早老素5抑制因子抗原表位、抗早老素5抑制因子抗體及其用途的製作方法

2024-02-03 22:20:15

專利名稱：早老素5抑制因子抗原表位、抗早老素5抑制因子抗體及其用途的製作方法
技術領域：
本發明屬於分子生物學和免疫學領域。具體地，涉及一種早老素5抑制因子抗原表位、抗早老素5抑制因子抗體。本發明還涉及分別含有所述抗原表位或抗體的組合物、以及所述抗體在檢測早老素5抑制因子中的用途。
背景技術：
早老素5抑制因子(又稱Spr-5，酶分類號EC:1)是定位於水稻第四號染色體上的基因，早老素5抑制因子是一個組織特異性基因，在葉中有特異性表達。它所表達的早老素5抑制因子蛋白質，其構象與人基因KIAA0601所編碼的多胺氧化酶類似。水稻早老素5 抑制因子是位於葉綠體上的具有電子載體活性和氧化還原活性的蛋白酶，屬於氨基氧化酶家族。這個家族由各種各樣的氨基氧化酶組成，包括許多的多胺氧化酶(PAO)和各種黃素多巴胺氧化酶(MAO)。在植物、細菌和原生動物中PAOs把亞精胺和精胺氧化成氨基丁縮醛、 雙氨基丙烷和過氧化氫，參與到多胺的分解代謝中。在其他生物中，大部分的早老素5抑制因子質導致hop-Ι的低表達。早老素5抑制因子與抑制轉錄複合體具有同源性，它的抑制活性需要功能性的早衰蛋白H0P-1，並通過非等位基因特異性使sel-12Egl表型低表達。水稻(Oryzae Sativa L.)是世界上最重要的糧食作物，也是單子葉植物的模式植物，它為全球近一半的人口提供食物。水稻基因組測序工作的成果極大地推動了水稻相關研究的進展，帶動了水稻轉錄組學和蛋白質組學的研究，目前一些研究功能基因組學的新技術如cDNA微陣列、基因晶片、基因表達系統分析、基因敲除等在分析基因表達、發掘基因資源上取的了很大進展，很多與優良性狀相關的基因被克隆並轉化應用。在研究基因功能過程中，作為一種靈敏度高、特異性好、操作簡便、結果直觀的技術，蛋白質印記(Western Blot)表現出了良好的效果。蛋白印跡(Western Blot)是根據抗原抗體的特異性結合檢測複雜樣品中的某種蛋白的方法，用於檢測經電泳或斑點雜交後固定於膜上的蛋白質。特異、穩定的液態酶標抗體和相應的底物，保證了快速、準確的檢測；而避免了放射性物質的使用，現已成為蛋白分析的一種常規技術，對蛋白進行定性和半定量分析。然而，迄今為止，在水稻生長發育過程中表達的早老素5抑制因子基因的功能研究目前並不清楚。並且在現有技術中，通常製備的多克隆抗體特異性不高，用於檢測目標物質會存在準確性不足的問題。另一方面，如果用早老素5抑制因子製備抗原的話，如果是採用重組表達的方法，步驟比較繁瑣，如果是採用化學合成的方法，全長的胺基酸序列有492 個胺基酸，合成很困難，而且蛋白質空間結構的重建是一個很困難的工作，再現與生物體內相同的空間構象仍然是現階段蛋白質學研究的難點。一般來說抗原表位合成簡易，準確性高，成本低廉，空間構象容易再現，因此有必要開發一種具有代表早老素5抑制因子本身的抗原表位(antigenic determinant, AD)(又稱抗原決定簇，是指抗原分子中決定抗原特異性的特殊化學基團)來代替全長蛋白。儘管目前已經有用於預測抗原表位的軟體，例如ΒΕΡΙΤ0ΡΕ軟體，但是預測得到
3的抗原表位中會有30%左右的非有效抗原表位，即不能特異性地代表抗原的抗原表位， 或者不能引發免疫應答(Chang HT, Liu CH, Pai Tff. Estimation and extraction of B-cell linear epitopes predicted by mathematical morphology approaches. J Mol Recognit. 2008Nov_Dec；21(6) :431-41)。

發明內容
