高純度菊苣、菊芋型低聚果糖並聯產多聚果糖的方法
2024-01-28 19:05:15 2
高純度菊苣、菊芋型低聚果糖並聯產多聚果糖的方法
【專利摘要】本發明涉及糖類提取製備【技術領域】，特別涉及一種高純度菊苣、菊芋型低聚果糖並聯產多聚果糖的方法：對菊苣塊根或菊芋塊莖進行清洗、切片、烘乾、粉碎、鹼性浸提液進行連續逆流超聲浸提得到菊粉液；菊粉液用超濾膜進行分級處理，分離出大分子濾液和小分子濾液；對小分子濾液進行酶解，酶解後濃縮，再經色譜分離、脫色、離交、濃縮、乾燥得低聚果糖；對大分子濾液進行脫色、離交、濃縮、乾燥得多聚果糖。實現與多聚果糖的聯產，顯著提高了原料利用率；節省了時間，提高了提取率，還能實現連續化生產，極大地提高了生產效率。
【專利說明】高純度菊苣、菊芋型低聚果糖並聯產多聚果糖的方法
[0001]【技術領域】
本發明涉及糖類提取製備【技術領域】，特別涉及一種高純度菊苣、菊芋型低聚果糖並聯產多聚果糖的方法 。
[0002]【背景技術】
低聚果糖是一種天然活性物質。甜度為蔗糖的0.3-0.6倍。既保持了蔗糖的純正甜味性質，又比蔗糖甜味清爽。是具有調節腸道菌群，增殖雙歧桿菌，促進鈣的吸收，調節血脂，免疫調節，抗齲齒等保健功能的新型甜味劑，被譽為繼抗生素時代後最具潛力的新一代添加劑——促生物質；在法國被稱為原生素(PPE)，已在乳製品、乳酸菌飲料、固體飲料、糖果、餅乾、麵包、果凍、冷飲等多種食品中應用。
[0003]多聚果糖是一種優良的水溶性膳食纖維，攝入後能增加人體膳食纖維攝入量，預防便秘與結腸癌，降低血液膽固醇，穩定血糖水平。廣泛應用於乳製品、飲料、焙烤食品及保健食品中。
[0004]由於國內蔗糖產量很大，能滿足低聚果糖的生產需要，而菊苣或菊芋在國內種植較少，原材料不能滿足生產需要，因此國內的低聚果糖多以蔗糖為原料，通過果糖基轉移酶轉化並通過精製、純化製得。但以蔗糖為原料的低聚果糖在生產過程中用的多是細胞轉化，在轉化過程中產生了很多雜質，不但增加了精製工藝的負擔，而且影響了產品的風味，嚴重製約著低聚果糖的發展。
[0005]在歐美國家生產的低聚果糖多是以菊苣為原料，通過一步酶解，精製所得。其風味清爽，一直深受歐美人群的喜愛。而我國所產的蔗糖型低聚果糖在歐美國家認可度不夠，嚴重阻礙了低聚果糖事業的發展。
[0006]近年，隨著黃河三角洲菊芋種植面積的逐漸增大，菊芋的原料問題會逐漸得以解決，生產菊苣型或菊芋型的低聚果糖變得更加必要。而傳統工藝多是菊苣/芋一菊苣/芋粉一浸提一石灰乳處理一過濾一酶解一滅酶一脫色一色譜一離交一濃縮一乾燥。在傳統工藝中先浸提後用石灰乳處理，酶解時更是用游離的酶進行酶解，乾燥多用噴霧乾燥，這些操作增加了生產時間，而且效率低下。
[0007]
【發明內容】
本發明的目的在於克服上述現有技術中存在的生產效率低、無法充分利用原材料的問題，本發明提供了一種提高了生產效率、降低了生產成本、能同時得到低聚果糖和多聚果糖的高純度菊苣、菊芋型低聚果糖聯產多聚果糖的方法。
[0008]本發明是通過以下措施實現的:
一種高純度菊苣、菊芋型低聚果糖聯產多聚果糖的方法，包括以下步驟:
(1)對菊苣塊根或菊芋塊莖進行清洗、切片、烘乾、粉碎，然後使用鹼性浸提液進行連續逆流超聲浸提得到菊粉液，鹼性浸提液為用石灰乳調節PH為11-13的去離子水，浸提溫度為60-95°C，浸提時間1-3小時，固液比為I:10-30 ；
(2)菊粉液調pH至6-8，過濾進行固液分離得濾液，濾液經脫色後，用4000-6000分子量的超濾膜進行分級處理，分離出聚合度在23以上的大分子濾液和聚合度在23以下的小分子濾液；
