癌症相關基因rasgef1a的製作方法

2024-01-20 19:48:15 2

專利名稱：：癌症相關基因rasgef1a的製作方法
技術領域：
：本發明涉及用於4企測和診斷癌症的方法以及用於治療和預防癌症的方法。
背景技術：
：肝內膽管癌(ICC)是第二位最常見類型的原發性肝膽管癌。在日本和西方國家，尤其在英國，其發病率日益升高(ShaibYHetal.，JHepatol2004,40:472-7;Taylor-RobinsonSDetal"Lancet1997，350:1142-3;KatoIetal"JpnJClinOncol1990,20:232-7)。已深入研究了最常見的肝惡性肺瘤一肝細胞癌，而且通過開發多種治療策略已獲得了臨床進展。然而，對於ICC所牽涉的致癌過程了解甚少，而且ICC患者的預後仍然不好。在治療方面，腫瘤外科切除術幾乎是克服該疾病的唯一方式(OkudaKetal.,JGastroenterolHepatol2002,17:1056-63)，但完全清除晚期侵入性ICC患者的癌細胞是幾乎不可能的。此外，針對ICC的化學療法也不令人滿意；例如，儘管基於5-氟尿嘧啶和吉西他濱的用藥法具有20-30%的部分應答率，但沒有顯示出存活益處(GoresGJ,Hepatology2003，37:961-9)。因此，開發新的ICC治療策略迫在眉睫。GTP酶的Ras家族在從細胞表面受體到下遊效應器途徑的信號整合和傳遞中發揮關鍵作用。Ras蛋白在靜息細胞中主要以無活性的GDP結合態存在。它們在有活性的GTP結合型與無活性的GDP結合型之間可互相轉換的循環(HallA,Annu.RevCellBiol1994,10:31-54)。它們的活性受與刺激GDP/GTP交換(GEF蛋白)和GTP水解(GAP蛋白)的調節蛋白的相互作用所調控。在受到細胞外刺激物的激活後，鳥噤呤核苦酸交換因子(GEF)促使Ras釋放GDP,使GTP能與Ras結合。該GTP結合型Ras形成有活性的構象，並將信號傳遞和介導到下遊的效應蛋白，諸如Raf、磷酸肌醇3-激酶和RalGDS(CampbellSLetal"Oncogene1998,17:1395-413;QuilliamLAetal"Bioessays1995,17:395-404)。雖然已鑑定了許多Ras家族GTP酶，但已闡明活性的RasGEF數目有限；例如，對於Ras為Sos、GRF和GRP,對於Rapl為C3G、CalDAGl和Epac，而對於Ral為RalGDS家族成員(QuilliamLAetal.,Bioessays1995,17:395-404;BosJL，EMBOJ1998,17:6776-82;deRooijJetal.,Nature1998，396:474-7;EbinuJOetal.，Science1998,280:1082-6;GotohTetal"JBiolChem1997，272:18602-7;KawasakiHetal.，ProcNatlAcadSciUSA1998,95:13278-83)。通過cDNA微陣列分析產生的基因表達序型可提供比傳統組織病理學方法顯著更多的關於個體癌症特性的詳情。這樣的信息的前途在於其有可能用於改進治療贅生性疾病的臨床策略及開發新藥(PetricoinEFetal.,NatGenet2002，32Suppl:474-9)。為此目的，本發明人通過cDNA微陣列分析了來自不同組織的肺瘤的表達序型(OkabeHetal.，CancerRes2001,61:2129-37;HasegawaSetal,，CancerRes2002，62:7012-7;KanetaYetal.，JpnJCancerRes2002，93:849-56;Kaneta,Y.etal.，IntJOncol2003,23:681-91;KitaharaOetal.,CancerRes2001，61:3544-9;LinYetal.,Oncogene2002,21:4120-8;NagayamaSetal"CancerRes2002，62:5859-66;OkutsuJetal"MolCancerTher2002,1:1035-42;KikuchiTetal.，Oncogene2003,22:2192-205)。設計用於揭示癌症發生機制的研究促進了某些抗腫瘤劑的分子靶的鑑定。例如，最初開發用於抑制涉及Ras的生長信號傳導途徑、其激活依賴於翻譯後法尼基化的法尼基轉移酶抑制劑(FTI)在動物模型中已顯示出有效治療Ras依賴性腫瘤(SunJetal"Oncogene1998,16(11):1467-73)。類似的，使用抗腫瘤劑和抗HER2單克隆抗體曲妥單抗(trastuzumab)(為了拮抗原癌基因受體HER2/neu)組合的人體臨床試驗已在癌症患者中實現了有所改善的臨床應答和總體存活(MolinaMAetal.,CancerRes2001,61(12):4744-9)。最後，已開發出選擇性滅活bcr-abl融合蛋白的酪氨酸激酶抑制劑STI-571來治療慢性髓細胞性白血病，其中bcr-abl酪氨酸激酶的組成性激活在白細胞轉化中發揮關鍵作用。這些種類的藥劑設計用於抑制特定基因產物的致癌活性(O'DwyerME&DmkerBJ,CurrOpinOncol2000，12(6):594-7)。因此，在癌細胞中普遍上調的基因產物顯然可充當用於開發新的抗腫瘤劑的潛在靶。已進一步證明CD8+細胞毒性T淋巴細胞(CTL)識別MHCI類分子上呈遞的腫瘤相關抗原(TAA)所衍生的表位肽並裂解腫瘤細胞。第一例TAA是MAGE家族，由於這一發現，使用免疫學方法已發現了許多其它TAA(Boon,IntJCancer1993，54:177-80;Boon&vanderBruggen,JExpMed1996,183:725-9;vanderBruggenetal"Science1991,254:1643-7;Brichardetal.，JExpMed1993，178:489-95;Kawakamietal"JExpMed1994,180:347-52)。有些新發現的TAA現在正在進行作為免疫療法靶的臨床開發。迄今為止所發現的TAA包括MAGE(vanderBruggenetal.，Science1991，254:1643-7)、gplOO(Kawakamietal.,JExpMed1994,180:347-52)、SART(Shichijoetal.，JExpMed1998,187:277-88)和NY-ESO曙l(Chenetal.,ProcNatlAcadSciUSA1997,94:1914-8)。另一方面，已證明在肺瘤細胞中特異性it^達的基因產物已顯示出作為誘導細胞免疫應答的靶受到識別。此類基因產物包括p53(Umanoetal"BritJCancer2001,84:1052-7)、HER2/neu(Tanakaetal.,BritJCancer2001,84:94-9)、CEA(Nukayaetal.,IntJCancer1999，80:92-7)等。儘管已在與TAA有關的基礎和臨床研究中取得了顯著進步(Rosenbergetal"NatureMed1998,4:321-7;Mukherjietal"ProcNatlAcadSciUSA1995，92:8078-82;Huetal.，CancerRes1996,56:2479-83)，目前可用於治療&泉癌，包括結腸直腸癌的候選TAA的數目仍然很有限。在癌細胞中豐富表達且該表達局限於癌細胞的TAA可能是免疫療法耙的理想候選物。此外，能誘導有力且特異性的抗肺瘤免疫應答的新TAA的鑑定預計會促進肽接種策略在多種類型癌症中的臨床使用(Boonetal"JExpMed1996,183:725-9;vanderBruggenetal"Science1991,254:1643-7;Brichardetal"JExpMed1993,178:489-95;Kawakamietal"JExpMed1994,180:347-52;Shichijoetal"JExpMed1998,187:277-88;Chenetal.，ProcNatlAcadSciUSA1997,94:1914-8;Harris,JNatlCancerInst1996,88:1442-55;Butterfieldetal"CancerRes1999,59:3134-42;Vissersetal"CancerRes1999,59:5554-9;vanderBurgetal"JImmunol1996,156:3308-14;Tanakaetal"CancerRes1997，57:4465-8;Fujieetal.,IntJCancer1999,80:169-72;Kikuchietal.,IntJCancer1999,81:459-66;Oisoetal.,IntJCancer1999,81:387-94)。據反覆報導，來自某些健康供體的經肽刺激的外周血單個核細胞(PBMC)應答肽而產生顯著水平的IFN-a，但在"Cr-釋放測定法中很少以局限於HLA-A24或-A0201的方式對肺瘤細胞發揮細胞毒性(Kawanoetal.,CancerRes2000,60:3550-8;Nishizakaetal"CancerRes2000,60:4830-7;Tamuraetal.,JpnJCancerRes2001,92:762-7)。然而，HLA-A24和HLA-A0201二者是曰本人和高加索人中常見的HLA等位基因(Dateetal.,TissueAntigens1996,47:93-101;Kondoetal.,JImmunol1995,155:4307-12;Kuboetal.，JImmunol1994，152:3913-24;Imanishietal"ProceedingoftheeleventhInternationalHistocompatibilityWorkshopandConferenceOxfordUniversityPress,Oxford,1992,1065;\Villiamsetal.,TissueAntigen1997,49:129)。》口jt匕，由這些HLA呈遞的癌症抗原性肽對於治療日本人和高加索人中的癌症可能是特別有用的。另外，已知使用高濃度的肽通常在體外誘導低親和力的CTL,在抗原呈遞細胞(APC)上產生高水平的特定肽/MHC複合物，該複合物會有效激活這些CTL(Alexander-Milleretal.,ProcNatlAcadSciUSA1996,93:4102-7)。
發明內容本發明基於iM5U五i^M基因在癌性細胞中的特異性表達樣式的發現。通過之前對25例ICC中基因組廣度(genome-wide)基因表達序型的分析，鑑定出表達普遍上調的一組基因(ObamaKetal.,Hepatology2005Jun，41(6):1339-48)。在此，聚焦於這些基因中的基因iMSG^FL4(iosG五F趁溝械家族，成^L4)。本發明人已檢測出iASG^FL4基因在膀胱癌中的表達升高(PCT/JP2006/302684),而在乳腺癌中的表達受抑制(WO2005/28678)。本發明進一步揭示了iASG^FL4基因在包括肝內膽管癌(ICC)、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、前列腺癌、慢性髓細胞樣白血病、腎癌、軟組織肉瘤、胰腺癌和精原細胞瘤的諸多人腫瘤中頻繁上調。此外，發現該基因編碼的蛋白質增強RAS活性。此外，由於小幹擾RNA(siRNA)對i^SG^FL4基因的抑制導致ICC細胞的生長抑制和/或細胞死亡，該基因可用作不同類型人肺瘤的新治療耙。在此鑑定的7^SOEFL4基因及其轉錄和翻if產物具有作為癌症標誌物和癌基因靶的診斷用途，可改變其表達和/或活性來治療或緩解癌症症狀。類似的，通過檢測iASG五F"基因的表達因化合物所致的改變，可鑑定出可用於治療或預防癌症的各種化合物。因此，本發明提供了一種用於診斷或確定受試者中的癌症傾向性(predisposition)的方法，其通過測定來源於受試者的生物學樣品諸如組織樣品中的iL4SG^i^M基因表達水平來實現。基因表達水平與正常對照水平相比的升高表明該受試者患有癌症或有風險發生癌症。可使用獲自非癌性組織的正常細胞來測定正常對照水平。在本發明中，優選的癌症為ICC。在本發明的上下文中，短語"對照水平"指在對照樣品中檢測到的iASG五FL4基因表達水平，包括正常對照水平和癌症對照水平。對照水平可以是來源於單個參比群的單個表達樣式或來源於多個表達樣式。例如，對照水平可以是來自於先前已受試細胞的表達樣式資料庫。"正常對照水平，，指在正常健康個體或已知未患癌症個體人群中檢測到的iASG^FL4基因表達水平。正常個體是沒有癌症臨床症狀的個體。另一方面，"癌症對照水平，，指患有癌症的個體或人群中所見的iM5^五FL4基因表達水平。樣品中檢測到的i^SG五FL4基因表達水平與正常對照水平相比的升高表明該受試者(樣品來源)患有癌症或有風險發生癌症。或者，可將樣品中包含WSG^FL4基因在內的一組基因的表達水平與同組基因的癌症對照水平進行比較。樣品表達水平與癌症對照水平之間相似表明該受試者(樣品來源)患有癌症或有風險發生癌症。在此，若基因表達與對照水平相比升高或降低了例如10%、25%、或50%，或者至少0.1倍、至少0.2倍、至少1倍、至少2倍、至少5倍、至少10倍或更多倍，則認為表達水平有"改變"。可通過檢測例如核酸探針與樣品中基因轉錄物的雜交強度來測定WSG五FL4基因表達水平。在本發明的上下文中，來源於受試者的組織樣品可以是獲得自接受測試的受試者例如已知患有癌症或懷疑患有癌症的患者的任何組織。例如，組織可包含上皮細胞。更具體來說，組織可以是癌性上皮細胞。本發明進一步提供了用於鑑定抑制或增強RASGEF1A的表達或活性的化合物的方法，其通過將受試化合物與表達RASGEF1A的受試細胞接觸並測定i^5U五FL4基因表達水平或基因產物活性來實現。受試細胞可以是上皮細胞，諸如癌性上皮細胞。與不存在受試化合物情況下的對照水平相比，基因表達水平或其基因產物活性的降低表明該受試化合物可用於減輕癌症症狀。本發明還提供了一種試劑盒，其包含至少一種能與iL45U五FL4基因轉錄或翻譯產物結合的檢測試劑。本發明的治療方法包括用於治療或預防受試者中癌症的方法，其包括對受試者施用反義組合物的步驟。在本發明的上下文中，反義組合物降低特定靶基因(即iASG五FL4基因)表達。例如，反義組合物可含有與iA9GSF"基因序列互補的核苦酸。或者，本發明的方法可包括對受試者施用siRNA組合物的步驟。在本發明的上下文中，siRNA組合物降jto^G五屍L4基因表達。在又一種方法中，可通過對受試者施用核酶組合物來進行受試者中癌症的治療或預防。在本發明的上下文中，核酸特異性核酶組合物降^JASC五FL4基因表達。事實上，本發明人證實了siRNA對iASG^屍L4基因的抑制作用。例如，在實施例章節中證明了siRNA對癌細胞的細胞增殖的抑制，其支持i^4SG^FL4基因作為優選的癌症治療靶的事實。本發明還包括疫苗和疫苗接種方法。例如，一種用於治療或預防受試者中癌症的方法可包括對受試者施用含有iAS"G^FL4基因編碼的多肽或該多肽的免疫學活性片段的疫苗。在本發明的上下文中，免疫學活性片段長度短於全長的天然存在蛋白質、仍能誘導類似於該全長蛋白質所誘導的免疫應答的免疫應答的多肽。