為了解決上述問題，本發明人在通過BEPIT0PE軟體預測得到多個抗原表位序列的基礎上，進行了大量的實驗和不懈的努力，結果發現在預測的40個抗原表位中有一個抗原表位序列DNISLKNWDQEHVL(SEQID NO 3)是最有效的抗原表位，並且其具有良好的抗原特異性，並且製備了能與該蛋白酶特異免疫結合的抗體，該抗體具有足夠的靈敏性和準確性。由此提供了下述發明本發明的一個方面涉及一種早老素5抑制因子抗原表位，其胺基酸序列如SEQ ID NO 3所示。在本發明的一個實施方案中，為了增加與載體的交聯性，在上述抗原表位的N末端添加了一個半胱氨酸(半胱氨酸提供二硫鍵與載體交聯)，得到序列為 CDNISLKNWDQEHVL(SEQ ID NO 4)的抗原表位。半胱氨酸也可以加在多肽的C末端，得到序列為DNISLKNWDQEHVLC(SEQ ID NO 5) 的抗原表位。末端加1個半胱氨酸就可以了。如果在同一端加多個半胱氨酸，導致成本上升，而且會影響抗體的特異性，並且二硫鍵密度太大，而實際上也不需要這麼多二硫鍵。另外不宜在N末端和C末端都加半胱氨酸，因為一個抗原表位和一個載體結合，如果在兩端分別加1 個半胱氨酸，半胱氨酸與載體結合後，抗原表位少了游離端，反而不利於產生抗體。本發明的抗原表位可以通過常規的肽合成技術化學合成得到，也可以在適當的宿主中表達得到；優選的是化學合成。本發明的還一方面涉及一種組合物，其包含SEQ ID NO :3或SEQID NO :4或SEQ ID NO :5所示的早老素5抑制因子抗原表位，任選地，可以含有免疫佐劑，例如氫氧化鋁、弗氏完全佐劑、或者弗氏不完全佐劑等。本發明的還一方面涉及一種早老素5抑制因子抗原表位-載體複合物；其中，所述早老素5抑制因子抗原表位為SEQ ID NO 3或SEQID NO 4或SEQ ID NO 5所示的早老素 5抑制因子抗原表位，所述載體可以是鑰孔戚血藍素(KLH)、BSA、或酪蛋白等。本發明的還一方面涉及一種抗早老素5抑制因子抗體，所述抗早老素5抑制因子抗體能夠特異性地結合SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4或SEQ ID NO :5所示的早老素5抑制因子抗原表位。所述抗早老素5抑制因子抗體可以是單克隆抗體，也可以是多克隆抗體。本發明的抗早老素5抑制因子多克隆抗體可以得自各種常規製備多克隆抗體的動物，例如山羊，兔子，大鼠，小鼠等。對本領域技術人員而言，可以根據SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4或SEQ ID N0: 5所示的早老素5抑制因子抗原表位製備單克隆抗體，具體操作可以參見本領域的技術手冊，也可以參考文獻例 Naturel975Kohler & Milstein Vol 256，p495。本發明的還一方面涉及一種含有抗早老素5抑制因子多克隆抗體的血清(簡稱多
4抗血清)，其通過使用SEQ ID NO 3或SEQ ID NO 4或SEQ ID NO 5所示的抗原表位免疫動物製得。本發明的還一方面涉及一種抗早老素5抑制因子多克隆抗體製備方法，包括將 SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4或SEQ ID NO :5所示的早老素5抑制因子抗原表位作為抗原免疫動物的步驟。任選地，所述免疫步驟可以加入佐劑，例如氫氧化鋁、弗氏完全佐劑、或者弗氏不完全佐劑，等等。本發明的一個實施方案中，所述抗早老素5抑制因子多克隆抗體製備方法，包括如下步驟1)將SEQ ID NO 3或SEQ ID NO 4或SEQ ID NO 5所示的早老素5抑制因子抗原表位作為抗原免疫動物；2)取血，離心收集多抗血清；和3)純化步驟2)中的多抗血清，得到抗早老素5抑制因子多克隆抗體。