(3)對小分子濾液進行酶解，酶解後濃縮，再經色譜分離、脫色、離交、濃縮、乾燥得低聚果糖；
(4)對大分子濾液進行脫色、離交、濃縮、乾燥得多聚果糖。
[0009]所述的方法，優選步驟(3)中使用固定化的菊粉酶對小分子濾液進行酶解，其固定化工藝:加酶量為10-30mg/g吸附樹脂，在pH5.5-7.0、10_30°C恆溫水浴振蕩器中緩慢振蕩吸附24-40h，棄去上清，用磷酸鹽緩衝溶液衝洗未固定上的游離菊粉酶；酶解條件:調pH5.5-6.0，菊粉酶添加量為30u/g乾物質，在55-57°C下酶解反應20_30h。
[0010]所述的方法，優選步驟(2)中濾液經脫色後進行濃縮，至固含為40%。 [0011]所述的方法，優選步驟(2)中濾液脫色工藝步驟為:濾液先用活性炭脫色處理，脫色溫度為60-80°C，脫色時間20-60min ;再用LSA-600、LSA_700或D941樹脂脫色，料液濃度為7%-15%，進柱溫度為40-60°C。
[0012]所述的方法，優選步驟(3)中色譜分離工藝為:進料濃度10±5%，pH8.0-8.5，低聚果糖含量≥70%，溫度控制在55~75°C，電導率≤50ii s ? cnT1，出料低聚果糖純度≥95%。
[0013]所述的方法，優選步驟(3)中色譜分離後料液調pH7.0-8.0、6(T80°C保溫30min，板框過濾；進行離交，進柱溫度300C~50°C，出柱pH5.0-7.0，電導率< 50 u s ? cnT1，濃縮至Ij糖濃73%-79%的低聚果糖液。
[0014]所述的方法，優選濃縮得到的低聚果糖液採用氣流式旋轉閃蒸乾燥技術，料液濃度為73-79%，操作壓力10-30Pa，得純度為95%低聚果糖粉。
[0015]所述的方法，優選步驟(4)中將得到的大分子濾液調pH5.0-7.0,60^80 V保溫30min，板框過濾，進行離子交換，進柱溫度30°C~50°C，出柱pH5.0-7.0，電導率< 50 u s ? cnT1，得到的料液通過六效蒸發器濃縮到糖濃70%-80%的多聚果糖液，採用氣流式旋轉閃蒸乾燥，得多聚果糖粉。
[0016]所述的方法，優選吸附樹脂型號為LX-1000EP。
[0017]菊粉酶(inulinase)是能夠水解P — 2，I 一 d—果聚糖果糖苷鍵的一類水解酶，學名0 — 2，I 一 d—果聚糖酶，又叫P —果聚糖酶，2，I 一 d—果聚糖水解酶(ec3.2.1)。分泌菊粉酶的微生物在自然界中分布很廣，土壤、水和動物消化道中的多種微生物都能分泌。菊粉酶可以在一定的溫度條件下水解菊粉成果糖或低聚果糖。
[0018]本發明第一次提出新型的、優化的、靈活的加工菊芋、菊苣聯產低聚果糖與多聚果糖的方法，通過本發明中膜過濾分級處理，可同時得到菊苣型低聚果糖和多聚果糖。
[0019]本發明第一次將浸提工藝和石灰乳浸提工藝結合起來，提高了生產效率，降低了生廣成本，提聞了提取率。
[0020]本發明提出的依次用活性炭和樹脂脫色的方法，與傳統活性炭脫色方法相比，降低了活性炭的使用量與菊粉的損失量；與一些文獻中提出的只用樹脂脫色的方法相比，提高了脫色效率並降低了脫色樹脂的負擔，而且使脫色效果更好。
[0021]本發明對低聚果糖生產中採用固定化菊糖酶酶解，可達到菊糖酶反覆利用，連續操作，分離純化的目的；而且能簡化工藝，使底物轉化率提高，從而降低成本，提高利潤，為工業化獲得更高的效益。
[0022]本發明提出的乾燥使用旋轉閃蒸乾燥機，該設備將噴動床與強化流化床乾燥有機地結合起來，較好地解決了高稠度、高粘度、觸變性、熱敏性等物料乾燥的難題，該設備集乾燥、粉碎、分級於一體，簡化了工藝過程，降低了勞動強度，改善了勞動環境，減少了物料的耗散，而且設備緊湊、體積小，生產效率高，真正實現了小設備、大生產。