例如，免疫學活性片段長度應當有至少8個胺基酸殘基並能刺激諸如T細胞或B細胞的免疫細胞。可通過^r測細胞增殖、細胞因子(例如IL-2)的加工產生、或抗體的生成來測量免疫細胞刺激。在此描述的方法的一個優點是在檢測到明顯的癌症臨床症狀之前就能鑑定該疾病。本發明的其它特徵和優點在閱讀以下詳述和權利要求之後將顯而易見。附圖簡述圖1A顯示了D42"(iL4SG^FL4)基因在13種ICC組織、非癌性膽管細胞混合物、和5種正常組織中的表達。使用一組iAS(7五FL4基因特異性引物進行半定量RT-PCR。以P-肌動蛋白G4Cr5)基因的表達作為定量對照。圖1B顯示了Z)4223(^45*(^屍")基因的多組織Northern印跡分析。圖2顯示了RASGEF1A的亞細胞定位。圖2A顯示了利用經質粒轉染而表達帶FLAG標籤的RASGEF1A的NIH3T3細胞進行的帶FLAG標籤的RASGEF1A的螢光免疫細胞化學染色的結果。用抗FLAG小鼠抗體染色帶FLAG標籤的蛋白質，接著用綴合有FITC的山羊抗小鼠第二抗體顯現(右上部)。用DAPI對細胞核進行復染色(左上部)。合併的圖像顯示在左下部。在圖2B中，通過Western印跡分析，分析了細胞中帶Flag標籤的蛋白質的表達。圖3A顯示了經表達RASGEFlA的質粒轉染的COS7細胞的集落形成測定法。用吉姆薩染料(Giemsa)溶液染色經pCAGGS-n3Fc-RASGEFlA、pCAGGS-n3Fc-RASGEFlA(-)或pCAGGS-n3Fc-Mock轉染的細胞。圖3B顯示了使用細胞計數試劑盒通過MTT測定法測量的細胞存活力。圖3C顯示了iASG^FL4基因在經表達siRNA(si-B和si-E)的質粒轉染的細胞中的表達。以表達EGFP的質粒(s正GFP)和模擬質粒(模擬物)作為對照。進行半定量RT-PCR來檢查siRNA的基因沉默效應。以爿C7S基因的表達作為定量對照。圖3D顯示了設計用於抑制i^S(7五屍L4的siRNA的生長抑制效應。使用細胞計數試劑盒測量了SSP25細胞應答siRNA的存活力。圖4A顯示了K-Ras(左上部)、Ha-Ras(右上部)和N-RAS(下部)核苷酸解離測定法的結果。在用重組GST(空心方框)、SOS(帶陰影線的方框)或RASGEF1A(實心方框)處理後與Ras相互作用的[SH]-GDP與沒有進行這樣的處理所獲得的結果(附有陰影的方框)相比的相對量。圖4B顯示了RASGEF1A的RAS激活活性。通過GST-RafRBD"下拉"(pull-down)測定法分析了經pCAGGS-n3Fc-RASGEFlA或模擬質粒轉染的細胞的提取物。使用抗FLAG抗體通過免疫印跡分析檢查了RASGEF1A在細胞中的表達(左部)。用重組Raf-l蛋白沉澱活化形式的GTP結合型Ras，並使用抗泛Ras抗體通過Western印跡分析進行了分析(右部)。圖5A顯示了使用經RASGEF1A或模擬載體轉染的COS7細胞進行的傷口癒合測定法的結果。在抓傷後12和24小時，捕捉遷移細胞的代表性圖像。圖5B顯示了使用相同細胞進行的Matrigel侵入測定法的結果。通過5個不同一見野的計數測定了穿過Matrigd遷移的平均細胞數。通過重複試驗獲得了相似的結果。發明詳述除非另有明確說明，本文中用語"一和/種"、"該"和"所述"指的是"至少一個/種"。與物質(例如多肽、抗體、多核苷酸等)聯用的術語"分離的"和"純化的"表示該物質基本上不含至少一種可包括於天然來源中的其他物質。因此，分離的或純化的抗體指基本上不含細胞物質諸如碳水化合物、脂質或其他來自該蛋白質(抗體)來源的細胞或組織的汙染性蛋白質的抗體，或當化學合成時基本上不含化學前體或其他化學藥品的抗體。術語"基本上不含細月包物質，，包括其中多肽與來自其被分離或重組產生的細胞的細胞組分相分離的所述多肽製備物。因此，基本上不含細胞物質的多肽包括具有少於約30%、20%、10%或5%(按乾重計)的異源蛋白質(在此也稱為"汙染性蛋白質")的多肽製備物。當多肽重組產生時，其還優選基本上不含培養基，包括具有少於約20%、10%或5%蛋白質製備物體積的培養基的多肽製備物。當多肽通過化學合成產生時，其優選基本上不含化學前體或其他化學藥品，包括具有少於約30%、20%、10%、5%(按乾重計)的與該蛋白質合成有關的化學前體或其他化學藥品的多肽製備物。可例如通過在蛋白質製備物的十二烷基硫酸鈉(SDS)-聚丙烯醯胺凝膠電泳及凝膠的考馬斯亮藍染色等之後單一條帶的出現來顯示特定蛋白質製備物含有分離的或純化的多肽。在一個優選的實施方案中，本發明的抗體是分離的或純化的。"分離的"或"純化的"核酸分子，諸如cDNA分子，當通過重組技術產生時可基本上不含其他細胞物質或培養基，或當化學合成時可基本上不含化學前體或其他化學藥品。在一個優選的實施方案中，編碼本發明抗體的核酸分子是分離的或純化的。術語"多肽"、"肽"和"蛋白質"在此可交換用於指胺基酸殘基聚合物。這些術語適用於其中一個或多個胺基酸殘基為修飾的殘基或非天然存在的殘基，諸如相應的天然存在的胺基酸的人工化學模擬物的胺基酸多聚體，以及天然存在的胺基酸多聚體。術語"胺基酸，，是指天然存在的和合成的胺基酸，以及與天然存在的胺基酸功能類似的胺基酸類似物和胺基酸模擬物。天然存在的胺基酸是由遺傳密碼編碼的那些，以及在細胞中翻i奪後被修飾的那些(例如羥脯氨酸、y-羧基穀氨酸根和O-磷酸絲氨酸)。短語"胺基酸類似物"指除具有修飾的R^或修飾的骨架之外，具有與天然存在的胺基酸相同的基本化學結構(連接氫原子、羧基、氨基和R基的a碳原子)的化合物(例如高絲氨酸、正亮氨酸、曱硫氨酸、亞碸、曱硫氨酸曱基鋶)。短語"胺基酸模擬物"指具有與一般胺基酸不同的結構、但具有類似的功能的化學化合物。在此，胺基酸可以用它們普遍知道的、IUPAC-IUB生物化學命名委員會推薦的三字母符號或單字母符號表示。除非另有明確陳述，術語"多核苷酸"、"核苷酸"、"核酸"和"核酸分子"可交換使用，並且與胺基酸類似，以普遍接受的單字母代碼來表示。類似於胺基酸，它們涵蓋天然存在的和非天然存在的核酸聚合物。本發明部分基於多種癌症患者的細胞中i^SG五FW基因表達升高的發現。人iASG五屍L4基因的核芬酸序列示於SEQIDNO:1,且還可獲得自GenBank登記號AK095136。在此，iL4SG^FL4基因涵蓋人iMSG五FL4基因以及其他動物的^4SG五FL4基因，所述其他動物包括非人靈長類動物、小鼠、大鼠、犬、貓、馬和牛，但不限於此，並包括等位突變體和在其他動物中發現的相應於該iMSG^屍L4基因的基因。人7L4SG五FL4基因編碼的胺基酸序列示於SEQIDNO:2，且還可獲得自GenBank登記號BAC04491。在本發明中，iASG五FL4基因編碼的多肽稱為"RASGEF1A"，有時稱為"RASGEF1A多肽"或"RASGEF1A蛋白，，。根據本發明的一方面，功能等價物也包括在RASGEF1A多肽中。在此，蛋白質的"功能等價物"是具有相當於該蛋白質的生物學活性的多肽。換句話說，在本發明中任何保留RASGEF1A蛋白生物學能力的多肽都可用作為這樣的功能等價物。這樣的功能等價物包括其中一個或多個胺基酸被替代、缺失、添加或插入到RASGEF1A蛋白的天然存在胺基酸序列中的那些多肽。或者，所述多肽可以是包含與相應蛋白質的序列具有至少約80%同源性(也稱為序列同一性)的胺基酸序列的多肽。在其他實施方案中，所述多肽可為在嚴格條件下與iASG五FL4基因的天然存在核苷酸序列發生雜交的多核苷酸所編碼。短語"嚴格(雜交)條件，，指通常在核酸的複雜混合物中，核酸分子會與其靶序列雜交，但無法檢測到與其他序列的雜交的條件。嚴格條件是序列依賴性的並且在不同環境中是不同的。較長序列能在較高溫度性發生特異性雜交。關於核酸雜交的全面指導見Tijssen,TechniquesinBiochemistryandMolecularBiology—HybridizationwithNucleicProbes,"Overviewofprinciplesofhybridizationandthestrategyofnucleicacidassays"(1993)。一般而言，在規定的離子強度、pH下，對於特定的序列，嚴格條件選擇為低於熱解鏈溫度(Tm)約5-10。C。Tm是(在規定的離子強度、pH和核酸濃度下)50%與靶互補的的探針與靶序列雜交處於平衡狀態(當靶序列存在過量時，在Tm下，50%的探針佔據處於平衡狀態)時的溫度。還可通過添加諸如曱醯胺的去穩定劑來達到嚴格條件。對於選擇性或特異性雜交，陽性信號應為背景的至少2倍，優選為背景雜交的10倍。例示性的嚴格雜交條件可為如下50%曱醯胺、5xSSC和l。/。SDS，在42。C溫育，或5xSSC、1%SDS,在65。C溫育，在50。C於0.2xSSC和0.1。/。SDS中洗滌。一般而言，人們知道對蛋白質中一個或多個胺基酸的修飾並不影響該蛋白質的功能。本領域技術人員應認識到改變單個胺基酸或小部分胺基酸的對胺基酸序列的個別添加、缺失、插入或替代是一種"保守修飾"，其對蛋白質的改變產生具有類似功能的蛋白質。提供功能類似胺基酸的保守替代表格在本領域是眾所周知的。例如，下列八組各自包含對於彼此而言為保守替代的胺基酸1)丙氨酸(A),甘氨酸(G);2)天冬氨酸(D)，穀氨酸(E);.3)天冬醯胺(N)，穀氨醯胺(Q);4)精氨酸(R),賴氨酸(K);5)異亮氨酸(I),亮氨酸(L)，曱硫氨酸(M)，纈氨酸(V);6)苯丙氨酸(F),酪氨酸(Y),色氨酸(W);7)絲氨酸(S)，蘇氨酸(T);和8)半胱氨酸(C)，曱硫氨酸(M)(參見例如Creighton,Proteins1984)。這樣的保守修飾的多肽包括於本發明的RASGEF1A蛋白中。然而，本發明並不限於此，RASGEF1A蛋白還可包括非保守修飾，只要它們保留RASGEF1A蛋白的至少一種生物學活性即可。此外，經過修飾的蛋白質並不排除多態性變體、種間同系物、及為這些蛋白質的等位基因所編碼的那些蛋白質。此外，本發明的/ASG^FL4基因涵蓋編碼上述RASGEF1A蛋白功能等價物的多核芬酸。除非另有說明，本文所使用的所有技術術語和科學術語與本發明所屬領域技術人員一般理解的含義相同。在有沖突的情況下，以本說明書(包括定義)為準。I.it斷癌症1-1.用於診斷癌症或發生癌症的傾向性的方法發現iMSG^FL4基因的表達在癌症患者中特異性升高。因此，在此鑑定的基因及其轉錄和翻譯產物具有作為癌症標誌的診斷效用，並且可通過測量細胞樣品中的iASG^FL4基因的表達來診斷癌症。具體來說，本發明提供了一種通過測定受試者中iAS(^FL4基因的表達水平用於診斷受試者中癌症或發生癌症的傾向性的方法。可通過本發明方法診斷的癌症包括但不限於ICC、膀胱癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、前列腺癌、慢性髓細胞樣白血病、腎癌、軟組織肉瘤、胰腺癌和精原細胞瘤。本發明的方法特別適用於診斷ICC。根據本發明的另一方面，用於診斷髮生至少一種任何上述癌症的傾向性。在本發明的上下文中，術語"i貪斷"意圖涵蓋預測和可能性分析。本發明的方法意圖用於關於治療才莫態的臨床決策，包括對於癌症的治療幹預、i貪斷標準諸如疾病分期、及疾病監測和監視。待通過本發明方法診斷的受試者優選為哺乳動物。例示性的哺乳動物包括但不限於例如人、非人靈長類動物、小鼠、大鼠、犬、貓、馬和牛。優選從待診斷的受試者中釆集生物學樣品進行診斷。任何生物學材料皆可用作為測定的生物學樣品，只要其包含iASG^FL4基因的目的轉錄或翻譯產物即可。生物學樣品包括但不限於身體組織和液體，諸如血液、痰液和尿液。生物學樣品優選含有包含上皮細胞的細胞群體，更優選包含癌性上皮細胞或來自於懷疑為癌性的組織的上皮細胞的細胞群體。此外，必要時，所述細胞可純化自所獲得的身體組織和液體，然後用作為生物學樣品。根據本發明，在來源於受試者的生物學樣品中測定i^5"G^FL4基因的表達水平。可使用本領域已知方法在轉錄(核酸)產物水平上測定該表達水平。例如，可通過雜交法(例如Northern印跡雜交)使用4笨針來定量iylSG^FL4基因的mRNA。可在晶片或陣列上進行這樣的檢測。優選使用陣列來^r測包括本發明iASG五FL4基因在內的多種基因(例如多種癌症特異性基因)的表達水平。本領域技術人員可利用iASG五FL4基因的序列信息來(SEQIDNO:1;GenBank登記號AK095136)製備這樣的探針。例如，iAS"G五FL4基因的cDNA可用作為探針。必要時，可用適合的標記物諸如染料和同位素標記探針，並且可通過雜交標記物的強度來檢測基因的表達水平。此外，可通過基於擴增的檢測方法(例如RT-PCR)使用引物定量WSG五F"基因的轉錄產物。還可基於可得到的該基因的序列信息來製備這樣的引物。例如，實施例中所使用的引物(SEQIDNO:5和6;或者7和8)可用於通過RT-PCR進行的檢測，但本發明並不限於此。具體來說，用於本發明方法的探針或引物在嚴格條件、中度嚴格條件或低嚴格條件下與iASG^FL4基因的mRNA發生雜交。如本文所使用的，短語"嚴格(雜交)條件"指探針或引物會與其耙序列而不與其他序列發生雜交的條件。嚴格條件是序列依賴性的並且在不同環境下會不同。與較短序列相比，在較高溫度下，會觀察到較長序列的特異性雜交。一般而言，在規定的離子強度和pH下，對於特定的序列，嚴格條件的溫度選擇為低於熱解鏈溫度(Tm)約5。C。Tm是(在規定的離子強度、pH和核酸濃度下)50%與靶序列互補的探針與靶序列雜交處於平衡狀態時的溫度。因為靶序列通常以過量存在，因此在Tm下，50%的探針佔據處於平衡狀態。通常，嚴格條件可以是其中在pH7.0-8.3,鹽濃度低於約1.0M鈉離子，通常為約0.01-1.0M鈉離子(或其他鹽類)，以及對於短探針或引物(例如10-50個核苦酸)溫度為至少約30。C而對於長探針或引物溫度為至少約60。C的那些條件。還可通過添加諸如曱醯胺的去穩定劑來達到嚴格條件。或者，為了本發明的診斷，可檢測翻譯產物。例如，可測定RASGEF1A蛋白的數量。一種用於測定作為翻譯產物的蛋白質數量的方法包括使用特異性識別該蛋白質的抗體的免疫測定法。該抗體可以是單克隆的或多克隆的。此外，該抗體的任何片段或修飾產物(例如嵌合抗體、scFv、Fab、F(ab，)2、Fv等)都可用於檢測，只要這樣的片段保留RASGEF1A蛋白的結合能力即可。製備用於蛋白質檢測的這些類型抗體的方法是本領域眾所周知的，並且任何方法都可用於本發明中以製備上述抗體及其等價物。作為另一種基於iASG^FL4基因翻譯產物來檢測該基因表達水平的方法，使用針對RASGEF1A蛋白的抗體通過免疫組織化學分析來觀察染色強度。即，觀察到強染色表明該蛋白質的存在量增加了，以及同時iASG^FL4基因的高表達水平。此外，可基於翻譯產物的生物學活性來^r測它。在此具體來說，RASGEFlA蛋白被證明具有Ras核苷酸解離活性、RAS增強活性，並與癌細胞的遷移有關。因此，RASGEF1A蛋白的上述活性可用作為生物學樣品中存在RASGEF1A蛋白的指標。例如，可遵循實施例所描述的方法來檢測上述活性。此外，在/ASG^FL4基因的表達水平之外，也可測定其他癌症相關基因例如已知在ICC中差異表達的基因的表達水平以提高診斷的準確性。如果由相應癌症標誌基因的對照水平升高或降低例如10%、25%或50%;或升高至多於l.l倍、多於1.5倍、多於2.0倍、多於5.0倍、多於10.0倍或更多；或降低至至少0.5倍、至少0.2倍、至少0.1倍或更少，可認為生物學樣品中包括iMSG^FL4基因在內的癌症標誌基因的表達水平升高或降低。