本發明的還一方面涉及一種組合物，其包含本發明的抗早老素5抑制因子多克隆抗體。本發明的還一方面涉及一種早老素5抑制因子檢測劑，其包含本發明的抗早老素 5抑制因子多克隆抗體。其中早老素5抑制因子的胺基酸序列(SEQ ID NO 1)如下MDQPSNGFAAGGLFLRHIDGQNASPPSVIVIGGGISGIAAARALSNASFKVTLLESRDRLGGRVHTDYS FGCPIDMGASWLHGVCNENSLAPLIRLLGLRLYRTSGDNSVLYDHDLESYALFDKDGRQVPQEIVTKVGETFEKILK
ETVKVRAEHEDDMPLIQAISI VLDRNPHLKLDGLQYEVLQff CICRLEAWFATDV |DNISLKNWDQEHVL| rGGHGL
MVHGYDPVIKALAQDLDIHLNHRVTKIIQRYNKTIVCVEDGTSFVADAAIITVPLGVLKANIIKFEPELPDffKLSSI SDLGIGIENKIALRFNSVFWPNVEVLGRVAPTSNACGYFLNLHKATGHPVLVCMVAGRFAYEFEKLSDEESVNFVMS QLKKMLPGATEPVQYLVSRWGTDPNSLGSYSCDLVGKPADLYERFCAPVGNLFFAGEAACIDHSGSVHGAYSSGIVA AEDCRRHLSTQLGISDLFQVGKIIMREEMTEVMVPFQISRL(SEQ IDNO 1)其中，加邊框的序列為SEQ ID NO :3。本發明的還一方面涉及本發明的抗早老素5抑制因子多克隆抗體在製備檢測早老素5抑制因子的藥物中的用途。本發明的還一方面涉及一種檢測早老素5抑制因子的方法，所述方法包括使用本發明的抗早老素5抑制因子多克隆抗體的步驟。具體地，包括如下步驟1)將待測樣品與本發明的抗早老素5抑制因子多克隆抗體孵育，使所述的抗早老素5抑制因子多克隆抗體與待測樣品中的早老素5抑制因子特異性結合，由此形成免疫複合物；和2)檢測是否存在免疫複合物。上述檢測早老素5抑制因子的方法可以檢測早老素5抑制因子的有無、對其進行半定量(例如western blot方法)；在有早老素5抑制因子標準品的情況下，還可以通過 ELISA方法對早老素5抑制因子進行定量檢測。在本發明的一個實施方案中，所述早老素5抑制因子為水稻的早老素5抑制因子。 具體的，所述水稻為水稻93-11。發明的有益效果
5
1)本發明提供的多克隆抗體，特異性和靈敏度高，具有很高的應用價值；2)本發明提供的早老素5抑制因子抗原合成簡易，準確性高。本發明提供的抗原表位是經軟體預測選出的抗原表位片段後化學合成的，片段短小，容易合成，空間構象再現
各易ο3)本發明提供的抗體製備方法簡單，收穫量大。取合成的抗原1-ang免疫紐西蘭大白兔，每隔14天加強免疫一次；第2次加強免疫後7天耳靜脈取血，離心收集多抗血清， 獲得大量的多克隆抗體。4)通過本發明獲得早老素5抑制因子蛋白多克隆抗體，除了可以用於檢測早老素 5抑制因子基因在植物中早老素5抑制因子蛋白表達以外，還應用於研究早老素5抑制因子結構與功能相關的多個方面通過免疫螢光檢測，可以檢測早老素5抑制因子在轉基因植物中的分布；Western blot分析早老素5抑制因子在轉基因植物中是否表達；免疫螢光檢測可以確定蛋白表達的部位；確定表達的蛋白是在葉片、莖稈、種子、還在根部等.此外，在對水稻的研究中，本發明的多克隆抗體可應用於水稻蛋白質水平的科學研究中，也可以用於免疫共沉澱、蛋白質-蛋白質相互作用、蛋白晶片、免疫組化及細胞定位等實驗中，此外還可能用於其它植物的相關研究。


圖1 使用抗早老素5抑制因子多克隆抗體對早老素5抑制因子在水稻不同組織的免疫印跡檢測結果。