[0023]本發明的有益效果:
1、開發以菊苣/菊芋為原料生產低聚果糖的新技術，實現與多聚果糖的聯產，顯著提高了原料利用率；該方法採用鹼性逆流浸提、活性炭和樹脂脫色聯用、固定化菊糖酶酶解、氣流式旋轉閃蒸乾燥等新工藝生產低聚果糖和多聚果糖產品，精簡了生產工序，實現了連續化操作，降低了生產成本；改善了產品質量，降低了活性炭用量；提高了菊糖酶利用率，縮短了酶解糖化時間，提高了生產效率；解決了多聚果糖乾燥難、物耗大等難題；
2、本發明中把浸提和石灰乳處理有機的結合了起來，節省了時間，提高了提取率；使用固定化技術將酶進行固定，節省了生產成本；使用膜過濾技術分級處理，聯產多聚果糖產品，顯著提高原料利用率；而乾燥是採用旋轉氣流閃式乾燥，乾燥更徹底，更高效。此外，還能實現連續化生產，極大地提高了生產效率。
【具體實施方式】
[0024]為了更好的理解本發明，下面結合具體實施例來進一步說明。
[0025]實施例1
(1)取2400公斤新鮮菊苣塊根，用清水清洗去泥土後，切片、烘乾、粉碎，得300kg菊苣根粉，將菊苣根粉置入連續逆流超聲浸提設備浸提，浸提液採用使用石灰乳調節PH值為13的去離子水，浸提溫度為85°C，控制浸提時間為`lh，固液比1:15，得到菊粉液，通過計算，提取率為89% ；
(2)菊粉液使用磷酸調節pH至7，經板框過濾.得到4000L糖濃為7%的黃色澄清濾液，濾液經活性炭脫色處理，活性炭用量為浸提液總質量的1%，脫色溫度為80°C，脫色時間30min，板框過濾，濾液用六效蒸發器濃縮到糖濃40%，然後用分子量為4000的超濾膜進行分級處理，分離出聚合度在23以上(DP > 23)的大分子濾液和聚合度在23以下(DP < 23)的小分子濾液；
(3)對小分子濾液進行酶解，酶解後濃縮，再經色譜分離、脫色、離交、脫色、濃縮、乾燥得低聚果糖；
(4)對大分子濾液進行脫色、離交、濃縮、乾燥得多聚果糖。
[0026]在對小分子濾液和大分子濾液進行處理得到低聚果糖和多聚果糖的步驟中，現有技術中有很多的操作步驟都可以採用，在此不可能一一列舉，只是以以下的操作來進行示範:
一、對小分子濾液的處理:
①酶解、濃縮:小分子濾液首先用固定化菊粉酶進行酶解，固定化條件為首先將吸附樹脂LX-1000EP樹脂在磷酸緩衝液中浸泡6h，去離子水衝洗乾淨，稱取菊粉酶IOmg/gLX-1000EP樹脂，在pH6.0、30°C恆溫水浴振蕩器中緩慢振蕩吸附40h後，棄去上清，用磷酸鹽緩衝溶液衝洗未固定上的游離酶，即得；酶解條件為調小分子濾液PH5.5-6.0，菊粉酶添加量為30u/g乾物質，在55-57°C下酶解反應20h，酶解後料液經六效蒸發器濃縮到糖濃60% ；②色譜分離:濃縮後料液進入色譜分離裝置，進料濃度60±2%，pH8.0-8.5，低聚果糖純度≥70%，溫度控制在55~75°C，電導率≤50 ii s ? cnT1，出料低聚果糖液純度≥95% ；
③脫色:色譜分離後的低聚果糖液調PH7.0-8.0，用糖幹基總質量1%的活性炭脫色處理，脫色溫度為80°C，保溫30min，板框過濾得脫色低聚果糖液；
④離交:進柱溫度30°C~50°C，出柱pH5.0-7.0，電導率< 50 y s cm,離交後的料液用LSA-600樹脂脫色，料液濃度為58%，進柱溫度為60°C ；
⑤濃縮:步驟④的料液通過六效蒸發器濃縮到糖濃73%-79%的低聚果糖液；
⑥乾燥:步驟⑤的低聚果糖液採用氣流式旋轉閃蒸乾燥技術，料液濃度為73-79%，操作壓力10-30Pa，得純度為95%低聚果糖粉103.54g。
