體為100mg/ml以上；⑤蛋白質反應3%磺基水楊酸法(一)性；⑥熱流反應(一)；⑦過敏反應(一)；⑧藥物刺激試驗皮下注射無紅腫、硬變、壞死症狀，眼結膜滴入無紅腫、充血現象。
2.按照權利要求1所述的人早期胚胎因子及其製取法和在製藥中的應用，其特徵是所說的製取法是①收集原料的標準要求為a、製取人早期胚胎因子的組織材料，應由健康婦女提供，時期為2—3個月，胚胎組織在體內為活體，無病態異常；b、取出胚胎組織後應迅速放置-20℃以下保存；c、對胚胎組織進行B肝、C肝等血液的病毒抗原抗體×檢測、陰性方可選為正式原料；②將收集到的符合標準要求的胚胎組織用無菌蒸餾水衝洗乾淨，然後置高速絞碎機內，加冷蒸餾水進行勻漿，轉速10000—12000轉/分，時間3—5分鐘，將勻漿置-20℃以下冰凍，然後取出，在35—37℃水浴融化，融化後立即速凍，將勻漿混懸液調整PH值為4.6—4.8，在4—6℃下放置1—2小時，然後離心，轉速3000轉/分以上，取出上清液，將上清液調為PH6.9—7.1，澄清過濾，將澄清液倒入超濾器內進行超濾，所得超濾液即為人早期胚胎因子製劑，對超濾所得製劑進行除菌，各類血液病毒抗原抗體檢測，全部為陰性後進行分裝成品。
3.按照權利要求1、2所述的人早期胚胎因子及其製取法和在製藥中的應用，其特徵在於所說的在製藥中的應用是人早期胚胎因子作為治癌症藥的應用，它能直接抑殺癌細胞，誘導Lak細胞，激活NK細胞。
全文摘要
公開了人早期胚胎因子及其製取方法和在製藥中的應用。它將人早期胚胎組織置高速絞碎機內勻漿，勻漿冰凍後取出，然後離心、過濾和超濾、除菌，進行血液病毒抗原抗體檢測，所得人早期胚胎因子分子量為2萬，多肽為1000mg/ml以上，核糖體為100mg/ml以上，能高效誘導Lak細胞，激活NK細胞，作為治癌藥物，具有很強的殺癌力和免疫功能，無毒副作用。所用原料為人工流產廢棄物，一般生物製品所均可製造，應用前景廣闊。
文檔編號A61K35/54GK1102097SQ93115199
公開日1995年5月3日 申請日期1993年10月29日 優先權日1993年10月29日
發明者李濱勝, 李榮傑, 孫安堂, 李星 申請人:泰安市中醫醫院, 泰安市衛生防疫站, 山東省生物製品研究所