激活胞外基質蛋白質合成的新肽和包含其的美容組合物的製作方法

2024-01-21 12:18:15

激活胞外基質蛋白質合成的新肽和包含其的美容組合物的製作方法
【專利摘要】本發明涉及用於在皮膚中合成胞外基質蛋白質的新的激活肽。本發明還涉及一種包括這種肽作為活性劑的美容組合物，涉及這種組合物用於增強胞外基質蛋白質的表達、延遲皺紋出現或減少皺紋、下垂和皮膚體積減少和皮膚脫水的應用。最後，本發明涉及用於延遲或治療皮膚衰老和光老化跡象的美容護理方法。
【專利說明】激活胞外基質蛋白質合成的新肽和包含其的美容組合物
發明領域
[0001]本發明涉及美容和皮膚藥物活性物質以及包含其的組合物的領域。
[0002]本發明的目的是提供激活胞外基質蛋白表達的新的肽。
[0003]本發明還涉及在生理學合適的介質中包含這種肽作為活性劑的美容組合物。
[0004]本發明還涉及這種組合物用於增強胞外基質蛋白表達、延遲皮膚衰老跡象尤其是皺紋的出現、下垂和皮膚體積減少以及皮膚脫水和/或對抗其的應用，最後涉及試圖延遲皮膚衰老和光老化的出現和/或治療皮膚衰老和光老化的跡象的美容護理方法。 _5] 發明背景
[0006]皮膚包括許多層(真皮，真皮表皮連接，表皮)的覆蓋器官。真皮是支撐皮膚的組織，包括水、彈性蛋白纖維和膠原纖維(70%真皮纖維)，被包圍在蛋白聚糖的間質基質裡。成纖維細胞是真皮的主要細胞成分，而且是膠原纖維和彈性蛋白纖維合成的來源。
[0007]糖胺聚糖確保膠原和彈性蛋白原纖維的構建以及水儲存，由於其特別的吸水性。透明質酸是皮膚中最豐富的糖胺聚糖，而且是真皮的主要成分，但是還存在於表皮中的角質細胞周圍。糖胺聚糖和膠原複合物是皮膚彈性和緊緻性的主要參與者。
[0008]如同所有其他器官一樣，皮膚也經受複雜的衰老生理過程。內在或序時衰老和外在衰老是不同的。內在衰老是遺傳程序衰老和由於內在因素的生化改變的結果。在皮膚中，它特徵在於細胞和胞外基質再生的減慢，導致真皮和表皮萎縮，乾燥，彈性降低，以及細紋和皺紋的出現。
[0009]至於外在衰老，它是由於環境脅迫如汙染，陽光，疾病，生活方式習慣等等造成。它的作用與內在衰老的作用在長期暴露於這些侵襲的區域中結合；這稱為光老化。與光老化相關的主要改變包括:色素斑點的出現，以及導致皺紋出現的膠原纖維的減少和破壞。
[0010]鑑定能對抗皮膚衰老的活性物質的研究已經導致許多或多或少有效的活性物質在市場上出現。然而，鑑定能延遲皮膚衰老跡象或更有效地對抗皮膚衰老跡象的新化合物仍然是重要的。本發明更具體靶向的問題是鑑定能對抗位於胞外基質的主要皮膚衰老跡象的新的活性物質。
[0011]發明描述
[0012]發明人已經證明具有下面通式(I)的肽是好的胞外基質蛋白質合成活化劑:R1- (AA) ^X1-Pro-X2-Gly-Pro-X3-X4- (AA) p-R2。因此，這些肽適於對抗皮膚衰老和光老化。
[0013]根據本發明的肽特徵在於:
[0014]-增強I型和Ill型膠原的表達
[0015]-增強纖連蛋白的表達，
[0016]-增強透明質酸的表達，
[0017]-減少成纖維細胞衰老的跡象。
[0018]「激活胞外基質蛋白的肽或活性物質」指通式(I)的任何肽，其能增加細胞中存在的膠原蛋白、纖連蛋白和透明質酸的量、或者通過直接或間接調苄基因表達增加蛋白質合成或通過其他生物學進程如蛋白質穩定或信使RNA轉錄的穩定增加分泌的膠原蛋白，纖連蛋白和透明質酸的量。
[0019]「成纖維細胞衰老的跡象」指與細胞衰老表型相關的生化標記的表達譜。
[0020]皮膚指構成皮膚，黏膜和皮膚附件包括毛髮，睫毛和眉毛的所有覆蓋組織。
[0021]因此，本發明首先涉及通式⑴的肽
[0022]R1- (AA) U-X1-Pro-X2-Gly-Pro-XS-X^ (AA) p-R2
[0023]其中
[0024]X1表示甘氨酸或丙氨酸或纈氨酸，