[0027]二、對大分子濾液的處理
①脫色:將大分子濾液調PH5.0-7.0，60~80°C保溫30min，板框過濾；
②離交:進柱溫度30°C~50°C，出柱pH5.0-7.0，電導率< 50 u s ? cm—1 ；
③濃縮:離交後料液通過六效蒸發器濃縮到糖濃70%-80%的多聚果糖液；
④乾燥:濃縮後的多聚果糖液採用氣流式旋轉閃蒸乾燥技術，料液濃度為70-80%，操作壓力20-50Pa，得多聚果糖粉40g。
[0028]實施例2
(1)取2400公斤新鮮菊芋塊莖，用清水清洗，切片、烘乾、粉碎，得240kg菊芋粉，將菊芋粉置入連續逆流超聲浸提設備浸提，浸提液採用使用石灰乳調節PH值為12的去離子水，浸提溫度為95°C，控制浸提時間為2h，固液比1:30，得到菊粉液，通過計算，提取率為92% ；
(2)菊粉液使用磷酸調節pH至7，經板框過濾.得到4000L糖濃為10%的黃色澄清濾液，濾液經活性炭脫色處理，活性炭用量為浸提液總質量的1%，脫色溫度為60°C，脫色時間20min，板框過濾，濾液用六效蒸發器濃縮到糖濃40%，然後用分子量為5000的超濾膜進行分級處理，分離出聚合度在23以上(DP > 23)的大分子濾液和聚合度在23以下(DP < 23)的小分子濾液；
(3)對小分子濾液進行酶解，酶解後濃縮，再經色譜分離、脫色、離交、脫色、濃縮、乾燥得低聚果糖；
(4)對大分子濾液進行脫色、離交、濃縮、乾燥得多聚果糖。
[0029]在本實施例中，在對小分子濾液和大分子濾液進行處理操作步驟如下:
一、對小分子濾液的處理:
①酶解、濃縮:小分子濾液首先用固定化菊粉酶進行酶解，固定化條件為首先將吸附樹脂LX-1000EP樹脂在磷酸緩衝液中浸泡6h，去離子水衝洗乾淨，稱取菊粉酶30mg/gLX-1000EP樹脂，在pH6.0、30°C恆溫水浴振蕩器中緩慢振蕩吸附40h後，棄去上清，用磷酸鹽緩衝溶液衝洗未固定上的游離酶，即得；酶解條件為調小分子濾液PH5.8，菊粉酶添加量為30u/g乾物質，在55-57°C下酶解反應25h，酶解後料液經六效蒸發器濃縮到糖濃62% ；
②色譜分離:濃縮後料液進入色譜分離裝置，進料濃度60±2%，pH8.0-8.5，低聚果糖純度為73%，溫度控制在55~75°C，電導率≤50u s ? cnT1，出料低聚果糖液純度≥95% ；
③脫色:色譜分離後的低聚果糖液調PH7.0-8.0，用糖幹基總質量1%的活性炭脫色處理，脫色溫度為70°C， 保溫20min，板框過濾得脫色低聚果糖液；
④離交:進柱溫度30°C~50°C，出柱pH5.0-7.0，電導率< 50 y s ^cnT1,離交後的料液用LSA-600樹脂脫色，料液濃度為60%，進柱溫度為40°C ；
⑤濃縮:步驟④的料液通過六效蒸發器濃縮到糖濃73%-79%的低聚果糖液；
⑥乾燥:步驟⑤的低聚果糖液採用氣流式旋轉閃蒸乾燥技術，料液濃度為73-79%，操作壓力10-30Pa，得純度為95%低聚果糖粉108.38g。
[0030]二、對大分子濾液的處理
①脫色:將大分子濾液調PH5.0-7.0，6080°C保溫30min，板框過濾；
②離交:進柱溫度30°C~50°C，出柱pH5.0-7.0，電導率< 50 u s ? cm—1 ；
③濃縮:離交後料液通過六效蒸發器濃縮到糖濃70%-80%的多聚果糖液；
④乾燥:濃縮後的多聚果糖液採用氣流式旋轉閃蒸乾燥技術，料液濃度為70-80%，操作壓力20-50Pa，得多聚果糖粉41.03g。
[0031]實施例3