利用之前自疾病狀態(癌性的或非癌性的)已知的受試者收集並貯藏的樣品，使用該受試生物學樣品可同時測定對照水平。或者，基於分析之前測定的來自疾病狀態已知的受試者的樣品中iJASG五FL4基因表達水平所獲得的結果通過統計方法可確定對照水平。此外，對照水平可以是來自之前所受試細胞的表達樣式的資料庫。此外，根據本發明的一方面，生物學樣品中iASG五屍L4基因的表達水平可與多個對照水平進行比較，所述對照水平測定自多個參照樣品。優選使用測定自這樣的參照樣品的對照水平，該參照樣品來源於與患者來源的生物學樣品的組織類型相似的組織類型。此外，優選使用疾病狀態已知的人群中i^SOEF"基因的表達水平的標準值。可通過任何本領域已知方法來獲得該標準值。例如平均值士2S.D.或平均值士3S.D.的範圍可用作為標準值。在本發明的上下文中，自已知非癌性生物學樣品測定的對照水平稱為"正常對照水平"。另一方面，如果對照水平測定自癌性生物學樣品，則稱為"癌性對照水平"。若iL4SG五屍W基因的表達水平與正常對照水平相比升高或與癌性對照水平類似，則可診斷受試者患有癌症或有風險發生癌症，此外，在多個癌症相關基因的表達水平進行比較的情況下，樣品與癌性參照之間基因表達樣式的相似表明受試者患有癌症或有風險發生癌症。測試生物學樣品的表達水平與對照水平之間的差異可相對於對照核酸例如持家基因(其表達水平已知不因細胞的癌性或非癌性狀態而不同)進行標準化。例示性的對照基因包括但不限於p-肌動蛋白、甘油醛3-磷酸脫氫酶和核糖體蛋白P1。1-2.評估癌症治療有效性在正常與癌性細胞之間差異表達的iL4SG^F"基因還可供要被監測的癌症治療過程使用，並且上述用於診斷癌症的方法亦可用於評估治療對癌症的有效性。具體來說，可通過測定來源於經受治療的受試者的細胞中iASG五FL4基因的表達水平來評估該治療對癌症的有效性。如果需要，在治療之前、期間和/或之後的不同時間點自受試者獲取受試細胞群。例如，可遵循上文標題'1-1.用於診斷癌症或發生癌症的傾向性的方法，之下所述方法來測定iASG五屍L4基因的表達水平。在本發明的上下文中，優選與所檢測到的表達水平進行比較的對照水平測定自未暴露於所述治療的細胞中的W5^五FL4基因表達。如果iASG"EFL4基因的表達水平與測定自正常細胞或不含癌細胞的細胞群的對照水平相比，表達水平相似則表示所述治療是有效的，而表達水平差異則表示該治療的臨床結果或預後較不理想。另一方面，如果針對測定自癌細胞或含有癌細胞的細胞群的對照水平進行比較，表達水平差異則表示有效治療，而表達水平相似則表示臨床結果或預後較不理想。此外，根據本發明的方法可比較治療前後的i^5U五FA4基因的表達水平，以評估該治療的有效性。具體來說，比較治療後來源於受試者的生物學樣品中所檢測到的表達水平(即治療後水平)與治療開始前獲得自同一受試者的生物學樣品中所檢測到的表達水平(即治療前水平)。治療後水平與治療前水平相比的降低表示所述治療是有效的，而治療後水平與治療前水平相比的升高或相似則表示臨床結果或預後較不理想。如本文中所使用的，術語"有效的，，表示治療引起受試者體內病理性上調的基因的表達降低、病理性下調的基因的表達升高或者癌的大小、患病率(prevalence)或轉移潛力降低。當預防性施用所述治療時，"有效的，，指治療能延遲或防止腫瘤的形成，或者能延遲、防止或緩解癌症的至少一種臨床症狀。可使用標準臨床方案來進行受試者中腫瘤狀況的評估。此外，可以與任何已知的用於診斷癌症的方法相結合來確定治療的有效性。例如，可通過鑑定症狀異常來進行癌症診斷，所述症狀異常例如體重減輕、腹痛、背痛、食名夂缺乏、噁心、嘔吐和全身不適、虛弱和黃疸。1-3.評估癌症受試者的預後上述用於診斷癌症的方法還可用於評估受試者中癌症的預後。因此，本發明還提供了一種用於評估癌症受試者預後的方法。例如，可遵循上文標題'I-1.用於if斷癌症或發生癌症的傾向性的方法'之下所述方法來測定7ASG五FL4基因的表達水平。例如，來源於一系列疾病階革更的患者的生物學樣品中iASG五FL4基因的表達水平可用作為要與對受試者檢測的基因的表達水平進行比較的對照水平。通過比較受試者中WSG^i^4基因的表達水平與對照水平，可評估受試者的預後。或者，通過比較受試者中隨時間變化的表達水平的樣式，可評估受試者的預後。例如，受試者中iL4SG^FL4基因的表達水平與正常對照水平相比的升高表明預後較不理想。相反，表達水平與正常對照水平相比的相似表明受試者預後更加良好。II.試劑盒本發明還提供了用於檢測癌症的試劑，即能檢測^4SG五FW基因的轉錄或翻譯產物的試劑，具體來說，能特異性結合或鑑定iM5U五FL4基因轉錄產物的核酸。例如，能特異性結合或鑑定iL^G五屍L4基因轉錄產物的核酸包括諸如具有與WSG^FL4基因轉錄產物的一部分互補的序列的寡核苷酸(例如探針和引物)。或者，抗體可例示作為用於檢測該基因翻譯產物的試劑。上文標題'1-1.用於診斷癌症或發生癌症的傾向性的方法'之下所述糹果針、引物和抗體可作為上述試劑的合適例子。此外，可基於翻譯產物的生物學活性來檢測它。如實施例中所示，RASGEFlA蛋白被證明具有Ras核苷酸解離活性、RAS增強活性、並與癌細胞的遷移有關。因此，根據本發明，為Ras核苷酸解離測定法、^^測RAS活性或癌細胞的遷移所需的物質也可用作為試劑用於檢測i^SG五FL4基因的表達水平。這些試劑可用於上述癌症的診斷。使用這些試劑的測定形式可以是皆為本領域眾所周知的Northern雜交或夾心ELISA。檢測試劑可以試劑盒的形式一起包裝。例如，檢測試劑可包裝於分開的容器中。此外，檢測試劑可與該檢測所必需的其他試劑一起包裝。例如，試劑盒可包括作為檢測試劑的核酸或抗體(可與固體基質結合，或與使其同基質結合的試劑分開包裝)、對照試劑(陽性的和/或陰性的)和/或可檢測標記物。試劑盒中還可包括用於實施所述測定的說明書(例如書面說明書、錄音帶、VCR、CD-ROM等)。作為本發明的一方面，用於檢測癌症的試劑可固定於固體基質諸如多孔條(porousstrip)上，以形成至少一個用於檢測癌症的位點。多孔條的測量區或檢測區可包括多個位點，每個位點都含有檢測試劑(例如核酸)。測試條也可含有供陰性和/或陽性對照使用的位點。或者，對照位點可以設置於與測試條不同的條上。任選的，不同的^r測位點可含有不同量的固定化^r測試劑(例如核酸)，即第一檢測位點的量較多，隨後位點的量較少。添加受試生物學樣品後，顯示出可檢測信號的位點數目提供了樣品中iOS(7五FL4基因的表達水平的定量指標。檢測位點可設置成任何適宜的可檢測形狀，一般為跨越測試條寬度的條狀或點狀。III.篩選方法利用iL45"G五FL4基因、該基因編碼的多肽或其片段、或該基因的轉錄調節區，能夠篩選改變該基因的表達或該基因所編碼多肽的生物學活性的藥劑。上述藥劑可用作為治療或預防癌症的藥物。因此，本發明提供了利用iAS^五FL4基因、該基因編碼的多肽或其片段、或該基因的轉錄調節區篩選用於治療或預防癌症的藥劑的方法。通過本發明的篩選方法所分離的藥劑是一種預計能抑制/ASG^FL4基因的表達或該基因翻譯產物的活性的藥劑，因此，是一種用於治療或預防歸因於例如細胞增殖性疾病諸如癌症的疾病的候選物。這樣的藥劑預計能治療或預防選自ICC、膀脫在^4癌、胃癌、結腸直腸癌、前列腺癌、慢性髓細胞樣白血病、腎癌、軟組織肉瘤、胰腺癌和精原細胞瘤的癌症。即通過本發明方法所篩選的這樣的藥劑被認為具有臨床益處並可在動物模型或受試者中進一步測試其阻止癌細胞生長的能力。在本發明的上下文中，待通過本發明篩選方法鑑定的藥劑可以是任何化合物或包括數種化合物的組合物。此外，根據本發明的篩選方法暴露於細胞或蛋白質的受試藥劑可以是單一化合物或化合物的組合。當在該方法中使用化合物組合時，化合物可順序或同時接觸。在本發明的篩選方法中可以使用任何受試藥劑，例如細胞提取物、細胞培養物上清液、發酵微生物的產物、海洋生物提取物、植物提取物、純化的或粗製的蛋白質、肽、非肽化合物、合成的小分子化合物(包括核酸構建物，例如反義RNA、siRNA、核酶等)及天然化合物。本發明的受試藥劑還可使用本領域已知的組合文庫法中多種方法中的任一種獲得，包括(l)生物學文庫、(2)空間可尋址平行固相或液相文庫、("需要重疊合法的合成文庫法、(4)"一珠一化合物"文庫法和(5)使用親和層析選擇的合成文庫法。使用親和層析選擇的生物學文庫法僅限於肽文庫，而其它四種方法適用於肽，非肽寡聚體或化合物小分子文庫(Lam,AnticancerDrugDes1997，12:145-67)。合成分子文庫的方法的舉例可見於本領域中(DeWittetal.,ProcNatlAcadSciUSA1993，90:6909-13;Erbetal.,ProcNatlAcadSciUSA1994,91:11422-6;Zucke誰nnetal"JMedChem1994，37:2678-85;Choetal"Science1993,261:1303-5;Carelletal"AngewChemIntEdEngl1994，33:2059;Carelletal"AngewChemIntEdEngl1994,33:2061;Gallopetal.，JMedChem1994,37:1233-51)。化合物文庫可存在於溶液中(參見Houghten,Bio/Techniques1992，13:412-21)或存在於珠子(Lam,Nature1991，354:82-4)、晶片(Fodor,Nature1993,364:555-6)、細菌(美國專利No.5,223,409)、孢子(美國專利No.5,571,698;5,403,484和5,223,409)、質粒(Culletal.,ProcNatlAcadSciUSA1992，89:1865-9)或噬菌體(ScottandSmith,Science1990,249:386-90;Devlin,Science1990,249:404-6;Cwirlaetal.,ProcNatlAcadSciUSA1990,87:6378-82;Felici,JMolBiol1991,222:301-10;美國專利申請2002103360)上。其中通過任一種本發明篩選方法所篩選的化合物的部分結構經添加、缺失和/或取代所轉變得到的化合物包括於通過本發明篩選方法所獲得的藥劑中。此外，當篩選的受試藥劑是蛋白質時，為了獲得編碼該蛋白質的DNA,可測定該蛋白質的完整胺基酸序列以推出編碼該蛋白質的核酸序列，或可分析所獲得的蛋白質的部分胺基酸序列以基於該序列製備寡DNA作為探針，並用該探針篩選cDNA文庫以獲得編碼該蛋白質的DNA。所獲得的DNA用於製備受試藥劑，其是用於治療或預防癌症的候選物。III-l.基於蛋白質的篩選方法根據本發明，提出i^SG^FL4基因的表達對於癌細胞的生長和/或存活是至關重要的。因此，認為抑制該基因所編碼多肽的功能的藥劑抑制癌細胞的生長和/或存活，並可用於治療或預防癌症。因此，本發明提供了利用RASGEF1A多肽來篩選用於治療或預防癌症的藥劑的方法。在RASGEF1A多肽之外，該多肽的片段也可用於本發明的篩選，只要其保留天然存在RASGEF1A多肽的至少一種生物學活性即可。所述多肽或其片段可進一步連接其他物質，只要該多肽及片段保留其至少一種生物學活性即可。可利用的物質包括肽、脂質、糖和糖鏈、乙醯基、天然和合成聚合物等。可進行這些類型的修飾以賦予該多肽及片段別的功能或使其穩定。用於本發明方法的多肽或片段可作為天然存在蛋白質通過常規純化方法獲得自自然界，或基於所選擇的胺基酸序列通過化學合成獲得。例如，可用於合成的常規肽合成法包括1)PeptideSynthesis,Interscience,NewYork,1966;2)TheProteins,Vol.2，AcademicPress,NewYork,1976;3)PeptideSynthesis(曰語)，MaruzenCo.,1975;4)BasicsandExperimentofPeptideSynthesis(日語),MaruzenCo"1985;5)DevelopmentofPharmaceuticals(第二巻)(曰語),Vol.14(peptidesynthesis),Hirokawa,1991;6)W099/67288;和7)BaranyG.&MerrifieldR.B.,PeptidesVol.2,"SolidPhasePeptideSynthesis",AcademicPress,NewYork,1980,100-118。或者，可採用用於產生多肽的任何已知基因工程方法來獲得該蛋白質(例^口MorrisonJ"JBacteriology1977,132:349-51;Clark畫Curtiss&Curtiss,MethodsinEnzymology(編輯Wuetal.)1983,101:347-62)。例如，首先製備以可表達形式(例如位於包含啟動子的調節序列的下遊)包含編碼目標蛋白質的多核苷酸的適合的載體，然後轉化入合適的宿主細胞，接著培養宿主細胞以產生蛋白質。更具體的說，通過將編碼RASGEFIA多肽的基因插入用於表達外來基因的載體諸如pSV2neo、pcDNAI、pcDNA3.1、pCAGGS或pCD8，在宿主(例如動物)細胞等中表達該基因。啟動子可用於表達。可使用任何常用的啟動子，包括例如SV40早期啟動子(RigbyinWilliamson(編)，GeneticEngineering,vol.3.AcademicPress,London,1982,83-141)、EF-a啟動子(Kimetal.,Gene1990,91:217-23)、CAG啟動子(Niwaetal.,Gene1991,108:193)、RSVLTR啟動子(Cullen,MethodsinEnzymology1987,152:684-704)、SRot啟動子(Takebeetal.，MolCellBiol1988,8:466)、CMV立即早期啟動子(Seedetal.，ProcNatlAcadSciUSA1987,84:3365-9)、SV40晚期啟動子(GheysenetaLJMolApplGenet1982,1:385-94)、腺病毒晚期啟動子(Kaufmanetal.,MolCellBiol1989,9:946)、HSVTK啟動子等。可根據任何方法將載體導入宿主細胞以表達WSG^FL4基因，例如電穿孔法(Chuetal.,NucleicAcidsRes1987:15:1311-26)、磷酸鉤法(Chenetal.,MolCellBiol1987,7:2745-52)、DEAE右旋糖苦法(Lopataetal"NucleicAcidsRes1984,12:5707-17;Sussmanetal.,MolCellBiol1985，4:1642-3)、脂轉染法(DerijardB,Cell1994，7:1025-37;Lambetal"NatureGenetics1993，5:22-30;Rabindranetal"Science1993，259:230-4)等。還可採用體外翻譯系統在體外產生RASGEF1A蛋白。要與受試藥劑接觸的RASGEF1A多肽可以是例如純化的多肽、可溶性蛋白質或與其他多肽融合的融合蛋白。m-l-l.鑑定能與RASGEFIA多肽結合的藥劑能與蛋白質結合的藥劑可能改變編碼該蛋白質的基因的表達或該蛋白質的生物學活性。因此，作為一方面，本發明提供了一種篩選用於治療或預防癌症的藥劑的方法，包括步驟a)將受試藥劑與RASGEFIA多肽或其片段接觸；b)^r測多肽與受試藥劑之間的結合；並c)選擇與多肽結合的受試藥劑。