[0025]X2表示甘氨酸或丙氨酸或纈氨酸，
[0026]X3表示天冬醯胺或賴氨酸或穀氨醯胺或沒有胺基酸，
[0027]X4表示苯丙氨酸或酪氨酸或沒有胺基酸，
[0028]AA表示任何胺基酸，η和P是O與2之間的整數，
[0029]R1表示N-末端胺基酸的伯胺官能，-ΝΗ2，其中2個氫原子中的一個被飽和或不飽和的C1到C3tl烴基鏈取代、或者被醯基型基團(R-C0-)取代或者被苯甲醯基、甲苯磺醯基或卞氧羰基型的芳基取代，其中R基團是飽和或不飽和的C1到C3tl烴基鏈，優選甲基，
[0030]R2表示C-末端胺基酸的羧基官能的羥基，-0Η，其中氫原子可以被CjIjC3tl烴基鏈、或NH2、NHY或NYY基團取代，其中Y表示C1到C4烴基鏈，
[0031]通式(1)的所述序列由5到11個胺基酸殘基組成並能夠是鹽的形式。
[0032]根據本發明的一個特別優選的實施方案，肽是如下的序列:
[0033](SEQ ID n°l) =Ala-Pro-Ala-Gly-Pro-NH2
[0034](SEQ ID n°2) =Val-Pro-Ala-Gly-Pro
[0035](SEQ ID n°3) =Val-Pro-Gly-Gly-Pro-NH2
[0036](SEQ ID n°4):Gly-Pro-Ala-Gly-Pro
[0037](SEQ ID n°5) =Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-NH2
[0038](SEQ ID n°6):Lys-Gly-Ala-Pro-Gly-GLy-Pro-Asn-Tyr-NH2
[0039]根據一個特別有利的實施方案，肽相應於序列SEQ ID n°4。
[0040]根據另一個特別有利的實施方案，肽相應於序列SEQ ID n°5o
[0041]構成本發明的肽並以術語AA指示的胺基酸可以是L-和D-同分異構構型。優選地，胺基酸是L型的。
[0042]術語「肽」指彼此通過肽鍵連接的兩個或更多個胺基酸的鏈。
[0043]「肽」還指如上所述本發明的天然或合成肽，或者至少它的片段之一，無論它是通過蛋白質水解或合成獲得的，或者任何天然或合成肽，其序列完全或部分由上述肽的序列組成。
[0044]為了提高對降解的抗性，使用保護形式的本發明肽是必需的。通過用醯基型的R1基團(R-C0-)取代(其中R基團是飽和或不飽和的C1到C3tl烴基鏈)、優選甲基型的R1基團或者通過用苯甲醯基、甲苯磺醯基或卞氧羰基型的芳基取代可以保護N-末端胺基酸的伯胺官能。
[0045]優選地，通過用C1到C3tl烴基鏈型的R2基團、或NH2、NHY或NYY基團取代(其中Y表示C1到C4烴基鏈)保護C-末端胺基酸的羧基官能。
[0046]可以在N-末端或C-末端或在兩個末端對序列SEQ ID n°l到SEQ ID n°6的本發明的肽進行保護。
[0047]可以通過典型化學合成(以固相或液體均相)或通過從組成胺基酸的酶促合成(Kullman et al.J.Biol.Chem.，1980，vol.225，p.8234)獲得本發明的通式(I)的肽。
[0048]本發明的肽可以是天然或合成來源的。優選地，根據本發明，肽是合成來源的，通過化學合成獲得。
[0049]根據本發明，活性物質可以是單個肽或肽的混合物。
[0050]本發明的肽有利地溶解於一種或多種生理學合適的溶劑中，如水，甘油，乙醇，丙二醇，丁二醇，二丙撐二醇，乙氧基化或丙氧基化二甘醇，環狀多元醇或這些溶劑的任何混合物。
[0051]「生理學合適」指適合用於與人皮膚或皮膚附件接觸、同時沒有毒性、不耐受性、不穩定性、過敏反應或其他不利作用風險的溶劑或介質。
[0052]稀釋的肽然後通過無菌過濾進行消毒。
[0053]這種稀釋步驟後，肽可以包封或包含在美容載體中如脂質體或用於美容領域的任何其他微囊中或吸附於粉狀有機聚 合物、礦物載體如滑石和膨潤土，更常見地溶解於或連接到任何生理學合適的載體。