(1)取菊苣根粉製備:取2400公斤新鮮菊苣塊根，用清水清洗去泥土後，切片、烘乾、粉碎，得280kg菊苣根粉，將菊苣根粉置入連續逆流超聲浸提設備浸提，浸提液採用使用石灰乳調節PH值為11的去離子水，浸提溫度為60°C，控制浸提時間為3h，固液比1:10，得到菊粉液，通過計算，提取率為96% ；
(2)菊粉液使用磷酸調節pH至7，經板框過濾.得到4000L糖濃為15%的黃色澄清濾液，濾液經活性炭脫色處理，活性炭用量為浸提液總質量的1%，脫色溫度為70°C，脫色時間60min，板框過濾，濾液用六效蒸發器濃縮到糖濃40%，然後用分子量為6000的超濾膜進行分級處理，分離出聚合度在23以上(DP > 23)的大分子濾液和聚合度在23以下(DP < 23)的小分子濾液；
(3)對小分子濾液進行酶解，酶解後濃縮，再經色譜分離、脫色、離交、脫色、濃縮、乾燥得低聚果糖；
(4)對大分子濾液進行脫色、離交、濃縮、乾燥得多聚果糖。
[0032]在本實施例中，在對小分子濾液和大分子濾液進行處理操作步驟如下:
一、對小分子濾液的處理:
①酶解、濃縮:小分子濾液首先用固定化菊粉酶進行酶解，固定化條件為首先將吸附樹脂LX-1000EP樹脂在磷酸緩衝液中浸泡6h，去離子水衝洗乾淨，稱取菊粉酶20mg/gLX-1000EP樹脂，在pH6.0、30°C恆溫水浴振蕩器中緩慢振蕩吸附40h後，棄去上清，用磷酸鹽緩衝溶液衝洗未固定上的游離酶，即得；酶解條件為調小分子濾液PH6.0，菊粉酶添加量為30u/g乾物質，在55-57°C下酶解反應30h，酶解後料液經六效蒸發器濃縮到糖濃58% ；
②色譜分離:濃縮後料液進入色譜分離裝置，進料濃度60±2%，pH8.0-8.5，低聚果糖純度為70%，溫度控制在55~75°C，電導率≤50u s ? cm-1，出料低聚果糖液純度≥95% ；
③脫色:色譜分離後的低聚果糖液調PH7.0-8.0，用糖幹基總質量3%的活性炭脫色處理，脫色溫度為60°C，保溫60min，板框過濾得脫色低聚果糖液；
④離交:進柱溫度30°C~50°C，出柱pH5.0-7.0，電導率< 50u s ? cm-1 離交後的料液用D941樹脂脫色，料液濃度為56%，進柱溫度為50°C ；
⑤濃縮:步驟④的料液通過六效蒸發器濃縮到糖濃73%-79%的低聚果糖液；
⑥乾燥:步驟⑤的低聚果糖液採用氣流式旋轉閃蒸乾燥技術，料液濃度為73-79%，操作壓力10-30Pa，得純度為95%低聚果糖粉104.83g。[0033]二、對大分子濾液的處理
①脫色:將大分子濾液調PH5.0-7.0，60~80。C保溫30min，板框過濾；
②離交:進柱溫度300C~50。C，出柱pH5.0-7.0，電導率< 50 u s ? cm—1 ；
③濃縮:離交後料液通過六效蒸發器濃縮到糖濃70%-80%的多聚果糖液；
④乾燥:濃縮後的多聚果糖液採用氣流式旋轉閃蒸乾燥技術，料液濃度為70-80%，操作壓力20-50Pa，得多聚果糖粉53.12g。
[0034]實施例4
與實施例3相比，在步驟(1)中，浸提液採用去離子水，提前完成後，再用石灰乳處理，其餘操作同實施例3完全一致。提取率為40%，得純度為95%低聚果糖粉47.23g。得多聚果糖粉17.28g。
[0035]實施例5
與實施例3相比，在小分子濾液的處理過程的酶解步驟，菊粉酶不進行固定，而是採用常規的酶解方式進行酶解，菊粉酶加量同實施例3相同，其餘操作同實施例3保持一致，最終得純度為95%低聚果糖粉87.80g，得多聚果糖粉52.98g。
[0036]上述實施例為本發明較佳的實施方式，但本發明的實施方式並不受實施例的限制，其它任何未背離本發明的精神實質與原理下所做的改變、修飾、組合、替代、簡化均應為等效替換方式，都包含在本發明的保護範圍之內。