受試藥劑與RASGEF1A多肽的結合可以例如通過使用針對該多肽的抗體的免疫沉澱來檢測。因此，為了進行上述檢測，優選用於篩選的RASGEFIA多肽或其片段含有抗體識別位點。用於篩選的抗體可以是識別本發明RASGEF1A多肽的抗原區(例如表位)的抗體，其製備方法是本領域眾所周的識別位點(表位)的融合蛋白而得到表達，所述單克隆抗體的特異性已被揭示是針對該多肽的N-或C-末端的。可使用市售的表位-抗體系統(ExperimentalMedicine1995,13:85-90)。通過利用其多克隆位點能表達具有例如P-半乳糖苦酶、麥芽糖結合蛋白、穀胱甘肽S-轉移酶、綠色焚光蛋白(GFP)等的融合蛋白的載體是商業上可得到的，並能用於本發明。此外，本領域還已知含有小得多的表位的融合蛋白，所述表位可通過與針對它的抗體的免疫沉澱而得以檢測(ExperimentalMedicine1995，13:85-90)。上述由幾個到幾十個胺基酸組成、不會改變RASGEF1A多肽或其片段的特性的表位也可用於本發明。例子包括聚組氨酸(His標籤)、流感病毒聚集體(influenzaaggregate)HA、人c-myc、FLAG、水泡性口膜炎病毒糖蛋白(VSV-GP)、T7基因10蛋白(T7標籤)、人單純皰滲病毒糖蛋白(HSV標籤)、E標籤(單克隆噬菌體上的一種表位)等。眾所周知，穀胱甘肽S-轉移酶(GST)也是作為要通過免疫沉澱進行檢測的融合蛋白的配對物(coimterpart)。當GST用作為要與RASGEF1A多肽或其片段融合以形成融合蛋白的蛋白質時，可用針對GST的抗體或與GST特異性結合的物質即諸如穀胱甘肽(例如穀胱甘肽-Sepharose4B)來檢測該融合蛋白。在免疫沉澱中，通過添加抗體(識別RASGEF1A多肽或其片段自身，或標記到該多肽或片段上的表位)到RASGEF1A多肽和受試藥劑的反應混合物中形成免疫複合物。如果受試藥劑具有與該多肽結合的能力，那麼所形成的免疫複合物應由RASGEF1A多肽、受試藥劑和抗體組成。反之，如果受試藥劑缺乏上述能力，那麼所形成的免疫複合物僅由RASGEF1A多肽和抗體組成。因此，可通過例如測量所形成的免疫複合物的大小來檢查受試藥劑與RASGEF1A多肽結合的能力。任何用於檢測物質大小的方法皆可使用，包括層析、電泳等。例如，當小鼠IgG抗體用於檢測時，蛋白A或蛋白Gsepharose可用於定量所形成的免疫複合物。免疫；冗；定"i羊見仿J長口Harlowetal.,Antibodies,ColdSpringHarborLaboratorypublications,NewYork,1988,511-52。此外，用於篩選能與其結合的藥劑的RASGEFIA多肽或其片段可與載體結合。可用於結合多肽的載體的例子包括不溶性多糖，諸如瓊脂糖、纖維素和右旋糖苷；及合成樹脂，諸如聚丙烯醯胺、聚苯乙烯和矽；優選使用由上述材料製備的市售的珠和板(例如多孔板、生物傳感器晶片等)。使用珠時，可以將其填入柱子。或者，在本領域中也已知使用石茲珠，能通過^f茲性容易的分離結合在^K上的多肽和藥劑。多肽與載體的結合可根據常規方法進行，諸如化學鍵合和物理吸附。或者，多肽可通過特異性識別蛋白質的抗體而與載體結合。此外，還可以藉助於相互作用的分子諸如親合素與生物素的組合來進行多肽與載體的結合。利用上述載體結合型RASGEF1A多肽或其片段的篩選包括例如將受試藥劑與載體結合型多肽接觸，溫育該混合物，洗滌載體，並片企測和/或測量與載體結合的藥劑。可在緩衝液中進行該結合，例如但不限於磷酸鹽緩沖液和Tris緩沖液，只要所述緩沖液不抑制該結合即可。對於其中以上述載體結合型RASGEF1A多肽或其片段和組合物(例如細胞提取物、細胞裂解物等)用作為受試藥劑的篩選方法，這樣的方法通常^皮稱為親和層析。例如，可將RASGEF1A多肽固定在親和柱的載體上，然後將含有能與該多肽結合的物質的受試藥劑施加於該柱子。在受試藥劑上樣後，洗滌柱子，接著用合適的緩衝液洗脫與多肽結合的物質。在本發明中，利用表面等離子體共振現象的生物傳感器可用作為檢測或定量所結合藥劑的手段。當使用這樣的生物傳感器時，僅使用少量的多肽，而無需標記(例如BIAcore,Pharmacia),即可將RASGEF1A多肽與受試藥劑之間的相互作用實時觀察為表面等離子體共振信號。因此，利用諸如BIAcore的生物傳感器有可能評估多肽與受試藥劑之間的結合。通過將固定在載體上的特定蛋白質暴露於下述分子，在合成化合物、或者天然物質庫或隨機噬菌體肽展示文庫中的分子中篩選與特定蛋白質結合的分子的方法，以及基於組合化學技術(Wrightonetal.,Science1996,273:458-64;Verdine,Nature1996，384:11-3)來分離蛋白質和化合物的高通量篩選方法也是本領域技術人員眾所周知的。這些方法還可用於篩選能與RASGEF1A蛋白或其片段結合的藥劑(包括激動劑和拮抗劑)。當受試藥劑為蛋白質時，例如West-Western印跡分析(Skolniketal.，Cell1991,65:83-90)可用於本發明的方法。具體來說，可通過首先利用噬菌體載體(例如ZAP)由預期表達至少一種與RASGEF1A多肽結合的蛋白質的細胞、組織、器官或培養細胞(例如SSP25)製備cDNA文庫，在LB-瓊脂糖上表達由cDNA文庫的載體編碼的蛋白質，將所表達的蛋白質固定在濾膜上，讓經過純化和標記的RASGEF1A多肽與上述濾膜反應，並根據RASGEF1A多肽的標記物來檢測表達與RASGEF1A多肽結合的蛋白質的噬斑，從而獲得能與RASGEF1A多肽結合的蛋白質。在本發明的方法中，標記物質諸如放射性同位素(例如SH、14C、32P、33P、35S、125I、131I)、酶(例如鹼性磷酸酶、辣根過氧化物酶、(3-半乳糖苷酶、(3-葡糖苷酶)、焚光物質(例如異硫氰酸螢光素(FITC)、若丹明)和生物素/親合素可用於RASGEFlA多肽的標記。當蛋白質用放射性同位素標記時，可通過液體閃爍法進行^f企測或測量。或者，當蛋白質用酶標記時，可通過添加酶的底物來4企測底物的酶促改變諸如利用吸收光度計(absorptiometer)檢測顏色產生來檢測或測量。此外，在螢光物質用作為標記物的情況下，可利用螢光光度計來檢測或測量所結合的蛋白質。此外，可通過利用特異性結合RASGEF1A多肽或融合至RASGEF1A多肽的肽或多肽(例如GST)的抗體來檢測或測量結合至蛋白質的RASGEF1A多肽。在本發明篩選中使用抗體的情況下，該抗體優選用上述標記物質之一進行標記，並基於該標記物質進行檢測或測量。或者，針對RASGEF1A多肽的抗體可用作為第一抗體，該抗體用標記有標記物質的第二抗體來檯r測。此外，可利用蛋白G或蛋白A柱來檢測或測量在本發明篩選中與RASGEF1A多肽結合的抗體。或者，在本發明篩選方法的另一個實施方案中，可使用利用細胞的雙雜交系統("MATCHMAKER雙雜交系統"、"哺乳動物MATCHMAKER雙雜交測定試劑盒"、"MATCHMAKER單雜交系統"(Clontech);"HybriZAP雙雜交載體系統(Stratagene)，，；參考文獻Daltonetal.,Cell1992,68:597-612和Fieldsetal.,TrendsGenet1994，10:286-92)。在雙雜交系統中，將RASGEF1A多肽或其片段與SRF結合區或GAL4結合區融合，並在酵母細胞中表達。由預期表達至少一種與RASGEF1A多肽結合的蛋白質的細胞製備cDNA文庫，使得該文庫在表達時與VP16或GAL4轉錄活化區融合。然後將cDNA文庫導入上述酵母細胞，並從;f全測為陽性的克隆分離出來源於所述文庫的cDNA(當在酵母細胞中表達能與RASGEF1A多肽結合的蛋白質時，兩者的結合激活了報告基因，使陽性克隆可以檢出)。通過將上述分離的cDNA導入大腸桿菌並表達蛋白質，可以製備由該cDNA編碼的蛋白質。作為報導基因，在HIS3基因之外，可使用例如Ade2基因、lacZ基因、CAT基因、螢光素酶基因等。通過這種篩選分離的藥劑是RASGEF1A多肽的激動劑或拮抗劑的候選物。術語"激動劑，，指通過與多肽結合從而激活其功能的分子。與此相反，術語"拮抗劑"指通過與多肽結合而抑制其功能的分子。此外，通過這種篩選作為拮抗劑而分離的藥劑是抑制RASGEF1A多肽與分子(包括核酸(RNA和DNA)和蛋白質)體內相互作用的候選物。III-1-2.通過檢測RASGEF1A多肽的生物學活性來鑑定藥劑才艮據本發明，iL4SG^FL4基因的表達顯示出對於癌細胞的生長和/或存活是至關重要的。因此，遏制或抑制iASG^FL4基因翻譯產物的生物學功能的藥劑被認為是能作為用於治療或預防癌症的候選物。因此，本發明還提供了一種利用RASGEF1A多肽或其片段來篩選用於治療或預防癌症的化合物的方法，包括如下步驟a)將受試藥劑與RASGEF1A多肽或其片段接觸；b)檢測步驟(a)的多肽的生物學活性；並任何多肽都可用於篩選，只要其具有RASGEF1A多肽的一種生物學活性即可，所述生物學活性可用作為本發明篩選方法的指標。由於RASGEF1A多肽具有促進癌細胞增殖的活性，因此可用作為篩選指標的RASGEF1A多肽的生物學活性包括上述人RASGEF1A多肽的細胞增殖活性。例如，可使用人RASGEF1A多肽，也可使用包括其片段在內的、與其在功能上等價的多肽。可通過適合的細胞內源或外源表達上述多肽。當本發明的方法中所;險測的生物學活性為細胞增殖時，可以如實施例(參見"材料和方法，，)所述，通過如下方法進行檢測製備表達RASGEF1A多肽或其片段的細胞，在存在受試藥劑的條件下培養所述細胞，並測定細胞增殖速度，測量細胞周期等，以及測定傷口癒合活性，進行Matrigel侵入測定法，並測量集落形成活性。才艮據本發明的一方面，所述篩選在上述步驟(b)之後進一步包括步驟c)選擇與不存在受試藥劑的條件下檢測到的生物學活性相比抑制多肽生物學活性的受試藥劑。通過該篩選所分離的藥劑是RASGEF1A多肽的拮抗劑候選物，因此，也是抑制該多肽與分子(包括核酸(RNA和DNA)和蛋白質)體內相互作用的候選物。作為本發明的另一方面，可利用RASGEF1A多肽的生物學活性作為指標來篩選用作該多肽的激動劑候選物的藥劑。根據上述方法，選擇提高RASGEF1A多肽的生物學活性的藥劑。具體來說，該篩選方法在上述步驟(b)之後進一步包括步驟c)選擇與不存在受試藥劑的條件下檢測到的生物學活性相比提高多肽生物學活性的受試藥劑。在此，揭示了RASGEF1A多肽提高RAS的活性。因此，降低RAS增強活性(即RASGEF1A多肽的生物學活性之一)的藥劑可用於治療或預防癌症。因此，本發明進一步提供了一種篩選用於治療或預防癌症的藥劑的方法。該篩選方法的一個實施方案包括步驟(a)在存在受試藥劑的條件下，將RASGEF1A多肽或其片段與RAS接觸；(b)檢測RAS活性；並(c)選擇與不存在受試藥劑的條件下檢測到的活性相比降低RAS活性的受試藥劑。可根據本領域已知方法來測量RAS活性；例如，通過GDP檢測(參見例如HallBEetal.，JBiolChem2001,276:27629-37)或RAS激活測定法。在本發明中，為了評估在受試藥劑存在與否的條件下RASGEFIA多肽的RAS激活活性，例如，在受試化合物存在與否的條件下將表達iASG^FL4基因的細胞的細胞裂解物與GST-Ras融合蛋白、GDP和GTPyS溫育。溫育後，通過使用檢測活性或21kDaGTP-Ras的抗Ras抗體的Western印跡分析來檢測活性或GTP-Ras。可使用穀胱甘肽盤(glutathionedisc)進行活性或GTP-Ras的下拉測定法。市售的RAS激活測定試劑盒也可用於本發明的篩選方法。例如，"StressXpressRASj:敫活試劑盒"(StressgenBioreagentsCorp.)或"EZ-DetectTMRas激活試劑盒"(PIERCEBiotechnology)包含用於該測定的所有組分，例如抗RAS抗體、穀胱甘肽盤、含有Rafl的Ras結合域(RBD)的GST融合蛋白、GDP和GTPyS。此外，可如實施例所述來檢測RAS活性(參見標題"材料和方法"的"8.Ras核香酸解離測定法"和"9.RAS活性分析")。III-2.基於核苷酸的篩選方法III-2-1.使用RASGEFIA基因的篩選方法如上詳述，通過控制i/!S(^F"基因的表達水平，可以控制癌症的發病和進展。因此，通過使用iASG^FL4基因的表達水平作為指標的篩選可鑑定能用於治療或預防癌症的藥劑。在本發明的上下文中，這樣的篩選可包括例如以下步驟；a)將受試藥劑與表達7MSG^FL4基因的細胞接觸；b)檢測iAS(7E屍L4基因的表達水平；並c)選擇與不存在受試藥劑的條件下檢測到的水平相比降低WSG^FL4基因的表達水平的受試藥劑。可通過將表達RASGEF1A基因的細胞與受試藥劑接觸，然後測定7ASG五FL4基因的表達水平，從而鑑定抑制iASG五FL4基因的表達或其基因產物的活性的藥劑。當然，也可使用一群表達該基因的細胞代替單個細胞進行該鑑定。在存在該藥劑的條件下檢測到與不存在該藥劑的條件下的表達水平相比降低的表達水平表明該藥劑能作為iASG^FL4基因的抑制劑，說明該藥劑具有抑制癌症用途的可能性，從而作為用於治療或預防癌症的候選藥劑。可通過本領域眾所周知的方法來評估基因的表達水平。例如，可遵循上文標題'I-1.用於診斷癌症或發生癌症的傾向性的方法，之下所述方法來測定i^4SG五F/^基因的表達水平。用於上述鑑定的細胞或細胞群可以是任何細胞或任何細胞群，只要其表達iASG^FL4基因即可。例如，該細胞或細胞群可以是或包含來源於組織的上皮細胞。或者，該細胞或細胞群可以是或包含來源於癌性細胞的永生化細胞，包括來源於ICC、膀胱癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、前列腺癌、慢性髓細胞樣白血病、腎癌、軟組織肉瘤、胰腺癌和精原細胞瘤的那些永生化細胞。表達iMSGf^L4基因的細胞包括例如自癌建立的細胞系(例如SSP25)。此外，該細胞或細胞群可以是或包含已用iL^G^FW基因轉染的細胞。本發明的方法容許篩選各種上述物質，特別適用於篩選功能性核酸分子，包括反義RNA、siRNA等。III-2-2.使用RASGEF1A基因轉錄調節區的篩選方法根據另一方面，本發明提供了一種方法，其包括以下步驟a)將受試藥劑與其中已導入如下載體的細胞接觸，所述載體包含iASG五FL4基因的轉錄調節區及在該轉錄調節區控制之下表達的報導基因；b)檢測所述報導基因的表達或活性；並c)選擇與不存在受試藥劑的條件下檢測到的水平相比降低所述報導基因的表達或活性的受試藥劑。適合的報導基因和宿主細胞是本領域眾所周知的。可使用iASU五FL4基因的轉錄調節區來製備篩選所需要的報導構建物，所述轉錄調節區可基於該基因的核苷酸信息作為含有轉錄調節區的核苦酸區段自基因組文庫獲得。轉錄調節區可以是例如i^5U五F"基因的啟動子序列。當使用經與WSG^FL4基因的調節序列(例如啟動子序列)可操作連接的報導基因轉染的細胞時，可通過檢測報導基因產物的表達水平來鑑定抑制或增強iL4SG^F"基因的表達的藥劑。作為報導基因，例如Ade2基因、lacZ基因、CAT基因、螢光素酶基因、HIS3基因和本領域眾所周知的這樣的基因可被使用。用於檢測這些基因的表達的方法是本領域眾所周知的。III-3.