具體實施例方式下面將結合實施例對本發明的實施方案進行詳細描述。本領域技術人員將會理解，下面的實施例僅用於說明本發明，而不應視為限定本發明的範圍。實施例中未註明具體技術或條件者，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件(例如參考J.薩姆布魯克等著， 黃培堂等譯的《分子克隆實驗指南》，第三版，科學出版社)或者按照產品說明書進行。所用試劑或儀器未註明生產廠商者，均為可以通過市購獲得的常規產品。實施例1 候選抗原表位的預測水稻早老素5抑制因子對應的基因在GenBank中的基因ID是NP_001(^4219. 1。 讀碼框序列如下ATGGACCAGCCTTCTAATGGCTTCGCCGCCGGAGGTCTTTTTCTTCGTCACATTGATGGGCAAAATGCC TCTCCCCCTTCTGTCATTGTGATTGGTGGAGGGATTTCAGGCATTGCAGCTGCTCGTGCGCTGTCTAATGCTTCGTT TAAGGTCACACTATTAGAGTCACGGGACCGACTTGGTGGCCGTGTGCATACTGACTATTCTTTTGGCTGCCCAATTG ACATGGGAGCATCTTGGTTGCATGGTGTATGCAATGAGAATTCATTGGCACCACTGATTAGGTTGCTTGGCCTTAGA TTATATCGCACCAGTGGTGATAACTCTGTGCTATATGACCATGATCTGGAGAGCTATGCTCTCTTTGATAAGGATGG TCGTCAAGTTCCCCAGGAGATAGTGACAAAAGTCGGGGAAACATTTGAGAAAATTCTTAAGGAGACGGTGAAAGTAA GAGCTGAACATGAAGATGACATGCCTCTTATTCAAGCCATCTCAATTGTGCTTGACAGGAATCCACACCTAAAGCTT GATGGTTTGCAATATGAAGTACTGCAGTGGTGCATATGTAGGCTGGAGGCATGGTTTGCCACAGATGTGGATAATAT ATCTCTGAAAAATTGGGATCAGGAACATGTTCTTACTGGTGGCCATGGGCTTATGGTGCATGGTTATGATCCTGTTA TCAAAGCTCTCGCGCAAGATCTTGATATCCACCTGAACCACAGGGTTACCAAAATCATCCAGAGGTACAACAAAACT
6ATAGTATGTGTTGAAGATGGGACAAGCTTTGTTGCAGATGCTGCTATAATAACTGTCCCTCTTGGTGTACTTAAAGC AAATATCATCAAGTTTGAACCTGAGCTCCCAGATTGGAAGCTTTCATCAATATCTGATCTTGGTATTGGCATTGAGA ACAAAATAGCCCTCCGCTTCAATAGTGTATTTTGGCCAAATGTAGAAGTGCTAGGCAGGGTTGCCCCAACATCAAAT GCCTGCGGTTACTTTCTTAACCTTCACAAAGCCACAGGGCATCCGGTTCTTGTATGCATGGTAGCAGGAAGATTCGC ATATGAATTCGAGAAGCTATCCGATGAAGAATCCGTAAACTTTGTCATGTCTCAGCTCAAGAAAATGCTACCAGGAG CTACTGAACCGGTCCAGTATTTGGTTTCAAGGTGGGGAACCGACCCGAATTCGCTTGGTTCTTATTCCTGCGACCTT GTTGGGAAGCCAGCTGACTTGTATGAAAGATTCTGTGCTCCGGTGGGCAACCTGTTTTTCGCTGGGGAGGCCGCCTG