[0054]第二，本發明涉及一種美容組合物，其包括於生理學合適介質中的通式(I)的肽作為激活皮膚中胞外基質蛋白質合成的活性物質。
[0055]根據本發明的一個有利的實施方案，相對於最終組合物的總重量，所述活性物質以0.0005到500mg / kg、優選0.01到5mg / kg的濃度存在於組合物中。
[0056]該濃度範圍表示獲得所需分子效應也即激活I型和Ill型膠原、纖連蛋白和透明質酸的表達所需的活性物質的量。
[0057]優選地，本發明的組合物是適於局部施用的形式，其包括生理學上適於皮膚的介質。
[0058]「局部施用」指本發明活性物質或者包含它的組合物應用或塗布於皮膚表面。
[0059]這些組合物尤其可以含水、水醇或含油溶液；水包油或油包水或多重乳液、含水或無水凝膠、膠體的形式。這些組合物還可以是乳劑、懸浮液或粉末的形式，適於應用於皮膚、黏膜、唇和/或皮膚附件。這些組合物可以是更多或更少的流體並具有乳劑、洗液、乳、血清、潤髮油、乳劑、糊劑或泡沫的形態。它們也可以是固體形式如棒或以氣溶膠形式應用於皮膚。它們可以用作護理產品和/或化妝產品用於皮膚。
[0060]所有這些組合物另外包括通常用於規定應用領域的任何添加劑，以及它們配製所
需的助劑，如助溶劑(乙醇，甘油，苯甲醇，溼潤劑......)，增稠劑，稀釋劑，乳化劑，抗氧化
劑，著色劑，防曬霜，色素，填料，防腐劑，香料，氣味吸附劑，精油，微量元素，必需脂肪酸，表面活性劑，成膜聚合物，化學或礦物過濾物，水合劑或熱水等等。例如，可以提及的是天然型的水溶性聚合物如多糖或多肽，甲基纖維素或羥丙基纖維素型的纖維素衍生物，或合成聚合物，泊洛沙姆，卡波姆，矽氧烷，PVA或PVP，尤其是ISP公司銷售的聚合物。
[0061]在任何情況下，本領域技術人員將確信選擇的這些助劑以及它們的比例以便不抵消本發明組合物中探索到的有利特性。這些助劑可以例如以組合物總重量的0.01到20%的濃度範圍存在。當本發明的組合物是乳液時，相對於組合物的總重量，脂肪相可以是5到80%重量，優選5到50%重量。可以從考慮的領域中通常使用的那些中選擇組合物中使用的乳化劑和助乳化劑。例如，相對於組合物的總重量，它們可以0.3到30%重量的比例使用。
[0062]當然，本發明的活性物質可以單獨或者與其他的活性物質聯合使用。
[0063]有利地，根據本發明可以使用的組合物另外包括至少一種意欲增強本發明活性物質在預防和改善皮膚衰老跡象方面的作用的其他活性物質或者使擴展考慮的組合物的特性範圍成為可能的另一種活性物質。
[0064]以非限制性方式，引用下面的組分類別是可能的:再生、抗衰老、抗皺、滋潤、抗自由基、抗糖化、水合、抗菌、抗真菌、角質層分離、肌肉放鬆、剝落和緊緻劑，刺激真皮大分子合成或能量代謝或微循環或指甲或毛髮生長的物質，調節表皮分化或色素沉著的物質，金屬蛋白酶抑制劑或防曬霜和陽光過濾物。
[0065]在本發明的一個特定實施方案中，除了本發明的肽以外，本發明的組合物還將包括:
[0066]-至少一種細胞色素C激活化合物，和/或
[0067]-至少一種水合化合物，如水通道蛋白激活化合物，和/或
[0068]-至少一種sirtuin激活化合物，和/或
[0069]-至少一種增強細胞粘附的化合物，和/或
[0070]-至少一種增加基質蛋白質如膠原、纖連蛋白、層粘連蛋白、糖胺聚糖生產的化合物，和/或
·[0071]-至少一種調節蛋白酶體活性的化合物，和/或
[0072]-至少一種調節生理節奏的化合物，和/或
[0073]-至少一種調節HSP蛋白的化合物，和/或
[0074]-至少一種增強細胞能量的化合物，和/或
[0075]-至少一種調節皮膚色素沉著的化合物，和/或
[0076]-至少一種輔酶QlO激活化合物，和/或