選擇適合於特定個體的治療劑個體遺傳組成的差異可導致其代謝各種藥物的相對能力出現差異。在受試者體內代謝從而起到抗腫瘤劑作用的藥劑，可通過在受試者的細胞中誘導癌性狀態特徵性基因表達樣式向非癌性狀態特徵性基因表達樣式的轉變而自己顯現出來。因此，在此披露的在癌性細胞與非癌性細胞之間差異表達的iL4SG^FL4基因容許在來自選定受試者的受試細胞群中測試推定的癌症治療性或預防性抑制劑，從而確定該藥劑在該受試者中是否是合適的癌症抑制劑。為鑑定適合於特定受試者的癌症抑制劑，將來自該受試者的受試細胞群暴露於候選治療劑，並測定iASG^^M基因的表達。在本發明方法的上下文中，受試細胞群含有表達iMSG^i^7J基因的癌細胞。優選的，受試細胞是上皮細胞。具體來說，可在存在候選治療劑的條件下溫育受試細胞群，測量受試細胞群中iASG^FL4基因的表達，並與一個或多個對照序型比較，例如癌性參照表達序型或非癌性參照表達序型。受試細胞群中iASG五FL4基因的表達相對於含有癌細胞的參照細胞群的降低表明該藥劑具有治療潛力。IV.用於治療或預防癌症的藥物組合物通過本發明任何篩選方法篩出的藥劑、iL4SG^FL4基因的反義核酸和siRNA、及針對RASGEF1A多肽的抗體抑制或遏制i^SG五FW基因的表達或RASGEF1A多肽的生物學活性，還抑制或破壞細胞周期調節和細胞增殖。因此，本發明提供了用於治療或預防癌症的組合物，該組合物包括通過本發明任何篩選方法篩出的藥劑、/ASG五FL4基因的反義核酸和siRNA、或針對RASGEF1A多肽的抗體。本發明的組合物可用於治療或預防癌症，諸如ICC、膀胱癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、前列腺癌、慢性髓細胞樣白血病、腎癌、軟組織肉瘤、胰腺癌和精原細胞瘤。該組合物可用作為用於人或其他哺乳動物的藥物，所述哺乳動物諸如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、貓、犬、綿羊、豬、牛、猴、狒狒和黑猩猩。在本發明的上下文中，適合於詳述如下的本發明活性成分(包括所篩出的藥劑、反義核酸、siRNA、抗體等)的藥物劑型包括適於口服、直腸、鼻、局部(包括口腔和舌下)、陰道或腸胃外(包括肌內、皮下和靜脈內)施用的，或適於通過吸入或吹入施用的藥物劑型。優選的，通過靜脈內施用。製劑任選以離散的劑量單位包裝。適合於供口服施用的藥物劑型包括各自包含預定量活性成分的膠嚢、微嚢劑、扁嚢劑和片劑。適合的劑型還包括粉劑、酏劑、粒劑、溶液、混懸液和乳劑。活性成分可以任選以大丸劑(bolus)、藥糖劑(electuary)或糊劑(paste)的形式施用。或者，視需要，藥物組合物可以無菌溶液或與水或任何其他藥學上可接受的液體的混懸液注射的形式非口服施用。例如，可將本發明的活性成分與藥學上可接受的載體或介質混合，具體來說，為無菌水、生理鹽水、植物油、乳化劑、助懸劑、表面活性劑、穩定劑、芳香劑、賦形劑、媒介物、防腐劑、粘合劑等等，以通常可接受的藥物配製方法所要求的單位劑量形式存在。包含於上述製劑中的活性成分的量為可獲得的指定範圍內的合適劑量。可摻入片劑和膠嚢中的添加劑的例子包括但不限於粘合劑，諸如明膠、玉米澱粉、黃蓍膠和阿拉伯膠；賦形劑，諸如結晶纖維素；溶脹劑，諸如玉米澱粉、明膠和海藻酸；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂；甜味劑，諸如蔗糖、乳糖或糖精；及芳香劑，諸如薄荷油、白珠(Gaultheriaadenothrix)油和櫻桃。片劑可通過壓縮或模製來製備，其中任選含有一種或多種配方成分。壓製片劑可通過如下方法製備將活性成分以自由流動的形式(諸如粉末或顆粒)任選與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、潤滑劑、表面活性劑或分散劑混合，並在適當的機器中進行壓制。模製片劑可通過如下方法製備在適當的機器中對利用惰性液體稀釋劑溼潤的粉末化合物的混合物進行模製。所述片劑可根據本領域眾所周知的方法進行包衣。片劑可任選配製以4是供活性成分在體內的緩釋或控釋。片劑的包裝中可以包含每月服用的一片藥物。此外，當單位劑量形式為膠嚢時，在上述成分之外還可包括液體載體，諸^口、油。口服液體製劑可以例如含水或含油混懸液、溶液、乳劑、糖漿劑或酏劑的形式存在，或可以乾燥產物存在用於在使用前與水或其他適合的媒介物重建。上述液體製劑可含有常規添加劑，諸如助懸劑、乳化劑、非水媒介物(可包括食用油類)或防腐劑。用於腸胃外施用的製劑包括水性和非水性無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和使得製劑與目標受者的血液等滲的溶質；及水性和非水性無菌懸浮液，其可含有助懸劑和增稠劑。所述製劑可以單位劑量或多劑量容器提供，例如密封的安瓿和小管，還可以在冷凍乾燥(凍幹)條件下保存，這樣僅需要臨使用前添加無菌液體載體，例如鹽水、注射用水。或者，可提供用於連續輸注的製劑。即配即用的注射溶液和混懸液可由前述類型的無菌粉劑、顆粒和片劑製備。此外，使用適合於注射的媒介物諸如蒸餾水，按照普通的藥物配製方法可配製供注射用的無菌混合物。生理鹽水、葡萄糖和其它等滲液體包括佐劑，諸如D-山梨醇、D-甘露糖、D-甘露醇和氯化鈉可用作注射用的水溶液。它們可與適當的增溶劑，諸如醇，例如乙醇；多元醇，諸如丙二醇和聚乙二醇；及非離子型表面活性劑，諸如Polysorbate80(TM)和HCO-50—起使用。芝麻油或大豆油可用作為油質液體，可與苯曱酸千酯或苯曱醇組合使用作為增溶劑，還可與緩沖液，諸如磷酸鹽緩沖液和乙酸鈉緩沖液；鎮痛劑，諸如鹽酸普魯卡因；穩定劑，諸如苯曱醇和酚；和/或抗氧化劑一起配製。製備的注射劑可以裝入到合適的安瓿中。用於直腸給藥的製劑包括具有標準載體諸如可可脂或聚乙二醇的栓劑。用於口內局部給藥，例如口腔或舌下給藥的製劑包括錠劑和軟錠劑，其中錠劑在調味基質諸如蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠中包含活性成分，而軟錠劑在基質諸如明膠、甘油、蔗糖或阿拉伯膠中包含活性成分。對於鼻內施用活性成分，可使用液體噴霧劑、可分散粉劑，或以滴劑的形式使用。滴劑可用水性或非水性基質配製，該基質中還含有一種或多種分散劑、增溶劑或助懸劑。對於通過吸入給藥，可以由吹入器、霧化器、加壓包裝(pressurizedpack)或其它遞送氣溶膠噴霧的便利裝置方便地遞送組合物。加壓包裝可含有適宜的推進劑，諸如二氯二氟曱烷、三氯氟曱烷，二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適宜氣體。在加壓氣溶膠的情況下，可通過提供遞送計量數量的閥門來確定劑量單位。或者，對於通過吸入或吹入給藥，組合物可以採取乾粉組合物的形式，例如活性成分與適合的粉末基質(諸如乳糖或澱粉)的粉末混合物。粉末組合物可以單位劑量形式提供，例如膠嚢、藥筒(cartridge)、凝膠(gelatin)或泡罩包裝(blisterpack),藉助吸入器或吹入器，可由上述單位劑量形式施用所述粉末。其它的製劑包括可釋放治療劑的可檔入裝置和粘性貼片。需要時，可以採用適於緩釋活性成分的上述製劑。藥物組合物中還可以含有其它活性成分，諸如抗微生物劑、免疫抑制劑或防腐劑。應當理解，在上述具體提及的成分外，本發明的製劑可含有本領域對於所述製劑類型常用的其它藥劑，例如適於口服給藥的製劑可以含有調味劑。優選的單位劑量製劑是含有如下文標題'用於治療或預防癌症的方法，中所述的每種本發明活性成分或其適宜部分的有效劑量的那些製劑。IV-1.包含所篩出的藥劑的藥物組合物本發明提供了包含通過上述本發明篩選方法篩選出的任何藥劑、用於治療或預防癌症的組合物。通過本發明方法篩選出的藥劑可直接施用或根據以上詳述的任何常規藥物製備方法配製為劑量形式。IV-2.包含siRNA的藥物組合物針對iAS(^:屍L4基因的siRNA(以下也稱為"RASGEF1AsiRNA")可用於降低該基因的表達水平。在此，術語"siRNA"指阻止靶mRNA翻譯的雙鏈RNA分子。在本發明的上下文中，siRNA包含針對上調標誌基因iASG五屍L4的有義核酸序列和反義核酸序列。構建該siRNA使得其包含靶基因的有義和互補反義序列，即包含髮夾結構的核苷酸。iMSG五FL4基因的siRNA與耙mRNA雜交，即與正常的單鏈mRNA轉錄物結合併因此幹擾mRNA翻譯，最終降低或抑制該基因編碼多肽的產生(表mRNA特異性雜交的能力而得以限定。在本發明的上下文中，siRNA的長度優選少於500、200、100、50或25個核苷酸。更優選的，siRNA的長度為19-25個核苷酸。例示性的RASGEF1AsiRNA的靶核S吏序列包括SEQIDNO:9或13的核苷酸序列。在RNA或其書亍生物中，序列中的核苷酸"t，，應為"u"所取代。因此，例如，本發明提供了包含核苷酸序歹'J5'-gagaauggcacagugaaga畫3，(SEQIDNO:9)或5'隱caucuacuuccugcacaaa-3，(SEQIDNO:13)的雙鏈RNA分子。為了增強si脂A的抑制活性，可將核苷酸"u，，添加到靶序列的反義鏈的3，末端。要添加的"u，，的數目為至少2個，通常為2-10個，優選2-5個。所添加的"u"在siRNA的反義鏈的3，末端形成單鏈。可將由任意核苷酸序列組成的環序列放置於有義序列與反義序列之間，以便形成髮夾環結構。因此，本發明還提供了具有通式5，-[A]-[B]-[A，]-3，的siRNA,其中[A]為對應於與i^SG五FL4基因的mRNA或cDNA特異性雜交的序列的核糖核苷酸序列。在優選的實施方案中，[A]為對應於iASG^FL4基因的序列的核糖核苷酸序列；[B]為由3-23個核苷酸組成的核糖核苷酸序列；而[A，]為由[A]的互補序列組成的核糖核苷酸序列。[A]區與[A，]區雜交，然後形成由[B]區組成的環。環序列的長度可優選為3-23個核香酸。環序列例如可選自長口下序歹'J(http:〃www.ambion.com/techlib/tb/tb—506.html):CCC、CCACC或CCACACC:JacqueJMetal.,Nature2002,418:435-8。UUCG:LeeNSetal.，NatureBiotechnology2002，20:500-5;FruscoloniPetal.,ProcNatlAcadSciUSA2003,100(4):1639-44。UUCAAGAGA:DykxhoornDMetal.,NatureReviewsMolecularCellBiology2003,4:457-67。"UUCAAGAGA(在DNA中為"ttcaagaga")"是特別適合的環序列。此外，由23個核苷酸組成的環序列也提供了有活性的siRNA(JacqueJ-Metal.,Nature2002,418:435-8)。適用於本發明上下文中的例證性的髮夾siRNA包4舌，對於RASGEFlA-si脂A,5，-gagaauggcacagugaaga-[B]-ucuucacugugccauucuc-3，(用於SEQIDNO:9的革巴序歹'J);和5，-caucuacuuccugcacaaa-[B]-uuugugcaggaaguagaug-3，(用於SEQIDNO:13的耙序歹ll)。可"f吏用能4尋自Ambion網鄉佔(http:〃www.ambion.com/techlib/misc/siRNA—fmder.html)的siRNA設計電腦程式設計適合的siRNA的核苷酸序列。該電腦程式基於以下流程選擇用於siRNA合成的核苷酸序列。siRNA靶位點的選擇1.從目標轉錄物的AUG起始密碼子開始向下遊掃描，尋找AA二核苷酸序列。記錄每個AA的出現及其3，側鄰近的19個核苷酸作為潛在的siRNA靶位點。Tuschletal.GenesCev1999,13(24):3191-7,不推薦針對5，和3，非翻譯區(UTR)和鄰近起始密碼子的區域(75個鹼基之內)設計siRNA,因為上述區域可能富含調節蛋白結合位點。UTR結合蛋白和/或翻譯起始複合物可幹擾siRNA內切核酸酶複合物的結合。2.將所述潛在靶位點與人基因組資料庫進行比較，不考慮與其它編碼序列顯著同源的任何耙序列。可採用可見於NCBI伺服器www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/的BLAST(AltschulSFetal.,NucleicAcidsRes1997,25:3389-402;JMolBiol1990,215:403-10)進行同源性4叟索。3.選擇合格的靶序列用於合成。在Ambion，可優選順著待評估的基因的長度選擇數個靶序列。可使用用於將siRNA導入細胞中的標準技術。例如，可以能與mRNA轉錄物結合的形式將RASGEFlA的siRNA直接導入細胞。在這些實施方案中，本發明的siRNA分子通常進行如上所述關於反義分子的修飾。也可能進行其他修飾，例如，偶聯有膽固醇的siRNA顯示出具有改善的藥理特性(Songetal.，NatureMed2003,9:347-51)。或者，編碼siRNA的DNA可攜帶於載體(以下也稱為"siRNA載體")中。可通過例如將耙i^SG五FL4基因序列克隆入在該序列側翼可操作連接有調節序列(例如來自小核RNA(snRNA)U6的RNA聚合酶III轉錄單位或人H1RNA啟動子)的表達載體中，以容許兩條鏈都表達(通過該DNA分子的轉錄)的方式產生上述載體(LeeNSetal.,NatureBiotechnology2002,20:500-5)。例如，通過第一啟動子(例如所克隆的DNA3'側的啟動子序列)轉錄與iL4SG^FL4基因的mRNA反義的RNA分子，通過第二啟動子(例如所克隆的DNA5，側的啟動子序列)轉錄對於iL46U五i^M基因的mRNA為有義鏈的RNA分子。有義鏈與反義鏈在體內雜交以產生用於沉默i^ASG五屍L4基因表達的siRNA構建物。或者，可利用兩種構建物來創建單鏈siRNA構建物的有義鏈和反義鏈。在這種情況下，具有二級結構例如髮夾的構建物作為包含靶基因的有義序列和互補的反義序列的單一轉錄物產生。因而，本發明用於治療或預防癌症的藥物組合物包含siRNA或在體內表達siRNA的載體。為了將siRNA載體導入細胞，可使用轉染增強劑。FuGENE6(Rochediagnostics)、Lipofectamine2000(Invitrogen)、Oligofectamine(Invitrogen)和Nucleofector(WakopureChemical)可用作為轉染增強劑。因此，本發明的藥物組合物可進一步包括上述轉染增強劑。IV-3.包含反義核酸的藥物組合物相應於iASG^屍L4基因核苦酸序列的反義核酸可用於P條低在多種癌性細胞中上調的該基因的表達水平，具有治療癌症的用途，因此也包含在本發明中。反義核酸通過與i^SG五FL4基因的核苦酸序列或其相應的mRNA結合起作用，從而抑制該基因的轉錄或翻譯，促進mRNA的降解，和/或抑制該基因所編碼蛋白質的表達。因此，結果是，反義核酸抑制RASGEF1A蛋白在癌性細胞中發揮功能。在此，短語"反義核酸"指與耙序列特異性雜交的核苷酸，不但包括與該靶序列完全互補的核苷酸，還包括包含一個或多個核苷酸錯配的、與該耙序列互補的核苷酸。