【權利要求】
1.一種高純度菊苣、菊芋型低聚果糖聯產多聚果糖的方法，其特徵在於包括以下步驟: (1)對菊苣塊根或菊芋塊莖進行清洗、切片、烘乾、粉碎，然後使用鹼性浸提液進行連續逆流超聲浸提得到菊粉液，鹼性浸提液為用石灰乳調節PH為11-13的去離子水，浸提溫度為60-95°C，浸提時間1-3小時，固液比為I:10-30 ； (2)菊粉液調pH至6-8，過濾進行固液分離得濾液，濾液經脫色後，用4000-6000分子量的超濾膜進行分級處理，分離出聚合度在23以上的大分子濾液和聚合度在23以下的小分子濾液； (3)對小分子濾液進行酶解，酶解後濃縮，再經色譜分離、脫色、離交、脫色、濃縮、乾燥得低聚果糖； (4)對大分子濾液進行脫色、離交、濃縮、乾燥得多聚果糖。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟(3)中使用固定化的菊粉酶對小分子濾液進行酶解，其固定化工藝:加酶量為10-30mg/g固定化樹脂，在pH5.5-7.0,10-30°Cfl溫水浴振蕩器中緩慢振蕩吸附24-40h，棄去上清，用磷酸鹽緩衝溶液衝洗未固定上的游離菊粉酶；酶解條件:調PH5.5-6.0，菊粉酶添加量為30u/g乾物質，在55-57°C下酶解反應20-30h。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特徵在於步驟(2)中濾液經脫色後進行濃縮，至固含為40%。
4.根據權利要求1或2或3所述的方法，其特徵在於步驟(2)中濾液脫色工藝步驟為:濾液先用活性炭脫色處理，脫色溫度為60-80°C，脫色時間20-60min ;再用LSA-600、LSA-700或D941樹脂脫色，料液濃度為7%_15%，進柱溫度為40_60°C。
5.根據權利要求1或2所述的方法，其特徵在於步驟(3)中色譜分離工藝為:進料濃度10±5%，pH8.0-8.5，低聚果糖純度≤70%，溫度控制在55~75°C，電導率≤50y s.cm—1，出料低聚果糖純度> 95%。
6.根據權利要求1或2或5所述的方法，其特徵在於步驟(3)中色譜分離後料液調pH7.0-8.0、6(T80°C保溫30min，板框過濾；進行離交，進柱溫度30°C~50°C，出柱pH5.0-7.0，電導率< 50 ii s ? cnT1，濃縮到糖濃73%_79%的低聚果糖液。
7.根據權利要求6所述的方法，其特徵在於濃縮得到的低聚果糖液採用氣流式旋轉閃蒸乾燥技術，料液濃度為73-79%，操作壓力10-30Pa，得純度為95%低聚果糖粉。
8.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟(4)中將得到的大分子濾液調pH5.0-7.0，6(T80°C保溫30min，板框過濾，進行離子交換，進柱溫度30°C~50°C，出柱PH5.0-7.0，電導率< 50 ii s ? cnT1，得到的料液通過六效蒸發器濃縮到糖濃70%_80%的多聚果糖液，採用氣流式旋轉閃蒸乾燥，得多聚果糖粉。
9.根據權利要求2所述的方法，其特徵在於固定化樹脂型號為LX-1000EP。
【文檔編號】C08B37/00GK103642876SQ201310672976
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年12月12日 優先權日:2013年12月12日
【發明者】劉宗利, 王乃強, 張姝, 欒慶民, 賈慧慧 申請人:保齡寶生物股份有限公司