[0077]-至少一種改善屏障功能的化合物，如轉穀氨醯胺酶或HMG-CoA還原酶激活化合物，和/或
[0078]-至少一種線粒體保護化合物。
[0079]所述上述化合物可以是天然來源的，如植物的肽水解物，或合成來源的，如肽。
[0080]與它們的功能無關，組合物中與本發明的活性物質相關的其他活性物質可以具有非常多樣的化學結構。以非限制性方式，引用肽，維生素C及其衍生物，B組維生素，DHEA (雙氫表雄留酮)，植物留醇，水楊酸及其衍生物，類視黃醇，類黃酮，糖胺，吡咯，金屬鹽,植物來源的肽提取物或聚合物是可能的。
[0081]第三，本發明涉及一種美容組合物用於增強通過皮膚細胞的胞外基質蛋白質合成的應用，該美容組合物包括作為活性物質的通式(I)的肽。
[0082]更具體地，本發明的肽用於增強通過人皮膚的成纖維細胞的膠原I和III以及纖連蛋白的合成。
[0083]根據本發明的這個特定實施方案，通式(I)的肽用於增加真皮密度，從而增加皮膚的緊緻度，以延遲或減少面部線條的下垂，真皮體積減少，皮膚變薄，張力缺乏，細紋，深皺紋和真皮萎縮。[0084]第四，本發明涉及一種美容組合物用於增強通過成纖維細胞和角質細胞的透明質酸的表達的應用，該美容組合物包括作為活性物質的通式(I)的肽。
[0085]根據本發明的這個特定的實施方案，通式(I)的肽用於增加所有皮膚層的容量，用於保持水分和延遲或減少與衰老相關的皮膚脫水。
[0086]第五，本發明涉及一種美容組合物用於延遲皮膚細胞衰老的出現或減少皮膚細胞衰老的應用，該美容組合物包括作為活性物質的通式(I)的肽。
[0087]短語「延遲真皮細胞衰老的出現或減少真皮細胞衰老」指，根據本發明的該有利方面，本發明的肽降低了人成纖維細胞中衰老標記的表達，其中已經通過F0X03a基因的消退誘導了衰老。
[0088]第六，本發明涉及一種延遲和/或治療皮膚衰老和光老化跡象的美容護理方法，其特徵在於把本發明的組合物局部應用於待處理的皮膚。
[0089]「皮膚衰老徵象」指皮膚和皮膚附件由於衰老而出現的外部表觀的變化，如例如皮膚變薄，下垂，水合作用減少和張力缺乏，深皺紋和細紋，緊緻度和色調喪失，真皮萎縮或由於暴露於UV輻射而致的任何其他內部皮膚退化。
[0090]根據用於說明性和非限制性目的而提供的以下實施例，本發明的其他優點和特徵
將變得更清楚。
[0091]實施例1 JtSEQ ID nfl4和#5對人成纖維細胞中膠原I，膠原III，前膠原，纖連蛋白和透明質酸表達的激活作用的i正明
[0092]本研究的目的是確定肽SEQ ID n°4和n°5與肽SEQ ID n°4對人成纖維細胞中以下胞外基質蛋白質表達的影響:膠原I，膠原III，前膠原，纖連蛋白和透明質酸。為此，對獲自真皮的正常人成纖維細胞培養物進行特異標記。
[0093]特異標記方案:用狀SEQ ID n°5或肽SEQ ID n°4以0.5%，I %和/或3%的終濃度(基於40mg / kg原液)處理培養物中的人成纖維細胞24，48和/或72小時。然後洗滌細胞，用冷甲醇4°C固定4分鐘(用於膠原I，膠原III和透明質酸標記)或用甲醛以
3.7%在室溫固定10分鐘(用於前膠原和纖連蛋白標記)。在存在特異性兔膠原I多克隆抗體(Rockland, Ref:600-401-103-0.5)，特異性兔膠原 III 多克隆抗體(Rockland, Ref:600-401-105-0.5)，特異性小鼠前膠原多克隆抗體(MiIlipore, Ref:MAB1912)，特異性兔纖連蛋白多克隆抗體(Sigma, Ref:F_3648),然後偶聯突光染料的抗兔二抗(Invitrogen,Ref:A21206)或偶聯螢光染料的抗大鼠抗體(Invitrogen，A11006)時孵育細胞。為標記透明質酸，在存在特異性生物素化蛋白(Coger，Ref:4007631A)，然後在存在偶聯螢光染料的鏈黴抗生物素蛋白(InvitiOgemRef:S32354)時孵育細胞。然後在落射螢光顯微鏡(NikonEclipse E600顯微鏡)下檢驗細胞。