例如，本發明的反義核酸包括在7L4SG五FL4基因或其互補序列的至少15個連續核苷酸的^爭度上具有至少70%或更高、優選至少80%或更高、更優選至少90%或更高、甚至更優選至少95%或更高同源性的多核苦酸。本領域中已知的算法可用於測定上述同源性。本發明的反義核酸通過與iL4SG^FL4基因的DNA或mRNA結合，作用於產生該基因所編碼蛋白質的細胞，抑制它們的轉錄或翻譯，促進mRNA的降解，並抑制該蛋白質的表達，最終抑制該蛋白質發揮功能。通過與對核酸無活性的適合基質材料混合，可將本發明的反義核酸製備為外用製劑，例如搽劑(liniment)或罨劑(poultice)。同樣，根據需要，通過添加賦形劑、等滲劑、增溶劑、穩定劑、防腐劑、鎮痛劑等，可將本發明的反義核酸配製成片劑、粉末、顆粒、膠嚢、脂質體膠嚢、注射劑、溶液、滴鼻劑和冷凍乾燥劑。反義封固介質(antisense-mountingmedium)也可用於增加耐久性和膜通透性。所述反義封固介質的例子包括但不限於脂質體、聚L-賴氨酸、脂質、膽固醇、脂質轉染劑或它們的衍生物。可通過下列已知方法製備它們。本發明的反義核酸抑制RASGEF1A蛋白的表達並具有抑制該蛋白質生物學活性的用途。此外，包含本發明反義核酸的表達抑制劑是有用的，因為它們能抑制RASGEF1A蛋白的生物學活性。本發明的反義核酸包括經過修飾的寡核苷酸。例如，硫代(thioated)寡核苷酸可用來賦予寡核苷酸以核酸酶抗性。IV-4.包含抗體的藥物組合物可通過施用如下化合物抑制在多種癌症中過表達的/MSG五FL4基因的基因產物的功能，所述化合物能與該基因產物結合或以其它方式抑制其功能。針對RASGEF1A多肽的抗體可作為這樣的化合物被提及，並可用作為用於治療或預防癌症的藥物組合物的活性成分。本發明涉及針對i^4SG五FL4基因所編碼的蛋白質的抗體或該抗體的片段的應用。如本文中所使用的，術語"抗體"指具有特定結構、只與用於合成該抗體的抗原(即上調標誌的基因產物)或與該抗體密切相關的抗原相互作用(即結合)的免疫球蛋白分子。包含用於合成抗體的抗原的分子和包含為抗體所識別的該抗原的表位的分子可作為與該抗體密切相關的抗原淨皮提及。此外，用於本發明藥物組合物中的抗體可以是抗體片段或經過修飾的抗體，只要其與iASG五FL4基因所編碼的蛋白質結合即可(例如抗RASGEF1A抗體的免疫學活性片段)。舉例來說，抗體片段可以是Fab、F(ab，)2、Fv或單鏈Fv(scFv),其中來自H和L鏈的Fv片段通過合適的接頭連接(HustonJSetal.，ProcNatlAcadSciUSA1988,85:5879-83)。可通過用酶諸如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶處理抗體來產生這樣的抗體片段。或者，可構建編碼抗體片段的基因，將其插入表達載體，並在適宜的宿主細胞中表達(參見例如CoMSetal.,JImmunol1994,152:2968-76;BetterMetal.，MethodsEnzymol1989,178:476-96;PluckthunAetal.,MethodsEnzymol1989,178:497-515;LamoyiE，MethodsEnzymol1986,121:652-63;RousseauxJetal.,MethodsEnzymol1986:121:663-9;BirdREetal.,TrendsBiotechnol1991,9:132-7)。可通過與多種分子偶聯來修飾抗體，諸如聚乙二醇(PEG)。本發明包括這樣的經過修飾的抗體。可通過化學修飾抗體來獲得經過修飾的抗體。上述修飾方法是本領域中常規的。抗體的可變區和來源於人抗體的恆定區的嵌合抗體，或包含來源於非人抗體的互補決定區(CDR)、來源於人抗體的框架區(FR)和恆定區的人源化抗體。可使用已知技術製備上述抗體。可通過用嚙齒類動物的CDR或CDR序列替代人抗體的相應序列來進行人源化(參見如Verhoeyenetal.,Science1988,239:1534-6)。因而，這樣的人源化抗體是嵌合抗體，其中基本上小於完整人可變域已被來自非人物種的相應序列所替代。在人框架區和恆定區外還包含人可變區的完整人抗體也是可以利用的。這樣的抗體可利用本領域已知的各種技術製備。例如，體外方法包括使用在噬菌體上展示的人抗體片段的重組文庫(例如Hoogenboometal.,JMolBiol1992,227:381)。類似的，可通過將人免疫球蛋白基因座引入轉基因動物例如內源免疫球蛋白基因部分或完全滅活的小鼠來製備人抗體。該方法描述於例如美國專利Nos.6，150，584;5,545,807;5,545,806;5,569,825;5,625,126;5,633,425;和5,661,016。當要將所獲得的抗體施用於人體(抗體治療)時，優選人抗體或人源化抗體，因為它們具有降低的免疫原性。可將如上獲得的抗體純化至均質。例如，可根據用於普通蛋白質的分離和純化方法進行抗體的分離和純化。例如，通過適當選擇和組合使用柱層析諸如親和層析、過濾、超濾、鹽析、透析、SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳、等電聚焦等，可以分開和分離抗體(Antibodies:ALaboratoryManual.EdHarlowandDavidLane,ColdSpringHarborLaboratory(1988)),^旦並不局限於此。蛋白A柱和蛋白G柱可以用作親和柱。例示性的可使用的蛋白A柱包括例如HyperD，POROS和SepharoseF.F.(Pharmacia)。除親和層析外，例示性的層析包括例如離子交換層析、疏水層析、凝膠過濾、反相層析、吸附層析等(StrategiesforProteinPurificationandCharacterization:ALaboratoryCourseManual.EdDanielR.Marshaketal.,ColdSpringHarborLaboratoryPress(1996》。可以通過液相層析，諸如HPLC和FPLC進行層析操作。V.用於治療或預防癌症的方法針對癌細胞中發生的特定分子變化的癌症療法已經通過下述抗肺瘤藥物的臨床開發和管理機構的批准被認定為有效諸如用於治療晚期癌症的曲妥單抗(trastuzumab)(Herceptin)、用於治療慢性髓細胞樣白血病的甲磺酸伊馬替尼(imatinibmethylate)(Gleevec)、用於治療非小細胞肺癌(NSCLC)的gefitinib(Iressa)、及用於治療B細胞淋巴瘤和套細胞淋巴瘤的利妥昔單抗(rituximab)(抗CD20mAb)(CiardielloFetal.,ClinCancerRes2001,7:2958-70,Review;SlamonDJetal.,NEnglJMed2001，344:783-92;RehwaldUetal.,Blood2003，101:420-4;FangGetal.,Blood2000,96:2246-53)。這些藥物臨床上是有效的，並且比傳統抗腫瘤劑具有更好的耐受性，因為它們僅僅靶向轉化細胞。因此，這些藥物不僅改善了癌症患者的存活率和生活質量，而且驗證了分子耙向癌症療法的理念。另外，當靶向藥物與標準化療組合使用時，可以增強標準化療的效力(GianniL,Oncology2002,63Suppl1:47-56;KlejmanAetal.,Oncogene2002，21:5868-76)。因此，未來的癌症治療將4艮可能涉及將常規藥物與針對腫瘤細胞不同特性諸如血管發生和侵入的靶特異性藥劑組合。這些調節方法可以離體(exvivo)、體外(例如通過在藥劑的存在下培養細胞)或體內(例如通過給受試者施用藥劑)來進行。所述方法包括施用蛋白質或蛋白質的組合、或者核酸分子或核酸分子的組合，作為抵制差異表達基因的異常表達或其基因產物的異常活性的療法。可以用拮抗(即降低或抑制)過表達基因的活性的治療劑來治療特徵在試者)分別有所升高的疾病和病症。可以治療性或預防性的施用拮抗活性的治療劑。因此，在本發明上下文中可利用的治療劑包括例如(i)過表達的iAS(^FL4基因的多肽或其類似物、衍生物、片段或同系物；(ii)針對過表達的基因或基因產物的抗體；(iii)編碼過表達的基因的核酸；(iv)"功能不良的"(即由於過表達基因的核酸中的異源插入所致)的反義核酸或核酸；(v)小幹擾RNA(siRNA);或(vi)調節劑(即改變過表達的多肽與其結合配偶體之間相互作用的抑制劑、拮抗劑)。功能不良的反義分子通過同源重組被用於"敲除"多肽的內源功能(參見例如Capecchi,Science1989,244:1288-92)。通過獲:f又患者組織樣品(例如^Mv活^r組織)並在體外測定其RNA或肽水平、所表達的肽(或表達有所改變的基因的mRNA)的結構和/或活性，定量肽和/或RNA,從而可以容易的檢測出水平的升高。本領域中眾所周知的方法包括但不限於免疫測定法(例如Western印跡分析、免疫沉澱接著十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯醯胺凝膠電泳、免疫細胞化學等)和/或用於檢測mRNA表達的雜交測定法(例如Northern印跡測定法、斑點印跡、原位雜交等)。在疾病的明顯臨床症狀出現之前進行預防性給藥，卩吏得疾病或病症得以預防或延遲其發展。本發明的治療方法可包括將細胞與調節RASGEF1A基因產物的一種或多種活性的藥劑接觸的步驟。調節蛋白質活性的藥劑的例子包括但不限於核酸、蛋白質、上述蛋白質的天然存在關聯配體、肽、肽模擬物和其他小分子。因此，本發明提供了通過降Jto4SG^FL4基因的表達或該基因產物的活性在受試者中治療或緩解癌症症狀、或預防癌症的方法。本發明的方法特別適用於治療或預防ICC、膀胱癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、前列腺癌、慢性髓細胞樣白血病、腎癌、軟組織肉瘤、胰腺癌和精原細胞瘤。可預防性或治療性施用適合的治療劑給患有癌症或有風險發生癌症(或懷疑發生癌症)的受試者。可通過使用標準臨床方法或通過^r測iASG五^M基因的異常表達水平("上調"或"it^達")或該基因產物的異常活性來鑑定這樣的受試者。根據本發明的一方面，通過本發明方法篩選的藥劑可用於治療或預防癌症。可使用本領域技術人員眾所周知的方法將這些藥劑施用給患者，例如，動脈內、靜脈內或經皮注射或鼻內、經支氣管、肌內或口服給藥。如果所述藥劑為DNA所能編碼的，則可將DNA插入用於基因療法的載體，並施用該載體給患者以實施該療法。根據待治療患者的體重、年齡、性別、症狀、狀況及給藥方法改變給藥劑量和方法；然而，本領域技術人員可常規選擇合適的劑量和給藥方法。例如，儘管與RASGEF1A多肽結合併調節該多肽活性的藥劑的劑量取決於上述多種因素，當正常體重成年人(60kg)口服給藥時，該劑量通常為約0.1mg到約100mg每天、優選約1.0mg到約50mg每天、更優選約1.0mg到約20mg每天。當以注射劑形式向正常體重成年人(60kg)腸胃外給藥時，儘管根據患者、靶器官、症狀和給藥方法存在一些差異，但靜脈內注射約0.01mg到約30mg每天、優選約0.1mg到約20mg每天、更優選約0.1mg到約10mg每天的劑量是合適的。在其它動物的情況下，可通過轉換為60kg體重常規計算出合適的劑量。類似的，本發明的藥物組合物可用於治療或預防癌症。可使用本領域技術人員眾所周知的方法將所述組合物施用於患者，例如動脈內、靜脈內或經皮注射或鼻內、經支氣管、肌內或口服給藥。對於前述每一種情況，可以約0.1-約250mg/kg每天的劑量範圍口服或通過注射來施用所述組合物，例如多肽和有機化合物。成人的劑量範圍通常為約5mg到約17.5g/天、優選約5mg到約10g/天、最優選約100mg到約3g/天。片劑或其它以離散單元提供的單位劑量形式可方便的含有以這樣的劑量或者作為多個這樣的劑量有效的量，例如含有約5mg到約500mg、通常為約100mg到約500mg。所用劑量依賴於多種因素，包括受試者的年齡、體重和性別，所治療的確切疾患及其嚴重程度。此外，給藥途徑也隨疾患及其嚴重程度而變化。然而無論怎樣，本領域技術人員都能在考慮上述因素的基礎上常規計算出合適的和最佳的劑量。具體來說，可通過將針對i^SG^FL4基因的反義核酸直接施用於病痛部位或注射入血管中〗吏之到達病痛部位，/人而施用於患者。根據患者狀況，本發明的反義核酸衍生物的劑量可作適當調節並以所需量使用。例如，可施用0.1-100mg/kg、優選0.1-50mg/kg的劑量範圍。VI.針對癌症的疫苗接種本發明涉及一種用於治療或預防受試者中癌症的方法，包括施用包含i^5"G^FL4基因編碼的多肽(即RAS多肽)、所述多肽的免疫學活性片段、或編碼上述多肽或其片段的多核苷酸的疫苗於所述受試者的步驟。在本發明中，針對癌症的疫苗指有能力在接種到動物中後誘導抗腫瘤免疫力的物質。在受試者中施用這樣的疫苗誘導了抗腫瘤免疫力。根據本發明，表位肽，其可誘導針對表達iL4SG^FL4基因的癌細胞有力且特異性的免疫應答。因此，本發明還涉及一種通過施用包含WSG^^L4基因編碼的多肽(即RAS多肽)、所述多肽的免疫學活性片段、或編碼上述多肽或其片段的多核苦酸的疫苗於有所需要的受試者，用於在所述受試者中誘導抗腫瘤免疫力的方法。這些方法特別適用於治療或預防ICC、膀胱癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、前列腺癌、慢性髓細胞樣白血病、腎癌、軟組織肉瘤、胰腺癌和精原細胞瘤。在有些情況下，RASGEF1A蛋白或其免疫學活性片段可以結合至T細胞受體(TCR)或由APC諸如巨噬細胞、樹突細胞(DC)、B細胞或PBMC呈遞的形式施用。由於DC的強抗原呈遞能力，因此在APC中最優選使用DC。一般而言，抗腫瘤免疫力包括諸如以下的免疫應答-誘導針對腫瘤的細胞毒性淋巴細胞，-誘導識別肺瘤的抗體，和-誘導抗腫瘤細胞因子的產生。因此，當某種蛋白質接種動物後誘導任一種這些免疫應答時，確定該蛋白質具有抗腫瘤免疫力誘導效果。RASGEF1A多肽的任何蛋白質片段都可用作本發明方法的免疫學活性片段。可通過在體內或體外觀察宿主免疫系統針對該蛋白質的應答來檢測蛋白質對抗腫瘤免疫力的誘導。例如，一種用於檢測CTL誘導的方法是眾所周知的。具體來說，進入活體的外來物質通過APC的作用而被呈遞於T細胞和B細胞。以抗原特異性方式應答於APC所呈遞抗原的T細胞由於該抗原的刺激而分化為CTL，然後增殖(這稱為T細胞活化)。因此，某種肽的CTL誘導可以通過將該肽經由APC呈遞於T細胞並檢測CTL的誘導來進行評估。此外，APC具有激活CD4+T細胞、CD8+T細胞、巨喧細胞、嗜曙紅細胞和NK細胞的功效。由於CD4+T細胞和CD8+T細胞在抗腫瘤免疫力中也是重要的，可使用這些細胞的激活效應作為指標來評估肽的抗腫瘤免疫力誘導作用。的。在APC中，DC是具有最強CTL誘導作用的代表性APC。為確定RASGEF1A多肽的片段是否有免疫學活性，且是否可用於本發明的方法，首先將受試多肽(即RASGEF1A多肽的任何片段)與DC接觸，然後將DC與T細胞接觸。在與DC接觸後，如果檢測出具有針對目標細胞的細胞毒性作用的T細胞，則表示該受試多肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。CTL針對腫瘤的活性可例如採用"Cr標記的腫瘤細胞的溶解作為指標來進行檢測。