CATCGATCACTCTGGGTCCGTGCATGGAGCTTATTCTTCAGGCATTGTTGCTGCAGAGGATTGCCGAAGGCATCTGT CGACGCAGCTAGGCATCTCCGACCTTTTCCAGGTTGGGAAGATTATCATGAGGGAGGAGATGACTGAAGTCATGGTC CCCTTCCAGATATCCAGGCTGTGA(SEQ ID NO 2)所編碼的水稻早老素5抑制因子全長序列如下MDQPSNGFAAGGLFLRHIDGQNASPPSVIVIGGGISGIAAARALSNASFKVTLLESRDRLGGRVHTDYS FGCPIDMGASWLHGVCNENSLAPLIRLLGLRLYRTS⑶NSVLYDHDLESYALFDKDGRQVPQEIVTKVGETFEKILK
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LMVHGYDPVIKALAQDLDIHLNHRVTKIIQRYNKTIVCVEDGTSFVADAAIITVPLGVLKANIIKFEPELPDWKLSS ISDLGIGIENKIALRFNSVFWPNVEVLGRVAPTSNACGYFLNLHKATGHPVLVCMVAGRFAYEFEKLSDEESVNFVM SQLKKMLPGATEPVQYLVSRWGTDPNSLGSYSCDLVGKPADLYERFCAPVGNLFFAGEAACIDHSGSVHGAYSSGIV AAEDCRRHLSTQLGISDLFQVGKIIMREEMTEVMVPFQISRL(SEQ IDNO :1，其中加框的序列為 SEQ ID NO 3)早老素5抑制因子來源於水稻(Oryzae Sativa L.)，具有序列表中的SEQ ID NO: 1序列；及與序列表中SEQ ID NO :1序列中任意連續14個胺基酸的相似性大於80%的多肽片段。然後根據SEQ ID NO :3，用ΒΕΡΙΤ0ΡΕ軟體對水稻早老素5抑制因子基因編碼的蛋白質進行抗原表位的預測。本實施例中使用了 ΒΕΡΙΤ0ΡΕ軟體提供的五種方法Mandard、 KarpIus> Emini> Amphiphi> Pellequer,以及這五禾中方法的綜合方法 cons_Sta_Kar_Emi_ Amp_Pel，所有參數選擇默認。具體方法可以參考Odorico M, Pellequer J L. BEPITOPE predicting the location of continuous epitopes and patterns in proteins[J]. J Mol Recognit，2003，16(1) :20-22 —共預測得到了 40個候選的抗原表位，在TIGR水稻資料庫上篩選肽段結構，選出抗原表位峰值較高的片段DNISLKNWDQEHVL(SEQ ID NO :3)。然後該片段在水稻蛋白質庫(RAP-DB資料庫，網址http//rapdb. dna. affrc. go.jp/)進行唯一性檢索(蛋白序列比對)，確定了該片段在水稻蛋白質庫中的唯一性。實施例2 抗原表位的化學合成實施例1中得到的候選抗原表位的兩端沒有半胱氨酸，為了實現與載體的交聯， 合成的序列需加入半胱氨酸，因此要合成的多肽序列為⑶NISLKNWDQEHVL(SEQ ID NO :4)。對SEQ ID NO 4所示的多肽序列進行化學合成(由吉爾生化公司合成)，得到早老素5抑制因子的抗原表位。實施例3 抗原表位-KLH複合物的製備採用戊二醛連接法，將實施例2中合成的抗原表位的N端與交聯載體蛋白-鑰孔戚血藍素(KLH)交聯，得到抗原表位-KLH複合物。