[0094]結果:在所有的檢測備件下，在通討狀SEQ ID n°5或肽SEQ ID n°4處理的成纖維細胞中，觀察到比對照條件下更強的螢光。
[0095]結論:肽SEQ ID n°5和SEQ ID n°4刺激人真皮成纖維細胞的膠原I，膠原III，前膠原，纖連蛋白和透明質酸的表達。
[0096]實施例2:證明人皮膚活組織檢杳中肽SEQ ID #5對膠原I，膠原III，前膠原和透明質酸表達的激活作用
[0097]本研究的目的是確定肽SEQ ID n°5對人皮膚中以下胞外基質蛋白質表達的影響:膠原I，膠原III，前膠原，纖連蛋白和透明質酸。為此，對離體培養的人皮膚樣本進行特異
標記
[0098]方案:人皮膚樣本置於空氣/液體界面培養。肽SEQ ID n°5以0.5%，I %或3%的終濃度局部應用於樣本(使用40mg / kg的原液)，然後樣本於37°C孵育24，48和/或72小時。
[0099]這些皮膚樣本然後用甲醛固定，然後包埋到石蠟中或者固定並包埋到OCT中，然後-20°C冷凍。然後產生4μm厚的切片(6 μ m用於冷凍切片)。
[0100]暴露特異性位點後，對包埋到石蠟中的樣本上的膠原I和膠原III進行標記。使用特異性兔膠原I多克隆抗體(Rockland，Ref:600-401-103-0.5)，特異性兔膠原III多克隆抗體(Rockland, Ref:600-401-105-0.5),然後用偶聯突光染料的抗兔二抗(Invitrogen,Ref:A21206)進行免疫標記。為標記透明質酸，在存在特異性生物素化蛋白(Coger，Ref:4007631A)，然後在存在偶聯螢光染料的鏈黴抗生物素蛋白(Invitrogen，Ref:S32354)時孵育細胞。
[0101]在用冷丙酮固定10分鐘以後，對包埋到OCT中的樣本上的前膠原進行免疫標記。使用特異性小鼠前膠原多克隆抗體(Millipore，Ref:MAB1912)，然後用偶聯螢光標記的抗大鼠二抗(Invitrogen, A11006)進行免疫標記。
[0102]然後在落射突光顯微鏡(Nikon Eclipse E600顯微鏡)下檢驗細胞。
[0103]結果:顯微鏡觀察顯示用肽SEQ ID n°5處理的皮膚樣本的真皮上的螢光更強烈。在免疫標記透明質酸的情況中，用肽SEQ ID n°5處理的皮膚樣本的表皮也觀察到螢光增強。
[0104]結論:肽SEQ ID n°5刺激真皮中的膠原I，膠原III，前膠原的表達，並刺激人真皮和表皮中透明質酸的表達。
[0105]實施例3:通過實時PCR證實肽SEQ ID nfl5對膠原I信使RNA表達的激活作用
[0106]本研究的目的是確定肽SEQ ID n°5對人成纖維細胞中膠原I信使RNA表達的影響。為此，通過實時PCR研究膠原I的表達。
[0107]方案:用妝SEQ ID n°5以0.5%和I %的終濃度(使用40mg / kg的原液)處理培養物中的人成纖維細胞24，48和72小時。使用提取試劑盒(QIAGEN)提取總RNA，然後用含RNase抑制劑的特定試劑盒(Applied Biosystems)進行反轉錄。使用特定膠原I TaqMan基因表達分析(Applied Biosystem, Hs99999901_sl)在熱循環儀上進行實時PCR，而且特定的18S TaqMan基因表達分析用作內源對照(Applied Biosystem, Hs00164004_ml)。通過比較性Ct方法對膠原I信使RNA的表達進行相對定量(Ct，閾值循環，是擴增曲線與閾值線之間的交點)。
[0108]結果/結論:妝SEQ ID n°5刺激人成纖維細胞中膠原I信使RNA的表達。
[0109]實施例4:研究存在狀SEQ ID nfl5時衰老標記P16的表汰