或者，採用311-胸苷攝取活性或LDH(乳糖脫氫酶)釋放作為指標來評估腫瘤細胞損傷程度的方法也是眾所周知的。除DC外，PBMC也可用作APC。已才艮道通過在存在GM-CSF和IL-4的情況下培養PBMC來增強CTL的誘導。類似的，已顯示通過在存在鑰孔i戚血藍蛋白(KLH)和IL-7的條件下培養PBMC來誘導CTL。一可以認為通過這些方法證實具有CTL誘導活性的受試多肽是具有DC激活效應和隨後的CTL誘導活性的多肽。因此，能誘導針對肺瘤細胞的CTL的多肽可用作針對腫瘤的疫苗。此外，通過與所述多肽接觸而獲得誘導針對腫瘤的CTL的能力的APC也可用作針對腫瘤的疫苗。此外，通過APC呈遞多肽抗原而獲得細胞毒性的CTL也可用作針對腫瘤的疫苗。利用由APC和CTL產生的抗腫瘤免疫力的這些腫瘤治療方法稱為細胞免疫療法。一般而言，當使用多肽用於細胞免疫療法時，已知通過組合多種具有不同結構的多肽並使其與DC接觸來提高CTL誘導的效率。因此，當用蛋白質片段刺激DC時，使用多種類型的片段的混合物是有利的。或者，多肽對針對肺瘤的免疫力的誘導可以通過觀察針對胂瘤的抗體產生的誘導來進行確認。例如，當用多肽免疫的試驗動物中誘導產生針對該多肽的抗體時，並且當這些抗體抑制腫瘤細胞生長時，所述多肽可一見為具有誘導抗腫瘤免疫力的能力。通過施用本發明的疫苗"i秀導了抗肺瘤免疫力，而該抗腫瘤免疫力的"^秀導使癌症的治療及預防得以可能。針對癌症的治療或對癌症發作的預防可以包括任何下述步驟諸如癌細胞生長的抑制，癌症的退化(involution)、及癌發生的抑制。癌症的治療或預防還包括患有癌症的個體死亡率和發病率降低、血液中腫瘤標誌物水平降低、癌症伴發的可檢測症狀的緩解等。上述治療性和預防性效果優選是統計學上顯著的。例如，在觀察中顯著性水平為5%或的對照進行比較。例如，可將Student氏t檢驗、Mann-WhitneyU檢驗或ANOVA用於統計分析。與佐劑組合。佐劑指當與多肽或具有免疫學活性的片段共同(或相繼)施用時能增強針對RASGEF1A多肽的免疫應答的化合物。例示性的佐劑包括但不限於霍亂毒素、沙門氏菌毒素、明礬等。此外，本發明的疫苗可適宜的與藥學上可接受的載體組合。這樣的載體的例子包括無菌水、生理鹽水、磷酸鹽緩沖液、培養液等。此外，疫苗可根據需要包含穩定劑、懸浮劑、防腐劑、表面活性劑等。疫苗可系統或局部施用。疫苗施用可以通過單次給藥進行，或者通過多次給藥來強化。當使用APC或CTL作為本發明的疫苗時，可例如通過離體方法來治療或預防腫瘤。更具體的，可以收集接受治療或預防的受試者的PBMC,使細胞與RASGEF1A多肽或其片段在離體條件下接觸，並在誘導APC或CTL後，將該細胞施用於受試者。也可通過將編碼多肽的載體在離體條件下導入PBMC來誘導APC。體外誘導的APC或CTL可以在施用前進行克隆。通過克隆和培養具有高靶細胞破壞活性的細胞，可以更有效的實施細胞免疫療法。此外，以該方式分離的APC和CTL不僅可以用於針對提供細胞的受試者進行細胞免疫療法，還可以用於針對來自其它個體的相似類型的腫瘤進行細胞免疫治法。此外，提供了用於治療或預防細胞增殖性疾病諸如癌症的藥物組合物，其包含藥學上有效量的RASGEF1A多肽或其免疫學活性片段。這樣的藥物組合物可用於產生抗腫瘤免疫力。在下文中，參照實施例，本發明將得到更詳細的描述。然而，下列材料、方法和實施例僅在舉例說明本發明的各方面，決不意在限制本發明的範圍。因此，與本文所述類似或相當的方法和材料可用於本發明的實踐或測試。實施例I.材料和方法1.細胞系和組織標本猴腎細胞系COS7和小鼠成纖維細胞糹田胞系MH3T3從美國典型培養物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,ATCC)處獲得。人膽管癌細胞系SSP25,人日本研究生物資源收藏中心(JapaneseCollectionofResearchBioresources，JCRB)處獲得。所有細胞在如下合適培養基中作為細胞單層培養用於COS7和NIH3T3的Dullbecco氏改良Eagle氏培養基(Sigma-AldrichCorporation,St.Louis,MO);及用於SSP25的RPMI1640(Sigma-AldrichCorporation,St.Louis,MO)。臨床組織得自徵得同意的、接受肝切除術的患者的手術標本。2.RNA製備和半定量RT-PCR本發明人使用雷射微束顯微解剖技術來收集來自手術標本的膽管癌細胞以及非癌性膽管上皮細胞的純細胞群。如前所述進行切片製備、雷射微束顯孩t解剖、總RNA提耳又、基於T7的擴增(NakamuraTeta1.,Oncogene2004,23:2385-400)。製備來自IO位無ICC患者肝組織的正常肝內膽管上皮細胞的混合物作為通用對照。根據廠商方案，利用TRIZOL試劑(Invitrogen)從培養細胞中提取總RNA。使用SuperscriptII逆轉錄酶(LifeTechnologies),利用聚(1丁12-18虧1物(AmershamBiosciences)將所提取的RNA逆轉錄為單鏈cDNA。將每份單鏈cDNA稀釋用於之後的PCR擴增。在GeneAmpPCR系統9700(Perkin-Elmer)中，於12pl體積的PCR緩沖液(TAKARA)中進行標準的RT-PCR以擴增，即94。C變性4分鐘，之後進行25個(對於爿CrB)或30個(對於WSG^FL4)循環94。C持續20秒，53°C(對於^CT^)或60。C(對於iL4SG^FL4)持續30秒，72°C持續30秒。引物序列如下；用於爿C7S的5'-CAAGATGAGATTGGCATGG畫3'(SEQIDNO:3)和5'畫TCTCCTTAGAGAGAAGTGG-3'(SEQIDNO:4);及用於/L4SG五FL4的5'-TTTGCACTTTCTGAGGTTCTAGC-3'(SEQIDNO:5)和5'-GTCCTGCATTATGGTACAGCTTC-3'(SEQIDNO:6)。3.Northern印跡分析將人多組織RNA印跡(Clontech)與"P標記的WSG^i^McDNA進行雜交。依據廠商建議進行預雜交、雜交和洗滌。用增光屏在-80。C對印跡放射自顯影120小時。4.RASGEF1A的亞細胞定位通過RT-PCR擴增RASGEF1A的完整編碼區(Genbank登記號AK095136(SEQIDNO:1),編碼SEQIDNO:2的胺基酸序歹'J)，使用如下一組引物5'-ATTGAATTCCGGCCAGAATGTTCCTGGAGC-3'(SEQIDNO:7)和5'-AATCTCGAGGGCTCTGTTCAGAAGGGTGGTC-3'(SEQIDNO:8),並將其克隆入pCAGGS-n3Fc載體的適宜酶位點(pCAGGS-n3Fc-RASGEFlA)。腔式載玻片上。轉染後24小時，在室溫用含4。/。低聚曱醛的PBS固定培養細胞15分鐘，然後用含0.1%TritonX-100的PBS處理2.5分鐘使細胞具有可滲透性。在4。C用含3。/。BSA的PBS覆蓋細胞24小時以封閉非特異性雜交，然後與作為第一抗體的抗FLAG抗體(SIGMAF-3165)溫育。用偶聯有底物的抗小鼠IgG第二抗體(ICN/CappelandJacksonImmunoResearch)對抗體進4亍螢光染色。用4',6-二脒基-2-苯吲咮二鹽酸(DAPI)對細胞核進行復染。使用TCS-SP2光譜共焦掃描系統(Leica)獲得萸光圖像。5.集落形成測定法用表達iASG五FL4的質粒(pCAGGS-n3Fc-RASGEFlA)轉染COS7細胞。將表達反義i^45U五F^(pCAGGS-n3Fc-RASGEFlA(-))或模擬質粒(pCAGGS-n3Fc-Mock)的細胞與適宜濃度的遺傳黴素溫育14天。用100%曱醇固定細胞並用吉姆薩溶液染色。根據廠商的方案，使用細胞計數試劑盒(DOJINDO，kumamoto,Japan)分析細胞存活力，一式三份。6.構建針對i^SG五FL4的siRNA表達載體通過將雙鏈寡核苦酸克隆入前述psiHlBX3.0載體的BbsI位點來製備表達siRNA的質粒(ShimokawaTetal.，CancerRes2003，63:6116-20)。配對的寡核苷酸的序列如下用於siRNA-B的TTCTC-3，,(SEQIDNO:10)和TTCTC-3，(SEQIDNO:11);用於siRNA國E的GATG-3，(SEQIDNO:14),和GATG-3，(SEQIDNO:15);及用於siRNA-EGFP的GCTTC-3，(SEQIDNO:18)和GCTTC-3，(SEQIDNO:19)。在用T4多核苷酸激酶磷酸化後，煮沸配對的寡核苷酸5分鐘，隨後通過緩慢冷卻而退火產生雙鏈寡核苷酸。轉染後24小時，通過半定量RT-PCR檢查iASG五FL4的表達。用於本發明的siRNA序列如下所示。表ltableseeoriginaldocumentpage46tableseeoriginaldocumentpage477.細月包存活力測定法使用Nucleofector(AMAXA)或FuGENE6試劑(RocheDiagnostics),用表達siRNA的質粒轉染在10cm平皿上培養的SSP25細胞(lxl(^個細胞/平皿)。在補充有0.9mg/ml遺傳黴素的含10%胎牛血清的培養基中維持轉染細胞兩周。用100%曱醇固定存活的細胞並用吉姆薩溶液染色。在另一試驗中，用細胞計數試劑盒(DOJINDO,Kumamoto,Japan)測量存活的細胞。為分析對RASGEF1A表達的效果，轉染後24小時從細胞提取總RNA並進行半定量RT-PCR分析。8.Ras核香酸解離測定法將K-Ras(胺基酸1-188)、Ha-Ras(胺基酸1-188)、N-RAS(胺基酸1-189)、RASGEFlA或Sos催化域(胺基酸564-1049)的完整編碼區克隆入pGEX-6P細菌表達載體(AmershamPharmaciaBiotech)的適宜克隆位點(BamHI和Xhol)。在大腸桿菌BL21菌抹中表達GST融合蛋白，根據廠商的方案，使用穀胱甘肽-Sepharose4B樹脂(AmershamPharmaciaBiotech)乂人全細胞裂解液中純化重組蛋白。如另文所述進4亍Ras核苷酸解離測定法(Ha11BEetal.,JBiolChem2001，276:27629-37)。通過在加熱搖床上，將處於含20mMTris(pH8.0)、50mMNaCl、lmg/ml牛血清清蛋白(BSA)、lmM二硫蘇糖醇和lmMEDTA的100ml緩沖液中的40pmo1Ras與400pmo1[8-3H]標記的GDP(12.4Ci/mmol;AmershamBiosciences)在30。C溫育15分鐘，使GST-Ras融合蛋白與[8-311]標記的鳥香5，-二磷酸(GDP)結合。然後在30。C將20ml混合物與含有或不含重組RASGEFlA的20ml緩衝液進一步溫育15分鐘，所述緩衝液含20mMTris(pH8.0)、50mMNaCl、1mg/mlBSA、lmM二碌u蘇糖醇、5mMMgCl2和0,8mMGTPgS。以Sos催化域作為陽性對照。通過添加40ml冰冷的終止液(20mMTris(pH8.0)、50mMNaCl和15mMMgCl2)來終止反應，並將混合物點在P81磷酸纖維素方片(square)(Upstate;目錄#20-134)上。用3ml水冷的終止液洗滌兩次，將濾膜裝到AlokaLSC-5100液體閃爍計數器上以測量結合至Ras的卩H]-GDP的放射性。9.Ras活性的分析根據廠商的方案，利用Ras激活測定試劑盒(Upstate，目錄#17-218批次#26220)，通過Raf-l"下拉"測定法來測量Ras的激活。具體來說，製備偶聯有GST融合蛋白的瓊脂糖珠，該GST融合蛋白含有Raf-l的RBD，並在4。C與來自轉染有表達RASGEF1A的質粒或對照質粒(模擬物)的COS7細胞的裂解物溫育45分鐘。沉澱結合至Raf-l的蛋白質，並在SDS-PAGE上分離，隨後4吏用抗泛Ras抗體(Upstate)通過Western印跡進4亍分析。10.傷口癒合和Matrigel侵入測定法通過RT-PCR擴增RASGEF1A(GenBank登記號AK095136)的完整編碼區，4吏用一組引物5'-ATTGAATTCCGGCCAGAATGTTCCTGGAGC畫3'(SEQIDNO:7)和5'畫AATCTCGAGGGCTCTGTTCAGAAGGGTGGTC-3'(SEQIDNO;8)，然後將其克隆入pCAGGS-n3Fc載體的適宜酶位點(pCAGGS畫n3Fc-RASGEFlA)。通過用pCAGGS-n3Fc-RASGEFlA或pCAGGS-Mock質粒轉染COS7細胞，建立表達RASGEF1A的COS7細胞(COS7-RASGEF1A)和對照細胞(COS7-Mock)。將細胞維持在補充有0.9mg/ml遺傳黴素的培養基中，轉染後兩周選擇單個集落。使用抗FLAG抗體通過Western印跡證實RASGEFlA的表達。根據廠商的方案，使用細胞計數試劑盒(DOJINDO,Kumamoto，Japan)分析細胞生長，一式三份。對於傷口癒合遷移測定法，在6孔板中培養細胞2天至匯合，並用塑料移液管尖端在匯合的單層細胞上以十字方式進行刮擦。數個創面被標記方向，在刮擦後於指定時間觀察並接著通過相差顯微術(phase-contactmicroscopy)照相。使用具有8jim孔隙的BDBioCoatMatrigelT^M曼入室(BDBiosciences,SanJose，CA)牙企48查細胞侵入。溫育36小時後，在顯微鏡下於5個獨立視野中對穿過該室遷移的COS7-RASGEFlA和COS7-Mock細胞的數目進行計數。統計分析，通過Student氏t檢驗測定統計學顯著性。II.結果1.i^SG五F^在多種人癌症中的表達升高使用含有27,648個基因的基因組廣度cDNA微陣列，本發明人分析了25例ICC的表達序型，並鑑定了52個在腫瘤中其表達頻繁上調通過所設定的截止濾器的基因。在這52個基因之外，還發現一種內部登記號為D4223、對應於國立生物4支術信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation)Unigene資料庫(Build弁183)中Hs.125293的EST的基因，它在14例通過所設定的截止濾器的ICC的11例(78.6%)中與正常肝內膽管上皮細胞相比超過兩倍的顯著上調。在本發明人所獲得的微陣列數據中，與相應的非癌性對照相比，D4223表達在9例膀胱癌的8例(88.9%)、26例肺癌的16例(61.5°/。)、5例胃癌的4例(80%)、5例結腸直腸癌的3例(60%)、3例前列腺癌的1例(33.3%)、44例慢性髓細胞樣白血病的8例(18.2%)、所有5例腎癌(100%)、所有5例軟組織肉瘤(100%)、所有3例胰腺癌(100%)及所有3例精原細胞瘤(100%)中也升高了超過兩倍。之後的半定量RT-PCR分析揭示了在進行微陣列分析的13例ICC的9例中D4223表達升高(圖1A)。為評估D4223在人正常成人組織中的表達水平，本發明人使用D4223cDNA作為探針進行了多組織Northern印跡分析，並鑑定出一大約3.3kb的轉錄物，其在腦、脊髓中中度表達，在淋巴結、腎上腺中弱表達，但在所檢查的其它19個組織中沒有任何表達(圖1B)。該基因稍後被命名為iL4SG^FL4，因為其含有RAS-GEF結構域。使用推斷的RASGEF1A胺基酸序列進行的同源性搜索顯示出其與PDZ-GEF2具有30。