具體實施步驟如下將5mg合成多肽加入7mg KLH中，邊震蕩邊緩慢加入新鮮配製的3g/L戊二醛溶液 lml，室溫孵育池。以pH8. 5的硼酸緩衝液透析Mh，得到抗原表位-KLH複合物。實施例4 多抗血清的製備取Ι-aiig實施例3中製備的抗原表位-KLH複合物，免疫紐西蘭大白兔，每隔14天加強免疫一次；第2次加強免疫後7天，耳靜脈取血，分離血清(5000rpm離心IOmin)，收集上清，測效價。同時按照相同的步驟，用抗原表位(SEQ ID NO 4)作為對照。具體步驟如下取l-2mg實施例3中製備的抗原表位-KLH複合物與等量的完全福氏佐劑充分乳化，形成油水包，於兔頸部和背部皮下多點注射，每點約100 μ g。2周後加強免疫，劑量同前，用不完全福氏佐劑充分乳化後，於兔背部皮下多點注射；以後隔2周加強免疫1次；從第2次加強免疫開始，每次免疫7天後，經耳靜脈取血測定抗體的效價。其中，耳靜脈取血進行效價檢測(ELI SA法)的步驟如下在96孔板上，每孔加入50μβ/πι1磷酸酪氨酸ΙΟΟμ 1，4°C過夜後，進行包被，洗滌。 將按照前述方法製備的耳靜脈血的多抗血清稀釋為1 100，1 500,1 2500,1 3200， 1 12800,1 25600，每孔各加100μ 1，37°C保溫30min，洗滌。各加入1 100稀釋的羊抗兔Ig酶結合物100μ 1，37°C保溫30min，洗滌。加入TMB (3，3，5，5-四甲基聯苯胺)100 μ 1， 20min後，加2mol/l的H2SO4終止反應經過2次加強免疫後，效價檢測的結果如下多抗血清(抗原表位-KLH複合物免疫)> 25600 (抗原表位-KLH複合物有免疫原性的最大稀釋倍數是51200)；裸肽免疫(抗原表位，SEQ ID NO 4)得到的多抗血清> 800(僅僅由抗原表位組成的裸肽具有免疫原性的最大稀釋倍數是800)。上述結果已經符合要求，遂於末次加強免疫7天後頸動脈放血，收集血樣。將收集的血樣在3-4°C下靜置3-4小時，然後5000rpm離心10分鐘，收集血清，得到多抗血清(耳靜脈檢測效價符合要求後，頸動脈取的血樣不必再檢測效價)。無菌分裝保存於-80°C備用。實施例5 抗早老素5抑制因子多克隆抗體(多抗)的製備將實施例4中製備的多抗血清進行純化，製得多克隆抗體(多抗)。將抗原表位DNISLKNWDQEHVL(SEQ ID NO 4)多肽與溴化氰活化的kpharose 4B 偶聯，製備多肽親和層析柱。將製備的多抗血清加入到以上製備的層析柱中，放置於4°C孵育過夜後，洗脫抗體，即得到抗早老素5抑制因子多克隆抗體(多抗)。實施例6 多抗對早老素5抑制因子的特異性檢驗選取水稻93-11不同發育階段和不同部位的組織，提取總蛋白質，用Bradford法測定樣品水稻總蛋白含量，每個樣品分別上樣為苗期地上部上樣量7 yL ；分櫱期葉片上樣量8 μ L ；孕穗期劍葉上樣量7 μ L ；開花期劍葉上樣量6 μ L ；成熟期劍葉上樣量 6 μ L ；苗期地下部上樣量6 μ L ；分櫱期莖上樣量10 μ L ；開花期穗子上樣量3 μ L ；成熟期種子上樣量5μΚ，利用製備的eEF-ld多克隆抗體檢測蛋白質表達(圖1)。
8
總蛋白質樣品的製備用液氮研磨上述新鮮水稻組織至粉末狀，分裝到預冷離心管中，每300 μ 1粉末加入800 μ 1蛋白質裂解液(62. 5mmol/L ρΗ7· 4Tris · HC1，10%甘油， 2% SDS,20mmol/LNaF,2mmol/L EDTA，lmmol/L PMSF,5% β -巰基乙醇)，迅速混勻並置於冰上，冰水混合物中孵育10分鐘，約每2分鐘震蕩混勻1次。4V，12000r/min離心15分鐘。取上清，轉移到新的離心管中，-70°C保存。得到水稻總蛋白。Western 印記免疫反應western bloting為將提取的水稻蛋白質進行SDS-PAGE後電轉移到PVDF膜上，用5%脫脂奶粉封閉PVDF膜，用製備的抗體室溫孵育3h，TTBS(2mmol/L Tris · HClpH7. 