[0110]本研究的目的是確定肽SEQ ID n°5對P16表達的影響，P16是隨著年齡在皮膚中表達增加的蛋白質。P16是涉及細胞循環的負調節的蛋白質，其已經被描述為細胞衰老的可靠標記(Brookes S.et al.Experimental Cell Research298, 2004)。
[0111]方案:用妝SEQ I D n°5以0.5%和I %的終濃度(使用40mg / kg的原液)處理培養的人成纖維細胞48小時。根據Shandon Cytoblock?細胞製備系統試劑盒(ThermoScientific, Ref:7401150)製備細胞。
[0112]細胞然後用甲醛固定然後包埋到石蠟中。然後產生4μπι切片。在暴露特異性位點以後，對包埋到石蠟中的細胞上的Ρ16進行標記。使用特異性小鼠ρ16多克隆抗體(Santa-Cruz, Ref:sc81157),然後用偶聯突光染料的抗小鼠二抗(Invitrogen, Ref:A21202)進行免疫標記。然後在落射螢光顯微鏡(Nikon Eclipse E600顯微鏡)下檢驗細胞。
[0113]結果:顯微鏡觀察顯示用肽SEQ ID n°5處理的細胞中核螢光強度較弱。
[0114]結論:肽SEQ ID n°5降低人成纖維細胞中pl6衰老標記的表達。
[0115]實施例5 JtSEQ ID nfl5逆轉成纖維細胞中誘導的細胞衰老的i正實
[0116]本研究的目的是確定肽SEQ ID n°5對衰老成纖維細胞的影響，該衰老成纖維細胞中F0X03a基因的消退已經誘導了衰老。相對於它們的衰老狀態，這些細胞過表達β-半乳糖苷酶。
[0117]F0X03a是細胞壽命中涉及的一種Forkhead轉錄因子。在皮膚中，F0X03a的負調節加速正常人成纖維細胞的衰老(Hyun Kyoung K.et al.J.0f Gerontol., 2005, vol.60An°l, pages4-9)。這種特性用於有利於通過特異性幹擾RNA (siRNA)阻斷F0X03a表達誘導人成纖維細胞衰老。
[0118]方案:利用LipofectamineTmRNAiMAX (Invitrogen, Ref: 13778-075)轉染技術，通過用F0X03a的特異性siRNA以25nM的終濃度處理，使培養中的人成纖維細胞衰老。產生未經處理的對照。通過肽SEQ ID n°5以I %的終濃度(使用40mg / kg的原液)平行處理成纖維細胞48小時。
[0119]漂洗細胞並在固定緩衝液(0.2%戊二醛，`2%甲醛)中固定。然後用於40mM檸檬酸 / 磷酸鹽(pH6)，5mM K3FeCN6, 5mM K4FeCN6,150mM NaCl 和 2mM MgCl2 中的 Img / mL 的X-Gal溶液在37°C、無CO2孵育細胞24小時。然後在白色光顯微鏡(Nikon Eclipse E600顯微鏡)下檢驗細胞。
[0120]結果:具有特異性B-半乳糖苷酶活性的衰老細胞染色顯示藍色。用F0X03a的特異性siRNA處理的細胞顯示與衰老誘導相關的β -半乳糖苷酶活性增加，包括染色顯示藍色的細胞數目增加。用F0X03a的特異性siRNA和肽SEQ ID n°5以1%處理的細胞顯示β-半乳糖苷酶活性降低，包括染色顯示藍色的細胞數目減少。
[0121]結論:肽SEQ ID η°5能降低人成纖維細胞中誘導的衰老表型。
[0122]實施例6:組合物的製備
[0123]1-抗衰老面霜:
[0124]
【權利要求】
1.通式⑴的肽:
R1- (AA) J1-X1-Pro-X2-Gly-Pro-X3-X4- (AA) P~R2