/o的同一性，與PDZ-GEFl具有29。/。的同一性。2.RASGEF1A的亞細胞定位為調查RASGEF1A的亞細胞定位，本發明人在NIH3T3細胞中通過質粒並進行了免疫細胞化學染色。該免疫細胞化學染色揭示了RASGEF1A蛋白定位於轉染細胞的細胞質中(圖2A)。3.RASGEF1A與ICC細胞生長的關係進行集落形成測定法以檢查RASGEF1A在COS7細胞中的致癌活性。結果是，與使用對照質粒pCAGGS-n3Fc-Mock或pCAGGS-n3Fc-RASGEF1A(-)的轉染相比，在細胞用表ii^SG五屍L4的質粒(pCAGGS-n3Fc-RASGEFlA)轉染時所觀察到的集落數顯著增加(圖3A和3B)。為進一步評估其在細胞生長中的潛在作用，製備表達RASGEFlA特異性siRNA及新黴素抗性基因的質粒psiHlBX-RASGEFlA-siB和psiHlBX-RASGEFlA-s正。用任一上述質粒或用對照質粒(psiHlBX-s正GFP、psiHlBX-Mock)轉染SSP25ICC細胞。半定量RT-PCR顯示了與對照質粒的轉染相比，7L^G五FW表達受psiRNA-BX-RASGEFlA-siB和psiHlBX-RASGEFlA-siE轉染的抑制(圖3C)。特別是，與用對照質粒轉染的細胞相比，用siRNA-B和siRNA-E抑制的轉染細胞具有明顯的生長遲滯(圖3D)。這些數據表明iL4SG^FL4的表達對於ICC細胞的生長和/或存活至關重要。4.RASGEFlA的Ras核香酸解離活性由於RASEGFlA含有推定的RasGEF結構域，因此研究其GDP解離活性。隨後添加含有或不含重組RASGEF1A蛋白的反應混合物，並用閃爍計數器測量結合有GDP的RAS。SOS(—種已知的RASGEF蛋白)用作陽性對照。SOS減少GDP結合型K-RAS約40。/。。類似的，RASGEF1A減少GDP結合型K-RAS約50。/o(圖4A,左上部)。其還分別解離了約40。/。和80。/。的結合至H-RAS和N-RAS的GDP(圖4A,右上部和下部)。這些數據表明RASEGF1A對於所有三種被檢查的RAS蛋白都顯示出GDP解離活性。5.RASGEF1A對RAS的激活由於RASGEF1A含有推定的RASGEF結構域，因此進一步研究RASGEF1A是否具有刺激RAS的活性。使用表達外源RASGEF1A的COS7細胞和對照細胞測量該活性。使用抗FLAG抗體對用pxFLAG-RASGEFlA質粒轉染的細胞的提取物進行的免疫印跡分析證實了轉染細胞中的外源RASGEF1A表達(圖4B,左上部)。對細胞提取物或對照細胞提取物進行重組Raf-l(—種RAS的效應物)的"下拉"測定法。結果是，與RASGEF1A表達相一致的是使用抗泛Ras抗體通過免疫印跡分析測量的與Raf-1的RBD相互作用的Ras的量增加了(圖4B,右上部)，表明RASGEF1A增強了RAS的活性。6.RASGEF1A對癌細胞遷移的作用已報導RAS家族蛋白質在細胞遷移及細胞生長中起重要作用。因此，研究RASGEF1A與癌細胞遷移和侵入的關係。建立表達外源RASGEF1A的C0S7-RASGEF1A細胞和對照細胞(COS7-Mock)用於傷口癒合測定法。如圖5A所示，C0S7-RASGEF1A細^^夬速遷移並充滿傷口，明顯快於COS7-Mock細胞，暗示RASGEF1A涉及細胞遷移。此外，為調查RASGEF1A對侵入的作用，使用Matrigel進行穿孔(transwell)測定法。與傷口癒合測定法的結果相一致，與COS7-Mock細胞相比穿過侵入室孔隙的COS7-RASGEF1A細胞的數目增力口(圖5B)。由於這兩種細胞具有相似的增殖速率，因此這些數據說明RASGEF1A涉及細胞遷移。III.結果討論本發明人在此證明了RASGEF1A在人ICC中升高的表達及其對K-RAS、H-RAS和N-RAS的鳥嘌呤核苷酸交換活性，暗示其升高的表達在ICC的癌發生中起相當重要的作用。迄今為止，已報導了屬於Ras-GEF家族的大約20個成員，它們享有具有5個結構保守區的核心催化域(BoguskiMS&McComickF,Nature1993,366:643-54;RebhunJFetal.，JBiolChem2000,275:13406-10)。像其它Ras-GEF成員一樣，RASGEF1A含有這5個保守區。此外，其在密碼子49與178之間具有REM(Ras交換基序)或RasGEFN結構域，被認為能穩定打開GTP結合口袋的大螺旋髮夾結構。然而，由於RASGEF1A缺少任何別的保守域，諸如Dbl同源(DH)域、普列克底物蛋白(pleckstrin)同源(PH)域、EF手、富含半胱氨酸的C1域及PDZ域，其可能發揮著與其它成員諸如SOS、GRF1、RasGRP或PDZ-GEF所不同的功能(QuilliamLAetal.,ProgressinNucleicAcidResearchandMolecularBiology2002，71:391-444)。在本發明中，揭示了RASGEF1A具有對K-RAS、H-RAS和N-RAS的鳥噪呤核苷酸交換活性。其它Ras-GEF成員具有不同的底物譜；例如，SOSl調節K-RAS、H-RAS、N-RAS、R-RAS2、R-RAS3和Racl，但不調節R-RAS;Ras-GRP2刺激K-RAS、H-RAS、N-RAS、R-RAS、R-RAS2、RaplA、Rap2A，但不刺激H-RAS(MitinNetal.，CurrentBiology2005，15:R563-74)。因此，RASGEF1A還可能特異性激活本發明研究中沒有調查的底物，並且可能涉及Ras-信號傳導途徑的串擾(crosstalk)。近來研究表明Ras信號傳導不但與細胞增殖和存活有關，還與細胞運動和細胞黏著有關。有活性的Ras與多種下遊效應物相互作用並調節它們，所述下遊效應物刺激包括Raf/MEK/ERK和磷酸肌醇3激酶(PI3K)/Akt、RalGDS/Ral和Tiaml/Racl途徑在內的不同的信號傳導途徑。日益積累的證據表明Raf/MEK/ERK與Ras介導的細胞增殖有關。Raf結合測定法證明在RASGEF1A存在時激活的RAS增加，並因此認為在表達RASGEF1A的細胞中下遊RaCGMEK/ERK增強。相一致的是，通過導入特異性siRNA抑制RASGEF1A,降低了ICC細胞的生長，這與增強的RAF/MEK/ERK信號傳導賦予癌細胞生長促進效果的觀點是一致的。在使用COS7和NIH3T3成纖維細胞來測試RASGEF1A致癌活性的集落形成測定法中，在表達外源RASGEF1A的細胞和對照之間集落數目沒有改變。因此，很可能單獨導入RASGEF1A不足以引起COS7或NIH3T3成纖維細胞的轉化。然而，RASGEF1A的致癌活性被認為是組織和/或細胞類型依賴性的，並且siRNA試驗表明RASGEFlA對維持ICC的細胞生長或增殖是必不可少的。因此，對其鳥。票呤核香酸交換活性的抑制可能成為有希望的ICC治療選擇。在其生長促進作用之外，已報導Ras通過不同機制在細胞運動中起一定作用。增強的PI3激酶活性導致增加的乳腺癌細胞侵入，其以Racl依賴性方式通過P4整聯蛋白介導。PI3K也激活RacGEF,並誘導肌動蛋白改組和膜起皺，它們與細胞運動有關。此外，Ras增強了Tiaml,產生與遷移和肌動蛋白-細胞骨架有關的激活型Racl。在成纖維細胞中，H-RAS的激活抑制了整聯蛋白(在細胞外基質粘附中起重要作用的細胞表面受體)的活性(PaulEHetal.,MolBiolCell2002,13:2256-65;SechlerJLetal.，JCellSci2000,113:1491-8)。根據本發明，發現RASGEF1A激活RAS蛋白，以及在Matrigel測定法中RASGEFlA的外源表達增強細胞運動。儘管需要進一步的研究來闡明通過RASGEF1A增加運動性的機制，但提出RASGEF1A通過激活PI3K或Tiaml增強細胞運動。本發明人進一步研究了K-Ras突變狀態與RASGEF1A表達水平之間的關係，但沒有發現它們之間存在任何關係(數據未顯示)。因為在K-Ras之外，升高的RASGEF1A表達還激活了H-Ras和N-Ras，因此與K-Ras中的突變相比，在ICC的癌發生中RASGEF1A的積累可能具有別的作用。由於通過siRNA抑制RASGEF1A導致對癌細胞的抑制，因此RASGEF1A可能是一種有希望的ICC治療耙。工業實用性在此描述的利用雷射捕捉解剖與基因組廣度cDNA微陣列的組合進行的癌症基因表達分析已鑑定出作為靶用於癌症預防和治療的特定基因。根據這些差異表達基因子集的表達，本發明提供了用於鑑定和檢測癌症的分子診斷標誌物。本文所述方法還可用於鑑定預防、診斷和治療癌症的別的分子靶。本文所提供的數據增加了對癌症的全面了解，促進了新診斷策略的開發，並提供了鑑定治療性藥物和預防性藥劑的分子靶的線索。這些信息有助於更深刻的了解腫瘤發生，並提供了開發用於診斷、治療和最終預防癌症的新策略的指標。完整收入本文中所引用的所有專利、專利申請和出版物作為參考。此外，儘管本發明已經參考具體實施方案進行了詳細描述，應當了解，上文描述本質上是例示性和解釋性的，意圖例示本發明及其優選實施方案。通過常規實驗，本領域技術人員將容易的認識到可以在不背離本發明的精神和範圍的前提下對本發明進行多種改變和修飾。如此，本發明意圖以所附權利要求及其等同方案來進行限定，而非上文描述。權利要求1.一種用於診斷受試者中的癌症或發生癌症的傾向性的方法，其包括以下步驟在來源於受試者的生物學樣品中測定RASGEF1A基因的表達水平，其中所述表達水平與所述基因正常對照水平相比的升高表明所述受試者患有癌症或有風險發生癌症。2.權利要求l的方法，其中所述表達水平比正常對照水平高至少10%。3.權利要求l的方法，其中通過選自下組的任何一種方法來測定所述表達水平(a)檢測RASGEF1A基因的mRNA;(b)檢測RASGEF1A基因編碼的蛋白質；和(c)檢測RASGEF1A基因編碼的蛋白質的生物學活性。4.權利要求l的方法，其中所述來源於受試者的生物學樣品包含上皮細胞。5.權利要求l的方法，其中所述來源於受試者的生物學樣品包含癌細胞。6.權利要求l的方法，其中所述來源於受試者的生物學樣品包含癌性上皮細胞。7.權利要求l的方法，其中所述癌症選自ICC、膀胱癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、前列腺癌、慢性髓細胞樣白血病、腎癌、軟組織肉瘤、胰腺癌和姊青原細胞瘤。8.—種試劑盒，其包含能與i^SG五FL4基因的轉錄或翻譯產物結合的檢測試劑。9.一種篩選用於治療或預防癌症的藥劑的方法，其包括以下步驟a)將受試藥劑與RASGEF1A多肽或其片段接觸；b)檢測所述多肽與所述受試藥劑之間的結合；並c)選擇與所述多肽結合的受試藥劑。10.—種篩選用於治療或預防癌症的藥劑的方法，其包括以下步驟a)將受試藥劑與RASGEF1A多肽或其片段接觸；b);險測所述多肽的生物學活性；並c)選擇與不存在受試藥劑的條件下檢測到的生物學活性相比抑制所述多肽的生物學活性的受試藥劑。11.一種篩選用於治療或預防癌症的藥劑的方法，其包括以下步驟(a)在存在受試藥劑的條件下，將RASGEF1A多肽或其片段與RAS接觸；(b)檢測RAS活性；並(c)選擇與不存在受試藥劑的條件下檢測到的RAS活性相比降低RAS活性的受試藥劑。12.—種篩選用於治療或預防癌症的藥劑的方法，其包括以下步驟a)將受試藥劑與表達i^4SG五FL4基因的細胞接觸；b)檢測iJASG^FL4基因的表達水平；並c)選擇與不存在受試藥劑的條件下檢測到的表達水平相比降低所述基因的表達水平的受試藥劑。13.權利要求12的方法，其中所述細胞來源於ICC、膀胱癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、前列腺癌、慢性髓細胞樣白血病、腎癌、軟組織肉瘤、胰腺癌或精原細胞瘤。14.一種篩選用於治療或預防癌症的藥劑的方法，其包括以下步驟a)將受試藥劑與其中已導入載體的細胞接觸，所述載體包含iAS^五FL4基因的轉錄調節區和在該轉錄調節區控制之下表達的報導基因；b)測量所述報導基因的表達或活性；並c)選擇與不存在受試藥劑的條件下檢測到的表達或活性相比降低所述報導基因的表達或活性的受試藥劑。15.權利要求9-14任一項的方法，其中所述癌症選自ICC、膀胱癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、前列腺癌、慢性髓細胞樣白血病、腎癌、軟組織肉瘤、胰腺癌和精原細胞瘤。16.—種用於治療或預防癌症的組合物，其包含作為活性成分的藥學上有效量的通過權利要求9-15任一項的方法選擇的藥劑，和藥學上可接受的載體。17.—種用於治療或預防癌症的組合物，其包含藥學上有效量的針對iASG五FL4基因編碼的多核苷酸的反義多核苷酸或siRNA。18.權利要求17的組合物，其中所述siRNA包含含有SEQIDNO:9或13的核苷酸序列的W5"C^屍L4基因的有義鏈。19.權利要求18的組合物，其中所述siRNA具有通式5，-[A]-[BHA，]-3，，其中[A]是對應於SEQIDNO:9或13的序列的核糖核苷S吏序列，[B]是由3-23個核苷酸組成的核糖核苷酸環序列，而[A，]是與[A]互補的核糖核苷酸序列。20.—種用於治療或預防癌症的組合物，其包含藥學上有效量的能與RASGEF1A多肽結合的抗體或其片段。21.權利要求16-20任一項的組合物，其中所述癌症選自ICC、膀胱癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、前列腺癌、慢性髓細胞樣白血病、腎癌、軟組織肉瘤、胰腺癌和精原細胞瘤。22.—種用於治療或預防受試者中癌症的方法，其包括對受試者施用通過權利要求9-15任一項的方法獲得的藥劑的步驟。23.—種用於治療或預防受試者中癌症的方法，其包括對受試者施用權利要求16-20任一項的組合物的步驟。24.—種用於治療或預防受試者中癌症的方法，其包括對受試者施用藥學上25.—種用於治療或預防受試者中癌症的方法，其包括對受試者施用疫苗的步驟，所述疫苗包含(a)RASGEFlA多肽，(b)所述多肽的免疫學活性片段，或(c)編碼所述多肽或片段的多核香酸。26.—種用於誘導抗腫瘤免疫力的方法，其包括將APC與RASGEF1A多肽或其片段、編碼所述多肽或片段的多核苦酸、或包含所述多核香酸的載體接觸的步驟。27.權利要求26的用於誘導抗腫瘤免疫力的方法，其進一步包括對受試者施用APC的步驟。28.權利要求22-27任一項的方法，其中所述癌症選自ICC、膀胱癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、前列腺癌、慢性髓細胞樣白血病、腎癌、軟組織肉瘤、胰腺癌和精原細胞瘤。全文摘要本發明提供了用於檢測和診斷癌症的方法。根據一個實施方案，該診斷方法包括測定RASGEF1A基因的表達水平，因為發現RASGEF1A基因能區分癌細胞與正常細胞。此外，本發明提供了篩選在癌症治療中有用的治療劑的方法、用於治療癌症的方法、及用於給受試者針對癌症進行疫苗接種的方法。文檔編號C12Q1/68GK101273145SQ20068003535公開日2008年9月24日申請日期2006年7月14日優先權日2005年7月28日發明者中村佑輔,中鶴修一,古川洋一申請人:腫瘤療法科學股份有限公司