6，13. 6mmol/LNaCl,0. 1% Tween 一 20)洗膜 3 次，每次 5min，之後加入羊抗兔二抗室溫孵育lh，TTBS洗膜3次，每次5min，加ECL Plus檢測液檢測，暗室曝光5min.免疫反應檢測到苗期(地上部)、分櫱期(葉片)、孕穗期(劍葉)、開花期(劍葉)、成熟期(劍葉)五個時期的葉片樣品中與理論中的35KD分子量相接近的條帶，該蛋白質在不同組織中有特異性表達。需要說明的是，儘管水稻全蛋白中可能有很多分子量與其相似的蛋白，但是與多抗特異性結合的就只有早老素5抑制因子一個。關於特異性的預測SEQ ID NO :4 經過 http://rice.plantbiology.msu.edu/blast.shtml (與實施例 1 中的http://rapdb. dna. affrc. go. jp/作用相同，目的是再次檢驗唯一性)的檢查，確定此多肽序列特異，該序列在水稻總蛋白中唯一確定早老素5抑制因子。儘管本發明的具體實施方式
已經得到詳細的描述，本領域技術人員將會理解。根據已經公開的所有教導，可以對那些細節進行各種修改和替換，這些改變均在本發明的保護範圍之內。本發明的全部範圍由所附權利要求及其任何等同物給出。
權利要求
1.一種早老素5抑制因子抗原表位，其由SEQ ID NO 3或SEQID NO 4或SEQ ID NO 5所示的胺基酸序列組成。
2.一種組合物，其中含有權利要求1所述的早老素5抑制因子抗原表位，任選地，還含有用於免疫的佐劑。
3.一種早老素5抑制因子抗原表位-載體複合物，其中，所述早老素5抑制因子抗原表位為權利要求1所述的早老素5抑制因子抗原表位，所述載體選自鑰孔戚血藍素、BSA、以及酪蛋白。
4.一種抗早老素5抑制因子抗體的製備方法，包括使用權利要求1的早老素5抑制因子抗原表位或者權利要求2的組合物或者權利要求3的複合物的步驟；任選地，所述抗早老素5抑制因子抗體是單克隆抗體或者多克隆抗體；具體地，所述製備方法包括如下步驟1)將權利要求1所述的早老素5抑制因子抗原表位或者權利要求2的組合物或者權利要求3的複合物免疫動物得到的血樣進行離心，得到多抗血清；和2)純化步驟1)中的多抗血清，得到抗早老素5抑制因子多克隆抗體。
5.一種多抗血清，其由權利要求1的早老素5抑制因子抗原表位或者權利要求2的組合物或者權利要求3的複合物免疫動物製得。
6.一種抗早老素5抑制因子抗體，其能夠特異地結合權利要求1所述的早老素5抑制因子抗原表位，任選地，其為多克隆抗體或者單克隆抗體。
7.一種組合物，其包含權利要求6所述的抗早老素5抑制因子抗體。
8.一種早老素5抑制因子檢測劑，其包含權利要求6所述的抗早老素5抑制因子抗體。
9.權利要求6所述的抗體在製備檢測早老素5抑制因子的藥物中的用途。
10.一種檢測早老素5抑制因子的方法，所述方法包括使用權利要求6所述的抗早老素5抑制因子多克隆抗體的步驟；具體地，所述早老素5抑制因子為水稻的早老素5抑制因子。
全文摘要
本發明屬於分子生物學和免疫學領域，涉及早老素5抑制因子抗原表位、抗早老素5抑制因子抗體及其用途。具體地，所述早老素5抑制因子抗原表位具有SEQ ID NO3或SEQ ID NO4或SEQ ID NO5所示的序列。本發明還涉及一種抗早老素5抑制因子多克隆抗體，所述多克隆抗體與上述抗原表位特異性結合。所述多克隆抗體具有高的特異性和效價。本發明還涉及所述多克隆抗體的製備方法和用途、含有該多克隆抗體的組合物、以及檢測早老素5抑制因子的方法。
文檔編號G01N33/53GK102206252SQ20101052030
公開日2011年10月5日 申請日期2010年10月25日 優先權日2010年10月25日
發明者劉斯奇, 史曉儒, 尹成園, 朱健輝, 韓宇寧 申請人:深圳華大基因科技有限公司