其中 X1表示甘氨酸或丙氨酸或纈氨酸， X2表示甘氨酸或丙氨酸或纈氨酸， X3表示天冬醯胺或賴氨酸或穀氨醯胺或沒有胺基酸， X4表示苯丙氨酸或酪氨酸或沒有胺基酸， AA表示任何胺基酸，η和P是O與2之間的整數， R1表示N-末端胺基酸的伯胺官能，-ΝΗ2，其中2個氫原子中的一個被飽和或不飽和的C1到C3tl烴基鏈取代；或被醯基型基團(R-C0-)取代，其中R基團是飽和或不飽和的C1到Cm烴基鏈，優選甲基；或被苯甲醯基、甲苯磺醯基或苄氧羰基型的芳基取代， R2表示C-末端胺基酸的羧基官能的羥基，-0Η，其中氫原子可以被C1到C3tl烴基鏈、或NH2, NHY或NYY基團取代，其中Y表示C1到C4烴基鏈，通式⑴的所述序列由5到11個胺基酸殘基組成並能夠是鹽的形式，其特徵在於它相應於下列序列之一:
(SEQ ID n°l):Ala-Pro-Ala-Gly-Pro-NH2
(SEQ ID n°2) =Val-Pro-Ala-Gly-Pro
(SEQ ID n°3):Val-Pro-Gly-Gly-Pro-NH2
(SEQ ID n°4):Gly-Pro-Ala-Gly-Pro
(SEQ ID n°5):Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-NH2
(SEQ ID n°6):Lys-Gly-Ala-Pro-Gly-Gly-Pro-Asn-Tyr-NH2
2.權利要求1的肽，特徵在於其相應於序列SEQID n°4或序列SEQ ID n°5。
3.前述權利要求中任一項的肽，特徵在於其溶解於一或多種生理學合適的溶劑中，如水，甘油，乙醇，丙二醇，丁二醇，二丙撐二醇，乙氧基化或丙氧基化二甘醇，環狀多元醇或這些溶劑的任何混合物。
4.美容組合物，其包含存在於生理學合適介質中的權利要求1到3任一項的至少一種肽，其作為激活皮膚中胞外基質蛋白質合成的活性劑。
5.權利要求4的組合物，特徵在於相對於最終組合物的總重量，所述肽以0.0005到500mg / kg、優選0.01到5mg / kg的濃度存在。
6.權利要求4或5的組合物，特徵在於其用於局部施用。
7.權利要求4到6中任一項的組合物，特徵在於其還包含至少一種其他的活性劑。
8.權利要求7的組合物，特徵在於所述其他的活性劑選自再生、抗衰老、抗皺、潤滑、抗自由基、抗糖化、7jC合、抗菌、抗真菌、角質層分離、肌肉放鬆、剝落和緊緻物質、刺激真皮大分子合成或能量代謝或微循環或指甲或毛髮生長的物質、調節表皮分化或色素沉著的物質、金屬蛋白酶抑制劑或防曬霜和陽光過濾物質。
9.一種組合物用於增強皮膚細胞的胞外基質蛋白質合成的美容應用，該組合物包括在生理學合適的介質中的作為活性劑的權利要求1到3中任一項的肽。
10.一種組合物用於增強成纖維細胞的I型和III型膠原蛋白以及纖連蛋白合成的美容應用，該組合物包括在生理學合適的介質中的作為活性劑的權利要求1到3中任一項的肽。
11.前述權利要求的組合物用於增加真皮密度和皮膚彈性、和用於延遲或降低面部特徵下垂、真皮體積減少、皮膚變薄、張力缺乏、細紋和深皺紋的美容用途。
12.—種組合物用於增強皮膚成纖維細胞和角質細胞的透明質酸表達的美容應用，該組合物包括在生理學合適的介質中的作為活性劑的權利要求1到3中任一項的肽。
13.前述權利要求的組合物用於增加所有皮膚層的容量用於保持水分和延遲或降低與衰老相關的皮膚脫水的美容用途。
14.一種組合物用於延遲皮膚細胞衰老出現或減少皮膚細胞衰老的美容應用，該組合物包括在生理學合適的介質中的作為活性劑的權利要求1到3中任一項的肽。
15.一種為了延遲和/或處理皮膚衰老和光老化跡象的美容護理方法，其特徵在於把權利要求4到8中任一項的組合物局部應用於待處理的皮膚。
【文檔編號】C07K7/06GK103582649SQ201280009431
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2012年2月17日 優先權日:2011年2月18日
【發明者】C·達爾法拉, N·東洛熱, J-M·博託 申請人:Isp投資公司